Nature.com സന്ദർശിച്ചതിന് നന്ദി.നിങ്ങൾ ഉപയോഗിക്കുന്ന ബ്രൗസർ പതിപ്പിന് പരിമിതമായ CSS പിന്തുണയുണ്ട്.മികച്ച അനുഭവത്തിനായി, നിങ്ങൾ ഒരു അപ്‌ഡേറ്റ് ചെയ്‌ത ബ്രൗസർ ഉപയോഗിക്കാൻ ഞങ്ങൾ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു (അല്ലെങ്കിൽ Internet Explorer-ൽ അനുയോജ്യത മോഡ് പ്രവർത്തനരഹിതമാക്കുക).അതിനിടയിൽ, തുടർച്ചയായ പിന്തുണ ഉറപ്പാക്കാൻ, ഞങ്ങൾ ശൈലികളും JavaScript ഇല്ലാതെ സൈറ്റ് റെൻഡർ ചെയ്യും.
മയക്കുമരുന്ന് പരിശോധനയ്ക്കായി ഹൃദയത്തിന്റെ ശാരീരിക അന്തരീക്ഷം കൃത്യമായി പുനർനിർമ്മിക്കാൻ കഴിയുന്ന വിശ്വസനീയമായ ഇൻ വിട്രോ സിസ്റ്റത്തിന്റെ ആവശ്യകതയുണ്ട്.ഹ്യൂമൻ ഹാർട്ട് ടിഷ്യു കൾച്ചർ സിസ്റ്റങ്ങളുടെ പരിമിതമായ ലഭ്യത കാർഡിയാക് ഡ്രഗ് ഇഫക്റ്റുകളുടെ തെറ്റായ വ്യാഖ്യാനങ്ങളിലേക്ക് നയിച്ചു.ഇവിടെ, ഞങ്ങൾ ഒരു കാർഡിയാക് ടിഷ്യു കൾച്ചർ മോഡൽ (CTCM) വികസിപ്പിച്ചെടുത്തിട്ടുണ്ട്, അത് ഇലക്ട്രോ മെക്കാനിക്കലായി ഹാർട്ട് സ്ലൈസുകളെ ഉത്തേജിപ്പിക്കുകയും കാർഡിയാക് സൈക്കിളിന്റെ സിസ്റ്റോളിക്, ഡയസ്റ്റോളിക് ഘട്ടങ്ങളിൽ ഫിസിയോളജിക്കൽ സ്ട്രെച്ചിന് വിധേയമാക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.12 ദിവസത്തെ സംസ്കാരത്തിന് ശേഷം, ഈ സമീപനം ഹൃദയ വിഭാഗങ്ങളുടെ പ്രവർത്തനക്ഷമതയെ ഭാഗികമായി മെച്ചപ്പെടുത്തി, പക്ഷേ അവയുടെ ഘടനാപരമായ സമഗ്രത പൂർണ്ണമായും സംരക്ഷിച്ചില്ല.അതിനാൽ, ചെറിയ മോളിക്യൂൾ സ്ക്രീനിംഗിന് ശേഷം, ഞങ്ങളുടെ മീഡിയത്തിലേക്ക് 100 nM ട്രയോഡൊഥൈറോണിൻ (T3), 1 μM ഡെക്സമെതസോൺ (ഡെക്സ്) എന്നിവ ചേർത്ത് 12 ദിവസത്തേക്ക് വിഭാഗങ്ങളുടെ സൂക്ഷ്മഘടന നിലനിർത്തുന്നതായി ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി.T3/Dex ചികിത്സയുമായി ചേർന്ന്, CTCM സിസ്റ്റം ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ പ്രൊഫൈലുകൾ, പ്രവർത്തനക്ഷമത, ഉപാപചയ പ്രവർത്തനങ്ങൾ, ഘടനാപരമായ സമഗ്രത എന്നിവ 12 ദിവസത്തേക്ക് ഫ്രഷ് ഹാർട്ട് ടിഷ്യുവിന്റെ അതേ തലത്തിൽ നിലനിർത്തി.കൂടാതെ, സംസ്കാരത്തിലെ കാർഡിയാക് ടിഷ്യു അമിതമായി നീട്ടുന്നത് ഹൈപ്പർട്രോഫിക് കാർഡിയാക് സിഗ്നലിംഗിനെ പ്രേരിപ്പിക്കുന്നു, ഇത് കാർഡിയാക് സ്ട്രെച്ച് വഴി പ്രേരിപ്പിക്കുന്ന ഹൈപ്പർട്രോഫിക് അവസ്ഥകളെ അനുകരിക്കാനുള്ള സിടിസിഎമ്മിന്റെ കഴിവിന് തെളിവ് നൽകുന്നു.ഉപസംഹാരമായി, CTCM-ന് ദീർഘകാലാടിസ്ഥാനത്തിൽ ഹൃദയത്തിന്റെ ശരീരശാസ്ത്രവും പാത്തോഫിസിയോളജിയും മാതൃകയാക്കാൻ കഴിയും, ഇത് വിശ്വസനീയമായ മയക്കുമരുന്ന് പരിശോധന സാധ്യമാക്കുന്നു.
ക്ലിനിക്കൽ ഗവേഷണത്തിന് മുമ്പ്, മനുഷ്യ ഹൃദയത്തിന്റെ ശാരീരിക അന്തരീക്ഷം കൃത്യമായി പുനർനിർമ്മിക്കാൻ കഴിയുന്ന വിശ്വസനീയമായ ഇൻ വിട്രോ സിസ്റ്റങ്ങൾ ആവശ്യമാണ്.അത്തരം സംവിധാനങ്ങൾ മെക്കാനിക്കൽ സ്ട്രെച്ച്, ഹൃദയമിടിപ്പ്, ഇലക്ട്രോഫിസിയോളജിക്കൽ ഗുണങ്ങൾ എന്നിവയെ അനുകരിക്കണം.മനുഷ്യന്റെ ഹൃദയത്തിലെ മരുന്നുകളുടെ ഫലങ്ങൾ പ്രതിഫലിപ്പിക്കുന്നതിൽ പരിമിതമായ വിശ്വാസ്യതയുള്ള കാർഡിയാക് ഫിസിയോളജിയുടെ സ്ക്രീനിംഗ് പ്ലാറ്റ്ഫോമായി മൃഗങ്ങളുടെ മോഡലുകൾ സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്നു1,2.ആത്യന്തികമായി, ഐഡിയൽ കാർഡിയാക് ടിഷ്യു കൾച്ചർ എക്‌സ്‌പെരിമെന്റൽ മോഡൽ (CTCM) മനുഷ്യ ഹൃദയത്തിന്റെ ശരീരശാസ്ത്രവും പാത്തോഫിസിയോളജിയും കൃത്യമായി പുനർനിർമ്മിക്കുന്ന, വിവിധ ചികിത്സാ, ഫാർമക്കോളജിക്കൽ ഇടപെടലുകൾക്ക് വളരെ സെൻസിറ്റീവ് ആയ ഒരു മാതൃകയാണ്3.അത്തരമൊരു സംവിധാനത്തിന്റെ അഭാവം ഹൃദയസ്തംഭനത്തിനുള്ള പുതിയ ചികിത്സകളുടെ കണ്ടെത്തലിനെ പരിമിതപ്പെടുത്തുന്നു, കൂടാതെ വിപണിയിൽ നിന്ന് പുറത്തുകടക്കുന്നതിനുള്ള പ്രധാന കാരണമായി മയക്കുമരുന്ന് കാർഡിയോടോക്സിസിറ്റിയിലേക്ക് നയിച്ചു.
കഴിഞ്ഞ ദശകത്തിൽ, എട്ട് നോൺ-കാർഡിയോവാസ്കുലർ മരുന്നുകൾ ക്ലിനിക്കൽ ഉപയോഗത്തിൽ നിന്ന് പിൻവലിച്ചു, കാരണം അവ ക്യുടി ഇടവേള നീട്ടുന്നതിന് കാരണമാകുന്നു, ഇത് വെൻട്രിക്കുലാർ ആർറിഥ്മിയയിലേക്കും പെട്ടെന്നുള്ള മരണത്തിലേക്കും നയിക്കുന്നു7.അതിനാൽ, ഹൃദയ സംബന്ധമായ ഫലപ്രാപ്തിയും വിഷാംശവും വിലയിരുത്തുന്നതിന് വിശ്വസനീയമായ പ്രീക്ലിനിക്കൽ സ്ക്രീനിംഗ് തന്ത്രങ്ങളുടെ ആവശ്യകത വർദ്ധിച്ചുകൊണ്ടിരിക്കുകയാണ്.ഡ്രഗ് സ്ക്രീനിംഗിലും വിഷാംശ പരിശോധനയിലും മനുഷ്യൻ-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് പ്ലൂറിപോട്ടന്റ് സ്റ്റെം സെൽ-ഡെറൈവ്ഡ് കാർഡിയോമയോസൈറ്റുകളുടെ (hiPS-CM) സമീപകാല ഉപയോഗം ഈ പ്രശ്നത്തിന് ഒരു ഭാഗിക പരിഹാരം നൽകുന്നു.എന്നിരുന്നാലും, hiPS-CM-കളുടെ പക്വതയില്ലാത്ത സ്വഭാവവും കാർഡിയാക് ടിഷ്യുവിന്റെ മൾട്ടിസെല്ലുലാർ സങ്കീർണ്ണതയുടെ അഭാവവും ഈ രീതിയുടെ പ്രധാന പരിമിതികളാണ്.സ്വതസിദ്ധമായ സങ്കോചങ്ങൾ ആരംഭിച്ചതിന് തൊട്ടുപിന്നാലെ കാർഡിയാക് ടിഷ്യു ഹൈഡ്രോജലുകൾ രൂപപ്പെടുത്തുന്നതിനും കാലക്രമേണ വൈദ്യുത ഉത്തേജനം ക്രമേണ വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിനും ആദ്യകാല ഹൈപിഎസ്-സിഎം ഉപയോഗിച്ച് ഈ പരിമിതി ഭാഗികമായി മറികടക്കാൻ കഴിയുമെന്ന് സമീപകാല പഠനങ്ങൾ തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട്.എന്നിരുന്നാലും, ഈ hiPS-CM മൈക്രോ ടിഷ്യൂകൾക്ക് മുതിർന്ന മയോകാർഡിയത്തിന്റെ പക്വമായ ഇലക്ട്രോഫിസിയോളജിക്കൽ, കോൺട്രാക്ടൈൽ ഗുണങ്ങൾ ഇല്ല.കൂടാതെ, ഹ്യൂമൻ കാർഡിയാക് ടിഷ്യുവിന് കൂടുതൽ സങ്കീർണ്ണമായ ഘടനയുണ്ട്, അതിൽ എൻഡോതെലിയൽ സെല്ലുകൾ, ന്യൂറോണുകൾ, സ്ട്രോമൽ ഫൈബ്രോബ്ലാസ്റ്റുകൾ എന്നിവയുൾപ്പെടെ വിവിധ സെൽ തരങ്ങളുടെ വൈവിധ്യമാർന്ന മിശ്രിതം ഉൾപ്പെടുന്നു, പ്രത്യേക സെല്ലുലാർ മാട്രിക്സ് പ്രോട്ടീനുകൾ പരസ്പരം ബന്ധിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നു.പ്രായപൂർത്തിയായ സസ്തനികളുടെ ഹൃദയത്തിലെ 11,12,13 നോൺ-കാർഡിയോമയോസൈറ്റ് ജനസംഖ്യയുടെ ഈ വൈവിധ്യം വ്യക്തിഗത കോശ തരങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ച് കാർഡിയാക് ടിഷ്യു മാതൃകയാക്കുന്നതിനുള്ള ഒരു പ്രധാന തടസ്സമാണ്.ഈ പ്രധാന പരിമിതികൾ ഫിസിയോളജിക്കൽ, പാത്തോളജിക്കൽ അവസ്ഥകളിൽ കേടുകൂടാത്ത മയോകാർഡിയൽ ടിഷ്യു സംസ്കരിക്കുന്നതിനുള്ള രീതികൾ വികസിപ്പിക്കുന്നതിന്റെ പ്രാധാന്യം ഊന്നിപ്പറയുന്നു.
മനുഷ്യ ഹൃദയത്തിന്റെ സംസ്ക്കരിച്ച നേർത്ത (300 µm) ഭാഗങ്ങൾ കേടുകൂടാത്ത മനുഷ്യ മയോകാർഡിയത്തിന്റെ ഒരു നല്ല മാതൃകയാണെന്ന് തെളിയിക്കപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട്.ഈ രീതി മനുഷ്യ ഹൃദയ കോശങ്ങൾക്ക് സമാനമായ പൂർണ്ണമായ 3D മൾട്ടിസെല്ലുലാർ സിസ്റ്റത്തിലേക്ക് പ്രവേശനം നൽകുന്നു.എന്നിരുന്നാലും, 2019 വരെ, സംസ്ക്കരിച്ച ഹൃദയ വിഭാഗങ്ങളുടെ ഉപയോഗം ഹ്രസ്വ (24 മണിക്കൂർ) സംസ്കാരത്തിന്റെ അതിജീവനത്താൽ പരിമിതപ്പെടുത്തിയിരുന്നു.ഫിസിക്കൽ-മെക്കാനിക്കൽ സ്ട്രെച്ചിന്റെ അഭാവം, എയർ-ലിക്വിഡ് ഇന്റർഫേസ്, കാർഡിയാക് ടിഷ്യുവിന്റെ ആവശ്യങ്ങളെ പിന്തുണയ്ക്കാത്ത ലളിതമായ മാധ്യമങ്ങളുടെ ഉപയോഗം എന്നിവയുൾപ്പെടെ നിരവധി ഘടകങ്ങളാണ് ഇതിന് കാരണം.2019-ൽ, നിരവധി ഗവേഷണ ഗ്രൂപ്പുകൾ കാർഡിയാക് ടിഷ്യു കൾച്ചർ സിസ്റ്റങ്ങളിൽ മെക്കാനിക്കൽ ഘടകങ്ങൾ ഉൾപ്പെടുത്തുന്നത് സംസ്കാര ആയുസ്സ് വർദ്ധിപ്പിക്കാനും കാർഡിയാക് എക്സ്പ്രഷൻ മെച്ചപ്പെടുത്താനും കാർഡിയാക് പാത്തോളജി അനുകരിക്കാനും കഴിയുമെന്ന് തെളിയിച്ചു.17-ഉം 18-ഉം രണ്ട് ഗംഭീരമായ പഠനങ്ങൾ കാണിക്കുന്നത് യൂണിയാക്സിയൽ മെക്കാനിക്കൽ ലോഡിംഗ് സംസ്കാര സമയത്ത് കാർഡിയാക് ഫിനോടൈപ്പിൽ നല്ല സ്വാധീനം ചെലുത്തുന്നു എന്നാണ്.എന്നിരുന്നാലും, ഈ പഠനങ്ങൾ കാർഡിയാക് സൈക്കിളിന്റെ ഡൈനാമിക് ത്രിമാന ഫിസിക്കോ-മെക്കാനിക്കൽ ലോഡിംഗ് ഉപയോഗിച്ചില്ല, കാരണം ഹൃദയ ഭാഗങ്ങളിൽ ഐസോമെട്രിക് ടെൻസൈൽ ഫോഴ്‌സ് 17 അല്ലെങ്കിൽ ലീനിയർ ഓക്സോട്ടോണിക് ലോഡിംഗ് 18 എന്നിവ ലോഡുചെയ്‌തു.ടിഷ്യു വലിച്ചുനീട്ടുന്നതിനുള്ള ഈ രീതികൾ പല ഹൃദയ ജീനുകളെ അടിച്ചമർത്തുന്നതിലേക്കോ അസാധാരണമായ സ്ട്രെച്ച് പ്രതികരണങ്ങളുമായി ബന്ധപ്പെട്ട ജീനുകളുടെ അമിത എക്സ്പ്രഷനിലേക്കോ കാരണമായി.ശ്രദ്ധേയമായി, Pitoulis et al.19 ഫോഴ്‌സ് ട്രാൻസ്‌ഡ്യൂസർ ഫീഡ്‌ബാക്കും ടെൻഷൻ ഡ്രൈവുകളും ഉപയോഗിച്ച് കാർഡിയാക് സൈക്കിൾ പുനർനിർമ്മാണത്തിനായി ഡൈനാമിക് ഹാർട്ട് സ്ലൈസ് കൾച്ചർ ബാത്ത് വികസിപ്പിച്ചെടുത്തു.ഈ സംവിധാനം വിട്രോ കാർഡിയാക് സൈക്കിൾ മോഡലിംഗിൽ കൂടുതൽ കൃത്യതയോടെ അനുവദിക്കുന്നുണ്ടെങ്കിലും, രീതിയുടെ സങ്കീർണ്ണതയും കുറഞ്ഞ ത്രൂപുട്ടും ഈ സിസ്റ്റത്തിന്റെ പ്രയോഗത്തെ പരിമിതപ്പെടുത്തുന്നു.ഞങ്ങളുടെ ലബോറട്ടറി അടുത്തിടെ ഇലക്‌ട്രിക്കൽ സ്റ്റിമുലേഷനും ഒപ്‌റ്റിമൈസ് ചെയ്‌ത മാധ്യമവും ഉപയോഗിച്ച് പോർസൈൻ, ഹ്യൂമൻ ഹാർട്ട് ടിഷ്യു എന്നിവയുടെ 6 ദിവസത്തേക്ക് 20,21 ദിവസത്തേക്ക് പ്രവർത്തനക്ഷമത നിലനിർത്താൻ ഒരു ലളിതമായ സംസ്‌കാര സംവിധാനം വികസിപ്പിച്ചെടുത്തിട്ടുണ്ട്.
നിലവിലെ കയ്യെഴുത്തുപ്രതിയിൽ, ഹൃദയ ചക്രത്തിലെ ത്രിമാന കാർഡിയാക് ഫിസിയോളജിയും പാത്തോഫിസിയോളജിക്കൽ ഡിസ്റ്റൻഷനും പുനഃപരിശോധിക്കാൻ ഹ്യൂമറൽ സൂചകങ്ങൾ ഉൾക്കൊള്ളുന്ന പോർസൈൻ ഹൃദയത്തിന്റെ ഭാഗങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ച് ഒരു കാർഡിയാക് ടിഷ്യു കൾച്ചർ മോഡൽ (CTCM) ഞങ്ങൾ വിവരിക്കുന്നു.പ്രീ-ക്ലിനിക്കൽ ഡ്രഗ് ടെസ്റ്റിംഗിനായി സസ്തനികളുടെ ഹൃദയത്തിന്റെ ഫിസിയോളജി/പാത്തോഫിസിയോളജി അനുകരിക്കുന്ന ചെലവ് കുറഞ്ഞതും മിഡ്-ത്രൂപുട്ട് കാർഡിയാക് സിസ്റ്റം നൽകുന്നതിലൂടെയും ഈ CTCM-ന് പ്രീ-ക്ലിനിക്കൽ ഡ്രഗ് പ്രവചനത്തിന്റെ കൃത്യത വർധിപ്പിക്കാൻ കഴിയും.
വിട്രോ 22,23,24 ലെ കാർഡിയോമയോസൈറ്റുകളുടെ പ്രവർത്തനം നിലനിർത്തുന്നതിൽ ഹീമോഡൈനാമിക് മെക്കാനിക്കൽ സിഗ്നലുകൾ നിർണായക പങ്ക് വഹിക്കുന്നു.നിലവിലെ കയ്യെഴുത്തുപ്രതിയിൽ, ഫിസിയോളജിക്കൽ ഫ്രീക്വൻസികളിൽ (1.2 Hz, 72 ബീറ്റുകൾ) വൈദ്യുതവും മെക്കാനിക്കൽ ഉത്തേജനവും പ്രേരിപ്പിച്ചുകൊണ്ട് മുതിർന്നവരുടെ ഹൃദയ പരിതസ്ഥിതിയെ അനുകരിക്കാൻ കഴിയുന്ന ഒരു CTCM (ചിത്രം 1a) ഞങ്ങൾ വികസിപ്പിച്ചെടുത്തിട്ടുണ്ട്.ഡയസ്റ്റോൾ സമയത്ത് അമിതമായ ടിഷ്യു നീട്ടുന്നത് ഒഴിവാക്കാൻ, ടിഷ്യു വലുപ്പം 25% വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ ഒരു 3D പ്രിന്റിംഗ് ഉപകരണം ഉപയോഗിച്ചു (ചിത്രം 1 ബി).കാർഡിയാക് സൈക്കിൾ പൂർണ്ണമായി പുനർനിർമ്മിക്കുന്നതിനായി ഒരു ഡാറ്റ അക്വിസിഷൻ സിസ്റ്റം ഉപയോഗിച്ച് സി-പേസ് സിസ്റ്റം പ്രേരിപ്പിച്ച ഇലക്ട്രിക്കൽ പേസിംഗ് സിസ്റ്റോളിന് 100 എംഎസ് മുമ്പ് ആരംഭിക്കാൻ സമയമായി.ടിഷ്യു കൾച്ചർ സിസ്റ്റം ഒരു പ്രോഗ്രാമബിൾ ന്യൂമാറ്റിക് ആക്യുവേറ്റർ (എൽബി എഞ്ചിനീയറിംഗ്, ജർമ്മനി) ഉപയോഗിച്ച് ഒരു ഫ്ലെക്സിബിൾ സിലിക്കൺ മെംബ്രൺ ചാക്രികമായി വികസിപ്പിക്കുന്നു, ഇത് മുകളിലെ അറയിലെ ഹൃദയ സ്ലൈസുകളുടെ വികാസത്തിന് കാരണമാകുന്നു.മർദ്ദം (± 1 എംഎംഎച്ച്ജി), സമയം (± 1 എംഎസ്) (ചിത്രം 1 സി) എന്നിവ കൃത്യമായി ക്രമീകരിക്കാൻ സാധ്യമാക്കിയ ഒരു പ്രഷർ ട്രാൻസ്ഡ്യൂസർ വഴി സിസ്റ്റം ഒരു ബാഹ്യ എയർ ലൈനിലേക്ക് ബന്ധിപ്പിച്ചു.
a ഉപകരണത്തിന്റെ കൾച്ചർ ചേമ്പറിനുള്ളിൽ നീല നിറത്തിൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്ന 7 mm സപ്പോർട്ട് റിങ്ങിലേക്ക് ടിഷ്യു വിഭാഗം അറ്റാച്ചുചെയ്യുക.കൾച്ചർ ചേമ്പറിനെ എയർ ചേമ്പറിൽ നിന്ന് നേർത്ത വഴക്കമുള്ള സിലിക്കൺ മെംബ്രൺ ഉപയോഗിച്ച് വേർതിരിക്കുന്നു.ചോർച്ച തടയാൻ ഓരോ അറയ്ക്കും ഇടയിൽ ഒരു ഗാസ്കട്ട് സ്ഥാപിക്കുക.ഉപകരണത്തിന്റെ ലിഡിൽ വൈദ്യുത ഉത്തേജനം നൽകുന്ന ഗ്രാഫൈറ്റ് ഇലക്ട്രോഡുകൾ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു.b വലിയ ടിഷ്യു ഉപകരണത്തിന്റെ സ്കീമാറ്റിക് പ്രാതിനിധ്യം, ഗൈഡ് റിംഗ്, സപ്പോർട്ട് റിംഗ്.ടിഷ്യു വിഭാഗങ്ങൾ (തവിട്ട്) ഉപകരണത്തിന്റെ പുറം അറ്റത്തുള്ള ഗ്രോവിൽ സ്ഥാപിച്ചിരിക്കുന്ന ഗൈഡ് റിംഗ് ഉപയോഗിച്ച് വലിയ ഉപകരണത്തിൽ സ്ഥാപിച്ചിരിക്കുന്നു.ഗൈഡ് ഉപയോഗിച്ച്, കാർഡിയാക് ടിഷ്യുവിന്റെ ഭാഗത്ത് ടിഷ്യു അക്രിലിക് പശ കൊണ്ട് പൊതിഞ്ഞ പിന്തുണ വളയം ശ്രദ്ധാപൂർവ്വം സ്ഥാപിക്കുക.c പ്രോഗ്രാമബിൾ ന്യൂമാറ്റിക് ആക്യുവേറ്റർ (PPD) നിയന്ത്രിക്കുന്ന എയർ ചേമ്പർ മർദ്ദത്തിന്റെ പ്രവർത്തനമായി വൈദ്യുത ഉത്തേജന സമയം കാണിക്കുന്ന ഗ്രാഫ്.പ്രഷർ സെൻസറുകൾ ഉപയോഗിച്ച് വൈദ്യുത ഉത്തേജനം സമന്വയിപ്പിക്കാൻ ഒരു ഡാറ്റ ഏറ്റെടുക്കൽ ഉപകരണം ഉപയോഗിച്ചു.കൾച്ചർ ചേമ്പറിലെ മർദ്ദം സെറ്റ് ത്രെഷോൾഡിൽ എത്തുമ്പോൾ, വൈദ്യുത ഉത്തേജനം ട്രിഗർ ചെയ്യുന്നതിനായി ഒരു പൾസ് സിഗ്നൽ C-PACE-EM-ലേക്ക് അയയ്ക്കുന്നു.d ഒരു ഇൻകുബേറ്റർ ഷെൽഫിൽ സ്ഥാപിച്ചിരിക്കുന്ന നാല് CTCM-കളുടെ ചിത്രം.ഒരു ന്യൂമാറ്റിക് സർക്യൂട്ട് വഴി ഒരു പിപിഡിയിലേക്ക് നാല് ഉപകരണങ്ങൾ ബന്ധിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നു, കൂടാതെ ന്യൂമാറ്റിക് സർക്യൂട്ടിലെ മർദ്ദം നിരീക്ഷിക്കുന്നതിന് പ്രഷർ സെൻസറുകൾ ഹെമോസ്റ്റാറ്റിക് വാൽവിലേക്ക് തിരുകുന്നു.ഓരോ ഉപകരണത്തിലും ആറ് ടിഷ്യൂ വിഭാഗങ്ങൾ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു.
ഒരൊറ്റ ന്യൂമാറ്റിക് ആക്യുവേറ്റർ ഉപയോഗിച്ച്, ഞങ്ങൾക്ക് 4 CTCM ഉപകരണങ്ങൾ നിയന്ത്രിക്കാൻ കഴിഞ്ഞു, അവയിൽ ഓരോന്നിനും 6 ടിഷ്യൂ സെക്ഷനുകൾ (ചിത്രം 1d).CTCM-ൽ, എയർ ചേമ്പറിലെ വായു മർദ്ദം ഫ്ലൂയിഡ് ചേമ്പറിലെ സിൻക്രണസ് മർദ്ദമായി പരിവർത്തനം ചെയ്യപ്പെടുകയും ഹൃദയ സ്ലൈസിന്റെ ശാരീരിക വികാസത്തിന് കാരണമാവുകയും ചെയ്യുന്നു (ചിത്രം 2a, അനുബന്ധ സിനിമ 1).80 എംഎം എച്ച്ജിയിൽ ടിഷ്യു നീട്ടുന്നതിന്റെ വിലയിരുത്തൽ.കല.ടിഷ്യു വിഭാഗങ്ങൾ 25% (ചിത്രം 2 ബി) നീട്ടുന്നത് കാണിച്ചു.സാധാരണ കാർഡിയാക് വിഭാഗത്തിന്റെ സങ്കോചത്തിന് 2.2-2.3 µm എന്ന ഫിസിയോളജിക്കൽ സാർകോമെയർ നീളവുമായി ഈ ശതമാനം സ്ട്രെച്ച് പൊരുത്തപ്പെടുന്നതായി കാണിക്കുന്നു17,19,25.ഇഷ്‌ടാനുസൃത ക്യാമറ ക്രമീകരണങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ച് ടിഷ്യു ചലനം വിലയിരുത്തി (സപ്ലിമെന്ററി ചിത്രം 1).ടിഷ്യു ചലനത്തിന്റെ വ്യാപ്തിയും വേഗതയും (ചിത്രം. 2c, d) ഹൃദയ ചക്രത്തിലും സിസ്റ്റോളിലും ഡയസ്റ്റോളിലുമുള്ള സമയത്തിലും (ചിത്രം 2 ബി) നീട്ടുന്നതിന് തുല്യമാണ്.സങ്കോചത്തിലും വിശ്രമത്തിലും ഹൃദയ കോശങ്ങളുടെ നീട്ടലും വേഗതയും സംസ്കാരത്തിൽ 12 ദിവസത്തേക്ക് സ്ഥിരമായി തുടർന്നു (ചിത്രം 2f).സംസ്കാര സമയത്ത് സങ്കോചത്തിൽ വൈദ്യുത ഉത്തേജനത്തിന്റെ പ്രഭാവം വിലയിരുത്തുന്നതിന്, ഒരു ഷേഡിംഗ് അൽഗോരിതം (സപ്ലിമെന്ററി ചിത്രം 2a,b) ഉപയോഗിച്ച് സജീവമായ വൈകല്യം നിർണ്ണയിക്കുന്നതിനുള്ള ഒരു രീതി ഞങ്ങൾ വികസിപ്പിച്ചെടുത്തു, കൂടാതെ വൈദ്യുത ഉത്തേജനത്തോടുകൂടിയും അല്ലാതെയും വൈകല്യങ്ങൾ തമ്മിൽ വേർതിരിച്ചറിയാൻ കഴിഞ്ഞു.ഹൃദയത്തിന്റെ അതേ ഭാഗം (ചിത്രം 2f).കട്ട് (R6-9) ചലിക്കുന്ന മേഖലയിൽ, വൈദ്യുത ഉത്തേജനത്തിന്റെ അഭാവത്തേക്കാൾ 20% കൂടുതലാണ് വൈദ്യുത ഉത്തേജന സമയത്ത് വോൾട്ടേജ്, ഇത് സങ്കോചപരമായ പ്രവർത്തനത്തിന് വൈദ്യുത ഉത്തേജനത്തിന്റെ സംഭാവനയെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.
എയർ ചേമ്പർ മർദ്ദം, ഫ്ലൂയിഡ് ചേമ്പർ മർദ്ദം, ടിഷ്യു ചലന അളവുകൾ എന്നിവയുടെ പ്രതിനിധി അടയാളങ്ങൾ ചേമ്പർ മർദ്ദം ദ്രാവക അറയിലെ മർദ്ദം മാറ്റുന്നു, ഇത് ടിഷ്യു സ്ലൈസിന്റെ ചലനത്തിന് കാരണമാകുന്നു.b ശതമാനം സ്ട്രെച്ച് (ഓറഞ്ച്) യുമായി ബന്ധപ്പെട്ട ടിഷ്യു വിഭാഗങ്ങളുടെ ശതമാനം സ്ട്രെച്ചിന്റെ (നീല) പ്രതിനിധി അടയാളങ്ങൾ.c കാർഡിയാക് സ്ലൈസിന്റെ അളന്ന ചലനം ചലനത്തിന്റെ അളന്ന വേഗതയുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നു.(ഡി) ഹൃദയത്തിന്റെ ഒരു സ്ലൈസിൽ ചാക്രിക ചലനത്തിന്റെയും (നീലരേഖ) വേഗതയുടെയും (ഓറഞ്ച് ഡോട്ടഡ് ലൈൻ) പ്രതിനിധീകരിക്കുന്ന പാതകൾ.ഇ സൈക്കിൾ സമയത്തിന്റെ അളവ് (ഒരു ഗ്രൂപ്പിന് n = 19 സ്ലൈസുകൾ, വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്ന്), സങ്കോച സമയം (ഒരു ഗ്രൂപ്പിന് n = 19 സ്ലൈസുകൾ), വിശ്രമ സമയം (ഒരു ഗ്രൂപ്പിന് n = 19 സ്ലൈസുകൾ, വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്ന്), ടിഷ്യു ചലനം (n = 25 ).വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്നുള്ള സ്ലൈസുകൾ)/ഗ്രൂപ്പ്), പീക്ക് സിസ്റ്റോളിക് വേഗത (n = 24(D0), 25(D12) സ്ലൈസുകൾ/വിവിധ പന്നികളിൽ നിന്നുള്ള ഗ്രൂപ്പ്), പീക്ക് റിലാക്സേഷൻ നിരക്ക് (n=24(D0), 25(D12) വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്നുള്ള സ്ലൈസുകൾ/ഗ്രൂപ്പ്).ടു-ടെയിൽഡ് സ്റ്റുഡന്റ്സ് ടി-ടെസ്റ്റ് ഒരു പാരാമീറ്ററിലും കാര്യമായ വ്യത്യാസമൊന്നും കാണിച്ചില്ല.f (ചുവപ്പ്) കൂടാതെ (നീല) വൈദ്യുത ഉത്തേജനം ഉള്ള ടിഷ്യു വിഭാഗങ്ങളുടെ പ്രതിനിധി സ്ട്രെയിൻ വിശകലനം, ഒരേ വിഭാഗത്തിൽ നിന്നുള്ള ടിഷ്യു വിഭാഗങ്ങളുടെ പത്ത് പ്രാദേശിക മേഖലകൾ.വിവിധ വിഭാഗങ്ങളിൽ നിന്നുള്ള പത്ത് മേഖലകളിൽ വൈദ്യുത ഉത്തേജനം ഉള്ളതും അല്ലാത്തതുമായ ടിഷ്യു വിഭാഗങ്ങളിലെ സ്ട്രെയിനിലെ ശതമാനം വ്യത്യാസത്തിന്റെ അളവ് താഴെയുള്ള പാനലുകൾ കാണിക്കുന്നു. (വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്നുള്ള n = 8 സ്ലൈസുകൾ/ഗ്രൂപ്പ്, ടു-ടെയിൽഡ് സ്റ്റുഡന്റ് ടി-ടെസ്റ്റ് നടത്തുന്നു; ****p <0.0001, **p <0.01, *p <0.05). (വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്നുള്ള n = 8 സ്ലൈസുകൾ/ഗ്രൂപ്പ്, ടു-ടെയിൽഡ് സ്റ്റുഡന്റ് ടി-ടെസ്റ്റ് നടത്തുന്നു; ****p <0.0001, **p <0.01, *p <0.05). (n = 8 വാക്യങ്ങൾ/ഗ്രൂപ്പുകളിൽ നിന്ന് റസ്‌നിഹ് സ്വീനെയ്, പ്രോവോഡിറ്റ്സ് ഡുസ്‌റ്റോറോൺനിയ് ടി-ക്രിതെറി സ്റ്റോർഡ് സെറ്റ്; (വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്നുള്ള n = 8 വിഭാഗങ്ങൾ/ഗ്രൂപ്പ്, ടു-ടെയിൽഡ് സ്റ്റുഡന്റ്സ് ടി-ടെസ്റ്റ്; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05). （n = 8 片/组,来自不同的猪,进行双尾学生t 检验；****p <0.0001,**p <0.01,*p <0.05） （n = 8 片/组,来自不同的猪,进行双尾学生t 检验；****p <0.0001,**p <0.01,*p <0.05） (n = 8 വാക്യങ്ങൾ/ഗ്രൂപ്പ്, യഥാക്രമം, ദ്വുസ്തൊരൊംനിഎ ക്രിതെര്യ് Стьюдента; ****p <0,0001, **p <0,01, *p <0,05). (n = 8 വിഭാഗങ്ങൾ/ഗ്രൂപ്പ്, വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്ന്, ടു-ടെയിൽഡ് സ്റ്റുഡന്റ്സ് ടി-ടെസ്റ്റ്; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05).പിശക് ബാറുകൾ ശരാശരി ± സ്റ്റാൻഡേർഡ് ഡീവിയേഷനെ പ്രതിനിധീകരിക്കുന്നു.
ഞങ്ങളുടെ മുമ്പത്തെ സ്റ്റാറ്റിക് ബയോമിമെറ്റിക് ഹാർട്ട് സ്ലൈസ് കൾച്ചർ സിസ്റ്റത്തിൽ [20, 21], വൈദ്യുത ഉത്തേജനം പ്രയോഗിച്ചും മീഡിയം കോമ്പോസിഷൻ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്തും ഞങ്ങൾ 6 ദിവസത്തേക്ക് ഹാർട്ട് സ്ലൈസുകളുടെ പ്രവർത്തനക്ഷമത, പ്രവർത്തനം, ഘടനാപരമായ സമഗ്രത എന്നിവ നിലനിർത്തി.എന്നിരുന്നാലും, 10 ദിവസത്തിനുശേഷം, ഈ കണക്കുകൾ കുത്തനെ കുറഞ്ഞു.ഞങ്ങളുടെ മുൻ സ്റ്റാറ്റിക് ബയോമിമെറ്റിക് കൾച്ചർ സിസ്റ്റം 20, 21 നിയന്ത്രണ വ്യവസ്ഥകളിൽ (Ctrl) സംസ്‌കരിച്ച വിഭാഗങ്ങളെ ഞങ്ങൾ റഫർ ചെയ്യും, കൂടാതെ ഒരേസമയം മെക്കാനിക്കൽ, ഇലക്ട്രിക്കൽ ഉത്തേജനത്തിന് (CTCM) കീഴിൽ MC അവസ്ഥകളും സംസ്കാരവും ആയി ഞങ്ങൾ മുമ്പ് ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്ത മീഡിയം ഉപയോഗിക്കും.വിളിച്ചു .ആദ്യം, വൈദ്യുത ഉത്തേജനം കൂടാതെ മെക്കാനിക്കൽ ഉത്തേജനം 6 ദിവസത്തേക്ക് ടിഷ്യു പ്രവർത്തനക്ഷമത നിലനിർത്താൻ പര്യാപ്തമല്ലെന്ന് ഞങ്ങൾ നിർണ്ണയിച്ചു (അനുബന്ധ ചിത്രം. 3a, b).രസകരമെന്നു പറയട്ടെ, എസ്ടിസിഎം ഉപയോഗിച്ച് ഫിസിയോ-മെക്കാനിക്കൽ, ഇലക്ട്രിക്കൽ ഉത്തേജനം ഏർപ്പെടുത്തിയതോടെ, 12 ദിവസത്തെ ഹൃദയ വിഭാഗങ്ങളുടെ പ്രവർത്തനക്ഷമത MS അവസ്ഥകളിൽ ഫ്രഷ് ഹാർട്ട് വിഭാഗങ്ങളിലെ പോലെ തന്നെ തുടർന്നു, എന്നാൽ MTT വിശകലനം കാണിക്കുന്നത് പോലെ Ctrl അവസ്ഥകളിൽ അല്ല (ചിത്രം 1).3a).ഹൃദയ ചക്രത്തിന്റെ മെക്കാനിക്കൽ ഉത്തേജനവും സിമുലേഷനും നമ്മുടെ മുൻ സ്റ്റാറ്റിക് കൾച്ചർ സിസ്റ്റത്തിൽ റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തതിന്റെ ഇരട്ടി ദൈർഘ്യമുള്ള ടിഷ്യു വിഭാഗങ്ങളെ നിലനിർത്താൻ കഴിയുമെന്ന് ഇത് സൂചിപ്പിക്കുന്നു.എന്നിരുന്നാലും, കാർഡിയാക് ട്രോപോണിൻ ടി, കോണക്‌സിൻ 43 എന്നിവയുടെ ഇമ്മ്യൂണോലേബലിംഗ് വഴി ടിഷ്യൂ വിഭാഗങ്ങളുടെ ഘടനാപരമായ സമഗ്രത വിലയിരുത്തുന്നത്, അതേ ദിവസത്തെ നിയന്ത്രണങ്ങളേക്കാൾ 12-ാം ദിവസം എംസി ടിഷ്യൂകളിൽ കൺസെക്‌സിൻ 43 എക്സ്പ്രഷൻ ഗണ്യമായി ഉയർന്നതായി കാണിച്ചു.എന്നിരുന്നാലും, യൂണിഫോം കോണക്‌സിൻ 43 എക്‌സ്‌പ്രഷനും Z- ഡിസ്‌ക് രൂപീകരണവും പൂർണ്ണമായി പരിപാലിക്കപ്പെട്ടില്ല (ചിത്രം 3 ബി).ടിഷ്യൂ സ്ട്രക്ചറൽ ഇന്റഗ്രിറ്റി അളക്കാൻ ഞങ്ങൾ ഒരു ആർട്ടിഫിഷ്യൽ ഇന്റലിജൻസ് (AI) ഫ്രെയിംവർക്ക് ഉപയോഗിക്കുന്നു, ഇത് പ്രാദേശികവൽക്കരണത്തിന്റെ ശക്തിയുടെ അടിസ്ഥാനത്തിൽ ഹൃദയ സ്ലൈസുകളുടെ ഘടനാപരമായ സമഗ്രതയും ഫ്ലൂറസൻസും സ്വപ്രേരിതമായി കണക്കാക്കാൻ ട്രോപോണിൻ-ടി, കൺസെക്‌സിൻ സ്റ്റെയിനിംഗ് 43 എന്നിവയെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള ഇമേജ് അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള ആഴത്തിലുള്ള പഠന പൈപ്പ്ലൈൻ.ഈ രീതി റഫറൻസിൽ വിവരിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ, യാന്ത്രികവും നിഷ്പക്ഷവുമായ രീതിയിൽ കാർഡിയാക് ടിഷ്യുവിന്റെ ഘടനാപരമായ സമഗ്രത വിശ്വസനീയമായി കണക്കാക്കാൻ കൺവ്യൂഷണൽ ന്യൂറൽ നെറ്റ്‌വർക്കും (സിഎൻഎൻ) ആഴത്തിലുള്ള പഠന ചട്ടക്കൂടും ഉപയോഗിക്കുന്നു.26. സ്റ്റാറ്റിക് കൺട്രോൾ സെക്ഷനുകളെ അപേക്ഷിച്ച് MC ടിഷ്യു ദിവസം 0 ന് മെച്ചപ്പെട്ട ഘടനാപരമായ സാമ്യം കാണിച്ചു.കൂടാതെ, സംസ്‌കാരത്തിന്റെ 12-ാം ദിവസത്തെ നിയന്ത്രണ സാഹചര്യങ്ങളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, MS അവസ്ഥകളിൽ ഫൈബ്രോസിസിന്റെ ഗണ്യമായ കുറഞ്ഞ ശതമാനം മാസന്റെ ട്രൈക്രോം സ്റ്റെയിനിംഗ് വെളിപ്പെടുത്തി (ചിത്രം 3 സി).CTCM 12-ാം ദിവസം ഹൃദയ കോശ വിഭാഗങ്ങളുടെ പ്രവർത്തനക്ഷമതയെ പുതിയ ഹൃദയ കോശങ്ങളുടേതിന് സമാനമായ തലത്തിലേക്ക് വർദ്ധിപ്പിച്ചെങ്കിലും, അത് ഹൃദയ ഭാഗങ്ങളുടെ ഘടനാപരമായ സമഗ്രതയെ കാര്യമായി മെച്ചപ്പെടുത്തിയില്ല.
ഒരു ബാർ ഗ്രാഫ്, സ്റ്റാറ്റിക് കൾച്ചറിലോ (D12 Ctrl) അല്ലെങ്കിൽ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 Ctrl), 12 (D12 Ctrl), 12 (D12 #ഗ്രൂപ്പ്, പി.വി.എ.ഗ്രൂപ്പ് വൺ വേ, പി.വി.എ./എം.സി. D0-മായി താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ 0.0001, D12 Ctrl-നെ അപേക്ഷിച്ച് **p <0.01). സ്റ്റാറ്റിക് കൾച്ചറിലോ (D12 Ctrl) CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 Ctrl), 12 (D12 Ctrl), 12 (D12 #ഗ്രൂപ്പ്, ANO-ൽ നിന്ന് വ്യത്യസ്‌തമായ pVAs/എംസി) സ്ലൈസുകളിൽ 12 ദിവസത്തേക്ക് ഫ്രഷ് ഹാർട്ട് സ്ലൈസുകളുടെ (D0) അല്ലെങ്കിൽ ഹാർട്ട് സ്‌ലൈസ് കൾച്ചറിന്റെ MTT പ്രവർത്തനക്ഷമതയുടെ അളവ് ഒരു ബാർ ഗ്രാഫ് കാണിക്കുന്നു. D0-മായി താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ 0.0001, D12 Ctrl-നെ അപേക്ഷിച്ച് **p <0.01).സ്റ്റാറ്റിക് കൾച്ചർ (D12 കൺട്രോൾ) അല്ലെങ്കിൽ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 കൺട്രോൾ) (n = 18 (D0), 15 (D12 കൺട്രോൾ) എന്നിവയിൽ 12 ദിവസത്തേക്ക് MTT ഫ്രഷ് ഹാർട്ട് സെക്ഷനുകളുടെ (D0) അല്ലെങ്കിൽ ഹൃദയ വിഭാഗങ്ങളുടെ കൾച്ചറിന്റെ പ്രവർത്തനക്ഷമതയുടെ അളവ് കാണിക്കുന്നത് ഹിസ്റ്റോഗ്രാം കാണിക്കുന്നു.####p <0,0001 по сравнению с D0 и **p < 0,01 по сравнению с D12 Ctrl). ####p <0.0001 D0-മായി താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ **p <0.01-മായി താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ D12 Ctrl). എ养12 天的MTT 活力的量化), 来自不同猪的12 (D12 എംസി)与D12 Ctrl 相比,**p <0.01)。 a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心琇席新鲜心，中新鲜心茇帥)的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；与D0 相比,####p <0.0001,与D12 Ctrl 相。,**p比,)സ്റ്റാറ്റിക് കൾച്ചർ (D12 കൺട്രോൾ) അല്ലെങ്കിൽ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 കൺട്രോൾ)) , 12 (D12 MC) വിഭാഗങ്ങൾ/ഗ്രൂപ്പ്, 12 (D12 MC) വിഭാഗങ്ങൾ/ഗ്രൂപ്പ്, വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്ന് 12 ദിവസത്തേക്ക് കൾച്ചർ ചെയ്ത ഫ്രഷ് ഹാർട്ട് സെക്ഷനുകളിലോ (D0) അല്ലെങ്കിൽ ഹൃദയ വിഭാഗങ്ങളിലോ MTT പ്രവർത്തനക്ഷമതയുടെ അളവ് കാണിക്കുന്ന ഹിസ്റ്റോഗ്രാം####p <0,0001 по сравнению с D0, **p <0,01 по сравнению с D12 Ctrl). ####p <0.0001 D0 മായി താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ, **p <0.01 D12 Ctrl മായി താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ).b Troponin-T (പച്ച), connexin 43 (ചുവപ്പ്), DAPI (നീല) പുതുതായി ഒറ്റപ്പെട്ട ഹൃദയ വിഭാഗങ്ങളിൽ (D0) അല്ലെങ്കിൽ സ്റ്റാറ്റിക് അവസ്ഥകളിൽ (Ctrl) അല്ലെങ്കിൽ CTCM അവസ്ഥകളിൽ (MC) 12 ദിവസത്തേക്ക് കൾച്ചർ ചെയ്ത ഹാർട്ട് വിഭാഗങ്ങളിൽ പ്രതിനിധി ഇമ്മ്യൂണോഫ്ലൂറസെൻസ് ഇമേജുകൾ (ശൂന്യമായ സ്കെയിൽ = 100). ഹൃദയ കോശങ്ങളുടെ ഘടനാപരമായ സമഗ്രതയുടെ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) സ്ലൈസുകൾ/ഗ്രൂപ്പ് ഓരോന്നിനും വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്ന് കൃത്രിമബുദ്ധി അളക്കൽ, വൺ-വേ ANOVA ടെസ്റ്റ് നടത്തുന്നു; ####p <0.0001 D0, ****p2 Ctrl എന്നിവയുമായി താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ. ഹൃദയ കോശങ്ങളുടെ ഘടനാപരമായ സമഗ്രതയുടെ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) സ്ലൈസുകൾ/ഗ്രൂപ്പ് ഓരോന്നിനും വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്ന്, വൺ-വേ ANOVA ടെസ്റ്റ് നടത്തുന്നു; ####p <0.0001-നെ അപേക്ഷിച്ച് D0, *****p2 വരെ താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ, കൊളിചെസ്‌റ്റ്‌വെന്നയ ഒസെങ്ക സ്‌ട്രൂക്‌ടൂർനോയ് സെർദെച്‌നോയ് ടക്കനി ഇന്റലക്‌ടോം (n = 7D10), (n = 7D10) എസോവ്/ഗ്രൂപ്പ് ഓഫ് റസ്‌നിഷ് സ്വീനെയ്, പ്രോവോഡിറ്റ്സ് ഓഡ്‌നോഫാക്‌ടോർണി ടെസ്‌റ്റ് അനോവ D12 Ctrl). ആർട്ടിഫിഷ്യൽ ഇന്റലിജൻസ് (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) വിഭാഗങ്ങൾ/ഗ്രൂപ്പുകൾ എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് കാർഡിയാക് ടിഷ്യുവിന്റെ ഘടനാപരമായ സമഗ്രതയുടെ അളവ് വിവിധ പന്നികളിൽ നിന്ന്, വൺ-വേ ANOVA ടെസ്റ്റ് നടത്തി; ####p <0.0001 വേഴ്സസ്. D0, ****p2 വരെ താരതമ്യം ചെയ്തു.人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) സ്ലൈസുകൾ/ഗ്രൂപ്പ് ഓരോന്നിനും വ്യത്യസ്ത പന്നികൾ, വൺ-വേ ANOVA ടെസ്റ്റ് 1#0.0.00;比,****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）。人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) സ്ലൈസുകൾ/ഗ്രൂപ്പ് ഓരോന്നിനും വ്യത്യസ്ത പന്നികൾ, വൺ-വേ 1#0D0 ടെസ്റ്റ്;比,****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）。 അസ്‌കുസ്‌റ്റ്‌വെന്റി ഇന്റലക്‌ട് വരെ കോളിചെസ്‌റ്റ്‌വെൻനോയ് ഒസെങ്കി സ്‌ട്രൂക്‌ടൂർനോയ് സെലോസ്‌റ്റ്‌നോസ്‌റ്റി സെർഡെക്‌നോസ്‌റ്റി (2എംസിഡി) (20D) സ്രെസോവ്/ഗ്രൂപ്പ് കജ്ഹ്ദൊയ് IS RAZNYH SEVINEY, ODNOSTORONNIY TEST ANOVA 12 Ctrl). കാർഡിയാക് ടിഷ്യുവിന്റെ ഘടനാപരമായ സമഗ്രത അളക്കുന്നതിനുള്ള കൃത്രിമബുദ്ധി (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) വിഭാഗങ്ങൾ/ഗ്രൂപ്പ് ഓരോന്നിനും വ്യത്യസ്ത പന്നികൾ, വൺ-വേ ANOVA ടെസ്റ്റ്; ####p<0.0001 vs .D0001 ലേക്ക് .D2 താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ ****00. c മാസന്റെ ട്രൈക്രോം സ്റ്റെയിൻ (സ്കെയിൽ ബെയർ = 500 µm) (സ്കെയിൽ ബെയർ = 500 µm) (n = 10 സ്ലൈസുകൾ/ഗ്രൂപ്പ് ഓരോന്നും, വൺ-വേ ANOVA ടെസ്റ്റ് നടത്തുന്നു, D1-മായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ D0-0 ലേക്ക് D0 0.0 ലേക്ക് താരതമ്യം ചെയ്യുന്നു. trl). c മാസ്സന്റെ ട്രൈക്രോം സ്റ്റെയിൻ (സ്കെയിൽ ബെയർ = 500 µm) (സ്കെയിൽ ബെയർ = 500 µm) (n = 10 സ്ലൈസുകൾ/ഗ്രൂപ്പ് ഓരോന്നിനും, വൺ-വേ ANOVA ടെസ്റ്റ് നടത്തുന്നു, D000 p <0 10 വരെ താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ, D000 p <0 10 വരെ താരതമ്യം ചെയ്യുന്നു. Ctrl). c റെപ്രെസന്റതിവ്ന്ыഎ ഇസോബ്രാജെനിയ (സ്ലേവ) കൂടാതെ കൊളിചെസ്ത്വെന്നയ ഒസെങ്ക (സ്പ്രാവ) സെർസോവ് സെർഡ്സാ, ഒക്രഷെംസ്ത്യ്മ് മാസോന (മസ്തിഷ്ക പൊക്രിതിയ = 500 എം.കെ.എം.) (n = 10 സ്രെസോവ്/ഗ്രൂപ്പ്, റസ്‌നിഹ് സ്വീനി##, വൈപോൾനിയറ്റ്സ്യ ഒഡ്‌നോസ്‌റ്റ്, #00,000 01 по сравнению с D0 и ***p < 0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c മാസന്റെ ട്രൈക്രോം സ്റ്റെയിൻ (അൺകോട്ട് സ്കെയിൽ = 500 µm) (n = 10 സെക്ഷനുകൾ/ഗ്രൂപ്പ് വിവിധ പന്നികളിൽ നിന്ന്, വൺ-വേ ANOVA ടെസ്റ്റ് നടത്തി; D-0 l). c 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像（左）和量化（剳）（0£55个切片/组,每组来自不同的猪,进行单向ANOVA 测试；#### p <0.0001 与D0 相比,001 与D0 相比, C 用 മാസൻ 三 色 染料 的 心脏 切片 的 代表性 （左 左） 量化 （右度 = 500 മി比,***p <0.001 与D12 Ctrl 相比）。 സി റെപ്രെസന്റതിവ്ന്ыഎ ഇസോബ്രാജെനിയ (സ്ലേവ) കൂടാതെ കൊളീചെസ്റ്റ്വെന്റി അനാലിസ് (സ്പ്രാവ) സെർസോവ് സെർഡ്സാ, ഒക്രഷെംസ്തെംസ് മാസോന (ചിസ്തയ ശകല = 500 എം.കെ.എം.) (n = 10 സ്‌റേസോവ്/ഗ്രൂപ്പ, കജ്ഹ്ഡിയോ മറ്റ് ഡ്രൂഗോയ് സ്വിനിയോ, പ്രോട്ടസ്‌റ്റിറോവാനോ сперсионного анализа ;### #p < 0,0001 по сравнению с D0, ***p < 0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c മാസന്റെ ട്രൈക്രോം സ്റ്റെയിൻ (ശൂന്യം = 500 µm) (ശൂന്യം = 500 µm) (n = 10 വിഭാഗങ്ങൾ/ഗ്രൂപ്പ്, ഓരോന്നും വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്ന്, വ്യത്യാസത്തിന്റെ വൺ-വേ വിശകലനം വഴി പരീക്ഷിച്ചു, D1-ലേക്ക് D0-0 p, Ctrl).പിശക് ബാറുകൾ ശരാശരി ± സ്റ്റാൻഡേർഡ് ഡീവിയേഷനെ പ്രതിനിധീകരിക്കുന്നു.
കൾച്ചർ മീഡിയത്തിലേക്ക് ചെറിയ തന്മാത്രകൾ ചേർക്കുന്നതിലൂടെ, CTCM കൾച്ചർ സമയത്ത് കാർഡിയോമയോസൈറ്റ് സമഗ്രത മെച്ചപ്പെടുത്താനും ഫൈബ്രോസിസ് വികസനം കുറയ്ക്കാനും കഴിയുമെന്ന് ഞങ്ങൾ അനുമാനിക്കുന്നു.അതിനാൽ, ആശയക്കുഴപ്പമുണ്ടാക്കുന്ന ഘടകങ്ങളുടെ എണ്ണം കുറവായതിനാൽ, ഞങ്ങളുടെ സ്റ്റാറ്റിക് കൺട്രോൾ കൾച്ചറുകൾ 20,21 ഉപയോഗിച്ച് ഞങ്ങൾ ചെറിയ തന്മാത്രകൾക്കായി പരിശോധിച്ചു.ഈ സ്ക്രീനിനായി ഡെക്സമെതസോൺ (ഡെക്സ്), ട്രയോഡൊഥൈറോണിൻ (T3), SB431542 (SB) എന്നിവ തിരഞ്ഞെടുത്തു.ഈ ചെറിയ തന്മാത്രകൾ മുമ്പ് hiPSC-CM സംസ്കാരങ്ങളിൽ സാർകോമെയർ നീളം, ടി-ട്യൂബുലുകൾ, ചാലക വേഗത എന്നിവ വർദ്ധിപ്പിച്ച് കാർഡിയോമയോസൈറ്റുകളുടെ പക്വത വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ ഉപയോഗിച്ചിരുന്നു.കൂടാതെ, ഡെക്സും (ഒരു ഗ്ലൂക്കോകോർട്ടിക്കോയിഡ്) എസ്ബിയും വീക്കം അടിച്ചമർത്താൻ അറിയപ്പെടുന്നു29,30.അതിനാൽ, ഈ ചെറിയ തന്മാത്രകളുടെ ഒന്നോ സംയോജനമോ ഉൾപ്പെടുത്തുന്നത് ഹൃദയ വിഭാഗങ്ങളുടെ ഘടനാപരമായ സമഗ്രത മെച്ചപ്പെടുത്തുമോ എന്ന് ഞങ്ങൾ പരിശോധിച്ചു.പ്രാരംഭ സ്ക്രീനിംഗിനായി, സെൽ കൾച്ചർ മോഡലുകളിൽ (1 μM Dex27, 100 nM T327, 2.5 μM SB31) സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന സാന്ദ്രതയെ അടിസ്ഥാനമാക്കി ഓരോ സംയുക്തത്തിന്റെയും ഡോസ് തിരഞ്ഞെടുത്തു.12 ദിവസത്തെ സംസ്കാരത്തിന് ശേഷം, T3, Dex എന്നിവയുടെ സംയോജനം ഒപ്റ്റിമൽ കാർഡിയോമയോസൈറ്റ് ഘടനാപരമായ സമഗ്രതയ്ക്കും കുറഞ്ഞ നാരുകളുള്ള പുനർനിർമ്മാണത്തിനും കാരണമായി (സപ്ലിമെന്ററി കണക്കുകൾ 4, 5).കൂടാതെ, T3, Dex എന്നിവയുടെ ഈ സാന്ദ്രതയുടെ ഇരട്ടിയോ ഇരട്ടിയോ ഉപയോഗം സാധാരണ സാന്ദ്രതയുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ ദോഷകരമായ ഫലങ്ങൾ ഉളവാക്കുന്നു (സപ്ലിമെന്ററി ചിത്രം. 6a,b).
പ്രാരംഭ സ്ക്രീനിംഗിന് ശേഷം, ഞങ്ങൾ 4 സംസ്കാര വ്യവസ്ഥകളുടെ തല-തല താരതമ്യം നടത്തി (ചിത്രം 4a): Ctrl: ഞങ്ങളുടെ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്ത മീഡിയം ഉപയോഗിച്ച് മുമ്പ് വിവരിച്ച സ്റ്റാറ്റിക് സംസ്കാരത്തിൽ സംസ്കരിച്ച ഹൃദയ വിഭാഗങ്ങൾ;20.21 TD: T3, Ctrl എന്നിവ ബുധനാഴ്ച ചേർത്ത Dex;MC: ഞങ്ങളുടെ മുമ്പ് ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്ത മീഡിയം ഉപയോഗിച്ച് CTCM-ൽ കൾച്ചർ ചെയ്ത ഹൃദയ വിഭാഗങ്ങൾ;കൂടാതെ MT: CTCM, T3, Dex എന്നിവ മീഡിയത്തിലേക്ക് ചേർത്തു.12 ദിവസത്തെ കൃഷിക്ക് ശേഷം, എം.എസ്., എം.ടി ടിഷ്യൂകളുടെ പ്രവർത്തനക്ഷമത എം.ടി.ടി അസ്സെ (ചിത്രം 4 ബി) വിലയിരുത്തിയ പുതിയ ടിഷ്യൂകളിലെ പോലെ തന്നെ തുടർന്നു.രസകരമെന്നു പറയട്ടെ, ട്രാൻസ്‌വെൽ കൾച്ചറുകളിലേക്ക് (TD) T3, Dex എന്നിവ ചേർക്കുന്നത് Ctrl അവസ്ഥകളെ അപേക്ഷിച്ച് പ്രവർത്തനക്ഷമതയിൽ കാര്യമായ പുരോഗതി ഉണ്ടാക്കിയില്ല, ഇത് ഹൃദയ വിഭാഗങ്ങളുടെ പ്രവർത്തനക്ഷമത നിലനിർത്തുന്നതിൽ മെക്കാനിക്കൽ ഉത്തേജനത്തിന്റെ പ്രധാന പങ്ക് സൂചിപ്പിക്കുന്നു.
12 ദിവസത്തേക്ക് മീഡിയത്തിൽ മെക്കാനിക്കൽ ഉത്തേജനത്തിന്റെയും T3/Dex സപ്ലിമെന്റേഷന്റെയും ഫലങ്ങൾ വിലയിരുത്താൻ ഉപയോഗിക്കുന്ന നാല് സംസ്കാര വ്യവസ്ഥകൾ ചിത്രീകരിക്കുന്ന ഒരു പരീക്ഷണാത്മക ഡിസൈൻ ഡയഗ്രം. b ബാർ ഗ്രാഫ് ഫ്രഷ് ഹാർട്ട് സ്ലൈസുകളുമായി (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD, D12 MT), 12 (D12 Ctrl, D12 TD, D12 MT), 12 (D12 # ഗ്രൂപ്പിൽ നിന്ന് വ്യത്യസ്തമായ ps/ MC-യിൽ നിന്ന് വ്യത്യസ്തമായ ps/ MC-ൽ നിന്ന് 4 സംസ്‌കാര സാഹചര്യങ്ങളിലും (Ctrl, TD, MC, MT) 12 ദിവസത്തെ പോസ്‌റ്റ് കൾച്ചറിന്റെ അളവ് കാണിക്കുന്നു. p <0.0001, ###p <0.001 D0 മായി താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ **p <0.01 D12 Ctrl മായി താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ). b ബാർ ഗ്രാഫ് ഫ്രഷ് ഹാർട്ട് സ്ലൈസുകളുമായി (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD, D12 MT), 12 (D12 Ctrl, D12 TD, D12 MT), 12 (D12 # ഗ്രൂപ്പിൽ നിന്ന് വ്യത്യസ്തമായ ps/ MC-യിൽ നിന്ന് വ്യത്യസ്തമായ ps/ MC-ൽ നിന്ന് 4 സംസ്‌കാര സാഹചര്യങ്ങളിലും (Ctrl, TD, MC, MT) 12 ദിവസത്തെ പോസ്‌റ്റ് കൾച്ചറിന്റെ അളവ് കാണിക്കുന്നു. p <0.0001, ###p <0.001 D0 മായി താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ **p <0.01 D12 ctrl). b ജിസ്‌റ്റോഗ്രമ്മ പൊക്കസ്‌വീറ്റ് കോളിചെസ്‌റ്റ്‌വെന്നു ഒസെങ്കു ജിസ്‌നെസ്‌പോസോബ്‌നോസ്‌തി ചെറസ് 12 ദിവസം പോസ്‌ലെ കുലട്ടിവിസ് കുൾട്ടിവിറോവനിയ (കോൺട്രോൾ, ടിഡി, എംസി, എംടി) പോൾ സ്വീജിമി സെർഡ്സാ (ഡി0) (എൻ = 18 (ഡി0, ഡി 0), ഡി 12 സിടിഡി), 12 (ഡി 15 2 എം.സി.) സ്രെജൊവ്/ഗ്രൂപ്പ് ഓത്ത് റസ്‌നിഷ് സ്വീനി, പ്രോവോഡിറ്റ്സ് ഓഡ്‌നോസ്‌റ്റോറോണിക് ടെസ്‌റ്റ് അനോവ; ####p <0,0001, ###p <0,0001, ##p <0,001,P <0,001 D12 Ctrl-ൽ 1. b ബാർ ഗ്രാഫ് ഫ്രഷ് ഹാർട്ട് സെക്ഷനുകളുമായി (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD, D12 MT), 12 (D12 Ctrl, D12 TD, D12 MT), 12 (D12 Ctrl, D12 MT) വ്യത്യസ്‌ത വിഭാഗങ്ങളിൽ നിന്ന് 12 (D12-ഗ്രൂപ്പ്, എ.എൻ.ഒ., 0.0001, ###p <0.001 vs. D0, **p <0.01 by D12 Ctrl). b和D12 MT), 来自不同猪的12 (D12 MC)与D12控制).b 4 12 (D12 MC) ബി ഗൈസ്‌റ്റോഗ്രമ്മ, പോക്കസിവയസ് 4 ഉസ്‌ലോവിയ കുൽത്തിവിറോവനിയ (കോൺട്രോൾ, ടിഡി, എംസി, എംടി) (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD и D12 MT), യഥാക്രമം 12 (D12 MC) മുതൽ 001 по сравнению с D0, **p <0,01 по сравнению с контролем D12). b വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്ന് 12 (D12 MC) വിഭാഗങ്ങൾ/ഗ്രൂപ്പിൽ നിന്നുള്ള (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD, D12 MT) എല്ലാ 4 സംസ്കാര സാഹചര്യങ്ങളും (നിയന്ത്രണം, TD, MC, MT) കാണിക്കുന്ന ഹിസ്റ്റോഗ്രാം, വൺ-വേ ANOVA ടെസ്റ്റ്. . D0, **p<0.01 vs. കൺട്രോൾ D12). c ബാർ ഗ്രാഫ് ഫ്രഷ് ഹാർട്ട് സ്ലൈസുകളുമായി (D0) താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ എല്ലാ 4 കൾച്ചർ അവസ്ഥകളിലും (Ctrl, TD, MC, MT) 12 ദിവസത്തെ പോസ്‌റ്റ് കൾച്ചറിന്റെ അളവ് കാണിക്കുന്നു l). c ബാർ ഗ്രാഫ് ഫ്രഷ് ഹാർട്ട് സ്ലൈസുകളുമായി (D0) താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ എല്ലാ 4 കൾച്ചർ അവസ്ഥകളിലും (Ctrl, TD, MC, MT) 12 ദിവസത്തെ പോസ്‌റ്റ് കൾച്ചറിന്റെ അളവ് കാണിക്കുന്നു l). സി ഗൈസ്‌റ്റോഗ്രമ്മ പൊക്കസ്‌വീറ്റ് കോളിചെസ്‌റ്റ്‌വെന്നു ഒസെങ്കു പോട്ടോക ഗ്ലൂക്കോസി ചെറസ് 12 ദിവസത്തെ പോസ്റ്റുകൾ ഉൾട്ടിവിറോവനിയ (കോൺട്രോൾ, ടിഡി, എംസി, എംടി) പോൾ സ്രവണിയൂസ് സോ സ്വെജിമി സെർഡ്സാ (ഡി0) (n = 6 വൃത്തങ്ങൾ/ഗവേഷണങ്ങൾ торонний Выполняется тест ANOVA; ###p <0,001 по сравнению с D0 и ***p <0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c ഹിസ്റ്റോഗ്രാം ഫ്രഷ് ഹാർട്ട് സെക്ഷനുകളെ അപേക്ഷിച്ച് (D0) എല്ലാ 4 സംസ്‌കാര സാഹചര്യങ്ങളിലും (നിയന്ത്രണം, TD, MC, MT) സംസ്‌കാരത്തിനു ശേഷമുള്ള 12 ദിവസത്തെ ഗ്ലൂക്കോസ് ഫ്‌ളക്‌സിന്റെ അളവ് കാണിക്കുന്നു (n = 6 വിഭാഗങ്ങൾ/വിവിധ പന്നികളിൽ നിന്നുള്ള 6 വിഭാഗങ്ങൾ/ഗ്രൂപ്പ്, വൺ-വേ ANOVA ടെസ്റ്റ് നടത്തി c 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC 和MT）与新鲜心脏切片(D0)糖通量定量（n = 6 片/组，来自不同猪，单向执行ANOVA 测试；###p <0.001，与D0 <0.001,与D0, 0.120.比). C 条形图 显示 所有 4 种 条件后 后 12 天 的 通量 定量 （n = 6 片/组 , 来自 猪 ， ， ， ， ， ， ， 猪 猪单 匑 ，#10.与D0 相比，***p <0.001 与D12 Ctrl 相比）。 സി ഗിസ്റ്റോഗ്രമ്മ, പൊകജ്ыവയുത്സ്യ കൊളിചെസ്ത്വെംനുയു ഒസെന്കു പൊട്ടാസ്യം ഗ്ലൂക്കോസി ചെരെസ് 12 ദിവസം പോസ്റ്റുകൾ കുല്ദ്൪ വി കുൽത്തിവിറോവനിയ (കോൺട്രോൾ, ടിഡി, എംസി, എംടി) പോൾ സ്രാവണിയൂസ് സെർഡ്സാമി സെർഡ്സാ (ഡി0) (n = 6/ഗ്രന്ഥം ഒദ്നൊസ്തൊരൊംന്ыയ് ബൈലി പ്രൊവെദെന്ы ടെസ്ത്യ് അനോവ; c ഹിസ്റ്റോഗ്രാം ഫ്രഷ് ഹാർട്ട് സെക്ഷനുകളെ അപേക്ഷിച്ച് (ഡി0) (n = 6 വിഭാഗങ്ങൾ/ഗ്രൂപ്പ്, വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്ന്, ഏകപക്ഷീയമായി ANOVA ടെസ്റ്റുകൾ നടത്തിയിരുന്നു, D1-0-യുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, D1 ***p 2.0.00 ലേക്ക് താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ, 12 ദിവസത്തെ സംസ്‌കാരത്തിന് ശേഷമുള്ള എല്ലാ 4 സംസ്‌കാര സാഹചര്യങ്ങൾക്കും (നിയന്ത്രണം, TD, MC, MT) ഗ്ലൂക്കോസ് ഫ്‌ളക്‌സിന്റെ അളവ് കാണിക്കുന്നു. (നിയന്ത്രണം).d പത്ത് റീജിയണൽ ടിഷ്യൂ സെക്ഷൻ പോയിന്റുകളിൽ ഫ്രഷ് (നീല), ദിവസം 12 എംസി (പച്ച), ദിവസം 12 എംടി (ചുവപ്പ്) ടിഷ്യൂകളുടെ സ്‌ട്രെയിൻ അനാലിസിസ് പ്ലോട്ടുകൾ (n = 4 സ്ലൈസുകൾ/ഗ്രൂപ്പ്, വൺ-വേ ANOVA ടെസ്റ്റ്; ഗ്രൂപ്പുകൾക്കിടയിൽ കാര്യമായ വ്യത്യാസമില്ല).e അഗ്നിപർവ്വത പ്ലോട്ട്, 10-12 ദിവസത്തേക്ക് സ്റ്റാറ്റിക് അവസ്ഥയിൽ (Ctrl) അല്ലെങ്കിൽ MT അവസ്ഥയിൽ (MT) സംസ്കരിച്ച ഹൃദയ വിഭാഗങ്ങളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ ഫ്രഷ് ഹാർട്ട് സെക്ഷനുകളിൽ (D0) വ്യത്യസ്തമായി പ്രകടിപ്പിക്കുന്ന ജീനുകൾ കാണിക്കുന്നു.f ഹൃദയ വിഭാഗങ്ങൾക്കായുള്ള സാർകോമെയർ ജീനുകളുടെ ഹീറ്റ്‌മാപ്പ് ഓരോ സംസ്‌കാര സാഹചര്യങ്ങളിലും സംസ്‌കരിക്കപ്പെടുന്നു.പിശക് ബാറുകൾ ശരാശരി ± സ്റ്റാൻഡേർഡ് ഡീവിയേഷനെ പ്രതിനിധീകരിക്കുന്നു.
ഫാറ്റി ആസിഡ് ഓക്സിഡേഷനിൽ നിന്ന് ഗ്ലൈക്കോളിസിസിലേക്കുള്ള മാറ്റത്തെ ഉപാപചയ ആശ്രിതത്വം കാർഡിയോമയോസൈറ്റ് ഡിഫറൻഷ്യേഷന്റെ ഒരു മുഖമുദ്രയാണ്.പ്രായപൂർത്തിയാകാത്ത കാർഡിയോമയോസൈറ്റുകൾ പ്രാഥമികമായി എടിപി ഉൽപാദനത്തിനായി ഗ്ലൂക്കോസ് ഉപയോഗിക്കുന്നു, കൂടാതെ കുറച്ച് ക്രിസ്റ്റേ5,32 ഉള്ള ഹൈപ്പോപ്ലാസ്റ്റിക് മൈറ്റോകോണ്ട്രിയയുമുണ്ട്.ഗ്ലൂക്കോസ് ഉപയോഗ വിശകലനം കാണിക്കുന്നത് എംസി, എംടി അവസ്ഥകളിൽ, ഗ്ലൂക്കോസ് ഉപയോഗം ദിവസം 0 ടിഷ്യൂകളുടേതിന് സമാനമാണ് (ചിത്രം 4 സി).എന്നിരുന്നാലും, Ctrl സാമ്പിളുകൾ പുതിയ ടിഷ്യുവിനെ അപേക്ഷിച്ച് ഗ്ലൂക്കോസ് ഉപയോഗത്തിൽ ഗണ്യമായ വർദ്ധനവ് കാണിച്ചു.CTCM, T3/Dex എന്നിവയുടെ സംയോജനം ടിഷ്യു പ്രവർത്തനക്ഷമത വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും 12 ദിവസത്തെ സംസ്ക്കരിച്ച ഹൃദയ വിഭാഗങ്ങളുടെ ഉപാപചയ പ്രതിഭാസത്തെ സംരക്ഷിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു എന്ന് ഇത് സൂചിപ്പിക്കുന്നു.കൂടാതെ, സ്ട്രെയിൻ അനാലിസിസ് കാണിക്കുന്നത് എംടി, എംഎസ് അവസ്ഥകളിൽ 12 ദിവസത്തേക്ക് ഫ്രഷ് ഹാർട്ട് ടിഷ്യുവിലെ പോലെ തന്നെ സ്‌ട്രെയിൻ ലെവലുകൾ തുടരുന്നു (ചിത്രം 4 ഡി).
കാർഡിയാക് സ്ലൈസ് ടിഷ്യുവിന്റെ ആഗോള ട്രാൻസ്‌ക്രിപ്‌ഷണൽ ലാൻഡ്‌സ്‌കേപ്പിൽ CTCM, T3/Dex എന്നിവയുടെ മൊത്തത്തിലുള്ള സ്വാധീനം വിശകലനം ചെയ്യാൻ, ഞങ്ങൾ നാല് വ്യത്യസ്ത സംസ്‌കാര വ്യവസ്ഥകളിൽ നിന്നുള്ള കാർഡിയാക് സ്‌ലൈസുകളിൽ RNAseq നടത്തി (സപ്ലിമെന്ററി ഡാറ്റ 1).രസകരമെന്നു പറയട്ടെ, 13,642 ജീനുകളിൽ 16 എണ്ണം മാത്രമേ വ്യത്യസ്തമായി പ്രകടിപ്പിക്കുന്നുള്ളൂ, പുതിയ ഹൃദയ കോശങ്ങളുമായി എംടി വിഭാഗങ്ങൾ ഉയർന്ന ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷനൽ സമാനത കാണിച്ചു.എന്നിരുന്നാലും, ഞങ്ങൾ നേരത്തെ കാണിച്ചതുപോലെ, Ctrl സ്ലൈസുകൾ 10-12 ദിവസങ്ങൾക്ക് ശേഷം സംസ്കാരത്തിൽ (ചിത്രം 4e) 1229 വ്യത്യസ്തമായി പ്രകടിപ്പിക്കുന്ന ജീനുകൾ പ്രദർശിപ്പിച്ചു.ഈ ഡാറ്റ ഹൃദയത്തിന്റെയും ഫൈബ്രോബ്ലാസ്റ്റ് ജീനുകളുടെയും qRT-PCR സ്ഥിരീകരിച്ചു (സപ്ലിമെന്ററി ചിത്രം. 7a-c).രസകരമെന്നു പറയട്ടെ, Ctrl വിഭാഗങ്ങൾ കാർഡിയാക്, സെൽ സൈക്കിൾ ജീനുകളുടെ നിയന്ത്രണം കുറയ്ക്കുകയും കോശജ്വലന ജീൻ പ്രോഗ്രാമുകൾ സജീവമാക്കുകയും ചെയ്തു.ദീർഘകാല സംസ്ക്കരണത്തിനു ശേഷം സാധാരണയായി സംഭവിക്കുന്ന ഡിഫറൻഷ്യേഷൻ, എംടി അവസ്ഥകളിൽ പൂർണ്ണമായും ദുർബലമാകുമെന്ന് ഈ ഡാറ്റ സൂചിപ്പിക്കുന്നു (സപ്ലിമെന്ററി ചിത്രം. 8a,b).സാർകോമെയർ ജീനുകളെക്കുറിച്ചുള്ള ശ്രദ്ധാപൂർവമായ പഠനം കാണിക്കുന്നത്, MT അവസ്ഥകളിൽ മാത്രമേ സാർകോമറെ (ചിത്രം 4f), അയോൺ ചാനലുകൾ (സപ്ലിമെന്ററി ചിത്രം 9) എന്നിവ എൻകോഡിംഗ് ചെയ്യുന്ന ജീനുകൾ സംരക്ഷിച്ചിട്ടുള്ളൂ, Ctrl, TD, MC അവസ്ഥകളിൽ അടിച്ചമർത്തലിൽ നിന്ന് അവയെ സംരക്ഷിക്കുന്നു.മെക്കാനിക്കൽ, ഹ്യൂമറൽ സ്റ്റിമുലേഷൻ (T3/Dex) എന്നിവയുടെ സംയോജനത്തിലൂടെ, ഹാർട്ട് സ്ലൈസ് ട്രാൻസ്‌ക്രിപ്‌റ്റോം സംസ്‌കാരത്തിൽ 12 ദിവസത്തിന് ശേഷം ഫ്രഷ് ഹാർട്ട് സ്‌ലൈസുകൾക്ക് സമാനമായി നിലനിൽക്കുമെന്ന് ഈ ഡാറ്റ തെളിയിക്കുന്നു.
ഈ ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷണൽ കണ്ടെത്തലുകളെ പിന്തുണയ്ക്കുന്നത് ഹൃദയഭാഗങ്ങളിലെ കാർഡിയോമയോസൈറ്റുകളുടെ ഘടനാപരമായ സമഗ്രത 12 ദിവസത്തേക്ക് എംടി അവസ്ഥയിൽ മികച്ച രീതിയിൽ സംരക്ഷിക്കപ്പെടുന്നു, കേടുകൂടാതെയും പ്രാദേശികവൽക്കരിച്ച കോൺക്‌സിൻ 43 (ചിത്രം 5 എ) കാണിക്കുന്നു.കൂടാതെ, Ctrl-മായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ MT അവസ്ഥകളിലെ ഹൃദയ വിഭാഗങ്ങളിലെ ഫൈബ്രോസിസ് ഗണ്യമായി കുറഞ്ഞു, കൂടാതെ ഫ്രഷ് ഹാർട്ട് വിഭാഗങ്ങൾക്ക് സമാനമാണ് (ചിത്രം 5 ബി).മെക്കാനിക്കൽ ഉത്തേജനത്തിന്റെയും T3/Dex ചികിത്സയുടെയും സംയോജനം സംസ്കാരത്തിലെ ഹൃദയ വിഭാഗങ്ങളിൽ ഹൃദയ ഘടനയെ ഫലപ്രദമായി സംരക്ഷിക്കുന്നുവെന്ന് ഈ ഡാറ്റ തെളിയിക്കുന്നു.
ട്രോപോണിൻ-ടി (പച്ച), കോണക്‌സിൻ 43 (ചുവപ്പ്), ഡിഎപിഐ (നീല) എന്നിവയുടെ ഒരു പ്രതിനിധി ഇമ്മ്യൂണോഫ്ലൂറസെൻസ് ചിത്രങ്ങൾ പുതുതായി വേർതിരിച്ച ഹൃദയ വിഭാഗങ്ങളിൽ (D0) അല്ലെങ്കിൽ 12 ദിവസത്തേക്ക് നാല് ഹൃദയ വിഭാഗ സംസ്‌കാര സാഹചര്യങ്ങളിലും (സ്കെയിൽ ബാർ = 100 µm).). ഹൃദയ കോശങ്ങളുടെ ഘടനാപരമായ സമഗ്രതയുടെ (n = 7 (D0, D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC, D12 MT) സ്ലൈസുകൾ/ഗ്രൂപ്പ് വിവിധ പന്നികളിൽ നിന്നുള്ള കൃത്രിമബുദ്ധി അളക്കൽ, വൺ-വേ ANOVA ടെസ്റ്റ് നടത്തുന്നു; ####p <0.0001 താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ <0.0001. ed to D12 Ctrl). ഹൃദയ കോശങ്ങളുടെ ഘടനാപരമായ സമഗ്രതയുടെ (n = 7 (D0, D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC, D12 MT) സ്ലൈസുകൾ/ഗ്രൂപ്പ് വിവിധ പന്നികളിൽ നിന്നുള്ള കൃത്രിമബുദ്ധി അളക്കൽ, വൺ-വേ ANOVA ടെസ്റ്റ് നടത്തുന്നു; #### p <0.0001 താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ. ed to D12 Ctrl). കൊളീച്ചെസ്‌റ്റ്‌വെന്നയ ഒഷെങ്ക സ്‌ട്രൂക്‌ടൂർനോയ് ഇലോസ്‌റ്റ്‌നോസ്‌റ്റി ടകനി സെർഡ്‌സ് സ് പോമോഷ് ഇസ്‌കുസ്‌റ്റ്‌വെന്നോഗോ (ഡിഎൽഡിഎൽഡിഎൽ =15), 12 TD, D12 MC, D12 MT) സ്രെസോവ്/ഗ്രൂപ്പ് ഓഫ് റസ്‌നിഹ് സ്വീനി, പ്രോവെഡൻ ഓഡ്‌നോഫാക്‌ടോർണി ടെസ്‌റ്റ് അനോവ; ### p <0,0001а; ### p <0,0001 5 или ****p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). ആർട്ടിഫിഷ്യൽ ഇന്റലിജൻസ് (n = 7 (D0, D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC, D12 MT) വിഭാഗങ്ങൾ/ഗ്രൂപ്പ് ഉപയോഗിച്ച് വിവിധ പന്നികളിൽ നിന്ന്, വൺ-വേ ANOVA ടെസ്റ്റ് നടത്തി; #### p <0.0001-നെ അപേക്ഷിച്ച് D0.1, <0. 2 Ctrl).对不同猪的心脏组织结构完整性（n = 7（D0 和D12 Ctrl）、5（D12 TD,D12 എംടി人工智能量化，进行单向ANOVA 测试；#### p <0.0001 与D0 和*p <0.05 相比，或****p <0.00 相比，或****p <0.00ഉദാഹരണത്തിന്工 智能量 化 进 行 单向 单向 单向 测试rl 相比).ഒരു വൺ-വേ ANOVA ടെസ്റ്റ് ഉപയോഗിച്ച് വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ (n = 7 (D0, D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC, D12 MT) വിഭാഗങ്ങൾ/ഗ്രൂപ്പ്) കൃത്രിമബുദ്ധി ഉപയോഗിച്ച് കാർഡിയാക് ടിഷ്യുവിന്റെ ഘടനാപരമായ സമഗ്രതയുടെ അളവ്;#### p <0,0001 по сравнению с D0 и *p < 0,05 или ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). D0-മായി താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ #### p <0.0001, D12 Ctrl-നെ അപേക്ഷിച്ച് *p <0.05 അല്ലെങ്കിൽ ****p <0.0001). b മാസന്റെ ട്രൈക്രോം സ്റ്റെയിൻ (സ്കെയിൽ ബാർ = 500 µm) (സ്കെയിൽ ബാർ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, D12 MC), 9 (D12 MT), 9 (D12 MT) കൊണ്ടുള്ള ഹാർട്ട് സ്ലൈസുകളുടെ പ്രതിനിധാന ചിത്രങ്ങളും അളവും, 9 (D12 MT) വ്യത്യസ്‌ത സ്ലൈസുകൾ # VA-#0-ൽ നിന്ന് വ്യത്യസ്ത സ്ലൈസുകൾ D0, ***p <0.001 എന്നിവയുമായി താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ 001, അല്ലെങ്കിൽ D12 Ctrl-മായി താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ ****p <0.0001). b മാസന്റെ ട്രൈക്രോം സ്റ്റെയിൻ (സ്കെയിൽ ബാർ = 500 µm) (സ്കെയിൽ ബാർ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, D12 MC), 9 (D12 MT), 9 (D12 MT) കൊണ്ടുള്ള ഹാർട്ട് സ്ലൈസുകളുടെ പ്രതിനിധാന ചിത്രങ്ങളും അളവും, 9 (D12 MT) വ്യത്യസ്‌ത സ്ലൈസുകൾ # VA-#0-ൽ നിന്ന് വ്യത്യസ്ത സ്ലൈസുകൾ D0, ***p <0.001 എന്നിവയുമായി താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ 001, അല്ലെങ്കിൽ D12 Ctrl-മായി താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ ****p <0.0001). b റപ്രെസന്റതിവ്ന്ыഎ ഇസോബ്രാജെനിയയും കൊളിചെസ്ത്വെന്നയ ഒസെങ്ക സ്ട്രെസോവ് സെർഡ്സാ, ഒക്രശെന്ыഹ് ട്രിംസ്നാം ബ്നയ ലിനൈക = 500 മില്ലീമീറ്റർ) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD , D12 MC), 9 (D12 MT) т ANOVA; ####p <0,0001 по сравнению с D0 и ***p <0,001 или ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). b മാസണിന്റെ ട്രൈക്രോം സ്റ്റെയിൻ (സ്കെയിൽ ബാർ = 500 µm) (സ്കെയിൽ ബാർ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, D12 MC), 9 (D12 MT, D12 MC) എന്നിവയിൽ പാടുകളുള്ള ഹൃദയഭാഗങ്ങളുടെ പ്രതിനിധി ചിത്രങ്ങളും അളവും, 9 (D12 MT, D12 MT) വിഭാഗങ്ങൾ/ഗ്രൂപ്പ്. 0, ***p <0.001 അല്ലെങ്കിൽ ****p <0.0001 vs. D12 Ctrl). b 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像和量化（比例尺= 500 D（D10D =201 TD 和D12 എംസി 001，或****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）。 b 用 മാസൻ 三 色 染料 的 心脏 切片 的 代表性 和 量化 （比㾋 尺 尺 剼 = 500 d ctrl 、 d12 td 和 d12 mc） 9 കൂടാതെ ***p <0.001，或****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）。 b റപ്രെസന്റതിവ്ന്ыഎ ഇസോബ്രാജെനിയയും കോളിചെസ്റ്റ്വെന്നയ ഒഷെങ്ക സ്ട്രെസോവ് സെർഡ്സാ, ഒക്രഷെന്ыഹ് ട്രൈക്രോമോസ് 500 മില്ലീമീറ്റർ) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD и D12 MC), 9 (D12 MT) റേസോവ് ഓഫ് റസ്‌നിഷ് സ്വീനി / ഗ്രുപ്പ്പി, ഒഡിൻ- <##0019 ию с D0, ***p <0,001 или ****p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). b മാസന്റെ ട്രൈക്രോം (സ്കെയിൽ ബാർ = 500 µm) (സ്കെയിൽ ബാർ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, D12 MC), 9 (D12 MT) എന്നിവയിൽ നിറമുള്ള ഹൃദയഭാഗങ്ങളുടെ പ്രതിനിധാന ചിത്രങ്ങളും അളവും വ്യത്യസ്ത പന്നികൾ/ഗ്രൂപ്പിൽ നിന്ന് 9 (D12 MT) വിഭാഗങ്ങൾ വ്യത്യസ്ത പന്നികൾ/ഗ്രൂപ്പ്, #0 VAp0 വരെ താരതമ്യം ചെയ്തു, #0.1. < 0.001 അല്ലെങ്കിൽ ****p < 0.0001 D12 Ctrl മായി താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ).പിശക് ബാറുകൾ ശരാശരി ± സ്റ്റാൻഡേർഡ് ഡീവിയേഷനെ പ്രതിനിധീകരിക്കുന്നു.
അവസാനമായി, കാർഡിയാക് ഹൈപ്പർട്രോഫിയെ അനുകരിക്കാനുള്ള CTCM ന്റെ കഴിവ്, കാർഡിയാക് ടിഷ്യു സ്ട്രെച്ച് വർദ്ധിപ്പിച്ച് വിലയിരുത്തി.CTCM-ൽ, പീക്ക് എയർ ചേമ്പർ മർദ്ദം 80 mmHg ൽ നിന്ന് 80 mmHg ആയി വർദ്ധിച്ചു.കല.(സാധാരണ സ്ട്രെച്ച്) 140 mmHg വരെ കല.(ചിത്രം 6a).ഇത് ഹൈപ്പർട്രോഫിയിൽ കാണപ്പെടുന്നതിന് സമാനമായ ഒരു സാർകോമെയർ ദൈർഘ്യം കൈവരിക്കുന്നതിന് ഹൃദയ വിഭാഗങ്ങൾക്ക് ആവശ്യമായ സ്ട്രെച്ചിന്റെ 32% വർദ്ധനവിന് (ചിത്രം 6 ബി) സമാനമാണ്.സങ്കോചത്തിലും വിശ്രമത്തിലും ഹൃദയ കോശങ്ങളുടെ നീട്ടലും വേഗതയും സംസ്കാരത്തിന്റെ ആറ് ദിവസങ്ങളിൽ സ്ഥിരമായി നിലകൊള്ളുന്നു (ചിത്രം 6 സി).MT അവസ്ഥകളിൽ നിന്നുള്ള കാർഡിയാക് ടിഷ്യു ആറ് ദിവസത്തേക്ക് സാധാരണ സ്ട്രെച്ച് (MT (സാധാരണ)) അല്ലെങ്കിൽ ഓവർസ്ട്രെച്ച് അവസ്ഥകൾക്ക് (MT (OS)) വിധേയമാക്കി.സംസ്കാരത്തിൽ ഇതിനകം നാല് ദിവസം കഴിഞ്ഞ്, ഹൈപ്പർട്രോഫിക് ബയോമാർക്കർ NT-ProBNP എംടി (സാധാരണ) അവസ്ഥകളെ അപേക്ഷിച്ച് എംടി (ഒഎസ്) സാഹചര്യങ്ങളിൽ മാധ്യമത്തിൽ ഗണ്യമായി ഉയർത്തി (ചിത്രം 7 എ).കൂടാതെ, ആറ് ദിവസത്തെ സംസ്ക്കരണത്തിന് ശേഷം, എംടി ഹൃദയത്തിന്റെ (സാധാരണ) വിഭാഗങ്ങളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ എംടി (ഒഎസ്) (ചിത്രം 7 ബി) ലെ സെൽ വലുപ്പം ഗണ്യമായി വർദ്ധിച്ചു.കൂടാതെ, NFATC4 ന്യൂക്ലിയർ ട്രാൻസ്‌ലോക്കേഷൻ ഓവർസ്ട്രെച്ച്ഡ് ടിഷ്യൂകളിൽ ഗണ്യമായി വർദ്ധിച്ചു (ചിത്രം 7c).ഈ ഫലങ്ങൾ ഹൈപ്പർഡിസ്റ്റൻഷനു ശേഷമുള്ള പാത്തോളജിക്കൽ പുനർനിർമ്മാണത്തിന്റെ പുരോഗമനപരമായ വികസനം കാണിക്കുകയും സ്ട്രെച്ച്-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് കാർഡിയാക് ഹൈപ്പർട്രോഫി സിഗ്നലിംഗ് പഠിക്കുന്നതിനുള്ള ഒരു പ്ലാറ്റ്ഫോമായി CTCM ഉപകരണം ഉപയോഗിക്കാമെന്ന ആശയത്തെ പിന്തുണയ്ക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.
എയർ ചേമ്പർ മർദ്ദം, ഫ്ലൂയിഡ് ചേമ്പർ മർദ്ദം, ടിഷ്യു ചലന അളവുകൾ എന്നിവയുടെ പ്രതിനിധി അടയാളങ്ങൾ ചേമ്പർ മർദ്ദം ദ്രാവക അറയിലെ മർദ്ദം മാറ്റുന്നു, ഇത് ടിഷ്യു സ്ലൈസിന്റെ ചലനത്തിന് കാരണമാകുന്നു.b സാധാരണയായി വലിച്ചുനീട്ടുന്ന (ഓറഞ്ച്), ഓവർസ്ട്രെച്ച്ഡ് (നീല) ടിഷ്യൂ വിഭാഗങ്ങളുടെ പ്രതിനിധി സ്ട്രെച്ച് ശതമാനവും സ്ട്രെച്ച് റേറ്റ് കർവുകളും.c ബാർ ഗ്രാഫ് സൈക്കിൾ സമയം കാണിക്കുന്നു (ഒരു ഗ്രൂപ്പിന് n = 19 സ്ലൈസുകൾ, വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്ന്), സങ്കോച സമയം (ഒരു ഗ്രൂപ്പിന് n = 18-19 സ്ലൈസുകൾ, വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്ന്), വിശ്രമ സമയം (ഒരു ഗ്രൂപ്പിന് n = 19 സ്ലൈസുകൾ, വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്ന്) ), ടിഷ്യു ചലനത്തിന്റെ വ്യാപ്തി (n = 14 കഷ്ണങ്ങൾ/ഗ്രൂപ്പ്, വ്യത്യസ്ത പന്നികൾ വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്ന്), വിവിധ പന്നികളിൽ നിന്നുള്ള പീക്ക് റിലാക്സേഷൻ റേറ്റ് (n = 14 (D0), 15 (D6) ) വിഭാഗങ്ങൾ/ഗ്രൂപ്പുകൾ), ടു-ടെയിൽഡ് സ്റ്റുഡന്റ്സ് ടി-ടെസ്റ്റ് ഒരു പാരാമീറ്ററിലും കാര്യമായ വ്യത്യാസം കാണിച്ചില്ല, ഇത് 6 ദിവസത്തെ ഓവർവോൾട്ടേജുള്ള സംസ്കാരത്തിൽ ഈ പാരാമീറ്ററുകൾ സ്ഥിരമായി നിലനിന്നിരുന്നുവെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു.പിശക് ബാറുകൾ ശരാശരി ± സ്റ്റാൻഡേർഡ് ഡീവിയേഷനെ പ്രതിനിധീകരിക്കുന്നു.
MT നോർമൽ സ്ട്രെച്ച് (Norm) അല്ലെങ്കിൽ ഓവർ സ്ട്രെച്ചിംഗ് (OS) അവസ്ഥകളിൽ (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, D4 MTOS) കൾച്ചർ ചെയ്ത ഹാർട്ട് സ്‌ലൈസുകളിൽ നിന്ന് കൾച്ചർ മീഡിയയിലെ NT-ProBNP കോൺസൺട്രേഷന്റെ ഒരു ബാർ ഗ്രാഫ് ക്വാണ്ടിഫിക്കേഷൻ സ്ലൈസുകൾ/ഗ്രൂപ്പ് രണ്ട്- * വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്ന് താരതമ്യം ചെയ്യുന്നു. ഒരു ബാർ ഗ്രാൽ സ്റ്റു ആർപ്പ് സ്ലൈസുകളിൽ നിന്നുള്ള എൻടി-പ്രോംപ് സാന്ദ്രീകരണത്തിന്റെ അളവ് (നോർത്ത്), 3 (ഡി 2 എംടിഒആർഎം, ഡി 4 എംടിഒആർ), 3 (ഡി 2 എംടിഒകൾ, ഡി 4 എംടിഒആർ), 3 (ഡി 2 എംടിഒകൾ, ഡി 2 എംടിഒആർഎം), 3 (ഡി 2 എംടിഒആർഎം, ഡി 4 എംടിഒആർഎം)സാധാരണ MT സ്ട്രെച്ച് (മാനദണ്ഡം) അല്ലെങ്കിൽ ഓവർ സ്ട്രെച്ച് (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, D4) എന്നിവയിൽ സംസ്കരിച്ച ഹൃദയ സ്ലൈസുകളിൽ നിന്നുള്ള കൾച്ചർ മീഡിയത്തിലെ NT-ProBNP കോൺസൺട്രേഷന്റെ ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് ഹിസ്റ്റോഗ്രാം.**p <0,01 по сравнению с нормальным растяжением). ** p <0.01 സാധാരണ സ്ട്രെച്ചിനെ അപേക്ഷിച്ച്). എ = 4 (D2 MTNorm)、3（D2 MTOS、D4 MTNorm 和D4 MTOS ,p <0.01). ഹാർട്ട് കഷണങ്ങളായി എൻടി-പ്രോംപ് സാന്ദ്രതയുടെ അളവ് (മാനദണ്ഡം), ഓവർ ഡ്രാച്ച് (OS) വ്യവസ്ഥകൾ (N / 双向 的 方方发 发动 发动), 可以 的ഹിസ്റ്റോഗ്രാം സാധാരണ MT സ്ട്രെച്ച് (മാനദണ്ഡം) അല്ലെങ്കിൽ ഓവർസ്ട്രെച്ച് (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm), D4 MTOS) എന്നിവയിൽ സംസ്കരിച്ച ഹൃദയ സ്ലൈസുകളിലെ NT-ProBNP സാന്ദ്രതയുടെ അളവ്, വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്നുള്ള സ്ലൈസുകൾ/ഗ്രൂപ്പ്, രണ്ട്-വഴി വിശകലനം;**p <0,01 по сравнению с нормальным растяжением). ** p <0.01 സാധാരണ സ്ട്രെച്ചിനെ അപേക്ഷിച്ച്). b ട്രോപോണിൻ-ടി, ഡബ്ല്യുജിഎ (ഇടത്), സെൽ സൈസ് ക്വാണ്ടിഫിക്കേഷൻ (വലത്) എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് സ്റ്റെയിൻ ചെയ്ത ഹാർട്ട് സ്ലൈസുകൾക്കായുള്ള പ്രതിനിധി ചിത്രങ്ങൾ (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) സെല്ലുകൾ/ഗ്രൂപ്പ് വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്ന് 10 വ്യത്യസ്ത സ്ലൈസുകളിൽ നിന്ന്, രണ്ട്-വാലുള്ള വിദ്യാർത്ഥി <0-0p വരെ താരതമ്യം ചെയ്യുന്നു. b ട്രോപോണിൻ-ടി, ഡബ്ല്യുജിഎ (ഇടത്), സെൽ സൈസ് ക്വാണ്ടിഫിക്കേഷൻ (വലത്) എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് സ്റ്റെയിൻ ചെയ്ത ഹാർട്ട് സ്ലൈസുകളുടെ പ്രതിനിധി ചിത്രങ്ങൾ (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) സെല്ലുകൾ/ഗ്രൂപ്പ് വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്ന് 10 വ്യത്യസ്ത സ്ലൈസുകളിൽ നിന്ന്, 2- *ടെയിൽഡ് സ്റ്റുഡന്റ് 0 മുതൽ സാധാരണ 1 വരെ നീളുന്നു. b റെപ്രെസന്റതിവ്ന്ыഎ ഇസോബ്രാജെനിയ സ്രെസോവ് സെർഡ്സാ, ഒക്രഷെന്ыഹ് ട്രോപോണിനോം-ടി, ആൻഗാൾ (സ്ലേവ) കോഡോൾ എന്നിവ അസ്മേര ക്ലെറ്റോക്ക് (സ്പ്രാവ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ക്ലെറ്റോക്ക്/ഗ്രൂപ്പ് 10 രാഷ്ട്രങ്ങൾ, പുതിയ വ്യവസ്ഥകൾ ой t-критерий Стьюдента; ****p <0,0001 по сравнению с нормальным растяжением). b ട്രോപോണിൻ-T, AZP (ഇടത്), സെൽ സൈസ് ക്വാണ്ടിഫിക്കേഷൻ (വലത്) എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് പാടുകളുള്ള ഹൃദയഭാഗങ്ങളുടെ പ്രതിനിധി ചിത്രങ്ങൾ (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) സെല്ലുകൾ/ഗ്രൂപ്പ് വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്ന് 10 വ്യത്യസ്ത വിഭാഗങ്ങളിൽ നിന്ന്, രണ്ട്-വാലുള്ള വിദ്യാർത്ഥിയുടെ <0 മുതൽ 0 വരെ താരതമ്യം ചെയ്തു. ബി ），来自不同猪的10 个不同切片的369（D6 MTNorm）细胞/组,两进行有尾学生，检检检p <0.0001). b calcarein-T, WGA (ഇടത്), സെല്ലിന്റെ വലിപ്പം (വലത്) എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് സ്റ്റെയിൻ ചെയ്ത ഹാർട്ട് സ്ലൈസുകളുടെ പ്രതിനിധി ചിത്രങ്ങൾ (n = 330 (D6 MTOS), 369 10 വ്യത്യസ്ത സ്ലൈസുകളിൽ നിന്ന് (D6 MTNorm)) സെല്ലുകൾ 0001). b റപ്രെസന്റതിവ്ന്ыഎ ഇസോബ്രാജെനിയ സ്രെസോവ് സെർഡ്സാ, ഒക്രഷെംന്ыഹ് ട്രോപോണിനോം-ടി, അംഗാജ് (സ്ലേവ) കോൾവോസ് ക്ലെറ്റോക്ക് (സ്പ്രാവ്) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) അതായത് 10 റേസ്‌ലിക് സ്‌റേസോവ് മുതൽ റഷ്യൻ സ്‌വിനിഷ് ക്ലെറ്റ്‌കി/ഗ്രൂപ്പ്‌സ്, юдента; ****p <0,0001 по сравнению с нормальным растяжением). b ട്രോപോണിൻ-T, AZP (ഇടത്), സെൽ സൈസ് (വലത്) എന്നിവയുടെ അളവ് (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് പാടുകളുള്ള ഹൃദയഭാഗങ്ങളുടെ പ്രതിനിധി ചിത്രങ്ങൾ, വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്ന് 10 വ്യത്യസ്ത വിഭാഗങ്ങളിൽ നിന്ന്) കോശങ്ങൾ/ഗ്രൂപ്പ്, രണ്ട്-വാലുള്ള മാനദണ്ഡം;സാധാരണ സ്‌ട്രെയിനുമായി താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ ****p <0.0001). c ട്രോപോണിൻ-T, NFATC4 എന്നിവയ്‌ക്കായി ഇമ്മ്യൂണോലേബൽ ചെയ്‌ത ദിവസം 0, ദിവസം 6 MTOS ഹാർട്ട് സ്‌ലൈസുകളുടെ പ്രതിനിധി ചിത്രങ്ങൾ, സി‌എം (n = 4 (D0), 3 (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) സ്‌ലൈസുകൾ/ഗ്രൂപ്പ് വ്യത്യസ്‌ത പന്നികളിൽ നിന്ന് . c ട്രോപോണിൻ-T, NFATC4 എന്നിവയ്‌ക്കായി ഇമ്മ്യൂണോലേബൽ ചെയ്‌ത ദിവസം 0, ദിവസം 6 MTOS ഹാർട്ട് സ്‌ലൈസുകളുടെ പ്രതിനിധി ചിത്രങ്ങൾ, സി‌എം (n = 4 (D0), 3 (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) സ്‌ലൈസുകൾ/ഗ്രൂപ്പ് രണ്ട് വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്ന് . സി റെപ്രെസന്റതിവ്ന്ыഎ ഐസോബ്രാജെനിയ ഡ്ലിയ സ്രെസോവ് സെർഡിസ 0 അല്ലെങ്കിൽ 6 ദിവസം എംടിഒഎസ്, ഇമ്മുനോമെച്ചെന്ыഹ് ദ്ലിയ ട്രോപോണിന-ടിക്ഫോഡ്, സെൻക ട്രാൻസ്ലോക്കസികൾ NFATC4 വിൽ യാദ്ര കാവേർണോസ്ന്ыഹ് ക്ലെറ്റോക്ക് (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) സ്ട്രെസോവ്/ഗ്രൂപ്പ് റേറ്റിംഗിൽ നിന്ന് വ്യത്യസ്തമായി. ий t-критерий Стьюдента; *p <0,05). c 0, 6 ദിവസങ്ങളിൽ MTOS, ട്രോപോണിൻ-T, NFATC4 എന്നിവയ്‌ക്കായി ഇമ്മ്യൂണോലേബൽ ചെയ്‌ത ഹൃദയഭാഗങ്ങൾക്കായുള്ള പ്രതിനിധി ചിത്രങ്ങൾ, കാവേർനസ് സെല്ലുകളുടെ ന്യൂക്ലിയസിലെ NFATC4 ട്രാൻസ്‌ലോക്കേഷന്റെ അളവ് (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) രണ്ട് സ്‌ലൈസുകൾ/ഗ്രൂപ്പ് വിവിധ പന്നികളിൽ നിന്ന്;*p <0.05). c 用于肌钙蛋白-T 和NFATC4的NFATC4 易位至CM 细胞核的量化（n = 4 (D0)、3 (D6 MTOS) c calcanin-T, NFATC4 ഇമ്മ്യൂണോലേബലിംഗിന്റെ പ്രതിനിധി ചിത്രങ്ങൾ间双尾学生et 电影；*p <0.05). c റെപ്രെസന്ററ്റിവ്ന്ыഎ ഇസോബ്രാജെനിയ സ്രെസോവ് സെർഡ്സാ എംടിഒഎസ് 0 നും 6 നും ദിവസങ്ങളിൽ ഇമ്മുനോമാർക്കിറോവ്കി ട്രോപോണിഫോം-4 സെൻക ട്രാൻസ്‌ലോക്കസികൾ NFATC4 യാദ്ര മുഖ്യമന്ത്രിയിൽ നിന്ന് റാസ്‌നിഹ് സ്വിനെ (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) വർഗ്ഗം/ഗ്രൂപ്പ്, ദ്വ- ഹവ്‌സ്‌റ്റാക്റ്റ്; ,05). c വ്യത്യസ്ത പന്നികളിൽ നിന്ന് CM ന്റെ ന്യൂക്ലിയസിൽ ട്രോപോണിൻ-T, NFATC4 ഇമ്മ്യൂണോലേബലിംഗിനും NFATC4 ട്രാൻസ്‌ലോക്കേഷന്റെ അളവ് നിർണയിക്കുന്നതിനുമായി 0, 6 ദിവസങ്ങളിൽ MTOS ഹൃദയ സ്‌ലൈസുകളുടെ പ്രതിനിധി ചിത്രങ്ങൾ (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) സ്‌ലൈസുകൾ/ഗ്രൂപ്പ്, 2-ടെയിൽഡ് 5.പിശക് ബാറുകൾ ശരാശരി ± സ്റ്റാൻഡേർഡ് ഡീവിയേഷനെ പ്രതിനിധീകരിക്കുന്നു.
ഹൃദയ പരിതസ്ഥിതിയെ കൃത്യമായി പുനർനിർമ്മിക്കുന്ന സെല്ലുലാർ മോഡലുകൾ വിവർത്തന ഹൃദയ ഗവേഷണത്തിന് ആവശ്യമാണ്.ഈ പഠനത്തിൽ, ഹൃദയത്തിന്റെ അൾട്രാത്തിൻ വിഭാഗങ്ങളെ ഉത്തേജിപ്പിക്കാൻ കഴിയുന്ന ഒരു CTCM ഉപകരണം വികസിപ്പിച്ചെടുത്തു.CTCM സിസ്റ്റത്തിൽ ഫിസിയോളജിക്കൽ സിൻക്രൊണൈസ്ഡ് ഇലക്ട്രോ മെക്കാനിക്കൽ ഉത്തേജനവും T3, Dex ഫ്ലൂയിഡ് സമ്പുഷ്ടീകരണവും ഉൾപ്പെടുന്നു.പോർസൈൻ ഹൃദയ വിഭാഗങ്ങൾ ഈ ഘടകങ്ങളുമായി സമ്പർക്കം പുലർത്തിയപ്പോൾ, അവയുടെ പ്രവർത്തനക്ഷമത, ഘടനാപരമായ സമഗ്രത, ഉപാപചയ പ്രവർത്തനങ്ങൾ, ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ എക്സ്പ്രഷൻ എന്നിവ 12 ദിവസത്തെ സംസ്കാരത്തിന് ശേഷം പുതിയ ഹൃദയ കോശങ്ങളിലെ പോലെ തന്നെ തുടർന്നു.കൂടാതെ, കാർഡിയാക് ടിഷ്യു അമിതമായി നീട്ടുന്നത് ഹൈപ്പർ എക്സ്റ്റൻഷൻ മൂലമുണ്ടാകുന്ന ഹൃദയത്തിന്റെ ഹൈപ്പർട്രോഫിക്ക് കാരണമാകും.മൊത്തത്തിൽ, ഈ ഫലങ്ങൾ ഒരു സാധാരണ കാർഡിയാക് ഫിനോടൈപ്പ് നിലനിർത്തുന്നതിൽ ഫിസിയോളജിക്കൽ കൾച്ചർ അവസ്ഥകളുടെ നിർണായക പങ്കിനെ പിന്തുണയ്ക്കുകയും മയക്കുമരുന്ന് പരിശോധനയ്ക്ക് ഒരു പ്ലാറ്റ്ഫോം നൽകുകയും ചെയ്യുന്നു.
കാർഡിയോമയോസൈറ്റുകളുടെ പ്രവർത്തനത്തിനും നിലനിൽപ്പിനും അനുയോജ്യമായ അന്തരീക്ഷം സൃഷ്ടിക്കുന്നതിന് പല ഘടകങ്ങളും സംഭാവന ചെയ്യുന്നു.ഈ ഘടകങ്ങളിൽ ഏറ്റവും വ്യക്തമായത് (1) ഇന്റർസെല്ലുലാർ ഇടപെടലുകൾ, (2) ഇലക്‌ട്രോ മെക്കാനിക്കൽ ഉത്തേജനം, (3) ഹ്യൂമറൽ ഘടകങ്ങൾ, (4) ഉപാപചയ സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റുകൾ എന്നിവയുമായി ബന്ധപ്പെട്ടതാണ്.ഫിസിയോളജിക്കൽ സെൽ-ടു-സെൽ ഇടപെടലുകൾക്ക് ഒരു എക്സ്ട്രാ സെല്ലുലാർ മാട്രിക്സ് പിന്തുണയ്ക്കുന്ന ഒന്നിലധികം സെൽ തരങ്ങളുടെ സങ്കീർണ്ണമായ ത്രിമാന നെറ്റ്‌വർക്കുകൾ ആവശ്യമാണ്.അത്തരം സങ്കീർണ്ണമായ സെല്ലുലാർ ഇടപെടലുകൾ വ്യക്തിഗത സെൽ തരങ്ങളുടെ സഹ-സംസ്കാരത്തിലൂടെ വിട്രോയിൽ പുനർനിർമ്മിക്കാൻ പ്രയാസമാണ്, പക്ഷേ ഹൃദയ വിഭാഗങ്ങളുടെ ഓർഗാനോടൈപ്പിക് സ്വഭാവം ഉപയോഗിച്ച് എളുപ്പത്തിൽ നേടാനാകും.
കാർഡിയാക് ഫിനോടൈപ്പ്33,34,35 നിലനിർത്തുന്നതിന് കാർഡിയോമയോസൈറ്റുകളുടെ മെക്കാനിക്കൽ സ്ട്രെച്ചും വൈദ്യുത ഉത്തേജനവും നിർണായകമാണ്.ഹൈപിഎസ്‌സി-സിഎം കണ്ടീഷനിംഗിനും പക്വതയ്ക്കും മെക്കാനിക്കൽ ഉത്തേജനം വ്യാപകമായി ഉപയോഗിക്കപ്പെടുന്നുണ്ടെങ്കിലും, നിരവധി ഗംഭീരമായ പഠനങ്ങൾ ഈയിടെ യുണിയാക്സിയൽ ലോഡിംഗ് ഉപയോഗിച്ച് സംസ്കാരത്തിലെ ഹൃദയ സ്ലൈസുകളുടെ മെക്കാനിക്കൽ ഉത്തേജനം പരീക്ഷിച്ചു.ഈ പഠനങ്ങൾ കാണിക്കുന്നത് 2D യൂണിയാക്സിയൽ മെക്കാനിക്കൽ ലോഡിംഗ് സംസ്കാര സമയത്ത് ഹൃദയത്തിന്റെ ഫിനോടൈപ്പിൽ നല്ല സ്വാധീനം ചെലുത്തുന്നു എന്നാണ്.ഈ പഠനങ്ങളിൽ, ഹൃദയത്തിന്റെ ഭാഗങ്ങൾ ഒന്നുകിൽ ഐസോമെട്രിക് ടെൻസൈൽ ഫോഴ്‌സുകൾ 17, ലീനിയർ ഓക്‌സോട്ടോണിക് ലോഡിംഗ് 18 എന്നിവയാൽ ലോഡുചെയ്‌തു, അല്ലെങ്കിൽ ഫോഴ്‌സ് ട്രാൻസ്‌ഡ്യൂസർ ഫീഡ്‌ബാക്കും ടെൻഷൻ ഡ്രൈവുകളും ഉപയോഗിച്ച് കാർഡിയാക് സൈക്കിൾ പുനഃസൃഷ്ടിച്ചു.എന്നിരുന്നാലും, ഈ രീതികൾ പാരിസ്ഥിതിക ഒപ്റ്റിമൈസേഷൻ ഇല്ലാതെ യൂണിയാക്സിയൽ ടിഷ്യു സ്ട്രെച്ച് ഉപയോഗിക്കുന്നു, ഇത് പല കാർഡിയാക് ജീനുകളെ അടിച്ചമർത്തുകയോ അസാധാരണമായ സ്ട്രെച്ച് പ്രതികരണങ്ങളുമായി ബന്ധപ്പെട്ട ജീനുകളുടെ അമിത എക്സ്പ്രഷൻ നടത്തുകയോ ചെയ്യുന്നു.ഇവിടെ വിവരിച്ചിരിക്കുന്ന CTCM ഒരു 3D ഇലക്‌ട്രോ മെക്കാനിക്കൽ ഉത്തേജനം നൽകുന്നു, അത് സൈക്കിൾ സമയവും ഫിസിയോളജിക്കൽ സ്ട്രെച്ചും (25% സ്ട്രെച്ച്, 40% സിസ്റ്റോൾ, 60% ഡയസ്റ്റോൾ, മിനിറ്റിൽ 72 ബീറ്റുകൾ) എന്നിവയിൽ സ്വാഭാവിക കാർഡിയാക് സൈക്കിളിനെ അനുകരിക്കുന്നു.ടിഷ്യു സമഗ്രത നിലനിർത്താൻ ഈ ത്രിമാന മെക്കാനിക്കൽ ഉത്തേജനം മാത്രം മതിയാകില്ലെങ്കിലും, ടിഷ്യു പ്രവർത്തനക്ഷമത, പ്രവർത്തനക്ഷമത, സമഗ്രത എന്നിവ വേണ്ടത്ര നിലനിർത്തുന്നതിന് T3/Dex ഉപയോഗിച്ചുള്ള ഹ്യൂമറൽ, മെക്കാനിക്കൽ ഉത്തേജനം എന്നിവ ആവശ്യമാണ്.
മുതിർന്നവരുടെ ഹൃദയത്തിന്റെ പ്രതിഭാസം മോഡുലേറ്റ് ചെയ്യുന്നതിൽ നർമ്മ ഘടകങ്ങൾ ഒരു പ്രധാന പങ്ക് വഹിക്കുന്നു.സെൽ മെച്ചറേഷൻ ത്വരിതപ്പെടുത്തുന്നതിന് കൾച്ചർ മീഡിയയിൽ T3, Dex എന്നിവ ചേർത്ത HiPS-CM പഠനങ്ങളിൽ ഇത് എടുത്തുകാണിച്ചു.കോശ സ്തരങ്ങളിലുടനീളം അമിനോ ആസിഡുകൾ, പഞ്ചസാര, കാൽസ്യം എന്നിവയുടെ ഗതാഗതത്തെ T3 സ്വാധീനിച്ചേക്കാം.കൂടാതെ, T3 MHC-α എക്‌സ്‌പ്രഷനും MHC-β ഡൗൺറെഗുലേഷനും പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുന്നു, ഇത് ഗര്ഭപിണ്ഡത്തിന്റെ CM ലെ സ്ലോ ട്വിച്ച് മയോഫിബ്രിലുകളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ പ്രായപൂർത്തിയായ കാർഡിയോമയോസൈറ്റുകളിൽ ഫാസ്റ്റ് ട്വിച്ച് മയോഫിബ്രിലുകളുടെ രൂപവത്കരണത്തെ പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുന്നു.ഹൈപ്പോതൈറോയ്ഡ് രോഗികളിൽ T3 യുടെ കുറവ് മയോഫിബ്രില്ലർ ബാൻഡുകളുടെ നഷ്ടത്തിനും ടോൺ വികസനത്തിന്റെ നിരക്ക് കുറയുന്നതിനും കാരണമാകുന്നു.ഡെക്സ് ഗ്ലൂക്കോകോർട്ടിക്കോയിഡ് റിസപ്റ്ററുകളിൽ പ്രവർത്തിക്കുകയും ഒറ്റപ്പെട്ട പെർഫ്യൂസ്ഡ് ഹൃദയങ്ങളിൽ മയോകാർഡിയൽ സങ്കോചം വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു;38 ഈ മെച്ചപ്പെടുത്തൽ കാൽസ്യം ഡെപ്പോസിറ്റ്-ഡ്രൈവ് എൻട്രി (SOCE) 39,40-ലെ ഫലവുമായി ബന്ധപ്പെട്ടതാണെന്ന് കരുതപ്പെടുന്നു.കൂടാതെ, ഡെക്സ് അതിന്റെ റിസപ്റ്ററുകളുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുന്നു, ഇത് വിശാലമായ ഇൻട്രാ സെല്ലുലാർ പ്രതികരണത്തിന് കാരണമാകുന്നു, ഇത് രോഗപ്രതിരോധ പ്രവർത്തനത്തെയും വീക്കത്തെയും അടിച്ചമർത്തുന്നു.
Ctrl-നെ അപേക്ഷിച്ച് ഫിസിക്കൽ മെക്കാനിക്കൽ ഉത്തേജനം (MS) മൊത്തത്തിലുള്ള കൾച്ചർ പ്രകടനം മെച്ചപ്പെടുത്തിയതായി ഞങ്ങളുടെ ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു, എന്നാൽ സംസ്കാരത്തിൽ 12 ദിവസങ്ങളിൽ പ്രവർത്തനക്ഷമത, ഘടനാപരമായ സമഗ്രത, ഹൃദയ പ്രകടനങ്ങൾ എന്നിവ നിലനിർത്തുന്നതിൽ പരാജയപ്പെട്ടു.Ctrl-നെ അപേക്ഷിച്ച്, CTCM (MT) സംസ്കാരങ്ങളിൽ T3, Dex എന്നിവ ചേർക്കുന്നത് പ്രവർത്തനക്ഷമത മെച്ചപ്പെടുത്തുകയും 12 ദിവസത്തേക്ക് ഫ്രഷ് ഹാർട്ട് ടിഷ്യുവിനൊപ്പം സമാനമായ ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ പ്രൊഫൈലുകൾ, ഘടനാപരമായ സമഗ്രത, ഉപാപചയ പ്രവർത്തനങ്ങൾ എന്നിവ നിലനിർത്തുകയും ചെയ്തു.കൂടാതെ, ടിഷ്യു സ്ട്രെച്ചിന്റെ അളവ് നിയന്ത്രിക്കുന്നതിലൂടെ, എസ്ടിസിഎം ഉപയോഗിച്ച് ഒരു ഹൈപ്പർ എക്സ്റ്റൻഷൻ-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് കാർഡിയാക് ഹൈപ്പർട്രോഫി മോഡൽ സൃഷ്ടിച്ചു, ഇത് എസ്ടിസിഎം സിസ്റ്റത്തിന്റെ വൈവിധ്യത്തെ വ്യക്തമാക്കുന്നു.ഹൃദയ പുനർനിർമ്മാണത്തിലും ഫൈബ്രോസിസിലും സാധാരണയായി കേടുപാടുകൾ സംഭവിക്കാത്ത അവയവങ്ങൾ ഉൾപ്പെടുന്നു, അവയുടെ രക്തചംക്രമണ കോശങ്ങൾക്ക് ഉചിതമായ സൈറ്റോകൈനുകളും ഫാഗോസൈറ്റോസിസും മറ്റ് പുനർനിർമ്മാണ ഘടകങ്ങളും നൽകാൻ കഴിയും, സമ്മർദ്ദത്തിനും ആഘാതത്തിനും മറുപടിയായി ഹൃദയത്തിന്റെ ഭാഗങ്ങൾ ഇപ്പോഴും ഫൈബ്രോട്ടിക് പ്രക്രിയയെ അനുകരിക്കാൻ കഴിയും.മൈഫൈബ്രോബ്ലാസ്റ്റുകളിലേക്ക്.ഈ കാർഡിയാക് സ്ലൈസ് മോഡലിൽ ഇത് മുമ്പ് വിലയിരുത്തിയിട്ടുണ്ട്.ടാക്കിക്കാർഡിയ, ബ്രാഡികാർഡിയ, മെക്കാനിക്കൽ രക്തചംക്രമണ പിന്തുണ (മെക്കാനിക്കൽ അൺലോഡഡ് ഹാർട്ട്) തുടങ്ങിയ നിരവധി അവസ്ഥകളെ അനുകരിക്കുന്നതിന് മർദ്ദം/വൈദ്യുത ആംപ്ലിറ്റ്യൂഡ്, ഫ്രീക്വൻസി എന്നിവ മാറ്റിക്കൊണ്ട് CTCM പാരാമീറ്ററുകൾ മോഡുലേറ്റ് ചെയ്യാൻ കഴിയുമെന്നത് ശ്രദ്ധിക്കേണ്ടതാണ്.ഇത് മയക്കുമരുന്ന് പരിശോധനയ്ക്ക് സിസ്റ്റത്തെ ഒരു മീഡിയം ത്രൂപുട്ട് ആക്കുന്നു.ഓവർ എക്സർഷൻ-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് കാർഡിയാക് ഹൈപ്പർട്രോഫിയെ മാതൃകയാക്കാനുള്ള CTCM-ന്റെ കഴിവ്, വ്യക്തിഗതമാക്കിയ തെറാപ്പിക്കായി ഈ സംവിധാനം പരിശോധിക്കുന്നതിന് വഴിയൊരുക്കുന്നു.ഉപസംഹാരമായി, കാർഡിയാക് ടിഷ്യു വിഭാഗങ്ങളുടെ സംസ്കാരം നിലനിർത്തുന്നതിന് മെക്കാനിക്കൽ സ്ട്രെച്ചും ഹ്യൂമറൽ ഉത്തേജനവും നിർണായകമാണെന്ന് നിലവിലെ പഠനം തെളിയിക്കുന്നു.
കേടുകൂടാത്ത മയോകാർഡിയം മോഡലിംഗ് ചെയ്യുന്നതിനുള്ള വളരെ വാഗ്ദാനമായ പ്ലാറ്റ്‌ഫോമാണ് CTCM എന്ന് ഇവിടെ അവതരിപ്പിച്ച ഡാറ്റ സൂചിപ്പിക്കുന്നുണ്ടെങ്കിലും, ഈ സംസ്കാര രീതിക്ക് ചില പരിമിതികളുണ്ട്.CTCM സംസ്കാരത്തിന്റെ പ്രധാന പരിമിതി അത് സ്ലൈസുകളിൽ തുടർച്ചയായ ചലനാത്മക മെക്കാനിക്കൽ സമ്മർദ്ദങ്ങൾ അടിച്ചേൽപ്പിക്കുന്നു എന്നതാണ്, ഇത് ഓരോ സൈക്കിളിലും ഹൃദയ സ്ലൈസ് സങ്കോചങ്ങൾ സജീവമായി നിരീക്ഷിക്കാനുള്ള കഴിവിനെ തടയുന്നു.കൂടാതെ, കാർഡിയാക് സെക്ഷനുകളുടെ (7 മില്ലിമീറ്റർ) ചെറിയ വലിപ്പം കാരണം, പരമ്പരാഗത ഫോഴ്സ് സെൻസറുകൾ ഉപയോഗിച്ച് സംസ്ക്കരണ സംവിധാനങ്ങൾക്ക് പുറത്തുള്ള സിസ്റ്റോളിക് പ്രവർത്തനം വിലയിരുത്താനുള്ള കഴിവ് പരിമിതമാണ്.നിലവിലെ കയ്യെഴുത്തുപ്രതിയിൽ, ഒപ്റ്റിക്കൽ വോൾട്ടേജ് കോൺട്രാക്റ്റൈൽ ഫംഗ്‌ഷന്റെ സൂചകമായി വിലയിരുത്തുന്നതിലൂടെ ഞങ്ങൾ ഈ പരിമിതിയെ ഭാഗികമായി മറികടക്കുന്നു.എന്നിരുന്നാലും, ഈ പരിമിതിക്ക് കൂടുതൽ ജോലി ആവശ്യമായി വരും, ഭാവിയിൽ കാൽസ്യം, വോൾട്ടേജ് സെൻസിറ്റീവ് ഡൈകൾ എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് ഒപ്റ്റിക്കൽ മാപ്പിംഗ് പോലുള്ള സംസ്കാരത്തിലെ ഹൃദയ സ്ലൈസുകളുടെ പ്രവർത്തനത്തെ ഒപ്റ്റിക്കൽ മോണിറ്ററിംഗിനുള്ള രീതികൾ അവതരിപ്പിക്കുന്നതിലൂടെ ഇത് പരിഹരിക്കപ്പെടാം.CTCM-ന്റെ മറ്റൊരു പരിമിതി, പ്രവർത്തന മാതൃക ഫിസിയോളജിക്കൽ സ്ട്രെസ് (പ്രീലോഡും ആഫ്റ്റർലോഡും) കൈകാര്യം ചെയ്യുന്നില്ല എന്നതാണ്.CTCM-ൽ, വളരെ വലിയ ടിഷ്യൂകളിൽ ഡയസ്റ്റോളിലും (ഫുൾ സ്ട്രെച്ച്) സിസ്റ്റോളിലും (വൈദ്യുത ഉത്തേജന സമയത്ത് സങ്കോചത്തിന്റെ ദൈർഘ്യം) 25% ഫിസിയോളജിക്കൽ സ്ട്രെച്ച് പുനർനിർമ്മിക്കുന്നതിന് എതിർ ദിശകളിൽ സമ്മർദ്ദം ചെലുത്തി.ഭാവിയിലെ CTCM ഡിസൈനുകളിൽ ഇരുവശത്തുനിന്നും ഹൃദയ കോശങ്ങളിൽ മതിയായ സമ്മർദ്ദം ചെലുത്തിയും ഹൃദയത്തിന്റെ അറകളിൽ സംഭവിക്കുന്ന കൃത്യമായ സമ്മർദ്ദ-വോളിയം ബന്ധങ്ങൾ പ്രയോഗിച്ചും ഈ പരിമിതി നീക്കം ചെയ്യണം.
ഈ കൈയെഴുത്തുപ്രതിയിൽ റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തിരിക്കുന്ന ഓവർസ്ട്രെച്ച്-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് റീമോഡലിംഗ് ഹൈപ്പർട്രോഫിക് ഹൈപ്പർസ്ട്രെച്ച് സിഗ്നലുകൾ അനുകരിക്കുന്നതിന് പരിമിതപ്പെടുത്തിയിരിക്കുന്നു.അതിനാൽ, ഹ്യൂമറൽ അല്ലെങ്കിൽ ന്യൂറൽ ഘടകങ്ങളുടെ ആവശ്യമില്ലാതെ (ഈ സിസ്റ്റത്തിൽ നിലവിലില്ലാത്ത) സ്ട്രെച്ച്-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് ഹൈപ്പർട്രോഫിക് സിഗ്നലിംഗ് പഠിക്കാൻ ഈ മാതൃക സഹായിക്കും.CTCM-ന്റെ ഗുണിതത വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിന് കൂടുതൽ പഠനങ്ങൾ ആവശ്യമാണ്, ഉദാഹരണത്തിന്, രോഗപ്രതിരോധ കോശങ്ങളുമായി സഹ-സംസ്കരണം, പ്ലാസ്മ ഹ്യൂമറൽ ഘടകങ്ങൾ പരിക്രമണം, ന്യൂറോണൽ കോശങ്ങളുമായി സഹ-സംസ്കാരം ചെയ്യുമ്പോൾ കണ്ടുപിടിത്തം എന്നിവ CTCM-നൊപ്പം രോഗ മോഡലിംഗ് സാധ്യതകൾ മെച്ചപ്പെടുത്തും.
പതിമൂന്ന് പന്നികളെയാണ് ഈ പഠനത്തിൽ ഉപയോഗിച്ചത്.എല്ലാ മൃഗ നടപടിക്രമങ്ങളും സ്ഥാപന മാർഗ്ഗനിർദ്ദേശങ്ങൾക്കനുസൃതമായി നടത്തുകയും ലൂയിസ്‌വില്ലെ സർവകലാശാലയിലെ ഇൻസ്റ്റിറ്റ്യൂഷണൽ അനിമൽ കെയർ ആൻഡ് യൂസ് കമ്മിറ്റി അംഗീകാരം നൽകുകയും ചെയ്തു.അയോർട്ടിക് കമാനം മുറുകെപ്പിടിക്കുകയും ഹൃദയം 1 എൽ അണുവിമുക്ത കാർഡിയോപ്ലെജിയ (110 mM NaCl, 1.2 mM CaCl2, 16 mM KCl, 16 mM MgCl2, 10 mM NaHCO3, 5 U/mL ഹെപ്പാരിൻ, pH 7.4 വരെ) ഉപയോഗിച്ച് പെർഫ്യൂസ് ചെയ്യുകയും ചെയ്തു; സാധാരണയായി 10 മിനിറ്റിൽ താഴെയുള്ള ഐസിൽ ലാബിലേക്ക് കൊണ്ടുപോകുന്നതുവരെ ഹൃദയങ്ങൾ ഐസ്-കോൾഡ് കാർഡിയോപ്ലെജിക് ലായനിയിൽ സൂക്ഷിച്ചു. സാധാരണയായി 10 മിനിറ്റിൽ താഴെയുള്ള ഐസിൽ ലാബിലേക്ക് കൊണ്ടുപോകുന്നതുവരെ ഹൃദയങ്ങൾ ഐസ്-കോൾഡ് കാർഡിയോപ്ലെജിക് ലായനിയിൽ സൂക്ഷിച്ചു. സെർഡ്‌സാ ക്രാനിലി വോൾഡ്യാനോം കാർഡിയോപ്ലെഗിചെസ്‌കോം റാസ്‌റ്റ്‌വോറെ ഡൊ ട്രാൻസ്‌പോർട്ടിറോവ്‌ക്കി വോൾ ലബോറട്ടറിസ് ന ലുഡ്‌ഡു, . ഐസ് ലബോറട്ടറിയിലേക്ക് കൊണ്ടുപോകുന്നത് വരെ ഹൃദയങ്ങൾ ഐസ്-കോൾഡ് കാർഡിയോപ്ലെജിക് ലായനിയിൽ സൂക്ഷിച്ചു, ഇത് സാധാരണയായി <10 മിനിറ്റ് എടുക്കും.将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟。将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟。 ഡെർജിറ്റെ സെർഡ്‌സാ വ ലെഡിയനോയ് കർദിയോപ്ലേഗി ഡൊ ട്രാൻസ്‌പോർട്ടിറോവ്കി വ് ലബോറട്ടറിയിൽ ലിഡു, ഒബിച്നോ <10 മി. ഐസിൽ ലബോറട്ടറിയിലേക്ക് കൊണ്ടുപോകുന്നത് വരെ ഹൃദയങ്ങൾ ഐസ് കാർഡിയോപ്ലെജിയയിൽ സൂക്ഷിക്കുക, സാധാരണയായി <10 മിനിറ്റ്.
SolidWorks കമ്പ്യൂട്ടർ-എയ്ഡഡ് ഡിസൈൻ (CAD) സോഫ്റ്റ്‌വെയറിലാണ് CTCM ഉപകരണം വികസിപ്പിച്ചത്.CNC ക്ലിയർ അക്രിലിക് പ്ലാസ്റ്റിക് ഉപയോഗിച്ചാണ് കൾച്ചർ ചേമ്പറുകളും ഡിവൈഡറുകളും എയർ ചേമ്പറുകളും നിർമ്മിച്ചിരിക്കുന്നത്.7mm വ്യാസമുള്ള ബാക്ക്-അപ്പ് റിംഗ് മധ്യഭാഗത്ത് ഉയർന്ന സാന്ദ്രത പോളിയെത്തിലീൻ (HDPE) കൊണ്ടാണ് നിർമ്മിച്ചിരിക്കുന്നത്, കൂടാതെ മീഡിയയ്ക്ക് താഴെയായി സീൽ ചെയ്യാൻ ഉപയോഗിക്കുന്ന സിലിക്കൺ ഒ-റിംഗ് ഉൾക്കൊള്ളാൻ ഒരു ഓ-റിംഗ് ഗ്രോവ് ഉണ്ട്.ഒരു നേർത്ത സിലിക്ക മെംബ്രൺ കൾച്ചർ ചേമ്പറിനെ വേർതിരിക്കുന്ന പ്ലേറ്റിൽ നിന്ന് വേർതിരിക്കുന്നു.സിലിക്കൺ മെംബ്രൺ 0.02 ഇഞ്ച് കട്ടിയുള്ള സിലിക്കൺ ഷീറ്റിൽ നിന്ന് ലേസർ മുറിച്ചതാണ്, കൂടാതെ 35A കാഠിന്യവുമുണ്ട്.താഴെയും മുകളിലുമുള്ള സിലിക്കൺ ഗാസ്കറ്റുകൾ 1/16″ കട്ടിയുള്ള സിലിക്കൺ ഷീറ്റിൽ നിന്ന് ലേസർ മുറിച്ചതാണ്, കൂടാതെ 50A കാഠിന്യവുമുണ്ട്.316L സ്റ്റെയിൻലെസ് സ്റ്റീൽ സ്ക്രൂകളും വിംഗ് നട്ടുകളും ബ്ലോക്ക് ഉറപ്പിക്കുന്നതിനും എയർടൈറ്റ് സീൽ സൃഷ്ടിക്കുന്നതിനും ഉപയോഗിക്കുന്നു.
ഒരു സമർപ്പിത പ്രിന്റഡ് സർക്യൂട്ട് ബോർഡ് (പിസിബി) രൂപകൽപ്പന ചെയ്തിരിക്കുന്നത് C-PACE-EM സിസ്റ്റവുമായി സംയോജിപ്പിക്കാനാണ്.പിസിബിയിലെ സ്വിസ് മെഷീൻ കണക്റ്റർ സോക്കറ്റുകൾ ഗ്രാഫൈറ്റ് ഇലക്ട്രോഡുകളുമായി വെള്ളി പൂശിയ ചെമ്പ് വയറുകളും വെങ്കല 0-60 സ്ക്രൂകളും ഉപയോഗിച്ച് ഇലക്ട്രോഡുകളിലേക്ക് സ്ക്രൂ ചെയ്തിരിക്കുന്നു.പ്രിന്റഡ് സർക്യൂട്ട് ബോർഡ് 3D പ്രിന്ററിന്റെ കവറിൽ സ്ഥാപിച്ചിരിക്കുന്നു.
CTCM ഉപകരണം നിയന്ത്രിക്കുന്നത് ഒരു പ്രോഗ്രാമബിൾ ന്യൂമാറ്റിക് ആക്യുവേറ്റർ (PPD) ആണ്, അത് ഒരു കാർഡിയാക് സൈക്കിളിന് സമാനമായ നിയന്ത്രിത രക്തചംക്രമണ മർദ്ദം സൃഷ്ടിക്കുന്നു.എയർ ചേമ്പറിനുള്ളിലെ മർദ്ദം വർദ്ധിക്കുന്നതിനനുസരിച്ച്, വഴക്കമുള്ള സിലിക്കൺ മെംബ്രൺ മുകളിലേക്ക് വികസിക്കുന്നു, ഇത് ടിഷ്യു സൈറ്റിന് കീഴിൽ മാധ്യമത്തെ നിർബന്ധിക്കുന്നു.ഈ ദ്രാവകം പുറന്തള്ളുന്നതിലൂടെ ടിഷ്യുവിന്റെ വിസ്തീർണ്ണം നീട്ടും, ഡയസ്റ്റോൾ സമയത്ത് ഹൃദയത്തിന്റെ ശാരീരിക വികാസത്തെ അനുകരിക്കുന്നു.വിശ്രമത്തിന്റെ കൊടുമുടിയിൽ, ഗ്രാഫൈറ്റ് ഇലക്ട്രോഡുകളിലൂടെ വൈദ്യുത ഉത്തേജനം പ്രയോഗിച്ചു, ഇത് എയർ ചേമ്പറിലെ മർദ്ദം കുറയ്ക്കുകയും ടിഷ്യു വിഭാഗങ്ങളുടെ സങ്കോചത്തിന് കാരണമാവുകയും ചെയ്തു.പൈപ്പിനുള്ളിൽ എയർ സിസ്റ്റത്തിലെ മർദ്ദം കണ്ടുപിടിക്കാൻ മർദ്ദം സെൻസറുള്ള ഒരു ഹെമോസ്റ്റാറ്റിക് വാൽവ് ഉണ്ട്.പ്രഷർ സെൻസർ മനസ്സിലാക്കുന്ന മർദ്ദം ലാപ്‌ടോപ്പുമായി ബന്ധിപ്പിച്ചിരിക്കുന്ന ഒരു ഡാറ്റ കളക്ടറിൽ പ്രയോഗിക്കുന്നു.ഗ്യാസ് ചേമ്പറിനുള്ളിലെ മർദ്ദം തുടർച്ചയായി നിരീക്ഷിക്കാൻ ഇത് അനുവദിക്കുന്നു.പരമാവധി ചേമ്പർ മർദ്ദം (സ്റ്റാൻഡേർഡ് 80 എംഎംഎച്ച്ജി, 140 എംഎംഎച്ച്ജി ഒഎസ്) എത്തിയപ്പോൾ, ഡാറ്റ അക്വിസിഷൻ ഉപകരണത്തിന് സി-പേസ്-ഇഎം സിസ്റ്റത്തിലേക്ക് ഒരു സിഗ്നൽ അയയ്ക്കാൻ ഉത്തരവിട്ടു, 2 എംഎസ്, 4 വി ആയി സജ്ജമാക്കി.
ഹാർട്ട് സെക്ഷനുകൾ ലഭിച്ചു, 6 കിണറുകളിലെ സംസ്ക്കാര വ്യവസ്ഥകൾ ഇനിപ്പറയുന്ന രീതിയിൽ നടത്തി: കൈമാറ്റ പാത്രത്തിൽ നിന്ന് തണുത്ത (4 ° C.) കാർഡിയോപ്ലെജിയ അടങ്ങിയ ഒരു ട്രേയിലേക്ക് വിളവെടുത്ത ഹൃദയങ്ങൾ മാറ്റുക.ഇടത് വെൻട്രിക്കിൾ ഒരു അണുവിമുക്തമായ ബ്ലേഡ് ഉപയോഗിച്ച് വേർതിരിച്ച് 1-2 സെന്റീമീറ്റർ കഷണങ്ങളായി മുറിച്ചു.ഈ ടിഷ്യൂ ബ്ലോക്കുകൾ ടിഷ്യു പശ ഉപയോഗിച്ച് ടിഷ്യു സപ്പോർട്ടുകളിൽ ഘടിപ്പിച്ച്, ടൈറോഡിന്റെ ലായനി അടങ്ങിയ വൈബ്രേറ്റിംഗ് മൈക്രോടോം ടിഷ്യു ബാത്തിൽ വയ്ക്കുകയും തുടർച്ചയായി ഓക്സിജൻ നൽകുകയും ചെയ്തു (3 g/L 2,3-butanedione monooxime (BDM), 140 mM NaCl (8.18 g) . ), 6 mM KCl (0.46 m1 gM), 0.44 m1 glu HEPES (2.38 g), 1 mM MgCl2 (1 ml 1 M പരിഹാരം), 1.8 mM CaCl2 (1.8 ml 1 M പരിഹാരം), 1 L ddH2O വരെ).വൈബ്രേറ്റിംഗ് മൈക്രോടോം 300 µm കട്ടിയുള്ള കഷ്ണങ്ങൾ 80 Hz ആവൃത്തിയിലും 2 mm തിരശ്ചീന വൈബ്രേഷൻ ആംപ്ലിറ്റ്യൂഡിലും 0.03 mm/s മുൻകൂർ നിരക്കിലും മുറിക്കുന്നതിന് സജ്ജമാക്കി.ലായനി തണുപ്പിക്കാൻ ടിഷ്യു ബാത്ത് ഐസ് കൊണ്ട് ചുറ്റപ്പെട്ടു, താപനില 4 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ നിലനിർത്തി.ഒരു കൾച്ചർ പ്ലേറ്റിന് ആവശ്യമായ ഭാഗങ്ങൾ ലഭിക്കുന്നതുവരെ മൈക്രോടോം ബാത്തിൽ നിന്ന് ടിഷ്യൂ ഭാഗങ്ങൾ ഐസിൽ തുടർച്ചയായി ഓക്സിജൻ അടങ്ങിയ ടൈറോഡ് ലായനി അടങ്ങിയ ഇൻകുബേഷൻ ബാത്തിലേക്ക് മാറ്റുക.ട്രാൻസ്‌വെൽ കൾച്ചറുകൾക്കായി, ടിഷ്യൂ വിഭാഗങ്ങൾ അണുവിമുക്തമായ 6 എംഎം വീതിയുള്ള പോളിയുറീൻ സപ്പോർട്ടുകളിൽ ഘടിപ്പിച്ച് 6 മില്ലി ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്ത മീഡിയത്തിൽ (199 മീഡിയം, 1x ITS സപ്ലിമെന്റ്, 10% FBS, 5 ng/ml VEGF, 10 ng/ml FGF-ആൽക്കലൈൻ, 2X ആൻറിബയോട്ടിക്-ആൻറിബയോട്ടിക്-ഇഫ്) സ്ഥാപിക്കുന്നു.വൈദ്യുത ഉത്തേജനം (10 V, ഫ്രീക്വൻസി 1.2 Hz) സി-പേസിലൂടെ ടിഷ്യു വിഭാഗങ്ങളിൽ പ്രയോഗിച്ചു.TD വ്യവസ്ഥകൾക്കായി, ഓരോ മീഡിയം മാറ്റത്തിലും പുതിയ T3, Dex എന്നിവ 100 nM-ലും 1 μM-ലും ചേർത്തു.ഒരു ദിവസം 3 തവണ മാറ്റിസ്ഥാപിക്കുന്നതിനുമുമ്പ് മീഡിയം ഓക്സിജനുമായി പൂരിതമാകുന്നു.ടിഷ്യു വിഭാഗങ്ങൾ 37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിലും 5% CO2 ലും ഇൻകുബേറ്ററിൽ സംസ്ക്കരിച്ചു.
CTCM കൾച്ചറുകൾക്കായി, ടിഷ്യൂ സെക്ഷനുകൾ ഇഷ്‌ടാനുസൃതമായി നിർമ്മിച്ച 3D പ്രിന്ററിൽ പരിഷ്‌ക്കരിച്ച ടൈറോഡിന്റെ ലായനി അടങ്ങിയ പെട്രി ഡിഷിൽ സ്ഥാപിച്ചു.പിന്തുണ വളയത്തിന്റെ വിസ്തീർണ്ണത്തിന്റെ 25% ഹൃദയത്തിന്റെ സ്ലൈസിന്റെ വലുപ്പം വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിനാണ് ഉപകരണം രൂപകൽപ്പന ചെയ്തിരിക്കുന്നത്.ടൈറോഡിന്റെ ലായനിയിൽ നിന്ന് മീഡിയത്തിലേക്ക് മാറ്റിയതിനുശേഷവും ഡയസ്റ്റോൾ സമയത്തും ഹൃദയത്തിന്റെ ഭാഗങ്ങൾ നീട്ടാതിരിക്കാനാണ് ഇത് ചെയ്യുന്നത്.ഹിസ്റ്റോഅക്രിലിക് പശ ഉപയോഗിച്ച്, 300 µm കട്ടിയുള്ള ഭാഗങ്ങൾ 7 മില്ലീമീറ്റർ വ്യാസമുള്ള ഒരു പിന്തുണ വളയത്തിൽ ഉറപ്പിച്ചു.ടിഷ്യൂ സെക്ഷനുകൾ സപ്പോർട്ട് റിങ്ങിൽ ഘടിപ്പിച്ച ശേഷം, അധിക ടിഷ്യു ഭാഗങ്ങൾ മുറിച്ചുമാറ്റി, ഒരു ഉപകരണത്തിന് ആവശ്യമായ ഭാഗങ്ങൾ തയ്യാറാക്കുന്നത് വരെ ഐസ് (4 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസ്) ബാത്ത് ടൈറോഡ് ലായനിയിൽ തിരികെ വയ്ക്കുക.എല്ലാ ഉപകരണങ്ങളുടെയും മൊത്തം പ്രോസസ്സിംഗ് സമയം 2 മണിക്കൂറിൽ കൂടരുത്.6 ടിഷ്യു വിഭാഗങ്ങൾ അവയുടെ പിന്തുണ വളയങ്ങളിൽ ഘടിപ്പിച്ച ശേഷം, CTCM ഉപകരണം കൂട്ടിച്ചേർക്കപ്പെട്ടു.CTCM കൾച്ചർ ചേമ്പർ 21 മില്ലി പ്രീ-ഓക്സിജനേറ്റഡ് മീഡിയം കൊണ്ട് മുൻകൂട്ടി നിറച്ചിരിക്കുന്നു.ടിഷ്യൂ വിഭാഗങ്ങൾ കൾച്ചർ ചേമ്പറിലേക്ക് മാറ്റുക, ഒരു പൈപ്പറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് വായു കുമിളകൾ ശ്രദ്ധാപൂർവ്വം നീക്കം ചെയ്യുക.ടിഷ്യു വിഭാഗം പിന്നീട് ദ്വാരത്തിലേക്ക് നയിക്കുകയും സൌമ്യമായി സ്ഥലത്ത് അമർത്തുകയും ചെയ്യുന്നു.അവസാനമായി, ഉപകരണത്തിൽ ഇലക്ട്രോഡ് തൊപ്പി സ്ഥാപിച്ച് ഉപകരണം ഇൻകുബേറ്ററിലേക്ക് മാറ്റുക.തുടർന്ന് CTCM-നെ എയർ ട്യൂബിലേക്കും C-PACE-EM സിസ്റ്റത്തിലേക്കും ബന്ധിപ്പിക്കുക.ന്യൂമാറ്റിക് ആക്യുവേറ്റർ തുറക്കുകയും എയർ വാൽവ് CTCM തുറക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.C-PACE-EM സിസ്റ്റം 2 ms ന് ബൈഫാസിക് പേസിംഗ് സമയത്ത് 1.2 Hz-ൽ 4 V നൽകുന്നതിന് ക്രമീകരിച്ചു.ഇലക്‌ട്രോഡുകളിൽ ഗ്രാഫൈറ്റ് അടിഞ്ഞുകൂടുന്നത് ഒഴിവാക്കാൻ മാധ്യമം ദിവസത്തിൽ രണ്ടുതവണയും ഇലക്‌ട്രോഡുകൾ ദിവസത്തിൽ ഒരിക്കൽ മാറ്റുകയും ചെയ്തു.ആവശ്യമെങ്കിൽ, അവയുടെ കൾച്ചർ കിണറുകളിൽ നിന്ന് ടിഷ്യു ഭാഗങ്ങൾ നീക്കം ചെയ്യാവുന്നതാണ്, അവയ്ക്ക് താഴെ വീണേക്കാവുന്ന ഏതെങ്കിലും വായു കുമിളകൾ പുറന്തള്ളാൻ കഴിയും.MT ചികിത്സാ സാഹചര്യങ്ങൾക്കായി, 100 nM T3, 1 μM Dex എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് ഓരോ ഇടത്തരം മാറ്റത്തിലും T3/Dex പുതുതായി ചേർത്തു.CTCM ഉപകരണങ്ങൾ ഒരു ഇൻകുബേറ്ററിൽ 37°C, 5% CO2 എന്നിവയിൽ സംസ്കരിച്ചു.
ഹൃദയ സ്ലൈസുകളുടെ നീട്ടുന്ന പാതകൾ ലഭിക്കുന്നതിന്, ഒരു പ്രത്യേക ക്യാമറ സംവിധാനം വികസിപ്പിച്ചെടുത്തു.Navitar സൂം 7000 18-108mm മാക്രോ ലെൻസിനൊപ്പം (Navitar, San Francisco, CA) ഒരു SLR ക്യാമറ (Canon Rebel T7i, Canon, Tokyo, Japan) ഉപയോഗിച്ചു.മീഡിയം മാറ്റി പുതിയ മീഡിയം ഉപയോഗിച്ചതിന് ശേഷം ഊഷ്മാവിൽ ദൃശ്യവൽക്കരണം നടത്തി.ക്യാമറ 51° ആംഗിളിൽ സ്ഥാപിക്കുകയും സെക്കൻഡിൽ 30 ഫ്രെയിമുകളിൽ വീഡിയോ റെക്കോർഡ് ചെയ്യുകയും ചെയ്യുന്നു.ആദ്യം, ഹൃദയ സ്‌ലൈസുകളുടെ ചലനം അളക്കാൻ ഇമേജ്-ജെയ്‌ക്കൊപ്പം ഓപ്പൺ സോഴ്‌സ് സോഫ്റ്റ്‌വെയർ (MUSCLEMOTION43) ഉപയോഗിച്ചു.ശബ്‌ദം ഒഴിവാക്കാൻ ഹൃദയ സ്‌ലൈസുകൾ അടിക്കാൻ താൽപ്പര്യമുള്ള പ്രദേശങ്ങൾ നിർവചിക്കുന്നതിന് MATLAB (MathWorks, Natick, MA, USA) ഉപയോഗിച്ചാണ് മാസ്‌ക് സൃഷ്‌ടിച്ചത്.സ്വമേധയാ വിഭജിച്ച മാസ്കുകൾ ഒരു ഫ്രെയിം സീക്വൻസിലുള്ള എല്ലാ ചിത്രങ്ങളിലും പ്രയോഗിക്കുകയും തുടർന്ന് MUSCLEMOTION പ്ലഗ്-ഇന്നിലേക്ക് കൈമാറുകയും ചെയ്യുന്നു.ഓരോ ഫ്രെയിമിലെയും പിക്സലുകളുടെ ശരാശരി തീവ്രത റഫറൻസ് ഫ്രെയിമുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ അതിന്റെ ചലനം കണക്കാക്കാൻ മസിൽ മോഷൻ ഉപയോഗിക്കുന്നു.ഡാറ്റ രേഖപ്പെടുത്തുകയും ഫിൽട്ടർ ചെയ്യുകയും സൈക്കിൾ സമയം കണക്കാക്കാനും കാർഡിയാക് സൈക്കിൾ സമയത്ത് ടിഷ്യു സ്ട്രെച്ച് വിലയിരുത്താനും ഉപയോഗിച്ചു.ആദ്യ ഓർഡർ സീറോ-ഫേസ് ഡിജിറ്റൽ ഫിൽട്ടർ ഉപയോഗിച്ച് റെക്കോർഡ് ചെയ്ത വീഡിയോ പോസ്റ്റ്-പ്രോസസ്സ് ചെയ്തു.ടിഷ്യു സ്ട്രെച്ച് (പീക്ക്-ടു-പീക്ക്) കണക്കാക്കാൻ, റെക്കോർഡ് ചെയ്ത സിഗ്നലിലെ കൊടുമുടികളും തൊട്ടിയും തമ്മിൽ വേർതിരിച്ചറിയാൻ പീക്ക്-ടു-പീക്ക് വിശകലനം നടത്തി.കൂടാതെ, സിഗ്നൽ ഡ്രിഫ്റ്റ് ഇല്ലാതാക്കാൻ ആറാം ഓർഡർ പോളിനോമിയൽ ഉപയോഗിച്ച് ഡിട്രെൻഡിംഗ് നടത്തുന്നു.ആഗോള ടിഷ്യു ചലനം, സൈക്കിൾ സമയം, വിശ്രമ സമയം, സങ്കോച സമയം എന്നിവ നിർണ്ണയിക്കാൻ MATLAB-ൽ പ്രോഗ്രാം കോഡ് വികസിപ്പിച്ചെടുത്തു (സപ്ലിമെന്ററി പ്രോഗ്രാം കോഡ് 44).
സ്‌ട്രെയിൻ വിശകലനത്തിനായി, മെക്കാനിക്കൽ സ്ട്രെച്ച് അസസ്‌മെന്റിനായി സൃഷ്‌ടിച്ച അതേ വീഡിയോകൾ ഉപയോഗിച്ച്, MUSCLEMOTION സോഫ്‌റ്റ്‌വെയർ അനുസരിച്ച് ചലനത്തിന്റെ കൊടുമുടികളെ (ഉയർന്ന (മുകളിൽ) ഏറ്റവും താഴ്ന്ന (താഴ്ന്ന) ചലന പോയിന്റുകളെ പ്രതിനിധീകരിക്കുന്ന രണ്ട് ചിത്രങ്ങൾ ഞങ്ങൾ ആദ്യം കണ്ടെത്തി.തുടർന്ന് ഞങ്ങൾ ടിഷ്യു മേഖലകളെ വിഭജിക്കുകയും സെഗ്മെന്റഡ് ടിഷ്യുവിലേക്ക് ഷേഡിംഗ് അൽഗോരിതം പ്രയോഗിക്കുകയും ചെയ്തു (സപ്ലിമെന്ററി ചിത്രം 2a).വിഭജിച്ച ടിഷ്യുവിനെ പിന്നീട് പത്ത് ഉപതലങ്ങളായി വിഭജിച്ചു, ഓരോ പ്രതലത്തിലെയും സമ്മർദ്ദം ഇനിപ്പറയുന്ന സമവാക്യം ഉപയോഗിച്ച് കണക്കാക്കുന്നു: സ്ട്രെയിൻ = (Sup-Sdown)/Sdown, ഇവിടെ Sup and Sdown എന്നത് യഥാക്രമം തുണിയുടെ മുകളിലും താഴെയുമുള്ള നിഴലുകളിൽ നിന്നുള്ള ആകൃതിയുടെ ദൂരമാണ് (സപ്ലിമെന്ററി ചിത്രം. .2b).
ഹൃദയഭാഗങ്ങൾ 4% പാരാഫോർമാൽഡിഹൈഡിൽ 48 മണിക്കൂർ ഉറപ്പിച്ചു.സ്ഥിരമായ ടിഷ്യൂകൾ 1 മണിക്കൂർ 10%, 20% സുക്രോസിൽ നിർജ്ജലീകരണം ചെയ്തു, തുടർന്ന് 30% സുക്രോസിൽ ഒറ്റരാത്രികൊണ്ട്.വിഭാഗങ്ങൾ പിന്നീട് ഒപ്റ്റിമം കട്ടിംഗ് ടെമ്പറേച്ചർ കോമ്പൗണ്ടിൽ (OCT കോമ്പൗണ്ട്) ഉൾച്ചേർക്കുകയും ക്രമേണ ഐസോപെന്റെയ്ൻ/ഡ്രൈ ഐസ് ബാത്തിൽ ഫ്രീസ് ചെയ്യുകയും ചെയ്തു.OCT എംബെഡിംഗ് ബ്ലോക്കുകൾ വേർപെടുത്തുന്നത് വരെ -80 °C-ൽ സൂക്ഷിക്കുക.8 μm കനം ഉള്ള വിഭാഗങ്ങളായി സ്ലൈഡുകൾ തയ്യാറാക്കി.
ഹൃദയ ഭാഗങ്ങളിൽ നിന്ന് OCT നീക്കം ചെയ്യാൻ, സ്ലൈഡുകൾ 95 °C താപനിലയിൽ 5 മിനിറ്റ് ചൂടാക്കി ചൂടാക്കുക.ഓരോ സ്ലൈഡിലേക്കും 1 മില്ലി പിബിഎസ് ചേർത്ത് ഊഷ്മാവിൽ 30 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക, തുടർന്ന് റൂം ടെമ്പറേച്ചറിൽ 15 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് പിബിഎസിൽ 0.1% ട്രൈറ്റൺ-എക്സ് സജ്ജീകരിച്ച് ഭാഗങ്ങളിൽ വ്യാപിക്കുക.നോൺ-സ്പെസിഫിക് ആന്റിബോഡികൾ സാമ്പിളുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുന്നത് തടയാൻ, സ്ലൈഡുകളിലേക്ക് 1 മില്ലി 3% BSA ലായനി ചേർത്ത് ഊഷ്മാവിൽ 1 മണിക്കൂർ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക.തുടർന്ന് ബിഎസ്എ നീക്കം ചെയ്യുകയും സ്ലൈഡുകൾ പിബിഎസ് ഉപയോഗിച്ച് കഴുകുകയും ചെയ്തു.ഓരോ സാമ്പിളും പെൻസിൽ കൊണ്ട് അടയാളപ്പെടുത്തുക.പ്രൈമറി ആന്റിബോഡികൾ (1% BSA-ൽ 1:200 നേർപ്പിച്ചത്) (connexin 43 (Abcam; #AB11370), NFATC4 (Abcam; #AB99431), troponin-T (തെർമോ സയന്റിഫിക്; #MA5-12960) എന്നിവ 20 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ 1% ആന്റിബോഡികൾ (BSA-12960) 20 മിനിറ്റിൽ കൂടുതലായി ചേർത്തു. മൗസിനെതിരെ അലക്‌സാ ഫ്‌ളൂർ 488 (തെർമോ സയന്റിഫിക്; #A16079), മുയലിനെതിരെ അലക്‌സാ ഫ്‌ളൂർ 594 (തെർമോ സയന്റിഫിക്; #T6391) 90 മിനിറ്റ് കൂടി പിബിഎസ് ഉപയോഗിച്ച് 3 തവണ കഴുകി, ടാർഗെറ്റ് സ്റ്റെയിനിംഗിനെ പശ്ചാത്തലത്തിൽ നിന്ന് വേർതിരിച്ചറിയാൻ, ഒടുവിൽ ഞങ്ങൾ കൺട്രോൾ സെക്കണ്ടറി ആൻറിബോഡി, ന്യൂക്ലിയർ ആൻറിബോഡി എന്നിവയായി ഉപയോഗിച്ചു. ield (വെക്റ്റർ ലബോറട്ടറികൾ) നെയിൽ പോളിഷ് ഉപയോഗിച്ച് മുദ്രയിട്ടിരിക്കുന്നു -x മാഗ്നിഫിക്കേഷൻ) 40x മാഗ്നിഫിക്കേഷനോടുകൂടിയ കീയൻസ് മൈക്രോസ്കോപ്പ്.
WGA-Alexa Fluor 555 (Thermo Scientific; #W32464) PBS-ൽ 5 μg/ml, WGA സ്റ്റെയിനിംഗിനായി ഉപയോഗിക്കുകയും ഊഷ്മാവിൽ 30 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് നിശ്ചിത വിഭാഗങ്ങളിൽ പ്രയോഗിക്കുകയും ചെയ്തു.സ്ലൈഡുകൾ പിന്നീട് പിബിഎസ് ഉപയോഗിച്ച് കഴുകുകയും ഓരോ സ്ലൈഡിലും സുഡാൻ കറുപ്പ് ചേർക്കുകയും 30 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുകയും ചെയ്തു.സ്ലൈഡുകൾ പിന്നീട് പിബിഎസ് ഉപയോഗിച്ച് കഴുകുകയും വെക്റ്റഷീൽഡ് എംബെഡിംഗ് മീഡിയം ചേർക്കുകയും ചെയ്തു.40x മാഗ്‌നിഫിക്കേഷനിൽ കീയൻസ് മൈക്രോസ്കോപ്പിൽ സ്ലൈഡുകൾ ദൃശ്യവൽക്കരിച്ചു.
മുകളിൽ വിവരിച്ചതുപോലെ OCT സാമ്പിളുകളിൽ നിന്ന് നീക്കം ചെയ്തു.OCT നീക്കം ചെയ്‌തതിന് ശേഷം, സ്ലൈഡുകൾ ഒറ്റരാത്രികൊണ്ട് ബോയിന്റെ ലായനിയിൽ മുക്കുക.സ്ലൈഡുകൾ 1 മണിക്കൂർ വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളത്തിൽ കഴുകി 10 മിനിറ്റ് ഒരു Bibrich കറ്റാർ ആസിഡ് fuchsin ലായനിയിൽ സ്ഥാപിച്ചു.പിന്നീട് സ്ലൈഡുകൾ വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളം ഉപയോഗിച്ച് കഴുകി 5% ഫോസ്ഫോമോളിബ്ഡിനം/5% ഫോസ്ഫോട്ടൂങ്സ്റ്റിക് ആസിഡ് ലായനിയിൽ 10 മിനിറ്റ് വയ്ക്കുക.കഴുകിക്കളയാതെ, സ്ലൈഡുകൾ നേരിട്ട് അനിലിൻ നീല ലായനിയിലേക്ക് 15 മിനിറ്റ് മാറ്റുക.അതിനുശേഷം സ്ലൈഡുകൾ വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളം ഉപയോഗിച്ച് കഴുകി 1% അസറ്റിക് ആസിഡ് ലായനിയിൽ 2 മിനിറ്റ് വയ്ക്കുന്നു.സ്ലൈഡുകൾ 200 N എത്തനോളിൽ ഉണക്കി സൈലീനിലേക്ക് മാറ്റി.10x ഒബ്ജക്റ്റീവുള്ള കീയൻസ് മൈക്രോസ്കോപ്പ് ഉപയോഗിച്ച് സ്റ്റെയിൻഡ് സ്ലൈഡുകൾ ദൃശ്യവൽക്കരിച്ചു.കീയൻസ് അനലൈസർ സോഫ്‌റ്റ്‌വെയർ ഉപയോഗിച്ച് ഫൈബ്രോസിസ് ഏരിയ ശതമാനം കണക്കാക്കി.
CyQUANT™ MTT സെൽ വയബിലിറ്റി അസ്സെ (ഇൻവിട്രോജൻ, കാൾസ്ബാഡ്, CA), കാറ്റലോഗ് നമ്പർ V13154, നിർമ്മാതാവിന്റെ പ്രോട്ടോക്കോൾ അനുസരിച്ച് ചില പരിഷ്കാരങ്ങളോടെ.പ്രത്യേകിച്ചും, എംടിടി വിശകലന സമയത്ത് യൂണിഫോം ടിഷ്യു വലുപ്പം ഉറപ്പാക്കാൻ 6 മില്ലീമീറ്റർ വ്യാസമുള്ള ഒരു സർജിക്കൽ പഞ്ച് ഉപയോഗിച്ചു.നിർമ്മാതാവിന്റെ പ്രോട്ടോക്കോൾ അനുസരിച്ച് എംടിടി സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റ് അടങ്ങിയ 12-കിണർ പ്ലേറ്റിന്റെ കിണറുകളിലേക്ക് ടിഷ്യുകൾ വ്യക്തിഗതമായി പൂശുന്നു.ഭാഗങ്ങൾ 37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 3 മണിക്കൂർ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുകയും ജീവനുള്ള ടിഷ്യു MTT അടിവസ്ത്രത്തെ ഒരു പർപ്പിൾ ഫോർമസാൻ സംയുക്തം രൂപപ്പെടുത്തുകയും ചെയ്യുന്നു.MTT ലായനി മാറ്റി 1 ml DMSO ഉപയോഗിച്ച് 37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 15 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്ത് ഹൃദയ ഭാഗങ്ങളിൽ നിന്ന് പർപ്പിൾ ഫോർമാസാൻ വേർതിരിച്ചെടുക്കുക.സാമ്പിളുകൾ 1:10 ഡിഎംഎസ്ഒയിൽ 96 കിണർ വ്യക്തമായ അടിഭാഗം പ്ലേറ്റുകളിലും പർപ്പിൾ കളർ തീവ്രതയിലും 570 nm-ൽ ഒരു സൈറ്റേഷൻ പ്ലേറ്റ് റീഡർ (ബയോടെക്) ഉപയോഗിച്ച് അളന്നു.ഹൃദയത്തിന്റെ ഓരോ സ്ലൈസിന്റെയും ഭാരത്തിനനുസരിച്ച് വായനകൾ നോർമലൈസ് ചെയ്തു.
മുമ്പ് വിവരിച്ചതുപോലെ ഗ്ലൂക്കോസ് ഉപയോഗ വിശകലനത്തിനായി ഹാർട്ട് സ്ലൈസ് മീഡിയയ്ക്ക് പകരം 1 μCi/ml [5-3H]-ഗ്ലൂക്കോസ് (മൊറാവെക് ബയോകെമിക്കൽസ്, ബ്രിയ, സിഎ, യുഎസ്എ) അടങ്ങിയ മീഡിയ ഉപയോഗിച്ച് മാറ്റി.4 മണിക്കൂർ ഇൻകുബേഷനു ശേഷം, 100 μl 0.2 N HCl അടങ്ങുന്ന ഒരു തുറന്ന മൈക്രോസെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബിലേക്ക് 100 µl മീഡിയം ചേർക്കുക.തുടർന്ന് 37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 72 മണിക്കൂർ [3H]2O ബാഷ്പീകരിക്കാൻ ട്യൂബ് 500 μl dH2O അടങ്ങിയ ഒരു സിന്റിലേഷൻ ട്യൂബിൽ സ്ഥാപിച്ചു.തുടർന്ന് സിന്റിലേഷൻ ട്യൂബിൽ നിന്ന് മൈക്രോസെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബ് നീക്കം ചെയ്ത് 10 മില്ലി സിന്റിലേഷൻ ദ്രാവകം ചേർക്കുക.ട്രൈ-കാർബ് 2900TR ലിക്വിഡ് സിന്റിലേഷൻ അനലൈസർ (പാക്കാർഡ് ബയോസയൻസ് കമ്പനി, മെറിഡൻ, സിടി, യുഎസ്എ) ഉപയോഗിച്ചാണ് സിന്റിലേഷൻ എണ്ണം നടത്തിയത്.[5-3H]-ഗ്ലൂക്കോസ് നിർദ്ദിഷ്ട പ്രവർത്തനം, അപൂർണ്ണമായ സന്തുലിതാവസ്ഥയും പശ്ചാത്തലവും, [5-3H]-ലേബൽ ചെയ്യാത്ത ഗ്ലൂക്കോസിന്റെ നേർപ്പിക്കൽ, സിന്റിലേഷൻ കൌണ്ടർ കാര്യക്ഷമത എന്നിവ കണക്കിലെടുത്താണ് ഗ്ലൂക്കോസ് ഉപയോഗം കണക്കാക്കിയത്.ഹൃദയത്തിന്റെ വിഭാഗങ്ങളുടെ പിണ്ഡത്തിലേക്ക് ഡാറ്റ നോർമലൈസ് ചെയ്യുന്നു.
ട്രിസോളിലെ ടിഷ്യു ഹോമോജനൈസേഷനുശേഷം, നിർമ്മാതാവിന്റെ പ്രോട്ടോക്കോൾ അനുസരിച്ച് Qiagen miRNeasy മൈക്രോ കിറ്റ് #210874 ഉപയോഗിച്ച് RNA ഹൃദയ ഭാഗങ്ങളിൽ നിന്ന് വേർതിരിച്ചു.RNAsec ലൈബ്രറി തയ്യാറാക്കൽ, ക്രമപ്പെടുത്തൽ, ഡാറ്റ വിശകലനം എന്നിവ ഇനിപ്പറയുന്ന രീതിയിൽ നടത്തി:
ഒരു സാമ്പിളിൽ 1 μg ആർഎൻഎ ആർഎൻഎ ലൈബ്രറി തയ്യാറാക്കുന്നതിനുള്ള പ്രാരംഭ മെറ്റീരിയലായി ഉപയോഗിച്ചു.നിർമ്മാതാവിന്റെ ശുപാർശകൾ അനുസരിച്ച് ഇല്ലുമിനയ്‌ക്കായുള്ള (NEB, USA) NEBNext UltraTM RNA ലൈബ്രറി പ്രിപ്പറേഷൻ കിറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് സീക്വൻസിംഗ് ലൈബ്രറികൾ ജനറേറ്റുചെയ്‌തു, കൂടാതെ ഓരോ സാമ്പിളിനും ആട്രിബ്യൂട്ട് സീക്വൻസുകളിൽ ഇൻഡക്‌സ് കോഡുകൾ ചേർത്തു.ചുരുക്കത്തിൽ, പോളി-ടി ഒലിഗോ ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകൾ ഘടിപ്പിച്ച കാന്തിക മുത്തുകൾ ഉപയോഗിച്ച് മൊത്തം ആർഎൻഎയിൽ നിന്ന് എംആർഎൻഎ ശുദ്ധീകരിച്ചു.NEBNext First Strand Synthesis Reaction Buffer (5X) ൽ ഉയർന്ന ഊഷ്മാവിൽ ഡൈവാലന്റ് കാറ്റേഷനുകൾ ഉപയോഗിച്ചാണ് ഫ്രാഗ്മെന്റേഷൻ നടത്തുന്നത്.റാൻഡം ഹെക്സാമർ പ്രൈമറുകളും M-MuLV റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റസും (RNase H-) ഉപയോഗിച്ചാണ് ആദ്യ സ്ട്രാൻഡ് cDNA സംശ്ലേഷണം ചെയ്തത്.രണ്ടാമത്തെ സ്ട്രാൻഡ് cDNA പിന്നീട് DNA പോളിമറേസ് I, RNase H എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് സമന്വയിപ്പിക്കപ്പെടുന്നു.ഡിഎൻഎ ശകലത്തിന്റെ 3′ അറ്റം അഡിനൈലേഷനുശേഷം, ഹൈബ്രിഡൈസേഷനായി തയ്യാറാക്കുന്നതിനായി ഒരു ഹെയർപിൻ ലൂപ്പ് ഘടനയുള്ള ഒരു NEBNext അഡാപ്റ്റർ അതിൽ ഘടിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നു.ഇഷ്ടപ്പെട്ട നീളം 150-200 ബിപിയുടെ cDNA ശകലങ്ങൾ തിരഞ്ഞെടുക്കുന്നതിന്.AMPure XP സിസ്റ്റം (Beckman Coulter, Beverly, USA) ഉപയോഗിച്ച് ലൈബ്രറി ശകലങ്ങൾ ശുദ്ധീകരിച്ചു.തുടർന്ന്, 3 μl യൂസർ എൻസൈം (NEB, USA) ഒരു അഡാപ്റ്റർ ഉപയോഗിച്ച് തിരഞ്ഞെടുത്ത cDNA ലിഗേറ്റഡ് ഉപയോഗിച്ച് 15 മിനിറ്റ് 37 ° C ലും 5 മിനിറ്റ് 95 ° C ലും പിസിആറിന് മുമ്പ് ഉപയോഗിച്ചു.പിന്നീട് ഫ്യൂഷൻ ഹൈ-ഫിഡിലിറ്റി ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ്, യൂണിവേഴ്സൽ പിസിആർ പ്രൈമറുകൾ, ഇൻഡക്സ് (എക്സ്) പ്രൈമറുകൾ എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് പിസിആർ നടത്തി.അവസാനമായി, PCR ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ ശുദ്ധീകരിക്കുകയും (AMPure XP സിസ്റ്റം) ലൈബ്രറി ഗുണനിലവാരം എജിലന്റ് ബയോഅനലൈസർ 2100 സിസ്റ്റത്തിൽ വിലയിരുത്തുകയും ചെയ്തു.ഒരു Novaseq sequencer ഉപയോഗിച്ച് cDNA ലൈബ്രറി പിന്നീട് ക്രമീകരിച്ചു.ഇല്ലുമിനയിൽ നിന്നുള്ള റോ ഇമേജ് ഫയലുകൾ CASAVA ബേസ് കോളിംഗ് ഉപയോഗിച്ച് റോ റീഡുകളിലേക്ക് പരിവർത്തനം ചെയ്തു.റീഡ് സീക്വൻസുകളും അനുബന്ധ അടിസ്ഥാന ഗുണങ്ങളും അടങ്ങുന്ന FASTQ(fq) ഫോർമാറ്റ് ഫയലുകളിലാണ് റോ ഡാറ്റ സംഭരിക്കുന്നത്.Sscrofa11.1 റഫറൻസ് ജീനോമുമായി ഫിൽട്ടർ ചെയ്ത സീക്വൻസിങ് റീഡുകൾ പൊരുത്തപ്പെടുത്താൻ HISAT2 തിരഞ്ഞെടുക്കുക.പൊതുവേ, 4 ബില്യൺ ബേസുകളേക്കാൾ വലിയ ജീനോമുകൾ ഉൾപ്പെടെ ഏത് വലുപ്പത്തിലുമുള്ള ജീനോമുകളെ HISAT2 പിന്തുണയ്ക്കുന്നു, കൂടാതെ മിക്ക പാരാമീറ്ററുകൾക്കും സ്ഥിരസ്ഥിതി മൂല്യങ്ങൾ സജ്ജീകരിച്ചിരിക്കുന്നു.നിലവിൽ ലഭ്യമായ ഏറ്റവും വേഗതയേറിയ സിസ്റ്റമായ HISAT2 ഉപയോഗിച്ച് ആർ‌എൻ‌എ സെക് ഡാറ്റയിൽ നിന്നുള്ള സ്‌പ്ലിക്കിംഗ് റീഡുകൾ കാര്യക്ഷമമായി വിന്യസിക്കാൻ കഴിയും, മറ്റേതൊരു രീതിയേക്കാളും അതേ അല്ലെങ്കിൽ മികച്ച കൃത്യതയോടെ.
ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റുകളുടെ സമൃദ്ധി ജീൻ എക്സ്പ്രഷന്റെ നിലവാരത്തെ നേരിട്ട് പ്രതിഫലിപ്പിക്കുന്നു.ജീനോം അല്ലെങ്കിൽ എക്സോണുകളുമായി ബന്ധപ്പെട്ട ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റുകളുടെ (സീക്വൻസിങ് കൗണ്ട്) ധാരാളമായി ജീൻ എക്സ്പ്രഷൻ ലെവലുകൾ വിലയിരുത്തപ്പെടുന്നു.റീഡുകളുടെ എണ്ണം ജീൻ എക്സ്പ്രഷൻ ലെവലുകൾ, ജീൻ ദൈർഘ്യം, സീക്വൻസിങ് ഡെപ്ത് എന്നിവയ്ക്ക് ആനുപാതികമാണ്.FPKM (ആയിരം ബേസ് ജോഡി ട്രാൻസ്‌ക്രിപ്റ്റുകളുടെ ശകലങ്ങൾ ഓരോ ദശലക്ഷം ബേസ് ജോഡികൾക്കും ക്രമീകരിച്ചു) കണക്കാക്കുകയും ഡിഫറൻഷ്യൽ എക്‌സ്‌പ്രഷന്റെ പി-മൂല്യങ്ങൾ DESeq2 പാക്കേജ് ഉപയോഗിച്ച് നിർണ്ണയിക്കുകയും ചെയ്തു.ബിൽറ്റ്-ഇൻ R-ഫംഗ്ഷൻ "p.adjust" അടിസ്ഥാനമാക്കി Benjamini-Hochberg method9 ഉപയോഗിച്ച് ഞങ്ങൾ ഓരോ പി മൂല്യത്തിനും തെറ്റായ കണ്ടെത്തൽ നിരക്ക് (FDR) കണക്കാക്കി.
തെർമോയിൽ നിന്നുള്ള സൂപ്പർസ്‌ക്രിപ്റ്റ് IV വിലോ മാസ്റ്റർ മിക്സ് (തെർമോ, ക്യാറ്റ് നമ്പർ. 11756050) ഉപയോഗിച്ച് 200 ng/μl സാന്ദ്രതയിൽ ഹൃദയ ഭാഗങ്ങളിൽ നിന്ന് വേർതിരിച്ചെടുത്ത RNA സിഡിഎൻഎ ആയി പരിവർത്തനം ചെയ്തു.ഒരു അപ്ലൈഡ് ബയോസിസ്റ്റംസ് എൻഡ്യൂറ പ്ലേറ്റ് മൈക്രോആമ്പ് 384-നല്ല സുതാര്യമായ പ്രതികരണ പ്ലേറ്റ് (തെർമോ, പൂച്ച നമ്പർ. 4483319), മൈക്രോആമ്പ് ഒപ്റ്റിക്കൽ പശ (തെർമോ, പൂച്ച നമ്പർ. 4311971) എന്നിവ ഉപയോഗിച്ചാണ് ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് ആർടി-പിസിആർ നടത്തിയത്.പ്രതിപ്രവർത്തന മിശ്രിതത്തിൽ 5 µl തക്മാൻ ഫാസ്റ്റ് അഡ്വാൻസ്ഡ് മാസ്റ്റർ മിക്സ് (തെർമോ, ക്യാറ്റ് # 4444557), 0.5 µl തക്മാൻ പ്രൈമർ, 3.5 µl H2O എന്നിവ ഒരു കിണറ്റിൽ ചേർത്തു.സ്റ്റാൻഡേർഡ് qPCR സൈക്കിളുകൾ പ്രവർത്തിപ്പിക്കുകയും CT മൂല്യങ്ങൾ ഒരു അപ്ലൈഡ് ബയോസിസ്റ്റംസ് Quantstudio 5 റിയൽ-ടൈം PCR ഉപകരണം ഉപയോഗിച്ച് അളക്കുകയും ചെയ്തു (384-well module; product # A28135).തക്മാൻ പ്രൈമറുകൾ തെർമോയിൽ നിന്ന് വാങ്ങിയതാണ് (GAPDH (Ss03375629_u1), PARP12 (Ss06908795_m1), PKDCC (Ss06903874_m1), CYGB (Ss06900188_m1), RGL1 (S806801), RGL1680 8_mH), GATA4 (Ss03383805_u1), GJA1 (Ss03374839_u1), COL1A2 (Ss03375009_u1 ), COL3A1 (Ss04323794_m1), ACTA2 (Ss0424 ന്റെ എല്ലാ സാമ്പിളുകളുടെയും സാമ്പിളുകൾ സാധാരണ നിലയിലാക്കി) 588425 ജീൻ GAPDH.
NT-ProBNP-യുടെ മീഡിയ റിലീസ് നിർമ്മാതാവിന്റെ പ്രോട്ടോക്കോൾ അനുസരിച്ച് NT-ProBNP കിറ്റ് (പന്നി) (Cat. No. MBS2086979, MyBioSource) ഉപയോഗിച്ചാണ് വിലയിരുത്തിയത്.ചുരുക്കത്തിൽ, ഓരോ സാമ്പിളിന്റെയും സ്റ്റാൻഡേർഡിന്റെയും 250 μl ഓരോ കിണറിലേക്കും തനിപ്പകർപ്പായി ചേർത്തു.സാമ്പിൾ ചേർത്ത ഉടനെ, ഓരോ കിണറിലും 50 µl Assay Reagent A ചേർക്കുക.സൌമ്യമായി പ്ലേറ്റ് കുലുക്കുക, സീലന്റ് ഉപയോഗിച്ച് മുദ്രയിടുക.തുടർന്ന് ഗുളികകൾ 37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 1 മണിക്കൂർ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു.പിന്നീട് ലായനി ആസ്പിറേറ്റ് ചെയ്ത് 350 µl 1X വാഷ് ലായനി ഉപയോഗിച്ച് 4 തവണ കിണർ കഴുകുക, ഓരോ തവണയും 1-2 മിനിറ്റ് വാഷ് ലായനി ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക.തുടർന്ന് ഒരു കിണറിന് 100 µl Assay Reagent B ചേർത്ത് പ്ലേറ്റ് സീലന്റ് ഉപയോഗിച്ച് അടയ്ക്കുക.ടാബ്‌ലെറ്റ് മൃദുവായി കുലുക്കി 37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 30 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു.ലായനി ആസ്പിറേറ്റ് ചെയ്ത് 350 µl 1X വാഷ് ലായനി ഉപയോഗിച്ച് 5 തവണ കിണറുകൾ കഴുകുക.ഓരോ കിണറിലും 90 μl സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റ് ലായനി ചേർത്ത് പ്ലേറ്റ് അടയ്ക്കുക.37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 10-20 മിനിറ്റ് പ്ലേറ്റ് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക.ഓരോ കിണറിലും 50 μl സ്റ്റോപ്പ് സൊല്യൂഷൻ ചേർക്കുക.450 nm-ൽ സജ്ജമാക്കിയ Cytation (BioTek) പ്ലേറ്റ് റീഡർ ഉപയോഗിച്ച് പ്ലേറ്റ് ഉടനടി അളന്നു.
5% ടൈപ്പ് I പിശക് നിരക്ക് ഉപയോഗിച്ച് പാരാമീറ്ററിൽ 10% സമ്പൂർണ്ണ മാറ്റം കണ്ടെത്തുന്നതിന്> 80% പവർ നൽകുന്ന ഗ്രൂപ്പ് വലുപ്പങ്ങൾ തിരഞ്ഞെടുക്കുന്നതിന് പവർ വിശകലനങ്ങൾ നടത്തി. 5% ടൈപ്പ് I പിശക് നിരക്ക് ഉപയോഗിച്ച് പാരാമീറ്ററിൽ 10% സമ്പൂർണ്ണ മാറ്റം കണ്ടെത്തുന്നതിന്> 80% പവർ നൽകുന്ന ഗ്രൂപ്പ് വലുപ്പങ്ങൾ തിരഞ്ഞെടുക്കുന്നതിന് പവർ വിശകലനങ്ങൾ നടത്തി. അനലിസ് മോഷ്‌നോസ്‌റ്റി ബൈൽ വൈപോൾനെൻ ഡ്ലിയ വൈബോറ റജ്‌മെറോവ് ഗ്രൂപ്പ്, കോടോറി ഒബെസ്‌പെചത്>80% മോഷ്‌നോസ്‌തി ദ്ലിയ100% ഐസ്‌മെനേഷ്യൻ പരാമെത്രയിൽ 5% ചാസ്‌റ്റോയ് ഒഷിബോക് ടിപ്പ ഐ. 5% ടൈപ്പ് I പിശക് നിരക്ക് ഉപയോഗിച്ച് 10% സമ്പൂർണ്ണ പാരാമീറ്റർ മാറ്റം കണ്ടെത്തുന്നതിന്> 80% പവർ നൽകുന്ന ഗ്രൂപ്പ് വലുപ്പങ്ങൾ തിരഞ്ഞെടുക്കുന്നതിന് പവർ വിശകലനം നടത്തി.进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5 ബൈൽ പ്രൊവെഡൻ അനലിസ് മോഷ്‌നോസ്‌റ്റി ഡ്ലിയ വൈബോറ റസ്‌മേര ഗ്രുപ്പി, കൊതൊര്യ്‌യ് ഒബെസ്‌പെച്ചിൽ ബി> 80% മോഷ്‌നോസ്‌റ്റി%00 നോഗോ ഇസ്‌മെനെനിയ പാരാമെട്രോവും 5% ചാസ്‌റ്റോട്ടി ഓഷിബോക് ടിപ്പയും. 10% സമ്പൂർണ്ണ പാരാമീറ്റർ മാറ്റവും 5% ടൈപ്പ് I പിശക് നിരക്കും കണ്ടെത്തുന്നതിന്> 80% പവർ നൽകുന്ന ഒരു ഗ്രൂപ്പ് വലുപ്പം തിരഞ്ഞെടുക്കുന്നതിന് ഒരു പവർ വിശകലനം നടത്തി.പരീക്ഷണത്തിന് മുമ്പ് ടിഷ്യു ഭാഗങ്ങൾ ക്രമരഹിതമായി തിരഞ്ഞെടുത്തു.എല്ലാ വിശകലനങ്ങളും അവസ്ഥ അന്ധമായിരുന്നു, എല്ലാ ഡാറ്റയും വിശകലനം ചെയ്തതിന് ശേഷം മാത്രമേ സാമ്പിളുകൾ ഡീകോഡ് ചെയ്യുകയുള്ളൂ.എല്ലാ സ്റ്റാറ്റിസ്റ്റിക്കൽ വിശകലനങ്ങളും നടത്താൻ ഗ്രാഫ്പാഡ് പ്രിസം സോഫ്റ്റ്വെയർ (സാൻ ഡീഗോ, സിഎ) ഉപയോഗിച്ചു. എല്ലാ സ്ഥിതിവിവരക്കണക്കുകൾക്കും, p-മൂല്യങ്ങൾ <0.05 മൂല്യങ്ങളിൽ പ്രാധാന്യമുള്ളതായി കണക്കാക്കുന്നു. എല്ലാ സ്ഥിതിവിവരക്കണക്കുകൾക്കും, p- മൂല്യങ്ങൾ <0.05 മൂല്യങ്ങളിൽ പ്രാധാന്യമുള്ളതായി കണക്കാക്കുന്നു. Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. എല്ലാ സ്ഥിതിവിവരക്കണക്കുകൾക്കും, p- മൂല്യങ്ങൾ <0.05 മൂല്യങ്ങളിൽ പ്രാധാന്യമുള്ളതായി കണക്കാക്കുന്നു.对于所有统计数据，p 值在值<0.05 时被认为是显着的。对于所有统计数据，p 值在值<0.05 时被认为是显着的。 Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. എല്ലാ സ്ഥിതിവിവരക്കണക്കുകൾക്കും, p- മൂല്യങ്ങൾ <0.05 മൂല്യങ്ങളിൽ പ്രാധാന്യമുള്ളതായി കണക്കാക്കുന്നു.2 താരതമ്യങ്ങൾ മാത്രമുള്ള ഡാറ്റയിൽ ടു-ടെയിൽഡ് സ്റ്റുഡന്റ്സ് ടി-ടെസ്റ്റ് നടത്തി.ഒന്നിലധികം ഗ്രൂപ്പുകൾ തമ്മിലുള്ള പ്രാധാന്യം നിർണ്ണയിക്കാൻ വൺ-വേ അല്ലെങ്കിൽ ടു-വേ ANOVA ഉപയോഗിച്ചു.പോസ്റ്റ് ഹോക്ക് ടെസ്റ്റുകൾ നടത്തുമ്പോൾ, ഒന്നിലധികം താരതമ്യങ്ങൾക്കായി ടുക്കിയുടെ തിരുത്തൽ പ്രയോഗിച്ചു.FDR കണക്കാക്കുമ്പോൾ RNAsec ഡാറ്റയ്ക്ക് പ്രത്യേക സ്ഥിതിവിവരക്കണക്കുകൾ ഉണ്ട്, രീതി വിഭാഗത്തിൽ വിവരിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ p.adjust.
പഠന രൂപകല്പനയെക്കുറിച്ചുള്ള കൂടുതൽ വിവരങ്ങൾക്ക്, ഈ ലേഖനവുമായി ലിങ്ക് ചെയ്‌തിരിക്കുന്ന നേച്ചർ റിസർച്ച് റിപ്പോർട്ട് സംഗ്രഹം കാണുക.