ചില LC ട്രബിൾഷൂട്ടിംഗ് വിഷയങ്ങൾ ഒരിക്കലും പഴയതല്ല, കാരണം LC പ്രാക്ടീസിൽ പ്രശ്നങ്ങളുണ്ട്, കാലക്രമേണ ഇൻസ്ട്രുമെന്റ് സാങ്കേതികവിദ്യ മെച്ചപ്പെടുമ്പോൾ പോലും. ഒരു LC സിസ്റ്റത്തിൽ പ്രശ്നങ്ങൾ ഉണ്ടാകാനും മോശം പീക്ക് ഷേപ്പിൽ അവസാനിക്കാനും നിരവധി മാർഗങ്ങളുണ്ട്. പീക്ക് ഷേപ്പുമായി ബന്ധപ്പെട്ട പ്രശ്നങ്ങൾ ഉണ്ടാകുമ്പോൾ, ഈ ഫലങ്ങൾക്കുള്ള സാധ്യമായ കാരണങ്ങളുടെ ഒരു ചെറിയ പട്ടിക ഞങ്ങളുടെ ട്രബിൾഷൂട്ടിംഗ് അനുഭവം ലളിതമാക്കാൻ സഹായിക്കുന്നു.
ഈ “LC ട്രബിൾഷൂട്ടിംഗ്” കോളം എഴുതുന്നതും എല്ലാ മാസവും വിഷയങ്ങളെക്കുറിച്ച് ചിന്തിക്കുന്നതും രസകരമായിരുന്നു, കാരണം ചില വിഷയങ്ങൾ ഒരിക്കലും ശൈലി വിട്ടുപോകുന്നില്ല. ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി ഗവേഷണ മേഖലയിൽ ചില വിഷയങ്ങളോ ആശയങ്ങളോ പുതിയതും മികച്ചതുമായ ആശയങ്ങളാൽ മാറ്റിസ്ഥാപിക്കപ്പെടുന്നതിനാൽ കാലഹരണപ്പെടും, ട്രബിൾഷൂട്ടിംഗ് മേഖലയിൽ, 1983-ൽ ഈ ജേണലിൽ (അന്നത്തെ LC ജേണലിൽ) ആദ്യത്തെ ട്രബിൾഷൂട്ടിംഗ് ലേഖനം പ്രത്യക്ഷപ്പെട്ടതുമുതൽ ചില വിഷയങ്ങൾ ഇപ്പോഴും പ്രസക്തമാണ്) 1983(1)-ൽ ചില വിഷയങ്ങൾ ഇപ്പോഴും പ്രസക്തമാണ്. കഴിഞ്ഞ കുറച്ച് വർഷങ്ങളായി, ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി (LC) ബാധിക്കുന്ന സമകാലിക പ്രവണതകളെക്കുറിച്ച് നിരവധി LC ട്രബിൾഷൂട്ടിംഗ് വിഭാഗങ്ങൾ ഞാൻ ശ്രദ്ധ കേന്ദ്രീകരിച്ചു (ഉദാഹരണത്തിന്, നിലനിർത്തലിലെ സമ്മർദ്ദത്തിന്റെ ഫലത്തെക്കുറിച്ചുള്ള നമ്മുടെ ധാരണയുടെ ആപേക്ഷിക താരതമ്യം [2] പുതിയ പുരോഗതികൾ) LC ഫലങ്ങളുടെ ഞങ്ങളുടെ വ്യാഖ്യാനവും ആധുനിക LC ഉപകരണങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ച് എങ്ങനെ ട്രബിൾഷൂട്ട് ചെയ്യാം. ഈ മാസത്തെ ഇൻസ്‌റ്റാൾമെന്റിൽ, 2021 ഡിസംബറിൽ ആരംഭിച്ച എന്റെ പരമ്പര (3) ഞാൻ തുടരുകയാണ്, അത് LC ട്രബിൾഷൂട്ടിംഗിന്റെ ചില “ജീവിത-മരണ” വിഷയങ്ങളിൽ ശ്രദ്ധ കേന്ദ്രീകരിച്ചു - ഏതൊരു ട്രബിൾഷൂട്ടറിനും മികച്ച ഘടകങ്ങൾ അത്യാവശ്യമാണ്, നമ്മൾ ഉപയോഗിക്കുന്ന സിസ്റ്റത്തിന്റെ പ്രായം പരിഗണിക്കാതെ തന്നെ. ഇതിന്റെ പ്രധാന വിഷയം പല ലബോറട്ടറികളിലും തൂക്കിയിട്ടിരിക്കുന്ന LCGC യുടെ പ്രശസ്തമായ "LC ട്രബിൾഷൂട്ടിംഗ് ഗൈഡ്" വാൾ ചാർട്ടിന് (4) പരമ്പര വളരെ പ്രസക്തമാണ്. ഈ പരമ്പരയുടെ മൂന്നാം ഭാഗത്തിനായി, പീക്ക് ആകൃതി അല്ലെങ്കിൽ പീക്ക് സ്വഭാവസവിശേഷതകളുമായി ബന്ധപ്പെട്ട പ്രശ്നങ്ങളിൽ ശ്രദ്ധ കേന്ദ്രീകരിക്കാൻ ഞാൻ തിരഞ്ഞെടുത്തു. അവിശ്വസനീയമാംവിധം, മോശം പീക്ക് ആകൃതിയുടെ 44 വ്യത്യസ്ത സാധ്യതയുള്ള കാരണങ്ങൾ വാൾ ചാർട്ട് പട്ടികപ്പെടുത്തുന്നു! ഈ പ്രശ്നങ്ങളെല്ലാം ഒരു ലേഖനത്തിൽ നമുക്ക് വിശദമായി പരിഗണിക്കാൻ കഴിയില്ല, അതിനാൽ വിഷയത്തെക്കുറിച്ചുള്ള ഈ ആദ്യ ഗഡുവിൽ, ഞാൻ ഏറ്റവും കൂടുതൽ കാണുന്ന ചിലതിൽ ഞാൻ ശ്രദ്ധ കേന്ദ്രീകരിക്കും. ചെറുപ്പക്കാരും പ്രായമായവരുമായ LC ഉപയോക്താക്കൾക്ക് ഈ പ്രധാനപ്പെട്ട വിഷയത്തിൽ ചില സഹായകരമായ നുറുങ്ങുകളും ഓർമ്മപ്പെടുത്തലുകളും കണ്ടെത്തുമെന്ന് ഞാൻ പ്രതീക്ഷിക്കുന്നു.
"എന്തും സാധ്യമാണ്" എന്ന രീതിയിലാണ് ഞാൻ പ്രശ്‌നപരിഹാര ചോദ്യങ്ങൾക്ക് ഉത്തരം നൽകുന്നത്. വ്യാഖ്യാനിക്കാൻ പ്രയാസമുള്ള നിരീക്ഷണങ്ങൾ പരിഗണിക്കുമ്പോൾ ഈ പ്രതികരണം എളുപ്പമാണെന്ന് തോന്നിയേക്കാം, പക്ഷേ പലപ്പോഴും അത് ഉചിതമാണെന്ന് ഞാൻ കരുതുന്നു. മോശം പീക്ക് ഷേപ്പിന് നിരവധി കാരണങ്ങളുണ്ടാകാമെന്നതിനാൽ, പ്രശ്‌നം എന്തായിരിക്കുമെന്ന് പരിഗണിക്കുമ്പോൾ തുറന്ന മനസ്സ് നിലനിർത്തേണ്ടത് പ്രധാനമാണ്, കൂടാതെ ഏറ്റവും സാധാരണമായ സാധ്യതകളിൽ ശ്രദ്ധ കേന്ദ്രീകരിച്ച് ഞങ്ങളുടെ പ്രശ്‌നപരിഹാര ശ്രമങ്ങൾ ആരംഭിക്കുന്നതിന് സാധ്യതയുള്ള കാരണങ്ങൾക്ക് മുൻഗണന നൽകാനും ഈ പോയിന്റ് വളരെ പ്രധാനമാണ്. സാധ്യമാണ്.
ഏതൊരു ട്രബിൾഷൂട്ടിംഗ് വ്യായാമത്തിലെയും ഒരു പ്രധാന ഘട്ടം - എന്നാൽ അത് കുറച്ചുകാണുന്നതായി ഞാൻ കരുതുന്നില്ല - പരിഹരിക്കേണ്ട ഒരു പ്രശ്നമുണ്ടെന്ന് തിരിച്ചറിയുക എന്നതാണ്. ഒരു പ്രശ്നമുണ്ടെന്ന് തിരിച്ചറിയുക എന്നതിനർത്ഥം പലപ്പോഴും ഉപകരണത്തിന് സംഭവിക്കുന്നത് സിദ്ധാന്തം, അനുഭവപരമായ അറിവ്, അനുഭവം എന്നിവയാൽ രൂപപ്പെടുത്തിയ നമ്മുടെ പ്രതീക്ഷകളിൽ നിന്ന് വ്യത്യസ്തമാണെന്ന് തിരിച്ചറിയുക എന്നതാണ് (5). ഇവിടെ പരാമർശിച്ചിരിക്കുന്ന "പീക്ക് ആകൃതി" യഥാർത്ഥത്തിൽ കൊടുമുടിയുടെ ആകൃതിയെ (സമമിതി, അസമമിതി, മിനുസമാർന്ന, മൃദുവായ, മുൻനിര എഡ്ജ്, ടെയിലിംഗ് മുതലായവ) മാത്രമല്ല, വീതിയെയും സൂചിപ്പിക്കുന്നു. യഥാർത്ഥ പീക്ക് ആകൃതിയെക്കുറിച്ചുള്ള ഞങ്ങളുടെ പ്രതീക്ഷകൾ ലളിതമാണ്. ചിത്രം 1a-യിൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ, മിക്ക കേസുകളിലും, ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് കൊടുമുടികൾ സമമിതിയും ഒരു ഗൗസിയൻ വിതരണത്തിന്റെ ആകൃതിയുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നതുമായിരിക്കണമെന്ന പാഠപുസ്തക പ്രതീക്ഷയെ സിദ്ധാന്തം (6) നന്നായി പിന്തുണയ്ക്കുന്നു. പീക്ക് വീതികളിൽ നിന്ന് നമ്മൾ പ്രതീക്ഷിക്കുന്നത് കൂടുതൽ സങ്കീർണ്ണമായ ഒരു പ്രശ്നമാണ്, ഭാവിയിലെ ഒരു ലേഖനത്തിൽ ഈ വിഷയം ഞങ്ങൾ ചർച്ച ചെയ്യും. ചിത്രം 1-ലെ മറ്റ് പീക്ക് ആകൃതികൾ നിരീക്ഷിക്കാവുന്ന മറ്റ് ചില സാധ്യതകൾ കാണിക്കുന്നു - മറ്റൊരു വിധത്തിൽ പറഞ്ഞാൽ, കാര്യങ്ങൾ തെറ്റായി പോകാനുള്ള ചില വഴികൾ. ഈ ഗഡുവിൽ ബാക്കിയുള്ള ഭാഗത്ത്, ഞങ്ങൾ ചർച്ച ചെയ്യാൻ സമയം ചെലവഴിക്കും. ഈ ആകൃതി തരങ്ങളിലേക്ക് നയിച്ചേക്കാവുന്ന സാഹചര്യങ്ങളുടെ ചില പ്രത്യേക ഉദാഹരണങ്ങൾ.
ചിലപ്പോൾ ക്രൊമാറ്റോഗ്രാമിൽ പീക്കുകൾ നിരീക്ഷിക്കപ്പെടില്ല, അവിടെ അവ ഒഴിവാക്കപ്പെടുമെന്ന് പ്രതീക്ഷിക്കുന്നു. മുകളിലുള്ള വാൾ ചാർട്ട് സൂചിപ്പിക്കുന്നത് ഒരു പീക്കിന്റെ അഭാവം (സാമ്പിളിൽ യഥാർത്ഥത്തിൽ ഡിറ്റക്ടർ പ്രതികരണത്തെ ശബ്ദത്തിന് മുകളിൽ കാണാൻ പര്യാപ്തമാക്കുന്ന സാന്ദ്രതയിൽ ടാർഗെറ്റ് അനലൈറ്റ് അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു എന്ന് കരുതുക) സാധാരണയായി ചില ഉപകരണ പ്രശ്‌നങ്ങളുമായോ തെറ്റായ മൊബൈൽ ഫേസ് അവസ്ഥകളുമായോ ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു (എല്ലാം നിരീക്ഷിച്ചാൽ). പീക്കുകൾ, സാധാരണയായി വളരെ "ദുർബലമാണ്"). ഈ വിഭാഗത്തിലെ സാധ്യതയുള്ള പ്രശ്‌നങ്ങളുടെയും പരിഹാരങ്ങളുടെയും ഒരു ചെറിയ പട്ടിക പട്ടിക I-ൽ കാണാം.
മുകളിൽ സൂചിപ്പിച്ചതുപോലെ, ശ്രദ്ധിക്കുന്നതിനും പരിഹരിക്കുന്നതിനും മുമ്പ് എത്രത്തോളം പീക്ക് ബ്രേഡനിംഗ് സഹിക്കണം എന്ന ചോദ്യം ഒരു സങ്കീർണ്ണമായ വിഷയമാണ്, ഭാവിയിലെ ഒരു ലേഖനത്തിൽ ഞാൻ അത് ചർച്ച ചെയ്യും. എന്റെ അനുഭവം, ഗണ്യമായ പീക്ക് ബ്രേഡനിംഗ് പലപ്പോഴും പീക്ക് ആകൃതിയിൽ കാര്യമായ മാറ്റത്തോടൊപ്പമുണ്ടാകും, കൂടാതെ പീക്ക് ടെയിലിംഗ് പ്രീ-പീക്ക് അല്ലെങ്കിൽ സ്പ്ലിറ്റിംഗിനെ അപേക്ഷിച്ച് കൂടുതൽ സാധാരണമാണ്. എന്നിരുന്നാലും, നാമമാത്രമായ സമമിതി കൊടുമുടികളും വിശാലമാക്കപ്പെടുന്നു, ഇത് കുറച്ച് വ്യത്യസ്ത കാരണങ്ങളാൽ സംഭവിക്കാം:
ഈ വിഷയങ്ങൾ ഓരോന്നും ട്രബിൾഷൂട്ടിംഗ് എൽസിയുടെ മുൻ ലക്കങ്ങളിൽ വിശദമായി ചർച്ച ചെയ്തിട്ടുണ്ട്, ഈ വിഷയങ്ങളിൽ താൽപ്പര്യമുള്ള വായനക്കാർക്ക് ഈ പ്രശ്‌നങ്ങളുടെ മൂലകാരണങ്ങളെയും സാധ്യമായ പരിഹാരങ്ങളെയും കുറിച്ചുള്ള വിവരങ്ങൾക്ക് ഈ മുൻ ലേഖനങ്ങൾ പരിശോധിക്കാവുന്നതാണ്. കൂടുതൽ വിശദാംശങ്ങൾ.
പീക്ക് ടെയിലിംഗ്, പീക്ക് ഫ്രണ്ടിംഗ്, സ്പ്ലിറ്റിംഗ് എന്നിവയെല്ലാം രാസപരമോ ഭൗതികമോ ആയ പ്രതിഭാസങ്ങൾ മൂലമാകാം, കൂടാതെ നമ്മൾ ഒരു രാസപരമോ ഭൗതികമോ ആയ പ്രശ്നം കൈകാര്യം ചെയ്യുന്നുണ്ടോ എന്നതിനെ ആശ്രയിച്ച് ഈ പ്രശ്നങ്ങൾക്കുള്ള സാധ്യതയുള്ള പരിഹാരങ്ങളുടെ പട്ടിക വ്യാപകമായി വ്യത്യാസപ്പെടുന്നു. പലപ്പോഴും, ഒരു ക്രോമാറ്റോഗ്രാമിലെ വ്യത്യസ്ത കൊടുമുടികളെ താരതമ്യം ചെയ്യുന്നതിലൂടെ, കുറ്റവാളി ഏതാണെന്ന് നിങ്ങൾക്ക് പ്രധാന സൂചനകൾ കണ്ടെത്താൻ കഴിയും. ഒരു ക്രോമാറ്റോഗ്രാമിലെ എല്ലാ കൊടുമുടികളും സമാനമായ ആകൃതികൾ പ്രകടിപ്പിക്കുന്നുണ്ടെങ്കിൽ, കാരണം മിക്കവാറും ഭൗതികമായിരിക്കില്ല. ഒന്നോ അതിലധികമോ കൊടുമുടികൾ മാത്രമേ ബാധിച്ചിട്ടുള്ളൂവെങ്കിലും ബാക്കിയുള്ളവ നന്നായി കാണപ്പെടുന്നുണ്ടെങ്കിൽ, കാരണം മിക്കവാറും രാസവസ്തുവായിരിക്കാം.
പീക്ക് ടെയിലിംഗിന്റെ രാസ കാരണങ്ങൾ വളരെ സങ്കീർണ്ണമാണ്, ഇവിടെ സംക്ഷിപ്തമായി ചർച്ച ചെയ്യാൻ കഴിയില്ല. കൂടുതൽ ആഴത്തിലുള്ള ചർച്ചയ്ക്കായി താൽപ്പര്യമുള്ള വായനക്കാരനെ “LC ട്രബിൾഷൂട്ടിംഗ്” എന്ന പുതിയ ലക്കത്തിലേക്ക് റഫർ ചെയ്യുന്നു (10). എന്നിരുന്നാലും, എളുപ്പത്തിൽ ശ്രമിക്കാവുന്ന ഒരു കാര്യം, കുത്തിവച്ച അനലൈറ്റിന്റെ പിണ്ഡം കുറയ്ക്കുകയും പീക്ക് ആകൃതി മെച്ചപ്പെടുന്നുണ്ടോ എന്ന് നോക്കുകയും ചെയ്യുക എന്നതാണ്. അങ്ങനെയാണെങ്കിൽ, പ്രശ്നം “മാസ് ഓവർലോഡ്” ആണെന്നതിന്റെ ഒരു നല്ല സൂചനയാണിത്. ഈ സാഹചര്യത്തിൽ, ചെറിയ അനലൈറ്റ് പിണ്ഡങ്ങൾ കുത്തിവയ്ക്കുന്നതിലേക്ക് രീതി പരിമിതപ്പെടുത്തണം, അല്ലെങ്കിൽ വലിയ പിണ്ഡങ്ങൾ കുത്തിവച്ചാലും നല്ല പീക്ക് ആകൃതികൾ ലഭിക്കുന്നതിന് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് അവസ്ഥകൾ മാറ്റണം.
പീക്ക് ടെയിലിംഗിന് നിരവധി ഭൗതിക കാരണങ്ങളുണ്ട്. സാധ്യതകളെക്കുറിച്ചുള്ള വിശദമായ ചർച്ചയിൽ താൽപ്പര്യമുള്ള വായനക്കാർക്ക് "LC ട്രബിൾഷൂട്ടിംഗ്" (11) എന്ന പുതിയ ലക്കത്തിലേക്ക് റഫർ ചെയ്യാം. പീക്ക് ടെയിലിംഗിന്റെ ഏറ്റവും സാധാരണമായ ഭൗതിക കാരണങ്ങളിലൊന്ന് ഇൻജക്ടറും ഡിറ്റക്ടറും തമ്മിലുള്ള ഒരു പോയിന്റിലെ മോശം കണക്ഷനാണ് (12). ഏതാനും ആഴ്ചകൾക്ക് മുമ്പ് എന്റെ ലാബിൽ നിന്ന് ലഭിച്ച ഒരു അങ്ങേയറ്റത്തെ ഉദാഹരണം ചിത്രം 1d-യിൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു. ഈ സാഹചര്യത്തിൽ, മുമ്പ് ഉപയോഗിച്ചിട്ടില്ലാത്ത ഒരു പുതിയ ഇഞ്ചക്ഷൻ വാൽവ് ഉള്ള ഒരു സിസ്റ്റം ഞങ്ങൾ നിർമ്മിച്ചു, കൂടാതെ ഒരു സ്റ്റെയിൻലെസ് സ്റ്റീൽ കാപ്പിലറിയിൽ വാർത്തെടുത്ത ഒരു ഫെറൂൾ ഉള്ള ഒരു ചെറിയ വോളിയം ഇഞ്ചക്ഷൻ ലൂപ്പ് ഇൻസ്റ്റാൾ ചെയ്തു. ചില പ്രാരംഭ ട്രബിൾഷൂട്ടിംഗ് പരീക്ഷണങ്ങൾക്ക് ശേഷം, ഇഞ്ചക്ഷൻ വാൽവ് സ്റ്റേറ്ററിലെ പോർട്ട് ഡെപ്ത് നമ്മൾ ഉപയോഗിച്ചിരുന്നതിനേക്കാൾ വളരെ ആഴമുള്ളതാണെന്ന് ഞങ്ങൾ മനസ്സിലാക്കി, ഇത് പോർട്ടിന്റെ അടിയിൽ ഒരു വലിയ ഡെഡ് വോളിയത്തിന് കാരണമായി. ഇഞ്ചക്ഷൻ ലൂപ്പ് മറ്റൊരു ട്യൂബ് ഉപയോഗിച്ച് മാറ്റിസ്ഥാപിക്കുന്നതിലൂടെ ഈ പ്രശ്നം എളുപ്പത്തിൽ പരിഹരിക്കാനാകും, പോർട്ടിന്റെ അടിയിലുള്ള ഡെഡ് വോളിയം ഇല്ലാതാക്കാൻ നമുക്ക് ഫെറൂളിനെ ശരിയായ സ്ഥാനത്തേക്ക് ക്രമീകരിക്കാം.
ചിത്രം 1e-ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലുള്ള പീക്ക് ഫ്രണ്ടുകൾ ഭൗതികമോ രാസപരമോ ആയ പ്രശ്നങ്ങൾ മൂലവും ഉണ്ടാകാം. ലീഡിംഗ് എഡ്ജിന്റെ ഒരു സാധാരണ ഭൗതിക കാരണം, കോളത്തിന്റെ കണികാ കിടക്ക നന്നായി പായ്ക്ക് ചെയ്തിട്ടില്ല എന്നതാണ്, അല്ലെങ്കിൽ കണികകൾ കാലക്രമേണ പുനഃസംഘടിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നു എന്നതാണ്. ഈ ഭൗതിക പ്രതിഭാസം മൂലമുണ്ടാകുന്ന പീക്ക് ടെയിലിംഗ് പോലെ, ഇത് പരിഹരിക്കാനുള്ള ഏറ്റവും നല്ല മാർഗം കോളം മാറ്റിസ്ഥാപിച്ച് മുന്നോട്ട് പോകുക എന്നതാണ്. അടിസ്ഥാനപരമായി, രാസ ഉത്ഭവമുള്ള ലീഡിംഗ് എഡ്ജ് പീക്ക് ആകൃതികൾ പലപ്പോഴും നമ്മൾ "നോൺ-ലീനിയർ" നിലനിർത്തൽ അവസ്ഥകൾ എന്ന് വിളിക്കുന്നതിൽ നിന്നാണ് ഉണ്ടാകുന്നത്. ആദർശ (രേഖീയ) സാഹചര്യങ്ങളിൽ, സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടം (അതിനാൽ, നിലനിർത്തൽ ഘടകം) നിലനിർത്തുന്ന അനലൈറ്റിന്റെ അളവ് കോളത്തിലെ അനലൈറ്റിന്റെ സാന്ദ്രതയുമായി രേഖീയമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു. ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക്കലായി, ഇതിനർത്ഥം കോളത്തിലേക്ക് കുത്തിവയ്ക്കുന്ന അനലൈറ്റിന്റെ പിണ്ഡം വർദ്ധിക്കുന്നതിനനുസരിച്ച്, കൊടുമുടി ഉയരമുള്ളതായിത്തീരുന്നു, പക്ഷേ വിശാലമല്ല എന്നാണ്. നിലനിർത്തൽ സ്വഭാവം രേഖീയമല്ലാത്തപ്പോൾ ഈ ബന്ധം തകരുന്നു, കൂടുതൽ പിണ്ഡം കുത്തിവയ്ക്കുമ്പോൾ കൊടുമുടികൾ ഉയരമുള്ളതായി മാത്രമല്ല, വിശാലമാവുകയും ചെയ്യുന്നു. കൂടാതെ, നോൺലീനിയർ ആകൃതികൾ ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് കൊടുമുടികളുടെ ആകൃതി നിർണ്ണയിക്കുന്നു, അതിന്റെ ഫലമായി ലീഡിംഗ് അല്ലെങ്കിൽ ട്രെയിലിംഗ് അരികുകൾ ഉണ്ടാകുന്നു. മാസ് ഓവർലോഡ് പോലെ പീക്ക് ടെയിലിംഗിന് കാരണമാകുന്ന (10), നോൺലീനിയർ റിട്ടൻഷൻ മൂലമുണ്ടാകുന്ന പീക്ക് ലീഡിംഗ്, ഇൻജക്റ്റ് ചെയ്ത അനലൈറ്റ് മാസ് കുറയ്ക്കുന്നതിലൂടെയും നിർണ്ണയിക്കാൻ കഴിയും. പീക്ക് ആകൃതി മെച്ചപ്പെട്ടാൽ, ലീഡിംഗ് എഡ്ജിന് കാരണമാകുന്ന ഇഞ്ചക്ഷൻ ഗുണനിലവാരം കവിയാത്ത രീതിയിൽ രീതി പരിഷ്കരിക്കണം, അല്ലെങ്കിൽ ഈ സ്വഭാവം കുറയ്ക്കുന്നതിന് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് അവസ്ഥകൾ മാറ്റണം.
ചിലപ്പോൾ ചിത്രം 1f-ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ, ഒരു "സ്പ്ലിറ്റ്" പീക്ക് പോലെ തോന്നുന്നത് നമ്മൾ നിരീക്ഷിക്കുന്നു. ഈ പ്രശ്നം പരിഹരിക്കുന്നതിനുള്ള ആദ്യപടി, പീക്ക് ആകൃതി ഭാഗിക കോ-എല്യൂഷൻ മൂലമാണോ എന്ന് നിർണ്ണയിക്കുക എന്നതാണ് (അതായത്, രണ്ട് വ്യത്യസ്തവും എന്നാൽ അടുത്ത് എല്യൂട്ടിംഗ് സംയുക്തങ്ങളുടെ സാന്നിധ്യവും). യഥാർത്ഥത്തിൽ രണ്ട് വ്യത്യസ്ത അനലൈറ്റുകൾ പരസ്പരം അടുത്ത് എല്യൂട്ടിംഗ് ചെയ്യുന്നുണ്ടെങ്കിൽ, അവയുടെ റെസല്യൂഷൻ മെച്ചപ്പെടുത്തുക എന്നതാണ് (ഉദാഹരണത്തിന്, സെലക്റ്റിവിറ്റി, നിലനിർത്തൽ അല്ലെങ്കിൽ പ്ലേറ്റ് എണ്ണം വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിലൂടെ), കൂടാതെ വ്യക്തമായ "സ്പ്ലിറ്റ്" പീക്കുകൾ ഭൗതികവുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു. പ്രകടനത്തിന് നിരയുമായി തന്നെ യാതൊരു ബന്ധവുമില്ല. പലപ്പോഴും, ഈ തീരുമാനത്തിന്റെ ഏറ്റവും പ്രധാനപ്പെട്ട സൂചന ക്രോമാറ്റോഗ്രാമിലെ എല്ലാ കൊടുമുടികളും സ്പ്ലിറ്റ് ആകൃതികൾ പ്രദർശിപ്പിക്കുന്നുണ്ടോ, അതോ ഒന്നോ രണ്ടോ മാത്രമാണോ എന്നതാണ്. ഇത് ഒന്നോ രണ്ടോ മാത്രമാണെങ്കിൽ, അത് ഒരുപക്ഷേ ഒരു കോ-എല്യൂഷൻ പ്രശ്നമായിരിക്കാം; എല്ലാ കൊടുമുടികളും വിഭജിച്ചിട്ടുണ്ടെങ്കിൽ, അത് ഒരുപക്ഷേ ഒരു ഭൗതിക പ്രശ്നമാണ്, മിക്കവാറും നിരയുമായി തന്നെ ബന്ധപ്പെട്ടതാണ്.
കോളത്തിന്റെ ഭൗതിക സവിശേഷതകളുമായി ബന്ധപ്പെട്ട സ്പ്ലിറ്റ് പീക്കുകൾ സാധാരണയായി ഭാഗികമായി തടയപ്പെട്ട ഇൻലെറ്റ് അല്ലെങ്കിൽ ഔട്ട്‌ലെറ്റ് ഫ്രിറ്റുകൾ അല്ലെങ്കിൽ കോളത്തിലെ കണികകളുടെ പുനഃസംഘടന മൂലമാണ് ഉണ്ടാകുന്നത്, ഇത് കോളം ചാനൽ രൂപീകരണത്തിന്റെ ചില ഭാഗങ്ങളിൽ മൊബൈൽ ഘട്ടത്തേക്കാൾ വേഗത്തിൽ മൊബൈൽ ഘട്ടം ഒഴുകാൻ അനുവദിക്കുന്നു. മറ്റ് പ്രദേശങ്ങളിൽ (11). കോളത്തിലൂടെയുള്ള ഒഴുക്ക് വിപരീതമാക്കുന്നതിലൂടെ ഭാഗികമായി അടഞ്ഞുപോയ ഫ്രിറ്റ് ചിലപ്പോൾ മായ്‌ക്കാൻ കഴിയും; എന്നിരുന്നാലും, എന്റെ അനുഭവത്തിൽ, ഇത് സാധാരണയായി ഒരു ദീർഘകാല പരിഹാരമല്ല, മറിച്ച് ഒരു ഹ്രസ്വകാല പരിഹാരമാണ്. കോളത്തിനുള്ളിൽ കണികകൾ വീണ്ടും സംയോജിച്ചാൽ ആധുനിക കോളങ്ങളുടെ കാര്യത്തിൽ ഇത് പലപ്പോഴും മാരകമാണ്. ഈ ഘട്ടത്തിൽ, കോളം മാറ്റിസ്ഥാപിച്ച് തുടരുന്നതാണ് നല്ലത്.
ചിത്രം 1g-യിലെ പീക്ക്, എന്റെ സ്വന്തം ലാബിൽ അടുത്തിടെ ഉണ്ടായ ഒരു സംഭവത്തിൽ നിന്നും, സാധാരണയായി സിഗ്നൽ വളരെ ഉയർന്നതാണെന്നും അത് പ്രതികരണ ശ്രേണിയുടെ ഉയർന്ന അറ്റത്ത് എത്തിയിരിക്കുന്നുവെന്നും സൂചിപ്പിക്കുന്നു. ഒപ്റ്റിക്കൽ അബ്സോർബൻസ് ഡിറ്റക്ടറുകൾക്ക് (ഈ സാഹചര്യത്തിൽ UV-vis), അനലൈറ്റ് സാന്ദ്രത വളരെ ഉയർന്നതായിരിക്കുമ്പോൾ, ഡിറ്റക്ടർ ഫ്ലോ സെല്ലിലൂടെ കടന്നുപോകുന്ന പ്രകാശത്തിന്റെ ഭൂരിഭാഗവും അനലൈറ്റ് ആഗിരണം ചെയ്യുന്നു, ഇത് വളരെ കുറച്ച് പ്രകാശം മാത്രമേ കണ്ടെത്താനാകൂ. ഈ സാഹചര്യങ്ങളിൽ, ഫോട്ടോഡിറ്റക്ടറിൽ നിന്നുള്ള വൈദ്യുത സിഗ്നലിനെ വിവിധ ശബ്ദ സ്രോതസ്സുകൾ വളരെയധികം സ്വാധീനിക്കുന്നു, ഉദാഹരണത്തിന്, സ്ട്രേ ലൈറ്റ്, "ഡാർക്ക് കറന്റ്", ഇത് സിഗ്നലിനെ കാഴ്ചയിൽ വളരെ "അവ്യക്ത"മാക്കുകയും അനലൈറ്റ് സാന്ദ്രതയിൽ നിന്ന് സ്വതന്ത്രമാക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. ഇത് സംഭവിക്കുമ്പോൾ, അനലൈറ്റിന്റെ ഇഞ്ചക്ഷൻ വോളിയം കുറയ്ക്കുന്നതിലൂടെ - ഇഞ്ചക്ഷൻ വോളിയം കുറയ്ക്കുന്നതിലൂടെയോ, സാമ്പിൾ നേർപ്പിക്കുന്നതിലൂടെയോ, അല്ലെങ്കിൽ രണ്ടും ചെയ്തുകൊണ്ട് - പ്രശ്നം പലപ്പോഴും എളുപ്പത്തിൽ പരിഹരിക്കാൻ കഴിയും.
ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി സ്കൂളിൽ, സാമ്പിളിലെ അനലൈറ്റ് സാന്ദ്രതയുടെ സൂചകമായി ഞങ്ങൾ ഡിറ്റക്ടർ സിഗ്നൽ (അതായത്, ക്രോമാറ്റോഗ്രാമിലെ y-ആക്സിസ്) ഉപയോഗിക്കുന്നു. അതിനാൽ പൂജ്യത്തിന് താഴെയുള്ള സിഗ്നലുള്ള ഒരു ക്രോമാറ്റോഗ്രാം കാണുന്നത് വിചിത്രമായി തോന്നുന്നു, കാരണം ഇത് നെഗറ്റീവ് അനലൈറ്റ് സാന്ദ്രതയെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു എന്നതാണ് ലളിതമായ വ്യാഖ്യാനം - തീർച്ചയായും ഇത് ഭൗതികമായി സാധ്യമല്ല. എന്റെ അനുഭവത്തിൽ, ഒപ്റ്റിക്കൽ അബ്സോർബൻസ് ഡിറ്റക്ടറുകൾ (ഉദാഹരണത്തിന്, UV-vis) ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ നെഗറ്റീവ് കൊടുമുടികൾ മിക്കപ്പോഴും നിരീക്ഷിക്കപ്പെടുന്നു.
ഈ സാഹചര്യത്തിൽ, നെഗറ്റീവ് പീക്ക് എന്നാൽ കോളത്തിൽ നിന്ന് പുറത്തുവരുന്ന തന്മാത്രകൾ പീക്കിന് തൊട്ടുമുമ്പും ശേഷവും മൊബൈൽ ഘട്ടത്തേക്കാൾ കുറച്ച് പ്രകാശം ആഗിരണം ചെയ്യുന്നു എന്നാണ്. ഉദാഹരണത്തിന്, താരതമ്യേന കുറഞ്ഞ ഡിറ്റക്ഷൻ തരംഗദൈർഘ്യങ്ങളും (<230 nm) ഈ തരംഗദൈർഘ്യങ്ങളിൽ പ്രകാശത്തിന്റെ ഭൂരിഭാഗവും ആഗിരണം ചെയ്യുന്ന മൊബൈൽ ഘട്ട അഡിറ്റീവുകളും ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ ഇത് സംഭവിക്കാം. അത്തരം അഡിറ്റീവുകൾ മെഥനോൾ പോലുള്ള മൊബൈൽ ഘട്ട ലായക ഘടകങ്ങളോ അസറ്റേറ്റ് അല്ലെങ്കിൽ ഫോർമാറ്റ് പോലുള്ള ബഫർ ഘടകങ്ങളോ ആകാം. ഒരു കാലിബ്രേഷൻ കർവ് തയ്യാറാക്കുന്നതിനും കൃത്യമായ അളവ് വിവരങ്ങൾ നേടുന്നതിനും ഒരാൾക്ക് യഥാർത്ഥത്തിൽ നെഗറ്റീവ് പീക്കുകൾ ഉപയോഗിക്കാം, അതിനാൽ അവ സ്വയം ഒഴിവാക്കാൻ ഒരു അടിസ്ഥാന കാരണവുമില്ല (ഈ രീതിയെ ചിലപ്പോൾ "പരോക്ഷ UV കണ്ടെത്തൽ" എന്ന് വിളിക്കുന്നു) (13). എന്നിരുന്നാലും, ആഗിരണം കണ്ടെത്തലിന്റെ കാര്യത്തിൽ, നെഗറ്റീവ് പീക്കുകൾ പൂർണ്ണമായും ഒഴിവാക്കാൻ ഞങ്ങൾ ആഗ്രഹിക്കുന്നുവെങ്കിൽ, അനലൈറ്റ് മൊബൈൽ ഘട്ടത്തേക്കാൾ കൂടുതൽ ആഗിരണം ചെയ്യുന്ന തരത്തിൽ വ്യത്യസ്തമായ ഒരു ഡിറ്റക്ഷൻ തരംഗദൈർഘ്യം ഉപയോഗിക്കുക എന്നതാണ് ഏറ്റവും നല്ല പരിഹാരം, അല്ലെങ്കിൽ അനലൈറ്റുകളേക്കാൾ കുറച്ച് പ്രകാശം ആഗിരണം ചെയ്യുന്ന തരത്തിൽ മൊബൈൽ ഘട്ടത്തിന്റെ ഘടന മാറ്റുക എന്നതാണ്.
റിഫ്രാക്റ്റീവ് ഇൻഡക്സ് (RI) ഡിറ്റക്ഷൻ ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ, ലായക മാട്രിക്സ് പോലുള്ള സാമ്പിളിലെ അനലൈറ്റ് ഒഴികെയുള്ള ഘടകങ്ങളുടെ റിഫ്രാക്റ്റീവ് സൂചിക മൊബൈൽ ഫേസിന്റെ റിഫ്രാക്റ്റീവ് സൂചികയിൽ നിന്ന് വ്യത്യസ്തമാകുമ്പോൾ നെഗറ്റീവ് പീക്കുകൾ ദൃശ്യമാകാം. UV-vis ഡിറ്റക്ഷനിലും ഇത് സംഭവിക്കുന്നു, എന്നാൽ RI ഡിറ്റക്ഷനുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ ഈ പ്രഭാവം ദുർബലമാകും. രണ്ട് സാഹചര്യങ്ങളിലും, സാമ്പിൾ മാട്രിക്സിന്റെ ഘടന മൊബൈൽ ഫേസിന്റെ ഘടനയുമായി കൂടുതൽ അടുത്ത് പൊരുത്തപ്പെടുത്തുന്നതിലൂടെ നെഗറ്റീവ് പീക്കുകൾ കുറയ്ക്കാൻ കഴിയും.
LC ട്രബിൾഷൂട്ടിംഗിന്റെ അടിസ്ഥാന വിഷയത്തെക്കുറിച്ചുള്ള മൂന്നാം ഭാഗത്തിൽ, നിരീക്ഷിച്ച പീക്ക് ആകൃതി പ്രതീക്ഷിക്കുന്നതോ സാധാരണമോ ആയ പീക്ക് ആകൃതിയിൽ നിന്ന് വ്യത്യസ്തമായ സാഹചര്യങ്ങളെക്കുറിച്ച് ഞാൻ ചർച്ച ചെയ്തു. അത്തരം പ്രശ്നങ്ങളുടെ ഫലപ്രദമായ ട്രബിൾഷൂട്ടിംഗ് ആരംഭിക്കുന്നത് പ്രതീക്ഷിക്കുന്ന പീക്ക് ആകൃതികളെക്കുറിച്ചുള്ള അറിവോടെയാണ് (സിദ്ധാന്തത്തെയോ നിലവിലുള്ള രീതികളുമായുള്ള മുൻ പരിചയത്തെയോ അടിസ്ഥാനമാക്കി), അതിനാൽ ഈ പ്രതീക്ഷകളിൽ നിന്നുള്ള വ്യതിയാനങ്ങൾ വ്യക്തമാണ്. പീക്ക് ആകൃതി പ്രശ്നങ്ങൾക്ക് നിരവധി വ്യത്യസ്ത സാധ്യതയുള്ള കാരണങ്ങളുണ്ട് (വളരെ വീതിയുള്ളത്, ടെയിലിംഗ്, ലീഡിംഗ് എഡ്ജ് മുതലായവ). ഈ ഭാഗത്തിൽ, ഞാൻ മിക്കപ്പോഴും കാണുന്ന ചില കാരണങ്ങൾ ഞാൻ വിശദമായി ചർച്ച ചെയ്യുന്നു. ഈ വിശദാംശങ്ങൾ അറിയുന്നത് ട്രബിൾഷൂട്ടിംഗ് ആരംഭിക്കുന്നതിന് ഒരു നല്ല സ്ഥലം നൽകുന്നു, പക്ഷേ എല്ലാ സാധ്യതകളും പിടിച്ചെടുക്കുന്നില്ല. കാരണങ്ങളുടെയും പരിഹാരങ്ങളുടെയും കൂടുതൽ ആഴത്തിലുള്ള പട്ടികയിൽ താൽപ്പര്യമുള്ള വായനക്കാർക്ക് LCGC “LC ട്രബിൾഷൂട്ടിംഗ് ഗൈഡ്” വാൾ ചാർട്ട് റഫർ ചെയ്യാം.
(4) LCGC “LC ട്രബിൾഷൂട്ടിംഗ് ഗൈഡ്” വാൾ ചാർട്ട്. https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) എ. ഫെലിംഗർ, ഡാറ്റ അനാലിസിസ് ആൻഡ് സിഗ്നൽ പ്രോസസ്സിംഗ് ഇൻ ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി (എൽസെവിയർ, ന്യൂയോർക്ക്, NY, 1998), പേജ് 43-96.
(8) വഹാബ് എംഎഫ്, ദാസ്ഗുപ്ത പികെ, കാഡ്ജോ എഎഫ്, ആംസ്ട്രോങ് ഡിഡബ്ല്യു, അനൽ.ചിം.ജേണൽ.റവ. 907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.