Nature.com сайтад зочилсонд баярлалаа. Таны ашиглаж буй хөтчийн хувилбар нь CSS-г хязгаарлагдмал дэмждэг. Хамгийн сайн ашиглахын тулд бид танд шинэчилсэн хөтөч ашиглахыг зөвлөж байна (эсвэл Internet Explorer дээр нийцтэй байдлын горимыг унтраах). Энэ хооронд үргэлжлүүлэн дэмжлэг үзүүлэхийн тулд бид сайтыг загвар болон JavaScript-гүй харуулах болно.
Сүвэрхэг цахиурын тоосонцорыг соль-гелийн аргаар бэлтгэж, макро сүвэрхэг хэсгүүдийг гаргаж авсан. Эдгээр хэсгүүдийг N-фенилмалеймид-метилвинилизоцианат (PMI) ба стиролоор урвуу нэмэлт хуваагдлын гинжин дамжуулалт (RAFT) полимержилтоор гаргаж авсан. ган багануудыг (100 × 1.8 мм id) зутангаар савласан. Таван пептид (Гли-Тир, Гли-Лью-Тир, Гли-Гли-Тир-Арг, Тир-Иле-Гли-Сер-Арг, хроматин сер-Арг, диг-Арг)-аас бүрдэх пептидийн хольцыг PMP баганаар ялгах. in (HAS). Оновчтой шүүрлийн нөхцөлд пептидийн хольцын онолын хавтангийн тоо 280,000 хавтан/м² хүртэл өндөр байна. Боловсруулсан баганын салгах гүйцэтгэлийг арилжааны Ascentis Express RP-Amide баганатай харьцуулж үзэхэд PMP баганын ялгах гүйцэтгэл нь ялгах үр ашгийн хувьд арилжааны баганаас илүү байгаа нь ажиглагдсан.
Сүүлийн жилүүдэд биофармацын үйлдвэр нь зах зээлийн эзлэх хувь эрс нэмэгдэж дэлхийн зах зээл болж өргөжин тэлж байна. Био эм үйлдвэрлэлийн салбарын тэсрэлттэй өсөлт1,2,3-ын үед пептид ба уургийн шинжилгээг маш их хүсч байна. Зорилтот пептидээс гадна пептидийн нийлэгжилтийн явцад хэд хэдэн хольц үүсдэг тул пептидийн нийлэгжилтийн явцад хроматографийн шинж чанарыг олж авах, хроматидын шинж чанарыг олж авахыг шаарддаг. Биеийн шингэн, эд, эс дэх уургийн агууламжийг тодорхойлох нь нэг дээжинд олон тооны илрэх боломжтой зүйлүүд байдаг тул маш хэцүү ажил юм. Масс спектрометр нь пептид ба уургийн дарааллыг тогтоох үр дүнтэй хэрэгсэл боловч хэрэв ийм дээжийг масс спектрометрт нэг дамжлагад оруулвал салгах нь тийм ч тохиромжтой биш юм. Шингэний ялган салгах (LC) шинжилгээг хийснээр энэ асуудлыг арилгах боломжтой. өгөгдсөн хугацаанд масс спектрометрт орж буй литүүд4,5,6.Үүнээс гадна шингэний фазыг ялгах үед аналитуудыг нарийн бүсүүдэд төвлөрүүлж, улмаар эдгээр аналитуудыг төвлөрүүлж, MS илрүүлэх мэдрэмжийг сайжруулдаг. Шингэн хроматографи (LC) сүүлийн 10 жилийн хугацаанд ихээхэн ахиц дэвшил гаргаж, протеомик шинжилгээнд түгээмэл хэрэглэгддэг арга болжээ,8,917.
Урвуу фазын шингэн хроматографи (RP-LC) нь октадецилийн өөрчилсөн цахиур (ODS) ашиглан пептидийн хольцыг цэвэршүүлэх, салгахад өргөн хэрэглэгддэг11,12,13. Гэсэн хэдий ч RP стационар фазууд нь нийлмэл бүтэцтэй, тусгай фазын бүтэцтэй14 тул пептид ба уургийг хангалттай ялгаж чаддаггүй14. Эдгээр аналиттай харилцан үйлчилж, тэдгээрийг хадгалахын тулд туйл ба туйлшгүй хэсэг бүхий пептид ба уурагуудыг шинжлэхэд шаардлагатай байдаг16. Мультимодал харилцан үйлчлэлийг хангадаг холимог горимын хроматографи нь пептид, уураг болон бусад нарийн төвөгтэй хольцыг салгахад RP-LC-ийн альтернатив хувилбар байж болно. Эдгээр холимог горимын фазын сав баглаа боодол, суурин ба уургийн сав баглаа боодолуудыг бэлтгэсэн. 17,18,19,20,21.Холимог горимын суурин фазууд (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, туйлын интеркалац/RPLC) нь туйл ба туйлшгүй бүлгүүд22,23,24,25,26,27,28 фаз хоорондын харилцан уялдаатай, ижил фаз хоорондын харилцан уялдаа холбоог харуулсан тул пептид ба уураг ялгахад тохиромжтой. Тусгаарлах нь задлан шинжилдэг бодис ба суурин фазын харилцан үйлчлэлээс шалтгаалдаг тул туйл ба туйлшгүй шинжлэгчийн хүч чадал ба өвөрмөц сонгомол чанар.Multimodal харилцан үйлчлэл 29, 30, 31, 32. Саяхан, Zhang et al.30 нь додецил төгсгөлтэй полиамин стационар фазыг бэлтгэж, нүүрсустөрөгч, антидепрессант, флавоноид, нуклеозид, эстроген болон бусад хэд хэдэн аналитуудыг амжилттай ялгаж авав. Туйл интеркалатор нь туйлшрал ба туйлшралгүй бүлгүүдтэй байдаг тул энэ нь туйлшралгүй гидрофобик, гидрофобид, гидрофобид баганыг агуулсан пептид, уургийг ялгахад ашиглаж болно. C18 багана) нь Ascentis Express RP-Amide багана худалдааны нэрээр худалдаалагдаж байгаа боловч эдгээр багануудыг зөвхөн амин 33-ын шинжилгээнд ашигладаг.
Одоогийн судалгаанд туйлтай суурин фазыг (N-фенилмалеймидэд агуулагдсан полистирол) бэлтгэж, HSA-ийн пептид ба трипсин задралыг ялгах зорилгоор үнэлэв. Тогтворгүй үе шатыг дараах стратеги ашиглан бэлтгэсэн. Сүвэрхэг цахиурын тоосонцорыг манай өмнөх хэвлэлд өгөгдсөн процедурын дагуу бэлтгэсэн. ), TMOS, усны цууны хүчлийг том нүхтэй цахиурын тоосонцор бэлтгэхийн тулд тохируулсан. Хоёрдугаарт, шинэ лиганд болох фенилмалеймид-метил винил изоцианатыг нэгтгэж, цахиурын тоосонцорыг гаргаж авахдаа туйлын суулгагдсан суурин фазыг бэлтгэсэн. Үр дүнд нь суурин фазыг гангаар холбосон (мм-01) 01 багана болгон савласан. ing scheme.The багана сав баглаа боодол нь механик чичиргээний тусламжтайгаар баганын дотор нэгэн төрлийн давхарга үүсэхийг баталгаажуулдаг.Таван пептидээс бүрдэх пептидийн хольцын савласан баганын салалтыг үнэлэх;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) болон Trypsin digest-ийн хүний ​​ийлдэс альбумин (HAS). Пептидийн холимог болон HSA-ийн трипсин задрал нь сайн нягтаршилтай, PMP-ийн баганын үр ашигтайгаар ялгагдах нь ажиглагдсан. Ascentis Express-ийн RP-Amide баганаас илүү үр дүнтэй PMP баганад пептид болон уураг хоёулаа сайн шийдэгдэж, үр дүнтэй болох нь ажиглагдсан.
PEG (полиэтилен гликол), мочевин, цууны хүчил, триметокси ортосиликат (TMOS), триметил хлорсилан (TMCS), трипсин, хүний ​​ийлдэс альбумин (HSA), аммонийн хлорид, мочевин, гексан метилдизилазан (HMDS), метакрил, хлори-МХ4, хлорид-МХ4 Бензойл хэт исэл (BPO), HPLC зэрэглэлийн ацетонитрил (ACN), метанол, 2-пропанол, ацетоныг Sigma-Aldrich (Сент-Луис, MO, АНУ)-аас худалдаж авсан.
Мочевин (8 гр), полиэтилен гликол (8 гр), 8 мл 0.01 N цууны хүчлийн холимогийг 10 минутын турш хутгаж, дараа нь мөс шиг хүйтэн нөхцөлд 24 мл TMOS нэмсэн. Урвалын хольцыг 40 градусын температурт 6 цагийн турш халааж, дараа нь гангаар 120 градусын температурт 8 цагийн турш халаана. үлдэгдэл материалыг 70°С-т 12 цагийн турш хатаана. Хатаасан зөөлөн массыг зууханд жигд нунтаглаж, 550°C-т 12 цагийн турш кальцилсан. Гурван багцыг бэлтгэж, бөөмийн хэмжээ, нүх сүвний хэмжээ, гадаргуугийн талбайн нөхөн үржих чадварыг шалгахын тулд тодорхойлсон.
Урьдчилан нийлэгжүүлсэн фенилмалеймид-метилвинилизоцианат (PCMP)-ийн тусламжтайгаар цахиурын тоосонцорыг гадаргуугийн хувиргаж, дараа нь стиролоор радиаль полимержүүлснээр туйлын бүлэг агуулсан нэгдэл бэлтгэсэн.Дүүргэгч болон полистирол гинжний суурин үе шат.Бэлтгэх үйл явцыг доор тайлбарлав.
N-фенилмалеймид (200 мг) ба метил винил изоцианатыг (100 мг) хуурай толуолд уусгаж, 0.1 мл 2,2′-азоизобутиронитрил (AIBN) -ийг урвалын колбонд хийж фенилмалеймид-метил винилполимерийг 3 градусын температурт халаана. цаг, шүүж, 40 градусын зууханд 3 цагийн турш хатаана.
Хатаасан цахиурын тоосонцорыг (2 гр) хуурай толуолд (100 мл) тарааж, хутгаж, 500 мл дугуй ёроолтой колбонд 10 минутын турш дуу алддаг. PMCP (10 мг) толуолд уусгаж, дуслын юүлүүрээр урвалын колбонд дусал дуслаар нэмсэн. Холимогийг 1000С-ийн температурт угаана. 60°С-т 3 цаг байлгана. Дараа нь PMCP-тай холбогдсон цахиурын тоосонцорыг (100 гр) толуолд (200 мл) уусгаж, 4-гидрокси-TEMPO (2 мл) катализатор болгон 100 мкл дибутилттин дилаурат нэмсэн. Холимогийг 8°C-т 5 цагийн турш шүүж, 500С-т хутгана. 3 цаг.
Стирол (1 мл), бензоил хэт исэл BPO (0.5 мл), TEMPO-PMCP-д хавсаргасан цахиурын тоосонцор (1.5 гр) -ийг толуолд тарааж, азотоор цэвэрлэв. Стиролын полимержилтийг 100 градусын температурт 12 цагийн турш явуулна. Үр дүнд нь үүссэн бүтээгдэхүүнийг метолоор 60 градусаар угаана. намайг 1-р зурагт үзүүлэв.
Дээжийг 10-3 Torr-аас бага үлдэгдэл даралтыг олж авахын тулд 393 К-т 1 цагийн турш хийгүйжүүлсэн. P/P0 = 0.99 харьцангуй даралтаар шингэсэн N2-ийн хэмжээг нийт нүх сүвний эзэлхүүнийг тодорхойлоход ашигласан. Нүцгэн болон лиганд-холбогдсон цахиурын тоосонцоруудын морфологи (HighTech, Japan Microtechnics, electrochiescopy, электротехникийн аргаар шалгасан). хатаасан дээжийг (нүцгэн цахиур ба лиганд-холбогдсон цахиурын тоосонцор) наалдамхай нүүрстөрөгчийн соронзон хальс ашиглан хөнгөн цагаан багана дээр байрлуулсан. Дээж дээр Q150T цацагч бүрээс ашиглан алтыг бүрж, дээж дээр 5 нм Au давхарга тунасан байна. Энэ нь бага хүчдэлийг ашиглан үйл явцын үр ашгийг сайжруулж, нарийн ширхэгтэй graining, MAW, EA. Элементийн шинжилгээнд 1112 элементийн анализаторыг ашигласан. Бөөмийн хэмжээний тархалтыг гаргахын тулд Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 ширхэгийн хэмжээ анализаторыг ашигласан. Нүцгэн цахиурын тоосонцор болон лиганд-холбогдсон цахиурын тоосонцорыг (тус бүр 5 мг) 5 мл изопропанолд тарааж, оптик уусмалд шингээж, бага зэрэг шингээж авсан. Mastersizer-ийн.Термогравиметрийн шинжилгээг 30-аас 800 °C-ийн температурын хязгаарт минутанд 5 °C хурдаар хийсэн.
Шилэн доторлогоотой зэвэрдэггүй ган нарийн цооног багануудыг (100х1.8 мм) хэмжээсүүд нь зутангаар савлах аргыг ашиглан, 1-р зүйлд ашигласан ижил процедурыг ашиглан савласан.31. Зэвэрдэггүй ган баганыг (шилэн доторлогоотой, 100 × 1.8 мм хэмжээтэй) 1 μм фрит агуулсан гаралтын холбох хэрэгсэл нь зутан савлагчтай (Alltech Deerfield, IL, USA) холбосон. 150 мг түдгэлзүүлэх замаар суурин фазын зутан бэлтгэнэ. зутан уусгагч, түүнчлэн хөдөлгөгч уусгагчийн хувьд. 10 минут 100 МП, 15 минутын турш 80 МП, 30 минутын турш 60 МП даралтаар баганыг дарааллаар дүүргэнэ. Савлах явцад механик чичиргээг хоёр GC баганын сэгсэрч (Alltech, USA, IL) ашиглан хийж, баганын жигд жигд байдлыг хангана. баганын дотор гэмтэл учруулахгүйн тулд даралтыг аажмаар хийнэ. Баганыг зутан савлах хэсгээс салгаж, оролт болон LC системд өөр холбох хэрэгслийг холбож, гүйцэтгэлийг шалгана.
LC насос (10AD Shimadzu, Япон), форсунк (Valco (АНУ) C14 W.05) нь 50 нл тарилгын гогцоо, мембран дегазатор (Shimadzu DGU-14A), хэт ягаан туяаны-VIS хялгасан судасны цонхыг тусгай µLC төхөөрөмж илрүүлэгч (UV-2075), шилэн баганыг маш нарийн холбосон, богино туузаар холбосон. Савлагааны дараа хялгасан судсыг (50 μм id 365 ба редукцийн хялгасан судсыг (50 μм) бууруулагчийн нэгдлийн 1/16″ гаралтын хэсэгт суурилуулсан. Мэдээлэл цуглуулах, хроматографийн боловсруулалтыг Multichro 2000 программ ашиглан хийсэн. 254 μм өгөгдлийн шингээлтийн шинжилгээг C хроматографийн шинжилгээнд хийсэн. (Нортхэмптон, MA).
Хүний ийлдэсээс альбумин, лиофилжсэн нунтаг, ≥ 96% (агароз гель электрофорез) 3 мг трипсин (1.5 мг), 4.0 М мочевин (1 мл), 0.2 М аммонийн бикарбонат (1 мл) хольсон. Уусмалыг 10 минут хутгаж, дараа нь 10 0 3 литр усанд 7 цаг байлгана. 0.1% TFA.Уусмалыг шүүж, 4 °C-аас доош температурт хадгална.
Пептидийн холимог болон HSA трипсиний задралыг PMP баганууд дээр тусад нь үнэлэв. PMP баганаар HSA-ийн пептидийн хольц ба трипсин задралын салалтыг шалгаж, үр дүнг Ascentis Express RP-Amide баганатай харьцуулна уу. Онолын хавтангийн дугаарыг дараах байдлаар тооцоолно.
Нүцгэн цахиурын тоосонцор болон лиганд-холбогдсон цахиурын хэсгүүдийн SEM зургийг Зураг дээр үзүүлэв.2 .Нүцгэн цахиурын хэсгүүдийн (A, B) SEM зураг нь бидний өмнөх судалгаанаас ялгаатай нь эдгээр хэсгүүд нь бөмбөрцөг хэлбэртэй бөгөөд тэдгээр нь хэсгүүд нь уртассан эсвэл жигд бус тэгш хэмтэй байдаг. ca хэсгүүд.
Цахиурын нүцгэн тоосонцор (A, B) болон лиганд-холбогдсон цахиурын тоосонцор (C, D) -ийн электрон микроскопын зураг.
Нүцгэн цахиурын тоосонцор болон лиганд-холбогдсон цахиурын хэсгүүдийн ширхэгийн хэмжээтэй тархалтыг Зураг 3(A)-д үзүүлэв. Эзлэхүүнд суурилсан бөөмийн хэмжээ тархалтын муруй нь химийн өөрчлөлтийн дараа цахиурын бөөмсийн хэмжээ нэмэгдсэнийг харуулсан (Зураг 3А). Цахиурын бөөмсийн тоосонцрын хэмжээ тархалтын өгөгдөл нь одоогийн судалгаа болон өмнөх судалгаанд үндэслэсэн тоосонцрын хэмжээ (T)-д суурилж байна (-д). PMP нь 3.36 μм бөгөөд энэ нь 3.05 μм (полистиролтой цахиурын ислийн тоосонцор) 3.05 μм (полистиролтой холбогдсон цахиурын ислийн тоосонцор)-тай өмнөх судалгаатай харьцуулахад 3.36 μм байна. Энэ багц нь PEG, мочевин, TMOS, цууны хүчлийн харьцаа нь харилцан адилгүй байснаас бидний өмнөх судалгаатай харьцуулахад нарийн ширхэгийн хэмжээтэй тархалттай байсан. Цахиурын тоосонцрын үе шатыг бид өмнө нь судалж байсан. Энэ нь стирол бүхий цахиурын хэсгүүдийн гадаргуугийн функционалчлал нь цахиурын гадаргуу дээр зөвхөн полистирол давхаргыг (0.97 μм) хуримтлуулж байсан бол PMP үе шатанд давхаргын зузаан нь 1.38 μм байсан гэсэн үг юм.
Нүцгэн цахиурын тоосонцор болон лигандтай холбогдсон цахиурын хэсгүүдийн ширхэгийн хэмжээтэй тархалт (A) ба нүх сүвний хэмжээ (B).
Одоогийн судалгааны хэмжээ, одоогийн судалгааны хэмжээ, гадаргуугийн хэмжээ нь 1 (B) -ийг хүснэгтэд өгөгдсөн. 9 ХӨДӨЛМӨРИЙН ЗАГВАРЫН НЭГДҮГЭЭР СУРГУУЛЬД ОРУУЛАЛТЫН НЭГДСЭН НЭГДСЭН НЭГДСЭН НЭГДСЭН НЭГДСЭН НЭГДСЭН НЭГДСЭН НЭГДСЭН НЭГДСЭН НЭГДСЭН НЭГДСЭН НЭГДСЭН НЭГДСЭН НОГООНЫ НЭЭЛТТЭЙ. M2 / G) Цахиурын хэсгүүдийн хэсгүүд нь 116 м2 / G-ээс 105 м2 / g хүртэл химийн өөрчлөлтийн дараа буурсан.
Хөдөлгөөнгүй фазын элементийн шинжилгээний үр дүнг Хүснэгт 2-т үзүүлэв. Одоогийн суурин фазын нүүрстөрөгчийн ачаалал 6.35% байгаа нь бидний өмнөх судалгааны нүүрстөрөгчийн ачааллаас бага байна (полистиролтой цахиурын тоосонцор, 7.93%35, 10.21% тус тус) 42. Учир нь SP-д гүйдлийн нэмэгдэл нь нүүрстөрөгчийн ачаалал бага байна. стирол, фенилмалеймид-метилвинилизоцианат (PCMP) болон 4-гидрокси-ТЕМПО зэрэг зарим туйлтай лигандуудыг ашигласан. Одоогийн стационар фазын азотын жин 2.21% байсан бол өмнөх судалгаагаар 0.1735, жингийн 0.85% нь азотын жингийн 0.85% байна. фенилмалеймид. Үүний нэгэн адил (4) ба (5) бүтээгдэхүүний нүүрстөрөгчийн ачаалал 2.7% ба 2.9% байсан бол эцсийн бүтээгдэхүүний (6) нүүрстөрөгчийн ачаалал Хүснэгт 2-т үзүүлснээр 6.35% байна. Жингийн алдагдлыг PMP хөдөлгөөнгүй үе шатанд шалгасан ба TGA муруй нь TGA4-т жингийн алдагдал сайн байгааг Зураг 6-д харуулав. нүүрстөрөгчийн ачаалал (6.35%), учир нь лигандууд нь зөвхөн С төдийгүй N, O, H агуулдаг.
Фенилмалеймид-метилвинилизоцианатын лиганд нь туйлын фенилмалеймидын бүлгүүд болон винилизоцианатын бүлгүүдтэй тул цахиурын тоосонцорыг гадаргууг өөрчлөхөд сонгосон. Винил изоцианатын бүлгүүд нь амьд радикал полимержих замаар стиролтой цаашид урвалд ордог. Хоёрдахь шалтгаан нь электростатик ба дунд зэргийн аналитик харилцан үйлчлэлтэй бүлгийг оруулах явдал юм. фенилмалеймидын хэсэг нь хэвийн рН-д виртуал цэнэггүй тул фенилмалеймидын хэсэг нь стиролын оновчтой хэмжээ болон чөлөөт радикал полимержих урвалын хугацаа зэргээр хянагдаж болно. Урвалын сүүлчийн үе шат (чөлөөт радикал полимержих) нь маш чухал бөгөөд суурин фазын туйлшралыг өөрчлөх боломжтой. Эдгээр стационарын ачааллыг нэмэгдүүлэхийн тулд элементийн шинжилгээг хийсэн. урвалын хугацаа нь суурин фазын нүүрстөрөгчийн ачааллыг ихэсгэж, эсрэгээр. Янз бүрийн концентрацитай стиролоор бэлтгэсэн SP-үүд өөр өөр нүүрстөрөгчийн ачаалалтай байдаг. Дахин хэлэхэд, эдгээр суурин фазуудыг зэвэрдэггүй ган баганад ачаалж, хроматографийн гүйцэтгэлийг шалгана уу (сонголт, нягтрал, N-ийн утга гэх мэт). Эдгээр туршилтууд дээр үндэслэн PMP-ийн хяналтыг сайжруулахын тулд фазын аналогийг оновчтой, оновчтой бэлтгэхийн тулд станцын аналогийг сонгосон.
Таван пептидийн хольцыг (Гли-Тир, Гли-Лью-Тир, Гли-Гли-Тир-Арг, Тир-Иле-Гли-Сер-Арг, лейцин энкефалин) мөн хөдөлгөөнт фаз ашиглан PMP багана ашиглан үнэлэв;60/40 (v/v) ацетонитрил/ус (0.1% TFA) 80 мкл/мин урсгалын хурдаар. Оновчтой шүүрлийн нөхцөлд нэг баганын онолын хавтангийн дугаар (N) (100 × 1.8 мм id) нь 20,000 ± 100 (200,000 ± 100 (200,000 Pch/m²) баганын Pch3-ийн утгыг өгдөг). роматограммыг Зураг 5А-д үзүүлэв. Өндөр урсгалын хурдтай (700 мкл/мин) PMP баганад хурдан шинжилгээ хийсэн, нэг минутын дотор таван пептид ялгарсан, N-ийн утга маш сайн, нэг баганад 13,500 ± 330 (100 × 1,8 мм id), 135,000 мм-ийн баганын хэмжээтэй (135,000 мм багана) тохирч байна. 00 × 1.8 мм id) нь дахин үржих чадварыг шалгахын тулд гурван өөр багц PMP суурин фазаар савлагдсан. Багана тус бүрийн шинжилгээний бодисын концентрацийг оновчтой тунгаах нөхцөл, онолын хавтангийн N тоо, багана тус бүр дээр ижил туршилтын хольцыг ялгахын тулд хадгалах хугацааг ашиглан бүртгэв. PMP баганын нөхөн үржихүйн өгөгдлүүдийг Хүснэгт D багана дахь дахин үржих чадварын өгөгдлүүдийг PRS 4-т маш бага нарийвчлалтайгаар харуулсан байна. Хүснэгт 3.
PMP багана (B) ба Ascentis Express RP-Amide багана (A) дээр пептидийн хольцыг салгах;хөдөлгөөнт фаз 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP баганын хэмжээс (100 × 1.8 мм id);аналитик Нэгдлүүдийн ялгарлын дараалал: 1 (Гли-Тир), 2 (Гли-Лью-Тир), 3 (Гли-Гли-Тир-Арг), 4 (Тир-Иле-Гли-Сер-Арг) ба 5 (лейцин) хүчил энкефалин)).
PMP баганыг (100 × 1.8 мм id) хүний ​​ийлдэс альбумины триптик задралыг өндөр хүчин чадалтай шингэн хроматографийн аргаар ялгах зорилгоор үнэлэв. Зураг 6-д үзүүлсэн хроматограмм нь дээжийг сайтар ялгаж, нягтрал нь маш сайн байгааг харуулж байна. HSA задралд 100 мкл/л/ус ба хөдөлгөөнт фазын урсгалын хурдыг ашиглан дүн шинжилгээ хийсэн. .Хроматограммд (Зураг 6) үзүүлснээр HSA задралыг 17 пептидтэй харгалзах 17 оргилд хуваасан. HSA задралын оргил тус бүрийн салгах үр ашгийг тооцоолж, утгыг Хүснэгт 5-д өгсөн болно.
HSA (100 × 1.8 мм id)-ийн триптик задралыг PMP багана дээр тусгаарласан;урсгалын хурд (100 мкл/мин), хөдөлгөөнт фаз 60/40 ацетонитрил/0.1% TFA-тай ус.
Энд L нь баганын урт, η нь хөдөлгөөнт фазын зуурамтгай чанар, ΔP нь баганын арын даралт, u нь хөдөлгөөнт фазын шугаман хурд юм. PMP баганын нэвчилт нь 2.5 × 10-14 м2, урсгалын хурд 25 мкЛ/мин, баганын 60/40 в/v AC0M (хэрэглэгдсэн ус 18 мм.) id) нь бидний өмнөх судалгааны Ref.34-тэй төстэй байсан. Өнгөц сүвэрхэг тоосонцороор дүүрсэн баганын нэвчилт нь: 1.3 мкм хэсгүүдэд 1.7 × 10-15, 1.7 μм хэсгүүдэд 3.1 × 10-15, 5.2 × 10-152 м2.-152 м хэсгүүдэд 5.2 × 10-15 м. 5 μм тоосонцор 43.Тиймээс PMP фазын нэвчилт нь 5 μм-ийн гол бүрхүүлтэй хэсгүүдтэй төстэй байна.
Энд Wx нь хлороформоор дүүргэсэн баганын жин, Wy нь метанолоор дүүргэсэн баганын жин, ρ нь уусгагчийн нягт юм. Метанол (ρ = 0.7866) ба хлороформ (ρ = 1.484) -ийн нягтрал. SILICA-ийн нийт сүвэрхэг чанар (SILICA-1301 мм) Бидний өмнө нь судалж байсан 4 ба С18-Мочевин багана 31 тус тус 0.63 ба 0.55 байна. Энэ нь мочевин лиганд байгаа нь суурин фазын нэвчилтийг бууруулдаг гэсэн үг юм. Нөгөөтэйгүүр, PMP баганын нийт сүвэрхэг чанар (100 × 1.8 мм-ээс бага) нь P1 баганын баганын id.MP8 баганатай харьцуулахад бага байна. -холбогдсон цахиурын тоосонцор, учир нь С18 төрлийн суурин фазуудад С18 лигандууд цахиурын хэсгүүдэд шугаман гинж хэлбэрээр холбогддог бол полистирол төрлийн суурин фазын эргэн тойронд харьцангуй зузаан полимер давхарга үүсдэг. Ердийн туршилтаар баганын сүвэрхэг чанарыг дараах байдлаар тооцдог.
Зураг 7A,B-д PMP багана (100 × 1.8 мм id) болон Ascentis Express RP-Amide багана (100 × 1.8 мм id) -ийг ижил тунгалгийн нөхцөлд (жишээ нь, 60/40 ACN/H2O ба 0.1% TFA) ашиглан харуулав.) van Deemter талбайн.Сонгосон пептидийн хольцыг (Гли-Тир, Гли-Лью-Тир, Гли-Гли-Тир-Арг, Тир-Иле-Гли-Сер-Арг, Лейцин Энкефалин) 20 мкл-д бэлтгэсэн/ Хоёр баганын хамгийн бага урсгалын хурд нь 800 мкл/мин байна. Баганын хамгийн бага урсгалын хурд нь 800 мкл/мин байна. Экспресс RP-Amide багана нь тус тус 2.6 μм ба 3.9 μм байв. HETP-ийн утгууд нь PMP баганын (100 × 1.8 мм id) салгах үр ашиг нь худалдаанд байгаа Ascentis Express RP-Amide баганаас хамаагүй дээр байгааг харуулж байна (100 × 1.8 мм-ийн урсац нь N-ийн хэмжээ буурч байгааг харуулж байна). Бидний өмнөх судалгаатай харьцуулахад тийм ч чухал биш. Ascentis Express RP-Amide баганатай харьцуулахад PMP баганын (100 × 1.8 мм id) тусгаарлах үр ашиг нь одоогийн ажилд ашиглагдаж буй бөөмийн хэлбэр, хэмжээ, нарийн төвөгтэй багана савлах горимыг сайжруулсанд суурилдаг34.
(A) 0.1% TFA-тай 60/40 ACN/H2O-д PMP багана (100 × 1.8 мм id) ашиглан олж авсан ван Димтерийн график (Хөдөлгөөнт фазын шугаман хурдтай харьцуулахад HETP).(B) ван Димтерийн график (ХӨХХБ-ын эсрэг хөдөлгөөнт фазын шугаман хурд) Экспресс - RP10-ийн багана ашиглан олж авсан мм-Asisid. 0/40 ACN/H2O 0.1% TFA-тай.
Өндөр хүчин чадалтай шингэн хроматографийн аргаар хүний ​​ийлдэс альбумин (HAS)-ийн синтетик пептидийн холимог болон трипсин задралыг ялгах зорилгоор туйлтай полистиролын суурин фазыг бэлтгэж, үнэлэв. Пептидийн холимогт зориулсан PMP баганын хроматографийн гүйцэтгэл нь салгах үр ашиг, нягтралаараа маш сайн байдаг. Баганын ялгах чадвар нь PMP-ийн хэмжээ, популяцийн олон янз байдал зэрэгтэй холбоотой юм. ca тоосонцор, суурин фазын хяналттай нийлэгжилт, нийлмэл баганын савлагаа. Өндөр ялгах үр ашигтайгаас гадна өндөр урсгалын хурдтай баганын арын даралт бага байдаг нь энэ суурин фазын бас нэг давуу тал юм. PMP багана нь сайн давтагдах чадвартай бөгөөд пептидийн хольцын шинжилгээ болон төрөл бүрийн уургийн трипсин шингэцэд ашиглагдана. Бид энэхүү шингэн ургамлаас биоидэвхтэй нийлмэл бүтээгдэхүүн, биоидэвхитэй нэгдлүүдийг ялгахад ашиглахыг зорьж байна. хроматографи.Ирээдүйд PMP баганыг уураг ба моноклональ эсрэгбиемүүдийг ялгах зорилгоор үнэлнэ.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Урвуу фазын хроматографийн аргаар пептид салгах системийн судалгаа I хэсэг: Баганын шинж чанарыг тодорхойлох протокол боловсруулах.Ж.Хроматографи.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al.Халдварт өвчний эмчилгээнд зориулагдсан сайжруулсан идэвхтэй пептидүүд.Биотехнологи.Дэвшилтэт.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Синтетик эмчилгээний пептидүүд: шинжлэх ухаан ба зах зээл. эмийн нээлт.15 (1-2) өнөөдөр, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.200.2010.
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.Хроматографи.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Нарийвчилсан шингэн хроматографи-масс спектрометр нь өргөн зорилтот метаболомик ба протеомикийг нэгтгэх боломжийг олгодог.anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Эмийн хөгжилд UHPLC-ийн үүрэг.Ж.Sep. Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM. Хурдан салгахад зориулсан хэт өндөр даралтын шингэний хроматографийн үндсэн ба практик талууд.Ж.9-р сарын Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelicheff, P. Эмийн боловсруулалтад хэт өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматографийн хэрэглээ.J.Хроматографи.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. Энтеровирусыг үр дүнтэй цэвэршүүлэх зорилгоор усан доторх тос агуулсан өндөр дотоод фазын эмульсээс бэлтгэсэн цул макро сүвэрхэг гидрогель.Хими.Британи.Ж.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Протеомик дахь шингэн хроматографийн үүрэг.Ж.Хроматографи.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. Эмчилгээний пептид ба уургийн урвуу фазын шингэн хроматографийн салалтад гарч ирж буй чиг хандлага: онол ба хэрэглээ.Ж.Эмийн сан.Биоанагаахын шинжлэх ухаан.анус.69, 9-27 (2012).
Гилар, М., Оливова, П., Дэйли, АЕ, Геблер, ЖК. Эхний болон хоёр дахь тусгаарлах хэмжигдэхүүн дэх өөр өөр рН-ийн утгыг ашиглан RP-RP-HPLC системийг ашиглан пептидүүдийг хоёр хэмжээст тусгаарлах.Sep. Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al. C18 дэд 2 мкм бүрэн ба өнгөц сүвэрхэг хэсгүүдээр савласан өндөр үр ашигтай хроматографийн баганын масс дамжуулах шинж чанар ба кинетик гүйцэтгэлийг судалсан.J.9-р сар Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Ургамлын био идэвхит пептидүүдийг тусгаарлах, тодорхойлох, баталгаажуулах сүүлийн үеийн чиг хандлага ба аналитик сорилтууд.анус.биологийн анус.Химийн.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s002168-02 (s002168-0).
Мюллер, Ж.Б. нар. Амьдралын хаант улсын протеомик ландшафт. Байгаль 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al. Эмчилгээний пептидүүдийг бэлдмэлийн шингэн хроматографийн аргаар боловсруулах. Молекул (Базель, Швейцарь) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Холимог горимын хроматографи ба биополимеруудад хэрэглэх.Ж.Хроматографи.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Жао, Г., Дун, X.-Y.& Sun, Y. Холимог горимын уургийн хроматографийн лигандууд: зарчим, шинж чанар, дизайн.Ж.Биотехнологи.144(1), 3-11 (2009).