Nature.com സന്ദർശിച്ചതിന് നന്ദി. നിങ്ങൾ ഉപയോഗിക്കുന്ന ബ്രൗസർ പതിപ്പിന് CSS-ന് പരിമിതമായ പിന്തുണയേ ഉള്ളൂ. മികച്ച അനുഭവത്തിനായി, നിങ്ങൾ ഒരു അപ്ഡേറ്റ് ചെയ്ത ബ്രൗസർ ഉപയോഗിക്കാൻ ഞങ്ങൾ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു (അല്ലെങ്കിൽ ഇന്റർനെറ്റ് എക്സ്പ്ലോററിൽ കോംപാറ്റിബിലിറ്റി മോഡ് ഓഫ് ചെയ്യുക). അതേസമയം, തുടർച്ചയായ പിന്തുണ ഉറപ്പാക്കാൻ, സ്റ്റൈലുകളും ജാവാസ്ക്രിപ്റ്റും ഇല്ലാതെ ഞങ്ങൾ സൈറ്റ് പ്രദർശിപ്പിക്കും.
മാക്രോപോറസ് കണികകൾ ലഭിക്കുന്നതിനായി സോൾ-ജെൽ രീതി ഉപയോഗിച്ച് പോറസ് സിലിക്ക കണികകൾ ചില പരിഷ്കാരങ്ങളോടെ തയ്യാറാക്കി. പോളിസ്റ്റൈറൈൻ (PMP) സ്റ്റേഷണറി ഫേസിന്റെ N-ഫീനൈൽമലൈമൈഡ് ഇന്റർകലേഷൻ തയ്യാറാക്കുന്നതിനായി N-ഫീനൈൽമലൈമൈഡ്-മെഥൈൽവിനൈലിസോസയനേറ്റ് (PMI), സ്റ്റൈറീൻ എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് റിവേഴ്‌സിബിൾ അഡീഷൻ ഫ്രാഗ്മെന്റേഷൻ ചെയിൻ ട്രാൻസ്ഫർ (RAFT) പോളിമറൈസേഷൻ വഴി ഈ കണികകളെ വേർതിരിച്ചെടുത്തു. ഇടുങ്ങിയ ബോർ സ്റ്റെയിൻലെസ് സ്റ്റീൽ നിരകൾ (100 × 1.8 mm id) സ്ലറി പാക്കിംഗ് വഴി പായ്ക്ക് ചെയ്തു. അഞ്ച് പെപ്റ്റൈഡുകൾ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, lucine enkephalin) ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് പ്രകടനം) അടങ്ങിയ പെപ്റ്റൈഡ് മിശ്രിതത്തിന്റെ PMP കോളം വേർതിരിക്കൽ വിലയിരുത്തി, മനുഷ്യ സെറം ആൽബുമിന്റെ (HAS) ട്രിപ്സിൻ ദഹനം. ഒപ്റ്റിമൽ എല്യൂഷൻ സാഹചര്യങ്ങളിൽ, പെപ്റ്റൈഡ് മിശ്രിതത്തിന്റെ സൈദ്ധാന്തിക പ്ലേറ്റ് എണ്ണം 280,000 പ്ലേറ്റുകൾ/m² വരെ ഉയർന്നതാണ്. വേർതിരിക്കൽ പ്രകടനവുമായി താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ വാണിജ്യ അസെന്റിസ് എക്സ്പ്രസ് ആർപി-അമൈഡ് കോളം ഉള്ള വികസിപ്പിച്ച കോളത്തിന്റെ, വേർതിരിക്കൽ കാര്യക്ഷമതയിലും റെസല്യൂഷനിലും പിഎംപി കോളത്തിന്റെ വേർതിരിക്കൽ പ്രകടനം വാണിജ്യ കോളത്തേക്കാൾ മികച്ചതാണെന്ന് നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടു.
സമീപ വർഷങ്ങളിൽ, ബയോഫാർമസ്യൂട്ടിക്കൽ വ്യവസായം വിപണി വിഹിതത്തിൽ ഗണ്യമായ വർദ്ധനവോടെ വികസിച്ചുകൊണ്ടിരിക്കുന്ന ഒരു ആഗോള വിപണിയായി മാറിയിരിക്കുന്നു. ബയോഫാർമസ്യൂട്ടിക്കൽ വ്യവസായത്തിന്റെ സ്ഫോടനാത്മകമായ വളർച്ചയോടെ1,2,3, പെപ്റ്റൈഡുകളുടെയും പ്രോട്ടീനുകളുടെയും വിശകലനം വളരെയധികം അഭികാമ്യമാണ്. ലക്ഷ്യ പെപ്റ്റൈഡിന് പുറമേ, പെപ്റ്റൈഡ് സിന്തസിസ് സമയത്ത് നിരവധി മാലിന്യങ്ങൾ സൃഷ്ടിക്കപ്പെടുന്നു, അതിനാൽ ആവശ്യമുള്ള പരിശുദ്ധിയുടെ പെപ്റ്റൈഡുകൾ ലഭിക്കുന്നതിന് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് ശുദ്ധീകരണം ആവശ്യമാണ്. ശരീര ദ്രാവകങ്ങൾ, ടിഷ്യൂകൾ, കോശങ്ങൾ എന്നിവയിലെ പ്രോട്ടീനുകളുടെ വിശകലനവും സ്വഭാവരൂപീകരണവും ഒരു സാമ്പിളിൽ കണ്ടെത്താനാകുന്ന നിരവധി സ്പീഷീസുകൾ ഉള്ളതിനാൽ അത്യന്തം വെല്ലുവിളി നിറഞ്ഞ ഒരു ജോലിയാണ്. പെപ്റ്റൈഡും പ്രോട്ടീൻ സീക്വൻസിംഗും നടത്തുന്നതിന് മാസ് സ്പെക്ട്രോമെട്രി ഒരു ഫലപ്രദമായ ഉപകരണമാണെങ്കിലും, അത്തരം സാമ്പിളുകൾ ഒറ്റ പാസിൽ മാസ് സ്പെക്ട്രോമീറ്ററിലേക്ക് കുത്തിവച്ചാൽ, വേർതിരിവ് അനുയോജ്യമാകില്ല. എംഎസ് വിശകലനത്തിന് മുമ്പ് ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി (എൽസി) വേർതിരിവുകൾ നടപ്പിലാക്കുന്നതിലൂടെ ഈ പ്രശ്നം ലഘൂകരിക്കാൻ കഴിയും, ഇത് ഒരു നിശ്ചിത സമയത്ത് മാസ് സ്പെക്ട്രോമീറ്ററിലേക്ക് പ്രവേശിക്കുന്ന വിശകലനങ്ങളുടെ എണ്ണം കുറയ്ക്കും4,5,6. കൂടാതെ, ദ്രാവക ഘട്ടം വേർതിരിവ് സമയത്ത്, വിശകലനങ്ങളെ ഇടുങ്ങിയ പ്രദേശങ്ങളിൽ കേന്ദ്രീകരിക്കാനും അതുവഴി ഈ വിശകലനങ്ങളെ കേന്ദ്രീകരിക്കാനും കഴിയും. എംഎസ് ഡിറ്റക്ഷൻ സെൻസിറ്റിവിറ്റി മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നു. കഴിഞ്ഞ ദശകത്തിൽ ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി (എൽസി) ഗണ്യമായി പുരോഗമിച്ചു, പ്രോട്ടിയോമിക് വിശകലനത്തിൽ ഇത് ഒരു ജനപ്രിയ സാങ്കേതികതയായി മാറി7,8,9,10.
ഒക്ടാഡെസൈൽ-മോഡിഫൈഡ് സിലിക്ക (ODS) ഉപയോഗിച്ച് സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടമായി പെപ്റ്റൈഡ് മിശ്രിതങ്ങളുടെ ശുദ്ധീകരണത്തിനും വേർതിരിക്കലിനും റിവേഴ്‌സ്ഡ്-ഫേസ് ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി (RP-LC) വ്യാപകമായി ഉപയോഗിക്കുന്നു11,12,13. എന്നിരുന്നാലും, RP സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടങ്ങൾ അവയുടെ സങ്കീർണ്ണമായ ഘടനയും ആംഫിഫിലിക് സ്വഭാവവും കാരണം പെപ്റ്റൈഡുകളുടെയും പ്രോട്ടീനുകളുടെയും തൃപ്തികരമായ വേർതിരിവ് നൽകുന്നില്ല14,15. അതിനാൽ, ഈ വിശകലനങ്ങളുമായി സംവദിക്കാനും നിലനിർത്താനും പോളാർ, നോൺ-പോളാർ ഭാഗങ്ങളുള്ള പെപ്റ്റൈഡുകളും പ്രോട്ടീനുകളും വിശകലനം ചെയ്യുന്നതിന് പ്രത്യേകം രൂപകൽപ്പന ചെയ്ത സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടങ്ങൾ ആവശ്യമാണ്16. മൾട്ടിമോഡൽ ഇടപെടലുകൾ നൽകുന്ന മിക്സഡ്-മോഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി, പെപ്റ്റൈഡുകൾ, പ്രോട്ടീനുകൾ, മറ്റ് സങ്കീർണ്ണ മിശ്രിതങ്ങൾ എന്നിവ വേർതിരിക്കുന്നതിന് RP-LC-ക്ക് ഒരു ബദലാകാം.നിരവധി മിക്സഡ്-മോഡ് സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടങ്ങൾ തയ്യാറാക്കിയിട്ടുണ്ട്, കൂടാതെ ഈ ഘട്ടങ്ങൾ പായ്ക്ക് ചെയ്ത നിരകൾ പെപ്റ്റൈഡ്, പ്രോട്ടീൻ വേർതിരിക്കലുകൾക്കായി ഉപയോഗിച്ചു17,18,19,20,21. മിക്സഡ്-മോഡ് സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടങ്ങൾ (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, പോളാർ ഇന്റർകലേഷൻ/RPLC) പോളാർ, നോൺ-പോളാർ ഗ്രൂപ്പുകളുടെ സാന്നിധ്യം കാരണം പെപ്റ്റൈഡ്, പ്രോട്ടീൻ വേർതിരിക്കലുകൾക്ക് അനുയോജ്യം22,23,24,25,26,27,28 . അതുപോലെ, സഹസംയോജിതമായി ബന്ധിപ്പിച്ച പോളാർ ഗ്രൂപ്പുകളുള്ള പോളാർ ഇന്റർകലേറ്റിംഗ് സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടങ്ങൾ പോളാർ, നോൺ-പോളാർ അനലൈറ്റുകൾക്ക് നല്ല വേർതിരിക്കൽ ശക്തിയും അതുല്യമായ സെലക്റ്റിവിറ്റിയും കാണിക്കുന്നു, കാരണം വേർതിരിവ് അനലൈറ്റിനും സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടത്തിനും ഇടയിലുള്ള പ്രതിപ്രവർത്തനത്തെ ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നു. മൾട്ടിമോഡൽ ഇടപെടലുകൾ 29, 30, 31, 32. അടുത്തിടെ, ഷാങ് തുടങ്ങിയവർ. 30 ഒരു ഡോഡെസൈൽ-ടെർമിനേറ്റഡ് പോളിഅമൈൻ സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടം തയ്യാറാക്കി ഹൈഡ്രോകാർബണുകൾ, ആന്റീഡിപ്രസന്റുകൾ, ഫ്ലേവനോയ്ഡുകൾ, ന്യൂക്ലിയോസൈഡുകൾ, ഈസ്ട്രജൻസ്, മറ്റ് നിരവധി അനലൈറ്റുകൾ എന്നിവ വിജയകരമായി വേർതിരിച്ചു. പോളാർ ഇന്റർകലേറ്ററിൽ പോളാർ ഗ്രൂപ്പുകളും നോൺ-പോളാർ ഗ്രൂപ്പുകളും ഉണ്ട്, അതിനാൽ ഹൈഡ്രോഫോബിക്, ഹൈഡ്രോഫിലിക് ഭാഗങ്ങളുള്ള പെപ്റ്റൈഡുകളെയും പ്രോട്ടീനുകളെയും വേർതിരിക്കാൻ ഇത് ഉപയോഗിക്കാം. പോളാർ-എംബെഡഡ് കോളങ്ങൾ (ഉദാ. അമൈഡ്-എംബെഡഡ് സി 18 കോളങ്ങൾ) അസെന്റിസ് എക്സ്പ്രസ് ആർപി-അമൈഡ് കോളങ്ങൾ എന്ന വ്യാപാര നാമത്തിൽ വാണിജ്യപരമായി ലഭ്യമാണ്, എന്നാൽ ഈ കോളങ്ങൾ അമിൻ 33 ന്റെ വിശകലനത്തിന് മാത്രമേ ഉപയോഗിക്കുന്നുള്ളൂ.
നിലവിലെ പഠനത്തിൽ, HSA യുടെ പെപ്റ്റൈഡുകളും ട്രിപ്സിൻ ഡൈജസ്റ്റുകളും വേർതിരിക്കുന്നതിനായി ഒരു പോളാർ-എംബെഡഡ് സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടം (N-phenylmaleimide-എംബെഡഡ് പോളിസ്റ്റൈറൈൻ) തയ്യാറാക്കി വിലയിരുത്തി. താഴെപ്പറയുന്ന തന്ത്രം ഉപയോഗിച്ചാണ് സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടം തയ്യാറാക്കിയത്. ഞങ്ങളുടെ മുൻ പ്രസിദ്ധീകരണത്തിൽ നൽകിയിരിക്കുന്ന നടപടിക്രമം അനുസരിച്ച് തയ്യാറെടുപ്പ് പ്രോട്ടോക്കോളിൽ ചില മാറ്റങ്ങൾ വരുത്തി പോറസ് സിലിക്ക കണികകൾ തയ്യാറാക്കി. വലിയ സുഷിര വലുപ്പമുള്ള സിലിക്ക കണികകൾ തയ്യാറാക്കാൻ യൂറിയ, പോളിയെത്തിലീൻ ഗ്ലൈക്കോൾ (PEG), TMOS, ജല അസറ്റിക് ആസിഡ് എന്നിവയുടെ അനുപാതം ക്രമീകരിച്ചു. രണ്ടാമതായി, ഒരു പുതിയ ലിഗാൻഡ്, ഫീനൈൽമലെയിമൈഡ്-മീഥൈൽ വിനൈൽ ഐസോസയനേറ്റ്, സമന്വയിപ്പിച്ച് സിലിക്ക കണികകളെ ഡെറിവേറ്റൈസ് ചെയ്ത് ഒരു പോളാർ എംബെഡഡ് സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടം തയ്യാറാക്കാൻ ഉപയോഗിച്ചു. തത്ഫലമായുണ്ടാകുന്ന സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടം ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്ത പാക്കിംഗ് സ്കീം ഉപയോഗിച്ച് ഒരു സ്റ്റെയിൻലെസ് സ്റ്റീൽ കോളത്തിലേക്ക് (100 × 1.8 mm id) പായ്ക്ക് ചെയ്തു. കോളത്തിനുള്ളിൽ ഒരു ഏകതാനമായ ബെഡ് രൂപപ്പെടുന്നുവെന്ന് ഉറപ്പാക്കാൻ കോളം പാക്കിംഗിനെ മെക്കാനിക്കൽ വൈബ്രേഷൻ സഹായിക്കുന്നു. അഞ്ച് പെപ്റ്റൈഡുകൾ അടങ്ങിയ പെപ്റ്റൈഡ് മിശ്രിതങ്ങളുടെ പായ്ക്ക് ചെയ്ത കോളം വേർതിരിക്കൽ വിലയിരുത്തുക; (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) ഉം മനുഷ്യ സെറം ആൽബുമിന്റെ (HAS) ട്രിപ്‌സിൻ ഡൈജസ്റ്റും. HSA യുടെ പെപ്റ്റൈഡ് മിശ്രിതവും ട്രിപ്‌സിൻ ഡൈജസ്റ്റും നല്ല റെസല്യൂഷനോടും കാര്യക്ഷമതയോടും കൂടി വേർപെടുത്തുന്നതായി നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടു. PMP കോളത്തിന്റെ വേർതിരിക്കൽ പ്രകടനം Ascentis Express RP-Amide കോളത്തിന്റെതുമായി താരതമ്യം ചെയ്തു. PMP കോളത്തിൽ പെപ്റ്റൈഡുകളും പ്രോട്ടീനുകളും നന്നായി പരിഹരിക്കപ്പെടുകയും കാര്യക്ഷമമാവുകയും ചെയ്യുന്നതായി നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടു, ഇത് Ascentis Express RP-Amide കോളത്തേക്കാൾ കാര്യക്ഷമമായിരുന്നു.
PEG (പോളിയെത്തിലീൻ ഗ്ലൈക്കോൾ), യൂറിയ, അസറ്റിക് ആസിഡ്, ട്രൈമെത്തോക്സി ഓർത്തോസിലിക്കേറ്റ് (TMOS), ട്രൈമെഥൈൽ ക്ലോറോസിലെയ്ൻ (TMCS), ട്രിപ്സിൻ, ഹ്യൂമൻ സെറം ആൽബുമിൻ (HSA), അമോണിയം ക്ലോറൈഡ്, യൂറിയ, ഹെക്സെയ്ൻ മെഥൈൽഡിസിലാസെയ്ൻ (HMDS), മെത്തക്രൈലോയ്ൽ ക്ലോറൈഡ് (MC), സ്റ്റൈറീൻ, 4-ഹൈഡ്രോക്സി-ടെംപോ, ബെൻസോയിൽ പെറോക്സൈഡ് (BPO), HPLC ഗ്രേഡ് അസെറ്റോണിട്രൈൽ (ACN), മെഥനോൾ, 2-പ്രൊപ്പനോൾ, അസെറ്റോൺ എന്നിവ സിഗ്മ-ആൽഡ്രിച്ചിൽ (സെന്റ് ലൂയിസ്, MO, USA) നിന്ന് വാങ്ങി.
യൂറിയ (8 ഗ്രാം), പോളിയെത്തിലീൻ ഗ്ലൈക്കോൾ (8 ഗ്രാം), 0.01 N അസറ്റിക് ആസിഡ് എന്നിവയുടെ മിശ്രിതം 8 മില്ലി 10 മിനിറ്റ് ഇളക്കി, തുടർന്ന് 24 മില്ലി TMOS ഐസ്-തണുത്ത സാഹചര്യങ്ങളിൽ അതിലേക്ക് ചേർത്തു. പ്രതിപ്രവർത്തന മിശ്രിതം 40°C യിൽ 6 മണിക്കൂർ ചൂടാക്കി, തുടർന്ന് 120°C യിൽ 8 മണിക്കൂർ സ്റ്റെയിൻലെസ് സ്റ്റീൽ ഓട്ടോക്ലേവിൽ ചൂടാക്കി. വെള്ളം ഒഴിച്ചു, അവശിഷ്ട വസ്തുക്കൾ 70°C യിൽ 12 മണിക്കൂർ ഉണക്കി. ഉണങ്ങിയ മൃദുവായ പിണ്ഡം ഒരു അടുപ്പിൽ മിനുസമാർന്നതായി പൊടിച്ച് 550°C യിൽ 12 മണിക്കൂർ കാൽസിൻ ചെയ്തു. കണിക വലുപ്പം, സുഷിര വലുപ്പം, ഉപരിതല വിസ്തീർണ്ണം എന്നിവയിൽ പുനരുൽപാദനക്ഷമത പരിശോധിക്കുന്നതിനായി മൂന്ന് ബാച്ചുകൾ തയ്യാറാക്കി സ്വഭാവസവിശേഷതകൾ കാണിച്ചു.
പ്രീ-സിന്തസൈസ്ഡ് ലിഗാൻഡ് ഫീനൈൽമലൈമൈഡ്-മീഥൈൽവിനൈലിസോസയനേറ്റ് (പിസിഎംപി) ഉപയോഗിച്ച് സിലിക്ക കണങ്ങളുടെ ഉപരിതല പരിഷ്കരണവും തുടർന്ന് സ്റ്റൈറീൻ ഉപയോഗിച്ച് റേഡിയൽ പോളിമറൈസേഷനും നടത്തി, ഒരു പോളാർ ഗ്രൂപ്പ് അടങ്ങിയ സംയുക്തം തയ്യാറാക്കി. അഗ്രഗേറ്റുകൾക്കും പോളിസ്റ്റൈറൈൻ ചെയിനുകൾക്കുമുള്ള സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടം. തയ്യാറാക്കൽ പ്രക്രിയ താഴെ വിവരിച്ചിരിക്കുന്നു.
എൻ-ഫീനൈൽമലൈമൈഡ് (200 മില്ലിഗ്രാം), മീഥൈൽ വിനൈൽ ഐസോസയനേറ്റ് (100 മില്ലിഗ്രാം) എന്നിവ ഉണങ്ങിയ ടോലുയിനിൽ ലയിപ്പിച്ചു, കൂടാതെ 0.1 മില്ലി 2,2′-അസോയിസോബ്യൂട്ടിറോണിട്രൈൽ (AIBN) റിയാക്ഷൻ ഫ്ലാസ്കിൽ ചേർത്ത് ഫീനൈൽമലൈമൈഡ്-മീഥൈൽ വിനൈൽ ഐസോസയനേറ്റ് കോപോളിമർ (PMCP) തയ്യാറാക്കി. മിശ്രിതം 60°C-ൽ 3 മണിക്കൂർ ചൂടാക്കി, ഫിൽറ്റർ ചെയ്ത് 40°C-ൽ ഒരു അടുപ്പിൽ 3 മണിക്കൂർ ഉണക്കി.
ഉണങ്ങിയ സിലിക്ക കണികകൾ (2 ഗ്രാം) ഉണങ്ങിയ ടോലുയിനിൽ (100 മില്ലി) വിതറി, 500 മില്ലി വൃത്താകൃതിയിലുള്ള അടിഭാഗത്തെ ഫ്ലാസ്കിൽ 10 മിനിറ്റ് ഇളക്കി സോണിക്കേറ്റ് ചെയ്തു. പിഎംസിപി (10 മില്ലിഗ്രാം) ടോലുയിനിൽ ലയിപ്പിച്ച് ഒരു ഡ്രോപ്പിംഗ് ഫണൽ വഴി റിയാക്ഷൻ ഫ്ലാസ്കിലേക്ക് തുള്ളിയായി ചേർത്തു. മിശ്രിതം 100°C-ൽ 8 മണിക്കൂർ റിഫ്ലക്സ് ചെയ്തു, ഫിൽട്ടർ ചെയ്ത് അസെറ്റോൺ ഉപയോഗിച്ച് കഴുകി 60°C-ൽ 3 മണിക്കൂർ ഉണക്കി. തുടർന്ന്, പിഎംസിപി-ബന്ധിത സിലിക്ക കണികകൾ (100 ഗ്രാം) ടോലുയിനിൽ (200 മില്ലി) ലയിപ്പിച്ചു, 100 µL ഡൈബ്യൂട്ടിൽറ്റിൻ ഡൈലോറേറ്റിന്റെ സാന്നിധ്യത്തിൽ ഒരു ഉത്തേജകമായി 4-ഹൈഡ്രോക്സി-ടെമ്പോ (2 മില്ലി) ചേർത്തു. മിശ്രിതം 50°C-ൽ 8 മണിക്കൂർ ഇളക്കി, ഫിൽട്ടർ ചെയ്ത് 50°C-ൽ 3 മണിക്കൂർ ഉണക്കി.
സ്റ്റൈറീൻ (1 മില്ലി), ബെൻസോയിൽ പെറോക്സൈഡ് ബിപിഒ (0.5 മില്ലി), ടെംപോ-പിഎംസിപി ഘടിപ്പിച്ച സിലിക്ക കണികകൾ (1.5 ഗ്രാം) എന്നിവ ടോലുയിനിൽ വിതറി നൈട്രജൻ ഉപയോഗിച്ച് ശുദ്ധീകരിച്ചു. സ്റ്റൈറീന്റെ പോളിമറൈസേഷൻ 100°C ൽ 12 മണിക്കൂർ നടത്തി. തത്ഫലമായുണ്ടാകുന്ന ഉൽപ്പന്നം മെഥനോൾ ഉപയോഗിച്ച് കഴുകി രാത്രി മുഴുവൻ 60°C ൽ ഉണക്കി. മൊത്തത്തിലുള്ള പ്രതികരണ പദ്ധതി ചിത്രം 1 ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു.
10-3 ടോറിൽ താഴെയുള്ള അവശിഷ്ട മർദ്ദം ലഭിക്കുന്നതിന് സാമ്പിളുകൾ 1 മണിക്കൂർ 393 K താപനിലയിൽ ഡീഗ്യാസ് ചെയ്തു. P/P0 = 0.99 എന്ന ആപേക്ഷിക മർദ്ദത്തിൽ ആഗിരണം ചെയ്യപ്പെടുന്ന N2 ന്റെ അളവ് ഉപയോഗിച്ച് മൊത്തം പോർ വോളിയം നിർണ്ണയിക്കാൻ ഉപയോഗിച്ചു. സ്കാനിംഗ് ഇലക്ട്രോൺ മൈക്രോസ്കോപ്പി ഉപയോഗിച്ച് നഗ്നവും ലിഗാൻഡ്-ബോണ്ടഡ് സിലിക്ക കണങ്ങളുടെ രൂപഘടന പരിശോധിച്ചു (ഹിറ്റാച്ചി ഹൈ ടെക്നോളജീസ്, ടോക്കിയോ, ജപ്പാൻ). ഉണങ്ങിയ സാമ്പിളുകൾ (നഗ്നമായ സിലിക്ക, ലിഗാൻഡ്-ബോണ്ടഡ് സിലിക്ക കണികകൾ) ഒരു അലുമിനിയം നിരയിൽ പശ കാർബൺ ടേപ്പ് ഉപയോഗിച്ച് സ്ഥാപിച്ചു. Q150T സ്പട്ടർ കോട്ടർ ഉപയോഗിച്ച് സാമ്പിളുകളിൽ സ്വർണ്ണം പൂശി, സാമ്പിളുകളിൽ 5 nm Au പാളി നിക്ഷേപിച്ചു. ഇത് കുറഞ്ഞ വോൾട്ടേജുകൾ ഉപയോഗിച്ച് പ്രക്രിയ കാര്യക്ഷമത മെച്ചപ്പെടുത്തുകയും മികച്ച ധാന്യം, തണുത്ത സ്പട്ടറിംഗ് നൽകുകയും ചെയ്യുന്നു. മൂലക വിശകലനത്തിനായി ഒരു തെർമോ ഇലക്ട്രോൺ (വാൾത്താമ, MA, USA) ഫ്ലാഷ് EA1112 മൂലക വിശകലനമാണ് ഉപയോഗിച്ചത്. കണികാ വലിപ്പ വിതരണം ലഭിക്കാൻ ഒരു മാൽവെർൺ (വോർസെസ്റ്റർഷയർ, യുകെ) മാസ്റ്റേഴ്‌സൈസർ 2000 കണിക വലിപ്പ വിശകലനമാണ് ഉപയോഗിച്ചത്. ലിഗാൻഡ്-ബോണ്ടഡ് സിലിക്ക കണികകൾ (5 മില്ലിഗ്രാം വീതം) 5 മില്ലി ഐസോപ്രോപനോളിൽ വിതറി, 10 മിനിറ്റ് സോണിക്കേറ്റ് ചെയ്ത്, 5 മിനിറ്റ് വോർട്ടെക്സ് ചെയ്ത്, മാസ്റ്റെർസൈസറിന്റെ ഒപ്റ്റിക്കൽ ബെഞ്ചിൽ സ്ഥാപിച്ചു. 30 മുതൽ 800 °C വരെയുള്ള താപനില പരിധിയിൽ മിനിറ്റിൽ 5 °C എന്ന നിരക്കിൽ തെർമോഗ്രാവിമെട്രിക് വിശകലനം നടത്തി.
സ്ലറി പാക്കിംഗ് രീതി ഉപയോഗിച്ച്, റഫറിൽ ഉപയോഗിച്ചിരിക്കുന്ന അതേ നടപടിക്രമം പ്രയോഗിച്ചുകൊണ്ട്, സ്ലറി പാക്കിംഗ് രീതി ഉപയോഗിച്ച് (100 × 1.8 mm id) അളവുകളുള്ള ഗ്ലാസ്-ലൈൻഡ് സ്റ്റെയിൻലെസ് സ്റ്റീൽ ഇടുങ്ങിയ-ബോർ നിരകൾ പായ്ക്ക് ചെയ്തു. 31. 1 µm ഫ്രിറ്റ് അടങ്ങിയ ഔട്ട്‌ലെറ്റ് ഫിറ്റിംഗ് ഉള്ള ഒരു സ്റ്റെയിൻലെസ് സ്റ്റീൽ കോളം (ഗ്ലാസ്-ലൈൻഡ്, 100 × 1.8 mm id) ഒരു സ്ലറി പാക്കറുമായി (Alltech Deerfield, IL, USA) ബന്ധിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നു. 1.2 mL മെഥനോളിൽ 150 mg സ്റ്റേഷണറി ഫേസ് സസ്പെൻഡ് ചെയ്ത് ഒരു സ്റ്റേഷണറി ഫേസ് സ്ലറി തയ്യാറാക്കി സംഭരണ ​​കോളത്തിലേക്ക് അയയ്ക്കുക. സ്ലറി ലായകമായും പ്രൊപ്പല്ലിംഗ് ലായകമായും മെഥനോൾ ഉപയോഗിച്ചു. 10 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് 100 MP, 15 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് 80 MP, 30 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് 60 MP മർദ്ദം എന്നിവ പ്രയോഗിച്ച് കോളം തുടർച്ചയായി നിറയ്ക്കുക. പാക്കിംഗ് സമയത്ത്, കോളത്തിന്റെ ഏകീകൃത പാക്കിംഗ് ഉറപ്പാക്കാൻ രണ്ട് GC കോളം ഷേക്കറുകൾ (Alltech, Deerfield, IL, USA) ഉപയോഗിച്ച് മെക്കാനിക്കൽ വൈബ്രേഷൻ പ്രയോഗിച്ചു. സ്ലറി പാക്കർ അടച്ച് കോളത്തിനുള്ളിലെ കേടുപാടുകൾ തടയാൻ മർദ്ദം സാവധാനം വിടുക. സ്ലറി പാക്കിംഗ് യൂണിറ്റിൽ നിന്ന് കോളം വിച്ഛേദിച്ച് അതിന്റെ പ്രകടനം പരിശോധിക്കാൻ മറ്റൊരു ഫിറ്റിംഗ് ഇൻലെറ്റിലേക്കും LC സിസ്റ്റത്തിലേക്കും ബന്ധിപ്പിക്കുക.
50nL ഇഞ്ചക്ഷൻ ലൂപ്പുള്ള ഒരു LC പമ്പ് (10AD ഷിമാഡ്‌സു, ജപ്പാൻ), ഇൻജക്ടർ (വാൽകോ (യുഎസ്എ) C14 W.05), മെംബ്രൻ ഡീഗാസർ (ഷിമാഡ്‌സു DGU-14A), UV-VIS കാപ്പിലറി വിൻഡോ എന്നിവ നിർമ്മിച്ചു. പ്രത്യേക µLC ഉപകരണ ഡിറ്റക്ടർ (UV-2075), ഗ്ലാസ്-ലൈൻഡ് മൈക്രോകോളങ്ങൾ. അധിക കോളം ബാൻഡ് വിശാലമാക്കലിന്റെ പ്രഭാവം കുറയ്ക്കുന്നതിന് വളരെ ഇടുങ്ങിയതും ഹ്രസ്വവുമായ കണക്റ്റിംഗ് ട്യൂബിംഗ് ഉപയോഗിക്കുക. പാക്കേജിംഗിന് ശേഷം, റിഡ്യൂസിംഗ് യൂണിയന്റെ 1/16″ ഔട്ട്‌ലെറ്റിൽ കാപ്പിലറികൾ (50 μm ഐഡി 365 ഉം റിഡ്യൂസിംഗ് യൂണിയൻ കാപ്പിലറികൾ (50 μm) ഉം സ്ഥാപിച്ചു. മൾട്ടിക്രോ 2000 സോഫ്റ്റ്‌വെയർ ഉപയോഗിച്ചാണ് ഡാറ്റ ശേഖരണവും ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് പ്രോസസ്സിംഗും നടത്തിയത്. 254 nm-ൽ നിരീക്ഷണം നടത്തി UV ആഗിരണം പരീക്ഷിച്ചു. ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് ഡാറ്റ OriginPro8 (നോർത്താംപ്ടൺ, MA) വിശകലനം ചെയ്തു.
മനുഷ്യ സെറമിൽ നിന്നുള്ള ആൽബുമിൻ, ലയോഫിലൈസ് ചെയ്ത പൊടി, ≥ 96% (അഗരോസ് ജെൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ്) 3 മില്ലിഗ്രാം ട്രിപ്സിൻ (1.5 മില്ലിഗ്രാം), 4.0 മില്ലി യൂറിയ (1 മില്ലി), 0.2 മില്ലി അമോണിയം ബൈകാർബണേറ്റ് (1 മില്ലി) എന്നിവയുമായി കലർത്തി. ലായനി 10 മിനിറ്റ് ഇളക്കി 37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 6 മണിക്കൂർ വാട്ടർ ബാത്തിൽ സൂക്ഷിച്ചു, തുടർന്ന് 0.1% ടിഎഫ്എയുടെ 1 മില്ലി ഉപയോഗിച്ച് ശമിപ്പിച്ചു. ലായനി ഫിൽട്ടർ ചെയ്ത് 4 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ താഴെ സൂക്ഷിക്കുക.
പെപ്റ്റൈഡ് മിശ്രിതങ്ങളുടെയും HSA ട്രിപ്സിൻ ഡൈജസ്റ്റുകളുടെയും വേർതിരിക്കൽ PMP കോളങ്ങളിൽ വെവ്വേറെ വിലയിരുത്തി. PMP കോളം ഉപയോഗിച്ച് HSA യുടെ പെപ്റ്റൈഡ് മിശ്രിതത്തിന്റെയും ട്രിപ്സിൻ ഡൈജസ്റ്റിന്റെയും വേർതിരിക്കൽ പരിശോധിക്കുകയും ഫലങ്ങൾ അസെന്റിസ് എക്സ്പ്രസ് RP-അമൈഡ് കോളവുമായി താരതമ്യം ചെയ്യുകയും ചെയ്യുക. സൈദ്ധാന്തിക പ്ലേറ്റ് നമ്പർ ഇനിപ്പറയുന്ന രീതിയിൽ കണക്കാക്കുന്നു:
ചിത്രം 2-ൽ നഗ്നമായ സിലിക്ക കണങ്ങളുടെയും ലിഗാൻഡ്-ബോണ്ടഡ് സിലിക്ക കണങ്ങളുടെയും SEM ചിത്രങ്ങൾ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു. നഗ്നമായ സിലിക്ക കണങ്ങളുടെ (A, B) SEM ചിത്രങ്ങൾ കാണിക്കുന്നത്, നമ്മുടെ മുൻ പഠനങ്ങളിൽ നിന്ന് വ്യത്യസ്തമായി, ഈ കണികകൾ ഗോളാകൃതിയിലുള്ളതാണെന്നും അതിൽ കണികകൾ നീളമേറിയതോ ക്രമരഹിതമായ സമമിതിയുള്ളതോ ആണെന്നുമാണ്. ലിഗാൻഡ്-ബോണ്ടഡ് സിലിക്ക കണങ്ങളുടെ (C, D) ഉപരിതലം നഗ്നമായ സിലിക്ക കണങ്ങളേക്കാൾ മിനുസമാർന്നതാണ്, ഇത് സിലിക്ക കണങ്ങളുടെ ഉപരിതലത്തിൽ പോളിസ്റ്റൈറൈൻ ശൃംഖലകളുടെ ആവരണം മൂലമാകാം.
നഗ്നമായ സിലിക്ക കണികകളുടെ (A, B) സ്കാൻ ചെയ്യുന്ന ഇലക്ട്രോൺ മൈക്രോസ്കോപ്പ് ചിത്രങ്ങൾ, ലിഗാൻഡ്-ബോണ്ടഡ് സിലിക്ക കണികകൾ (C, D).
ചിത്രം 3(A)-ൽ നഗ്നമായ സിലിക്ക കണങ്ങളുടെയും ലിഗാൻഡ്-ബോണ്ടഡ് സിലിക്ക കണങ്ങളുടെയും കണികാ വലിപ്പ വിതരണങ്ങൾ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു. വോളിയം അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള കണികാ വലിപ്പ വിതരണ വക്രങ്ങൾ രാസ പരിഷ്കരണത്തിന് ശേഷം സിലിക്ക കണങ്ങളുടെ വലിപ്പം വർദ്ധിച്ചതായി കാണിച്ചു (ചിത്രം 3A). നിലവിലെ പഠനത്തിൽ നിന്നും മുൻ പഠനത്തിൽ നിന്നുമുള്ള സിലിക്ക കണങ്ങളുടെ കണികാ വലിപ്പ വിതരണ ഡാറ്റ പട്ടിക 1(A)-ൽ താരതമ്യം ചെയ്തിരിക്കുന്നു. ad(0.5) മൂല്യമുള്ള 3.05 μm (പോളിസ്റ്റൈറൈൻ-ബൗണ്ടഡ് സിലിക്ക കണികകൾ) ഉള്ള ഞങ്ങളുടെ മുൻ പഠനവുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ PMP-യുടെ വോളിയം അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള കണികാ വലിപ്പം, d(0.5) 3.36 μm ആണ്. പ്രതിപ്രവർത്തന മിശ്രിതത്തിലെ PEG, യൂറിയ, TMOS, അസറ്റിക് ആസിഡ് എന്നിവയുടെ വ്യത്യസ്ത അനുപാതങ്ങൾ കാരണം ഈ ബാച്ചിന് ഞങ്ങളുടെ മുൻ പഠനവുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ ഇടുങ്ങിയ കണികാ വലിപ്പ വിതരണമുണ്ടായിരുന്നു. PMP ഘട്ടത്തിന്റെ കണികാ വലിപ്പം ഞങ്ങൾ മുമ്പ് പഠിച്ച പോളിസ്റ്റൈറൈൻ-ബൗണ്ടഡ് സിലിക്ക കണിക ഘട്ടത്തേക്കാൾ അല്പം വലുതാണ്. ഇതിനർത്ഥം സ്റ്റൈറീൻ ഉപയോഗിച്ചുള്ള സിലിക്ക കണങ്ങളുടെ ഉപരിതല പ്രവർത്തനക്ഷമത സിലിക്ക ഉപരിതലത്തിൽ ഒരു പോളിസ്റ്റൈറൈൻ പാളി (0.97 µm) മാത്രമേ നിക്ഷേപിച്ചിട്ടുള്ളൂ എന്നാണ്, അതേസമയം PMP ഘട്ടത്തിൽ പാളിയുടെ കനം 1.38 µm ആയിരുന്നു.
നഗ്നമായ സിലിക്ക കണങ്ങളുടെയും ലിഗാൻഡ്-ബൗണ്ട് സിലിക്ക കണങ്ങളുടെയും കണികാ വലിപ്പ വിതരണം (A) ഉം സുഷിര വലിപ്പ വിതരണം (B).
നിലവിലെ പഠനത്തിലെ സിലിക്ക കണങ്ങളുടെ സുഷിരത്തിന്റെ വലിപ്പം, സുഷിരത്തിന്റെ അളവ്, ഉപരിതല വിസ്തീർണ്ണം എന്നിവ പട്ടിക 1(B)-ൽ നൽകിയിരിക്കുന്നു. നഗ്നമായ സിലിക്ക കണങ്ങളുടെയും ലിഗാൻഡ്-ബോണ്ടഡ് സിലിക്ക കണങ്ങളുടെയും PSD പ്രൊഫൈലുകൾ ചിത്രം 3(B)-ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു. ഫലങ്ങൾ ഞങ്ങളുടെ മുൻ പഠനവുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്താവുന്നതാണ്. നഗ്നമായതും ലിഗാൻഡ്-ബൗണ്ടഡ് സിലിക്ക കണങ്ങളുടെയും സുഷിരത്തിന്റെ വലിപ്പം യഥാക്രമം 310 ഉം 241 ഉം ആണ്, ഇത് പട്ടിക 1(B)-ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ, രാസ പരിഷ്കരണത്തിന് ശേഷം സുഷിരത്തിന്റെ വലിപ്പം 69 കുറയുന്നുവെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു, കൂടാതെ വക്രത്തിന്റെ മാറ്റം ചിത്രം 3(B)-ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു. അതുപോലെ, രാസ പരിഷ്കരണത്തിന് ശേഷം സിലിക്ക കണങ്ങളുടെ സുഷിരത്തിന്റെ അളവ് 0.67 ൽ നിന്ന് 0.58 cm3/g ആയി കുറഞ്ഞു. നിലവിൽ പഠിച്ച സിലിക്ക കണങ്ങളുടെ പ്രത്യേക ഉപരിതല വിസ്തീർണ്ണം 116 m2/g ആണ്, ഇത് ഞങ്ങളുടെ മുൻ പഠനവുമായി (124 m2/g) താരതമ്യപ്പെടുത്താവുന്നതാണ്. പട്ടിക 1(B)-ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ, സിലിക്ക കണങ്ങളുടെ ഉപരിതല വിസ്തീർണ്ണം (m2/g) 116 m2/g-ൽ നിന്ന് കുറഞ്ഞു. രാസമാറ്റത്തിന് ശേഷം 105 മീ2/ഗ്രാം.
സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടത്തിന്റെ മൂലക വിശകലനത്തിന്റെ ഫലങ്ങൾ പട്ടിക 2 ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു. നിലവിലെ സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടത്തിന്റെ കാർബൺ ലോഡിംഗ് 6.35% ആണ്, ഇത് ഞങ്ങളുടെ മുൻ പഠനത്തിന്റെ കാർബൺ ലോഡിംഗിനേക്കാൾ കുറവാണ് (പോളിസ്റ്റൈറൈൻ ബോണ്ടഡ് സിലിക്ക കണികകൾ, യഥാക്രമം 7.93%35 ഉം 10.21% ഉം) 42. നിലവിലെ സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടത്തിന്റെ കാർബൺ ലോഡിംഗ് കുറവാണ്, കാരണം നിലവിലെ SP തയ്യാറാക്കുന്നതിൽ, സ്റ്റൈറീനു പുറമേ, ഫീനൈൽമലൈമൈഡ്-മീഥൈൽവിനൈലിസോസയനേറ്റ് (PCMP), 4-ഹൈഡ്രോക്സി-ടെംപോ തുടങ്ങിയ ചില ധ്രുവ ലിഗാൻഡുകൾ ഉപയോഗിച്ചു. നിലവിലെ സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടത്തിന്റെ നൈട്രജൻ ഭാര ശതമാനം 2.21% ആണ്, മുൻ പഠനങ്ങളിലെ നൈട്രജന്റെ ഭാരത്തിന്റെ 0.1735 ഉം 0.85% ഉം ആയിരുന്നു. ഇതിനർത്ഥം ഫീനൈൽമലൈമൈഡ് കാരണം നിലവിലെ സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടത്തിൽ നൈട്രജന്റെ wt % കൂടുതലാണ് എന്നാണ്. അതുപോലെ, (4) ഉം (5) ഉം ഉൽപ്പന്നങ്ങളുടെ കാർബൺ ലോഡിംഗ് 2.7% ഉം ആയിരുന്നു. യഥാക്രമം 2.9%, അന്തിമ ഉൽപ്പന്നത്തിന്റെ (6) കാർബൺ ലോഡിംഗ് 6.35% ആയിരുന്നു, പട്ടിക 2 ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നത് പോലെ. പിഎംപി സ്റ്റേഷണറി ഫേസ് ഉപയോഗിച്ച് ഭാരക്കുറവ് പരിശോധിച്ചു, കൂടാതെ ടിജിഎ വക്രം ചിത്രം 4 ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു. ടിജിഎ വക്രം 8.6% ഭാരക്കുറവ് കാണിക്കുന്നു, ഇത് കാർബൺ ലോഡിംഗുമായി (6.35%) നല്ല യോജിപ്പിലാണ്, കാരണം ലിഗാൻഡുകളിൽ സി മാത്രമല്ല, എൻ, ഒ, എച്ച് എന്നിവയും അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു.
സിലിക്ക കണങ്ങളുടെ ഉപരിതല പരിഷ്കരണത്തിനായി ഫീനൈൽമലൈമൈഡ്-മീഥൈൽവിനൈലിസോസയനേറ്റ് ലിഗാൻഡ് തിരഞ്ഞെടുത്തത് അതിൽ ധ്രുവീയ ഫിനൈൽമലൈമൈഡ് ഗ്രൂപ്പുകളും വിനൈലിസോസയനേറ്റ് ഗ്രൂപ്പുകളും ഉള്ളതിനാലാണ്. വിനൈൽ ഐസോസയനേറ്റ് ഗ്രൂപ്പുകൾക്ക് ലിവിംഗ് റാഡിക്കൽ പോളിമറൈസേഷൻ വഴി സ്റ്റൈറീനുമായി കൂടുതൽ പ്രതിപ്രവർത്തിക്കാൻ കഴിയും. രണ്ടാമത്തെ കാരണം, അനലൈറ്റുമായി മിതമായ പ്രതിപ്രവർത്തനം ഉള്ളതും അനലൈറ്റിനും സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടത്തിനും ഇടയിൽ ശക്തമായ ഇലക്ട്രോസ്റ്റാറ്റിക് പ്രതിപ്രവർത്തനം ഇല്ലാത്തതുമായ ഒരു ഗ്രൂപ്പ് ചേർക്കുക എന്നതാണ്, കാരണം ഫീനൈൽമലൈമൈഡ് മൊയറ്റിക്ക് സാധാരണ pH-ൽ വെർച്വൽ ചാർജ് ഇല്ല. സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടത്തിന്റെ ധ്രുവീകരണം സ്റ്റൈറീന്റെ ഒപ്റ്റിമൽ അളവും ഫ്രീ റാഡിക്കൽ പോളിമറൈസേഷന്റെ പ്രതികരണ സമയവും ഉപയോഗിച്ച് നിയന്ത്രിക്കാൻ കഴിയും. പ്രതിപ്രവർത്തനത്തിന്റെ അവസാന ഘട്ടം (ഫ്രീ-റാഡിക്കൽ പോളിമറൈസേഷൻ) നിർണായകമാണ്, കൂടാതെ നിശ്ചല ഘട്ടത്തിന്റെ ധ്രുവീകരണം മാറ്റാനും കഴിയും. ഈ നിശ്ചല ഘട്ടങ്ങളുടെ കാർബൺ ലോഡിംഗ് പരിശോധിക്കുന്നതിനായി മൂലക വിശകലനം നടത്തി. സ്റ്റൈറീന്റെ അളവും പ്രതിപ്രവർത്തന സമയവും വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നത് നിശ്ചല ഘട്ടത്തിന്റെ കാർബൺ ലോഡിംഗ് വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും തിരിച്ചും ചെയ്യുന്നതായി നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടു. വ്യത്യസ്ത സാന്ദ്രതകളുള്ള സ്റ്റൈറീനുമായി തയ്യാറാക്കിയ SP-കൾക്ക് വ്യത്യസ്ത കാർബൺ ലോഡിംഗുകൾ ഉണ്ട്. വീണ്ടും, ഈ നിശ്ചല ഘട്ടങ്ങളെ സ്റ്റെയിൻലെസ് സ്റ്റീൽ നിരകളിലേക്ക് ലോഡ് ചെയ്യുക. അവയുടെ ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് പ്രകടനം (സെലക്ടിവിറ്റി, റെസല്യൂഷൻ, N മൂല്യം മുതലായവ) പരിശോധിക്കുക. ഈ പരീക്ഷണങ്ങളെ അടിസ്ഥാനമാക്കി, നിയന്ത്രിത പോളാരിറ്റിയും നല്ല അനലൈറ്റ് നിലനിർത്തലും ഉറപ്പാക്കുന്നതിന് PMP സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടം തയ്യാറാക്കുന്നതിനായി ഒരു ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്ത ഫോർമുലേഷൻ തിരഞ്ഞെടുത്തു.
മൊബൈൽ ഘട്ടം ഉപയോഗിച്ച് ഒരു പിഎംപി കോളം ഉപയോഗിച്ച് അഞ്ച് പെപ്റ്റൈഡ് മിശ്രിതങ്ങളും (ഗ്ലൈ-ടൈർ, ഗ്ലൈ-ല്യൂ-ടൈർ, ഗ്ലൈ-ഗ്ലൈ-ടൈർ-ആർഗ്, ടൈർ-ഐൽ-ഗ്ലൈ-സെർ-ആർഗ്, ല്യൂസിൻ എൻകെഫാലിൻ) വിലയിരുത്തി; 80 μL/മിനിറ്റ് എന്ന ഫ്ലോ റേറ്റിൽ 60/40 (v/v) അസെറ്റോണിട്രൈൽ/ജലം (0.1% TFA). ഒപ്റ്റിമൽ എല്യൂഷൻ സാഹചര്യങ്ങളിൽ, ഓരോ കോളത്തിനും സൈദ്ധാന്തിക പ്ലേറ്റ് നമ്പർ (N) (100 × 1.8 mm id) 20,000 ± 100 (200,000 പ്ലേറ്റുകൾ/m²) ആണ്. പട്ടിക 3 മൂന്ന് PMP കോളങ്ങൾക്കുള്ള N മൂല്യങ്ങൾ നൽകുന്നു, ക്രോമാറ്റോഗ്രാമുകൾ ചിത്രം 5A-യിൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു. ഉയർന്ന ഫ്ലോ റേറ്റിൽ (700 μL/മിനിറ്റ്) ഒരു PMP കോളത്തിൽ വേഗത്തിലുള്ള വിശകലനം, ഒരു മിനിറ്റിനുള്ളിൽ അഞ്ച് പെപ്റ്റൈഡുകൾ എല്യൂട്ടുചെയ്തു, N മൂല്യങ്ങൾ വളരെ മികച്ചതായിരുന്നു, ഒരു കോളത്തിന് 13,500 ± 330 (100 × 1.8 mm id), 135,000 പ്ലേറ്റുകൾ/മീറ്റർ (ചിത്രം 5B) ന് തുല്യമാണ്. ഒരേ വലിപ്പമുള്ള മൂന്ന് കോളങ്ങൾ (100 × 1.8 mm id) മൂന്ന് വ്യത്യസ്ത ലോട്ട് PMP സ്റ്റേഷണറി ഫേസ് കൊണ്ട് പായ്ക്ക് ചെയ്തു. പുനരുൽപാദനക്ഷമത പരിശോധിക്കുക. ഓരോ നിരയിലും ഒരേ ടെസ്റ്റ് മിശ്രിതം വേർതിരിക്കുന്നതിന് ഒപ്റ്റിമൽ എല്യൂഷൻ അവസ്ഥകളും സൈദ്ധാന്തിക പ്ലേറ്റുകളുടെ എണ്ണം N ഉം നിലനിർത്തൽ സമയവും ഉപയോഗിച്ച് ഓരോ നിരയുടെയും അനലൈറ്റ് സാന്ദ്രത രേഖപ്പെടുത്തി. PMP നിരകളുടെ പുനരുൽപാദനക്ഷമത ഡാറ്റ പട്ടിക 4 ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു. PMP നിരയുടെ പുനരുൽപാദനക്ഷമത പട്ടിക 3 ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ വളരെ കുറഞ്ഞ %RSD മൂല്യങ്ങളുമായി നന്നായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു.
PMP കോളം (B) ലും Ascentis Express RP-Amide കോളത്തിലും (A) പെപ്റ്റൈഡ് മിശ്രിതം വേർതിരിക്കൽ; മൊബൈൽ ഘട്ടം 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP കോളം അളവുകൾ (100 × 1.8 mm id); വിശകലനം സംയുക്തങ്ങളുടെ ഇല്യൂഷൻ ക്രമം: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) and 5 (leucine) acid enkephalin)).
ഉയർന്ന പ്രകടനമുള്ള ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയിൽ മനുഷ്യ സെറം ആൽബുമിൻ ട്രിപ്റ്റിക് ഡൈജസ്റ്റുകളെ വേർതിരിക്കുന്നതിനായി ഒരു പിഎംപി കോളം (100 × 1.8 എംഎം ഐഡി) വിലയിരുത്തി. ചിത്രം 6 ലെ ക്രോമാറ്റോഗ്രാം സാമ്പിൾ നന്നായി വേർതിരിച്ചിട്ടുണ്ടെന്നും റെസല്യൂഷൻ വളരെ മികച്ചതാണെന്നും കാണിക്കുന്നു. 100 µL/മിനിറ്റ്, മൊബൈൽ ഫേസ് 70/30 അസെറ്റോണിട്രൈൽ/ജലം, 0.1% TFA എന്നിവയുടെ ഫ്ലോ റേറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് എച്ച്എസ്എ ഡൈജസ്റ്റുകൾ വിശകലനം ചെയ്തു. ക്രോമാറ്റോഗ്രാമിൽ (ചിത്രം 6) കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ, എച്ച്എസ്എ ഡൈജസ്റ്റിനെ 17 പെപ്റ്റൈഡുകൾക്ക് അനുയോജ്യമായ 17 പീക്കുകളായി വിഭജിച്ചിരിക്കുന്നു. എച്ച്എസ്എ ഡൈജസ്റ്റിലെ ഓരോ പീക്കിന്റെയും വേർതിരിക്കൽ കാര്യക്ഷമത കണക്കാക്കി, മൂല്യങ്ങൾ പട്ടിക 5 ൽ നൽകിയിരിക്കുന്നു.
ഒരു പിഎംപി കോളത്തിൽ എച്ച്എസ്എയുടെ (100 × 1.8 എംഎം ഐഡി) ഒരു ട്രിപ്റ്റിക് ഡൈജസ്റ്റ് വേർതിരിച്ചു; ഫ്ലോ റേറ്റ് (100 µL/മിനിറ്റ്), മൊബൈൽ ഫേസ് 60/40 അസെറ്റോണിട്രൈൽ/ജലം, 0.1% ടിഎഫ്എ.
ഇവിടെ L എന്നത് കോളം നീളമാണ്, η എന്നത് മൊബൈൽ ഫേസിന്റെ വിസ്കോസിറ്റിയാണ്, ΔP എന്നത് കോളം ബാക്ക് പ്രഷറാണ്, കൂടാതെ u എന്നത് മൊബൈൽ ഫേസിന്റെ രേഖീയ പ്രവേഗമാണ്. PMP കോളത്തിന്റെ പെർമിയബിലിറ്റി 2.5 × 10-14 m2 ആയിരുന്നു, ഫ്ലോ റേറ്റ് 25 μL/മിനിറ്റ് ആയിരുന്നു, കൂടാതെ 60/40 v/v ACN/ജലം ഉപയോഗിച്ചു. PMP കോളത്തിന്റെ പെർമിയബിലിറ്റി (100 × 1.8 mm id) നമ്മുടെ മുൻ പഠനത്തിന് സമാനമായിരുന്നു Ref.34. ഉപരിപ്ലവമായി സുഷിരങ്ങളുള്ള കണികകൾ നിറഞ്ഞ നിരയുടെ പെർമിയബിലിറ്റി: 1.3 μm കണികകൾക്ക് 1.7 × 10-15, 1.7 μm കണികകൾക്ക് 3.1 × 10-15, 2.6 μm കണികകൾക്ക് 2.5 × 10-14 m2 എന്നിവയാണ് 5 μm കണികകൾക്ക് 43. അതിനാൽ, PMP ഘട്ടത്തിന്റെ പെർമിയബിലിറ്റി 5 μm ന് സമാനമാണ്. കോർ-ഷെൽ കണികകൾ.
ഇവിടെ Wx എന്നത് ക്ലോറോഫോം കൊണ്ട് പായ്ക്ക് ചെയ്ത കോളത്തിന്റെ ഭാരമാണ്, Wy എന്നത് മെഥനോൾ കൊണ്ട് പായ്ക്ക് ചെയ്ത കോളത്തിന്റെ ഭാരമാണ്, ρ എന്നത് ലായകത്തിന്റെ സാന്ദ്രതയാണ്. മെഥനോൾ (ρ = 0.7866), ക്ലോറോഫോം (ρ = 1.484) എന്നിവയുടെ സാന്ദ്രത. മുമ്പ് നമ്മൾ പഠിച്ച SILICA PARTICLES-C18 കോളങ്ങളുടെ (100 × 1.8 mm id) 34, C18-യൂറിയ കോളങ്ങളുടെ 31 എന്നിവയുടെ ആകെ പോറോസിറ്റി യഥാക്രമം 0.63 ഉം 0.55 ഉം ആയിരുന്നു. ഇതിനർത്ഥം യൂറിയ ലിഗാൻഡുകളുടെ സാന്നിധ്യം സ്റ്റേഷണറി ഫേസിന്റെ പെർമിയബിലിറ്റി കുറയ്ക്കുന്നു എന്നാണ്. മറുവശത്ത്, PMP കോളത്തിന്റെ (100 × 1.8 mm id) ആകെ പോറോസിറ്റി 0.60 ആണ്. PMP കോളങ്ങളുടെ പെർമിയബിലിറ്റി C18-ബോണ്ടഡ് സിലിക്ക കണികകൾ കൊണ്ട് പായ്ക്ക് ചെയ്ത കോളങ്ങളുടെ പെർമിയബിലിറ്റിയേക്കാൾ കുറവാണ്, കാരണം C18-ടൈപ്പ് സ്റ്റേഷണറി ഫേസുകളിൽ C18 ലിഗാൻഡുകൾ സിലിക്ക കണങ്ങളുമായി ലീനിയർ ചെയിനുകളായി ഘടിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നു, അതേസമയം പോളിസ്റ്റൈറൈൻ-ടൈപ്പ് സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടങ്ങളിൽ, അതിനു ചുറ്റും താരതമ്യേന കട്ടിയുള്ള ഒരു പോളിമർ പാളി രൂപം കൊള്ളുന്നു. ഒരു സാധാരണ പരീക്ഷണത്തിൽ, നിരയുടെ പോറോസിറ്റി ഇങ്ങനെ കണക്കാക്കുന്നു:
ചിത്രം 7A,B വാൻ ഡീംറ്റർ പ്ലോട്ടിന്റെ അതേ എല്യൂഷൻ അവസ്ഥകൾ (അതായത്, 60/40 ACN/H2O, 0.1% TFA) ഉപയോഗിച്ച് PMP കോളം (100 × 1.8 mm id) ഉം Ascentis Express RP-Amide കോളം (100 × 1.8 mm id) ഉം കാണിക്കുന്നു. തിരഞ്ഞെടുത്ത പെപ്റ്റൈഡ് മിശ്രിതങ്ങൾ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) 20 µL/ ൽ തയ്യാറാക്കി. രണ്ട് നിരകളുടെയും ഏറ്റവും കുറഞ്ഞ ഒഴുക്ക് നിരക്ക് 800 µL/min ആണ്. PMP കോളത്തിനും Ascentis Express RP-Amide കോളത്തിനും ഒപ്റ്റിമൽ ഫ്ലോ റേറ്റിൽ (80 µL/min) ഏറ്റവും കുറഞ്ഞ HETP മൂല്യങ്ങൾ യഥാക്രമം 2.6 µm ഉം 3.9 µm ഉം ആയിരുന്നു. HETP മൂല്യങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത് PMP കോളത്തിന്റെ (100 × 1.8 mm id) വേർതിരിക്കൽ കാര്യക്ഷമത വാണിജ്യപരമായി ലഭ്യമായ Ascentis Express RP-Amide കോളത്തേക്കാൾ (100 × 1.8 mm id) വളരെ മികച്ചതാണെന്ന്. ചിത്രം 7(A) ലെ വാൻ ഡീംറ്റർ പ്ലോട്ട് കാണിക്കുന്നത് വർദ്ധിച്ചുവരുന്ന ഒഴുക്കിനൊപ്പം N മൂല്യത്തിലെ കുറവ് നമ്മുടെ മുൻ പഠനവുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ പ്രാധാന്യമർഹിക്കുന്നില്ല എന്നാണ്. ഉയർന്ന വേർതിരിക്കൽ കാര്യക്ഷമത അസെന്റിസ് എക്സ്പ്രസ് ആർപി-അമൈഡ് കോളവുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ പിഎംപി കോളത്തിന്റെ (100 × 1.8 എംഎം ഐഡി) നിലവിലെ ജോലിയിൽ ഉപയോഗിക്കുന്ന കണികയുടെ ആകൃതി, വലിപ്പം, സങ്കീർണ്ണമായ കോളം പാക്കിംഗ് നടപടിക്രമങ്ങൾ എന്നിവയിലെ മെച്ചപ്പെടുത്തലുകളെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ളതാണ്34.
(എ) 0.1% TFA ഉള്ള 60/40 ACN/H2O-യിലെ PMP കോളം (100 × 1.8 mm id) ഉപയോഗിച്ച് ലഭിച്ച വാൻ ഡീംറ്റർ പ്ലോട്ട് (HETP vs മൊബൈൽ ഫേസ് ലീനിയർ വെലോസിറ്റി). (ബി) 0.1% TFA ഉള്ള 60/40 ACN/H2O-യിലെ Ascentis Express RP-Amide കോളം (100 × 1.8 mm id) ഉപയോഗിച്ച് ലഭിച്ച വാൻ ഡീംറ്റർ പ്ലോട്ട് (HETP vs മൊബൈൽ ഫേസ് ലീനിയർ വെലോസിറ്റി).
ഉയർന്ന പ്രകടനമുള്ള ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയിൽ സിന്തറ്റിക് പെപ്റ്റൈഡ് മിശ്രിതങ്ങളും ഹ്യൂമൻ സെറം ആൽബുമിൻ (HAS) ട്രിപ്സിൻ ഡൈജസ്റ്റുകളും വേർതിരിക്കുന്നതിനായി ഒരു പോളാർ-എംബെഡഡ് പോളിസ്റ്റൈറൈൻ സ്റ്റേഷണറി ഫേസ് തയ്യാറാക്കി വിലയിരുത്തി. പെപ്റ്റൈഡ് മിശ്രിതങ്ങൾക്കായുള്ള PMP നിരകളുടെ ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് പ്രകടനം വേർതിരിക്കൽ കാര്യക്ഷമതയിലും റെസല്യൂഷനിലും മികച്ചതാണ്. സിലിക്ക കണങ്ങളുടെ കണിക വലുപ്പവും സുഷിര വലുപ്പവും, സ്റ്റേഷണറി ഫേസിന്റെ നിയന്ത്രിത സിന്തസിസ്, സങ്കീർണ്ണമായ കോളം പാക്കിംഗ് തുടങ്ങിയ വിവിധ കാരണങ്ങളാൽ PMP നിരകളുടെ മെച്ചപ്പെട്ട വേർതിരിക്കൽ പ്രകടനം സാധ്യമാണ്. ഉയർന്ന വേർതിരിക്കൽ കാര്യക്ഷമതയ്ക്ക് പുറമേ, ഉയർന്ന ഫ്ലോ റേറ്റുകളിൽ കുറഞ്ഞ കോളം ബാക്ക് പ്രഷർ ഈ സ്റ്റേഷണറി ഫേസിന്റെ മറ്റൊരു നേട്ടമാണ്. PMP നിരകൾ നല്ല പുനരുൽപാദനക്ഷമത പ്രകടിപ്പിക്കുകയും പെപ്റ്റൈഡ് മിശ്രിതങ്ങളുടെ വിശകലനത്തിനും വിവിധ പ്രോട്ടീനുകളുടെ ട്രിപ്സിൻ ദഹനത്തിനും ഉപയോഗിക്കുകയും ചെയ്യാം. ദ്രാവക ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയിൽ പ്രകൃതിദത്ത ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ, ഔഷധ സസ്യങ്ങളിൽ നിന്നുള്ള ബയോആക്ടീവ് സംയുക്തങ്ങൾ, ഫംഗസ് സത്തുകൾ എന്നിവ വേർതിരിക്കുന്നതിന് ഈ കോളം ഉപയോഗിക്കാൻ ഞങ്ങൾ ഉദ്ദേശിക്കുന്നു. ഭാവിയിൽ, പ്രോട്ടീനുകളുടെയും മോണോക്ലോണൽ ആന്റിബോഡികളുടെയും വേർതിരിക്കലിനായി PMP നിരകളും വിലയിരുത്തപ്പെടും.
ഫീൽഡ്, ജെ.കെ, യൂർബി, എം.ആർ, ലൗ, ജെ., തോഗെർസെൻ, എച്ച്. & പീറ്റേഴ്‌സൺ, പി. റിവേഴ്‌സ്ഡ് ഫേസ് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി വഴി പെപ്റ്റൈഡ് സെപ്പറേഷൻ സിസ്റ്റങ്ങളെക്കുറിച്ചുള്ള ഗവേഷണം ഭാഗം I: ഒരു കോളം സ്വഭാവ സവിശേഷത പ്രോട്ടോക്കോളിന്റെ വികസനം.ജെ. ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
ഗോമസ്, ബി. തുടങ്ങിയവർ. പകർച്ചവ്യാധികളുടെ ചികിത്സയ്ക്കായി രൂപകൽപ്പന ചെയ്ത മെച്ചപ്പെടുത്തിയ സജീവ പെപ്റ്റൈഡുകൾ. ബയോടെക്നോളജി. അഡ്വാൻസ്ഡ്.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
വ്ലീഗെ, പി., ലിസോവ്സ്കി, വി., മാർട്ടിനെസ്, ജെ. & ക്രെസ്റ്റ്ചാറ്റിസ്കി, എം. സിന്തറ്റിക് തെറാപ്പിക് പെപ്റ്റൈഡുകൾ: ശാസ്ത്രവും വിപണിയും. മയക്കുമരുന്ന് കണ്ടെത്തൽ.15 (1-2) ഇന്ന്, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
സീ, എഫ്., സ്മിത്ത്, ആർ‌ഡി & ഷെൻ, വൈ. അഡ്വാൻസ്ഡ് പ്രോട്ടിയോമിക് ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി.ജെ. ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി.എ 1261, 78–90 (2012).
ലിയു, ഡബ്ല്യു. തുടങ്ങിയവർ. അഡ്വാൻസ്ഡ് ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി-മാസ് സ്പെക്ട്രോമെട്രി വിശാലമായി ലക്ഷ്യമിടുന്ന മെറ്റബോളമിക്സും പ്രോട്ടിയോമിക്സും സംയോജിപ്പിക്കാൻ പ്രാപ്തമാക്കുന്നു. അനസ്. ചിം. ആക്റ്റ 1069, 89–97 (2019).
ചെസ്നട്ട്, എസ്എം & സാലിസ്ബറി, ജെജെ മയക്കുമരുന്ന് വികസനത്തിൽ യുഎച്ച്പിഎൽസിയുടെ പങ്ക്.ജെ. സെപ്റ്റംബർ. സയൻസ്.30(8), 1183-1190 (2007).
വു, എൻ. & ക്ലോസെൻ, എ.എം. ദ്രുത വേർതിരിവുകൾക്കായുള്ള അൾട്രാഹൈ പ്രഷർ ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയുടെ അടിസ്ഥാനപരവും പ്രായോഗികവുമായ വശങ്ങൾ.ജെ. സെപ്റ്റംബർ. സയൻസ്.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
റെൻ, എസ്എ & ടിചെലിറ്റ്ചെഫ്, പി. മയക്കുമരുന്ന് വികസനത്തിൽ അൾട്രാ-ഹൈ പെർഫോമൻസ് ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയുടെ പ്രയോഗം. ജെ. ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
ഗു, എച്ച്. തുടങ്ങിയവർ. എന്ററോവൈറസുകളുടെ കാര്യക്ഷമമായ ശുദ്ധീകരണത്തിനായി എണ്ണ-ഇൻ-വാട്ടർ ഹൈ ഇന്റേണൽ ഫേസ് എമൽഷനുകളിൽ നിന്ന് തയ്യാറാക്കിയ മോണോലിത്തിക് മാക്രോപോറസ് ഹൈഡ്രോജലുകൾ.കെമിക്കൽ.ബ്രിട്ടൻ.ജെ. 401, 126051 (2020).
ഷി, വൈ., സിയാങ്, ആർ., ഹോർവാത്ത്, സി. & വിൽക്കിൻസ്, ജെഎ പ്രോട്ടിയോമിക്സിൽ ദ്രാവക ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയുടെ പങ്ക്.ജെ. ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി.എ 1053(1-2), 27-36 (2004).
ഫെക്കെറ്റ്, എസ്., വീതേ, ജെ.-എൽ. & ഗില്ലാർമെ, ഡി. തെറാപ്പിക് പെപ്റ്റൈഡുകളുടെയും പ്രോട്ടീനുകളുടെയും റിവേഴ്‌സ്ഡ്-ഫേസ് ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി വേർതിരിവുകളിലെ ഉയർന്നുവരുന്ന പ്രവണതകൾ: സിദ്ധാന്തവും പ്രയോഗങ്ങളും. ജെ. ഫാർമസി.ബയോമെഡിക്കൽ സയൻസ്.അനസ്.69, 9-27 (2012).
ഗിലാർ, എം., ഒലിവോവ, പി., ഡാലി, എഇ & ഗെബ്ലർ, ജെസി. ഒന്നാമത്തെയും രണ്ടാമത്തെയും വേർതിരിക്കൽ അളവുകളിൽ വ്യത്യസ്ത pH മൂല്യങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ച് ഒരു RP-RP-HPLC സിസ്റ്റം ഉപയോഗിച്ച് പെപ്റ്റൈഡുകളുടെ ദ്വിമാന വേർതിരിക്കൽ.ജെ. സെപ്റ്റംബർ. സയൻസ്.28(14), 1694-1703 (2005).
ഫെലെറ്റി, എസ്. തുടങ്ങിയവർ. C18 ൽ താഴെയുള്ള 2 μm പൂർണ്ണമായും ഉപരിതലത്തിലും സുഷിരങ്ങളുള്ള കണികകൾ നിറഞ്ഞ ഉയർന്ന കാര്യക്ഷമതയുള്ള ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് നിരകളുടെ മാസ് ട്രാൻസ്ഫർ സവിശേഷതകളും ഗതികോർജ്ജ പ്രകടനവും പരിശോധിച്ചു. ജെ. സെപ്റ്റംബർ. സയൻസ്.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
പിയോവേസന, എസ്. തുടങ്ങിയവർ. സസ്യ ബയോആക്ടീവ് പെപ്റ്റൈഡുകളുടെ ഒറ്റപ്പെടൽ, തിരിച്ചറിയൽ, സാധൂകരണം എന്നിവയിലെ സമീപകാല പ്രവണതകളും വിശകലന വെല്ലുവിളികളും. അനസ്.ബയോളജിക്കൽ അനസ്.കെമിക്കൽ.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
മുള്ളർ, ജെ.ബി. തുടങ്ങിയവർ. ജീവന്റെ രാജ്യത്തിന്റെ പ്രോട്ടിയോമിക് ലാൻഡ്‌സ്‌കേപ്പ്. നേച്ചർ 582(7813), 592-596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
ഡെലൂക്ക, സി. തുടങ്ങിയവർ. തയ്യാറെടുപ്പ് ദ്രാവക ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി വഴി ചികിത്സാ പെപ്റ്റൈഡുകളുടെ ഡൗൺസ്ട്രീം പ്രോസസ്സിംഗ്. മോളിക്യൂൾ (ബേസൽ, സ്വിറ്റ്സർലൻഡ്) 26(15), 4688(2021).
യാങ്, വൈ. & ഗെങ്, എക്സ്. മിക്സഡ്-മോഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയും ബയോപോളിമറുകളിലേക്കുള്ള അതിന്റെ പ്രയോഗവും. ജെ. ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി. എ 1218(49), 8813–8825 (2011).
ഷാവോ, ജി., ഡോങ്, എക്സ്.-വൈ. & സൺ, വൈ. ലിഗാൻഡ്സ് ഫോർ മിക്സഡ്-മോഡ് പ്രോട്ടീൻ ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി: തത്വം, സ്വഭാവരൂപീകരണം, ഡിസൈൻ.ജെ. ബയോടെക്നോളജി.144(1), 3-11 (2009).