Ви благодариме што ја посетивте Nature.com. Користите верзија на прелистувач со ограничена CSS поддршка. За најдобро искуство, препорачуваме да користите ажуриран прелистувач (или да го оневозможите режимот на компатибилност во Internet Explorer). Дополнително, за да обезбедиме континуирана поддршка, ја прикажуваме страницата без стилови и JavaScript.
Прикажува вртелешка од три слајдови одеднаш. Користете ги копчињата „Претходно“ и „Следно“ за да се движите низ три слајдови одеднаш или користете ги лизгачките копчиња на крајот за да се движите низ три слајдови одеднаш.
Порозни силициумски честички беа подготвени со методот сол-гел со некои модификации за да се добијат честички со широки пори. Овие честички беа дериватизирани со N-фенилмалеимид-метилвинил изоцијанат (PMI) и стирен преку полимеризација со обратен пренос на синџирот-фрагментација (RAFT) за да се произведат полиамиди со интеркалација на N-фенилмалеимид. Стационарна фаза на стирен (PMP). Теснопроводни колони од не'рѓосувачки челик (внатрешен дијаметар од 100 × 1,8 mm) беа спакувани со кашеста маса. Хроматографската изведба на PMP колоната беше оценета за да се одвои мешавина од синтетички пептиди што се состои од пет пептиди (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu аминокиселински енкефалин) и триптичен хидролизат на човечки серумски албумин (HAS). Под оптимални услови на елуирање, теоретскиот број на плочи со мешавина од пептиди достигна 280.000 плочи/кв.м. Споредувајќи ги перформансите на сепарација на развиената колона со комерцијалната колона Ascentis Express RP-Amide, беше забележано дека ефикасноста на сепарација на PMP колоната беше супериорна во однос на комерцијалната колона во однос на ефикасноста на сепарација и резолуцијата.
Биофармацевтската индустрија стана растечки глобален пазар со значително зголемување на пазарниот удел во последниве години. Со експлозивниот раст на биофармацевтската индустрија1,2,3 постои голема потреба за анализа на пептиди и протеини. Покрај целниот пептид, за време на синтезата на пептиди се формираат разни нечистотии, па затоа е потребно хроматографско прочистување за да се добие посакуваната чистота на пептидот. Анализата и карактеризацијата на протеините во телесни течности, ткива и клетки е исклучително предизвикувачка задача поради големиот број потенцијално детектабилни видови присутни во еден примерок. Иако масената спектрометрија е ефикасна алатка за секвенционирање на пептиди и протеини, ако таквите примероци се внесат директно во масениот спектрометар, одвојувањето ќе биде незадоволително. Овој проблем може да се реши со изведување на течна хроматографија (LC) пред MS анализата, што ќе ја намали количината на аналити што влегуваат во масениот спектрометар во дадено време4,5,6. Покрај тоа, аналитите можат да се концентрираат во тесен регион за време на одвојувањето на течната фаза, со што се концентрираат овие аналити и се зголемува чувствителноста на MS детекцијата. Течната хроматографија (LC) значително напредна во текот на изминатата деценија и стана широко користен метод за протеомска анализа7,8,9,10.
Обратно-фазната течна хроматографија (RP-LC) е широко користена за прочистување и одвојување на мешавини од пептиди со употреба на октадецил-модифициран силициум диоксид (ODS) како стационарна фаза11,12,13. Сепак, поради нивната комплексна структура и амфотерна природа,14,15 RP стационарните фази не можат да обезбедат задоволително одвојување на пептидите и протеините. Затоа, анализата на пептиди и протеини со поларни и неполарни фрагменти бара специјално дизајнирани стационарни фази за да комуницираат и да ги задржат овие аналити16. Мешаната хроматографија, која нуди мултимодални интеракции, може да биде алтернатива на RP-LC за одвојување на пептиди, протеини и други сложени мешавини. Подготвени се неколку стационарни фази од мешан тип и колони исполнети со овие стационарни фази се користени за одвојување на пептиди и протеини17,18,19,20,21. Поради присуството на поларни и неполарни групи, мешаните стационарни фази (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, поларна интеркалација/RPLC) се погодни за одвојување на пептиди и протеини22,23,24,25,26,27,28. , поларните интеркалирани стационарни фази со ковалентно врзани поларни групи покажуваат добри способности за одвојување и единствена селективност за поларните и неполарните аналити бидејќи одвојувањето зависи од интеракцијата помеѓу аналитот и стационарната фаза. Мултимодални интеракции29,30,31,32. Неодамна, Zhang et al. 30 добија бехенил-терминирани стационарни фази на полиамини и успешно одвоија јаглеводороди, антидепресиви, флавоноиди, нуклеозиди, естрогени и некои други аналити. Поларно вградениот стационарен материјал има и поларни и неполарни групи, така што може да се користи за одвојување на пептиди и протеини на хидрофобни и хидрофилни делови. Поларните колони во линија (на пр., колони C18 со амид во линија) се достапни под трговското име Ascentis Express RP-Amide колони, но овие колони се користеле само за анализа на амин 33.
Во оваа студија, беше подготвена и оценета поларна вградувачка стационарна фаза (N-фенилмалеимид, вградлив полистирен) за одвојување на пептиди и триптичко расцепување на HSA. Следната стратегија беше користена за подготовка на стационарната фаза. Порозните честички од силициум диоксид беа подготвени според постапките опишани во нашите претходни публикации, со некои промени во шемите за подготовка 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39. Односите на уреа, полиетилен гликол (PEG), TMOS и воден оцетна киселина беа прилагодени за да се добијат честички од силициум диоксид со големи димензии на порите. Второ, беше синтетизиран нов лиганд од фенилмалеимид-метилвинил изоцијанат и неговите дериватизирани честички од силициум диоксид беа користени за подготовка на поларни вградувани стационарни фази. Добиената стационарна фаза беше спакувана во колона од не'рѓосувачки челик (внатрешен дијаметар 100 × 1,8 mm) според оптимизирана шема на пакување. Пакувањето на колоната е потпомогнато од механички вибрации за да се обезбеди униформен слој во колоната. Спакуваната колона беше оценета за сепарација на мешавина од пептиди што се состои од пет пептиди (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, леуцин-енкефалин пептид) и триптички хидролизати на човечки серумски албумин (HSA). Беше забележано дека мешавината од пептиди и триптичкиот дигест на HSA се одвоија со добра резолуција и ефикасност. Ефикасноста на сепарацијата на PMP колоната беше споредена со онаа на колоната Ascentis Express RP-Amide. Беше забележано дека пептидите и протеините имаат добра резолуција и висока ефикасност на сепарација на PMP колоната, а ефикасноста на сепарацијата на PMP колоната е поголема од онаа на колоната Ascentis Express RP-Amide.
PEG (полиетилен гликол), уреа, оцетна киселина, триметоксиортосиликат (TMOS), триметилхлоросилан (TMCS), трипсин, човечки серумски албумин (HSA), амониум хлорид, уреа, хексаметилметакрилоилдисилазан (HMDS), метакрилоил хлорид (MC), стирен, 4-хидрокси-TEMPO, бензоил пероксид (BPO), ацетонитрил (ACN) за HPLC, метанол, 2-пропанол и ацетон. Компанија Sigma-Aldrich (Сент Луис, Мисури, САД).
Мешавина од уреа (8 g), полиетилен гликол (8 g) и 8 ml 0,01 N оцетна киселина се мешаше 10 минути, а потоа во неа беа додадени 24 ml TMOS под ладење со мраз. Реакционата смеса се загреваше на 40°C 6 часа, а потоа на 120°C 8 часа во автоклав од не'рѓосувачки челик. Водата се декантираше, а остатокот се сушеше на 70°C 12 часа. Исушените меки блокови беа мазно мелени и калцинирани во рерна на 550°C 12 часа. Беа подготвени и карактеризирани три серии за да се тестира репродуктивноста на големината на честичките, големината на порите и површината.
Поларна група и стационарна фаза за полистиренски синџири. Постапката за подготовка е опишана подолу.
N-фенилмалеимид (200 mg) и метил винил изоцијанат (100 mg) беа растворени во безводен толуен, а потоа 0,1 ml 2,2′-азоизобутиронитрил (AIBN) беше додаден во реакционата колба за да се добие кополимер на фенилмалеимид и метил винил изоцијанат (PMCP). ) Смесата беше загреана на 60°C во тек на 3 часа, филтрирана и сушена во рерна на 40°C во тек на 3 часа.
Сушените силициумски честички (2 g) беа дисперзирани во сув толуен (100 ml), промешани и соникирани 10 минути во колба со тркалезно дно од 500 ml. PMCP (10 mg) беше растворен во толуен и додаден капка по капка во реакционата колба преку адициона инка. Смесата беше рефлуксирана на 100°C 8 часа, филтрирана, измиена со ацетон и сушена на 60°C 3 часа. Потоа, силициумските честички поврзани со PMCP (100 g) беа растворени во толуен (200 ml), а во нив беше додаден 4-хидрокси-TEMPO (2 ml) во присуство на 100 μl дибутилтин дилаурат како катализатор. Смесата беше мешана на 50°C 8 часа, филтрирана и сушена на 50°C 3 часа.
Стирен (1 ml), бензоил пероксид BPO (0,5 ml) и честички од силициум диоксид прикачени на TEMPO-PMCP (1,5 g) беа дисперзирани во толуен и прочистени со азот. Полимеризацијата на стиренот беше извршена на 100°C во тек на 12 часа. Добиениот производ беше измиен со метанол и сушен преку ноќ на 60°C. Општата шема на реакцијата е прикажана на сл. еден.
Примероците беа дегасифицирани на 393 K во тек на 1 час додека не се добие резидуален притисок помал од 10–3 Torr. Количината на N2 адсорбирана при релативен притисок P/P0 = 0,99 беше искористена за да се одреди вкупниот волумен на порите. Морфологијата на чистите и лиганд-врзаните честички од силициум диоксид беше испитана со помош на скенирачки електронски микроскоп (Hitachi High Technologies, Токио, Јапонија). Сувите примероци (чист силициум диоксид и лиганд-врзани честички) беа поставени на алуминиумски прачки со помош на јаглеродна лента. Златото беше нанесено на примерокот со помош на уред за распрскување Q150T, а слој од Au со дебелина од 5 nm беше нанесен на примерокот. Ова ја подобрува ефикасноста на процесот со низок напон и обезбедува фино ладно прскање. Елементарната анализа беше извршена со помош на анализатор на елементарен состав Thermo Electron (Waltham, MA, САД) Flash EA1112. За да се добие распределбата на големината на честичките беше користен анализатор на големина на честички Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000. Необложените силициумски честички и силициумските честички врзани за лиганд (по 5 mg секоја) беа дисперзирани во 5 ml изопропанол, сонифицирани 10 минути, агитирани 5 минути и поставени на оптичка маса Mastersizer. Термогравиметриската анализа се спроведува со брзина од 5 °C во минута во температурен опсег од 30 до 800 °C.
Колони од не'рѓосувачки челик со тесен отвор обложени со стаклени влакна со димензии (ID 100 × 1,8 mm) беа спакувани со метод на полнење со кашеста маса следејќи ја истата постапка како во референцата 31. Колона од не'рѓосувачки челик (обложена со стакло, ID 100 × 1,8 mm) и излез што содржи фрит од 1 µm беа поврзани со машина за пакување кашеста маса (Alltech Deerfield, IL, САД). Подгответе суспензија од стационарната фаза со суспендирање на 150 mg од стационарната фаза во 1,2 ml метанол и внесување во колона во резервоар. Метанолот беше користен како растворувач за кашеста маса и контролен растворувач. Пакувајте ја колоната со примена на низа од притисок од 100 MP за 10 минути, 80 MP за 15 минути и 60 MP за 30 минути. Во процесот на пакување беа користени два вибратори на колона за гасна хроматографија (Alltech, Deerfield, IL, САД) за механички вибрации за да се обезбеди униформно пакување на колоната. Затворете го пакувачот за кашеста маса и полека ослободете го притисокот за да се спречи оштетување на низата. Колоната беше исклучена од млазницата за кашеста маса, а друг фитинг беше прикачен на влезот и поврзан со LC системот за да се тестира нејзината работа.
Прилагоден MLC беше конструиран со употреба на LC пумпа (10AD Shimadzu, Јапонија), семплер со инјекциска јамка од 50 nL (Valco (USA) C14 W.05), мембрански дегасер (Shimadzu DGU-14A) и UV-VIS капиларен прозорец. Уред за детекција (UV-2075) и емајлирана микроколона. Користете многу тесни и кратки цевки за поврзување за да се минимизира ефектот на дополнително ширење на колоната. По полнењето на колоната, инсталирајте капиларна цевка (50 µm id 365) на излезот од редукцискиот спој од 1/16″ и инсталирајте капиларна цевка (50 µm) од редукцискиот спој. Собирањето податоци и обработката на хроматограмот се вршат со помош на софтверот Multichro 2000. На 254 nm, UV апсорпцијата на испитаните аналити беше следена на 0. Хроматографските податоци беа анализирани со помош на OriginPro8 (Нортхемптон, Масачусетс).
Хуман серумски албумин, лиофилизиран прав, ≥ 96% (електрофореза со агарозен гел) 3 mg измешан со трипсин (1,5 mg), 4,0 M уреа (1 ml) и 0,2 M амониум бикарбонат (1 ml). Растворот се мешаше 10 минути и се чуваше во водена бања на 37°C во тек на 6 часа, а потоа се гасеше со 1 ml 0,1% TFA. Филтрирајте го растворот и чувајте го под 4°C.
Одвојувањето на мешавина од пептиди и триптичен дигест HSA на PMP колона беше оценето одделно. Проверете ја триптичката хидролиза на мешавина од пептиди и HSA одделени со PMP колона и споредете ги резултатите со колона Ascentis Express RP-Amide. Бројот на теоретски плочи се пресметува со помош на следната равенка:
SEM сликите од чисти силициумски честички и силициумски честички врзани за лиганд се прикажани на Слика 2. SEM сликите од чисти силициумски честички (A, B) покажуваат сферична форма во која честичките се издолжени или имаат неправилна симетрија во споредба со нашите претходни студии. Површината на силициумските честички врзани за лигандот (C, D) е помазна од онаа на чистите силициумски честички, што може да се должи на полистиренските синџири што ја покриваат површината на силициумските честички.
Скенирачки електронски микрографии на чисти силициумски честички (A, B) и силициумски честички врзани за лиганд (C, D).
Распределбата на големината на честичките на чисти силициумски честички и силициумски честички врзани со лиганд е прикажана на Сл. 2.3(A). Кривите на волуметриска распределба на големината на честичките покажаа дека големината на силициумските честички се зголемила по хемиската модификација (Сл. 3A). Податоците за распределба на големината на силициумските честички од тековната и претходната студија се споредени во Табела 1(A). Волуметриската големина на честичките d(0,5) на PMP беше 3,36 µm, во споредба со вредноста ad(0,5) од 3,05 µm во нашата претходна студија (честички силициум врзани со полистирен)34. Поради промената во односот на PEG, уреа, TMOS и оцетна киселина во реакционата смеса, распределбата на големината на честичките на оваа серија беше потесна во споредба со нашата претходна студија. Големината на честичките на PMP фазата е малку поголема од онаа на фазата на честички силициум врзани со полистирен што ја проучувавме претходно. Ова значи дека површинската функционализација на силициумските честички со стирен наталожила само слој од полистирен (0,97 µm) на површината на силициум, додека во PMP фазата дебелината на слојот била 1,38 µm.
Распределба на големината на честичките (A) и распределба на големината на порите (B) на честички од чист силициум диоксид и честички од силициум диоксид врзани за лиганд.
Големината на порите, волуменот на порите и површината на силициумските честички што се користат во оваа студија се прикажани во Табела 1 (Б). PSD профилите на чисти силициумски честички и силициумски честички врзани со лиганд се прикажани на Сл. 3(Б). Резултатите беа споредливи со нашата претходна студија34. Големините на порите на чисти и лигандски честички беа 310 Å и 241 Å, соодветно, што укажува дека по хемиската модификација, големината на порите се намалила за 69 Å, како што е прикажано во Табела 1 (Б), а кривата на поместување е прикажана на Сл. Специфичната површина на силициумските честички во тековната студија е 116 m2/g, што е споредливо со нашата претходна студија (124 m2/g). Како што е прикажано во Табела 1(Б), површината (m2/g) на силициумските честички по хемиската модификација исто така се намалила од 116 m2/g на 105 m2/g.
Резултатите од елементарната анализа на стационарната фаза се прикажани во Табела 2. Содржината на јаглерод во тековната стационарна фаза е 6,35%, што е пониско отколку во нашата претходна студија (силикатни честички поврзани со полистирен, 7,93%35 и 10,21%, соодветно) 42. Содржината на јаглерод во тековната стационарна фаза е прикажана подолу, бидејќи некои поларни лиганди како што се фенилмалеимид метил винил изоцијанат (PCMP) и 4-хидрокси-TEMPO се користени покрај стирен во подготовката на SP. Тежинскиот процент на азот во тековната стационарна фаза е 2,21% во споредба со 0,1735 и 0,85% во претходните студии 42. Ова значи дека тековната стационарна фаза има висок тежински процент на азот поради фенилмалеимидот. Слично, производите (4) и (5) имаат содржина на јаглерод од 2,7% и 2,9%, соодветно, додека финалниот производ (6) има содржина на јаглерод од 6,35%, како што е прикажано во Табела 2. Термогравиметриска анализа (TGA) е користена на стационарната фаза на PMP за тестирање на губење на тежина, а кривата TGA е прикажана на Слика 4. Кривата TGA покажува губење на тежина од 8,6%, што е во добра согласност со содржината на јаглерод (6,35%), бидејќи лигандите содржат не само C, туку и N, O и H.
Лигандот фенилмалеимид-метилвинил изоцијанат беше избран за да ја модифицира површината на честичките од силициум диоксид поради неговите поларни фенилмалеимидни и винилизоцијанатни групи. Винил изоцијанатните групи можат понатаму да реагираат со стирен преку жива радикална полимеризација. Втората причина е да се вметне група која има умерени интеракции со аналитот и нема силни електростатски интеракции помеѓу аналитот и стационарната фаза, бидејќи фенилмалеимидниот дел нема виртуелен полнеж при нормална pH вредност. Поларитетот на стационарната фаза може да се контролира со оптималната количина на стирен и времето на реакција на полимеризацијата на слободни радикали. Последниот чекор од реакцијата (полимеризација на слободни радикали) е клучен бидејќи ја менува поларноста на стационарната фаза. Елементарна анализа беше спроведена за да се провери содржината на јаглерод во овие стационарни фази. Забележано е дека зголемувањето на количината на стирен и времето на реакција ја зголемува содржината на јаглерод во стационарната фаза и обратно. SP подготвени со различни концентрации на стирен имаат различни оптоварувања на јаглерод. Слично на тоа, овие стационарни фази беа поставени на колони од не'рѓосувачки челик и беа проверени нивните хроматографски карактеристики (селективност, резолуција, вредност на N, итн.). Врз основа на овие експерименти, беше избран оптимизиран состав за подготовка на стационарната фаза на PMP за да се обезбеди контролиран поларитет и добро задржување на аналитот.
PMP колоната беше оценета и за анализа на пет мешавини од пептиди (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, леуцин-енкефалин) користејќи го капацитетот на мобилната фаза. 60/40 (v/v) ACN/вода (0,1% TFA) при брзина на проток од 80 µl/min. Под оптимални услови на елуирање (200.000 плочи/m2), бројот на теоретски плочи (N) по колона (100 × 1,8 mm) е 20.000 ± 100. Вредностите на N за трите PMP колони се прикажани во Табела 3, а хроматограмите се прикажани на Слика 5А. Брза анализа при висока брзина на проток (700 µl/min) на PMP колона, пет пептиди елуирани во рок од една минута, одлична вредност на N од 13.500 ± 330 по колона (дијаметар 100 x 1,8 mm), еквивалентно на 135.000 плочи/m2 (Сл. 5B). Три колони со иста големина (внатрешен дијаметар 100 x 1,8 mm) беа исполнети со три различни серии на стационарна фаза на PMP за да се тестира репродуктивноста. Аналитите беа евидентирани за секоја колона со одвојување на истата тест смеса на секоја колона користејќи оптимални услови за елуирање, број на теоретски плочи N и време на задржување. Податоците за репродуктивноста за PMP колоните се прикажани во Табела 4. Репродуктивноста на PMP колоната добро корелираше со многу ниски вредности на %RSD како што е прикажано во Табела 3.
Одвојување на пептидни мешавини на PMP колона (B) и Ascentis Express RP-Amide колона (A), мобилна фаза 60/40 ACN/H2O (TFA 0,1%), димензии на PMP колоната (100 x 1,8 mm id), анализа Редослед на елуирање на соединенијата: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) и 5 ​​(леуцинска киселина енкефалин).
PMP колона (внатрешен дијаметар 100 x 1,8 mm) беше оценета за одвојување на триптичкиот хидролизат на човечки серумски албумин со HPLC. Хроматограмот на Слика 6 покажува дека примероците се добро одвоени со многу добра резолуција. HSA растворите беа анализирани со користење на брзина на проток од 100 μl/min, мобилна фаза од 70/30 ацетонитрил/вода и 0,1% TFA. Расцепувањето на HSA беше поделено на 17 врвови, како што е прикажано на хроматограмот (Слика 6), што одговара на 17 пептиди. Ефикасноста на одвојување на поединечните врвови од HSA хидролизатот беше пресметана и вредностите се прикажани во Табела 5.
Триптичките хидролизати на HSA беа одвоени на PMP колона (внатрешен дијаметар 100 x 1,8 mm), брзина на проток (100 μl/min), мобилна фаза 60/40 ацетонитрил/вода и 0,1% TFA.
каде што L е должината на колоната, η е вискозитетот на мобилната фаза, ΔP е задниот притисок на колоната, а u е линеарната брзина на мобилната фаза. Пропустливоста на PMP колоната беше 2,5 × 10–14 m2, брзината на проток беше 25 µl/min, беше користен 60/40 v/v. ACN/вода. Пропустливоста на PMP колоната (ID 100 × 1,8 mm) беше слична на онаа од нашата претходна студија Ref.34. Пропустливоста на колона исполнета со површински порозни честички е 1,7×10 0,6 µm, 2,5×10-14 m2 за честички од 5 µm43. Затоа, пропустливоста на PMP фазата е слична на пропустливоста на честичките од јадро-обвивка со големина од 5 μm.
каде што Wx е масата на колоната исполнета со хлороформ, Wy е масата на колоната исполнета со метанол, а ρ е густината на растворувачот. Густина на метанол (ρ = 0,7866) и хлороформ (ρ = 1,484). Вкупната порозност на колоната со честички силициум-C18 (100 × 1,8 mm ID)34 и нашата претходно проучувана колона C18-уреа31 беше 0,63 и 0,55, соодветно. Ова значи дека присуството на уреа лиганди ја намалува пропустливоста на стационарната фаза. Од друга страна, вкупната порозност на PMP колоната (внатрешен дијаметар 100 × 1,8 mm) е 0,60. PMP колоните се помалку пропустливи од колоните спакувани со честички силициум диоксид врзани за C18, бидејќи во стационарните фази од типот C18, C18 лигандите се прикачени на честичките силициум диоксид во линеарни синџири, додека во стационарните фази од типот полистирен околу честичките се формира релативно дебел полимер. слој А. Во типичен експеримент, порозноста на колоната се пресметува на следниов начин:
На сл. 7А, Б се прикажани Ван Димтеров дијаграми за PMP колона (идентификациски димензии 100 x 1,8 mm) и Ascentis Express RP-Amide колона (идентификациски димензии 100 x 1,8 mm) под исти услови на елуирање, 60/40 ACN/H2O и 0,1% TFA 20 µl/min до 800 µl/min на обете колони. Минималните вредности на HETP при оптимална брзина на проток (80 µl/min) беа 2,6 µm и 3,9 µm за PMP колоната и Ascentis Express RP-Amide колоната, соодветно. Вредностите на HETP покажуваат дека ефикасноста на сепарација на PMP колоната (идентификациски димензии 100 x 1,8 mm) е многу поголема од онаа на комерцијално достапната Ascentis Express RP-Amide колона (идентификациски димензии 100 x 1,8 mm). Графиконот на ван Демтер на сл. 7(A) покажува дека намалувањето на вредноста на N не е значително поголемо со зголемување на протокот во споредба со нашата претходна студија. Повисоката ефикасност на сепарација на PMP колоната (id 100 × 1,8 mm) во споредба со колоната Ascentis Express RP-Amide се базира на подобрената форма и големина на честичките и софистицираната постапка на пакување на колоната што се користи во тековната работа34.
(A) Ван Димтеров графикон (HETP наспроти линеарна брзина на мобилната фаза) добиен на PMP колона (id 100 x 1,8 mm) во 60/40 ACN/H2O со 0,1% TFA. (B) Ван Димтеров графикон (HETP наспроти линеарна брзина на мобилната фаза) добиен на Ascentis Express RP-Amide колона (id 100 x 1,8 mm) во 60/40 ACN/H2O со 0,1% TFA.
Поларна стационарна фаза од интеркалиран полистирен беше подготвена и оценета за одвојување на мешавина од синтетички пептиди и триптичен хидролизат на човечки серумски албумин (HSA) во високо-перформансна течна хроматографија. Хроматографските перформанси на PMP колоните за пептидни мешавини се одлични во однос на ефикасноста на одвојување и резолуцијата. Подобрената ефикасност на одвојување на PMP колоните се должи на неколку причини како што се големината на честичките од силициум диоксид и големината на порите, контролираната синтеза на стационарни фази и сложените материјали за пакување на колоните. Покрај високата ефикасност на одвојување, друга предност на оваа стационарна фаза е нискиот повратен притисок на колоната при високи брзини на проток. PMP колоните се високо репродуцибилни и можат да се користат за анализа на мешавини од пептиди и триптичко варење на различни протеини. Имаме намера да ја користиме оваа колона за одвојување на биоактивни соединенија од природни производи, екстракти од лековити растенија и печурки во течна хроматографија. Во иднина, PMP колоните ќе бидат оценети и за одвојување на протеини и моноклонални антитела.
Филд, ЈК, Еуерби, МР, Лау, Ј., Тегерсен, Х. и Петерсон, П. Истражување на системи за одвојување на пептиди со обратна фазна хроматографија, дел I: Развој на протокол за карактеризација на колони. Филд, ЈК, Еуерби, МР, Лау, Ј., Тегерсен, Х. и Петерсон, П. Истражување на системи за одвојување на пептиди со обратна фазна хроматографија, дел I: Развој на протокол за карактеризација на колони.Филд, ЈК, Оверби, МР, Лау, Ј., Тогерсен, Х. и Петерсон, П. Истражување на системи за одвојување на пептиди со обратнофазна хроматографија, Дел I: Развивање на протокол за карактеризација на колони. Филд, ЈК, Еуерби, МР, Лау, Ј., Тегерсен, Х. и Петерсон, П. Истражување на системи за одвојување на пептиди со обратна фазна хроматографија, дел I: Развој на протокол за карактеристики на колоната. Филд, ЈК, Еуерби, МР, Лау, Ј., Тегерсен, Х. и Петерсон, П. Истражување на системи за одвојување на пептиди со обратна фазна хроматографија, дел I: Развој на протокол за карактеристики на колоната.Филд, ЈК, Оверби, МР, Лау, Ј., Тогерсен, Х. и Петерсон, П. Истражување на системи за одвојување на пептиди со обратнофазна хроматографија, Дел I: Развивање на протокол за карактеризација на колони.J.色谱法。 1603，113-129. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019)".
Гомез, Б. и др. Методи за создавање подобрени активни пептиди за третман на заразни болести. Биотехнологија. Достигнувања 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Влиеге, П., Лисовски, В., Мартинез, Ј. и Крестчатиски, М. Синтетички терапевтски пептиди: Наука и пазар. Влиеге, П., Лисовски, В., Мартинез, Ј. и Крестчатиски, М. Синтетички терапевтски пептиди: Наука и пазар.Влиге П, Лисовски В, Мартинез Ј и Чрешчатиски М. Синтетички терапевтски пептиди: наука и пазар.Влиге П, Лисовски В, Мартинез Ј и Крешчацки М. Синтетички терапевтски пептиди: наука и пазар. откривање на лекови. Денес 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
Сие, Ф., Смит, РД и Шен, Ј. Напредна протеомска течна хроматографија. Сие, Ф., Смит, РД и Шен, Ј. Напредна протеомска течна хроматографија.Видете Ф., Смит РД и Шен Ју. Напредна протеомска течна хроматографија. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Напреден протеински состав 液相色谱.Видете Ф., Смит РД и Шен Ју. Напредна протеомска течна хроматографија.J. Chromatography. A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Напредната течна хроматографија-масена спектрометрија е способна да комбинира широко базирана метаболомика и протеомика. anus. Chim. Acta 1069, 89–97 (2019).
Чеснат, СМ и Салисбери, ЏЈ Улогата на UHPLC во фармацевтскиот развој. Чеснат, СМ и Салисбери, ЏЈ Улогата на UHPLC во фармацевтскиот развој.Чеснат, СМ и Салисбери, ЏЈ Улогата на UHPLC во фармацевтскиот развој.Чеснат, СМ и Салисбери, ЏЈ Улогата на UHPLC во развојот на лекови. J. Sept Science. 30(8), 1183–1190 (2007).
Ву, Н. и Клаусен, АМ Фундаментални и практични аспекти на течна хроматографија под ултра висок притисок за брзи сепарации. Ву, Н. и Клаусен, АМ Фундаментални и практични аспекти на течна хроматографија под ултра висок притисок за брзи сепарации.Ву, Н. и Клаузен, АМ Фундаментални и практични аспекти на течна хроматографија под висок притисок за брзо сепарирање. Ву, Н. и Клаузен, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 Ву, Н. и Клаусен, АМ Основни и практични аспекти на течна хроматографија под ултра висок притисок за брзо сепарирање.Ву, Н. и Клаузен, АМ Фундаментални и практични аспекти на течна хроматографија под висок притисок за брзо сепарирање.J. Sept. Science. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Рен, СА и Челичеф, П. Употреба на ултра-перформансна течна хроматографија во фармацевтскиот развој. Рен, СА и Челичеф, П. Употреба на ултра-перформансна течна хроматографија во фармацевтскиот развој.Рен, СА и Челишеф, П. Употреба на ултра-високо-перформансна течна хроматографија во фармацевтскиот развој. Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用。 Рен, СА и Челичеф, П.Рен, СА и Челишеф, П. Примена на ултра-перформансна течна хроматографија во развојот на лекови.J. Хроматографија. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Гу, Х. и др. Монолитен макропорозен хидрогел добиен од емулзија масло-во-вода со висока внатрешна фаза за ефикасно прочистување на ентеровирус 71. Хемиски проект. Весник 401, 126051 (2020).
Ши, Ј., Ксијанг, Р., Хорват, К. и Вилкинс, ЈА Улогата на течната хроматографија во протеомиката. Ши, Ј., Ксијанг, Р., Хорват, К. и Вилкинс, ЈА Улогата на течната хроматографија во протеомиката.Ши, Ј., Ксијанг, Р., Хорват, К. и Вилкинс, ЈА Улогата на течната хроматографија во протеомиката. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Ши, Ј., Ксијанг, Р., Хорват, Ц. и Вилкинс, ЈАШи, Ј., Ксијанг, Р., Хорват, К. и Вилкинс, ЈА Улогата на течната хроматографија во протеомиката.J. Хроматографија. A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Фекете, С., Вутеј, Ј.-Л. & Гиларме, Д. Нови трендови во обратнофазните течни хроматографски одвојувања на терапевтски пептиди и протеини: Теорија и примена. & Гиларме, Д. Нови трендови во обратнофазните течни хроматографски одвојувања на терапевтски пептиди и протеини: Теорија и примена. & Гиларме, Д. & Гиларме, Д. Нови трендови во одвојувањето на терапевтски пептиди и протеини со обратнофазна течна хроматографија: теорија и примена. & Гиларме, Д. и Гиларме, Д.и Гиларме, Д. Нови трендови во одвојувањето на терапевтски пептиди и протеини со обратна фазна течна хроматографија: теорија и примени.J. Pharm. Биомедицинска наука. анус. 69, 9–27 (2012).
Гилар, М., Оливова, П., Дејли, АЕ и Геблер, ЈЦ Дводимензионално раздвојување на пептиди со користење на RP-RP-HPLC систем со различна pH вредност во првата и втората димензија на раздвојување. Гилар, М., Оливова, П., Дејли, АЕ и Геблер, ЈЦ Дводимензионално раздвојување на пептиди со користење на RP-RP-HPLC систем со различна pH вредност во првата и втората димензија на раздвојување.Гилар М., Оливова П., Дали АЕ и Геблер ЈК Дводимензионално раздвојување на пептиди со користење на RP-RP-HPLC системот со различна pH вредност во првата и втората димензија на раздвојување.Гилар М., Оливова П., Дали АЕ и Геблер ЈК Дводимензионално раздвојување на пептиди со користење на различни pH вредности во првата и втората димензија на раздвојување со користење на RP-RP-HPLC системот. J. Sept Science. 28 (14), 1694–1703 (2005).
Фелити, С. и др. Истражување на преносот на маса и кинетичките карактеристики на високоперформансни хроматографски колони спакувани со целосно порозни и површински порозни C18 честички помали од 2 µm. J. Sept Science. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
Пиовесана, С. и др. Неодамнешни трендови и аналитички предизвици во изолацијата, идентификацијата и валидацијата на растителни биоактивни пептиди. анус. Creature anal. Chemical. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Милер, ЈБ и др. Протеомски пејзаж на царството на животот. Nature 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
Де Лука, К. и др. Пост-третман на терапевтски пептиди со препаративна течна хроматографија. Молекули (Базел, Швајцарија) 26(15), 4688 (2021).
Јанг, Ј. и Генг, Х. Мешана хроматографија и нејзини примени кај биополимери. Јанг, Ј. и Генг, Х. Мешана хроматографија и нејзини примени кај биополимери.Јанг, Ју. и Генг, Х. Мешана модна хроматографија и нејзина примена кај биополимери. Јанг, И. и Генг, Х. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 Јанг, Ј. и Генг, Х. Мешана модна хроматографија и нејзина примена во биополимери.Јанг, Ју. и Џин, Х. Мешана модна хроматографија и нејзина примена кај биополимери.J. Chromatography. A 1218(49), 8813–8825 (2011).