Mauruuru koe mo te toro ki Nature.com. Kei te whakamahi koe i tetahi putanga tirotiro me te tautoko CSS iti. Mo te wheako pai rawa atu, e taunaki ana matou me whakamahi koe i tetahi kaitirotiro kua whakahoutia (me monohia ranei te Aratau Hototahi ki Internet Explorer). I tua atu, hei whakarite i te tautoko tonu, ka whakaatuhia e matou te waahi kaore he momo me te JavaScript.
Ka whakaatu i te carousel o nga kiriata e toru i te wa kotahi. Whakamahia nga paatene o mua me te Panuku ki te neke i roto i nga kiriata e toru i te wa kotahi, ka whakamahi ranei i nga patene rereti i te mutunga ki te neke i roto i nga kiriata e toru i te wa kotahi.
I whakaritea nga matūriki silica poroporo e te tikanga sol-gel me etahi whakarereketanga kia whiwhi matūriki pore whanui. Ko enei matūriki i ahu mai ki te N-phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate (PMI) me te styrene mā te whakamuri whakamuri mekameka whakawhiti-wehewehenga (RAFT) polymerization ki te whakaputa N-phenylmaleimide polyamides intercalated. Styrene (PMP) te wahanga tu. Ko nga pou kowiri tira kuiti (100 × 1.8 mm te whanui o roto) i kikii ki te taake slurry. I arotakea te mahi chromatographic o te pou PMP ki te wehe i te ranunga o nga peptides waihanga e rima nga peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu amino acid enkephalin) me te tryptic hydrolyzate o te serum tangata (HASrum albumin). I raro i nga tikanga elution tino pai, ko te maha o nga pereti me te ranunga o nga peptides i tae ki te 280,000 pereti/sq.m. Ko te whakataurite i te mahi wehewehenga o te waahanga kua whakawhanakehia me te pouhokohoko Ascentis Express RP-Amide, i kitea ko te pai o te wehenga o te pou PMP he pai ake i te waahanga hokohoko i runga i te pai o te wehewehenga me te whakatau.
Ko te ahumahi biopharmaceutical kua piki ake te maakete o te ao me te nui o te pikinga o nga wahanga maakete i nga tau tata nei. Na te tipu pahū o te ahumahi biopharmaceutical1,2,3 he nui te hiahia mo te peptide me te tātari pūmua. I tua atu i te peptide whaainga, he maha nga poke ka hangaia i te wa o te whakahiato peptide, na reira ka hiahiatia te purenga chromatographic kia whiwhi ai i te ma o te peptide. Ko te tātari me te tohu o nga pūmua i roto i nga wai o te tinana, nga kopa, me nga pūtau he mahi tino wero na te nui o nga momo ka kitea pea kei roto i te tauira kotahi. Ahakoa he taputapu whai hua te spectrometry papatipu mo te raupapa peptides me te pūmua, mena ka whakaurua mai enei tauira ki te spectrometer papatipu, ka kore e pai te wehenga. Ka taea te whakatau i tenei rapanga ma te mahi i te chromatography wai (LC) i mua i te tātaritanga MS, ka whakaitihia te nui o nga tātari ka uru ki te spectrometer papatipu i te waa4,5,6. I tua atu, ka taea e nga kaitirotiro te aro ki tetahi rohe whaiti i te wa e wehea ana te waahanga wai, na reira ka aro ki enei tātari me te whakanui ake i te maarama o te kitenga MS. Ko te chromatography wai (LC) kua tino anga whakamua i roto i nga tau tekau kua hori, a kua noho hei tikanga e whakamahia nuitia ana mo te tātari proteomic7,8,9,10.
Whakamuri-waahanga wai chromatography (RP-LC) Kei te whakamahia whānuitia hei pure me te wehe i nga ranunga peptides ma te whakamahi i te octadecyl-modified silica (ODS) hei waahanga noho11,12,13. Heoi, na te ahua uaua me te ahua o te amphoteric, 14,15 RP nga waahanga tuuturu kaore e taea te wehe pai o nga peptides me nga pūmua. No reira, ko te wetewete o nga peptides me nga pūmua me nga kongakonga polar me te kore-polar e hiahia ana i nga waahanga tuuturu hei mahi tahi me te pupuri i enei tātari16. Ko te chromatography whakauru, e tuku ana i nga tauwhitinga maha, ka taea te rereke ki te RP-LC mo te wehe i nga peptides, nga pūmua, me etahi atu ranunga matatini. He maha nga momo waahanga whakauru i whakaritea, ka whakamahia nga pou kua whakakiia ki enei waahanga tuuturu hei wehe i nga peptides me nga pūmua17,18,19,20,21. Na te mea ko nga roopu polar me nga roopu kore-polar, he pai nga waahanga tuuturu (WAX / RPLC, HILIC / RPLC, polar intercalation / RPLC) mo te wehenga o nga peptides me nga pūmua22,23,24,25,26,27,28. , Ko nga wahanga tuhonohono polar me nga roopu polar honohono honohono e whakaatu ana i nga kaha wehewehenga pai me te whiriwhiringa ahurei mo nga tātari polar me te kore-polar no te mea ko te wehenga e whakawhirinaki ana ki te taunekeneke i waenga i te tātari me te waahi pahoho Multimodal interactions 29,30,31,32. I tata nei, ko Zhang et al. 30 i whiwhi i nga wahanga o te polyamines kua whakamutua te behenyl me te wehe angitu i te waiwaro, te parepare, flavonoids, nucleosides, estrogens, me etahi atu tātari. He roopu polar me nga roopu kore-polar te rauemi pahoko kua whakauruhia, no reira ka taea te whakamahi hei wehe i nga peptides me nga pūmua ki nga waahanga hydrophobic me te hydrophilic. Ko nga pou rarangi polar (hei tauira, nga pou C18 me te amide inline) e waatea ana i raro i te ingoa hokohoko nga pou Ascentis Express RP-Amide, engari i whakamahia enei pou mo te tātaritanga o te amine 33.
I roto i te rangahau o naianei, i whakaritea he wahanga whakapumau polar (N-phenylmaleimide, polystyrene whakauru) ka arotakehia mo te wehenga peptide me te wehenga HSA tryptic. Ko te rautaki e whai ake nei i whakamahia hei whakarite i te wahanga tu. I whakaritea nga matūriki silica poroporo kia rite ki nga tikanga i whakaahuahia i roto i o maatau tuhinga o mua, me etahi huringa i roto i nga kaupapa whakarite 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39. Ko nga tauwehenga o te urea, te polyethylene glycol (PEG), te TMOS me te waikawa aqueous-acetic i whakatikahia kia whiwhi ai i nga matūriki silica me te nui o te pore. Tuarua, i whakahiatotia he herenga phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate hou ka whakamahia ona matūriki silica pärönaki ki te whakarite i nga wahanga pahoko kua mau. Ko te wahanga tuutuu kua kii ki roto i te pou kowiri tira (te diameter o roto 100 × 1.8 mm) e ai ki tetahi kaupapa whakakakahu pai. Ko te tarapi o te pou ka awhinahia e te wiri miihini ki te whakarite kia rite te paparanga o roto o te pou. I arotakehia te pou kua kiki mo te wehenga o te ranunga peptides e rima nga peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin peptide). me nga hydrolysates tryptic o te albumin serum tangata (HSA). I kitea ko te ranunga peptide me te HSA tryptic digest kua wehea me te whakatau pai me te pai. I whakaritea te pai o te wehenga o te pou PMP ki tera o te pourangi Ascentis Express RP-Amide. I kitea ko nga peptides me nga pūmua he pai te whakatau me te pai o te wehewehenga i runga i te pou PMP, a, ko te pai o te wehenga o te pou PMP he teitei ake i te waahanga o te Ascentis Express RP-Amide.
PEG (polyethylene glycol), urea, waikawa acetic, trimethoxyorthosilicate (TMOS), trimethylchlorosilane (TMCS), trypsin, albumin serum tangata (HSA), ammonium chloride, urea, hexamethylmethacryloyldisilazane (HMDS), methacryloyl chloride (MC4-hydro-oxide), styrene, styrene, acetonitrile (ACN) mo te HPLC, methanol, 2-propanol me te acetone. Kamupene Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, USA).
Ko te ranunga o te Urea (8 g), te polyethylene glycol (8 g) me te 8 ml o te 0.01 N. waikawa acetic i oho mo te 10 meneti, me te 24 ml o te TMOS i tapirihia ki roto i raro i te whakamatao tio. I whakawerahia te ranunga tauhohenga ki te 40°C mo te 6 haora, katahi ki te 120°C mo te 8 haora i roto i te autoclave kowiri tira. Ka whakahekehia te wai, ka whakamarokehia te toenga ki te 70°C mo te 12 haora. Ko nga poraka ngohengohe kua whakamarokehia kia maeneenehia, ka werohia ki roto i te oumu i te 550°C mo te 12 haora. E toru nga puranga i whakaritea me te tohu hei whakamatautau i te whakaputanga o te rahi matūriki, te rahi pore me te horahanga mata.
Ko te roopu polar me te waahi pumau mo nga mekameka polystyrene. Ko te tikanga whakarite ka whakaahuahia i raro nei.
Ko te N-phenylmaleimide (200 mg) me te methyl vinyl isocyanate (100 mg) i rewa i roto i te toluene anhydrous, katahi ka taapirihia te 0.1 ml o te 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ki te ipu tauhohenga kia whiwhi he copolymer o te phenylmaleimide me te methylPMCP isocyanate (methylPMCP isocyanate). ) Ka whakawerahia te ranunga ki te 60°C mo te 3 haora, ka tātarihia ka whakamarokehia i roto i te oumu i te 40°C mo te 3 haora.
Ko nga matūriki silica maroke (2 g) kua marara ki roto i te toluene maroke (100 ml), ka whakaohohia, ka sonicated mo te 10 min i roto i te 500 ml a tawhio noa ipu. I rewa te PMCP (10 mg) ki te toluene, ka taapiri atu ki te topata ki te ipu tauhohenga ma te kori taapiri. Ko te ranunga i whakamarohia i te 100°C mo te 8 haora, ka tātarihia, ka horoia ki te acetone ka whakamaroke ki te 60°C mo te 3 haora. Na, ko nga matūriki silica e hono ana ki te PMCP (100 g) ka whakarewahia ki te toluene (200 ml), ka whakauruhia te 4-hydroxy-TEMPO (2 ml) ki te aroaro o te 100 μl o te dibutyltin dilaurate hei whakakorikori. I whakakorikoria te ranunga ki te 50°C mo te 8 haora, ka tātarihia ka whakamaroke ki te 50°C mo te 3 haora.
Styrene (1 ml), benzoyl peroxide BPO (0.5 ml) me nga matūriki silica e piri ana ki te TEMPO-PMCP (1.5 g) i marara ki te toluene ka purea ki te hauota. I mahia te polymerization o te styrene i te 100°C mo te 12 haora. I horoia te hua ki te methanol ka whakamaroke i te po i te 60°C. Ko te kaupapa whanui o te tauhohenga e whakaatuhia ana i te piki. kotahi.
I whakahekehia nga tauira ki te 393 K mo te 1 haora tae noa ki te whiwhi i te pehanga toenga iti iho i te 10-3 Torr. Ko te nui o te N2 i whakauruhia ki te pehanga whanaunga P / P0 = 0.99 i whakamahia hei whakatau i te tapeke o te pore volume. I tirotirohia te ahua o nga matūriki silica parakore me te herea ki te maataki ma te whakamahi i te karu irahiko matawai (Hitachi High Technologies, Tokyo, Japan). Ko nga tauira maroke (he matūriki silica parakore me nga matūriki silica herea herea) i utaina ki runga i nga rakau konumohe ma te whakamahi i te riipene waro. I whakatakotohia te koura ki runga i te tauira ma te whakamahi i te taputapu sputtering Q150T, ka whakatakotoria he paparanga Au 5 nm te matotoru ki runga i te tauira. Ma tenei ka pai ake te pai o te tukanga ngaohiko iti me te whakarato i te rehu makariri pai. I mahia te tātaritanga huānga ma te whakamahi i te Thermo Electron (Waltham, MA, USA) Flash EA1112 kaitirotiro titonga huānga. He kaitātari rahi matūriki Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 i whakamahia hei tiki i te tohatoha rahi matūriki. Ko nga matūriki silica kaore i pania me nga matūriki silica herea-ligan (5 mg ia) i marara ki te 5 ml o te isopropanol, ka sonicated mo te 10 meneti, ka whakakorikori mo te 5 meneti, ka tuu ki runga i te paparangi mata Mastersizer. Ka whakahaerehia te tātaritanga Thermogravimetric i te tere o te 5 °C ia meneti i roto i te awhe pāmahana mai i te 30 ki te 800 °C.
Ko te muka karaihe kapihia nga pou kowiri tira whaiti me te rahi (ID 100 × 1.8 mm) i kikihia e te tikanga whakakī slurry e whai ake nei i te tikanga rite ki te tohutoro 31. Koreira kowiri tira (karaihe raina, ID 100 × 1 .8 mm) me tetahi putanga kei roto he 1 µm frit i honoa ki te miihini whakakakahu slurry, De USA. Whakaritea he whakatārewatanga o te wahanga noho ma te whakatarewa i te 150 mg o te wahanga noho ki roto i te 1.2 ml o te mewaro me te whangai ki roto i te pou puna. I whakamahia te Methanol hei whakarewa slurry me te whakarewa whakahaere. Whakapaia te pou ma te whakamahi i te raupapa pehanga 100 MP mo te 10 meneti, 80 MP mo te 15 meneti, me te 60 MP mo te 30 meneti. I whakamahia e te tukanga tarapi e rua nga wiri o nga pou chromatography hau (Alltech, Deerfield, IL, USA) mo te wiri miihini kia pai ai te whakakakahu o nga pou. Katia te putunga slurry ka tuku ata te pehanga kia kore ai e pakaru te aho. I momotuhia te poupou mai i te puha slurry me tetahi atu taputapu i piri ki te kokoru ka hono ki te punaha LC hei whakamatautau i tana mahi.
I hangaia he MLC ritenga ma te whakamahi i te papu LC (10AD Shimadzu, Japan), he tauira me te 50 nL i werohia (Valco (USA) C14 W.05), he degasser membrane (Shimadzu DGU-14A), me te matapihi kapi UV-VIS. He taputapu kaitirotiro (UV-2075) me te pou moroiti. Whakamahia nga ngongo hono whaiti me te poto hei whakaiti i te paanga o te roha atu o nga pou. Whai muri i te whakakī i te tīwae, whakauruhia he kapi (50 µm id 365) ki te putanga o te hononga whakaheke 1/16″ me te whakauru i te kapi (50 µm) o te hononga whakaheke. Ko te kohikohi raraunga me te tukatuka chromatogram ka mahia ma te whakamahi i te rorohiko Multichro 2000. I te 254 nm, i aroturukihia te whakauru o te UV o nga kaupapa tātari i te 0. I tātarihia nga raraunga Chromatographic ma te whakamahi i te OriginPro8 (Northampton, MA).
Albumin serum tangata, paura lyophilized, ≥ 96% (agarose gel electrophoresis) 3 mg i konatunatua ki te trypsin (1.5 mg), 4.0 M urea (1 ml) me te 0.2 M ammonium bicarbonate (1 ml). I whakaohohia te otinga mo te 10 meneti ka pupuri i roto i te pati wai i te 37 ° C mo te 6 haora, ka tineia ki te 1 ml o te 0.1% TFA. Tātarihia te otinga ka penapena ki raro i te 4°C.
Ko te wehenga o te ranunga peptides me te tryptic digest HSA i runga i te pou PMP i arotakea motuhake. Tirohia te hauwai tryptic o te ranunga o te peptides me te HSA i wehea e te pou PMP ka whakataurite i nga hua ki te pou Ascentis Express RP-Amide. Ka tātaihia te maha o ngā pereti ariā mā te whārite e whai ake nei:
Ko nga whakaahua SEM o nga matūriki silica parakore me nga matūriki silica herea ligand e whakaatuhia ana i te Whakaahua 2. Ko nga whakaahua SEM o nga matūriki silica parakore (A, B) e whakaatu ana i te ahua porowhita e roa ana nga matūriki, he hangarite koretake ranei i whakaritea ki o maatau rangahau o mua. Ko te mata o nga matūriki silica e herea ana e te ligand (C, D) he maeneene ake i nga matūriki silica parakore, he mea pea na nga mekameka polystyrene e hipoki ana i te mata o nga matūriki silica.
Matawai moroiti irahiko o nga matūriki silica parakore (A, B) me nga matūriki silica herea (C, D).
Ko te tohatoha rahi matūriki o nga matūriki silica parakore me nga matūriki silica herea-ligan e whakaatuhia ana i te Whakaahua 2. 3(A). Ko nga pihi tohatoha rahi matūriki volumetric i whakaatu i te rahi o te matūriki silica i muri i te whakarereketanga matū (Fig. 3A). Ko nga raraunga tohatoha matūriki silica mai i te rangahau o naianei me te rangahau o mua ka whakatauritehia i te Ripanga 1(A). Ko te rahi matūriki rōrahi d(0.5) o te PMP he 3.36 µm, ka whakaritea ki te ad(0.5) uara o te 3.05 µm i roto i ta maatau rangahau o mua (polystyrene bonded silica particles)34. Na te huringa o te tauwehenga o te PEG, te Urea, te TMOS me te waikawa acetic i roto i te ranunga tauhohenga, he whaiti te tohatoha matūriki o tenei puranga ki ta maatau rangahau o mua. Ko te rahi o te matūriki o te wahanga PMP he nui ake i tera o te waahanga matūriki silica herea polystyrene i akohia e matou i mua. Ko te tikanga ko te mahinga o te mata o nga matūriki silica me te styrene ka waiho he paparanga polystyrene anake (0.97 µm) ki runga i te mata silica, i te wahanga PMP he 1.38 µm te matotoru paparanga.
Te tohatoha rahi matūriki (A) me te tohatoha rahi pore (B) o nga matūriki silica parakore me nga matūriki silica herea ligand.
Ko te rahi o te pore, te rōrahi pore, me te horahanga mata o nga matūriki silica e whakamahia ana i roto i tenei rangahau e whakaatuhia ana i te Ripanga 1 (B). Ko nga korero PSD o nga matūriki silica parakore me nga matūriki silica herea-herea e whakaatuhia ana i te Fig. 3(B). He rite nga hua ki ta maatau rangahau o mua34. Ko te rahi o te pore o nga matūriki silica parakore me te ligand-here he 310 Å me te 241 Å, e tohu ana i muri i te whakarereketanga matū, ka heke te rahi o te pore ki te 69 Å, e whakaatuhia ana i te Ripanga 1 (B), ka whakaatuhia te kohanga nekehanga i te Fig. m2/g). E whakaatu ana i te Ripanga 1(B), ka heke iho te mata o te mata (m2/g) o nga matūriki silica i muri i te whakarereketanga matū mai i te 116 m2/g ki te 105 m2/g.
Kei te Ripanga nga hua o te wetewetetanga o te wahanga tuutuu. 2. He 6.35% te waro waro o te wahanga noho o naianei, he iti ake i ta maatau rangahau o mua (ko nga matūriki silica e hono ana ki te polystyrene, 7.93%35 me te 10.21%, ia) 42. Ko te ihirangi waro o te wahanga noho o naianei kei raro nei, no te mea kua whakamahia etahi hononga polar penei i te phenylmaleimide to methylMP TEMPxy isocyanate (he phenylmaleimide to methylMP TEMP me te 42. styrene i roto i te faaineineraa o SP. Ko te paheketanga taumaha o te hauota i roto i te wahanga o naianei he 2.21% ka whakaritea ki te 0.1735 me te 0.85% i nga rangahau o mua42. Ko te tikanga he nui te paheketanga o te hauota o te wahanga noho o naianei na te phenylmaleimide. Waihoki, ko nga hua (4) me te (5) he waro ki te 2.7% me te 2.9%, ko te hua whakamutunga (6) he waro ki te 6.35%, e whakaatuhia ana i te Ripanga 2. I whakamahia te tātaritanga Thermogravimetric (TGA) i runga i te waahi o te PMP ki te whakamatautau mo te mate taimaha, me te tohu TGA 4 e whakaatu ana i te TGA6% mate taimaha. e pai ana ki te ihirangi waro (6.35%), na te mea kei roto i nga hononga ehara i te C anake, engari ko N, O me H.
Ko te ligand phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate i whiriwhiria hei whakarereke i te mata o nga matūriki silica na ona roopu polar phenylmaleimide me vinylisocyanate. Ka taea e nga roopu isocyanate Vinyl te tauhohe atu ki te styrene ma te noho polymerization tuwhena. Ko te take tuarua ko te whakauru i tetahi roopu he ngawari nga taunekeneke ki te tātari, me te kore he hononga hiko hiko i waenga i te wetewete me te waahi tuuturu, i te mea karekau he utu mariko i te wahanga o te phenylmaleimide i te pH noa. Ka taea te whakahaere i te polarity o te wahanga tuutuu e te tino pai o te styrene me te wa tauhohenga o te polymerization radical free. Ko te taahiraa whakamutunga o te tauhohenga (ko te polymerization tuwhena kore utu) he mea tino nui i te mea ka huri i te polarity o te wahanga tu. I mahia he tātaritanga huānga ki te tirotiro i te ihirangi waro i roto i enei wahanga noho. Kua kitea ko te whakanui ake i te nui o te styrene me te wa tauhohenga ka piki ake te ihirangi waro o te wahanga tu me te rereke. Ko nga SP kua whakaritea he rereke nga kukū o te styrene he rereke nga kawenga waro. Waihoki, i utaina enei waahanga noho ki runga i nga pou kowiri tira ka tirohia o raatau ahuatanga chromatographic (te whiriwhiri, te whakatau, te uara N, me etahi atu). I runga i enei whakamatautau, i whiriwhiria he titonga tino pai mo te whakarite i te wahanga tuutuu PMP hei whakarato i te polarity whakahaere me te pupuri pai o te tātari.
I arotakea ano te pou PMP mo te tātaritanga o nga ranunga e rima o nga peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin) ma te whakamahi i te kaha o te waahanga pūkoro. 60/40 (v/v) ACN/wai (0.1% TFA) i te tere rere o te 80 µl/min. I raro i nga tikanga elution tino pai (200,000 pereti/m), ko te maha o nga pereti ariā (N) mo ia tīwae (100 × 1.8 mm) he 20,000 ± 100. Ko nga uara N mo nga pou PMP e toru e whakaatuhia ana i te Ripanga 3 me nga chromatograms kei te Whakaahua 5A. Te tātari tere i te tere rere teitei (700 µl / min) i runga i te pou PMP, e rima nga peptides i whakahekehia i roto i te meneti kotahi, te uara N tino pai o te 13,500 ± 330 mo ia pou (100 x 1.8 mm diameter), e rite ana ki te 135,000 pereti / m (Fig. 5B). E toru nga pou he rite te rahi (te diameter o roto 100 x 1.8 mm) i whakakiia ki nga roopu rereke e toru o te wahanga PMP e tu ana hei whakamatautau i te whakaputa. I tuhia nga wetewete mo ia pou ma te wehe i te ranunga whakamatautau kotahi ki ia pou ma te whakamahi i nga tikanga hauhautanga tino pai, te maha o nga pereti ariā N, me te wa pupuri. Ko nga raraunga whakahoki mo nga pou PMP e whakaatuhia ana i te Ripanga 4. He pai te hono o te reproducibility o te pou PMP ki nga uara %RSD tino iti e whakaatuhia ana i te Ripanga 3.
Te wehenga o nga ranunga peptide i runga i te pou PMP (B) me te pourangi Ascentis Express RP-Amide (A), te wahanga pūkoro 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), te rahi o te pou PMP (100 x 1.8 mm id) , te tātari Te raupapa Elution o nga pūhui: 1 (Gly-Tyr-Tyr), 2-U (Gly-Tyr) (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) me te 5 (leucic acid enkephalin).
He pou PMP (te diameter o roto 100 x 1.8 mm) i aromatawaihia mo te wehenga o te tryptic hydrolyzate o te albumin serum tangata na HPLC. Ko te chromatogram i te Whakaahua 6 e whakaatu ana he pai te wehewehe o nga tauira me te tino pai o te whakatau. I tātarihia nga otinga HSA ma te whakamahi i te tere o te rere o te 100 μl / min, he waahanga waea o te 70/30 acetonitrile / wai me te 0.1% TFA. I wehewehea te wehenga o te HSA ki nga tihi 17, e whakaatuhia ana i te chromatogram (Fig. 6), e rite ana ki te 17 peptides. I tatauhia te wehewehenga o nga tihi takitahi mai i te HSA hydrolyzate ka whakaatuhia nga uara ki te Ripanga 5.
I wehea te HSA tryptic hydrolysates i runga i te pou PMP (te diameter o roto 100 x 1.8 mm), te tere o te rere (100 μl / min), te waahanga pūkoro 60/40 acetonitrile / wai, me te 0.1% TFA.
ko L te roa o te pou, ko te η te pokey o te wahanga pūkoro, ko te ΔP te pehanga o muri o te pou, ko te u te tere raina o te wahanga pūkoro. Ko te uruhanga o te pou PMP ko 2.5 × 10-14 m2, ko te rere o te rere ko 25 µl / min, 60/40 v / v i whakamahia. ACN/wai. Ko te uruhanga o te pou PMP (ID 100 × 1.8 mm) he rite ki ta maatau rangahau Ref.34 o mua. Ko te uruhanga o te pou kua whakakiia ki nga matūriki poroporoporo he 1.7×10 .6 µm, 2.5×10-14 m2 mo te 5 µm matūriki43. Na reira, he rite te uruhanga o te wahanga PMP ki te uruhanga o nga matūriki matua-anga me te rahi o te 5 μm.
ko Wx te papatipu o te pou kua whakakiia ki te chloroform, ko Wy te papatipu o te pou kua whakakiia ki te methanol, ko te ρ te kiato o te whakarewa. Te kiato o te mewaro (ρ = 0.7866) me te chloroform (ρ = 1.484). Te tapeke porosity o te silica-C18 tīwae matūriki (100 × 1.8 mm ID)34 me to tatou C18-urea31 tīwae ako i mua ko 0.63 me 0.55, ia. Ko te tikanga ko te noho mai o nga ligand Urea e whakaiti ana i te uruhanga o te wahanga noho. I tetahi atu ringa, ko te tapeke porosity o te pou PMP (te diameter o roto 100 × 1.8 mm) he 0.60. He iti ake te permeable o nga pou PMP i nga pou kua whakakiia ki nga matūriki silica herea C18 na te mea i roto i nga momo C18 nga waahanga tuuturu ka piri nga herenga C18 ki nga matūriki silica i roto i nga mekameka raina, i roto i nga momo polystyrene ka hangaia he polymer ahua matotoru huri noa i nga matūriki. paparanga A. I roto i te whakamatautau angamaheni, ka tatauhia te porosity o te pou e whai ake nei:
I te piki. 7A, B whakaatu i nga mahere a Van Deemter mo tetahi pou PMP (id 100 x 1.8 mm) me tetahi pou Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 mm) i raro i nga tikanga elution kotahi, 60/40 ACN/H2O me te 0 .1% TFA 20 µl/meneti ki te 80 µl/meneti e rua. Ko nga uara HETP iti i te tere rere tino pai (80 µl/min) he 2.6 µm me te 3.9 µm mo te pou PMP me te pou Ascentis Express RP-Amide. Ko nga uara HETP e whakaatu ana ko te pai o te wehenga o te pou PMP (100 x 1.8 mm id) he teitei ake i tera o te waahanga hokohoko Ascentis Express RP-Amide (100 x 1.8 mm id). Ko te kauwhata van Deemter i te Whakaahua 7(A) e whakaatu ana ko te hekenga o te uara N ehara i te tino teitei ake me te piki haere o te rere ka whakaritea ki ta maatau rangahau o mua. Ko te pai ake o te wehewehenga o te pou PMP (id 100 × 1.8 mm) ka whakaritea ki te pourangi Ascentis Express RP-Amide e ahu mai ana i runga i te pai ake o te ahua me te rahi o te matūriki me te tikanga whakahiato poupou e whakamahia ana i roto i nga mahi o naianei34.
(A) Mahinga a Van Deemter (HETP vs. te tere tere o te wahanga pūkoro) i whiwhi i runga i te pou PMP (id 100 x 1.8 mm) i te 60/40 ACN/H2O me te 0.1% TFA. (B) Mahinga a Van Deemter (HETP me te tere tere o te wahanga pūkoro) i whiwhi i runga i te tiwae Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 mm) i te 60/40 ACN/H2O me te 0.1% TFA.
I whakaritea, i arotakehia tetahi wahanga polar o te polystyrene intercalated mo te wehenga o te ranunga o nga peptides waihanga me te tryptic hydrolyzate o te albumin serum tangata (HSA) i roto i te chromatography wai mahi teitei. He pai te mahi chromatographic o nga pou PMP mo nga ranunga peptide i runga i te pai o te wehenga me te whakatau. Ko te pai ake o te wehewehenga o nga pou PMP na te maha o nga take penei i te rahi o te matūriki silica me te rahi pore, te whakahiatotanga o nga waahanga noho, me nga rauemi whakakakahu o nga pou. I tua atu i te kaha o te wehewehenga, ko tetahi atu painga o tenei waahanga tuuturu ko te iti o te pehanga o muri o te pou i nga reiti rere tiketike. Ko nga pou PMP he tino whakaputa, ka taea te whakamahi ki te tarai i nga ranunga peptides me te keri tryptic o nga momo pūmua. E whakaaro ana matou ki te whakamahi i tenei pou mo te wehenga o nga pūhui koiora mai i nga hua taiao, nga tangohanga o nga tipu rongoa me nga harore i roto i te chromatography wai. I te wa kei te heke mai, ka arotakehia nga pou PMP mo te wehenga o nga pūmua me nga antibodies monoclonal.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Te whakatewhatewha ki nga punaha wehenga peptide peptide whakamuri wahanga I: Te whakawhanaketanga o te kawa mo te tohu tohu pou. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Te tirotiro ki nga punaha wehenga peptide peptide whakamuri wahanga I: Te whakawhanaketanga o te kawa mo te tohu tohu.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., me Petersson, P. Te Tirohanga o nga Pūnaha Wehenga Peptide ma te Whakamuri-Phase Chromatography, Wāhanga I: Te Whakawhanake i tetahi Kawa mo te Whakaaturanga Tiwae. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Te tirotiro ki nga punaha whakawehe peptide peptide wahanga hurihuri wahanga I: Te whakawhanaketanga o te kawa mo nga ahuatanga o te pou. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Te tirotiro ki nga punaha whakawehe peptide peptide wahanga hurihuri wahanga I: Te whakawhanaketanga o te kawa mo nga ahuatanga o te pou.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., me Petersson, P. Te Tirohanga o nga Pūnaha Wehenga Peptide ma te Whakamuri-Phase Chromatography, Wāhanga I: Te Whakawhanake i tetahi Kawa mo te Whakaaturanga Tiwae.J.色谱法。 1603，113-129。 https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019).
Gomez, B. et al. Nga tikanga mo te hanga peptides kaha ake mo te maimoatanga o nga mate hopuhopu. Hangarau koiora. Paetae 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic peptides therapeutic: Pūtaiao me te maakete. Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic peptides therapeutic: Pūtaiao me te maakete.Vliege P, Lisowski V, Martinez J me Chreschatyski M. peptides haumanu waihanga: pūtaiao me te maakete.Vliege P, Lisowski V, Martinez J me Khreschatsky M. Synthetic peptides therapeutic: pūtaiao me te maakete. te kitenga tarukino. I tenei ra 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Arā proteomic wai chromatography. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Arā proteomic wai chromatography.Tirohia F., Smith RD me Shen Yu. Ko te chromatography wai proteomic matatau. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱。 Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Hanganga pūmua matatau 液相色谱。Tirohia F., Smith RD me Shen Yu. Ko te chromatography wai proteomic matatau.J. Chromatography. A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Ka taea e te chromatography wai-papatipu spectrometry te whakakotahi i nga metabolomics whanui me te proteomics. nono. Chim. Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Ko te mahi a te UHPLC ki te whakawhanaketanga rongoa. Chesnut, SM & Salisbury, JJ Ko te mahi a te UHPLC ki te whakawhanaketanga rongoa.Chesnut, SM me Salisbury, JJ Ko te mahi a te UHPLC ki te whakawhanaketanga rongoa.Chesnut, SM me Salisbury, JJ Te mahi a te UHPLC ki te whakawhanake tarukino. J. Hepetema Pūtaiao. 30(8), 1183–1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Nga ahuatanga taketake me te whai kiko o te chromatography wai pehanga ultrahigh mo te wehenga tere. Wu, N. & Clausen, AM Nga ahuatanga taketake me te whai kiko o te chromatography wai pehanga ultrahigh mo te wehenga tere.Wu, N. me Clausen, AM Nga ahuatanga taketake me te mahi o te chromatography wai pehanga teitei mo te wehe tere. Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 Wu, N. & Clausen, AM Nga ahuatanga taketake me te mahi o te chromatography wai pehanga ultra-tiketike mo te wehe tere.Wu, N. me Clausen, AM Nga ahuatanga taketake me te mahi o te chromatography wai pehanga teitei mo te wehe tere.J. Hepetema Pūtaiao. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Te whakamahi i te mahi ultra-performance chromatography wai i roto i te whanaketanga ho'oraa. Wren, SA & Tchelitcheff, P. Te whakamahi i te mahi ultra-performance chromatography wai i roto i te whanaketanga ho'oraa.Ren, SA me Chelischeff, P. Ko te whakamahinga o te ultra high performance liquid chromatography i roto i te whanaketanga rongoa. Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用。 Wren, SA & Tchelitcheff, P.Ren, SA me Chelischeff, P. Te tono o te chromatography wai ultra-performance i roto i te whanaketanga tarukino.J. Chromatography. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. He monolithic macroporous hydrogel i ahu mai i te whakaehunga hinu-i roto i te wai me te wahanga o roto teitei mo te purenga pai o te enterovirus 71. Te matū. kaupapa. Hautaka 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Ko te mahi a te chromatography wai i roto i te proteomics. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Ko te mahi a te chromatography wai i roto i te proteomics.Shi, Y., Xiang, R., Horvath, C. me Wilkins, JA Ko te mahi a te wai chromatography i roto i te proteomics. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JAShi, Y., Xiang, R., Horvath, C. me Wilkins, JA Ko te mahi a te wai chromatography i roto i te proteomics.J. Chromatography. A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Vutey, J.-L. & Guillarme, D. Ko nga ahuatanga hou i roto i nga wehenga chromatographic wai whakamuri o nga peptides rongoa me nga pūmua: Te ariā me nga tono. & Guillarme, D. Ko nga ahuatanga hou i roto i nga wehenga chromatographic wai whakamuri o nga peptides rongoa me nga pūmua: Te ariā me nga tono. & Guillarme, D. Новые тенденции в разделении терапевтических пептидов и белков с помощью жидкостной хроматографира хроматографира: теория и приложения. & Guillarme, D. Ko nga ahuatanga hou mo te wehewehenga o nga peptides haumanu me nga pūmua na roto i te wahanga whakamuri chromatography wai: te ariā me nga tono. & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用。 & Guillarme, D.me Guillarmé, D. Ko nga ahuatanga hou i roto i te wehenga o nga peptides rongoa me nga pūmua na roto i te waahanga whakamuri chromatography wai: te ariā me nga tono.J. Pharm. Pūtaiao Hauora. nono. 69, 9–27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Te wehewehenga-rua o nga peptides ma te whakamahi i te punaha RP-RP-HPLC me te pH rereke i roto i nga waahanga wehe tuatahi me te tuarua. Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Te wehewehenga-rua o nga peptides ma te whakamahi i te punaha RP-RP-HPLC me te pH rereke i roto i nga waahanga wehe tuatahi me te tuarua.Gilar M., Olivova P., Dali AE me Gebler JK Te wehewehenga e rua nga waahanga o nga peptides ma te whakamahi i te punaha RP-RP-HPLC me te pH rereke i roto i nga waahanga wehe tuatahi me te tuarua.Gilar M., Olivova P., Dali AE me Gebler JK Wehewehenga e rua nga waahanga o nga peptides ma te whakamahi i nga uara pH rereke i nga waahanga wehe tuatahi me te tuarua ma te whakamahi i te punaha RP-RP-HPLC. J. Hepetema Pūtaiao. 28 (14), 1694–1703 (2005).
Fellitti, S. et al. Te whakatewhatewha mo te whakawhiti papatipu me nga ahuatanga oro o nga pou chromatography mahi teitei kua whakakiia ki nga matūriki C18 tino maiangi me te matūriki papapapa iti iho i te 2 µm. J. Hepetema Pūtaiao. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Ko nga ahuatanga hou me nga wero tātari i roto i te wehe, te tautuhi, me te whakamana i nga peptides bioactive tipu. nono. Te hanga whakaeneene. Te matū. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Muller, JB et al. Whenua Proteomic o te rangatiratanga o te ora. Nature 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
De Luca, K. et al. I muri mai i te maimoatanga o nga peptides rongoa ma te chromatography wai whakarite. Ngota ngota (Basel, Switzerland) 26(15), 4688 (2021).
Yang, Y. & Geng, X. Hangarite-aratau chromatography me ona tono ki biopolymers. Yang, Y. & Geng, X. Hangarite-aratau chromatography me ona tono ki biopolymers.Yang, Yu. me Geng, X. Te chromatography aratau whakaranu me tona whakamahinga ki nga biopolymers. Yang, Y. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 Yang, Y. & Geng, X. Te chromatography aratau whakaranu me tona whakamahinga i roto i te biopolymers.Yang, Yu. me Gene, X. Te chromatography aratau whakaranu me tona whakamahinga ki nga biopolymers.J. Chromatography. A 1218(49), 8813–8825 (2011).