Nature.com ला भेट दिल्याबद्दल धन्यवाद. तुम्ही मर्यादित CSS सपोर्टसह ब्राउझर आवृत्ती वापरत आहात. सर्वोत्तम अनुभवासाठी, आम्ही शिफारस करतो की तुम्ही अपडेटेड ब्राउझर वापरा (किंवा इंटरनेट एक्सप्लोररमध्ये कंपॅटिबिलिटी मोड अक्षम करा). याव्यतिरिक्त, सतत सपोर्ट सुनिश्चित करण्यासाठी, आम्ही शैली आणि जावास्क्रिप्टशिवाय साइट दाखवतो.
एकाच वेळी तीन स्लाईड्सचा कॅरोसेल प्रदर्शित करते. एका वेळी तीन स्लाईड्समधून जाण्यासाठी मागील आणि पुढील बटणे वापरा किंवा एका वेळी तीन स्लाईड्समधून जाण्यासाठी शेवटी स्लाईडर बटणे वापरा.
सोल-जेल पद्धतीने छिद्रयुक्त सिलिका कण तयार करून काही सुधारणा करून रुंद-छिद्रयुक्त कण मिळवले गेले. हे कण N-फिनाइलमॅलेमाइड-मिथाइलव्हिनाइल आयसोसायनेट (PMI) आणि स्टायरीनसह रिव्हर्स चेन ट्रान्सफर-फ्रॅगमेंटेशन (RAFT) पॉलिमरायझेशनद्वारे एन-फिनाइलमॅलेमाइड इंटरकॅलेटेड पॉलिमाइड्स तयार करण्यासाठी व्युत्पन्न केले गेले. स्टायरीन (PMP) स्थिर टप्पा. अरुंद बोअर स्टेनलेस स्टील कॉलम (100 × 1.8 मिमी आतील व्यास) स्लरी पॅकिंगने पॅक केले गेले. पीएमपी कॉलमच्या क्रोमॅटोग्राफिक कामगिरीचे मूल्यांकन पाच पेप्टाइड्स (ग्लाय-टायर, ग्लाय-ल्यू-टायर, ग्लाय-ग्लाय-टायर-आर्ग, टायर-इल-ग्लाय-सेर-आर्ग, ल्यू अमीनो अॅसिड एन्केफॅलिन) आणि मानवी सीरम अल्ब्युमिन (HAS) चे ट्रिप्टिक हायड्रोलायझेट असलेल्या सिंथेटिक पेप्टाइड्सचे मिश्रण वेगळे करण्यासाठी केले गेले. इष्टतम इल्युशन परिस्थितीत, पेप्टाइड्सच्या मिश्रणासह प्लेट्सची सैद्धांतिक संख्या 280,000 प्लेट्स/चौ.मी. पर्यंत पोहोचली. विकसित स्तंभाच्या पृथक्करण कामगिरीची व्यावसायिक असेंटिस एक्सप्रेस आरपी-अमाइड स्तंभाशी तुलना करताना, असे आढळून आले की पीएमपी स्तंभाची पृथक्करण कार्यक्षमता पृथक्करण कार्यक्षमता आणि रिझोल्यूशनच्या बाबतीत व्यावसायिक स्तंभापेक्षा श्रेष्ठ होती.
बायोफार्मास्युटिकल उद्योग हा एक विस्तारणारा जागतिक बाजार बनला आहे आणि अलिकडच्या काळात बाजारपेठेतील वाटा लक्षणीय वाढला आहे. बायोफार्मास्युटिकल उद्योगाच्या स्फोटक वाढीसह १,२,३ पेप्टाइड आणि प्रथिने विश्लेषणाची मोठी गरज आहे. लक्ष्य पेप्टाइड व्यतिरिक्त, पेप्टाइड संश्लेषणादरम्यान विविध अशुद्धता तयार होतात, म्हणून पेप्टाइडची इच्छित शुद्धता मिळविण्यासाठी क्रोमॅटोग्राफिक शुद्धीकरण आवश्यक आहे. एकाच नमुन्यात मोठ्या संख्येने संभाव्य शोधण्यायोग्य प्रजाती असल्याने शरीरातील द्रव, ऊती आणि पेशींमध्ये प्रथिनांचे विश्लेषण आणि वैशिष्ट्यीकरण हे एक अत्यंत आव्हानात्मक काम आहे. जरी मास स्पेक्ट्रोमेट्री हे पेप्टाइड्स आणि प्रथिने अनुक्रमित करण्यासाठी एक प्रभावी साधन असले तरी, जर असे नमुने थेट मास स्पेक्ट्रोमीटरमध्ये सादर केले गेले तर, पृथक्करण असमाधानकारक असेल. एमएस विश्लेषणापूर्वी लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी (एलसी) करून ही समस्या सोडवता येते, ज्यामुळे दिलेल्या वेळी मास स्पेक्ट्रोमीटरमध्ये प्रवेश करणाऱ्या विश्लेषकांचे प्रमाण कमी होईल ४,५,६. याव्यतिरिक्त, विश्लेषक द्रव टप्प्यातील पृथक्करणादरम्यान एका अरुंद प्रदेशात लक्ष केंद्रित करू शकतात, ज्यामुळे या विश्लेषकांचे लक्ष केंद्रित होते आणि एमएस शोधण्याची संवेदनशीलता वाढते. गेल्या दशकात लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी (LC) ने लक्षणीय प्रगती केली आहे आणि प्रोटिओमिक विश्लेषणासाठी ती मोठ्या प्रमाणावर वापरली जाणारी पद्धत बनली आहे7,8,9,10.
ऑक्टाडेसिल-मॉडिफाइड सिलिका (ODS) ला स्थिर टप्पा म्हणून वापरून पेप्टाइड्सचे मिश्रण शुद्ध करण्यासाठी आणि वेगळे करण्यासाठी रिव्हर्स-फेज लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी (RP-LC) मोठ्या प्रमाणावर वापरली जाते11,12,13. तथापि, त्यांच्या जटिल रचनेमुळे आणि अँफोटेरिक स्वरूपामुळे,14,15 RP स्थिर टप्पे पेप्टाइड्स आणि प्रथिनांचे समाधानकारक पृथक्करण प्रदान करू शकत नाहीत. म्हणून, ध्रुवीय आणि नॉन-ध्रुवीय तुकड्यांसह पेप्टाइड्स आणि प्रथिनांचे विश्लेषण करण्यासाठी या विश्लेषणांना परस्परसंवाद आणि टिकवून ठेवण्यासाठी विशेषतः डिझाइन केलेले स्थिर टप्पे आवश्यक आहेत16. मल्टीमोडल परस्परसंवाद देणारी मिश्रित क्रोमॅटोग्राफी पेप्टाइड्स, प्रथिने आणि इतर जटिल मिश्रणे वेगळे करण्यासाठी RP-LC चा पर्याय असू शकते. अनेक मिश्रित-प्रकारचे स्थिर टप्पे तयार केले गेले आणि पेप्टाइड्स आणि प्रथिने वेगळे करण्यासाठी या स्थिर टप्प्यांनी भरलेले स्तंभ वापरले गेले17,18,19,20,21. ध्रुवीय आणि ध्रुवीय नसलेल्या गटांच्या उपस्थितीमुळे, मिश्र मोड स्थिर टप्पे (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, ध्रुवीय इंटरकॅलेशन/RPLC) पेप्टाइड्स आणि प्रथिने 22,23,24,25,26,27,28 च्या पृथक्करणासाठी योग्य आहेत. , सहसंयोजक बंधन असलेल्या ध्रुवीय गटांसह ध्रुवीय इंटरकॅलेटेड स्थिर टप्पे ध्रुवीय आणि ध्रुवीय विश्लेषकांसाठी चांगली पृथक्करण क्षमता आणि अद्वितीय निवडकता दर्शवितात कारण पृथक्करण विश्लेषक आणि स्थिर टप्पा मल्टीमोडल परस्परसंवाद 29,30,31,32 यांच्यातील परस्परसंवादावर अवलंबून असते. अलीकडेच, झांग आणि इतर 30 यांनी पॉलीमाइन्सचे बेहेनाइल-टर्मिनेटेड स्थिर टप्पे मिळवले आणि हायड्रोकार्बन्स, अँटीडिप्रेसेंट्स, फ्लेव्होनॉइड्स, न्यूक्लियोसाइड्स, इस्ट्रोजेन्स आणि काही इतर विश्लेषकांना यशस्वीरित्या वेगळे केले. ध्रुवीय एम्बेडेड स्थिर मटेरियलमध्ये ध्रुवीय आणि ध्रुवीय दोन्ही गट असतात, म्हणून ते पेप्टाइड्स आणि प्रथिने हायड्रोफोबिक आणि हायड्रोफिलिक भागांमध्ये वेगळे करण्यासाठी वापरले जाऊ शकते. ध्रुवीय इनलाइन कॉलम (उदा., अमाइड इनलाइन असलेले C18 कॉलम) असेंटिस एक्सप्रेस RP-अमाइड कॉलम्स या ट्रेड नावाने उपलब्ध आहेत, परंतु हे कॉलम फक्त अमाइन 33 च्या विश्लेषणासाठी वापरले गेले आहेत.
सध्याच्या अभ्यासात, पेप्टाइड पृथक्करण आणि ट्रिप्टिक एचएसए क्लीवेजसाठी ध्रुवीय एम्बेडिंग स्थिर टप्पा (एन-फेनिलमॅलेइमाइड, एम्बेडिंग पॉलिस्टीरिन) तयार करण्यात आला आणि त्याचे मूल्यांकन करण्यात आले. स्थिर टप्पा तयार करण्यासाठी खालील रणनीती वापरली गेली. तयारी योजना 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39 मध्ये काही बदल करून, आमच्या मागील प्रकाशनांमध्ये वर्णन केलेल्या प्रक्रियेनुसार सच्छिद्र सिलिका कण तयार करण्यात आले. मोठ्या छिद्र आकाराचे सिलिका कण मिळविण्यासाठी युरिया, पॉलीथिलीन ग्लायकॉल (पीईजी), टीएमओएस आणि जलीय-एसिटिक ऍसिडचे गुणोत्तर समायोजित केले गेले. दुसरे म्हणजे, एक नवीन फिनिलमॅलेइमाइड-मिथाइलव्हिनाइल आयसोसायनेट लिगँड संश्लेषित केले गेले आणि त्याचे व्युत्पन्न सिलिका कण ध्रुवीय एम्बेडेड स्थिर टप्पे तयार करण्यासाठी वापरले गेले. प्राप्त स्थिर टप्पा एका ऑप्टिमाइझ्ड पॅकिंग योजनेनुसार स्टेनलेस स्टील कॉलममध्ये (अंतर्गत व्यास 100 × 1.8 मिमी) पॅक करण्यात आला. कॉलममध्ये एकसमान थर सुनिश्चित करण्यासाठी कॉलमचे पॅकिंग यांत्रिक कंपनाद्वारे सहाय्य केले जाते. पॅक्ड कॉलमचे मूल्यांकन पाच पेप्टाइड्स (ग्लाय-टायर, ग्लाय-ल्यू-टायर, ग्लाय-ग्लाय-टायर-आर्ग, टायर-इल-ग्लाय-सेर-आर्ग, ल्युसीन-एंकेफॅलिन पेप्टाइड) आणि मानवी सीरम अल्ब्युमिन (एचएसए) च्या ट्रिप्टिक हायड्रोलायसेट्स असलेल्या पेप्टाइड्सच्या मिश्रणाच्या पृथक्करणासाठी केले गेले. असे आढळून आले की पेप्टाइड मिश्रण आणि एचएसए ट्रिप्टिक डायजेस्ट चांगल्या रिझोल्यूशन आणि कार्यक्षमतेने वेगळे झाले. पीएमपी कॉलमच्या पृथक्करण कार्यक्षमतेची तुलना एसेंटिस एक्सप्रेस आरपी-अमाइड कॉलमशी करण्यात आली. असे आढळून आले की पेप्टाइड्स आणि प्रथिनांचे पीएमपी कॉलमवर चांगले रिझोल्यूशन आणि उच्च पृथक्करण कार्यक्षमता आहे आणि पीएमपी कॉलमची पृथक्करण कार्यक्षमता एसेंटिस एक्सप्रेस आरपी-अमाइड कॉलमपेक्षा जास्त आहे.
PEG (पॉलिथिलीन ग्लायकॉल), युरिया, एसिटिक अॅसिड, ट्रायमेथॉक्सिओर्थोसिलिकेट (TMOS), ट्रायमेथिलक्लोरोसिलेन (TMCS), ट्रिप्सिन, ह्यूमन सीरम अल्ब्युमिन (HSA), अमोनियम क्लोराईड, युरिया, हेक्सामेथिलमेथाक्रिलॉयल्डिसिलाझेन (HMDS), मेथाक्रिलॉयल क्लोराईड (MC), स्टायरीन, 4-हायड्रॉक्सी-टेम्पो, बेंझॉयल पेरोक्साइड (BPO), एचपीएलसीसाठी एसीटोनिट्राइल (ACN), मिथेनॉल, 2-प्रोपेनॉल आणि एसीटोन. सिग्मा-अल्ड्रिच कंपनी (सेंट लुईस, मिसूरी, यूएसए).
युरिया (८ ग्रॅम), पॉलीथिलीन ग्लायकॉल (८ ग्रॅम) आणि ८ मिली ०.०१ नॅनोअँटिअँल अ‍ॅसिटिक अ‍ॅसिड यांचे मिश्रण १० मिनिटे ढवळले गेले आणि त्यात २४ मिली टीएमओएस बर्फ थंड करून टाकण्यात आले. प्रतिक्रिया मिश्रण ४०°C वर ६ तासांसाठी आणि नंतर १२०°C वर ८ तासांसाठी स्टेनलेस स्टील ऑटोक्लेव्हमध्ये गरम केले गेले. पाणी काढून टाकण्यात आले आणि अवशेष ७०°C वर १२ तासांसाठी वाळवले गेले. वाळलेल्या सॉफ्ट ब्लॉक्सना सहजतेने बारीक करून ५५०°C वर ओव्हनमध्ये १२ तासांसाठी कॅल्साइन केले गेले. कण आकार, छिद्र आकार आणि पृष्ठभाग क्षेत्रफळाची पुनरुत्पादनक्षमता तपासण्यासाठी तीन बॅचेस तयार करण्यात आल्या आणि त्यांचे वैशिष्ट्यीकरण करण्यात आले.
पॉलिस्टीरिन साखळ्यांसाठी ध्रुवीय गट आणि स्थिर टप्पा. तयारी प्रक्रिया खाली वर्णन केली आहे.
एन-फेनिलमलेइमाइड (२०० मिग्रॅ) आणि मिथाइल व्हाइनिल आयसोसायनेट (१०० मिग्रॅ) निर्जल टोल्युइनमध्ये विरघळवले गेले आणि नंतर फेनिलमलेइमाइड आणि मिथाइल व्हाइनिल आयसोसायनेट (पीएमसीपी) चे कोपॉलिमर मिळविण्यासाठी ०.१ मिली २,२′-अ‍ॅझोइसोब्युटायरोनिट्राइल (एआयबीएन) रिअॅक्शन फ्लास्कमध्ये जोडले गेले. ) मिश्रण ६०°C वर ३ तास ​​गरम केले गेले, फिल्टर केले गेले आणि ४०°C वर ३ तास ​​ओव्हनमध्ये वाळवले गेले.
वाळलेल्या सिलिका कण (२ ग्रॅम) कोरड्या टोल्युइनमध्ये (१०० मिली) विखुरले गेले, ५०० मिली गोल तळाच्या फ्लास्कमध्ये १० मिनिटे ढवळले आणि सोनिकेट केले गेले. पीएमसीपी (१० मिलीग्राम) टोल्युइनमध्ये विरघळले गेले आणि अॅडिशन फनेलद्वारे रिअॅक्शन फ्लास्कमध्ये ड्रॉपवाइज जोडले गेले. मिश्रण १००°C वर ८ तासांसाठी रिफ्लक्स केले गेले, फिल्टर केले गेले, एसीटोनने धुतले गेले आणि ६०°C वर ३ तासांसाठी वाळवले गेले. त्यानंतर, पीएमसीपी (१०० ग्रॅम) शी संबंधित सिलिका कण टोल्युइनमध्ये (२०० मिली) विरघळले गेले आणि उत्प्रेरक म्हणून १०० μl डायब्युटिलटिन डायलॉरेटच्या उपस्थितीत ४-हायड्रॉक्सी-टेम्पो (२ मिली) त्यात जोडले गेले. मिश्रण ५०°C वर ८ तासांसाठी ढवळले गेले, फिल्टर केले गेले आणि ५०°C वर ३ तासांसाठी वाळवले गेले.
स्टायरीन (१ मिली), बेंझॉयल पेरोक्साइड बीपीओ (०.५ मिली) आणि टेम्पो-पीएमसीपी (१.५ ग्रॅम) शी जोडलेले सिलिका कण टोल्युइनमध्ये विखुरले गेले आणि नायट्रोजनने शुद्ध केले गेले. स्टायरीनचे पॉलिमरायझेशन १००°C वर १२ तासांसाठी केले गेले. परिणामी उत्पादन मिथेनॉलने धुऊन रात्रभर ६०°C वर वाळवले गेले. प्रतिक्रियेची सामान्य योजना आकृती १ मध्ये दर्शविली आहे.
नमुने 1 तासासाठी 393 K वर गॅस काढून टाकण्यात आले जोपर्यंत 10-3 Torr पेक्षा कमी अवशिष्ट दाब मिळत नव्हता. एकूण छिद्रांचे आकारमान निश्चित करण्यासाठी P/P0 = 0.99 सापेक्ष दाबाने शोषलेल्या N2 चे प्रमाण वापरले गेले. स्कॅनिंग इलेक्ट्रॉन मायक्रोस्कोप (हिताची हाय टेक्नॉलॉजीज, टोकियो, जपान) वापरून शुद्ध आणि लिगँड-बाउंड सिलिका कणांचे आकारविज्ञान तपासण्यात आले. कार्बन टेप वापरून अॅल्युमिनियम रॉडवर कोरडे नमुने (शुद्ध सिलिका आणि लिगँड-बाउंड सिलिका कण) ठेवण्यात आले. Q150T स्पटरिंग डिव्हाइस वापरून नमुन्यावर सोने जमा करण्यात आले आणि नमुन्यावर 5 nm जाडीचा Au थर जमा करण्यात आला. यामुळे कमी व्होल्टेज प्रक्रियेची कार्यक्षमता सुधारते आणि बारीक थंड फवारणी मिळते. थर्मो इलेक्ट्रॉन (वॉल्थम, एमए, यूएसए) फ्लॅश EA1112 एलिमेंटल कंपोझिशन अॅनालायझर वापरून एलिमेंटल विश्लेषण केले गेले. कण आकार वितरण मिळविण्यासाठी माल्व्हर्न कण आकार विश्लेषक (वॉर्स्टरशायर, यूके) मास्टरसायझर 2000 वापरण्यात आला. कोटिंग नसलेले सिलिका कण आणि लिगँड-बाउंड सिलिका कण (प्रत्येकी ५ मिग्रॅ) ५ मिली आयसोप्रोपॅनॉलमध्ये विखुरले गेले, १० मिनिटे सोनिकेट केले गेले, ५ मिनिटे हलवले गेले आणि मास्टरसायझर ऑप्टिकल बेंचवर ठेवले गेले. थर्मोग्रॅव्हिमेट्रिक विश्लेषण ३० ते ८०० °C तापमान श्रेणीत प्रति मिनिट ५ °C या दराने केले जाते.
संदर्भ ३१ मध्ये दिलेल्या प्रक्रियेनुसार ग्लास फायबर लाईन असलेले अरुंद बोअर स्टेनलेस स्टील कॉलम स्लरी फिलिंग पद्धतीने पॅक केले गेले होते (आयडी १०० × १.८ मिमी). स्टेनलेस स्टील कॉलम (ग्लास लाईन, आयडी १०० × १ .८ मिमी) आणि १ µm फ्रिट असलेले आउटलेट स्लरी पॅकेजिंग मशीनशी जोडले गेले होते (ऑलटेक डीअरफिल्ड, आयएल, यूएसए). १५० मिलीग्राम स्थिर फेज १.२ मिली मिथेनॉलमध्ये निलंबित करून आणि ते जलाशय स्तंभात भरून स्थिर फेजचे सस्पेंशन तयार करा. स्लरी सॉल्व्हेंट आणि कंट्रोल सॉल्व्हेंट म्हणून मिथेनॉलचा वापर केला गेला. १०० एमपी १० मिनिटांसाठी, ८० एमपी १५ मिनिटांसाठी आणि ६० एमपी ३० मिनिटांसाठी दाब क्रम लागू करून कॉलम पॅक करा. पॅकिंग प्रक्रियेत यांत्रिक कंपनासाठी दोन गॅस क्रोमॅटोग्राफी कॉलम व्हायब्रेटर (ऑलटेक, डीअरफिल्ड, आयएल, यूएसए) वापरले गेले जेणेकरून कॉलम पॅकिंग एकसारखे होईल. स्लरी पॅकर बंद करा आणि स्ट्रिंगला नुकसान होऊ नये म्हणून हळूहळू दाब सोडा. स्लरी नोजलपासून कॉलम डिस्कनेक्ट करण्यात आला आणि इनलेटला आणखी एक फिटिंग जोडण्यात आले आणि त्याच्या ऑपरेशनची चाचणी घेण्यासाठी एलसी सिस्टमशी जोडले गेले.
एलसी पंप (१०एडी शिमाडझू, जपान), ५० एनएल इंजेक्शन लूप (व्हॅल्को (यूएसए) सी१४ डब्ल्यू.०५) असलेला सॅम्पलर, मेम्ब्रेन डिगॅसर (शिमाडझू डीजीयू-१४ए) आणि यूव्ही-व्हीआयएस केशिका विंडो वापरून एक कस्टम एमएलसी तयार करण्यात आला. डिटेक्टर डिव्हाइस (यूव्ही-२०७५) आणि इनॅमेल्ड मायक्रोकॉलम. अतिरिक्त स्तंभ विस्ताराचा प्रभाव कमी करण्यासाठी खूप अरुंद आणि लहान कनेक्टिंग ट्यूब वापरा. ​​स्तंभ भरल्यानंतर, १/१६″ रिड्यूसिंग जंक्शनच्या आउटलेटवर एक केशिका (५० µm आयडी ३६५) स्थापित करा आणि रिड्यूसिंग जंक्शनचा केशिका (५० µm) स्थापित करा. मल्टीक्रो २००० सॉफ्टवेअर वापरून डेटा संकलन आणि क्रोमॅटोग्राम प्रक्रिया केली जाते. २५४ एनएमवर, विषय विश्लेषणांचे यूव्ही शोषण ० वर निरीक्षण केले गेले. क्रोमॅटोग्राफिक डेटाचे विश्लेषण ओरिजिनप्रो८ (नॉर्थॅम्प्टन, एमए) वापरून केले गेले.
मानवी सीरम अल्ब्युमिन, लायोफिलाइज्ड पावडर, ≥ 96% (अ‍ॅगारोज जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस) 3 मिलीग्राम ट्रिप्सिन (1.5 मिलीग्राम), 4.0 मिली युरिया (1 मिली) आणि 0.2 मिली अमोनियम बायकार्बोनेट (1 मिली) सह मिसळले. द्रावण 10 मिनिटे ढवळले गेले आणि 37°C वर 6 तासांसाठी वॉटर बाथमध्ये ठेवले गेले, नंतर 0.1% TFA च्या 1 मिलीसह शांत केले गेले. द्रावण गाळून घ्या आणि 4°C पेक्षा कमी तापमानात साठवा.
पीएमपी कॉलमवर पेप्टाइड्स आणि ट्रिप्टिक डायजेस्ट एचएसएच्या मिश्रणाचे पृथक्करण स्वतंत्रपणे करण्यात आले. पीएमपी कॉलमने वेगळे केलेल्या पेप्टाइड्स आणि एचएसएच्या मिश्रणाचे ट्रिप्टिक हायड्रोलिसिस तपासा आणि निकालांची तुलना एसेंटिस एक्सप्रेस आरपी-अमाइड कॉलमशी करा. सैद्धांतिक प्लेट्सची संख्या खालील समीकरण वापरून मोजली जाते:
शुद्ध सिलिका कण आणि लिगँड-बद्ध सिलिका कणांच्या SEM प्रतिमा आकृती २ मध्ये दर्शविल्या आहेत. शुद्ध सिलिका कणांच्या (A, B) SEM प्रतिमा गोलाकार आकार दर्शवितात ज्यामध्ये कण लांबलचक असतात किंवा आमच्या मागील अभ्यासांच्या तुलनेत अनियमित सममिती असते. लिगँड-बद्ध सिलिका कणांची पृष्ठभाग (C, D) शुद्ध सिलिका कणांपेक्षा गुळगुळीत असते, जी सिलिका कणांच्या पृष्ठभागावर असलेल्या पॉलिस्टीरिन साखळ्यांमुळे असू शकते.
शुद्ध सिलिका कण (A, B) आणि लिगँड-बद्ध सिलिका कण (C, D) यांचे इलेक्ट्रॉन मायक्रोग्राफ स्कॅन करणे.
शुद्ध सिलिका कण आणि लिगँड-बाउंड सिलिका कणांचे कण आकार वितरण आकृती 2. 3(A) मध्ये दर्शविले आहे. रासायनिक बदलानंतर सिलिका कण आकार वाढल्याचे व्हॉल्यूमेट्रिक कण आकार वितरण वक्रांवरून दिसून आले (आकृती 3A). सध्याच्या अभ्यासातील आणि मागील अभ्यासातील सिलिका कण आकार वितरण डेटाची तुलना तक्ता 1(A) मध्ये केली आहे. PMP चा व्हॉल्यूमेट्रिक कण आकार d(0.5) 3.36 µm होता, जो आमच्या मागील अभ्यासात (पॉलिस्टीरिन बॉन्डेड सिलिका कण) 34 च्या ad(0.5) मूल्याच्या तुलनेत होता. प्रतिक्रिया मिश्रणात PEG, युरिया, TMOS आणि एसिटिक ऍसिडच्या गुणोत्तरात बदल झाल्यामुळे, या बॅचचे कण आकार वितरण आमच्या मागील अभ्यासाच्या तुलनेत अरुंद होते. PMP टप्प्याचा कण आकार आम्ही आधी अभ्यासलेल्या पॉलिस्टीरिन बाउंड सिलिका कण टप्प्यापेक्षा थोडा मोठा आहे. याचा अर्थ असा की स्टायरीनसह सिलिका कणांच्या पृष्ठभागाच्या कार्यात्मकतेमुळे सिलिका पृष्ठभागावर फक्त पॉलिस्टीरिन थर (0.97 µm) जमा झाला, तर PMP टप्प्यात थराची जाडी 1.38 µm होती.
शुद्ध सिलिका कण आणि लिगँड-बद्ध सिलिका कणांचे कण आकार वितरण (A) आणि छिद्र आकार वितरण (B).
या अभ्यासात वापरल्या जाणाऱ्या सिलिका कणांचे छिद्र आकार, छिद्र आकारमान आणि पृष्ठभागाचे क्षेत्रफळ तक्ता १ (ब) मध्ये दाखवले आहे. शुद्ध सिलिका कण आणि लिगँड-बाउंड सिलिका कणांचे PSD प्रोफाइल आकृती ३ (ब) मध्ये दाखवले आहेत. निकाल आमच्या मागील अभ्यासाशी तुलनात्मक होते ३४. शुद्ध आणि लिगँड-बाउंड सिलिका कणांचे छिद्र आकार अनुक्रमे ३१० Å आणि २४१ Å होते, जे दर्शविते की रासायनिक सुधारणानंतर, छिद्र आकारात ६९ Å ने घट झाली, जसे की तक्ता १ (ब) मध्ये दाखवले आहे आणि शिफ्ट वक्र आकृतीमध्ये दाखवले आहे. सध्याच्या अभ्यासात सिलिका कणांचे विशिष्ट पृष्ठभाग क्षेत्रफळ ११६ m2/g आहे, जे आमच्या मागील अभ्यासाशी तुलनात्मक आहे (१२४ m2/g). तक्ता १ (ब) मध्ये दाखवल्याप्रमाणे, रासायनिक सुधारणानंतर सिलिका कणांचे पृष्ठभाग क्षेत्रफळ (m2/g) देखील ११६ m2/g वरून १०५ m2/g पर्यंत कमी झाले.
स्थिर टप्प्याच्या मूलभूत विश्लेषणाचे निकाल तक्ता २ मध्ये सादर केले आहेत. सध्याच्या स्थिर टप्प्यातील कार्बनचे प्रमाण ६.३५% आहे, जे आमच्या मागील अभ्यासापेक्षा कमी आहे (पॉलिस्टीरिनशी संबंधित सिलिका कण, अनुक्रमे ७.९३%३५ आणि १०.२१%) ४२. खाली दिलेल्या वर्तमान स्थिर टप्प्यातील कार्बनचे प्रमाण, कारण SP तयार करताना स्टायरीन व्यतिरिक्त काही ध्रुवीय लिगँड जसे की फेनिलमलेइमाइड मिथाइल व्हाइनिल आयसोसायनेट (PCMP) आणि ४-हायड्रॉक्सी-टेम्पो वापरले गेले आहेत. मागील अभ्यासांमध्ये ०.१७३५ आणि ०.८५% च्या तुलनेत सध्याच्या स्थिर टप्प्यात नायट्रोजनचे वजन टक्केवारी २.२१% आहे. याचा अर्थ असा की सध्याच्या स्थिर टप्प्यात फेनिलमलेइमाइडमुळे नायट्रोजनचे वजन टक्केवारी जास्त आहे. त्याचप्रमाणे, उत्पादनांमध्ये (४) आणि (५) कार्बनचे प्रमाण अनुक्रमे २.७% आणि २.९% आहे, तर अंतिम उत्पादनात (६) कार्बनचे प्रमाण ६.३५% आहे, जसे की तक्ता २ मध्ये दाखवले आहे. वजन कमी करण्यासाठी चाचणी करण्यासाठी PMP च्या स्थिर टप्प्यावर थर्मोग्रॅव्हिमेट्रिक विश्लेषण (TGA) वापरले गेले आणि TGA वक्र आकृती ४ मध्ये दाखवले आहे. TGA वक्र ८.६% वजन कमी दर्शवितो, जे कार्बनच्या प्रमाणाशी (६.३५%) चांगले सुसंगत आहे, कारण लिगँडमध्ये केवळ Cच नाही तर N, O आणि H देखील असतात.
सिलिका कणांच्या पृष्ठभागावर बदल करण्यासाठी लिगँड फेनिलमलेइमाइड-मिथाइलव्हिनाइल आयसोसायनेट निवडण्यात आले कारण त्यात ध्रुवीय फेनिलमलेइमाइड आणि व्हायनिलिसोसायनेट गट असतात. व्हाइनिल आयसोसायनेट गट जिवंत रॅडिकल पॉलिमरायझेशनद्वारे स्टायरीनशी अधिक प्रतिक्रिया देऊ शकतात. दुसरे कारण म्हणजे असा गट समाविष्ट करणे ज्याचा विश्लेषकाशी मध्यम संवाद असतो आणि विश्लेषक आणि स्थिर टप्प्यात मजबूत इलेक्ट्रोस्टॅटिक परस्परसंवाद नसतो, कारण फेनिलमलेइमाइडच्या अंशात सामान्य pH वर कोणतेही आभासी शुल्क नसते. स्थिर टप्प्याची ध्रुवीयता स्टायरीनच्या इष्टतम प्रमाणात आणि मुक्त रॅडिकल पॉलिमरायझेशनच्या प्रतिक्रिया वेळेद्वारे नियंत्रित केली जाऊ शकते. प्रतिक्रियेचा अंतिम टप्पा (मुक्त रॅडिकल पॉलिमरायझेशन) महत्त्वाचा आहे कारण तो स्थिर टप्प्याची ध्रुवीयता बदलतो. या स्थिर टप्प्यांमध्ये कार्बन सामग्री तपासण्यासाठी मूलभूत विश्लेषण केले गेले. असे आढळून आले आहे की स्टायरीनचे प्रमाण आणि प्रतिक्रिया वेळ वाढल्याने स्थिर टप्प्यातील कार्बन सामग्री वाढते आणि उलट. स्टायरीनच्या वेगवेगळ्या सांद्रतेसह तयार केलेल्या SP मध्ये वेगवेगळे कार्बन भार असतात. त्याचप्रमाणे, हे स्थिर टप्पे स्टेनलेस स्टीलच्या स्तंभांवर ठेवण्यात आले आणि त्यांची क्रोमॅटोग्राफिक वैशिष्ट्ये (सिलेक्टिव्हिटी, रिझोल्यूशन, एन व्हॅल्यू इ.) तपासण्यात आली. या प्रयोगांवर आधारित, नियंत्रित ध्रुवीयता आणि विश्लेषकाची चांगली धारणा प्रदान करण्यासाठी पीएमपी स्थिर टप्पा तयार करण्यासाठी एक ऑप्टिमाइझ केलेली रचना निवडण्यात आली.
मोबाइल फेज क्षमतेचा वापर करून पेप्टाइड्सच्या पाच मिश्रणांचे (ग्लाय-टायर, ग्लाय-ल्यू-टायर, ग्लाय-ग्लाय-टायर-आर्ग, टायर-इल-ग्लाय-सेर-आर्ग, ल्युसीन-एंकेफॅलिन) विश्लेषण करण्यासाठी पीएमपी कॉलमचे मूल्यांकन देखील करण्यात आले. 60/40 (v/v) एसीएन/पाणी (0.1% टीएफए) 80 µl/मिनिट प्रवाह दराने. इष्टतम एल्युशन परिस्थितीत (200,000 प्लेट्स/मीटर), प्रति कॉलम (100 × 1.8 मिमी) सैद्धांतिक प्लेट्स (N) ची संख्या 20,000 ± 100 आहे. तीन पीएमपी कॉलमसाठी एन मूल्ये तक्ता 3 मध्ये दर्शविली आहेत आणि क्रोमॅटोग्राम आकृती 5A मध्ये दर्शविले आहेत. एका PMP स्तंभावर उच्च प्रवाह दराने (७०० µl/मिनिट) जलद विश्लेषण, एका मिनिटात पाच पेप्टाइड्स बाहेर काढले गेले, प्रति स्तंभ १३,५०० ± ३३० चे उत्कृष्ट N मूल्य (१०० x १.८ मिमी व्यास), जे १३५,००० प्लेट्स/ मीटरच्या समतुल्य आहे (आकृती ५B). पुनरुत्पादनक्षमता तपासण्यासाठी समान आकाराचे तीन स्तंभ (अंतर्गत व्यास १०० x १.८ मिमी) PMP स्थिर टप्प्याच्या तीन वेगवेगळ्या बॅचने भरले गेले. इष्टतम उत्सर्जन परिस्थिती, सैद्धांतिक प्लेट्स N ची संख्या आणि धारणा वेळ वापरून प्रत्येक स्तंभावर समान चाचणी मिश्रण वेगळे करून प्रत्येक स्तंभासाठी विश्लेषणे रेकॉर्ड केली गेली. PMP स्तंभांसाठी पुनरुत्पादनक्षमता डेटा तक्ता ४ मध्ये दर्शविला आहे. तक्ता ३ मध्ये दर्शविल्याप्रमाणे PMP स्तंभाची पुनरुत्पादनक्षमता खूप कमी %RSD मूल्यांशी चांगल्या प्रकारे सहसंबंधित आहे.
पीएमपी कॉलम (बी) आणि एसेंटिस एक्सप्रेस आरपी-अमाइड कॉलम (ए), मोबाईल फेज 60/40 एसीएन/एच2ओ (टीएफए 0.1%), पीएमपी कॉलम आयाम (100 x 1.8 मिमी आयडी), विश्लेषण संयुगांचा एल्युशन क्रम: 1 (ग्लाय-टायर), 2 (ग्लाय-ल्यू-टायर), 3 (ग्लाय-ग्लाय-टायर-आर्ग), 4 (टायर-इल-ग्लाय-सेर-आर्ग) आणि 5 (ल्युसिक अॅसिड एन्केफॅलिन).
HPLC द्वारे मानवी सीरम अल्ब्युमिनच्या ट्रिप्टिक हायड्रोलायझेटचे पृथक्करण करण्यासाठी PMP कॉलम (अंतर्गत व्यास 100 x 1.8 मिमी) चे मूल्यांकन केले गेले. आकृती 6 मधील क्रोमॅटोग्राम दर्शविते की नमुने खूप चांगल्या रिझोल्यूशनसह चांगले वेगळे केले आहेत. HSA सोल्यूशन्सचे विश्लेषण 100 μl/मिनिट प्रवाह दर, 70/30 एसीटोनिट्राइल/पाण्याचा मोबाइल टप्पा आणि 0.1% TFA वापरून केले गेले. क्रोमॅटोग्राम (आकृती 6) मध्ये दर्शविल्याप्रमाणे, HSA चे क्लीव्हेज 17 शिखरांमध्ये विभागले गेले होते, जे 17 पेप्टाइड्सशी संबंधित होते. HSA हायड्रोलायझेटपासून वैयक्तिक शिखरांच्या पृथक्करण कार्यक्षमतेची गणना केली गेली आणि मूल्ये तक्ता 5 मध्ये दर्शविली आहेत.
एचएसए ट्रिप्टिक हायड्रोलायसेट्स पीएमपी कॉलम (अंतर्गत व्यास १०० x १.८ मिमी), प्रवाह दर (१०० μl/मिनिट), मोबाइल फेज ६०/४० एसीटोनिट्राइल/पाणी आणि ०.१% टीएफए वर वेगळे केले गेले.
जिथे L ही स्तंभाची लांबी आहे, η ही गतिमान टप्प्याची चिकटपणा आहे, ΔP हा स्तंभाचा मागील दाब आहे आणि u हा गतिमान टप्प्याचा रेषीय वेग आहे. PMP स्तंभाची पारगम्यता 2.5 × 10–14 m2 होती, प्रवाह दर 25 µl/मिनिट होता, 60/40 v/v वापरण्यात आला. ACN/पाणी. PMP स्तंभाची पारगम्यता (ID 100 × 1.8 मिमी) आमच्या मागील संदर्भ 34 अभ्यासासारखीच होती. वरवरच्या सच्छिद्र कणांनी भरलेल्या स्तंभाची पारगम्यता 1.7×10 .6 µm आहे, 5 µm कणांसाठी 2.5×10-14 m2 आहे43. म्हणून, PMP टप्प्याची पारगम्यता 5 μm आकाराच्या कोर-शेल कणांच्या पारगम्यतेसारखीच आहे.
जिथे Wx हे क्लोरोफॉर्मने भरलेल्या स्तंभाचे वस्तुमान आहे, Wy हे मिथेनॉलने भरलेल्या स्तंभाचे वस्तुमान आहे आणि ρ हे द्रावकाची घनता आहे. मिथेनॉलची घनता (ρ = 0.7866) आणि क्लोरोफॉर्म (ρ = 1.484). सिलिका-C18 कण स्तंभाची एकूण सच्छिद्रता (100 × 1.8 मिमी ID)34 आणि आमच्या पूर्वी अभ्यासलेल्या C18-यूरिया31 स्तंभाची एकूण सच्छिद्रता अनुक्रमे 0.63 आणि 0.55 होती. याचा अर्थ असा की युरिया लिगँड्सची उपस्थिती स्थिर टप्प्याची पारगम्यता कमी करते. दुसरीकडे, PMP स्तंभाची एकूण सच्छिद्रता (अंतर्गत व्यास 100 × 1.8 मिमी) 0.60 आहे. PMP स्तंभ C18 बद्ध सिलिका कणांनी भरलेल्या स्तंभांपेक्षा कमी पारगम्य असतात कारण C18 प्रकारच्या स्थिर टप्प्यांमध्ये C18 लिगँड्स रेषीय साखळ्यांमध्ये सिलिका कणांशी जोडलेले असतात, तर पॉलिस्टीरिन प्रकारच्या स्थिर टप्प्यांमध्ये कणांभोवती तुलनेने जाड पॉलिमर तयार होतो. थर A. एका सामान्य प्रयोगात, स्तंभ सच्छिद्रता खालीलप्रमाणे मोजली जाते:
आकृती ७अ, ब मध्ये, व्हॅन डीएम्टर प्लॉट पीएमपी कॉलम (आयडी १०० x १.८ मिमी) आणि एसेंटिस एक्सप्रेस आरपी-अ‍ॅमाइड कॉलम (आयडी १०० x १.८ मिमी) साठी समान एल्युशन परिस्थितीत दाखवले आहेत, दोन्ही कॉलमवर ६०/४० एसीएन/एच२ओ आणि ०.१% टीएफए २० µl/मिनिट ते ८०० µl/मिनिट. इष्टतम प्रवाह दरावर (८० µl/मिनिट) किमान एचईटीपी मूल्ये पीएमपी कॉलम आणि एसेंटिस एक्सप्रेस आरपी-अ‍ॅमाइड कॉलमसाठी अनुक्रमे २.६ µm आणि ३.९ µm होती. एचईटीपी मूल्ये दर्शवितात की पीएमपी कॉलम (१०० x १.८ मिमी आयडी) ची पृथक्करण कार्यक्षमता व्यावसायिकरित्या उपलब्ध एसेंटिस एक्सप्रेस आरपी-अ‍ॅमाइड कॉलम (१०० x १.८ मिमी आयडी) पेक्षा खूपच जास्त आहे. आकृती 7(A) मधील व्हॅन डीएम्टर आलेख दर्शवितो की आमच्या मागील अभ्यासाच्या तुलनेत वाढत्या प्रवाहासह N मूल्यातील घट लक्षणीयरीत्या जास्त नाही. असेंटिस एक्सप्रेस RP-अमाइड स्तंभाच्या तुलनेत PMP स्तंभाची उच्च पृथक्करण कार्यक्षमता (आयडी 100 × 1.8 मिमी) सुधारित कण आकार आणि आकार आणि सध्याच्या कामात वापरल्या जाणाऱ्या अत्याधुनिक स्तंभ पॅकिंग प्रक्रियेवर आधारित आहे34.
(अ) ०.१% TFA सह ६०/४० ACN/H2O मध्ये PMP कॉलम (आयडी १०० x १.८ मिमी) वर मिळवलेला व्हॅन डीएमटर प्लॉट (HETP विरुद्ध मोबाइल फेज रेषीय वेग). (ब) ०.१% TFA सह ६०/४० ACN/H2O मध्ये Ascentis Express RP-Amide कॉलम (आयडी १०० x १.८ मिमी) वर मिळवलेला व्हॅन डीएमटर प्लॉट (HETP विरुद्ध मोबाइल फेज रेषीय वेग).
उच्च कार्यक्षमता असलेल्या द्रव क्रोमॅटोग्राफीमध्ये मानवी सीरम अल्ब्युमिन (HSA) च्या सिंथेटिक पेप्टाइड्स आणि ट्रिप्टिक हायड्रोलायझेटच्या मिश्रणाचे पृथक्करण करण्यासाठी इंटरकॅलेटेड पॉलिस्टीरिनचा ध्रुवीय स्थिर टप्पा तयार करण्यात आला आणि त्याचे मूल्यांकन करण्यात आले. पेप्टाइड मिश्रणासाठी PMP स्तंभांची क्रोमॅटोग्राफिक कामगिरी पृथक्करण कार्यक्षमता आणि रिझोल्यूशनच्या बाबतीत उत्कृष्ट आहे. PMP स्तंभांची सुधारित पृथक्करण कार्यक्षमता सिलिका कण आकार आणि छिद्र आकार, स्थिर टप्प्यांचे नियंत्रित संश्लेषण आणि जटिल स्तंभ पॅकिंग सामग्री यासारख्या अनेक कारणांमुळे आहे. उच्च पृथक्करण कार्यक्षमतेव्यतिरिक्त, या स्थिर टप्प्याचा आणखी एक फायदा म्हणजे उच्च प्रवाह दरांवर कमी स्तंभ बॅक प्रेशर. PMP स्तंभ अत्यंत पुनरुत्पादनक्षम आहेत आणि पेप्टाइड्सच्या मिश्रणांचे विश्लेषण आणि विविध प्रथिनांचे ट्रिप्टिक पचन करण्यासाठी वापरले जाऊ शकतात. द्रव क्रोमॅटोग्राफीमध्ये नैसर्गिक उत्पादनांपासून जैविक सक्रिय संयुगे, औषधी वनस्पतींचे अर्क आणि मशरूम वेगळे करण्यासाठी आम्ही या स्तंभाचा वापर करण्याचा मानस करतो. भविष्यात, प्रथिने आणि मोनोक्लोनल अँटीबॉडीज वेगळे करण्यासाठी PMP स्तंभांचे देखील मूल्यांकन केले जाईल.
फील्ड, जेके, युअरबी, एमआर, लाऊ, जे., थोगरसन, एच. आणि पीटरसन, पी. रिव्हर्स्ड फेज क्रोमॅटोग्राफी पेप्टाइड सेपरेशन सिस्टम्सची चौकशी भाग I: कॉलम कॅरेक्टरायझेशनसाठी प्रोटोकॉलचा विकास. फील्ड, जेके, युअरबी, एमआर, लाऊ, जे., थोगरसन, एच. आणि पीटरसन, पी. रिव्हर्स्ड फेज क्रोमॅटोग्राफी पेप्टाइड सेपरेशन सिस्टम्सची तपासणी भाग I: कॉलम कॅरेक्टरायझेशनसाठी प्रोटोकॉलचा विकास.फील्ड, जेके, ओवरबी, एमआर, लाऊ, जे., टोगरसन, एच., आणि पीटरसन, पी. रिव्हर्स-फेज क्रोमॅटोग्राफीद्वारे पेप्टाइड सेपरेशन सिस्टम्सची तपासणी, भाग I: कॉलम कॅरेक्टरायझेशनसाठी प्रोटोकॉल विकसित करणे. फील्ड, जेके, युअरबी, एमआर, लाऊ, जे., थोगरसन, एच. आणि पीटरसन, पी. रिव्हर्स्ड फेज क्रोमॅटोग्राफी पेप्टाइड सेपरेशन सिस्टम्सचा तपास भाग I: कॉलम वैशिष्ट्यांसाठी प्रोटोकॉलचा विकास. फील्ड, जेके, युअरबी, एमआर, लाऊ, जे., थोगरसन, एच. आणि पीटरसन, पी. रिव्हर्स्ड फेज क्रोमॅटोग्राफी पेप्टाइड सेपरेशन सिस्टम्सचा तपास भाग I: कॉलम वैशिष्ट्यांसाठी प्रोटोकॉलचा विकास.फील्ड, जेके, ओवरबी, एमआर, लाऊ, जे., टोगरसन, एच., आणि पीटरसन, पी. रिव्हर्स-फेज क्रोमॅटोग्राफीद्वारे पेप्टाइड सेपरेशन सिस्टम्सची तपासणी, भाग I: कॉलम कॅरेक्टरायझेशनसाठी प्रोटोकॉल विकसित करणे.J.色谱法. 1603,113-129. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019).
गोमेझ, बी. आणि इतर. संसर्गजन्य रोगांच्या उपचारांसाठी सुधारित सक्रिय पेप्टाइड्स तयार करण्याच्या पद्धती. जैवतंत्रज्ञान. उपलब्धी 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
व्लीघे, पी., लिसोव्स्की, व्ही., मार्टिनेझ, जे. आणि ख्रेस्टचाटिस्की, एम. सिंथेटिक थेरपीटिक पेप्टाइड्स: विज्ञान आणि बाजार. व्लीघे, पी., लिसोव्स्की, व्ही., मार्टिनेझ, जे. आणि ख्रेस्टचाटिस्की, एम. सिंथेटिक थेरपीटिक पेप्टाइड्स: विज्ञान आणि बाजार.व्हिलीज पी, लिसोव्स्की व्ही, मार्टिनेझ जे आणि क्रेस्चॅटिस्की एम. सिंथेटिक थेरपीटिक पेप्टाइड्स: विज्ञान आणि बाजार.व्हिलीज पी, लिसोव्स्की व्ही, मार्टिनेझ जे आणि ख्रेस्चॅटस्की एम. सिंथेटिक थेरपीटिक पेप्टाइड्स: विज्ञान आणि बाजार. औषध शोध. आज १५ (१-२), ४०-५६. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (२०१०).
झी, एफ., स्मिथ, आरडी आणि शेन, वाय. प्रगत प्रोटिओमिक लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी. झी, एफ., स्मिथ, आरडी आणि शेन, वाय. प्रगत प्रोटिओमिक लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी.एफ., स्मिथ आरडी आणि शेन यू पहा. प्रगत प्रोटिओमिक लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. प्रगत प्रोटीन रचना 液相色谱.एफ., स्मिथ आरडी आणि शेन यू पहा. प्रगत प्रोटिओमिक लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी.जे. क्रोमॅटोग्राफी. ए १२६१, ७८–९० (२०१२).
लिऊ, डब्ल्यू. आणि इतर. प्रगत द्रव क्रोमॅटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्री ब्रॉड-बेस्ड मेटाबोलॉमिक्स आणि प्रोटीओमिक्स एकत्र करण्यास सक्षम आहे. गुदा. चिम. अॅक्टा १०६९, ८९–९७ (२०१९).
चेसनट, एसएम आणि सॅलिसबरी, जेजे. औषध विकासात यूएचपीएलसीची भूमिका. चेसनट, एसएम आणि सॅलिसबरी, जेजे. औषध विकासात यूएचपीएलसीची भूमिका.चेसनट, एसएम आणि सॅलिसबरी, जेजे औषध विकासात यूएचपीएलसीची भूमिका.चेसनट, एसएम आणि सॅलिसबरी, जेजे. औषध विकासात यूएचपीएलसीची भूमिका. जे. सेप्ट सायन्स. 30(8), 1183–1190 (2007).
वू, एन. आणि क्लॉसेन, एएम जलद पृथक्करणासाठी अतिउच्च दाब द्रव क्रोमॅटोग्राफीचे मूलभूत आणि व्यावहारिक पैलू. वू, एन. आणि क्लॉसेन, एएम जलद पृथक्करणासाठी अतिउच्च दाब द्रव क्रोमॅटोग्राफीचे मूलभूत आणि व्यावहारिक पैलू.वू, एन. आणि क्लॉसेन, एएम जलद पृथक्करणासाठी उच्च दाब द्रव क्रोमॅटोग्राफीचे मूलभूत आणि व्यावहारिक पैलू. Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面. वू, एन. आणि क्लॉसेन, एएम जलद पृथक्करणासाठी अल्ट्रा-हाय प्रेशर लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीचे मूलभूत आणि व्यावहारिक पैलू.वू, एन. आणि क्लॉसेन, एएम जलद पृथक्करणासाठी उच्च दाब द्रव क्रोमॅटोग्राफीचे मूलभूत आणि व्यावहारिक पैलू.जे. सप्टेंबर सायन्स. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
व्रेन, एसए आणि चेलिचेफ, पी. औषधनिर्माण विकासात अल्ट्रा-परफॉर्मन्स लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीचा वापर. व्रेन, एसए आणि चेलिचेफ, पी. औषधनिर्माण विकासात अल्ट्रा-परफॉर्मन्स लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीचा वापर.रेन, एसए आणि चेलिशेफ, पी. औषधनिर्माण विकासात अल्ट्रा हाय परफॉर्मन्स लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीचा वापर. Wren, SA आणि Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用. रेन, एसए आणि चेलिचेफ, पी.रेन, एसए आणि चेलिशेफ, पी. औषध विकासात अल्ट्रा-परफॉर्मन्स लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीचा वापर.जे. क्रोमॅटोग्राफी. १११९(१-२), १४०-१४६. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (२००६).
गु, एच. आणि इतर. एंटरोव्हायरसच्या कार्यक्षम शुद्धीकरणासाठी उच्च अंतर्गत टप्प्यासह तेल-इन-वॉटर इमल्शनपासून मिळवलेले एक मोनोलिथिक मॅक्रोपोरस हायड्रोजेल 71. केमिकल. प्रकल्प. जर्नल 401, 126051 (2020).
शी, वाय., झियांग, आर., हॉर्वाथ, सी. आणि विल्किन्स, जेए प्रोटीओमिक्समध्ये द्रव क्रोमॅटोग्राफीची भूमिका. शी, वाय., झियांग, आर., हॉर्वाथ, सी. आणि विल्किन्स, जेए प्रोटीओमिक्समध्ये द्रव क्रोमॅटोग्राफीची भूमिका.शी, वाय., झियांग, आर., हॉर्वाथ, सी. आणि विल्किन्स, जेए प्रोटिओमिक्समध्ये द्रव क्रोमॅटोग्राफीची भूमिका. शि, वाई., झियांग, आर., हॉर्व्हथ, सी. आणि विल्किन्स, जेए 液相色谱在蛋白质组学中的作用. शि, वाय., झियांग, आर., होर्व्हाथ, सी. आणि विल्किन्स, जेएशी, वाय., झियांग, आर., हॉर्वाथ, सी. आणि विल्किन्स, जेए प्रोटिओमिक्समध्ये द्रव क्रोमॅटोग्राफीची भूमिका.जे. क्रोमॅटोग्राफी. ए १०५३ (१-२), २७-३६ (२००४).
फेकेटे, एस., वुटे, जे.-एल. आणि गिलार्मे, डी. उपचारात्मक पेप्टाइड्स आणि प्रथिनांच्या रिव्हर्स्ड-फेज लिक्विड क्रोमॅटोग्राफिक पृथक्करणातील नवीन ट्रेंड: सिद्धांत आणि अनुप्रयोग. आणि गिलार्मे, डी. उपचारात्मक पेप्टाइड्स आणि प्रथिनांच्या रिव्हर्स्ड-फेज लिक्विड क्रोमॅटोग्राफिक पृथक्करणातील नवीन ट्रेंड: सिद्धांत आणि अनुप्रयोग. & Guillarme, D. Новые тенденции в разделении терапевтических пептидов и белков с помощью жидкостной хроматограбрафи соматографи: теория आणि приложения. आणि गिलार्मे, डी. रिव्हर्स फेज लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीद्वारे उपचारात्मक पेप्टाइड्स आणि प्रथिनांच्या पृथक्करणातील नवीन ट्रेंड: सिद्धांत आणि अनुप्रयोग. & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用. आणि गिलार्मे, डी.आणि गिलार्मे, डी. रिव्हर्स फेज लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीद्वारे उपचारात्मक पेप्टाइड्स आणि प्रथिनांच्या पृथक्करणातील नवीन ट्रेंड: सिद्धांत आणि अनुप्रयोग.जे. फार्म. बायोमेडिकल सायन्स. गुदा. ६९, ९–२७ (२०१२).
गिलार, एम., ऑलिव्होवा, पी., डेली, एई आणि गेबलर, जेसी. पहिल्या आणि दुसऱ्या पृथक्करण परिमाणांमध्ये वेगवेगळ्या पीएचसह आरपी-आरपी-एचपीएलसी प्रणाली वापरून पेप्टाइड्सचे द्विमितीय पृथक्करण. गिलार, एम., ऑलिव्होवा, पी., डेली, एई आणि गेबलर, जेसी. पहिल्या आणि दुसऱ्या पृथक्करण परिमाणांमध्ये वेगवेगळ्या पीएचसह आरपी-आरपी-एचपीएलसी प्रणाली वापरून पेप्टाइड्सचे द्विमितीय पृथक्करण.गिलार एम., ऑलिव्होवा पी., डाली एई आणि गेबलर जेके पहिल्या आणि दुसऱ्या पृथक्करण परिमाणांमध्ये वेगवेगळ्या पीएचसह आरपी-आरपी-एचपीएलसी प्रणाली वापरून पेप्टाइड्सचे द्विमितीय पृथक्करण.गिलार एम., ऑलिव्होवा पी., डाली एई आणि गेबलर जेके आरपी-आरपी-एचपीएलसी प्रणाली वापरून पहिल्या आणि दुसऱ्या पृथक्करण परिमाणांमध्ये वेगवेगळ्या पीएच मूल्यांचा वापर करून पेप्टाइड्सचे द्विमितीय पृथक्करण. जे. सप्टेंबर सायन्स. २८ (१४), १६९४–१७०३ (२००५).
फेलिट्टी, एस. आणि इतर. २ µm पेक्षा लहान पूर्णपणे सच्छिद्र आणि वरवरच्या सच्छिद्र C18 कणांनी भरलेल्या उच्च-कार्यक्षमता असलेल्या क्रोमॅटोग्राफी स्तंभांच्या वस्तुमान हस्तांतरण आणि गतिज वैशिष्ट्यांचा तपास. जे. सप्टेंबर सायन्स. ४३ (९-१०), १७३७-१७४५ (२०२०).
पिओवेसाना, एस. इत्यादी. वनस्पती जैवक्रिय पेप्टाइड्सचे पृथक्करण, ओळख आणि प्रमाणीकरणातील अलीकडील ट्रेंड आणि विश्लेषणात्मक आव्हाने. गुद्द्वार. प्राणी गुदाशय. रासायनिक. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
मुलर, जेबी आणि इतर. जीवनाच्या साम्राज्याचे प्रोटिओमिक लँडस्केप. निसर्ग 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
डी लुका, के. आणि इतर. प्रीपरेटिव्ह लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीद्वारे उपचारात्मक पेप्टाइड्सचे पोस्ट-ट्रीटमेंट. रेणू (बेसेल, स्वित्झर्लंड) 26(15), 4688 (2021).
यांग, वाय. आणि गेंग, एक्स. मिश्र-मोड क्रोमॅटोग्राफी आणि बायोपॉलिमरमध्ये त्याचे उपयोग. यांग, वाय. आणि गेंग, एक्स. मिश्र-मोड क्रोमॅटोग्राफी आणि बायोपॉलिमरमध्ये त्याचे उपयोग.यांग, यू. आणि गेंग, एक्स. मिक्स्ड मोड क्रोमॅटोग्राफी आणि बायोपॉलिमरमध्ये त्याचा वापर. यांग, वाय. आणि गेंग, एक्स. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用. यांग, वाय. आणि गेंग, एक्स. मिक्स्ड मोड क्रोमॅटोग्राफी आणि बायोपॉलिमरमध्ये त्याचा वापर.यांग, यू. आणि जीन, एक्स. मिक्स्ड मोड क्रोमॅटोग्राफी आणि बायोपॉलिमरमध्ये त्याचा वापर.जे. क्रोमॅटोग्राफी. ए १२१८(४९), ८८१३–८८२५ (२०११).