Mauruuru koe mo te toro ki Nature.com.Ko te putanga tirotiro e whakamahia ana e koe he iti te tautoko mo te CSS.Mo te wheako pai, ka tūtohu kia whakamahia e koe he tirotiro kua whakahoutia (whakawetohia ranei te aratau hototahi ki Internet Explorer).
Ko nga matūriki silica porous i whakaritea e te tikanga sol-gel me etahi whakarereketanga ki te whiwhi matūriki macroporous. I ahu mai enei matūriki ma te whakahuri whakahuri i te whakawhitinga wehenga wehenga (RAFT) polymerization me te N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) me te styrene ki te whakarite i te N-phenylmaleimide kowirihanga-waewae1 (P) polystyrene 1 × 0. .8 mm id) i kikihia e te packing slurry. I arotakehia te wehenga o te pou PMP o te ranunga peptide e rima nga peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin, me te mahi chromatorumpsingraphic tino pai o te mahi a te tangata. Ko te tatauranga pereti ariā o te ranunga peptide he rite ki te teitei o te 280,000 pereti / m². Ko te whakataurite i te mahi wehewehenga o te waahanga kua whakawhanakehia me te waahanga hokohoko Ascentis Express RP-Amide, i kitea ko te mahi wehenga o te pou PMP he pai ake i te waahanga hokohoko i runga i te pai o te wehewehenga me te whakatau.
I nga tau kua pahure ake nei, ko te ahumahi biopharmaceutical kua piki ake te maakete o te ao me te nui o te pikinga o te maakete. Ko nga wai, kopa me nga pūtau he mahi tino wero na te nui o nga momo ka kitea pea i roto i te tauira kotahi. mita i te wa homai4,5,6.I tua atu, i roto i te wehenga o te wahanga wai, ka taea te aro ki nga rohe whaiti, na reira ka aro ki enei tātari me te whakapai ake i te mohiotanga o te kitenga MS.Ko te chromatography wai (LC) kua tino piki haere i roto i nga tau tekau kua hipa, kua waiho hei tikanga rongonui i roto i te tātaritanga proteomic7,8,9,10.
Whakamuri-waahanga wai chromatography (RP-LC) Kei te whakamahia whānuitia mo te purenga me te wehenga o nga ranunga peptide ma te whakamahi i te octadecyl-modified silica (ODS) hei waahanga tuuturu11. tātarihia nga peptides me nga pūmua me nga waahanga polar me te kore-polar ki te taunekeneke me te pupuri i enei analytes16.Ko te chromatography aratau-whakaranu, e whakarato ana i nga taunekeneke multimodal, ka taea te rereke ki te RP-LC mo te wehewehenga o nga peptides, nga pūmua, me etahi atu ranunga matatini.He maha nga waahanga whakauru, kua oti te whakarite ki enei wahanga 8, peptide1para, kua oti te whakarite ki enei wahanga 8, peptide1para, kua oti te whakarite ki enei wahanga 8, peptide1para kua whakaritea, kua oti te whakarite ki enei wahanga 8, peptide1para. 20,21.Ko nga wahanga tuumotu aratau-whakaranu (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polar intercalation/RPLC) e pai ana mo te wehenga peptide me te pūmua na te noho o nga roopu polar me nga roopu kore-polar22,23,24,25,26,27,28 .He rite ano te ahua o nga roopu polar me te whakawehenga o nga roopu polar me nga roopu polar e whakaatu pai ana mo nga roopu polar me nga roopu kore-polar22,23,24,25,26,27,28. me nga tātari kore-polar, na te mea ko te wehenga ka whakawhirinaki ki te tauwhitinga i waenga i te tātari me te waahi noho.Nga taunekeneke maha 29, 30, 31, 32. I tata nei, Zhang et al.I whakaritea e 30 tetahi waahanga polyamine kua mutu te dodecyl me te wehe pai i te waiwaro, te antidepressants, te flavonoids, te nucleosides, te estrogens, me etahi atu analytes. Ko te intercalator polar he roopu polar me te kore-polar, no reira ka taea te whakamahi ki te wehe i nga peptides me nga pūmua e whai ana i te rua hydrophobic me te hydrophilic moieties e rua nga waahanga C-8 kua whakauruhia. i raro i te ingoa hokohoko Ascentis Express RP-Amide pou, engari ka whakamahia enei pou mo te tātaritanga o te amine 33 anake.
I roto i te rangahau o naianei, i whakaritea he waahanga-polar-embedded polystyrene (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) mo te wehewehenga o te peptides me te trypsin digests o HSA.I whakaritea te waahi noho ma te whakamahi i te rautaki e whai ake nei.I whakaritea nga matūriki silica poroporo kia rite ki te tukanga i hoatu i roto i to maatau panui o mua me etahi whakarereketanga ki te kawa whakarite, te polycelene te kawa o te waikawa, te polycelene a TMOS. ki te whakarite matūriki silica me te rahi pore nui.Tuarua, he herenga hou, phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate, i whakahiatotia ka whakamahia ki te whakaputa i nga matūriki silica ki te whakarite i tetahi waahanga noho polar kua whakauruhia. I kikiia te wahanga tuutuu ki roto i te pou kowiri tira (100 × 1.8 mm id) ki te whakarite kia pai te hanga o te moenga i roto i te whakahiatotanga me te whakamohoatanga o te moenga. te tīwae.Aromātaitia te wehenga tīwae tākai o ngā ranunga peptide e rima peptides;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) me Trypsin digest o te tangata albumin serum (HAS). Ko te ranunga peptide me te trypsin digest o te HSA i kitea ki te wehe me te pai o te whakatau me te pai o te mahinga o te PMPRP. .Ko nga peptides me nga pūmua e rua i kitea he pai te whakatau me te pai i runga i te pou PMP, he pai ake i te waahanga Ascentis Express RP-Amide.
PEG (Polyethylene Glycol), Urea, Acetic Acid, Trimethoxy Orthosilicate (TMOS), Trimethyl Chlorosilane (TMCS), Trypsin, Human Serum Albumin (HSA), Ammonium Chloride, Urea, Hexane Methyldisilazane (HMDS), Methacryloyl Chloride (MC-TEMP), Stydroxyl Chloride (MC-TEMP), Stydroxyl Chloride (MC-TEMP), Stydroxyl Chloride (MC-TEMP) trile (ACN), Methanol, 2-Propanol, me Acetone I hokona mai i Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).
Ko te ranunga o te Urea (8 g), polyethylene glycol (8 g), me te 8 mL o te 0.01 N te waikawa acetic i whakakorikoria mo te 10 meneti, katahi ka taapirihia te 24 mL o te TMOS ki roto i raro i nga tikanga hukapapa. I whakawerahia te ranunga tauhohenga ki te 40°C mo te 6 haora, katahi ki te 120°C ka whakamarokehia te wai i roto i te kowiri tira ka whakamarokehia te wai i roto i te 8 haora. 70 ° C mo nga haora 12. Ko te papatipu ngohengohe maroke he maeneene i roto i te oumu me te calcined i te 550 ° C mo nga haora 12. E toru nga waahanga i whakaritea me te tohu ki te tirotiro i te reproducibility i roto i te rahi o te matūriki, te rahi o te pore me te waahi mata.
Na te whakarereketanga o te mata o nga matūriki silica me te ligand phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) kua whakahiato-mua i muri mai i te polymerization radial me te styrene, i whakaritea he puhui kei roto i te roopu polar.Wāhanga pūmau mō ngā whakahiato me ngā mekameka polystyrene. Kei te whakaahuahia te tukanga whakareri i raro nei.
Ko te N-phenylmaleimide (200 mg) me te methyl vinyl isocyanate (100 mg) i rewa i roto i te toluene maroke, me te 0.1 mL o te 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) i tapirihia ki te pounamu tauhohenga ki te whakarite i te phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate copolymer (PMC) i te 3 haora i te whakamaroke i te whakamaroke i te 6 haora i te whakamaroke i te whakamaroke o te oumu i te 3°C. 40°C mo te 3 haora.
Ko nga matūriki silica maroke (2 g) kua marara ki roto i te toluene maroke (100 mL), te whakaoho me te sonicated i roto i te 500 mL porotaka raro ipu mo te 10 min. PMCP (10 mg) i rewa i roto i te toluene me te tāpiri dropwise ki te ipu tauhohenga mā te kōrere maturuturu. I refluxed te ranunga i te 100°C 3 haora me te tone whakamaroke mo te wa 8C me te 6C. haora.Na, ka rewa nga matūriki silica here-PMCP (100 g) i roto i te toluene (200 ml) me te 4-hydroxy-TEMPO (2 mL) i whakauruhia ki te aroaro o te 100 µL o te dibutyltin dilaurate hei whakakorikori. I whakaohohia te ranunga i te 50 ° C mo nga haora 8, kua tohua me te whakamaroke i nga haora 350 ° C.
Styrene (1 mL), benzoyl peroxide BPO (0.5 mL), me te TEMPO-PMCP-attached silica matūriki (1.5 g) i marara ki te toluene ka purea ki te hauota. Ko te polymerization o te styrene i mahia i te 100°C mo nga haora 12. Ko te hua ka horoia ki te methanol me te whakamaroke i te po katoa.
I whakakorehia nga tauira i te 393 K mo te 1 haora kia whiwhi ai i te pehanga toenga o te iti iho i te 10-3 Torr.Ko te nui o te N2 adsorbed i te pehanga whanaunga o P / P0 = 0.99 i whakamahia hei whakatau i te tapeke pore volume.I tirotirohia te morphology o nga matūriki silica karekau me te ligand-hononga me te matawai hikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohiko. Ko nga matūriki silica ded) i whakanohoia ki runga i te pou konumohe ma te whakamahi i te riipene waro piri. I whakakikoruatia te koura ki runga i nga tauira ma te whakamahi i te Q150T sputter coater, a ka waiho he paparanga 5 nm Au i runga i nga tauira. Ko tenei ka whakapai ake i te pai o te tukanga ma te whakamahi i nga ngaohiko iti me te whakarato i te witi pai, te pupuhi matao. Mastersizer 2000 i whakamahia te rahi matūriki tātari rahi ki te whiwhi i te tohatoha rahi matūriki. Matūriki silica tahanga me nga matūriki silica herea ligand-here (5 mg ia) i marara i roto i te 5 mL o isopropanol, sonicated mo 10 min, vortexed mo 5 min, a ka whakanohoia ki runga ki te pae whatu o te Mastersizer.Thermogravimetric i runga i te awhe meneti 0.8 °C i runga i te pāmahana o te 8. Thermogravimetric °C o te pāmahana o te 0.
Ko nga pou kowiri tira whaiti nga rahi (100 × 1.8 mm id) kua whakakiia ma te whakamahi i te tikanga whakakakahu slurry.31.He pou kowiri tira (karaihe-raina, 100 × 1.8 mm id) me te urunga whakaurunga kei roto he 1 µm frit i honoa ki te packer slurry (Alltech Deerfield, IL, USA).Whakaritea he slurry wahanga tuutuu ma te whakatārewa i te 150 mg o te wahanga pahoho i roto i te methanol me te rewa mL ka tukuna ki te methanol me te rewa mL. me te whakarewa whakarewa. Whakakiia te pou kia raupapa ma te whakamahi i nga pehanga o te 100 MP mo te 10 meneti, 80 MP mo te 15 meneti, me te 60 MP mo te 30 meneti. I te wa e whakakakahu ana, ka tukuna te wiri miihini me nga wiri GC e rua (Alltech, Deerfield, IL, USA) ki te whakarite kia kore te pehanga o te tiihi me te tuku i nga pakaru. tīwae mai i te kōwae takai slurry me te hono atu i tetahi atu taputapu ki te kokoru me te punaha LC hei tirotiro i tana mahi.
He papua LC (10AD Shimadzu, Hapani), he injector (Valco (USA) C14 W.05) me te 50nL i werohia te porowhita, te degasser membrane (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS matapihi capillary i hangaia He puhoi taputapu µLC motuhake (UV-2075) me te whakakoi i te karaihe-raina o te microcolumns whakaiti me te whakatiki i te hononga o te microcolumns poto me te hono i te karaihe. ter packaging, capillaries (50 μm id 365 me te whakaiti i nga capillaries union (50 μm) i whakauruhia ki te 1/16″ putanga o te uniana whakaiti. Ko te kohikohi raraunga me te tukatuka chromatographic i mahia ma te whakamahi i te rorohiko Multichro 2000. Te aroturuki i te 254 nm I whakamatauhia nga Analytes mo te whakaurunga o te UV o te UV. Prodtha.
Ko te Albumin mai i te serum tangata, te paura lyophilized, ≥ 96% (agarose gel electrophoresis) 3 mg i konatunatua ki te trypsin (1.5 mg), 4.0 M urea (1 mL), me te 0.2 M ammonium bicarbonate (1 mL). I whakaohohia te otinga mo te 10 meneti ka pupuri i roto i te pati wai i te 67,1°C i te 67,1°C kaukau i te 67,1°C. Hurihia te otinga ka penapena ki raro i te 4 °C.
Ko te wehewehenga o te ranunga peptide me te HSA trypsin digests i arotakea motuhake i runga i nga pou PMP.Tirohia te wehenga o te ranunga peptide me te trypsin digest o HSA ma te pou PMP me te whakataurite i nga hua ki te pou Ascentis Express RP-Amide.Ko te tau pereti ariā ka tatauhia penei:
Ko nga whakaahua SEM o nga matūriki silica karekau me nga matūriki silica here-hononga e whakaatuhia ana i te FIG.2. Ko nga whakaahua SEM o nga matūriki silica kore noa (A, B) e whakaatu ana, he rereke ki o maatau rangahau o mua, he porowhita enei matūriki e whakaroa ana nga matūriki, he hangarite koretake ranei. Ko te mata o nga matūriki silica herea ligand (C, D) he maeneene atu i tera o nga matūriki silica koretake.
Te matawai i nga whakaahua karu irahiko o nga matūriki silica tahanga (A, B) me nga matūriki silica hono-hononga (C, D).
Ko nga tohatoha rahi o te matūriki o nga matūriki silica tahanga me nga matūriki silica herea ligand e whakaatuhia ana i te Whakaahua 3 (A). Ko nga kohinga tohatoha o te rahi o te matūriki i runga i te reo i whakaatu ko te rahi o nga matūriki silica i piki ake i muri i te whakarereketanga matū (Fig. 3A) . ki ta maatau rangahau o mua me te uara ad(0.5) o 3.05 μm (polystyrene-herea matūriki silica)34. He iti ake te tohatoha o te matūriki matūriki o tenei puranga ka whakaritea ki ta maatau rangahau o mua na te rereke o nga owehenga o te PEG, Urea, TMOS, me te waikawa acetic i roto i te ranunga tauhohenga. Ko te rahi o te matūriki o te waahanga PMP he iti ake te rahi o te matūriki o te wahanga PMP o te matūriki o mua. Ko te styrene anake i whakatakoto he paparanga polystyrene (0.97 µm) ki runga i te mata silica, engari i te wahanga PMP ko te 1.38 µm te matotoru paparanga.
Te tohatoha rahi matūriki (A) me te tohatoha rahinga pore (B) o nga matūriki silica koretake me nga matūriki silica herea-ligan.
Ko te rahi o te pore, te rahi o te pore me te waahi mata o nga matūriki silica o te rangahau o naianei kei te Ripanga 1(B). Ko nga korero PSD o nga matūriki silica koretake me nga matūriki silica herea ligand e whakaatuhia ana i te Whakaahua 3(B). Ko nga hua ka rite ki ta maatau rangahau o mua. whakarerekētanga matū, rite whakaaturia i roto i te Ripanga 1(B), me te huringa o te ānau e whakaaturia i roto i te Fig. 3(B) .Similarly, the pore volume of the silica particles reduced from 0.67 to 0.58 cm3/g after chemical modification.The specific surface area of ​​the ​​study studying silica particles is 116 m2/g 116 m2/g (g 116 m2/g) o mua. B), ko te mata o te mata (m2/g) o nga matūriki silica i heke mai i te 116 m2/g ki te 105 m2/g i muri i te whakarereketanga matū.
Kei te Ripanga 2 nga hua o te wetewetetanga o te wahanga waro. Ko te uta waro o te wahanga noho o naianei ko te 6.35%, he iti ake i te uta waro o ta maatau rangahau o mua (ko nga matūriki silica hono polystyrene, 7.93%35 me te 10.21%) 42. Ko te uta waro o te wahanga waro o naianei i roto i te riipene o naianei he iti o te riipene SP i roto i te riipene o naianei ki te popherene. i whakamahia te nylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) me te 4-hydroxy-TEMPO. Ko te 2.21% te taumaha hauota o te wahanga noho o naianei he 2.21%, ka whakaritea ki te 0.1735 me te 0.85% i te taumaha o te hauota i roto i nga rangahau o mua. Ko te tikanga he nui ake te wt % o te hauota i roto i te wahanga waro noho 5, te hauota o naianei, na te . ko te 2.7% me te 2.9%, i te mea ko te uta waro o te hua whakamutunga (6) he 6.35%, e whakaatuhia ana i te Ripanga 2. Ko te mate taimaha i tirohia me te PMP waahi noho, me te tohu TGA e whakaatuhia ana i te Whakaahua 4. Ko te TGA curve e whakaatu ana i te mate taimaha o te 8.6%, kei roto i te pai o te whakaaetanga me te 35 o te waro, engari ko te N.
Ko te phenylmaleimide-methylvinylisocyanate ligand i whiriwhiria mo te whakarereketanga o te mata o nga matūriki silica no te mea he roopu polar phenylmaleimide me nga roopu vinylisocyanate.Ka taea e nga roopu isocyanate Vinyl te tauhohe atu ki te styrene ma te polymerization radical ora. Karekau he utu mariko i te pH noa.Ka taea te whakahaere i te polarity o te wahanga pahoho e te nui o te styrene me te wa tauhohenga o te polymerization tuwhena noa. kua rite ki nga kuhanga rereke o te styrene he rereke nga uta waro.A ano, utaina enei waahanga noho ki roto i nga pou kowiri tira ka tirotirohia o raatau mahi chromatographic (te whiriwhiringa, te whakatau, te uara N, me etahi atu).
E rima nga ranunga peptide (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) i aromatawaihia ma te whakamahi i te pou PMP ma te whakamahi i te waahanga waea;60/40 (v/v) acetonitrile/wai ​​(0.1% TFA) i te tere rere o te 80 μL/min. I raro i nga tikanga elution tino pai, ko te tau pereti ariā (N) mo ia pou (100 × 1.8 mm id) he 20,000 ± 100 (200,000 nga pereti chromato ​​/m²) e homai ana i nga uara 200,000 T/m². Ko nga karamu e whakaatuhia ana i te Whakaahua 5A. Te tātari tere i runga i te pou PMP i te tere rere teitei (700 μL / min), e rima nga peptides i whakahekehia i roto i te meneti kotahi, he tino pai nga uara N, 13,500 ± 330 mo ia pou (100 × 1.8 mm id), He rite ki te 135,000 te rahi o te pereti 135,000. × 1.8 mm id) i kikii ki nga rota rereke e toru o te wahanga PMP e tu ana hei tirotiro i te reproducibility.Ko te kukū tātari mo ia pou i tuhia ma te whakamahi i nga tikanga elution tino pai me te maha o nga pereti ariā N me te wa pupuri ki te wehe i te ranunga whakamatautau kotahi ki ia pou.Ko nga raraunga reproducibility mo nga pou PMP e whakaatuhia ana i roto i te Ripanga 4.Ko te reproducibility iti rawa o te PMP kua whakaatuhia i roto i te Ripanga 4.
Te wehenga o te ranunga peptide i runga i te pou PMP (B) me te pourangi Ascentis Express RP-Amide (A);wāhanga pūkoro 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), te rahi o te tīwae PMP (100 × 1.8 mm id);tātari Ko te raupapa elution o nga pūhui: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) me te 5 (leucine) waikawa enkephalin)).
He pou PMP (100 × 1.8 mm id) i arotakea mo te wehewehenga o nga kemu tryptic o te albumin serum tangata i roto i te chromatography wai mahi teitei. Ko te chromatogram i te Whakaahua 6 e whakaatu ana he pai te wehe o te tauira me te tino pai o te whakataunga. I tātarihia nga keri HSA ma te whakamahi i te tere o te rere o te 100 µL / 3000. whakaaturia i roto i te chromatogram (Whakaahua 6), kua wehea te keri HSA ki nga tihi 17 e rite ana ki nga peptides 17. I tatauhia te pai o te wehenga o ia tihi i roto i te keri HSA ka hoatu nga uara ki te Ripanga 5.
I wehea tetahi kemu tryptic o HSA (100 × 1.8 mm id) i runga i te pou PMP;tere rere (100 µL/min), wahanga pūkoro 60/40 acetonitrile/wai ​​me te 0.1% TFA.
ko L te roa o te pou, ko te η te pokey o te wahanga pūkoro, ko te ΔP te pehanga o muri o te pou, a ko te u te tere o te raina o te wahanga pūkoro. Ko te uruhanga o te pou PMP ko 2.5 × 10-14 m2, ko te rerenga rere ko 25 μL / min, me te 60/40 v/v i whakamahia te PMP / wai i whakamahia. he rite ki ta maatau rangahau o mua Ref.34.Ko te uruhanga o te pou kua whakakiia ki nga matūriki porous ko: 1.7 × 10-15 mo nga matūriki 1.3 μm, 3.1 × 10-15 mo te 1.7 μm matūriki, 5.2 × 10-15 me te 2.5 × 10μm matūriki mo te 2.5 × 10-15. refore, he rite te uruhanga o te wahanga PMP ki te 5 μm matūriki anga-matua.
ko te Wx te taumaha o te pou kua whakakiia ki te chloroform, ko Wy te taumaha o te pou kua whakakiia ki te methanol, a ko te ρ te kiato o te whakarewa. Te kiato o te methanol (ρ = 0.7866) me te chloroform (ρ = 1.484) Ko te s 31 i akohia e matou i mua ko te 0.63 me te 0.55. Ko te tikanga ko te noho o nga urea ligands e whakaiti ana i te uruhanga o te waahanga tuuturu. I tetahi atu taha, ko te tapeke porosity o te pou PMP (100 × 1.8 mm id) he 0.60. Ko te uruhanga o te PMP o nga pourangi-8 he iti ake i te C1 o nga pourangi C8. nga wahanga ka piri nga herenga C18 ki nga matūriki silica hei mekameka raina, i roto i nga momo polystyrene-momo waahi, ka hangaia te paparanga polymer ahua matotoru huri noa.
Ko te ahua 7A,B e whakaatu ana i te pou PMP (100 × 1.8 mm id) me te pourangi Ascentis Express RP-Amide (100 × 1.8 mm id) e whakamahi ana i nga tikanga elution rite (arā, 60/40 ACN/H2O me 0.1% TFA).) o te waahi van Deemter.Ko nga ranunga peptide kua tohua (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) i whakaritea i roto i te 20 µL/ Ko te reiti rere iti mo nga pou e rua ko te 800 µL/min. Ko te iti rawa o nga uara HETP/min. Ko te Express RP-Amide pou he 2.6 µm me te 3.9 µm. Ko nga uara HETP e tohu ana ko te pai o te wehenga o te pou PMP (100 × 1.8 mm id) he pai ake i te hokohokohoko Ascentis Express RP-Amide tīwae (100 × 1.8 mm te hekenga id7). he mea nui ki ta maatau rangahau o mua.Ko te teitei ake o te pai o te wehewehenga o te pou PMP (100 × 1.8 mm id) ka whakaritea ki te pourangi Ascentis Express RP-Amide e ahu mai ana i runga i nga whakapainga o te ahua matūriki, te rahi, me nga tikanga whakahiato poupou matatini e whakamahia ana i roto i nga mahi o naianei34.
(A) van Deemter te maataki (HETP versus te tere tere o te wahanga pūkoro) i whiwhi ma te whakamahi i te pourangi PMP (100 × 1.8 mm id) i roto i te 60/40 ACN/H2O me te 0.1% TFA.(B) van Deemter maataki (HETP versus te tere tere raina o te wahanga pūkoro) ka whiwhi ma te whakamahi i te pourangi Ascentis Express RP/CN0 ×12 (10mm0 i ×2) i roto i te pou Acentis Express RP/CN0 i ×12. O me te 0.1% TFA.
I whakaritea he waahanga polystyrene kua mau ki te polar, ka arotakehia mo te wehenga o nga ranunga peptide synthetic me te keri trypsin o te albumin serum tangata (HAS) i roto i te chromatography wai tino mahi. Ko te kohinga o te waahanga tuuturu, me te whakahiatotanga o nga pou matatini. I tua atu i te kaha o te wehewehenga nui, ko te iti o te pehanga o muri i nga rerenga rerenga teitei ko tetahi atu painga o tenei waahanga. ka arotakehia mo te wehenga o nga pūmua me nga paturopi monoclonal.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Rangahau mo te Peptide Separation Systems by Reversed Phase Chromatography Part I: Development of a Column Characterization Protocol.J.Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al.Improved active peptides i hangaia mo te maimoatanga o nga mate hopuhopu.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic peptides therapeutic: science and the market.drug discovery.15 (1-2) i tenei ra, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.Chromatography.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al.Ka taea e te chromatography-mass spectrometry te whakauru o nga metabolomics whanui me te proteomics.anus.Chim.Acta 1069, 89-97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Te mahi a te UHPLC ki te whakawhanake tarukino.J.Hepetema Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Ko nga ahuatanga taketake me te mahi o te chromatography wai pehanga ultrahigh mo te wehe tere.J.Hepetema Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Te tono o nga mahi tino teitei o te chromatography wai i roto i te whanaketanga tarukino.J.Chromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al.Monolithic macroporous hydrogels i taka mai i te hinu-i roto i te wai whakaehunga wahanga o roto teitei mo te purenga pai o enteroviruses.Chemical.Britain.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Ko te mahi a te chromatography wai i roto i te proteomics.J.Chromatography.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L.& Guillarme, D. Ka puta nga ahuatanga i roto i te wahanga whakamuri-waahanga wai whakawehenga o nga peptides rongoa me nga pūmua: te ariā me nga tono.J.Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Wehewehenga-rua o nga peptides ma te whakamahi i te punaha RP-RP-HPLC ma te whakamahi i nga uara pH rereke i te waahanga wehe tuatahi me te tuarua.J.Hepetema Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al.Ko nga ahuatanga whakawhiti papatipu me te mahinga oro o nga pou chromatographic kaha-nui kua whakakiia ki te C18 iti-2 μm kakato me te matūriki porous i runga.J.Hepetema Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al.Ko nga ahuatanga hou me nga wero tātari i roto i te wehe, te tautuhi me te whakamana o te tipu bioactive peptides.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-0218-08-x.
Mueller, JB et al.The proteomic landscape of the kingdom of life.Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al.Whakatikanga o raro o nga peptides haumanu na roto i te chromatography wai preparative.Molecule (Basel, Switzerland) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Rahui-aratau chromatography me tona tono ki biopolymers.J.Chromatography.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. Nga herenga mo te chromatography pūmua momo whakauru: te kaupapa, te tohu, me te hoahoa.J.Biotechnology.144(1), 3-11 (2009).