Mauruuru koe mo te toro ki Nature.com.Ko te putanga pūtirotiro e whakamahia ana e koe he iti te tautoko CSS.Mo te wheako pai rawa atu, e taunaki ana matou me whakamahi koe i tetahi kaitirotiro kua whakahoutia (me monohia ranei te Aratau Hototahi ki Internet Explorer).I tenei wa, hei whakarite i te tautoko tonu, ka tukuna e matou te waahi kaore he momo me te JavaScript.
Ko te kunenga mai o nga parapara moroiti ka uru ki te taupatupatu i waenga i te kowhiringa maaori, e pai ake ai nga pirinoa, me te paheketanga ira, e ngaro ai nga ira ira me te whakaemi i nga huringa kino.I konei, kia mohio ai me pehea te puta o tenei aukati i runga i te tauine o te macromolecule kotahi, ka whakaahuahia e matou te hanganga cryo-EM o te ribosome o Encephalitozoon cuniculi, he rauropi eukaryotic me tetahi o nga genome iti rawa o te taiao.Ko te tino whakahekenga o te rRNA i roto i te E. cuniculi ribosomes e haere tahi ana me nga huringa hanganga o mua, penei i te kukuwhatanga o nga hononga rRNA hono me te rRNA kaore he pupuhi.I tua atu, i ora te E. cuniculi ribosome i te ngaronga o nga kongakonga rRNA me nga pūmua ma te whakawhanake i te kaha ki te whakamahi i nga ngota ngota iti hei tauira hanganga o nga kongakonga rRNA kua whakahekehia me nga pūmua.I roto i te katoa, ka whakaatuhia e matou ko nga hanganga rapoi kua roa e whakaarohia ana kua heke, kua heke, me te pa ki nga huringa whakararuraru he maha nga tikanga utu e pupuri ana i a raatau ahakoa te tino whakahekenga ngota.
Na te nuinga o nga roopu o nga parapara moroiti he taputapu rapoi motuhake hei whakamahi i o raatau kaihautu, he maha tonu nga wa me whakawhanake tatou i nga rongoa rereke mo nga roopu o nga parapara1,2.Heoi ano, ko nga taunakitanga hou e kii ana ko etahi ahuatanga o te kunenga o te parasite he hurihanga me te tino matapae, e tohu ana i te kaupapa pea mo nga wawaotanga rongoa whanui i roto i nga parapara moroiti3,4,5,6,7,8,9.
Kua tautuhia e nga mahi o mua he ahua kukuwhatanga noa i roto i nga parapara moroiti e kiia nei ko te whakaheke ira, te pirau ira ranei10,11,12,13.Ko nga rangahau o naianei e whakaatu ana ka whakarerea e nga microorganisms to ratau oranga noho-kore, ka noho hei parapara intracellular (he endosymbionts ranei), ka puhoi te ahua o o ratou momo ira, engari he mea whakamiharo i roto i nga miriona tau9,11.I roto i te tukanga e mohiotia ana ko te pirau ira, ka whakaemihia e nga parapara moroiti nga huringa kino ka huri i te maha o nga ira nui o mua ki roto i nga pseudogenes, ka paheke haere te ira me te tiango ira14,15.Ka taea e tenei tiango te whakangaro ake ki te 95% o nga ira i roto i nga rauropi o roto o nga pūtau tawhito rawa atu ki nga momo noho-kore tata.No reira, ko te kunenga mai o nga pirinoa ki roto i nga pūtau he tohanga i waenga i nga ope whakakeke e rua: ko te kowhiringa taiao a Darwin, ka puta ki te whakapai ake o nga pirinoa, me te paheketanga o te ira tangata, ka maka nga pirinoa ki te warewaretanga.Kare e tino marama te pehea i puta mai ai te parapara mai i tenei kume-o-whawhai me te pupuri i te mahi o tana hanganga ngota.
Ahakoa kaore i te tino marama te tikanga o te pirau ira, ko te ahua ka puta mai i te nuinga o te waa na te rere o te ira ira.Na te mea e noho ana nga pirinoa ki roto i nga taupori iti, takakau, me te iti o te ira, e kore e taea e ratou te whakakore tika i nga huringa kino ka puta i etahi wa i te tukuruatanga o te DNA.Ko tenei ka arahi ki te whakaemi korekore o nga huringa kino me te whakahekenga o te ira parapara.Ko te mutunga mai, ehara i te mea ka ngaro noa nga ira ira kaore e tika ana mo tona oranga i roto i te taiao intracellular.Ko te kore e taea e te taupori pirinoa ki te whakakore tika i nga irakētanga whakakino karaka e whakaemi ai i enei huringa puta noa i te ira, tae atu ki o ratou ira tino nui.
Ko te nuinga o to maatau mohiotanga o naianei mo te whakaheke ira ira i ahu mai i nga whakataurite o nga raupapa ira ira, me te iti o te aro ki nga huringa o nga ngota ngota e mahi ana i nga mahi tiaki whare me te mahi hei whaainga tarukino pea.Kua whakaatuhia e nga rangahau whakatairite ko te taumahatanga o nga huringa microbial i roto i te pūkoro ka puta ki te tohu i nga pūmua me nga waikawa nucleic ki te hee me te whakahiato, ka nui ake te whakawhirinaki ki te chaperone me te hypersensitive ki te wera19,20,21,22,23.I tua atu, ko nga momo pirinoa—te kukuwhatanga motuhake i etahi wa ka wehea ki te 2.5 piriona tau—i pa ki te ngaronga rite tonu o nga pokapu whakahaere kounga i roto i ta raatau whakahiato pūmua5,6 me nga tikanga whakatikatika DNA24.Heoi, he iti noa te mohio mo te paanga o te noho ira-a-roto ki runga i nga ahuatanga katoa o nga macromolecules pūtau, tae atu ki te urutaunga ngota ki te piki haere o te taumahatanga o nga huringa kino.
I roto i tenei mahi, kia pai ake ai te mohio ki te whanaketanga o nga pūmua me nga waikawa karihi o nga microorganisms intracellular, i whakatauhia e matou te hanganga o nga ribosomes o te parasite intracellular Encephalitozoon cuniculi.Ko te E. cuniculi he rauropi rite ki te harore no roto i te roopu microsporidia parasitic he iti noa nga ira eukaryotic, na reira ka whakamahia hei rauropi tauira hei ako i te pirau ira25,26,27,28,29,30.I tata nei, i whakatauhia te hanganga ribosome cryo-EM mo nga momo ira iti o Microsporidia, Paranosema locustae, me Vairimorpha necatrix31,32 (~3.2 Mb genome).Ko enei hanganga e kii ana ko etahi mate o te whakakaha rRNA ka utua e te whakawhanaketanga o nga hononga hou i waenga i nga pūmua ribosomal tata, i te rironga ranei o nga pūmua ribosom msL131,32 hou.Momo enchephalitozoon (genome ~ 2.5 miriona bp), e whakaatu ana i te tohu o te ira tangata kaore i te neke atu i nga riipene a te roboosuric. Ko nga pūmua ribosomal na te kore o te homologues i roto i te E. Cuniculi GenOme26,27,28.Na reira, i whakatauhia e te E. cuniculi ribosome te whakaatu i nga rautaki kaore i mohiotia i mua mo te urutaunga ngota ki te pirau ira.
Ko ta tatou hanganga cryo-EM e tohu ana i te ribosome cytoplasmic eukaryotic iti rawa atu hei tohu me te whakaatu he pehea te paanga o te tohu mutunga o te whakaheke ira ira ki te hanga, te huihuinga, me te whanaketanga o nga miihini ngota e whai kiko ana ki te pūtau.I kitea e matou kua takahia e te E. cuniculi ribosome te maha o nga maataapono kua tiakina katoatia o te whakakopa RNA me te huihuinga ribosome, a ka kitea he pūmua ribosomal hou, kaore i mohiotia i mua.Kare i tino ohorere, ka whakaatu matou kua tipu te ribosomes microsporidia i te kaha ki te here i nga ngota ngota iti, me te whakapae ko nga tapahi i roto i te rRNA me nga pūmua ka puta nga auahatanga kunenga ka puta pea i te mutunga he huanga whaihua ki te ribosome.
Hei whakapai ake i to maatau mohiotanga ki te kukuwhatanga o nga pūmua me nga waikawa karihi i roto i nga rauropi intracellular, i whakatau matou ki te wehe i nga puaa E. cuniculi mai i nga ahurea o nga pūtau mammalian pangia kia purea o ratou ribosomes me te whakatau i te hanganga o enei ribosomes.He uaua ki te whiwhi i te maha o nga microsporidia parapara natemea kaore e taea te whakatipu microsporidia i roto i te tikanga matūkai.Engari, ka tipu, ka whakaputa uri anake i roto i te pūtau manaaki.Na reira, ki te whiwhi i te koiora E. cuniculi mo te purenga ribosome, ka pangia e matou te raina pūtau whatukuhu mammiana RK13 ki nga puaa E. cuniculi me te whakatipu i enei pūtau kua pangia mo etahi wiki kia taea ai e E. cuniculi te tipu me te tini.Ma te whakamahi i te monolayer pūtau pangia o te hawhe mita tapawha, i taea e matou te pure i te 300 mg o nga puaa Microsporidia me te whakamahi hei wehe i nga ribosomes.Katahi ka pakaruhia e matou nga pua kua purea ki nga pirepire karaihe ka wehea nga ribosomes ma te whakamahi i te hautanga polyethylene glycol takawaenga o nga lysates.Na tenei ka taea e matou te whiwhi tata ki te 300 µg o nga ribosomes E. cuniculi mata mo te tātari hanganga.
Na ka kohia e matou nga whakaahua cryo-EM ma te whakamahi i nga tauira ribosome ka puta mai, ka tukatukahia enei whakaahua ma te whakamahi i nga kanohi e rite ana ki te waahanga ribosom nui, te upoko iti, me te iti.I roto i tenei mahi, i kohia e matou nga whakaahua o te 108,000 matūriki ribosom me nga whakaahua cryo-EM me te taumira o te 2.7 Å (Whakaahua Tāpiri 1-3).Ka whakamahia e matou nga whakaahua cryoEM hei whakatauira i te rRNA, te pūmua ribosomal, me te tauwehe hibernation Mdf1 e hono ana ki te E. cuniculi ribosomes (Fig. 1a, b).
he Hanganga o te E. cuniculi ribosome i roto i te matatini me te tauwehe moe moe Mdf1 (pdb id 7QEP).b Mapi o te take moe moe Mdf1 e hono ana ki te E. cuniculi ribosome.c Mapi hanganga tuarua e whakatairite ana i te rRNA kua ora ake i roto i nga momo Microsporidian ki nga hanganga ribosomal e mohiotia ana.Ko nga panui e whakaatu ana i te waahi o nga kongakonga rRNA kua whakanuia (ES) me nga waahi hohe ribosome, tae atu ki te waahi wetewete (DC), te sarcinicin loop (SRL), me te peptidyl transferase centre (PTC).d Ko te kiato irahiko e rite ana ki te pokapū peptidyl transferase o te E. cuniculi ribosome e tohu ana he rite tonu te hanganga o tenei waahi catalytic i roto i te parapara E. cuniculi me ona ope, tae atu ki te H. sapiens.e, f Ko te kiato irahiko e rite ana o te pokapū wetewete (e) me te hanganga hoahoa o te pokapū wetewaehere (f) e tohu ana he toenga U1491 a E. cuniculi hei utu mo te A1491 (E. coli tatau) i roto i te maha atu o nga eukaryotes.Ko tenei huringa e tohu ana ko te E. cuniculi kei te tairongo ki nga paturopi e aro ana ki tenei waahi kaha.
He rereke ki nga hanganga o mua o te V. necatrix me te P. locustae ribosomes (ko nga hanganga e rua e tohu ana i te whanau microsporidia Nosematidae me te tino rite ki a raatau ano), 31,32 E. cuniculi ribosomes he maha nga tukanga o te rRNA me te wehenga pūmua.Te whakahekenga atu (Whakaahua Tāpiri 4-6).I roto i te rRNA, ko nga huringa tino nui ko te ngaro katoa o te wahanga 25S rRNA kua whakakaha ES12L me te whakahekenga wahanga o te h39, h41, me te H18 helices (Fig. 1c, Tāpiritanga Fig. 4).I roto i nga pūmua ribosomal, ko nga huringa tino whakamiharo ko te ngaro katoa o te pūmua eS30 me te poto o nga pūmua eL8, eL13, eL18, eL22, eL29, eL40, uS3, uS9, uS14, uS17, me eS7 (Taupiri 5, 5.
No reira, ko te tino whakahekenga o nga momo momo Encephalotozoon/Ordospora e kitea ana i roto i o raatau hanganga ribosome: E. cuniculi ribosomes ka wheako i te mate tino nui o te ihirangi pūmua i roto i nga ribosomes cytoplasmic eukaryotic i raro i te ahuatanga o te hanganga, a kaore ano i a raatau nga rRNA me nga kongakonga pūmua e tiakina nuitia ana i roto i nga rohe e toru, engari i roto i nga waahanga ora e toru.Ko te hanganga o te E. cuniculi ribosome e whakarato ana i te tauira ngota tuatahi mo enei huringa me te whakaatu i nga kaupapa kukuwhatanga kua warewarehia e nga momo tohu whakatairite me nga rangahau o te hanganga biomolecular intracellular (Taupiri Fig. 7).Kei raro nei, ka whakaahuahia ia o enei huihuinga me o raatau takenga mai i te kukuwhatanga me o raatau paanga pea ki te mahi ribosome.
Ka kitea e matou, i tua atu i nga tapahi rRNA nui, ko nga ribosomes E. cuniculi he rereke rRNA ki tetahi o o raatau waahi kaha.Ahakoa he rite tonu te hanganga o te pokapū peptidyl transferase o te E. cuniculi ribosome ki etahi atu ribosomes eukaryotic (Fig. 1d), he rereke te pokapū wetewete na te rereketanga o te raupapa i te nucleotide 1491 (E. coli numbering, Fig. 1e, f).He mea nui tenei tirohanga na te mea kei te waahi wetewete o nga ribosomes eukaryotic he toenga G1408 me A1491 ka whakaritea ki nga toenga momo kitakita A1408 me G1491.Ko tenei rereketanga kei raro i te maaramatanga rereke o nga ribosomes huakita me te eukaryotic ki te whanau aminoglycoside o nga paturopi ribosomal me etahi atu ngota ngota iti e aro ana ki te waahi wetewete.I te waahi wetewete o te ribosome E. cuniculi, ka whakakapihia te toenga A1491 ki te U1491, ka hanga pea he atanga herenga ahurei mo nga ngota ngota iti e aro ana ki tenei waahi hohe.Ko te momo rereke A14901 ano kei roto i etahi atu microsporidia penei i te P. locustae me te V. necatrix, e kii ana kei te horahia i waenga i nga momo microsporidia (Fig. 1f).
Na te mea ko o maatau tauira ribosome E. cuniculi ribosome i wehea mai i nga puaa kaore i te mahi, i whakamatauria e matou te mapi cryo-EM o E. cuniculi mo te herenga ribosome i whakaahuahia i mua i raro i te ahotea, te matekai ranei.Ko nga take moe moe 31,32,36,37, 38. I whakaritea e matou te hanganga o mua o te ribosome moe moe me te mapi cryo-EM o te E. cuniculi ribosome.Mo te tauranga, ka whakamahia nga ribosomes S. cerevisiae i roto i te matatini me te tauwehe hibernation Stm138, nga ribosomes mawhitiwhiti i te matatini me te tauwehe Lso232, me nga ribosomes V. necatrix i te matatini me nga mea Mdf1 me Mdf231.I taua wa ano, i kitea e matou te kiato cryo-EM e rite ana ki te toenga o te take Mdf1.He rite ki te Mdf1 e herea ana ki te ribosome V. necatrix, ka herea ano a Mdf1 ki te ribosome E. cuniculi, i reira ka aukati i te waahi E o te ribosome, ka awhina pea ki te whakawhiwhi ribosomes ina ka kore te mahi a te parapara i runga i te koretake o te tinana (Whakaahua 2).).
Ka aukati a Mdf1 i te waahi E o te ribosome, ka puta hei awhina i te whakahohe i te ribosome i te wa e kore ai e hohe nga puaa pirinoa.I roto i te hanganga o te E. cuniculi ribosome, i kitea e Mdf1 te hanga i tetahi hononga kaore i mohiotia i mua ki te kakau L1 ribosome, ko te waahanga o te ribosome e whakahaere ana i te tukunga o te tRNA deacylated mai i te ribosome i te wa o te whakahiato pūmua.Ko enei hononga e kii ana ka wehe a Mdf1 mai i te ribosome ma te whakamahi i te tikanga rite ki te tRNA deacetylated, e whakaatu ana ka taea e te ribosome te tango i te Mdf1 hei whakahohe i te whakahiato pūmua.
Heoi, i kitea e to maatau hanganga he hononga i waenga i te Mdf1 me te L1 ribosome waewae (te wahanga o te ribosome e awhina ana ki te tuku i te tRNA deacylated mai i te ribosome i te wa o te whakahiato pūmua).Ina koa, ka whakamahia e Mdf1 nga hoapaki rite tonu ki te wahanga tuke o te ngota ngota tRNA kua whakahekehia (Whakaahua 2).I whakaatu mai tenei whakatauira irapoi i mua atu ka wehe a Mdf1 mai i te ribosome ma te whakamahi i te tikanga rite ki te tRNA deacetylated, e whakamarama ana me pehea te tango a te ribosome i tenei take moe moe hei whakahohe i te whakahiato pūmua.
I te wa e hanga ana i te tauira rRNA, i kitea e matou ko te E. cuniculi ribosome he tino takai nga kongakonga rRNA, i kiia e matou he rRNA kua honoa (Fig. 3).I roto i nga ribosomes e awhi ana i nga rohe e toru o te oranga, ka takai te rRNA ki nga hanganga e tu ai te nuinga o te rRNA ki te takirua turanga ka takai tetahi ki tetahi, ki te taunekeneke ranei ki nga pūmua ribosom38,39,40.Heoi, i roto i te E. cuniculi ribosomes, te ahua nei kei te takahia e nga rRNA tenei maapono whakakopa ma te huri i etahi o o ratou helices ki nga rohe rRNA kua tuwhera.
Te hanganga o te H18 25S rRNA helix i S. cerevisiae, V. necatrix, me E. cuniculi.Ko te tikanga, i roto i nga ribosomes e toro ana i nga rohe ora e toru, ka uru tenei hononga hono ki roto i te RNA helix kei roto 24 ki te 34 toenga.I roto i te Microsporidia, he rereke, ka whakahekehia tenei hononga rRNA ki nga hononga e rua-nui-a-uridine-nui kei roto 12 anake nga toenga.Ko te nuinga o enei toenga ka kitea ki nga whakarewa.E whakaatu ana te ahua ko te microsporidia parasitic ka takahi i nga tikanga whanui o te whakakopa rRNA, i te nuinga o te wa ka honoa nga turanga rRNA ki etahi atu turanga, ka uru atu ranei ki nga taunekeneke rRNA-pūmua.I roto i te microsporidia, ka mau etahi kongakonga rRNA ki runga i te kopa kino, ka huri te topa o mua rRNA hei kongakonga whenu kotahi e whakaroa tata ana ki te raina tika.Ko te aroaro o enei rohe rereke ka taea e te microsporidia rRNA te here i nga kongakonga rRNA tawhiti ma te whakamahi i te iti o nga turanga RNA.
Ko te tauira tino whakamiharo o tenei whakawhitinga kukuwhatanga ka kitea i roto i te H18 25S rRNA helix (Fig. 3).I roto i nga momo mai i te E. coli ki te tangata, kei roto i nga turanga o tenei helix rRNA he 24-32 nucleotides, ka hangai he tokarere paku noa.I roto i nga hanganga ribosomal i tautuhia i mua mai i te V. necatrix me te P. locustae, 31,32 ko nga turanga o te H18 helix he waahi kaore i te waahi, engari ka tiakina te huinga o te nucleotide.Heoi, i roto i te E. cuniculi ka waiho tenei kongakonga rRNA hei hono poto rawa atu 228UUUGU232 me 301UUUUUUUUU307.Kaore i rite ki nga kongakonga rRNA angamaheni, karekau enei hononga e whai kiko ana ki te uridine e korikori, e hono nui ranei ki nga pūmua ribosomal.Engari, ka tangohia e ratou nga hanganga whakarewa-tuwhera me te tino tuwhera i roto i nga whenu rRNA e toro tika ana.Ko tenei ahua totoro e whakamarama ana me pehea te whakamahi a E. cuniculi i nga turanga RNA 12 anake hei whakaki i te 33 Å mokowhiti i waenga i te H16 me te H18 rRNA helices, ko etahi atu momo e hiahia ana kia rua ake nga turanga rRNA hei whakakii i te waahi.
No reira, ka taea e taatau te whakaatu, na roto i te whakakopa kino kino, kua whakawhanakehia e te microsporidia parasitic he rautaki ki te kirimana i nga wahanga rRNA e noho whanui tonu ana puta noa i nga momo i roto i nga waahi e toru o te oranga.Te ahua nei, ma te whakaemi i nga huringa e huri ana i nga helices rRNA ki roto i nga hononga poly-U poto, ka taea e E. cuniculi te hanga i nga kongakonga rRNA rereke kei roto i te iti o nga nucleotides e taea ana mo te herenga o nga kongakonga rRNA tawhiti.Ka awhina tenei ki te whakamaarama he pehea te hekenga nui o te microsporidia i roto i o raatau hanganga ngota me te kore e ngaro to raatau hanganga me te mahi.
Ko tetahi atu ahuatanga rereke o E. cuniculi rRNA ko te ahua o te rRNA kaore he matotoru (Fig. 4).Ko nga pupuhi he nucleotides karekau he takirua turanga ka huri mai i te RNA helix, kaua e huna ki roto.Ko te nuinga o nga totoro rRNA ka mahi hei piri ngota ngota, ka awhina ki te here i nga pūmua ribosom e tata ana, etahi atu kongakonga rRNA ranei.Ko etahi o nga pupuhi ka mahi hei inihi, ka taea e te rRNA helix ki te whakakorikori me te takai pai mo te whakahiato pūmua whai hua 41 .
a Karekau he toronga rRNA (S. cerevisiae numbering) i te hanganga ribosome E. cuniculi, engari kei roto i te nuinga atu o nga eukaryotes b E. coli, S. cerevisiae, H. sapiens, me E. cuniculi ribosomes roto.Karekau nga pirinoa i te maha o nga pupuhi rRNA tawhito, tino tiakina.Ko enei matotoru ka whakapumau i te hanganga ribosome;no reira, ko to ratou kore i roto i te microsporidia e tohu ana i te iti o te pumau o te whakakopa rRNA i roto i nga parapara microsporidia.Ko te whakataurite ki nga kakau P (L7/L12 nga kakau i roto i te huakita) e whakaatu ana ko te ngaro o nga pupuhi rRNA i etahi wa ka rite ki te ahua o nga pupuhi hou i te taha o nga pupuhi kua ngaro.Ko te H42 helix i roto i te 23S/28S rRNA he pupuhi tawhito (U1206 i Saccharomyces cerevisiae) e kiia ana he 3.5 piriona tau te iti rawa na tona whakamarumaru i nga wahanga e toru o te oranga.I roto i te microsporidia, ka whakakorehia tenei pupuhi.Heoi ano, ka puta mai he puku hou ki te taha o te putunga kua ngaro (A1306 i E. cuniculi).
Ko te mea whakamiharo, i kitea e matou ko te E. cuniculi ribosomes kei te kore te nuinga o nga pupuhi rRNA e kitea ana i etahi atu momo, tae atu ki te neke atu i te 30 nga pupuhi e tiakina ana i etahi atu eukaryotes (Fig. 4a).Ka whakakorea e tenei mate te maha o nga hononga i waenga i nga ribosomes ribosomes me nga helices rRNA e tata ana, i etahi wa ka hangai nga kohao nui i roto i te ribosome, ka nui ake te pore o te ribosome E. cuniculi ki nga ribosomes tuku iho (Fig. 4b).Ko te mea nui, i kitea e matou ko te nuinga o enei pupuhi i ngaro ano i roto i nga hanganga o te V. necatrix me te P. locustae ribosome i kitea i mua, i warewarehia e nga waahanga o mua31,32.
I etahi wa ka haere tahi te ngaro o nga pupuhi rRNA me te whakawhanaketanga o nga pupuhi hou i te taha o te pupuhi ngaro.Hei tauira, kei roto i te ribosomal P-stem he pupuhi U1208 (kei roto i te Saccharomyces cerevisiae) i ora mai i te E. coli ki te tangata, no reira e 3.5 piriona tau te pakeke.I te wa o te whakahiato pūmua, ka awhina tenei pupuhi i te kakau P ki te neke i waenga i nga hanganga tuwhera me te kati kia taea e te ribosome te kimi i nga mea whakamaori me te tuku ki te waahi hohe.I roto i nga ribosomes E. cuniculi, karekau tenei matotoru;heoi, ka taea e te whakamaatototanga hou (G883) kei roto i nga takirua turanga e toru anake ka whai waahi ki te whakahoki mai i te tino ngawari o te kakau P (Fig. 4c).
Ko o maatau raraunga i runga i te rRNA kaore he pupuhi e kii ana ko te whakaiti rRNA kaore i te iti ki te ngaro o nga huānga rRNA i runga i te mata o te ribosome, engari ka uru ano pea ki te ribosome karihi, ka hanga he hapa ngota ngota pirinoa kaore ano kia whakaahuahia i roto i nga ruma ora-kore.ka kitea nga momo ora.
I muri i te whakatauira i nga pūmua ribosomal canonical me te rRNA, i kitea e matou kaore e taea e nga waahanga ribosomal tikanga te whakamarama i nga wahanga e toru o te ahua cryo-EM.E rua o enei kongakonga he ngota ngota iti te rahi (Fig. 5, Tāpiritanga Fig. 8).Ko te wahanga tuatahi ka whakairihia ki waenga i nga ribosomal proteins uL15 me te eL18 i roto i te waahi e nohoia ana e te C-terminus o eL18, ka whakapotohia i E. cuniculi.Ahakoa kaore e taea te whakatau i te tuakiri o tenei ngota ngota, ka tino whakamaramatia te rahi me te ahua o tenei motu kiato na te noho mai o nga ngota ngota spermidine.Ko tana herenga ki te ribosome ka whakapumauhia e te microsporidia-specific mutations i roto i te uL15 proteins (Asp51 me Arg56), te ahua nei ka piki ake te hononga o te ribosome mo tenei ngota ngota iti, na te mea ka taea e uL15 te takai i te ngota ngota iti ki te hanga ribosom.Whakaahua Tāpiri 2).8, raraunga taapiri 1, 2).
Ko te whakaahua Cryo-EM e whakaatu ana i te noho o nga nucleotides i waho o te ribose e herea ana ki te E. cuniculi ribosome.I roto i te ribosome E. cuniculi, kei te noho tahi tenei nucleotide ki te 25S rRNA A3186 nucleotide (Saccharomyces cerevisiae numbering) i roto i te nuinga atu o nga ribosomes eukaryotic.b I roto i te hanganga ribosomal o E. cuniculi, ko tenei nucleotide kei waenganui i nga pūmua ribosomal uL9 me te eL20, na reira ka whakapumau i te whakapiri i waenga i nga pūmua e rua.cd eL20 tātaritanga tiaki raupapa i waenga i nga momo microsporidia.Ko te rakau phylogenetic o nga momo Microsporidia (c) me te raupapa raupapa maha o te pūmua eL20 (d) e whakaatu ana ko nga toenga here-nucleotide F170 me te K172 kei te tiakina i roto i te nuinga o Microsporidia angamaheni, haunga te S. lophii, haunga te Microsporidia peka wawe, i mau tonu te rRNA ES39L.E whakaatu ana te ahua nei ko nga toenga herenga nucleotide F170 me te K172 kei roto anake i te eL20 o te ira momo microsporidia kua tino heke, engari kaore i roto i etahi atu eukaryotes.I roto i te katoa, ko enei raraunga e whakaatu ana kua whakawhanakehia e nga ribosomes Microsporidian he pae here nucleotide e ahua ana ki te here i nga ngota ngota AMP me te whakamahi ki te whakapumau i nga taunekeneke pūmua-pūmua i roto i te hanganga ribosomal.Ko te nui o te tiaki i tenei waahi here i Microsporidia me te kore i roto i etahi atu eukaryotes e tohu ana ka taea e tenei waahi te whakarato i tetahi painga oranga mo Microsporidia.No reira, ko te pute here nucleotide i roto i te ribosome microsporidia karekau he ahua whakaheke, he ahua mutunga ranei o te whakahekenga o te rRNA pera i te korero i mua ake nei, engari he auahatanga whanaketanga whai hua e taea ai e te ribosome microsporidia te here tika i nga ngota ngota iti, ma te whakamahi hei poraka hanga rapoi.poraka hanga mo nga ribosomes.Na tenei kitenga ko te microsporidia ribosome anake te ribosome e mohiotia ana ki te whakamahi i te nucleotide kotahi hei poraka hangahanga.f Te ara kunenga whakapae i ahu mai i te herenga nucleotide.
Ko te tuarua o te kiato taumaha ngota iti kei te atanga i waenga i nga pūmua ribosomal uL9 me te eL30 (Fig. 5a).I korerohia tenei atanga i mua i te hanganga o te Saccharomyces cerevisiae ribosome hei waahi here mo te nucleotide 25S o te rRNA A3186 (he waahanga o te toronga ES39L rRNA)38.I whakaatuhia i roto i nga ribosomes P. locustae ES39L kua heke, ka herea e tenei atanga tetahi nucleotide kotahi e kore e mohiotia 31, a ka whakaarohia ko tenei nucleotide he ahua whakamutunga iti o te rRNA, kei roto ko te roa o te rRNA he ~130-230 nga turanga.Ka whakahekehia te ES39L ki te nucleotide kotahi 32.43.E tautoko ana a maatau whakaahua cryo-EM i te whakaaro ka taea te whakamarama e te nucleotides.Heoi, ko te taumira teitei ake o to maatau hanganga i whakaatu ko tenei nucleotide he ngota ngota extraribosomal, pea ko te AMP (Fig. 5a, b).
Ka patai matou mehemea i puta mai te waahi here nucleotide i roto i te ribosome E. cuniculi ribosome ranei i mua ranei.I te mea ko te herenga nucleotide te nuinga o te takawaenga e nga toenga Phe170 me Lys172 i roto i te eL30 ribosomal pūmua, i aromatawaihia e matou te tiaki i enei toenga i roto i te 4396 eukaryotes kanohi.Ka rite ki te take o te uL15 i runga ake nei, i kitea e matou ko nga toenga Phe170 me Lys172 e tino tiakina ana i roto i te Microsporidia angamaheni, engari kei te ngaro i etahi atu eukaryotes, tae atu ki te Microsporidia Mitosporidium me te Amphiamblys atypical, kaore i te whakahekehia te wahanga ES39L rRNA 44, 45, 45c.-e).
Ka huihuia, ka tautoko enei raraunga i te whakaaro kua whanakehia e E. cuniculi me etahi atu microsporidia canonical te kaha ki te hopu tika i te maha o nga metabolites iti i roto i te hanganga ribosome hei utu mo te hekenga o te rRNA me nga taumata pūmua.I roto i te mahi pera, kua whakawhanakehia e ratou he kaha ahurei ki te here i nga nucleotides i waho o te ribosome, e whakaatu ana ka utua e nga hanganga ngota parataiao ma te hopu i te maha o nga metabolites iti me te whakamahi hei tauira hanganga o te RNA me nga kongakonga pūmua kua heke..
Ko te tuatoru o nga waahanga kore-whakaaro o to maatau mapi cryo-EM, i kitea i roto i te waahanga ribosom nui.Ko te taumira ahua teitei (2.6 Å) o to maatau mapi e tohu ana ko tenei kiato no nga pūmua me nga huinga ahurei o nga toenga mekameka taha nui, i taea ai e matou te tautuhi i tenei kiato hei pūmua ribosomal i mohiotia i mua i mohiotia e matou Ko te ingoa ko msL2 (Microsporidia- pūmua motuhake L2) (tikanga, ahua 6).I kitea e ta maatau rapunga homology ko te msL2 e tiakina ana i roto i te momo Microsporidia o te puninga Encephaliter me Orosporidium, engari karekau i etahi atu momo, tae atu ki etahi atu Microsporidia.I roto i te hanganga ribosomal, kei te noho a msL2 i te waahi i hangaia e te ngaro o te ES31L rRNA roa.I tenei korekore, ka awhina a msL2 ki te whakapumau i te whakakopa rRNA ka taea te utu mo te ngaronga o te ES31L (Whakaahua 6).
he kiato irahiko me te tauira o te microsporidia-specific ribosomal protein msL2 i kitea i roto i te E. cuniculi ribosomes.b Ko te nuinga o nga ribosomes eukaryotic, tae atu ki te ribosome 80S o Saccharomyces cerevisiae, kua ngaro te whakakaha ES19L rRNA i roto i te nuinga o nga momo Microsporidian.Ko te hanganga o mua o te V. necatrix microsporidia ribosome e tohu ana ko te mate o te ES19L i roto i enei parapara ka utua e te whanaketanga o te msL1 ribosomal pūmua hou.I roto i tenei rangahau, i kitea e matou ko te E. cuniculi ribosome i whakawhanake ano he ribosomal RNA mimic protein hei utu mo te ngaronga o te ES19L.Heoi ano, ko te msL2 (kua tohuhia inaianei ko te pūmua ECU06_1135 whakapae) me te msL1 he rereke te takenga o te hanganga me te kukuwhatanga.c Ko tenei kitenga o te whakatipuranga o nga pūmua ribosomes msL1 me te msL2 e puta keeanea e kii ana mena ka kohia e nga ribosome nga huringa kino i roto i o ratou rRNA, ka taea e ratou te eke ki nga taumata o mua o te kanorau titonga ahakoa he waahanga iti o nga momo e tata ana.Ka taea e tenei kitenga te whakamarama i te takenga mai me te kukuwhatanga o te ribosome mitochondrial, e mohiotia ana mo te iti o te rRNA me te rereke rereke o te hanganga pūmua puta noa i nga momo.
Ka whakatauritea e matou te pūmua msL2 me te pūmua msL1 i whakaahuatia i mua, ko te pūmua ribosomes motuhake mo te microsporidia-motuhake e kitea ana i roto i te ribosome V. necatrix.I hiahia matou ki te whakamatautau mena he hononga kunenga te msL1 me te msL2.I whakaatuhia e ta maatau tātaritanga ko te msL1 me te msL2 e noho ana i te kohao kotahi i roto i te hanganga ribosom, engari he rereke nga hanganga tuatahi me te tuatoru, e tohu ana i to raatau takenga kunenga motuhake (Fig. 6).No reira, ko ta matou kitenga i te msL2 he taunakitanga ka taea e nga roopu o nga momo eukaryotic kiato te whanake takitahi nga pūmua ribosomes motuhake hei utu mo te ngaronga o nga kongakonga rRNA.Ka kitea tenei kitenga ko te nuinga o nga ribosomes eukaryotic cytoplasmic he pūmua rereke, tae atu ki te whanau kotahi o nga pūmua ribosomal 81.Ko te ahua o te msL1 me te msL2 i roto i nga momo momo microsporidia hei whakautu i te ngaronga o nga wahanga rRNA roa e tohu ana ko te paheketanga o te hangahanga rapoi o te pirinoa ka rapua e nga pirinoa nga whakarereketanga utu, tera pea ka riro mai i nga taupori parapara rereke.hanganga.
Ka mutu, ka oti ta matou tauira, ka whakatauritea e matou te hanganga o te ribosome E. cuniculi ki tera i tohuhia mai i te raupapa ira.He maha nga pūmua ribosomal, tae atu ki te eL14, eL38, eL41, me te eS30, i whakaarohia i mua kua ngaro mai i te E. cuniculi genome na te kore o o ratou homologues mai i te E. cuniculi genome.Ko te ngaronga o te maha o nga pūmua ribosomal e matapaetia ana i roto i te nuinga atu o nga pirinoa intracellular tino whakaheke me nga endosymbionts.Hei tauira, ahakoa ko te nuinga o nga huakita ora-kore kei roto i te whanau kotahi o te 54 ribosomal pūmua, 11 anake o enei whanau pūmua ka kitea he homologues i roto i ia ira tangata kua tātarihia o nga huakita kua aukatihia e te ope.Hei tautoko i tenei whakaaro, kua kitea te ngaronga o nga pūmua ribosom i roto i te V. necatrix me te P. locustae microsporidia, karekau he pūmua eL38 me eL4131,32.
Engari, ko o maatau hanganga e whakaatu ana ko te eL38, eL41, me te eS30 anake ka ngaro i roto i te ribosome E. cuniculi.I tiakina te pūmua eL14, ā, i whakaatuhia e tā mātou hanganga he aha te take i kore ai e kitea tēnei pūmua i te rapunga homology (Fig. 7).I roto i nga ribosomes E. cuniculi, ka ngaro te nuinga o te waahi here eL14 na te whakahekenga o te ES39L kua whakanuia e te rRNA.I te kore o ES39L, i ngaro te nuinga o te hanganga tuarua o te eL14, a, ko te 18% anake o te raupapa eL14 i rite ki E. cuniculi me S. cerevisiae.He mea whakamīharo tenei whakaraupapa raupapa natemea ahakoa ko Saccharomyces cerevisiae me Homo sapiens—ko nga rauropi i tipu 1.5 piriona tau te wehe—he nui atu i te 51% o nga toenga o te eL14.Ko tenei ngaronga kino o te tiaki e whakamarama ana he aha te E. cuniculi eL14 i tohuhia i tenei wa ko te pūmua putative M970_061160, kaua ko te eL1427 ribosomal protein.
me te Microsporidia ribosome i ngaro te toronga ES39L rRNA, i whakakorea te waahi herenga pūmua eL14 ribosomal.I te kore o te ES39L, ka mate te pūmua microspore eL14 i te hanganga tuarua, i te mea ka heke te α-helix here-rRNA o mua ki roto i te roanga iti.b E whakaatu ana te raupapa raupapa maha e tino tiakina ana te pūmua eL14 i roto i nga momo eukaryotic (57% te tuakiri raupapa i waenga i te rewena me te homologues tangata), engari he kino te tiaki me te rereke i roto i te microsporidia (kaore i neke atu i te 24% o nga toenga he rite ki te homologue eL14).mai i te S. cerevisiae or H. sapiens).Ko tenei ahua kino o te tiaki raupapa me te rereketanga o te hanganga tuarua e whakamarama ana he aha te homologue eL14 kaore ano kia kitea i roto i te E. cuniculi me te whakaaro he aha i ngaro ai tenei pūmua i roto i te E. cuniculi.Engari, ko te E. cuniculi eL14 i tohuhia i mua hei pūmua M970_061160 putative.E ai ki tenei tirohanga ko te rereketanga o te momo ira microsporidia i tenei wa ka nui noa atu: ko etahi o nga ira e whakaarohia ana kua ngaro i tenei wa i roto i te microsporidia ka mau tonu, ahakoa he tino rerekee;engari, ko etahi e whakaaro ana he tohu mo nga ira microsporidia mo nga pūmua noke-motuhake (hei tauira, te pūmua whakapae M970_061160) he tohu mo nga pūmua tino kanorau kei roto i etahi atu eukaryotes.
Ko tenei kitenga e tohu ana ko te whakahekenga o te rRNA ka taea te mate nui o te tiaki raupapa i roto i nga pūmua ribosomal tata, ka kore e kitea enei pūmua mo nga rapunga homology.No reira, ka nui pea te nui o te hekenga ngota i roto i nga rauropi ira iti, i te mea kei te mau tonu etahi o nga pūmua kua ngaro, ahakoa kua tino whakarereketia.
Me pehea e taea ai e nga pirinoa te pupuri i te mahi o a raatau miihini ngota i raro i nga ahuatanga o te whakahekenga ira tino nui?Ka whakautua e ta maatau rangahau tenei patai ma te whakaahua i te hanganga ngota ngota (ribosome) o E. cuniculi, he rauropi me tetahi o nga momo ira eukaryotic iti rawa.
Kua mohiohia mo te tata ki te rua tekau tau ko nga ngota ngota me te RNA i roto i nga parapara moroiti he rereke te rereke o o raatau momo homologous i roto i nga momo noho kore-kore na te mea kaore he pokapū whakahaere kounga, ka whakahekehia ki te 50% o te rahi i roto i nga moroiti ora-kore, etc.he maha nga huringa whakararuraru e whakararu ana i te kopaki me te mahi.Hei tauira, ko nga ribosomes o nga rauropi ira iti, tae atu ki te maha o nga pirinoa intracellular me nga endosymbionts, e tika ana kia kore he maha o nga pūmua ribosomal, tae atu ki te kotahi hautoru o nga nucleotides rRNA i whakaritea ki nga momo noho-kore 27, 29, 30, 49. Heoi, ko te mahi o enei ngota ngota i roto i te pirinoa ka noho tonu te nuinga o te mea ngaro.
Ko ta maatau rangahau e whakaatu ana ka taea e te hanganga o te macromolecules te whakaatu i te maha o nga ahuatanga o te kukuwhatanga he uaua ki te tango mai i nga rangahau genomic whakatairite tuku iho o nga pirinoa intracellular me etahi atu rauropi kua aukatihia e te ope (Taupiri Fig. 7).Hei tauira, ko te tauira o te pūmua eL14 e whakaatu ana ka taea e tatou te whakanui i te tino tohu o te paheketanga o te taputapu ngota i roto i nga momo parapara.Ko nga pirinoa encephalitic e whakaponohia ana he rau nga ira ira motuhake mo te microsporidia.Heoi, e whakaatu ana a maatau hua ko etahi o enei momo ira motuhake he tino rerekee noa nga momo ira e kitea ana i etahi atu eukaryotes.I tua atu, ko te tauira o te pūmua msL2 e whakaatu ana me pehea e warewarehia ai e tatou nga pūmua ribosomal hou me te whakaiti i te kiko o nga miihini ngota parapara.Ko te tauira o nga ngota ngota iti e whakaatu ana me pehea e taea ai e tatou te wareware ki nga mahi hou o te hangai ngota ngota parapara ka taea e ratou te mahi koiora hou.
Ko enei hua ka whakapai ake i to maatau mohio ki nga rereketanga i waenga i nga hanganga ngota o nga rauropi kua aukatihia e te ope me o raatau hoa i roto i nga rauropi noho kore utu.E whakaatu ana matou ko nga miihini rapoi, kua roa nei te whakaaro kua heke, kua heke, ka pa ki nga momo rerekee whakararuraru, engari he huinga o nga ahuatanga hanga rereke kua warewarehia.
I tetahi atu taha, ko nga kongakonga rRNA kore-nui me nga kongakonga hono i kitea e matou i roto i nga ribosomes o E. cuniculi e kii ana ka taea e te whakaheke ira ira te whakarereke ahakoa nga waahanga o nga miihini rapoi taketake e tiakina ana i roto i nga rohe e toru o te ao - i muri tata ki te 3.5 piriona tau.te whanaketanga motuhake o nga momo.
Ko nga kongakonga rRNA kore-kore me te whakakotahi i roto i nga ribosomes E. cuniculi e tino aro ana ki te maarama o nga rangahau o mua mo nga ngota ngota RNA i roto i nga huakita endosymbiotic.Hei tauira, i roto i te aphid endosymbiont Buchnera aphidicola, rRNA me tRNA ngota ngota kua whakaatuhia ki te whai i nga hanganga wera-tairongo na te A+T titonga rītaha me te nui o te wahanga o nga takirua turanga kore-kanoni20,50.Ko enei huringa i roto i te RNA, me nga huringa i roto i nga ngota ngota pūmua, ka whakaarohia inaianei ko te kawenga mo te nui o te whakawhirinaki o nga endosymbionts ki nga hoa me te kore e taea e nga endosymbionts te whakawhiti i te wera 21, 23.Ahakoa he rereke te hanganga o te microsporidia rRNA, ko te ahua o enei huringa e kii ana ko te whakaheke i te pumau o te waiariki me te nui ake o te whakawhirinaki ki nga pūmua chaperone he ahuatanga noa o nga ngota ngota RNA i roto i nga rauropi he iti nga momo ira.
I tetahi atu taha, ko o maatau hanganga e whakaatu ana kua whanakehia e te microsporidia parasite he kaha ahurei ki te whakahē i te rRNA me nga kongakonga pūmua kua tiakina, te whakawhanake i te kaha ki te whakamahi i nga metabolites iti me te waatea noa hei tauira hanganga o te rRNA whakaheke me nga kongakonga pūmua.Te whakahekenga hanganga rapoi..Ko tenei whakaaro e tautokohia ana e te meka ko nga ngota ngota iti e utu ana mo te ngaro o nga kongakonga pūmua i roto i te rRNA me nga ribosomes o E. cuniculi ka herea ki nga toenga microsporidia-motuhake i roto i te uL15 me te eL30 pūmua.E tohu ana tenei ko te herenga o nga ngota ngota iti ki nga ribosomes he hua o te kowhiringa pai, i kowhiria ai nga whakarereketanga motuhake o Microsporidia i roto i nga pūmua ribosomal mo to raatau kaha ki te whakanui ake i te hononga o nga ribosomes mo nga ngota ngota iti, tera pea ka pai ake nga rauropi ribosomal.Ka kitea e te kitenga he auahatanga atamai i roto i te hanganga ngota o te parapara moroiti me te pai ake o te maarama ki te pehea e mau tonu ai te mahi a nga hanganga rapoi parapara ahakoa te kukuwhatanga whakaheke.
I tenei wa, kei te noho marama tonu te tohu o enei ngota ngota iti.Kaore i te maarama he aha te ahua o enei ngota ngota iti i roto i te hanganga ribosom ka rerekee i waenga i nga momo microsporidia.Ina koa, kaore i te maarama he aha te herenga nucleotide e kitea ana i roto i nga ribosomes o E. cuniculi me P. locustae, kaore i roto i nga ribosomes o V. necatrix, ahakoa te noho o te toenga F170 i roto i te eL20 me te K172 proteins o V. necatrix.Ko tenei whakakorenga pea na te toenga 43 uL6 (kei te taha o te pukoro here nucleotide), ko te tyrosine i roto i te V. necatrix ehara i te threonine i roto i te E. cuniculi me te P. locustae.Ka taea e te mekameka taha kakara nui o Tyr43 te whakararu i te herenga nucleotide na te inaki steric.I tua atu, ko te ahua o te whakakorenga nucleotide na te iti o te taumira o te whakaahua cryo-EM, e aukati ana i te whakatauira o nga kongakonga ribosomal V. necatrix.
I tetahi atu taha, ko ta maatau mahi e whakaatu ana ko te tukanga o te pirau ira tangata he kaha whakaaro.Ina koa, ko te hanganga o te E. cuniculi ribosome e tohu ana ko te ngaronga o te rRNA me nga kongakonga pūmua i roto i te ribosome microsporidia ka waihanga te pehanga kukuwhatanga e whakatairanga ana i nga huringa o te hanganga ribosome.Ko enei momo rereke ka puta i tawhiti atu i te waahi kaha o te ribosome ka puta hei awhina i te pupuri (whakaora ranei) te huinga ribosome tino pai ka kore e pakaruhia e te rRNA iti.Ko te tohu tenei ko tetahi mea hou o te microsporidia ribosome te ahua kua puta ake hei hiahia ki te aukati i te paheketanga ira.
Akene he pai te whakaatu mai i te herenga nucleotide, kaore ano kia kitea i etahi atu rauropi i tenei wa.Ko te mea kei te noho nga toenga here-nucleotide i roto i te microsporidia angamaheni, engari kaore i roto i etahi atu eukaryotes, e tohu ana ko nga waahi here-nucleotide ehara i nga relics anake e tatari ana kia ngaro, ko te waahi whakamutunga mo te rRNA kia whakahokia ki te ahua o nga nucleotides takitahi.Engari, he ahua whai hua tenei pae ka taea te tipu i roto i nga waahanga maha o nga whiringa pai.Ko nga waahi herenga nucleotide he hua-a-hua o te kowhiringa taiao: kia whakahekehia te ES39L, ka akiakihia te microsporidia ki te rapu utu hei whakahoki i te koiora ribosome tino pai ki te kore o ES39L.I te mea ka taea e tenei nucleotide te whakataurite i nga hononga ngota o te nucleotide A3186 i roto i te ES39L, ka noho te ngota ngota nucleotide hei poraka hangahanga o te ribosome, ka pai ake te here na te whakarereketanga o te raupapa eL30.
Mo te kunenga mai o te ngota ngota pirinoa i roto i te pūtau, ka whakaatuhia e ta maatau rangahau ko nga kaha o te kowhiringa taiao a Darwin me te paheketanga ira o te pirau ira ira karekau e mahi whakarara, engari he oscillate.Tuatahi, ka whakakorehia e te paheketanga ira nga ahuatanga nui o te koiora, e tino hiahiatia ana te utu.Ko te wa anake ka makona nga pirinoa i tenei hiahia na roto i te kowhiringa taiao a Darwin ka whai waahi o ratou macromolecules ki te whakawhanake i o ratou ahuatanga tino whakamiharo me te auaha.Ko te mea nui, ko te kunenga mai o nga waahi here nucleotide i roto i te ribosome E. cuniculi ribosome e tohu ana ko tenei tauira ngaro-ki-whiwhinga o te kukuwhatanga rapoi ehara i te mea ka whakamomori noa i nga huringa kino, engari i etahi wa ka whakawhiwhia nga mahi hou katoa ki nga macromolecules parapara.
E rite ana tenei whakaaro ki te ariā taurite nekeneke a Sewell Wright, e kii ana ma te tino tikanga o te kowhiringa maaori e whakawhāiti ana i te kaha o nga rauropi ki te mahi auaha51,52,53.Heoi, ki te whakararu te paheketanga ira i te kowhiringa maaori, ka taea e enei pahekeheke te whakaputa i nga huringa kaore i te urutau (he kino ranei) engari ka arahi atu ki etahi atu huringa ka nui ake te whakapakari tinana, te mahi koiora hou ranei.E tautoko ana ta maatau anga i tenei whakaaro ma te whakaatu ko te ahua o te rerekee e whakaiti ana i te kopa me te mahi o te koiora ko te ahua o te keu hei whakapai ake.I runga ano i te tauira whanaketanga win-win, ko ta maatau rangahau e whakaatu ana ko te pirau ira tangata, e kiia nei he tukanga whakaheke, he tino kaiakiaki o te auahatanga, i etahi wa, i etahi wa ka taea e nga macromolecules te whiwhi mahi parapara hou.ka taea te whakamahi i a raatau.