Nature.com സന്ദർശിച്ചതിന് നന്ദി.നിങ്ങൾ ഉപയോഗിക്കുന്ന ബ്രൗസർ പതിപ്പിന് CSS-ന് പരിമിതമായ പിന്തുണയേ ഉള്ളൂ. മികച്ച അനുഭവത്തിനായി, നിങ്ങൾ ഒരു അപ്‌ഡേറ്റ് ചെയ്‌ത ബ്രൗസർ (അല്ലെങ്കിൽ Internet Explorer-ൽ കോംപാറ്റിബിലിറ്റി മോഡ് ഓഫാക്കുക) ഉപയോഗിക്കാൻ ഞങ്ങൾ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു. അതിനിടയിൽ, തുടർ പിന്തുണ ഉറപ്പാക്കാൻ, ഞങ്ങൾ ശൈലികളും JavaScript ഇല്ലാതെ സൈറ്റ് പ്രദർശിപ്പിക്കും.
പോറസ് സിലിക്ക കണികകൾ മാക്രോപോറസ് കണങ്ങൾ ലഭിക്കുന്നതിന് ചില പരിഷ്‌ക്കരണങ്ങളോടെ ഒരു സോൾ-ജെൽ രീതി ഉപയോഗിച്ചാണ് തയ്യാറാക്കിയത്. N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) ഉപയോഗിച്ച് റിവേഴ്സിബിൾ അഡിഷൻ ഫ്രാഗ്മെന്റേഷൻ ചെയിൻ ട്രാൻസ്ഫർ (RAFT) പോളിമറൈസേഷനും സ്റ്റേഷൻ തയ്യാറാക്കാൻ Nimiderinephylystyencal (PMI) സ്റ്റൈറൈൻ സ്റ്റൈറൈൻ. ആരോ-ബോർ സ്റ്റെയിൻലെസ്സ് സ്റ്റീൽ നിരകൾ (100 × 1.8 മിമി ഐഡി) സ്ലറി പാക്കിംഗ് വഴി പായ്ക്ക് ചെയ്തു. അഞ്ച് പെപ്റ്റൈഡുകൾ (ഗ്ലൈ-ടൈർ, ഗ്ലൈ-ല്യൂ-ടൈർ, ഗ്ലൈ-ഗ്ലൈ-ടൈർ-ടൈർ-ഐർഗ്, ടി-ഗ്ലിൻ-അർഗ്, ടി. മാടോഗ്രാഫിക് പ്രകടനം), ഹ്യൂമൻ സെറം ആൽബുമിൻ (HAS) ന്റെ ട്രൈപ്സിൻ ദഹനം. ഒപ്റ്റിമൽ എല്യൂഷൻ സാഹചര്യങ്ങളിൽ, പെപ്റ്റൈഡ് മിശ്രിതത്തിന്റെ സൈദ്ധാന്തിക പ്ലേറ്റ് എണ്ണം 280,000 പ്ലേറ്റുകൾ/m² വരെ ഉയർന്നതാണ്. വികസിപ്പിച്ച കോളത്തിന്റെ വേർതിരിക്കൽ പ്രകടനത്തെ വാണിജ്യ ആസ്സെന്റിസ് എക്സ്പ്രസ്സുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, അത് വാണിജ്യ അസെന്റിസ് എക്സ്പ്രസ് RP-Amide നിരയുടെ വേർപിരിയൽ നിരയുടെ പ്രകടനം നിരീക്ഷിച്ചു. പ്രമേയവും.
സമീപ വർഷങ്ങളിൽ, ബയോഫാർമസ്യൂട്ടിക്കൽ വ്യവസായം വിപണി വിഹിതത്തിൽ ഗണ്യമായ വർദ്ധനവോടെ വികസിച്ചുകൊണ്ടിരിക്കുന്ന ഒരു ആഗോള വിപണിയായി മാറിയിരിക്കുന്നു. ബയോഫാർമസ്യൂട്ടിക്കൽ വ്യവസായത്തിന്റെ 1,2,3 സ്ഫോടനാത്മകമായ വളർച്ചയോടെ, പെപ്റ്റൈഡുകളുടെയും പ്രോട്ടീനുകളുടെയും വിശകലനം വളരെ ആവശ്യമാണ്. ടാർഗെറ്റ് പെപ്റ്റൈഡിന് പുറമേ, പെപ്റ്റൈഡ് സിന്തസിസിന്റെ ആവശ്യാനുസരണം നിരവധി മാലിന്യങ്ങൾ ഉത്പാദിപ്പിക്കപ്പെടുന്നു. ശരീരദ്രവങ്ങൾ, ടിഷ്യൂകൾ, കോശങ്ങൾ എന്നിവയിലെ പ്രോട്ടീനുകളുടെ വിശകലനവും സ്വഭാവരൂപീകരണവും വളരെ വെല്ലുവിളി നിറഞ്ഞ ജോലിയാണ്. എംഎസ് വിശകലനം, ഒരു നിശ്ചിത സമയത്ത് മാസ് സ്പെക്ട്രോമീറ്ററിലേക്ക് പ്രവേശിക്കുന്ന അനലിറ്റുകളുടെ എണ്ണം കുറയ്ക്കും4,5,6. കൂടാതെ, ലിക്വിഡ് ഫേസ് വേർപിരിയൽ സമയത്ത്, ഇടുങ്ങിയ പ്രദേശങ്ങളിൽ അനലിറ്റുകളെ കേന്ദ്രീകരിക്കാനും അതുവഴി ഈ വിശകലനങ്ങളെ കേന്ദ്രീകരിക്കാനും എംഎസ് ഡിറ്റക്ഷൻ സെൻസിറ്റിവിറ്റി മെച്ചപ്പെടുത്താനും കഴിയും.
റിവേഴ്സ്ഡ്-ഫേസ് ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി (ആർപി-എൽസി) പെപ്റ്റൈഡ് മിശ്രിതങ്ങളുടെ ശുദ്ധീകരണത്തിനും വേർതിരിക്കലിനും ഒക്ടാഡെസിൽ-മോഡിഫൈഡ് സിലിക്ക (ഒഡിഎസ്) ഉപയോഗിച്ച് സ്റ്റേഷണറി ഫേസ് 11,12,13 ആയി ഉപയോഗിക്കുന്നു. എന്നിരുന്നാലും, ആർപി സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടങ്ങൾ അവയുടെ പെപ്റ്റൈഡുകൾ, സവിശേഷ ഘടനകൾ, പ്രോട്ടീനുകൾ എന്നിവയുടെ തൃപ്തികരമായ വേർതിരിവ് നൽകുന്നില്ല. ഈ വിശകലനങ്ങളുമായി സംവദിക്കുന്നതിനും നിലനിർത്തുന്നതിനും പെപ്റ്റൈഡുകളും പ്രോട്ടീനുകളും വിശകലനം ചെയ്യുന്നതിനായി ആറി ഘട്ടങ്ങൾ ആവശ്യമാണ് പ്രോട്ടീൻ വേർതിരിവുകൾ17,18,19,20,21. മിക്സഡ്-മോഡ് സ്റ്റേഷണറി ഫേസുകൾ (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, പോളാർ ഇന്റർകലേഷൻ/RPLC) പോളാർ, നോൺ-പോളാർ ഗ്രൂപ്പുകളുടെ സാന്നിധ്യം കാരണം പെപ്റ്റൈഡ്, പ്രോട്ടീൻ വേർതിരിവിന് അനുയോജ്യമാണ്. പോളാർ, നോൺ-പോളാർ അനലിറ്റുകൾക്ക് ലാർ ഗ്രൂപ്പുകൾ നല്ല വേർതിരിക്കൽ ശക്തിയും അതുല്യമായ സെലക്റ്റിവിറ്റിയും കാണിക്കുന്നു, കാരണം വേർതിരിക്കൽ വിശകലനവും നിശ്ചല ഘട്ടവും തമ്മിലുള്ള പ്രതിപ്രവർത്തനത്തെ ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നു.മൾട്ടിമോഡൽ ഇന്ററാക്ഷനുകൾ 29, 30, 31, 32. സമീപകാലത്ത്, ഷാങ് തുടങ്ങിയവർ.30 ഒരു ഡോഡെസൈൽ-ടെർമിനേറ്റഡ് പോളിമൈൻ സ്റ്റേഷണറി ഫേസ് തയ്യാറാക്കി, ഹൈഡ്രോകാർബണുകൾ, ആന്റീഡിപ്രസന്റുകൾ, ഫ്ലേവനോയ്ഡുകൾ, ന്യൂക്ലിയോസൈഡുകൾ, ഈസ്ട്രജൻ, കൂടാതെ മറ്റ് നിരവധി വിശകലനങ്ങൾ വിജയകരമായി വേർതിരിച്ചു. പോളാർ ഇന്റർകലേറ്ററിന് ധ്രുവവും ധ്രുവീയമല്ലാത്തതുമായ ഗ്രൂപ്പുകളുണ്ട്, അതിനാൽ ഇത് പെപ്റ്റൈഡുകളേയും ഹൈഡ്രോഫോബ് പ്രോട്ടീനുകളേയും വേർതിരിക്കാൻ ഉപയോഗിക്കാം. ide-എംബെഡഡ് C18 നിരകൾ) വാണിജ്യപരമായി Ascentis Express RP-Amide നിരകൾ എന്ന പേരിൽ ലഭ്യമാണ്, എന്നാൽ ഈ നിരകൾ amine 33 ന്റെ വിശകലനത്തിനായി മാത്രമാണ് ഉപയോഗിക്കുന്നത്.
നിലവിലെ പഠനത്തിൽ, എച്ച്എസ്എയുടെ പെപ്റ്റൈഡുകളും ട്രൈപ്സിൻ ഡൈജസ്റ്റുകളും വേർതിരിക്കുന്നതിനായി ഒരു പോളാർ-എംബഡഡ് സ്റ്റേഷണറി ഫേസ് (എൻ-ഫിനൈൽമലീമൈഡ്-എംബഡഡ് പോളിസ്റ്റൈറൈൻ) തയ്യാറാക്കി വിലയിരുത്തി. താഴെ പറയുന്ന തന്ത്രം ഉപയോഗിച്ചാണ് സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടം തയ്യാറാക്കിയത്. ലൈക്കോൾ (PEG), TMOS, വാട്ടർ അസറ്റിക് ആസിഡ്, വലിയ സുഷിര വലുപ്പമുള്ള സിലിക്ക കണങ്ങൾ തയ്യാറാക്കുന്നതിനായി ക്രമീകരിച്ചു. രണ്ടാമതായി, ഒരു പുതിയ ലിഗാൻഡ്, phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate, സിലിക്ക കണങ്ങളെ ഉൽപ്പാദിപ്പിക്കാൻ ഉപയോഗിച്ചു. ഐഡി) ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്ത പാക്കിംഗ് സ്കീം ഉപയോഗിക്കുന്നു. കോളത്തിനുള്ളിൽ ഒരു ഏകതാനമായ കിടക്ക രൂപപ്പെട്ടിട്ടുണ്ടെന്ന് ഉറപ്പാക്കാൻ മെക്കാനിക്കൽ വൈബ്രേഷനുമായി കോളം പാക്കിംഗ് സഹായിക്കുന്നു. അഞ്ച് പെപ്റ്റൈഡുകൾ അടങ്ങിയ പെപ്റ്റൈഡ് മിശ്രിതങ്ങളുടെ പാക്ക് ചെയ്ത കോളം വേർതിരിക്കൽ വിലയിരുത്തുക;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin), ട്രൈപ്‌സിൻ ഡൈജസ്റ്റ് ഓഫ് ഹ്യൂമൻ സെറം ആൽബുമിൻ (HAS). പെപ്റ്റൈഡ് മിശ്രിതവും ട്രൈപ്‌സിൻ ഡൈജസ്റ്റും എച്ച്എസ്എയുടെ നല്ല റെസല്യൂഷനും എച്ച്എസ്എയുടെ എക്‌സ്‌പ്രസ് ഡൈജസ്റ്റും വേർതിരിക്കുന്നതിന് മികച്ച റെസല്യൂഷനോട് കൂടിയ പ്രകടനം നിരീക്ഷിച്ചു. RP-Amide കോളം. PMP കോളത്തിൽ പെപ്റ്റൈഡുകളും പ്രോട്ടീനുകളും നന്നായി പരിഹരിച്ചിരിക്കുന്നതായി നിരീക്ഷിച്ചു, ഇത് Ascentis Express RP-Amide നിരയേക്കാൾ കൂടുതൽ കാര്യക്ഷമമായിരുന്നു.
PEG (പോളീത്തിലീൻ ഗ്ലൈക്കോൾ), യൂറിയ, അസറ്റിക് ആസിഡ്, ട്രൈമെത്തോക്സി ഓർത്തോസിലിക്കേറ്റ് (TMOS), ട്രൈമീഥൈൽ ക്ലോറോസിലെയ്ൻ (TMCS), ട്രിപ്സിൻ, ഹ്യൂമൻ സെറം ആൽബുമിൻ (HSA), അമോണിയം ക്ലോറൈഡ്, യൂറിയ, ഹെക്സെയ്ൻ മെഥിൽഡിസിലാസെയ്ൻ (HMDS), മെത്തക്രൈലോയ്ൽ-പെർസോ- ക്ലോറൈഡ് (, MCyloyx-4. ide (BPO), HPLC ഗ്രേഡ് അസെറ്റോണിട്രൈൽ (ACN), മെഥനോൾ, 2-പ്രൊപ്പനോൾ, അസെറ്റോൺ എന്നിവ സിഗ്മ-ആൽഡ്രിച്ചിൽ നിന്ന് (സെന്റ് ലൂയിസ്, MO, യുഎസ്എ) വാങ്ങിയതാണ്.
യൂറിയ (8 ഗ്രാം), പോളിയെത്തിലീൻ ഗ്ലൈക്കോൾ (8 ഗ്രാം), 0.01 N അസറ്റിക് ആസിഡ് 8 മില്ലി എന്നിവയുടെ ഒരു മിശ്രിതം 10 മിനിറ്റ് ഇളക്കി, തുടർന്ന് 24 മില്ലി ടിഎംഒഎസ് ഐസ്-തണുത്ത അവസ്ഥയിൽ ഇതിലേക്ക് ചേർത്തു. പ്രതികരണ മിശ്രിതം 40 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 6 മണിക്കൂർ ചൂടാക്കി, തുടർന്ന് 120 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 120 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ വെള്ളം ഒഴിച്ചു. ഐഡിയൽ മെറ്റീരിയൽ 70 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 12 മണിക്കൂർ ഉണക്കി. ഉണക്കിയ മൃദുവായ പിണ്ഡം അടുപ്പത്തുവെച്ചു മിനുസമാർന്ന നിലത്ത് 550 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 12 മണിക്കൂർ കണക്കാക്കി.
പ്രീ-സിന്തസൈസ്ഡ് ലിഗാൻഡ് ഫിനൈൽമലൈമൈഡ്-മീഥൈൽവിനൈലിസോസയനേറ്റ് (പിസിഎംപി) ഉപയോഗിച്ച് സിലിക്ക കണങ്ങളുടെ ഉപരിതല പരിഷ്ക്കരണവും സ്റ്റൈറീൻ ഉപയോഗിച്ച് റേഡിയൽ പോളിമറൈസേഷനും ഉപയോഗിച്ച്, ഒരു ധ്രുവഗ്രൂപ്പ് അടങ്ങിയ സംയുക്തം തയ്യാറാക്കി.അഗ്രഗേറ്റുകൾക്കും പോളിസ്റ്റൈറൈൻ ചങ്ങലകൾക്കുമുള്ള സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടം. തയ്യാറാക്കൽ പ്രക്രിയ താഴെ വിവരിച്ചിരിക്കുന്നു.
N-phenylmaleimide (200 mg), methyl vinyl isocyanate (100 mg) എന്നിവ ഡ്രൈ ടോള്യൂനിൽ ലയിപ്പിച്ചു, കൂടാതെ 0.1 mL 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) പ്രതികരണ ഫ്ലാസ്കിൽ ചേർത്തു. 3 മണിക്കൂർ, ഫിൽട്ടർ ചെയ്ത് 40 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 3 മണിക്കൂർ അടുപ്പത്തുവെച്ചു ഉണക്കുക.
ഉണക്കിയ സിലിക്ക കണികകൾ (2 ഗ്രാം) ഡ്രൈ ടോള്യൂനിൽ (100 മില്ലി) ചിതറിക്കിടത്തി, 500 മില്ലി വൃത്താകൃതിയിലുള്ള താഴത്തെ ഫ്ലാസ്കിൽ 10 മിനിറ്റ് നേരം ഇളക്കി സോണിക്കേറ്റ് ചെയ്തു. പിഎംസിപി (10 മില്ലിഗ്രാം) ടോലുയിനിൽ ലയിപ്പിച്ച് പ്രതികരണ ഫ്ലാസ്കിലേക്ക് ഡ്രോപ്പ് വൈസായി ചേർത്തു. 3 മണിക്കൂർ 60°C. തുടർന്ന് PMCP-ബന്ധിത സിലിക്ക കണങ്ങൾ (100 g) toluene (200 ml) ൽ ലയിപ്പിക്കുകയും 4-hydroxy-TEMPO (2 mL) 100 µL dibutyltin dilaurate ന്റെ സാന്നിധ്യത്തിൽ ഒരു ഉൽപ്രേരകമായി ചേർക്കുകയും ചെയ്തു.
സ്റ്റൈറൈൻ (1 മില്ലി), ബെൻസോയിൽ പെറോക്സൈഡ് ബിപിഒ (0.5 മില്ലി), TEMPO-PMCP- ഘടിപ്പിച്ച സിലിക്ക കണങ്ങൾ (1.5 ഗ്രാം) എന്നിവ ടോള്യൂനിൽ ചിതറിക്കിടക്കുകയും നൈട്രജൻ ഉപയോഗിച്ച് ശുദ്ധീകരിക്കുകയും ചെയ്തു. സ്റ്റൈറീനിന്റെ പോളിമറൈസേഷൻ 100 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ നടത്തുകയും 12 മണിക്കൂറിനേക്കാൾ 60 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ ഉൽപ്പന്നം 60 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ ഉണക്കുകയും ചെയ്തു. ചിത്രം 1-ൽ.
സാമ്പിളുകൾ 10-3 Torr-ൽ താഴെയുള്ള ശേഷിക്കുന്ന മർദ്ദം ലഭിക്കുന്നതിന് 1 മണിക്കൂർ 393 K-ൽ ഡീഗാസ് ചെയ്തു. P/P0 = 0.99 എന്ന ആപേക്ഷിക മർദ്ദത്തിൽ N2 ന്റെ അളവ് മൊത്തം സുഷിരങ്ങളുടെ അളവ് നിർണ്ണയിക്കാൻ ഉപയോഗിച്ചു. , ജപ്പാൻ).ഡ്രൈഡ് സാമ്പിളുകൾ (ബെയർ സിലിക്ക, ലിഗാൻഡ്-ബോണ്ടഡ് സിലിക്ക കണികകൾ) പശ കാർബൺ ടേപ്പ് ഉപയോഗിച്ച് ഒരു അലുമിനിയം നിരയിൽ സ്ഥാപിച്ചു. ഒരു Q150T സ്പട്ടർ കോട്ടർ ഉപയോഗിച്ച് സാമ്പിളുകളിൽ സ്വർണ്ണം പൂശി, കൂടാതെ 5 nm Au ലെയർ സാമ്പിളുകളിൽ നിക്ഷേപിച്ചു. tham, MA, USA) Flash EA1112 എലമെന്റൽ അനലൈസർ മൂലക വിശകലനത്തിനായി ഉപയോഗിച്ചു. A Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 കണികാ വലിപ്പം അനലൈസർ കണികാ വലിപ്പം വിതരണം ലഭിക്കാൻ ഉപയോഗിച്ചു. നഗ്നമായ സിലിക്ക കണങ്ങളും ലിഗാൻഡ്-ബോണ്ടഡ് സിലിക്ക കണങ്ങളും 5 മിമി, 5 മി. , 5 മിനിറ്റ് ചുഴലിക്കാറ്റ്, കൂടാതെ Mastersizer ന്റെ ഒപ്റ്റിക്കൽ ബെഞ്ചിൽ സ്ഥാപിച്ചിരിക്കുന്നു. തെർമോഗ്രാവിമെട്രിക് വിശകലനം 30 മുതൽ 800 ° C വരെ താപനില പരിധിയിൽ മിനിറ്റിന് 5 ° C എന്ന നിരക്കിൽ നടത്തി.
സ്ലറി പാക്കിംഗ് രീതി ഉപയോഗിച്ച്, Ref-ൽ ഉപയോഗിച്ചിരിക്കുന്ന അതേ നടപടിക്രമം പ്രയോഗിച്ച് അളവുകളുടെ (100 × 1.8 mm ഐഡി) സ്‌ഫടിക പാളികളുള്ള സ്റ്റെയിൻലെസ് സ്റ്റീൽ ഇടുങ്ങിയ-ബോർ നിരകൾ പാക്ക് ചെയ്‌തു.31. ഒരു സ്ലറി പാക്കറുമായി (Alltech Deerfield, IL, USA) 1 µm ഫ്രിറ്റ് അടങ്ങുന്ന ഔട്ട്‌ലെറ്റ് ഫിറ്റിംഗ് ഉള്ള ഒരു സ്റ്റെയിൻലെസ്സ് സ്റ്റീൽ കോളം (ഗ്ലാസ്-ലൈനഡ്, 100 × 1.8 mm ഐഡി) ഒരു സ്റ്റേഷണറി ഫേസ് സ്ലറി തയ്യാറാക്കുക. സ്ലറി ലായകമായും പ്രൊപ്പല്ലിംഗ് ലായകമായും ഉപയോഗിക്കുന്നു. 10 മിനിറ്റ് 100 MP, 15 മിനിറ്റിന് 80 MP, 30 മിനിറ്റ് 60 MP എന്നിങ്ങനെയുള്ള മർദ്ദം പ്രയോഗിച്ച് നിര തുടർച്ചയായി പൂരിപ്പിക്കുക. പാക്കിംഗ് സമയത്ത്, രണ്ട് GC കോളം ഷേക്കറുകൾ ഉപയോഗിച്ച് മെക്കാനിക്കൽ വൈബ്രേഷൻ പ്രയോഗിച്ചു. കോളത്തിനുള്ളിൽ എന്തെങ്കിലും കേടുപാടുകൾ സംഭവിക്കാതിരിക്കാൻ. സ്ലറി പാക്കിംഗ് യൂണിറ്റിൽ നിന്ന് കോളം വിച്ഛേദിച്ച് അതിന്റെ പ്രകടനം പരിശോധിക്കുന്നതിന് ഇൻലെറ്റിലേക്കും LC സിസ്റ്റത്തിലേക്കും മറ്റൊരു ഫിറ്റിംഗ് ബന്ധിപ്പിക്കുക.
ഒരു LC പമ്പ് (10AD Shimadzu, ജപ്പാൻ), 50nL ഇഞ്ചക്ഷൻ ലൂപ്പോടുകൂടിയ ഇൻജക്റ്റർ (Valco (USA) C14 W.05), മെംബ്രൻ ഡീഗാസർ (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS കാപ്പിലറി വിൻഡോ നിർമ്മിച്ചു, പ്രത്യേക µLC ഉപകരണ ഡിറ്റക്ടറും (UV-2075) വളരെ ഇടുങ്ങിയതുമായ µLC ഉപകരണ ഡിറ്റക്ടറും കോളൻസ്-2075 അധിക കോളം ബാൻഡ് വിശാലമാക്കുന്നതിന്റെ ഫലത്തെ വിലയിരുത്തുക.പാക്കേജിംഗിന് ശേഷം, കാപ്പിലറികൾ (50 μm ഐഡി 365 ഉം കുറയ്ക്കുന്ന യൂണിയൻ കാപ്പിലറികളും (50 μm) കുറയ്ക്കുന്ന യൂണിയന്റെ 1/16″ ഔട്ട്‌ലെറ്റിൽ ഇൻസ്റ്റാൾ ചെയ്തു. Multichro 2000-ലെ Multichro 2000 ടെസ്റ്റ് സോഫ്‌റ്റ്‌വെയറായ Chromatographic പ്രോസസ്സിംഗും Multichro 2000-ലെ Multichro 2000 ടെസ്റ്റ് സോഫ്‌റ്റ്‌വെയറാണ് ഉപയോഗിച്ചത്. ഗ്രാഫിക് ഡാറ്റ OriginPro8 (Northampton, MA) വിശകലനം ചെയ്തു.
ഹ്യൂമൻ സെറമിൽ നിന്നുള്ള ആൽബുമിൻ, ലയോഫിലൈസ്ഡ് പൗഡർ, ≥ 96% (അഗറോസ് ജെൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ്) 3 മില്ലിഗ്രാം ട്രിപ്സിൻ (1.5 മില്ലിഗ്രാം), 4.0 എം യൂറിയ (1 മില്ലി), 0.2 എം അമോണിയം ബൈകാർബണേറ്റ് (1 എംഎൽ) എന്നിവ കലർത്തി. ലായനി 10 മിനിറ്റ് ഇളക്കി 6 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 3 മണിക്കൂർ 7 മണിക്കൂർ കുളിമുറിയിൽ സൂക്ഷിക്കുക. 1% TFA. ലായനി ഫിൽട്ടർ ചെയ്ത് 4 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ താഴെ സൂക്ഷിക്കുക.
പെപ്റ്റൈഡ് മിശ്രിതങ്ങളുടെയും എച്ച്എസ്എ ട്രൈപ്സിൻ ഡൈജസ്റ്റുകളുടെയും വേർതിരിവ് പിഎംപി കോളങ്ങളിൽ വെവ്വേറെ വിലയിരുത്തി. പിഎംപി കോളം ഉപയോഗിച്ച് എച്ച്എസ്എയുടെ പെപ്റ്റൈഡ് മിശ്രിതവും ട്രൈപ്സിൻ ഡൈജസ്റ്റും വേർതിരിക്കുന്നത് പരിശോധിക്കുക, ഫലങ്ങൾ അസെന്റിസ് എക്സ്പ്രസ് ആർപി-അമൈഡ് നിരയുമായി താരതമ്യം ചെയ്യുക. സൈദ്ധാന്തിക പ്ലേറ്റ് നമ്പർ ഇനിപ്പറയുന്ന രീതിയിൽ കണക്കാക്കുന്നു:
നഗ്നമായ സിലിക്ക കണങ്ങളുടെയും ലിഗാൻഡ്-ബോണ്ടഡ് സിലിക്ക കണങ്ങളുടെയും SEM ചിത്രങ്ങൾ FIG-ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു.2 .നഗ്നമായ സിലിക്ക കണങ്ങളുടെ (A, B) SEM ചിത്രങ്ങൾ കാണിക്കുന്നത്, നമ്മുടെ മുൻ പഠനങ്ങളിൽ നിന്ന് വ്യത്യസ്തമായി, ഈ കണങ്ങൾ ഗോളാകൃതിയിലുള്ളവയാണ്, അതിൽ കണികകൾ നീളമേറിയതോ ക്രമരഹിതമായ സമമിതിയോ ഉള്ളവയാണ് സിലിക്ക കണങ്ങൾ.
നഗ്നമായ സിലിക്ക കണങ്ങളുടെയും (എ, ബി) ലിഗാൻഡ്-ബോണ്ടഡ് സിലിക്ക കണങ്ങളുടെയും (സി, ഡി) ഇലക്ട്രോൺ മൈക്രോസ്കോപ്പ് ചിത്രങ്ങൾ സ്കാൻ ചെയ്യുന്നു.
നഗ്നമായ സിലിക്ക കണങ്ങളുടെയും ലിഗാൻഡ്-ബോണ്ടഡ് സിലിക്ക കണങ്ങളുടെയും കണികാ വലിപ്പ വിതരണങ്ങൾ ചിത്രം 3(A) ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു. വോളിയം അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള കണികാ വലിപ്പ വിതരണ വളവുകൾ രാസ പരിഷ്കരണത്തിന് ശേഷം സിലിക്ക കണങ്ങളുടെ വലിപ്പം വർദ്ധിച്ചതായി കാണിക്കുന്നു (ചിത്രം. 3A). .5), PMP യുടെ 3.36 μm ആണ്, ഞങ്ങളുടെ മുൻ പഠനത്തെ അപേക്ഷിച്ച് പരസ്യം (0.5) മൂല്യം 3.05 μm (പോളിസ്റ്റൈറൈൻ-ബൗണ്ട് സിലിക്ക കണികകൾ) 34. ഈ ബാച്ചിന് ഞങ്ങളുടെ മുൻ പഠനത്തെ അപേക്ഷിച്ച് ഒരു ഇടുങ്ങിയ കണികാ വലിപ്പം വിതരണമുണ്ടായിരുന്നു, കാരണം PEG, യൂറിയ, acetic ആസിഡ് എന്നിവയുടെ വലിയ അളവിലുള്ള കണികാ ആസിഡാണ് പി.എം.പി. പോളിസ്റ്റൈറൈൻ ബന്ധിത സിലിക്ക കണികാ ഘട്ടം ഞങ്ങൾ മുമ്പ് പഠിച്ചു. ഇതിനർത്ഥം സ്റ്റൈറീൻ ഉപയോഗിച്ച് സിലിക്ക കണങ്ങളുടെ ഉപരിതല പ്രവർത്തനക്ഷമത സിലിക്ക പ്രതലത്തിൽ ഒരു പോളിസ്റ്റൈറൈൻ പാളി (0.97 µm) മാത്രമേ നിക്ഷേപിച്ചിട്ടുള്ളൂ, അതേസമയം PMP ഘട്ടത്തിൽ പാളിയുടെ കനം 1.38 µm ആയിരുന്നു.
നഗ്നമായ സിലിക്ക കണങ്ങളുടെയും ലിഗാൻഡ്-ബൗണ്ട് സിലിക്ക കണങ്ങളുടെയും കണികാ വലിപ്പ വിതരണവും (A) സുഷിരവലിപ്പ വിതരണവും (B).
നിലവിലെ പഠനത്തിന്റെ സിലിക്ക കണങ്ങളുടെ സുഷിരങ്ങളുടെ വലിപ്പം, സുഷിരങ്ങളുടെ അളവ്, ഉപരിതല വിസ്തീർണ്ണം എന്നിവ പട്ടിക 1(ബി) ൽ നൽകിയിരിക്കുന്നു. നഗ്നമായ സിലിക്ക കണങ്ങളുടെയും ലിഗാൻഡ്-ബോണ്ടഡ് സിലിക്ക കണങ്ങളുടെയും PSD പ്രൊഫൈലുകൾ ചിത്രം 3 (B) ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു. ഫലങ്ങൾ ഞങ്ങളുടെ മുൻ പഠനവുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്താവുന്നതാണ്. ടേബിൾ 1(ബി) ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ രാസമാറ്റത്തിന് ശേഷം സുഷിരത്തിന്റെ വലിപ്പം 69 കുറയുന്നു, കൂടാതെ വക്രത്തിന്റെ മാറ്റം ചിത്രം 3(ബി) ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു.അതുപോലെ, രാസപരിഷ്കരണത്തിന് ശേഷം സിലിക്ക കണങ്ങളുടെ സുഷിരത്തിന്റെ അളവ് 0.67 ൽ നിന്ന് 0.58 cm3/g ആയി കുറഞ്ഞു. 4 m2/g).പട്ടിക 1(B) ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ, സിലിക്ക കണങ്ങളുടെ ഉപരിതല വിസ്തീർണ്ണം (m2/g) രാസമാറ്റത്തിന് ശേഷം 116 m2/g ൽ നിന്ന് 105 m2/g ആയി കുറഞ്ഞു.
നിശ്ചല ഘട്ടത്തിന്റെ മൂലക വിശകലനത്തിന്റെ ഫലങ്ങൾ പട്ടിക 2-ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു. നിലവിലെ സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടത്തിന്റെ കാർബൺ ലോഡിംഗ് 6.35% ആണ്, ഇത് ഞങ്ങളുടെ മുൻ പഠനത്തിന്റെ കാർബൺ ലോഡിംഗിനെ അപേക്ഷിച്ച് കുറവാണ് (പോളിസ്റ്റൈറൈൻ ബോണ്ടഡ് സിലിക്ക കണങ്ങൾ, യഥാക്രമം 7.93% 35, 10.21%) സ്റ്റൈറീൻ, ഫിനൈൽമലൈമൈഡ്-മെഥൈൽവിനൈലിസോസയനേറ്റ് (പിസിഎംപി), 4-ഹൈഡ്രോക്സി-ടെമ്പോ തുടങ്ങിയ ചില ധ്രുവീയ ലിഗാൻഡുകൾ ഉപയോഗിച്ചു.നിലവിലെ നിശ്ചല ഘട്ടത്തിലെ നൈട്രജൻ ഭാരം 2.21% ആണ്, ഇത് 0.1735 ഉം 0.85% ഉം ആണ്. phenylmaleimide-ലേക്ക്. അതുപോലെ, ഉൽപ്പന്നങ്ങളുടെ കാർബൺ ലോഡിംഗ് (4), (5) യഥാക്രമം 2.7% ഉം 2.9% ഉം ആയിരുന്നു, അതേസമയം അന്തിമ ഉൽപ്പന്നത്തിന്റെ (6) കാർബൺ ലോഡിംഗ് 6.35% ആയിരുന്നു, പട്ടിക 2 ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നത് പോലെ. ഭാരം കുറയുന്നത് PMP സ്റ്റേഷണറി ഫേസ് ഉപയോഗിച്ച് പരിശോധിച്ചു. TGA കർവ് 8-ൽ കാണിക്കുന്നു. കാർബൺ ലോഡിംഗുമായി (6.35%) നല്ല കരാർ, കാരണം ലിഗാൻഡുകളിൽ C മാത്രമല്ല N, O, H എന്നിവയും അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു.
പോളാർ ഫിനൈൽമലൈമൈഡ് ഗ്രൂപ്പുകളും വിനൈലിസോസയനേറ്റ് ഗ്രൂപ്പുകളും ഉള്ളതിനാൽ സിലിക്ക കണങ്ങളുടെ ഉപരിതല പരിഷ്ക്കരണത്തിനായി phenylmaleimide-methylvinylisocyanate ലിഗാൻഡ് തിരഞ്ഞെടുത്തു. വിനൈൽ ഐസോസയനേറ്റ് ഗ്രൂപ്പുകൾക്ക് റാഡിക്കൽ പോളിമറൈസേഷൻ വഴി സ്റ്റൈറീനുമായി കൂടുതൽ പ്രതിപ്രവർത്തിക്കാൻ കഴിയും. രണ്ടാമത്തെ കാരണം, ഒരു മിതമായ പോളിമറൈസേഷനും ഇലക്ട്രോസ്റ്റാറ്റിക് ഇന്ററാക്ഷനും ഇടയിൽ ഒരു മിതമായ പ്രതിപ്രവർത്തനവും ഇല്ലാത്ത ഒരു ഗ്രൂപ്പിനെ ഉൾപ്പെടുത്തുക എന്നതാണ്. നിശ്ചല ഘട്ടം, കാരണം phenylmaleimide മൊയ്‌റ്റിക്ക് സാധാരണ pH-ൽ വെർച്വൽ ചാർജ് ഇല്ല. സ്റ്റൈറിനിന്റെ ഒപ്റ്റിമൽ അളവും ഫ്രീ റാഡിക്കൽ പോളിമറൈസേഷന്റെ പ്രതിപ്രവർത്തന സമയവും ഉപയോഗിച്ച് സ്റ്റേഷണറി ഫേസിന്റെ ധ്രുവത നിയന്ത്രിക്കാനാകും. പ്രതികരണത്തിന്റെ അവസാന ഘട്ടം (ഫ്രീ-റാഡിക്കൽ പോളിമറൈസേഷൻ) നിർണായകമാണ്. സ്റ്റൈറീന്റെ അളവും പ്രതികരണ സമയവും സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടത്തിലെ കാർബൺ ലോഡിംഗ് വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു, തിരിച്ചും. സ്റ്റൈറീനിന്റെ വ്യത്യസ്ത സാന്ദ്രത ഉപയോഗിച്ച് തയ്യാറാക്കിയ എസ്പികൾക്ക് വ്യത്യസ്ത കാർബൺ ലോഡിംഗുകൾ ഉണ്ട്. വീണ്ടും, ഈ സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടങ്ങൾ സ്റ്റെയിൻലെസ് സ്റ്റീൽ നിരകളിലേക്ക് ലോഡുചെയ്ത് അവയുടെ ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് പ്രകടനം പരിശോധിക്കുക. ധ്രുവീയതയും നല്ല വിശകലന നിലനിർത്തലും.
മൊബൈൽ ഫേസ് ഉപയോഗിച്ച് PMP കോളം ഉപയോഗിച്ച് അഞ്ച് പെപ്റ്റൈഡ് മിശ്രിതങ്ങളും (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) വിലയിരുത്തി;60/40 (v/v) അസെറ്റോണിട്രൈൽ/ജലം (0.1% TFA) 80 μL/min എന്ന ഫ്ലോ റേറ്റിൽ. ഒപ്റ്റിമൽ എല്യൂഷൻ അവസ്ഥയിൽ, ഒരു കോളത്തിന് (100 × 1.8 mm id) സൈദ്ധാന്തിക പ്ലേറ്റ് നമ്പർ (N) 20,000 ± 100 ² ന് പ്ലേറ്റിന് 20,000 ± 100 ² മൂല്യം നൽകുന്നു. MP നിരകളും ക്രോമാറ്റോഗ്രാമുകളും ചിത്രം 5A-ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു. ഉയർന്ന ഫ്ലോ റേറ്റിൽ (700 μL/min) ഒരു PMP കോളത്തിലെ വേഗത്തിലുള്ള വിശകലനം, ഒരു മിനിറ്റിനുള്ളിൽ അഞ്ച് പെപ്റ്റൈഡുകൾ എല്യൂട്ടുചെയ്‌തു, N മൂല്യങ്ങൾ വളരെ മികച്ചതായിരുന്നു, ഒരു കോളത്തിന് 13,500 ± 330 (ചിത്രം 100 × 1.8 mm മുതൽ 0 വരെ പ്ലേറ്റ്) പുനരുൽപാദനക്ഷമത പരിശോധിക്കുന്നതിനായി ഒരേ വലുപ്പത്തിലുള്ള നിരകൾ (100 × 1.8 മിമി ഐഡി) മൂന്ന് വ്യത്യസ്ത പിഎംപി സ്റ്റേഷണറി ഫേസ് കൊണ്ട് പായ്ക്ക് ചെയ്തിട്ടുണ്ട്. ഓരോ നിരയുടെയും അനലിറ്റ് കോൺസൺട്രേഷൻ ഒപ്റ്റിമൽ എല്യൂഷൻ അവസ്ഥകളും സൈദ്ധാന്തിക പ്ലേറ്റുകളുടെ എണ്ണം N, നിലനിർത്തൽ സമയം എന്നിവയും ഉപയോഗിച്ച് രേഖപ്പെടുത്തി. പട്ടിക 3-ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ, വളരെ കുറഞ്ഞ %RSD മൂല്യങ്ങളുമായി നന്നായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു.
PMP കോളം (B), Ascentis Express RP-Amide കോളം (A) എന്നിവയിൽ പെപ്റ്റൈഡ് മിശ്രിതം വേർതിരിക്കുന്നത്;മൊബൈൽ ഘട്ടം 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP കോളം അളവുകൾ (100 × 1.8 mm id);അനലിറ്റിക്കൽ സംയുക്തങ്ങളുടെ എല്യൂഷൻ ക്രമം: 1 (ഗ്ലൈ-ടൈർ), 2 (ഗ്ലൈ-ല്യൂ-ടൈർ), 3 (ഗ്ലൈ-ഗ്ലൈ-ടൈർ-ആർഗ്), 4 (ടൈർ-ഇലെ-ഗ്ലൈ-സെർ-ആർഗ്), 5 (ല്യൂസിൻ) ആസിഡ് എൻകെഫാലിൻ)).
ഉയർന്ന പെർഫോമൻസ് ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയിൽ ഹ്യൂമൻ സെറം ആൽബുമിന്റെ ട്രൈപ്റ്റിക് ഡൈജസ്റ്റുകളെ വേർതിരിക്കുന്നതിന് ഒരു PMP കോളം (100 × 1.8 mm id) വിലയിരുത്തി. ചിത്രം 6-ലെ ക്രോമാറ്റോഗ്രാം സാമ്പിൾ നന്നായി വേർപെടുത്തിയിട്ടുണ്ടെന്നും റെസല്യൂഷൻ വളരെ മികച്ചതാണെന്നും കാണിക്കുന്നു. ക്രോമാറ്റോഗ്രാമിൽ (ചിത്രം 6) കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ, എച്ച്എസ്എ ദഹനം 17 പെപ്റ്റൈഡുകളുമായി ബന്ധപ്പെട്ട 17 കൊടുമുടികളായി വിഭജിക്കപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട്.
എച്ച്എസ്എയുടെ (100 × 1.8 എംഎം ഐഡി) ട്രൈപ്റ്റിക് ഡൈജസ്റ്റ് ഒരു പിഎംപി കോളത്തിൽ വേർതിരിക്കപ്പെട്ടു;ഒഴുക്ക് നിരക്ക് (100 µL/മിനിറ്റ്), മൊബൈൽ ഫേസ് 60/40 അസറ്റോണിട്രൈൽ/ജലം 0.1% TFA.
ഇവിടെ L എന്നത് കോളം നീളം, η എന്നത് മൊബൈൽ ഘട്ടത്തിന്റെ വിസ്കോസിറ്റി ആണ്, ΔP എന്നത് കോളം ബാക്ക് പ്രഷർ ആണ്, u എന്നത് മൊബൈൽ ഘട്ടത്തിന്റെ ലീനിയർ വേഗതയാണ്. PMP കോളത്തിന്റെ പെർമെബിലിറ്റി 2.5 × 10-14 m2 ആയിരുന്നു, ഫ്ലോ റേറ്റ് 25 μL/min ആയിരുന്നു, കൂടാതെ 60/40 v/v കോളത്തിന്റെ 1 എംപി. 8 എംഎം ഐഡി) ഞങ്ങളുടെ മുൻ പഠനത്തിന് സമാനമാണ്. കണികകൾ 5 μm കണങ്ങൾക്ക് 43. അതിനാൽ, PMP ഘട്ടത്തിന്റെ പ്രവേശനക്ഷമത 5 μm കോർ-ഷെൽ കണികകളുടേതിന് സമാനമാണ്.
ഇവിടെ Wx എന്നത് ക്ലോറോഫോം പായ്ക്ക് ചെയ്ത നിരയുടെ ഭാരമാണ്, Wy എന്നത് മെഥനോൾ നിറച്ച നിരയുടെ ഭാരമാണ്, ρ എന്നത് ലായകത്തിന്റെ സാന്ദ്രതയാണ്. മെഥനോൾ (ρ = 0.7866), ക്ലോറോഫോം (ρ = 1.484) എന്നിവയുടെ സാന്ദ്രത. ഞങ്ങൾ മുമ്പ് പഠിച്ച C18-യൂറിയ കോളങ്ങൾ 31, യഥാക്രമം 0.63 ഉം 0.55 ഉം ആയിരുന്നു. ഇതിനർത്ഥം യൂറിയ ലിഗാണ്ടുകളുടെ സാന്നിധ്യം നിശ്ചല ഘട്ടത്തിന്റെ പെർമാസബിലിറ്റി കുറയ്ക്കുന്നു എന്നാണ്. മറുവശത്ത്, PMP കോളത്തിന്റെ മൊത്തം പോറോസിറ്റി (100 × 1.8 mm id) PMP നിരയുടെ 0.60 നിരയുടെ പായ്ക്ക്ഡ് കോളം 1-ന്റെ CMP-നേക്കാൾ 0.60 കുറവാണ്. C18-തരം നിശ്ചല ഘട്ടങ്ങളിൽ C18 ലിഗാൻഡുകൾ സിലിക്ക കണങ്ങളുമായി ലീനിയർ ചെയിനുകളായി ഘടിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നു, അതേസമയം പോളിസ്റ്റൈറൈൻ-തരം സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടങ്ങളിൽ, താരതമ്യേന കട്ടിയുള്ള പോളിമർ പാളി അതിന് ചുറ്റും രൂപം കൊള്ളുന്നു. ഒരു സാധാരണ പരീക്ഷണത്തിൽ, കോളം പോറോസിറ്റി ഇങ്ങനെ കണക്കാക്കുന്നു:
ചിത്രം 7A,B ഒരേ എല്യൂഷൻ വ്യവസ്ഥകൾ (അതായത്, 60/40 ACN/H2O, 0.1% TFA) ഉപയോഗിച്ച് PMP നിരയും (100 × 1.8 mm id) Ascentis Express RP-Amide നിരയും (100 × 1.8 mm id) കാണിക്കുന്നു.) വാൻ ഡീംറ്റർ പ്ലോട്ടിന്റെ.തിരഞ്ഞെടുത്ത പെപ്റ്റൈഡ് മിശ്രിതങ്ങൾ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) 20 µL/ ൽ തയ്യാറാക്കിയിട്ടുണ്ട്. ) PMP കോളത്തിനും Ascentis Express RP-Amide നിരയ്ക്കും യഥാക്രമം 2.6 µm ഉം 3.9 µm ഉം ആയിരുന്നു. HETP മൂല്യങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത്, PMP കോളത്തിന്റെ (100 × 1.8 mm id) വേർതിരിക്കൽ കാര്യക്ഷമത വാണിജ്യപരമായി ലഭ്യമായ Ascentis Express mmid (100 RP-Am) കോളത്തിൽ (ചിത്രം 1. 1 എംഎംഐഡി) 1 എംഎംഐഡി കോളത്തേക്കാൾ മികച്ചതാണ്. 7(A) കാണിക്കുന്നത്, ഞങ്ങളുടെ മുമ്പത്തെ പഠനവുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, N മൂല്യം കുറയുന്നത് പ്രാധാന്യമർഹിക്കുന്നതല്ല. PMP കോളത്തിന്റെ (100 × 1.8 mm id) ഉയർന്ന വേർതിരിക്കൽ ദക്ഷത, Ascentis Express RP-Amide നിരയുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, കണങ്ങളുടെ ആകൃതി, വലുപ്പം, സങ്കീർണ്ണമായ കോളം പാക്കിംഗ് നടപടിക്രമങ്ങൾ എന്നിവയിലെ മെച്ചപ്പെടുത്തലുകളെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ളതാണ്.
(A) 0.1% TFA ഉള്ള 60/40 ACN/H2O-യിൽ PMP കോളം (100 × 1.8 mm id) ഉപയോഗിച്ച് വാൻ ഡീംറ്റർ പ്ലോട്ട് (HETP വേഴ്സസ് മൊബൈൽ ഫേസ് ലീനിയർ വെലോസിറ്റി) ഉപയോഗിച്ചു.(B) van Deemter പ്ലോട്ട് (HETP 1% മൊബൈൽ ഫേസ് ലീനിയർ വെലോസിറ്റി. എച്ച്ഇടിപി 1 എംഎംഐഡ് എക്‌സ്‌സൈഡ് 1 എംഎംഐഡി. 0.1% TFA ഉള്ള 60/40 ACN/H2O-ൽ.
ഉയർന്ന പെർഫോമൻസ് ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയിൽ സിന്തറ്റിക് പെപ്റ്റൈഡ് മിശ്രിതങ്ങളും ഹ്യൂമൻ സെറം ആൽബുമിൻ (എച്ച്എഎസ്) ട്രിപ്സിൻ ഡൈജസ്റ്റുകളും വേർതിരിക്കുന്നതിനായി ഒരു ധ്രുവത്തിൽ ഉൾച്ചേർത്ത പോളിസ്റ്റൈറൈൻ സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടം തയ്യാറാക്കുകയും വിലയിരുത്തുകയും ചെയ്തു. സിലിക്ക കണങ്ങൾ, നിശ്ചല ഘട്ടത്തിന്റെ നിയന്ത്രിത സംശ്ലേഷണം, സങ്കീർണ്ണമായ കോളം പാക്കിംഗ് എന്നിവയും. ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയിൽ s. ഭാവിയിൽ, പ്രോട്ടീനുകളുടെയും മോണോക്ലോണൽ ആന്റിബോഡികളുടെയും വേർതിരിക്കലിനായി PMP നിരകളും വിലയിരുത്തപ്പെടും.
ഫീൽഡ്, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. റിവേഴ്സ്ഡ് ഫേസ് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി ബൈ പെപ്റ്റൈഡ് സെപ്പറേഷൻ സിസ്റ്റങ്ങളെക്കുറിച്ചുള്ള ഗവേഷണം ഭാഗം I: ഒരു കോളം ക്യാരക്റ്ററൈസേഷൻ പ്രോട്ടോക്കോളിന്റെ വികസനം.ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al. സാംക്രമിക രോഗങ്ങളുടെ ചികിത്സയ്ക്കായി രൂപകൽപ്പന ചെയ്ത മെച്ചപ്പെടുത്തിയ സജീവ പെപ്റ്റൈഡുകൾ.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. സിന്തറ്റിക് തെറാപ്പിക് പെപ്റ്റൈഡുകൾ: സയൻസും മാർക്കറ്റും. ഡ്രഗ് ഡിസ്കവറി.15 (1-2) ഇന്ന്, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.00099.10099.
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി.എ 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. അഡ്വാൻസ്ഡ് ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി-മാസ് സ്പെക്ട്രോമെട്രി വിശാലമായ ടാർഗെറ്റുചെയ്‌ത മെറ്റബോളമിക്‌സ്, proteomics.anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019) എന്നിവയുടെ സംയോജനം പ്രാപ്‌തമാക്കുന്നു.
Chesnut, SM & Salisbury, JJ മയക്കുമരുന്ന് വികസനത്തിൽ UHPLC യുടെ പങ്ക്.സെപ്. ശാസ്ത്രം.30(8), 1183-1190 (2007).
വു, എൻസെപ്. ശാസ്ത്രം.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. മയക്കുമരുന്ന് വികസനത്തിൽ അൾട്രാ-ഹൈ പെർഫോമൻസ് ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫിയുടെ ആപ്ലിക്കേഷൻ.ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. എന്ററോവൈറസുകളുടെ കാര്യക്ഷമമായ ശുദ്ധീകരണത്തിനായി ഓയിൽ-ഇൻ-വാട്ടർ ഹൈ ഇന്റേണൽ ഫേസ് എമൽഷനുകളിൽ നിന്ന് തയ്യാറാക്കിയ മോണോലിത്തിക്ക് മാക്രോപോറസ് ഹൈഡ്രോജലുകൾ.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA പ്രോട്ടിയോമിക്സിൽ ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയുടെ പങ്ക്.J.ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി.എ 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L.& Guillarme, D. ചികിത്സാ പെപ്റ്റൈഡുകളുടെയും പ്രോട്ടീനുകളുടെയും റിവേഴ്സ്ഡ്-ഫേസ് ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി വേർതിരിവുകളിൽ ഉയർന്നുവരുന്ന പ്രവണതകൾ: സിദ്ധാന്തവും പ്രയോഗങ്ങളും.ജെ.Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC RP-RP-HPLC സിസ്റ്റം ഉപയോഗിച്ച് പെപ്റ്റൈഡുകളുടെ ദ്വിമാന വിഭജനം ഒന്നും രണ്ടും വേർതിരിക്കൽ അളവുകളിൽ വ്യത്യസ്ത pH മൂല്യങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ച്.സെപ്. ശാസ്ത്രം.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al. C18 sub-2 μm പൂർണ്ണമായും ഉപരിപ്ലവമായും പോറസ് കണങ്ങളാൽ നിറഞ്ഞ ഉയർന്ന കാര്യക്ഷമതയുള്ള ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് നിരകളുടെ മാസ് ട്രാൻസ്ഫർ സവിശേഷതകളും ചലനാത്മക പ്രകടനവും അന്വേഷിച്ചു.സെപ്. സയ.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al. സസ്യ ബയോആക്ടീവ് peptides.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/0202180180180180180180180180180180180180180180018000002018000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000018001800180180018002016
Mueller, JB et al.The proteomic landscape of the Kingdom of life.Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al.പ്രിപ്പറേറ്റീവ് ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി വഴിയുള്ള ചികിത്സാ പെപ്റ്റൈഡുകളുടെ ഡൗൺസ്ട്രീം പ്രോസസ്സിംഗ്. മോളിക്യൂൾ (ബാസൽ, സ്വിറ്റ്സർലൻഡ്) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. മിക്സഡ്-മോഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയും ബയോപോളിമറുകളിലേക്കുള്ള അതിന്റെ പ്രയോഗവും.J.ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി.എ 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. Ligands for mixed-mode പ്രോട്ടീൻ ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി: തത്വം, സ്വഭാവം, ഡിസൈൻ.J.ബയോടെക്നോളജി.144(1), 3-11 (2009).