Misaotra anao nitsidika ny Nature.com. Mampiasa kinova mpitety tranonkala manana fanohanana CSS voafetra ianao. Mba hahazoana traikefa tsara indrindra, manoro hevitra anao izahay hampiasa navigateur nohavaozina (na esory ny Compatibility Mode amin'ny Internet Explorer). Ho fanampin'izany, mba hiantohana ny fanohanana mitohy, dia asehoy ny tranokala tsy misy fomba sy JavaScript.
Mampiseho carousel misy sary telo indray mandeha. Ampiasao ny bokotra teo aloha sy manaraka mba hivezivezena amin'ny slides telo amin'ny fotoana iray, na ampiasao ny bokotra slider amin'ny farany mba hivezivezena amin'ny slides telo isaky ny mandeha.
Ny potika silika porous dia nomanina tamin'ny fomba sol-gel miaraka amin'ny fanovana sasany mba hahazoana poti-pore midadasika. Ireo poti ireo dia nalaina avy amin'ny N-phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate (PMI) sy ny styrene amin'ny alàlan'ny polymerization reverse chain transfer-fragmentation (RAFT) mba hamokarana polyamide intercalated N-phenylmaleimide. Styrene (PMP) dingana mijoro. Ny tsanganana vy tsy misy vy matevina (100 × 1.8 mm ny savaivony anatiny) dia feno slurry. Ny fahombiazan'ny chromatographie amin'ny tsanganana PMP dia nodinihina mba hanasarahana ny fifangaroan'ny peptides sentetika misy peptides dimy (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu amino acid enkephalin) ary tryptic hydrolyzate an'ny serum olombelona (HASrum albumin). Ao anatin'ny fepetra elution tsara indrindra, ny isan'ny takelaka misy peptides mifangaro dia nahatratra 280.000 takelaka / sq.m. Ny fampitahana ny fahombiazan'ny fanasarahana ny tsanganana novolavolaina miaraka amin'ny tsanganana Ascentis Express RP-Amide ara-barotra, dia hita fa ny fahombiazan'ny fisarahana amin'ny tsanganana PMP dia ambony noho ny tsanganana ara-barotra amin'ny resaka fahombiazan'ny fisarahana sy ny famahana.
Ny indostrian'ny biopharmaceutical dia lasa tsena manerantany miitatra miaraka amin'ny fitomboana lehibe amin'ny fizarana tsena tato anatin'ny taona vitsivitsy. Miaraka amin'ny fitomboana mipoaka ny indostrian'ny biopharmaceutical1,2,3 dia ilaina ny famakafakana peptide sy proteinina. Ho fanampin'ny peptide kendrena dia misy loto isan-karazany miforona mandritra ny synthesis peptide, noho izany dia ilaina ny fanadiovana chromatographic mba hahazoana ny fahadiovana irina amin'ny peptide. Ny famakafakana sy ny famantarana ny proteinina ao amin'ny fluidin'ny vatana, ny tavy ary ny sela dia asa tena sarotra noho ny habetsahan'ny karazana mety ho hita ao anaty santionany iray. Na dia fitaovana mahomby amin'ny filaharan'ny peptides sy proteinina aza ny spectrometry faobe, raha ampidirina mivantana ao amin'ny spectrometer faobe ny santionany, dia tsy mahafa-po ny fisarahana. Ity olana ity dia azo vahana amin'ny fanaovana chromatography ranoka (LC) alohan'ny famakafakana MS, izay hampihena ny habetsaky ny analytes miditra amin'ny spectrometer faobe amin'ny fotoana nomena4,5,6. Ankoatr'izay, ny analytes dia afaka mifantoka amin'ny faritra tery mandritra ny fisarahana amin'ny dingan'ny rano, ka mampifantoka ireo analytes ireo ary mampitombo ny fahatsapan'ny MS detection. Ny chromatography ranoka (LC) dia nandroso be tato anatin'ny folo taona lasa ary nanjary fomba fampiasa be dia be amin'ny famakafakana proteomika7,8,9,10.
Reverse-phase liquid chromatography (RP-LC) dia ampiasaina betsaka mba hanadiovana sy hanasarahana ny fangaro peptides amin'ny fampiasana silica (ODS) octadecyl-modified (ODS) ho toy ny phase stationary11,12,13. Na izany aza, noho ny firafiny sarotra sy ny toetra amphoterika, 14,15 RP dia tsy afaka manome fisarahana mahafa-po ny peptides sy ny proteinina. Noho izany, ny famakafakana ny peptides sy ny proteinina miaraka amin'ny poti-polar sy tsy-polar dia mitaky dingana tsy mitongilana natao manokana hifaneraserana sy hitazonana ireo analytes ireo16. Ny chromatography mifangaro, izay manolotra fifandraisana multimodal, dia mety ho solon'ny RP-LC amin'ny fanasarahana ny peptides, ny proteinina, ary ny fangaro sarotra hafa. Maromaro ny karazana fizaram-potoana voaomana ary ny tsanganana feno an'ireo dingana ireo dia nampiasaina hanasarahana ny peptides sy ny proteinina17,18,19,20,21. Noho ny fisian'ny vondrona polar sy tsy polar, dia mety amin'ny fisarahana ny peptides sy ny proteinina22,23,24,25,26,27,28 ny fomba mifangaro (WAX / RPLC, HILIC / RPLC, polar intercalation / RPLC). , Ny fizotry ny fijanonan'ny polar intercalated miaraka amin'ny vondrona polar covalently mifamatotra dia mampiseho ny fahaiza-misaraka tsara sy ny fifantenana tokana ho an'ny analytes polar sy tsy polar satria ny fisarahana dia miankina amin'ny fifandraisana misy eo amin'ny analyte sy ny phase stationary Multimodal interactions 29,30,31,32. Vao haingana, Zhang et al. 30 dia nahazo ny polyamines tsy misy fiafarana behenyl ary nanasaraka tsara ny hydrocarbons, antidepressants, flavonoids, nucleosides, estrogens, ary analytes hafa. Ny fitaovana tsy misy polar dia manana vondrona polar sy tsy polar, ka azo ampiasaina hanasarahana ny peptides sy ny proteinina ho faritra hydrophobic sy hydrophilic. Andry inline polar (ohatra, tsanganana C18 miaraka amin'ny amide inline) dia azo alaina amin'ny anaran'ny varotra Ascentis Express RP-Amide tsanganana, fa ireo tsanganana ireo dia tsy nampiasaina afa-tsy tamin'ny famakafakana ny amine 33.
Ao amin'ny fandalinana amin'izao fotoana izao, ny dingana tsy misy fotony misy polar (N-phenylmaleimide, polystyrene embedding) dia nomanina sy nodinihina ho an'ny fisarahana peptide sy ny fizarazaran'ny HSA tryptic. Ity paikady manaraka ity dia nampiasaina hanomanana ny dingana tsy miato. Ny singa silica porous dia nomanina araka ny fomba fiasa voalaza ao amin'ny bokintsika teo aloha, miaraka amin'ny fanovana sasany amin'ny drafitra fanomanana 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39. Ny tahan'ny urea, polyethylene glycol (PEG), TMOS ary asidra aqueous-acetic dia namboarina mba hahazoana poti-silika lehibe. Faharoa, ny ligy isocyanate phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate vaovao dia novolavolaina ary ny poti-silica azo avy aminy dia nampiasaina mba hanomanana ireo dingana mipetaka amin'ny polar. Ny dingan'ny fijanonana azo dia nofonosina tao anaty tsanganana vy tsy misy kilema (diava anatiny 100 × 1.8 mm) araka ny rafitra famonosana tsara indrindra. Ny famenoana ny tsanganana dia manampy amin'ny vibration mekanika mba hahazoana antoka fa misy sosona mitovy ao anatin'ny tsanganana. Ny tsanganana feno dia nodinihina ho fisarahana ny fifangaroan'ny peptides misy peptides dimy (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin peptide). ary ny hydrolysate tryptic an'ny albumin serum olombelona (HSA). Voamarika fa ny fangaro peptide sy ny digest HSA tryptic dia nisaraka tamin'ny fanapahan-kevitra tsara sy ny fahombiazany. Ny fahombiazan'ny fisarahana amin'ny tsanganana PMP dia nampitahaina tamin'ny tsanganana Ascentis Express RP-Amide. Voamarika fa ny peptides sy ny proteinina dia manana vahaolana tsara sy fahombiazana avo lenta amin'ny tsanganana PMP, ary ny fahombiazan'ny fisarahana amin'ny tsanganana PMP dia ambony noho ny an'ny tsanganana Ascentis Express RP-Amide.
PEG (polyethylene glycol), urea, asidra acetic, trimethoxyorthosilicate (TMOS), trimethylchlorosilane (TMCS), trypsin, albumin serum olombelona (HSA), chloride ammonium, urea, hexamethylmethacryloyldisilazane (HMDS), methacryloyl chloride (MC4, BP4-Oxyde), styrene acetonitrile (ACN) ho an'ny HPLC, methanol, 2-propanol ary acetone. Sigma-Aldrich Company (St. Louis, Missouri, Etazonia).
Ny fifangaroan'ny urea (8 g), ny polyethylene glycol (8 g) ary ny 8 ml ny 0,01 N. asidra acetic dia nesorina nandritra ny 10 minitra, ary 24 ml TMOS no nampiana azy teo ambanin'ny ranomandry. Ny fifangaroan'ny fanehoan-kevitra dia nafanaina tamin'ny 40 ° C nandritra ny 6 ora ary avy eo tamin'ny 120 ° C nandritra ny 8 ora tao anaty autoclave vy. Nofoanana ny rano ary nafanaina tamin’ny 70°C nandritra ny 12 ora ny ambiny. Nototoina tamin'ny fomba malefaka ireo sakana malefaka maina ary natsofoka tao anaty lafaoro tamin'ny 550 ° C nandritra ny 12 ora. Andiany telo no nomanina sy nomanina mba hitsapana ny maha-reproducibilité ny habe potika, ny habe sy ny velaran-tany.
Vondrona polar sy phase stationary ho an'ny rojo polystyrene. Ny fomba fanomanana dia voalaza etsy ambany.
N-phenylmaleimide (200 mg) sy methyl vinyl isocyanate (100 mg) dia levona tao amin'ny toluene anhydrous, ary avy eo 0.1 ml ny 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) dia nampiana tao amin'ny tavoahangy fanehoan-kevitra mba hahazoana copolymer ny phenylmaleimide sy methylPMCP isocyanate. ) Nafanaina tamin’ny 60°C nandritra ny adiny 3 ny fangaro, voasivana ary nafatony tao anaty lafaoro tamin’ny 40°C nandritra ny adiny 3.
Ny poti-silika maina (2 g) dia naparitaka tamin'ny toluene maina (100 ml), namporisika ary natsofoka nandritra ny 10 minitra tao anaty tavoahangy boribory 500 ml. Ny PMCP (10 mg) dia levona tao amin'ny toluene ary nampidirina tsikelikely tao amin'ny tavoahangin'ny fanehoan-kevitra tamin'ny alàlan'ny fantson-drano fanampiny. Ny fangaro dia nampidirina tamin'ny 100 ° C nandritra ny 8 ora, voasivana, nosasana tamin'ny acetone ary maina tamin'ny 60 ° C nandritra ny 3 ora. Avy eo, ny singa silica mifandray amin'ny PMCP (100 g) dia levona amin'ny toluene (200 ml), ary ny 4-hydroxy-TEMPO (2 ml) dia nampiana azy teo anatrehan'ny 100 μl dibutyltin dilaurate ho toy ny catalyst. Ny fangaro dia nohetsehina tamin'ny 50 ° C nandritra ny 8 ora, voasivana ary maina tamin'ny 50 ° C nandritra ny 3 ora.
Styrene (1 ml), benzoyl peroxyde BPO (0,5 ml) ary ny poti-silica mipetaka amin'ny TEMPO-PMCP (1,5 g) dia naparitaka tamin'ny toluene ary nodiovina tamin'ny azota. Ny polymerization ny styrene dia natao tamin'ny 100 ° C nandritra ny 12 ora. Ny vokatra azo dia nosasana tamin'ny methanol ary maina mandritra ny alina amin'ny 60 ° C. Ny tetika ankapoben'ny fanehoan-kevitra dia aseho amin'ny sary. iray .
Ny santionany dia nesorina tao amin'ny 393 K nandritra ny 1 h mandra-pahazoany fanerena sisa tsy latsaky ny 10-3 Torr. Ny habetsahan'ny N2 adsorbed amin'ny tsindry P / P0 = 0.99 dia nampiasaina mba hamaritana ny totalin'ny pore. Nodinihina tamin'ny alalan'ny microscope electron scanning (Hitachi High Technologies, Tokyo, Japan) ny morphologie ny singa silica madio sy ligand. Ny santionany maina (silika madio sy ny singa silika mifamatotra ligand) dia napetraka teo amin'ny tsorakazo aluminium tamin'ny fampiasana kasety karbona. Napetraka teo amin'ny santionany ny volamena tamin'ny alàlan'ny fitaovana fanapotehana Q150T, ary nisy sosona Au matevina 5 nm napetraka teo amin'ilay santionany. Manatsara ny fahombiazan'ny fizotry ny volavolan-tena ambany izany ary manome famafazana mangatsiaka tsara. Ny famakafakana singa dia natao tamin'ny alàlan'ny Thermo Electron (Waltham, MA, USA) Flash EA1112 elemental compositional analyzer. Mpanadihady habe potika Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 no nampiasaina mba hahazoana ny fizarana haben'ny poti. Ny singa silica tsy misy loko sy ny singa silika voafatotra (5 mg tsirairay) dia niparitaka tao amin'ny 5 ml isopropanol, nodiovina nandritra ny 10 minitra, nihetsiketsika nandritra ny 5 minitra, ary napetraka teo amin'ny dabilio optika Mastersizer. Ny famakafakana thermogravimetric dia atao amin'ny tahan'ny 5 ° C isa-minitra amin'ny mari-pana eo anelanelan'ny 30 ka hatramin'ny 800 ° C.
Ny fibre vera misy tsanganana vy tsy misy habe misy refy (ID 100 × 1.8 mm) dia nofonosina tamin'ny fomba famenoana slurry manaraka ny fomba fiasa mitovy amin'ny voalaza ao amin'ny 31. Andry vy tsy misy pentina (fitaratra mipetaka, ID 100 × 1 .8 mm) ary ny fivoahana misy frit 1 µm dia mifandray amin'ny milina famonosana slurry, De USA). Manomàna fampiatoana ny dingana mijanona amin'ny fampiatoana 150 mg amin'ny dingana tsy mijanona ao anaty 1,2 ml methanol ary mamahana azy ao anaty tsanganana fitahirizana. Ny methanol dia nampiasaina ho solvent slurry sy solvent control. Fenoy ny tsanganana amin'ny alàlan'ny fampiharana ny filaharan'ny tsindry 100 MP mandritra ny 10 min, 80 MP mandritra ny 15 min, ary 60 MP mandritra ny 30 min. Ny fizotry ny famonosana dia nampiasa vibrator tsanganana chromatography roa (Alltech, Deerfield, IL, Etazonia) ho an'ny vibration mekanika mba hiantohana ny famenoana tsanganana fanamiana. Akatona ny slurry packer ary atsangano tsikelikely mba hisorohana ny fahasimban'ny tady. Ny tsanganana dia nesorina tamin'ny slurry nozzle ary ny fitaovana hafa dia niraikitra tamin'ny fidirana ary nifandray tamin'ny rafitra LC mba hitsapana ny asany.
MLC mahazatra dia namboarina tamin'ny alàlan'ny paompy LC (10AD Shimadzu, Japon), sampler misy 50 nL tsindrona loop (Valco (USA) C14 W.05), degasser membrane (Shimadzu DGU-14A), ary varavarankely kapila UV-VIS. Fitaovan'ny mpitsikilo (UV-2075) sy microcolumn enamelled. Mampiasà fantsona mampifandray tena tery sy fohy mba hampihenana ny fiantraikan'ny fanitarana tsanganana fanampiny. Aorian'ny famenoana ny tsanganana dia asio capillary (50 µm id 365) eo amin'ny fivoahan'ny 1/16″ fampitongana fampihenana ary asio capillary (50 µm) amin'ny fampihenana. Ny fanangonana angona sy ny fanodinana chromatogram dia atao amin'ny alàlan'ny rindrambaiko Multichro 2000. Ao amin'ny 254 nm, ny fatran'ny UV amin'ny analytes momba ny lohahevitra dia nodinihina tamin'ny 0. Ny angon-drakitra Chromatographic dia nodinihina tamin'ny fampiasana OriginPro8 (Northampton, MA).
Albumin serum olombelona, ​​vovoka lyophilized, ≥ 96% (électrophoresis gel agarose) 3 mg mifangaro amin'ny trypsin (1.5 mg), 4.0 M urea (1 ml) ary 0.2 M ammonium bikarbonate (1 ml). Ny vahaolana dia nohetsehina nandritra ny 10 minitra ary notazonina tao anaty rano fandroana tamin'ny 37 ° C nandritra ny 6 ora, avy eo novonoina tamin'ny 1 ml 0,1% TFA. Sivana ny vahaolana ary tehirizo ao ambanin'ny 4 ° C.
Ny fisarahana ny fifangaroan'ny peptides sy ny tryptic digest HSA amin'ny tsanganana PMP dia nodinihina manokana. Hamarino ny hydrolysis tryptic amin'ny fifangaroan'ny peptides sy HSA misaraka amin'ny tsanganana PMP ary ampitahao ny valiny amin'ny tsanganana Ascentis Express RP-Amide. Ny isan'ny takelaka teorika dia kajy amin'ny fampiasana ny equation manaraka:
Ny sary SEM amin'ny singa silika madio sy ny singa silika mifamatotra amin'ny ligand dia aseho amin'ny sary 2. Ny sary SEM amin'ny singa silika madio (A, B) dia mampiseho endrika boribory izay mihalava na manana symmetry tsy ara-dalàna raha oharina amin'ny fianarana teo aloha ny singa. Ny endrik'ireo singa silika voafatotry ny ligand (C, D) dia malama kokoa noho ny an'ny singa silica madio, izay mety ho noho ny rojo polystyrene mandrakotra ny endrik'ireo singa silika.
Fanaraha-maso ny micrographs elektronika amin'ny singa silika madio (A, B) sy ireo singa silika mifamatotra ligand (C, D).
Ny fizarana habe amin'ny singa silica madio sy ny singa silika mifamatotra ligand dia aseho amin'ny sary 2. 3 (A). Nasehon'ny curves fizarana habe potika volumetric fa nitombo ny haben'ny poti-silica taorian'ny fanovana simika (sary 3A). Ny angon-drakitra fizarana haben'ny singa silica avy amin'ny fandalinana ankehitriny sy ny fianarana teo aloha dia ampitahaina amin'ny tabilao 1 (A). Ny haben'ny ampahany volumetric d (0.5) an'ny PMP dia 3.36 µm, raha ampitahaina amin'ny sandan'ny ad(0.5) amin'ny 3.05 µm tamin'ny fandalinana nataontsika teo aloha (potika silika mifatotra polystyrene)34. Noho ny fiovan'ny tahan'ny PEG, urea, TMOS ary asidra acetic ao amin'ny fifangaroan'ny fanehoan-kevitra, dia tery kokoa ny fizarana habe amin'ity andiany ity raha oharina amin'ny fandinihanay teo aloha. Ny haben'ny ampahany amin'ny dingana PMP dia somary lehibe kokoa noho ny an'ny polystyrene mifatotra amin'ny dingan'ny singa silica izay nianarantsika teo aloha. Midika izany fa ny fampandehanana ny endrik'ireo singa silica miaraka amin'ny styrène dia tsy mametraka afa-tsy sosona polystyrène (0.97 µm) eo amin'ny velarana silika, raha ao amin'ny dingana PMP kosa ny hatevin'ny sosona dia 1.38 µm.
Fizarana ny haben'ny sombin-javatra (A) sy ny haben'ny mason-tsivana (B) ny singa silica madio sy ny singa silika mifamatotra ligand.
Ny haben'ny pore, ny haben'ny pore ary ny velaran'ny poti-silika ampiasaina amin'ity fandalinana ity dia aseho amin'ny tabilao 1 (B). Ny mombamomba ny PSD amin'ny singa silika madio sy ny singa silika mifamatotra ligand dia aseho amin'ny sary. 3(B). Ny valiny dia nampitahaina tamin'ny fandinihanay teo aloha34. Ny haben'ny pore amin'ny singa silica madio sy ligand dia 310 Å sy 241 Å, izay manondro fa taorian'ny fanovana simika, dia nihena ny haben'ny pore tamin'ny 69 Å, araka ny asehon'ny tabilao 1 (B), ary ny curve dia aseho amin'ny sary. m2/g). Araka ny asehon'ny tabilao 1(B), dia nihena koa ny velaran-tany (m2/g) amin'ny poti-silika taorian'ny fanovana simika avy amin'ny 116 m2/g ka hatramin'ny 105 m2/g.
Ny valin'ny famakafakana singa amin'ny dingana mijanona dia aseho amin'ny tabilao. 2. Ny votoatin'ny karbônina amin'ny dingan'ny fijanonana amin'izao fotoana izao dia 6,35%, izay ambany noho ny tamin'ny fandinihanay teo aloha (silika silika mifandray amin'ny polystyrene, 7,93% 35 ary 10,21%, tsirairay avy) 42. Ny votoatin'ny karbaona amin'ny dingana mijoro ankehitriny eto ambany, satria ny ligin-polar sasany toy ny phenylmaleimide methylMP-vinyl-isocyanate dia nampiasaina tamin'ny hydro-PC sy 42. styrene amin'ny fanomanana ny SP. Ny tahan'ny lanjan'ny azota ao amin'ny dingana tsy mijanona amin'izao fotoana izao dia 2.21% raha oharina amin'ny 0.1735 sy 0.85% tamin'ny fianarana teo aloha42. Midika izany fa manana isan-jaton'ny azota avo lenta amin'izao fotoana izao noho ny phenylmaleimide. Toy izany koa, ny vokatra (4) sy (5) dia manana karbaona afa-po amin'ny 2,7% sy 2,9%, tsirairay avy, raha ny vokatra farany (6) dia manana karbaona afa-po amin'ny 6,35%, araka ny hita ao amin'ny Table 2. Thermogravimetric fanadihadiana (TGA) dia nampiasaina tamin'ny dingana mijoro amin'ny PMP mba hizaha toetra ny lanja very, ary ny TGA curve dia aseho ao amin'ny Figure% 4 ny TGA curve. izay mifanaraka tsara amin'ny votoatin'ny karbônina (6,35%), satria ny ligy dia tsy C , fa koa N, O ary H.
Ny ligand phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate dia nofidina hanova ny endrik'ireo singa silica noho ny vondrona polar phenylmaleimide sy vinylisocyanate. Ny vondrona isocyanate vinyl dia afaka mihetsika bebe kokoa amin'ny styrene amin'ny alàlan'ny polymerization radical velona. Ny antony faharoa dia ny fampidirana vondrona iray izay manana fifandraisana antonony amin'ny analyte ary tsy misy fifandraisana elektrostatika matanjaka eo amin'ny analyte sy ny phase stationary, satria ny moiety phenylmaleimide dia tsy manana fiampangana virtoaly amin'ny pH ara-dalàna. Ny polarity ny dingan'ny mijanona dia azo fehezina amin'ny habetsahan'ny styrene tsara indrindra sy ny fotoana fanehoan-kevitry ny polymerization radika maimaim-poana. Ny dingana farany amin'ny fanehoan-kevitra (polymerization radika maimaim-poana) dia tena zava-dehibe satria manova ny polarity ny dingana mijanona. Ny famakafakana singa dia natao mba hijerena ny votoatin'ny karbônina ao anatin'ireo dingana tsy mihetsika ireo. Voamarika fa ny fampitomboana ny habetsahan'ny styrène sy ny fotoana fanehoan-kevitra dia mampitombo ny votoatin'ny karbônina amin'ny dingana mijanona ary ny mifamadika amin'izany. Ny SP nomanina miaraka amin'ny fifantohana samihafa amin'ny styrene dia manana enta-mavesatra karbonika samihafa. Toy izany koa, ireo dingana tsy misy fiatoana ireo dia napetraka teo amin'ny tsanganana vy tsy misy pentina ary nojerena ny toetran'ny chromatographique (selectivity, resolution, N value, sns.). Mifototra amin'ireo andrana ireo, dia nofinidy ny famoronana optimized ho an'ny fanomanana ny PMP stationary phase mba hanomezana polarity voafehy sy fihazonana tsara ny analyte.
Ny tsanganana PMP dia nodinihina ihany koa ho an'ny famakafakana ireo fangaro dimy amin'ny peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin) mampiasa ny fahafahan'ny dingana finday. 60/40 (v/v) ACN/rano (0,1% TFA) amin'ny hafainganam-pandehan'ny 80 µl/min. Eo ambanin'ny fepetra elution tsara indrindra (200,000 takelaka / m), ny isan'ny takelaka teorika (N) isaky ny tsanganana (100 × 1,8 mm) dia 20,000 ± 100. Ny sanda N ho an'ny tsanganana PMP telo dia aseho amin'ny tabilao 3 ary ny chromatograms dia aseho amin'ny sary 5A. Famakafakana haingana amin'ny taham-pivoarana avo (700 µl / min) amin'ny tsanganana PMP, peptides dimy nopotehina tao anatin'ny iray minitra, sanda N tsara indrindra amin'ny 13.500 ± 330 isaky ny tsanganana (100 x 1.8 mm savaivony), mitovy amin'ny takelaka 135.000 / m (sary 5B). Andry telo mitovy habe (diava anatiny 100 x 1.8 mm) no nofenoina andiana telo samy hafa amin'ny dingana tsy misy fiatoana amin'ny PMP mba hitsapana ny maha-reproducibility. Ny analytes dia voarakitra ho an'ny tsanganana tsirairay amin'ny alàlan'ny fanasarahana ny fangaro fitsapana mitovy amin'ny tsanganana tsirairay amin'ny fampiasana fepetra elution tsara indrindra, ny isan'ny takelaka teorika N, ary ny fotoana fihazonana. Ny angon-drakitra reproducibility ho an'ny tsanganana PMP dia aseho amin'ny tabilao 4. Ny reproducibility ny tsanganana PMP dia mifandray tsara amin'ny sanda %RSD ambany dia ambany araka ny aseho amin'ny tabilao 3.
Ny fisarahana ny fangaro peptide amin'ny tsanganana PMP (B) sy ny tsanganana Ascentis Express RP-Amide (A), ny dingana finday 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), ny haben'ny tsanganana PMP (100 x 1.8 mm id) , ny fanadihadiana Elution filaharana ny fitambarana: 1 (Gly-Tyr), 3u (Tyr), 3u (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) ary 5 ( enkephalin asidra leucic).
Ny tsanganana PMP (diameter anatiny 100 x 1.8 mm) dia nodinihina tamin'ny fisarahana ny hydrolyzate tryptic ny albumin serum olombelona amin'ny HPLC. Ny chromatogram amin'ny sary 6 dia mampiseho fa ny santionany dia misaraka tsara miaraka amin'ny fanapahan-kevitra tena tsara. Ny vahaolana HSA dia nodinihina tamin'ny fampiasana ny tahan'ny 100 μl / min, ny dingana finday 70/30 acetonitrile / rano ary 0.1% TFA. Ny cleavage ny HSA dia nizara ho tampon'ny 17, araka ny aseho amin'ny chromatogram (sary 6), mifanaraka amin'ny peptides 17. Ny fahombiazan'ny fisarahana amin'ny tendrony tsirairay avy amin'ny hydrolyzate HSA dia nokajiana ary ny sanda dia aseho amin'ny tabilao 5.
Ny hydrolysate tryptic HSA dia nisaraka tamin'ny tsanganana PMP (diameter anatiny 100 x 1.8 mm), ny tahan'ny fikorianan'ny (100 μl / min), ny dingana finday 60/40 acetonitrile / rano, ary 0.1% TFA.
izay L dia ny halavan'ny tsanganana, ny η dia ny viscosity ny dingan'ny finday, ny ΔP dia ny fanerena lamosina amin'ny tsanganana, ary ny u dia ny hafainganam-pandehan'ny dingana mihetsika. Ny permeability ny tsanganana PMP dia 2.5 × 10-14 m2, ny taham-pidirana dia 25 µl / min, 60/40 v / v no nampiasaina. ACN/rano. Ny permeability ny tsanganana PMP (ID 100 × 1.8 mm) dia nitovitovy tamin'ny fandinihanay Ref.34 teo aloha. Ny permeability amin'ny tsanganana feno poti-porous ambony dia 1.7 × 10 .6 µm, 2.5 × 10-14 m2 ho an'ny singa 5 µm43. Noho izany, ny permeability ny dingana PMP dia mitovy amin'ny permeability ny fototra akorandriaka poti amin'ny haben'ny 5 μm.
izay Wx dia ny lanjan'ny tsanganana feno chloroform, Wy ny lanjan'ny tsanganana feno methanol, ary ny ρ dia ny hakitroky ny solvent. Ny hamafin'ny methanol (ρ = 0,7866) sy ny chloroform (ρ = 1,484). Ny totalin'ny porosity amin'ny tsanganana silica-C18 (100 × 1.8 mm ID)34 ary ny tsanganana C18-urea31 teo aloha dia 0.63 sy 0.55, tsirairay avy. Midika izany fa ny fisian'ny ligin'ny urea dia mampihena ny permeability ny dingana mijanona. Amin'ny lafiny iray, ny totalin'ny porosity amin'ny tsanganana PMP (diameter anatiny 100 × 1.8 mm) dia 0.60. Ny tsanganana PMP dia kely kokoa noho ny tsanganana feno amin'ny singa silica mifatotra C18 satria ao amin'ny phase stationary karazana C18 ny ligy C18 dia mifamatotra amin'ny singa silica amin'ny rojo tsipika, raha ao amin'ny phase stationary karazana polystyrene dia misy polymère somary matevina miforona manodidina ny singa. sosona A. Amin'ny fanandramana mahazatra, ny porosity tsanganana dia kajy toy izao manaraka izao:
Ao amin'ny fig. 7A, B dia mampiseho ny sarin'i Van Deemter ho an'ny tsanganana PMP (id 100 x 1.8 mm) sy ny tsanganana Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 mm) eo ambanin'ny fepetra elution mitovy, 60/40 ACN/H2O ary 0 .1% TFA 20 µl/min hatramin'ny 80 µl/min amin'ny tsanganana roa. Ny sanda HETP kely indrindra amin'ny taham-pidirana tsara indrindra (80 µl / min) dia 2.6 µm ary 3.9 µm ho an'ny tsanganana PMP sy ny tsanganana Ascentis Express RP-Amide. Ny soatoavina HETP dia mampiseho fa ny fahombiazan'ny fisarahana amin'ny tsanganana PMP (100 x 1.8 mm id) dia ambony lavitra noho ny an'ny tsanganana Ascentis Express RP-Amide (100 x 1.8 mm id). Ny grafika van Deemter ao amin'ny sary 7 (A) dia mampiseho fa ny fihenan'ny sanda N dia tsy dia avo loatra amin'ny fitomboan'ny fikorianan'ny rivotra raha oharina amin'ny fianarana teo aloha. Ny fahombiazan'ny fisarahana ambony kokoa amin'ny tsanganana PMP (id 100 × 1.8 mm) raha oharina amin'ny tsanganana Ascentis Express RP-Amide dia mifototra amin'ny endrika sy ny haben'ny poti nohatsaraina ary ny fomba famonosana tsanganana be pitsiny ampiasaina amin'ny asa ankehitriny34.
(A) Van Deemter plot (HETP vs. mobile phase linear velocity) azo amin'ny tsanganana PMP (id 100 x 1.8 mm) amin'ny 60/40 ACN / H2O amin'ny 0.1% TFA. (B) Van Deemter plot (HETP versus mobile phase linear velocity) azo amin'ny tsanganana Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 mm) ao amin'ny 60/40 ACN/H2O amin'ny 0.1% TFA.
Ny dingana tsy misy polar amin'ny polystyrène intercalated dia nomanina sy nodinihina ho an'ny fisarahana ny fifangaroan'ny peptides synthetic sy ny hydrolyzate tryptic an'ny albumin serum olombelona (HSA) amin'ny chromatography ranon-javatra avo lenta. Ny fahombiazan'ny chromatographic an'ny tsanganana PMP ho an'ny fangaro peptide dia tena tsara amin'ny resaka fahombiazan'ny fisarahana sy ny famahana. Ny fahombiazan'ny fisarahana amin'ny tsanganana PMP dia noho ny antony maro toy ny haben'ny singa silica sy ny haben'ny mason-koditra, ny synthesis voafehy amin'ny dingana tsy mihetsika, ary ny fitaovana famonosana tsanganana sarotra. Ho fanampin'ny fahombiazan'ny fisarahana ambony, ny tombony hafa amin'ity dingana tsy mitongilana ity dia ny tsindry miverina amin'ny tsanganana ambany amin'ny tahan'ny fikorianan'ny rivotra. Ny tsanganana PMP dia azo averina be ary azo ampiasaina handinihana ny fifangaroan'ny peptides sy ny fandevonan-kanina tryptic ny proteinina isan-karazany. Mikasa ny hampiasa an'ity tsanganana ity izahay mba hanasarahana ny kapoaky ny bioactive amin'ny vokatra voajanahary, ny fitrandrahana ny zavamaniry fanafody sy ny holatra amin'ny chromatography ranoka. Amin'ny ho avy, ny tsanganana PMP dia hodinihina ihany koa amin'ny fisarahana ny proteinina sy ny antibody monoclonal.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Famotopotorana amin'ny rafitra fisarahan'ny peptide chromatography amin'ny dingana I: Fampandrosoana ny protocole momba ny tsanganana. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Famotopotorana amin'ny rafitra fisarahan'ny peptide chromatography amin'ny dingana I: Fampandrosoana ny protocole momba ny tsanganana.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., ary Petersson, P. Fanadihadiana momba ny rafitra fanasarahana peptide amin'ny alàlan'ny Chromatography Reverse-Phase, Fizarana I: Famolavolana Protocol ho an'ny Famaritana ny Tsanganana. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Famotopotorana amin'ny rafitra fisarahan'ny peptide chromatography amin'ny dingana I: Fampandrosoana ny protocole momba ny toetran'ny tsanganana. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Famotopotorana amin'ny rafitra fisarahan'ny peptide chromatography amin'ny dingana I: Fampandrosoana ny protocole momba ny toetran'ny tsanganana.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., ary Petersson, P. Fanadihadiana momba ny rafitra fanasarahana peptide amin'ny alàlan'ny Chromatography Reverse-Phase, Fizarana I: Famolavolana Protocol ho an'ny Famaritana ny Tsanganana.J.色谱法。 1603，113-129。 https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019).
Gomez, B. et al. Fomba hamoronana peptides mavitrika kokoa ho an'ny fitsaboana areti-mifindra. Biotechnology. Zava-bita 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. peptides fitsaboana synthetic: Siansa sy tsena. Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. peptides fitsaboana synthetic: Siansa sy tsena.Vliege P, Lisowski V, Martinez J ary Chreschatyski M. Peptides fitsaboana synthetic: siansa sy tsena.Vliege P, Lisowski V, Martinez J ary Khreschatsky M. Peptides fitsaboana synthetic: siansa sy tsena. fikarohana zava-mahadomelina. Androany 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced proteomic liquid chromatography. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced proteomic liquid chromatography.Jereo F., Smith RD ary Shen Yu. Advanced proteomic liquid chromatography. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱。 Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Famoronana proteinina mandroso 液相色谱。Jereo F., Smith RD ary Shen Yu. Advanced proteomic liquid chromatography.J. Chromatography. A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Ny chromatography ranoka avo lenta-spektrometrika faobe dia afaka manambatra ny metabolomika sy proteomika midadasika. anus. Chim. Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Ny anjara asan'ny UHPLC amin'ny fampandrosoana pharmaceutika. Chesnut, SM & Salisbury, JJ Ny anjara asan'ny UHPLC amin'ny fampandrosoana pharmaceutika.Chesnut, SM ary Salisbury, JJ Ny anjara asan'ny UHPLC amin'ny fampandrosoana pharmaceutika.Chesnut, SM ary Salisbury, JJ Ny anjara asan'ny UHPLC amin'ny fampivoarana zava-mahadomelina. J. Sept Science. 30(8), 1183–1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Lafiny fototra sy azo ampiharina amin'ny krômatôgrafia ranon-tsolika ultrahigh ho an'ny fisarahana haingana. Wu, N. & Clausen, AM Lafiny fototra sy azo ampiharina amin'ny krômatôgrafia ranon-tsolika ultrahigh ho an'ny fisarahana haingana.Wu, N. ary Clausen, AM Lafiny fototra sy azo ampiharina amin'ny krômatôgrafia ranon-tsavony avo lenta ho an'ny fisarahana haingana. Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 Wu, N. & Clausen, AM Lafiny fototra sy azo ampiharina amin'ny krômatôgrafia ranon-tsavony mahery vaika ho an'ny fisarahana haingana.Wu, N. ary Clausen, AM Lafiny fototra sy azo ampiharina amin'ny krômatôgrafia ranon-tsavony avo lenta ho an'ny fisarahana haingana.J. Sept. Science. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Fampiasana ny chromatography ranon-javatra ultra-performance amin'ny fampandrosoana pharmaceutique. Wren, SA & Tchelitcheff, P. Fampiasana ny chromatography ranon-javatra ultra-performance amin'ny fampandrosoana pharmaceutique.Ren, SA ary Chelischeff, P. Ny fampiasana ny chromatography ranon-javatra avo indrindra amin'ny fampandrosoana ny fanafody. Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用。 Wren, SA & Tchelitcheff, P.Ren, SA ary Chelischeff, P. Fampiharana ny chromatography ranoka ultra-performance amin'ny fampivoarana zava-mahadomelina.J. Chromatography. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. Hydrogel macroporous monolithic azo avy amin'ny emulsion menaka ao anaty rano miaraka amin'ny dingana anatiny avo lenta ho fanadiovana mahomby ny enterovirus 71. Chemical. tetikasa. Diary 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Ny anjara asan'ny chromatography ranoka amin'ny proteomika. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Ny anjara asan'ny chromatography ranoka amin'ny proteomika.Shi, Y., Xiang, R., Horvath, C. ary Wilkins, JA Ny anjara asan'ny chromatography ranoka amin'ny proteomika. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JAShi, Y., Xiang, R., Horvath, C. ary Wilkins, JA Ny anjara asan'ny chromatography ranoka amin'ny proteomika.J. Chromatography. A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Vutey, J.-L. & Guillarme, D. Fironana vaovao amin'ny fisarahan'ny chromatographic ranon-javatra mivadika amin'ny peptides sy proteinina fitsaboana: Teolojia sy fampiharana. & Guillarme, D. Fironana vaovao amin'ny fisarahan'ny chromatographic ranon-javatra mivadika amin'ny peptides sy proteinina fitsaboana: Teolojia sy fampiharana. & Guillarme, D. Новые тенденции в разделении терапевтических пептидов и белков с помощью жидкостной хроматографира хроматографира хроматографира теория и приложения. & Guillarme, D. Fironana vaovao amin'ny fisarahana ny peptides sy ny proteinina fitsaboana amin'ny alàlan'ny chromatography ranon-javatra mivadika: teoria sy fampiharana. & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用。 & Guillarme, D.ary Guillarmé, D. Fironana vaovao amin'ny fisarahana ny peptides sy ny proteinina fitsaboana amin'ny alàlan'ny chromatography ranon-javatra mivadika: teoria sy fampiharana.J. Pharm. Biomedical Science. anus. 69, 9–27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Fizarana roa-dimensional ny peptides mampiasa rafitra RP-RP-HPLC miaraka amin'ny pH samihafa amin'ny refy fisarahana voalohany sy faharoa. Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Fizarana roa-dimensional ny peptides mampiasa rafitra RP-RP-HPLC miaraka amin'ny pH samihafa amin'ny refy fisarahana voalohany sy faharoa.Gilar M., Olivova P., Dali AE ary Gebler JK Fizarana roa amin'ny peptides mampiasa ny rafitra RP-RP-HPLC miaraka amin'ny pH samihafa amin'ny refy fisarahana voalohany sy faharoa.Gilar M., Olivova P., Dali AE ary Gebler JK Fisarahan'ny peptide roa amin'ny fampiasana sanda pH samihafa amin'ny refy fisarahana voalohany sy faharoa amin'ny alàlan'ny rafitra RP-RP-HPLC. J. Sept Science. 28 (14), 1694–1703 (2005).
Fellitti, S. et al. Fanadihadiana momba ny fifindran'ny faobe sy ny toetran'ny kinetika amin'ny tsanganana chromatography mahomby feno feno poizina C18 feno porous sy superficielles kely noho ny 2 µm. J. Sept Science. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Fironana vao haingana sy fanamby famakafakana momba ny fitokanana, ny famantarana ary ny fanamarinana ny peptides bioactive zavamaniry. anus. Zavaboary anal. Chemical. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Muller, JB et al. Ny tontolon'ny proteomika ny fanjakan'ny fiainana. Natiora 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
De Luca, K. et al. Taorian'ny fitsaboana ny peptides fitsaboana amin'ny chromatography ranon-javatra fanomanana. Molecules (Basel, Soisa) 26(15), 4688 (2021).
Yang, Y. & Geng, X. Krômatôgrafia mifangaro sy ny fampiharana azy amin'ny biopolymers. Yang, Y. & Geng, X. Krômatôgrafia mifangaro sy ny fampiharana azy amin'ny biopolymers.Yang, Yu. ary Geng, X. Chromatography mode mifangaro sy ny fampiharana azy amin'ny biopolymers. Yang, Y. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 Yang, Y. & Geng, X. chromatography mode mifangaro sy ny fampiharana azy amin'ny biopolymers.Yang, Yu. ary Gene, X. chromatography mode mifangaro sy ny fampiharana azy amin'ny biopolymers.J. Chromatography. A 1218(49), 8813–8825 (2011).