Nature.com ला भेट दिल्याबद्दल धन्यवाद.तुम्ही वापरत असलेल्या ब्राउझर आवृत्तीमध्ये मर्यादित CSS सपोर्ट आहे.सर्वोत्तम अनुभवासाठी, आम्ही शिफारस करतो की तुम्ही अद्ययावत ब्राउझर वापरा (किंवा इंटरनेट एक्सप्लोररमध्ये सुसंगतता मोड अक्षम करा).दरम्यान, सतत समर्थन सुनिश्चित करण्यासाठी, आम्ही साइटला शैली आणि JavaScript शिवाय रेंडर करू.
अँगुस्टिफोलियस ल्युपिन (NLL, Lupinus angustifolius L.) ही शेंगयुक्त वनस्पती आहे जी अन्न उत्पादन आणि माती सुधारण्यासाठी वापरली जाते.पीक म्हणून NLL च्या जागतिक विस्तारामुळे ल्युपिन ऍन्थ्रॅकनोजसह अनेक रोगजनक बुरशी आकर्षित होतात, ज्यामुळे विनाशकारी ऍन्थ्रॅकनोज रोग होतो.दोन अॅलेल्स, Lanr1 आणि AnMan, जे वाढीव प्रतिकार देतात, NLL प्रजननामध्ये वापरले गेले आहेत, परंतु अंतर्निहित आण्विक यंत्रणा अज्ञात आहेत.या अभ्यासात, युरोपियन NLL नमुने तपासण्यासाठी Lanr1 आणि AnMan मार्कर वापरले गेले.नियंत्रित वातावरणात लसीच्या चाचणीने दोन्ही प्रतिरोधक दात्यांच्या कार्यक्षमतेची पुष्टी केली.विभेदक जनुक अभिव्यक्ती प्रोफाइलिंग प्रतिनिधी प्रतिरोधक आणि संवेदनाक्षम रेषांवर केले गेले.अँथ्रॅकनोज रेझिस्टन्स हे जीन ऑन्टोलॉजी संज्ञांच्या ओव्हरएक्सप्रेशनशी संबंधित होते “GO:0006952 डिफेन्स रिस्पॉन्स”, “GO:0055114 रेडॉक्स प्रक्रिया”, आणि “GO:0015979 प्रकाशसंश्लेषण”.याव्यतिरिक्त, Lanr1(83A:476) रेषेने लसीकरणानंतर लक्षणीय ट्रान्सक्रिप्टम रीप्रोग्रामिंग दर्शवले, तर इतर ओळींनी या प्रतिसादात सुमारे 42 तासांचा विलंब दर्शविला.TIR-NBS, CC-NBS-LRR आणि NBS-LRR जीन्स, पॅथोजेनेसिसमध्ये गुंतलेली 10 प्रथिने, लिपिड ट्रान्सफर प्रथिने, एंडोग्लुकन-1,3-β-ग्लुकोसिडेस, ग्लाइसिन-समृद्ध सेल वॉल प्रथिने आणि ऑक्सिजनच्या प्रतिक्रियाशील मार्गातील जनुकांशी संरक्षण प्रतिसाद संबंधित आहेत.83A:476 ला प्रारंभिक प्रतिसाद, प्रकाशसंश्लेषणाशी संबंधित जनुकांच्या काळजीपूर्वक दडपशाहीसह, बुरशीजन्य जीवशास्त्राच्या वनस्पतिवत् होणार्‍या वाढीच्या अवस्थेदरम्यान यशस्वी संरक्षणाशी एकरूप होते, जे सूचित करते की प्रभावक रोग प्रतिकारशक्तीला चालना देतो.एकंदर क्षैतिज ड्रॅगप्रमाणे मँडेलूप प्रतिक्रिया मंदावली आहे.
अरुंद पाने असलेले ल्युपिन (NLL, Lupinus angustifolius L.) हे पश्चिम भूमध्य प्रदेश 1,2 मध्ये उद्भवणारे उच्च प्रथिने अन्नधान्य आहे.हे सध्या प्राणी आणि मानवांसाठी अन्न पीक म्हणून घेतले जाते.सिम्बायोटिक नायट्रोजन फिक्सिंग बॅक्टेरियाद्वारे नायट्रोजन निश्चित केल्यामुळे आणि मातीच्या संरचनेत एकंदर सुधारणा झाल्यामुळे पीक रोटेशन सिस्टममध्ये हे हिरवे खत देखील मानले जाते.NLL ने गेल्या शतकात जलद गतीने पाळीव प्रक्रिया पार पाडली आहे आणि अजूनही 3,4,5,6,7,8,9,10,11,12 उच्च प्रजनन दबावाखाली आहे.एनएलएलच्या व्यापक लागवडीमुळे, रोगजनक बुरशीच्या लागोपाठ नवीन कृषी कोनाडे विकसित झाले आणि नवीन पीक नष्ट करणारे रोग निर्माण झाले. ल्युपिन शेतकरी आणि प्रजनन करणार्‍यांसाठी सर्वात उल्लेखनीय म्हणजे अँथ्रॅकनोज दिसणे, हे रोगजनक बुरशी, कोलेटोट्रिचम ल्युपिनी (बोंडार) निरेनबर्ग, फीलर आणि हॅगेडॉर्न 13 मुळे होते. ल्युपिन शेतकरी आणि प्रजनन करणार्‍यांसाठी सर्वात उल्लेखनीय म्हणजे अँथ्रॅकनोज दिसणे, हे रोगजनक बुरशी, कोलेटोट्रिचम ल्युपिनी (बोंडार) निरेनबर्ग, फीलर आणि हॅगेडॉर्न 13 मुळे होते. Наиболее примечательным для фермеров и селекционеров люпина было появление антракноза, вызванного примечательным для фермеров и селекционеров Hagedorn13. ल्युपिन शेतकरी आणि प्रजनन करणार्‍यांसाठी सर्वात लक्षणीय म्हणजे कोलेटोट्रिचम ल्युपिनी (बोंडार) निरेनबर्ग, फीलर आणि हेगेडॉर्न 13 या रोगजनक बुरशीमुळे होणारा अँथ्रॅकनोजचा उदय होता.对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原农民和饲养者来说orn13 引起的.- Наиболее поразительным для фермеров и селекционеров люпина является появление антракноза, вызываемого патоибренгон патоибренкомого поразительным , Feiler आणि Hagedorn13. ल्युपिन शेतकरी आणि प्रजनन करणार्‍यांना सर्वात धक्कादायक बाब म्हणजे कोलेटोट्रिचम ल्युपिनी (बोंडार) निरेनबर्ग, फीलर आणि हेगेडॉर्न13 या रोगजनक बुरशीमुळे होणारे अँथ्रॅकनोज.ब्राझील आणि युनायटेड स्टेट्समधून या रोगाचे सर्वात जुने अहवाल आले होते, त्यांची विशिष्ट लक्षणे अनुक्रमे 1912 आणि 1929 मध्ये दिसून आली होती.तथापि, सुमारे 30 वर्षांनंतर, रोगकारक कोलेटोट्रिचम ग्लोओस्पोरिओइड्स (पेन्झ.) पेन्झ म्हणून नियुक्त केले गेले. & Sacc., टेलिमॉर्फ ग्लोमेरेला सिंगुलाटा (स्टोनमॅन) स्पॉल्ड. & Sacc., टेलिमॉर्फ ग्लोमेरेला सिंगुलाटा (स्टोनमॅन) स्पॉल्ड. & Sacc., телеоморф Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. आणि सॅक., ग्लोमेरेला सिंगुलाटा (स्टोनमॅन) स्पॉल्डचे टेलिमॉर्फ. & Sacc.,有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc.,有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld в Целенаправленной морфологии. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld in Targeted Morphology. आणि एच. श्रेंक,. आणि एच. श्रेंक, .आणि एच. श्रेंक. आणि एच. 施伦克,. आणि एच. 施伦克,.आणि एच. श्लेंक, .20 व्या शतकाच्या मध्यात केलेल्या प्राथमिक रोग फेनोटाइपिंगमध्ये NLL आणि पिवळ्या ल्युपिन (L. luteus L.) ऍक्सेसन्समध्ये काही प्रतिकार दिसून आला, परंतु चाचणी केलेले सर्व पांढरे ल्युपिन (L. albus L.) ऍक्सेसन्स अत्यंत संवेदनाक्षम होते15,16.अभ्यासातून असे दिसून आले आहे की अॅन्थ्रॅकनोजचा विकास वाढत्या पर्जन्यमान (हवेतील आर्द्रता) आणि तापमान (१२-२८ डिग्री सेल्सिअसच्या श्रेणीत) यांच्याशी निगडीत आहे, ज्यामुळे उच्च तापमानात प्रतिकारशक्तीचे उल्लंघन होते १७, १८. खरं तर, कोनिडिया अंकुर वाढण्यास आणि रोग सुरू होण्यासाठी लागणारा वेळ, 4 पट कमी होता (1 ° से 4 ° से 4 तास कमी) परिस्थिती19.अशा प्रकारे, सध्या चालू असलेल्या जागतिक तापमानवाढीमुळे अँथ्रॅकनोजचा प्रसार झाला आहे.तथापि, हा रोग फ्रान्स (1982) आणि युक्रेन (1983) मध्ये येऊ घातलेल्या धोक्याचा आश्रयदाता म्हणून आढळून आला, परंतु 20,21 च्या वेळी ल्युपिन उद्योगाने त्याकडे दुर्लक्ष केले.काही वर्षांनंतर, हा विनाशकारी रोग जगभर पसरला आणि ऑस्ट्रेलिया, पोलंड आणि जर्मनी 22,23,24 सारख्या प्रमुख ल्युपिन उत्पादक देशांना देखील प्रभावित केले.1990 च्या दशकाच्या मध्यात ऍन्थ्रॅकनोजचा प्रादुर्भाव झाल्यानंतर, विस्तृत तपासणीमुळे NLL19 नमुन्यांमधील अनेक प्रतिरोधक दात्यांची ओळख पटली.ऍन्थ्रॅकनोजचा एनएलएल प्रतिकार वेगवेगळ्या जर्मप्लाझम स्त्रोतांमध्ये आढळणाऱ्या दोन वेगळ्या प्रबळ अ‍ॅलेल्सद्वारे नियंत्रित केला जातो: तंजील आणि वोंगा आणि कल्टिव्हरमधील अनमन.मंडाले 25, 26. प्रजनन कार्यक्रमात प्रतिरोधक जर्मप्लाझमच्या निवडीस समर्थन देणारे आण्विक चिन्हकांना पूरक आहेत 25,26,27,28,29,30.अँथ्रॅकनोज प्रतिरोधासाठी आरआयएल लोकसंख्येचे विलगीकरण करण्यासाठी लॅनर1 अ‍ॅलील वाहून नेणारी प्रतिरोधक प्रजनन रेषा 83A:476 ही संवेदनाक्षम वन्य रेषा P27255 बरोबर ओलांडली गेली, ज्यामुळे क्रोमोसोम NLL-1131, 32. 32.32.32 मॅपिंग मॅप वरून Lanr1 लोकस क्रोमोसोम NLL-1131 ला देणे शक्य झाले. जीनोमिक फ्रेमवर्कसह ऍन्थ्रॅकनोज करण्यासाठी, NLL ने एकाच गुणसूत्रावर (NLL-11) तीनही एलिल्सचे स्थान प्रकट केले, परंतु वेगवेगळ्या स्थितीत 29,34,35.तथापि, आरआयएलची कमी संख्या आणि मार्कर आणि संबंधित एलीलमधील मोठे अनुवांशिक अंतर यामुळे, त्यांच्या अंतर्निहित जनुकांबद्दल कोणतेही विश्वसनीय निष्कर्ष काढता येत नाहीत.दुसरीकडे, ल्युपिनमध्ये रिव्हर्स जेनेटिक्सचा वापर त्यांच्या अत्यंत कमी पुनरुत्पादन क्षमतेमुळे कठीण आहे, ज्यामुळे अनुवांशिक हाताळणी कठीण होते37.
83A:476 (Lanr1) आणि Mandelup (AnMan) सारख्या एकसंध अवस्थेमध्ये इच्छित अ‍ॅलील वाहून नेणाऱ्या पाळीव जर्मप्लाझमच्या विकासामुळे वन्य लोकसंख्येमध्ये अ‍ॅलेल्सच्या विरोधी संयोगांच्या उपस्थितीत अँथ्रॅकनोज प्रतिकाराचा अभ्यास करण्याचे दरवाजे खुले झाले आहेत.आण्विक यंत्रणेची शक्यता.विशिष्ट जीनोटाइपद्वारे व्युत्पन्न केलेल्या संरक्षण प्रतिसादांची तुलना करा.या अभ्यासाने NLL ते C. लुपिनी लसीकरणाच्या सुरुवातीच्या ट्रान्सक्रिप्टोम प्रतिसादाचे मूल्यांकन केले.प्रथम, 215 ओळी असलेल्या युरोपियन NLL जर्मप्लाझम पॅनेलची तपासणी आण्विक मार्कर वापरून केली गेली जी Lanr1 आणि AnMan alleles चिन्हांकित करतात.अँथ्रॅकनोज फेनोटाइपिंग नंतर 50 NLL लाईन्सवर केले गेले, जे आधी आण्विक मार्करसाठी निवडले गेले होते, नियंत्रित परिस्थितीत.या प्रयोगांच्या आधारे, दोन पूरक पध्दतींचा वापर करून विभेदक संरक्षण जनुक अभिव्यक्ती प्रोफाइलिंगसाठी अँथ्रॅकनोज प्रतिरोध आणि Lanr1/AnMan ऍलेलिक रचना मध्ये भिन्न असलेल्या चार ओळी निवडल्या गेल्या: उच्च-थ्रूपुट RNA अनुक्रम आणि रिअल-टाइम पीसीआर प्रमाणीकरण.
Lanr1 (Anseq3 आणि Anseq4) आणि AnMan (Anseq4) आणि AnMan (AnManM1) मार्कर असलेल्या NLL जर्मप्लाझम (N = 215) च्या संचाच्या स्क्रीनिंगमध्ये असे दिसून आले की फक्त एक ओळ (95726, Salamanca-b जवळ) सर्व "प्रतिरोधक" मार्कर आढळले, तर सर्व "प्रतिरोधक" मार्करचे प्रमाण वाढवते. 158 (~73.5%) ओळींमधील सर्व मार्करचे प्रमाण.तेरा रेषांनी Lanr1 मार्करचे दोन "प्रतिरोधक" alleles तयार केले आणि 8 रेषांनी Lanr1 चे "प्रतिरोधक" alleles तयार केले.मार्करAnMan मार्करचे "प्रतिरोध" एलील (पूरक सारणी S1).Anseq3 मार्करसाठी दोन रेषा विषमयुग्म आणि AnManM1 मार्करसाठी एक विषमयुग्म होती.42 रेषा (19.5%) Anseq3 आणि Anseq4 alleles च्या विरुद्ध टप्पे वाहून नेतात, जे या दोन स्थानांमधील पुनर्संयोजनाची उच्च वारंवारता दर्शवतात.नियंत्रित परिस्थितीत अँथ्रॅकनोज फिनोटाइप (पूरक सारणी S2) ने चाचणी केलेल्या जीनोटाइपच्या प्रतिकारामध्ये परिवर्तनशीलता प्रकट केली, जी अँथ्रॅकनोजच्या तीव्रतेमध्ये दिसून आली.सरासरी स्कोअरमधील फरक 1.8 (मध्यम प्रतिरोधक) ते 6.9 (संवेदनशील) आणि वनस्पती वजनातील फरक 0.62 (संवेदनशील) ते 4.45 ग्रॅम (प्रतिरोधक) पर्यंत आहे. प्रयोगाच्या दोन प्रतिकृतींमध्ये आढळलेल्या मूल्यांमध्ये (रोगाच्या तीव्रतेच्या स्कोअरसाठी 0.51, P = 0.00017 आणि 0.61 वनस्पती वजनासाठी, P < 0.0001) तसेच या दोन पॅरामीटर्स (− 0.59 आणि − 0.77, P < 0.000) दरम्यान महत्त्वपूर्ण सहसंबंध होता. प्रयोगाच्या दोन प्रतिकृतींमध्ये (रोगाच्या तीव्रतेच्या स्कोअरसाठी 0.51, वनस्पती वजनासाठी P = 0.00017 आणि 0.61, P < 0.0001) तसेच या दोन पॅरामीटर्समध्ये (− 0.59 आणि − 0.77, P <10) मूल्यांमध्ये महत्त्वपूर्ण सहसंबंध होता. Выявлена ​​достоверная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях эксперимента (0,51 для балоя, баловями, 0,51 и 0,61 для массы растения, P < 0,0001), а также между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,77, Р < 0,00001) 0,0001). प्रयोगाच्या दोन पुनरावृत्तींमध्ये (रोगाच्या तीव्रतेच्या स्कोअरसाठी 0.51, वनस्पती वजनासाठी P = 0.00017 आणि 0.61, P < 0.0001), तसेच या दोन मापदंडांमध्ये (- 0.59 आणि -0.77, P < 0. 0. 0. 0. 0. 0.) महत्त्वपूर्ण सहसंबंध आढळून आला.在两次重复实验中观察到的值之间存在显着相关性（疾病严重程度评分为程度评分为0.0.51,0.51 0.61，P <0.0001）以及这两个参数之间（- 0.59 和- 0.77，P <0.0001).在 两 次 重复 实验 中 观察 的 值 之间 存在 相关性 （疾病 严重 程度 严重 程度 评 分丆 5 0.00017 ， 植物 为 0.61 ， p < 0.0001） 以及 两 个 参数 之间 （（（（- 0.59 和 0.59 和–59和–和- ०.७७, पी < ०.००१). Наблюдалась значительная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях (оценка тяжести заболева, P01010101010) растения 0,61, P <0,0001), и между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,0001) 0,77, पी <0,0001. डुप्लिकेटमध्ये (रोग तीव्रता स्कोअर 0.51, P = 0.00017 आणि वनस्पती वजन 0.61, P < 0.0001) आणि या दोन पॅरामीटर्समध्ये (-0.59 आणि -0 .0001) 0.707, P< ).संवेदनाक्षम वनस्पतींमध्ये दिसणार्‍या वैशिष्ट्यपूर्ण लक्षणांमध्ये "मेंढपाळाच्या धनुष्य" रचनेसारखे स्टेमचे किंकिंग आणि वळणे, त्यानंतर नारिंगी/गुलाबी स्पोरोझोइट्ससह अंडाकृती जखम (पूरक चित्र 1) यांचा समावेश होतो.Lanr1 (83A:476 आणि Tanjil) आणि AnMan (Mandelup) जनुक वाहून नेणारी ऑस्ट्रेलियन ऍक्सेसन्स माफक प्रमाणात प्रतिरोधक आहेत, 0.0331 आणि 0.0036)."प्रतिरोधक" Lanr1 आणि/किंवा AnMan alleles असलेल्या काही रेषा रोगाची लक्षणे दर्शवतात.
विशेष म्हणजे, "प्रतिरोधक" मार्कर अ‍ॅलील नसलेल्या काही NLL ओळींनी उच्च पातळीचा अँथ्रॅकनोज प्रतिरोधक (लॅनर1 किंवा AnMan जीनोटाइपसाठी तुलना करता येण्याजोगा किंवा त्यापेक्षा जास्त) प्रकट केला, जसे की बोरेगिन (दोन्ही पॅरामीटर्ससाठी पी मूल्य < 0.0001), बोजर (पी मूल्य < 0.0001 आणि बी 09/5/4 रोपांसाठी 0.0001 वजन) (स्कोअरसाठी P मूल्य <0.0001 आणि वजनासाठी गैर-महत्त्वपूर्ण). विशेष म्हणजे, "प्रतिरोधक" मार्कर अ‍ॅलील नसलेल्या काही NLL ओळींनी उच्च पातळीचा अँथ्रॅकनोज प्रतिरोधक (लॅनर1 किंवा AnMan जीनोटाइपसाठी तुलना करता येण्याजोगा किंवा त्यापेक्षा जास्त) प्रकट केला, जसे की बोरेगिन (दोन्ही पॅरामीटर्ससाठी पी मूल्य < 0.0001), बोजर (पी मूल्य < 0.0001 आणि बी 09/5/4 रोपांसाठी 0.0001 वजन) (स्कोअरसाठी P मूल्य <0.0001 आणि वजनासाठी गैर-महत्त्वपूर्ण). Интересно, что несколько линий NLL, лишенных какого-либо «резистентного» маркерного аллеля, показали высокий уровень уровень уастерный какого-либо вимый или более высокий, чем для генотипов Lanr1 или AnMan), таких как बोरेगीन (значение P <0,0001 для обоих параметров), बोरेगिन (P00001) и 0,001 для массы растения) и популяции B-549/79b (значение P <0,0001 для оценки и незначимо для массы). विशेष म्हणजे, कोणत्याही 'प्रतिरोधक' मार्कर अ‍ॅलील नसलेल्या अनेक NLL ओळींनी अँथ्रॅकनोज (Lanr1 किंवा AnMan जीनोटाइपशी तुलना करता किंवा त्यापेक्षा जास्त) उच्च पातळीचा प्रतिकार दर्शविला, जसे की बोरेजिन (दोन्ही पॅरामीटर्ससाठी P मूल्य < 0.0001), बोजर (पी मूल्य < 0.0001) आणि B-490-501 वजन आणि वनस्पतींसाठी पी मूल्य < 0.050) /79b (मूल्यांकनासाठी P मूल्य < 0.0001 आणि वजनासाठी लक्षणीय नाही).有趣的是，一些缺乏任何“抗性”标记等位基因的NLL 系显示出高水平的炭疽病抗怗型相当或更高），例如Boregine（两个参数的P 值< 0.0001）、Bojar（P 值<得分为0.0001）得分为0.0001）得分两0.0001.种群B-549/79b（得分P 值< 0.0001, 重量不显着）. हे मनोरंजक आहे की काही एनएलएल प्रणाली ज्यामध्ये कोणतेही “अँटीजेनिक” मार्कर नसतात ते उच्च क्षैतिज प्रतिकार दर्शवतात (लॅनर1 किंवा एनमॅन जीन्सच्या समतुल्य किंवा उच्च), जसे की बोरेजिन (दोन्ही पॅरामीटर्स P < 0.0001), बोजर (पी मूल्य < 0.0001, वनस्पती वजन) 0.491 बी 0.091 आणि बी 0.091 मूल्य 0.0901 1, वजन लक्षणीय नाही). Интересно, что некоторые линии NLL, лишенные каких-либо маркерных аллей «резистентности», показали высокие уровни устовый высокие уровни устовый высокие или выше, чем у генотипов Lanr1 или AnMan), такие как बोरेगिन (значение P для обоих параметров <0,0001), Bojar (значение P <0,000п,001,00001,0001) ляция B-549/79b (оценка P-значение <0,0001, масса незначительна). विशेष म्हणजे, 'प्रतिरोधक' मार्कर अॅलेल्स नसलेल्या काही NLL ओळींनी उच्च पातळीचे अँथ्रॅकनोज प्रतिरोध (Lanr1 किंवा AnMan जीनोटाइपशी तुलना करता किंवा त्यापेक्षा जास्त) दर्शविला, जसे की बोरेजिन (दोन्ही पॅरामीटर्ससाठी पी मूल्य <0.0001), बोजर (पी-मूल्य <0. 0/0. 190, बी.590, बी.59 0.59 आणि वनस्पतीचे वजन <0.9.4). P-मूल्य < 0.0001, वजन लक्षणीय नाही).मार्कर जीनोटाइप आणि रोग फिनोटाइप (~0.42 ते ~0.98 पर्यंत पी मूल्ये) यांच्यातील परस्परसंबंधाच्या अभावाचे स्पष्टीकरण करून, ही घटना प्रतिकारशक्तीच्या नवीन अनुवांशिक स्त्रोताची शक्यता सूचित करते.अशाप्रकारे, कोल्मोगोरोव्ह-स्मिर्नोव्ह चाचणीने दर्शविले की अॅन्थ्रॅकनोज प्रतिकारावरील डेटा साधारणपणे स्कोअर (पी-मूल्ये 0.25 आणि 0.11) आणि वनस्पती वस्तुमान (पी-मूल्ये 0.47 आणि 0.55) साठी वितरीत केला गेला होता, असे सूचित करते की मी असे सुचवितो की लॅनन 1 पेक्षा अधिक अॅलेल्स आणि अॅलेल्स समाविष्ट आहेत.
अँथ्रॅकनोज रेझिस्टन्स स्क्रीनिंगच्या परिणामांवर आधारित, ट्रान्सक्रिप्टोम विश्लेषणासाठी 4 ओळी निवडल्या गेल्या: 83A:476, बोरेजिन, मँडेलप आणि पॉप्युलेशन 22660. या रेषांची RNA सिक्वेन्सिंगद्वारे इनोक्यूलेशन प्रयोगांमध्ये ऍन्थ्रॅक्स रेझिस्टन्ससाठी पुन्हा चाचणी करण्यात आली, बशर्ते ते पूर्वीच्या चाचणीत असतील.स्कोअर मूल्ये खालीलप्रमाणे होती: बोरेगिन (1.71 ± 1.39), 83A: 476 (2.09 ± 1.38), मँडेलप (3.82 ± 1.42) आणि लोकसंख्या 22660 (6.11 ± 1.29 ).
Illumina NovaSeq 6000 प्रोटोकॉलने प्रति नमुना सरासरी 40.5 Mread जोड्या (29.7 ते 54.4 Mreads) (पूरक सारणी S3) साध्य केल्या.संदर्भ क्रमातील संरेखन स्कोअर 75.5% ते 88.6% पर्यंत होते.जैविक प्रतिकृतींमधील प्रायोगिक रूपांमधील वाचन संख्या डेटाचा सरासरी सहसंबंध 0.812 ते 0.997 (म्हणजे 0.959) पर्यंत आहे. विश्लेषण केलेल्या 35,170 जनुकांपैकी 2917 जनुकांमध्ये कोणतीही अभिव्यक्ती आढळली नाही आणि इतर 4785 जीन्स नगण्य स्तरावर (बेस मीन <5) व्यक्त करण्यात आले. विश्लेषण केलेल्या 35,170 जनुकांपैकी 2917 जनुकांमध्ये कोणतीही अभिव्यक्ती आढळली नाही आणि इतर 4785 जीन्स नगण्य स्तरावर (बेस मीन <5) व्यक्त करण्यात आले. Из 35 170 проанализированных генов 2917 не проявляли экспрессии, а остальные 4785 генов экспресссировались на незвначированных генов 2917 е <5). विश्लेषण केलेल्या 35,170 जनुकांपैकी 2917 जनुकांमध्ये कोणतीही अभिव्यक्ती दिसून आली नाही आणि उर्वरित 4785 जीन्स नगण्य पातळीवर (बेस मीन <5) व्यक्त केले गेले.在分析的35,170 个基因中，2917 个没有表达，其他4785 个基因的表达可以因的表达可以忽略不计！。35,170 Из 35 170 проанализированных генов 2917 не экспрессировались, а остальные 4785 генов имели незначительную незначительную экспрессировались (<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<< " ). विश्लेषण केलेल्या 35,170 जनुकांपैकी 2917 व्यक्त केले गेले नाहीत आणि उर्वरित 4785 जनुकांमध्ये नगण्य अभिव्यक्ती होती (बेस मीन <5).अशा प्रकारे, प्रयोगादरम्यान व्यक्त (बेस मीन ≥ 5) जनुकांची संख्या 27,468 (78.1%) (पूरक तक्ता S4) होती.
पहिल्या वेळेपासून, सर्व NLL ओळींनी ट्रान्सक्रिप्टोम (टेबल 1) रीप्रोग्रामिंग करून C. lupini (स्ट्रेन Col-08) च्या टोचण्याला प्रतिसाद दिला, तथापि, रेषांमध्ये लक्षणीय फरक दिसून आला.अशाप्रकारे, प्रतिरोधक रेषा 83A:476 (Lanr1 जनुक घेऊन जाणाऱ्या) ने पहिल्या वेळेच्या बिंदूवर (6 hpi) लक्षणीय ट्रान्सक्रिप्टोम रीप्रोग्रामिंग दाखवले आणि या वेळेच्या इतर टाइम पॉइंटच्या तुलनेत वेगळ्या अप-आणि डाउन-जीन्सच्या संख्येत 31-69-पट वाढ झाली.याव्यतिरिक्त, हे शिखर अल्पायुषी होते, कारण दुसऱ्या वेळेच्या बिंदूवर (12 hpi) फक्त काही जनुकांची अभिव्यक्ती लक्षणीयरीत्या बदललेली राहिली.विशेष म्हणजे, बोरेजिन, ज्याने कलम चाचणीमध्ये उच्च पातळीचा प्रतिकार देखील दर्शविला, प्रयोगादरम्यान इतक्या मोठ्या प्रमाणात ट्रान्सक्रिप्शनल रीप्रोग्रामिंग केले नाही.तथापि, 12 HPI वर बोरेजिन आणि 83A:476 साठी भिन्नता व्यक्त केलेल्या जनुकांची संख्या (DEG) समान होती.मॅंडेलप आणि लोकसंख्या 22660 या दोघांनी शेवटच्या वेळी (48 l/s) डीईजी शिखरे दर्शविली, जी संरक्षण प्रतिसादांमध्ये सापेक्ष विलंब दर्शवितात.
कारण 83A:476 ने इतर सर्व ओळींच्या तुलनेत 6 HPI वर C. lupini च्या प्रतिसादात मोठ्या प्रमाणात ट्रान्सक्रिप्टोम रीप्रोग्रामिंग केले, यावेळी ~91% DEGs वंश-विशिष्ट होते (चित्र 1).तथापि, बोरेगिन, मँडेलप आणि लोकसंख्या 22660 मधील 68.5%, 50.9%, आणि 52.6% DEG, काही विशिष्ट बिंदूंमध्ये 83A:476 मध्ये आढळलेल्यांशी ओव्हरलॅप झाल्यामुळे, अभ्यासाच्या ओळींमधील सुरुवातीच्या प्रतिसादांमध्ये काही ओव्हरलॅप होते.तथापि, या DEGs मध्ये सध्या 83A:476 वापरून आढळलेल्या सर्व DEGs पैकी फक्त एक लहान अंश (0.97–1.70%) आहे.याव्यतिरिक्त, यावेळी सर्व ओळींमधील 11 DEGs सुसंगत होते (पूरक तक्ते S4-S6), ज्यात वनस्पती संरक्षण प्रतिसादांचे सामान्य घटक समाविष्ट आहेत: लिपिड ट्रान्सफर प्रोटीन (TanjilG_32225), एंडोग्लुकन-1,3-β-ग्लुकोसाइड एन्झाईम (TanjilG_233384), दोन टॅन्जिल-23384 प्रथिने आणि टॅन्जिल-23384 प्रथिने. jilG_31531), मूलभूत लेटेक्स प्रथिने (TanjilG_32352), आणि दोन ग्लाइसिन-युक्त स्ट्रक्चरल सेल वॉल प्रथिने (TanjilG_19701 आणि TanjilG_19702).83A:476 आणि बोरेगिन 24 HPI (एकूण 16-38% DEG) आणि मँडेलप आणि लोकसंख्या 22660 मधील 48 HPI (एकूण 14-20% DEG) दरम्यान ट्रान्सक्रिप्टोम प्रतिसादांमध्ये तुलनेने उच्च ओव्हरलॅप देखील होता.
कोलेटोट्रिचम ल्युपिनी (वेरझेनिस, पोलंड, 1999 मधील ल्युपिन फील्डमधून मिळविलेले स्ट्रेन कोल-08) सह टोचलेल्या अरुंद-लेव्हड ल्युपिन (NLL) रेषांमध्ये भिन्नपणे व्यक्त केलेल्या जनुकांची (DEG) संख्या दर्शविणारा वेन आकृती.विश्लेषण केलेल्या NLL रेषा होत्या: 83A:476 (प्रतिरोधक, Lanr1 अ‍ॅलील वाहून नेणारे), बोरेजिन (प्रतिरोधक, अनुवांशिक पार्श्वभूमी अज्ञात), मँडेलप (मध्यम प्रतिरोधक, AnMan अ‍ॅलील वाहून नेणारी) आणि लोकसंख्या 22660 (अत्यंत संवेदनाक्षम).hpi हे संक्षेप लसीकरणानंतर काही तास टिकते.आलेख सुलभ करण्यासाठी शून्य मूल्ये काढून टाकली आहेत.
प्रमाणिक R जनुक डोमेनच्या उपस्थितीसाठी 6 hpi वर ओव्हरएक्सप्रेस केलेल्या जनुकांच्या संचाचे विश्लेषण करण्यात आले (पूरक सारणी S7).या अभ्यासातून केवळ 83A:476 वर NBS-LRR डोमेनसह क्लासिक रोग प्रतिरोधक जनुकांचे ट्रान्सक्रिप्टोम इंडक्शन दिसून आले.या संचामध्ये एक TIR-NBS-LRR जनुक (tanjilg_05042), पाच CC-NBS-LRR जनुक (tanjilg_06165, tanjilg_06162, tanjilg_22773, tanjilg_22640, आणि F_111640, tanjilg, tanjilg, and 6116 tanjilg, tanjilg, tanjilg_22640) यांचा समावेश आहे. 62), आणि चार NBS-LRRE (tanjilg_16162) तसेच चार NBS-Lrr (tanjilg_16162) आणि चार NBS-LRR (TANJILG_16162).या सर्व जनुकांमध्ये संरक्षित अनुक्रमांमध्ये व्यवस्था केलेले प्रामाणिक डोमेन आहेत.NBS-LRR डोमेन जनुकांव्यतिरिक्त, अनेक RLL किनासेस 6 hpi वर सक्रिय केले गेले, म्हणजे एक बोरेगिनमध्ये (TanjilG_19877), दोन Mandelup (TanjilG_07141 आणि TanjilG_19877) आणि लोकसंख्येमध्ये 22660 (TanjilG_1304 आणि TanjilG1303) आणि दोन 27:476.
सी. ल्युपिनी (स्ट्रेन कॉल-08) सह लसीकरणाच्या प्रतिसादात लक्षणीय बदललेल्या अभिव्यक्ती असलेल्या जनुकांना जीन ऑन्टोलॉजी (GO) संवर्धन विश्लेषण (पूरक तक्ता S8) च्या अधीन केले गेले. "GO:0006952 डिफेन्स रिस्पॉन्स" हा सर्वात जास्त वारंवार सादर केलेला जैविक प्रक्रिया शब्द होता जो 16 पैकी 6 (वेळ × रेषा) उच्च महत्त्व असलेल्या (P मूल्य < 0.001) संयोजनांमध्ये दिसून आला (चित्र 2). "GO:0006952 डिफेन्स रिस्पॉन्स" हा सर्वात जास्त वारंवार सादर केलेला जैविक प्रक्रिया शब्द होता जो 16 पैकी 6 (वेळ × रेषा) उच्च महत्त्व असलेल्या (P मूल्य < 0.001) संयोजनांमध्ये दिसून आला (चित्र 2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 защитный ответ, защитный отвевя6», время × линия) комбинаций с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). सर्वाधिक वारंवार सादर केलेली जैविक प्रक्रिया संज्ञा 'GO:0006952 संरक्षण प्रतिसाद' होती, जी 16 पैकी 6 (वेळ × वंश) उच्च महत्त्व असलेल्या (पी मूल्य < 0.001) संयोजनांमध्ये दिसून आली (चित्र 2).最常被过度代表的生物过程术语是“GO:0006952 防御反应”，它出现在16 个（时间程个（时间程具有高显着性（P 值< 0.001）（图2）. सर्वात प्रातिनिधिक जैविक प्रक्रिया शब्द "GO:0006952 संरक्षण प्रतिसाद" आहे, जो 16 पैकी 6 (时间×线) संयोगांमध्ये दिसून येतो, उच्च महत्त्व असलेल्या (P मूल्य < 0.001) (图2) . Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 संरक्षण प्रतिसाद», который появленным который появленным мя × линия) с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). सर्वाधिक वारंवार सादर केलेली जैविक प्रक्रिया संज्ञा 'GO:0006952 डिफेन्स रिस्पॉन्स' होती, जी 16 पैकी 6 संयोजनांमध्ये (वेळ × रेषा) उच्च महत्त्व असलेल्या (पी मूल्य < 0.001) (चित्र 2) मध्ये दिसून आली.हे शब्द 83A: 476 आणि बोरेगिन (6 आणि 24 hpi) मध्ये दोन वेळेच्या बिंदूंवर आणि एका वेळी मँडेलप आणि लोकसंख्या 22660 (अनुक्रमे 12 आणि 6 hpi) मध्ये जास्त प्रमाणात सादर केले गेले.हा एक अपेक्षित परिणाम आहे, जो प्रतिरोधक रेषांच्या अँटीफंगल प्रतिसादावर प्रकाश टाकतो.या व्यतिरिक्त, 83A:476 ने C. lupini ला "GO:0055114 redox process" या शब्दाद्वारे दर्शविलेल्या ऑक्सिडेटिव्ह बर्स्टशी संबंधित जनुकांना वेगाने प्रेरित करून प्रतिसाद दिला, जो विशिष्ट संरक्षण प्रतिसाद दर्शवितो, तर बोरेगिनने 'GO' शब्दाशी संबंधित विशिष्ट संरक्षण प्रतिसाद प्रकट केले.:0006950 ताण प्रतिसाद”.लोकसंख्या 22660 ने दुय्यम चयापचयांचा समावेश असलेला क्षैतिज प्रतिकार प्रतिसाद सक्रिय केला, "GO:0016104 ट्रायटरपीन बायोसिंथेसिसची प्रक्रिया" आणि "GO:0006722 ट्रायटरपीन चयापचय प्रक्रिया" (दोन्ही संज्ञांचे परिणाम समान रीतीने गृहीत धरले जातात) अत्याधिक शब्द हायलाइट करतात. sis, Mandelup प्रतिक्रिया स्थिरता बोरेगिन आणि लोकसंख्या 22660 मध्ये होती. याव्यतिरिक्त, प्रारंभिक प्रतिक्रिया 83A:476 (6 hpi) आणि विलंबित प्रतिक्रिया Mandelup आणि Population 22660 मध्ये GO:0015979 'फोटोसिंथेसिस' आणि इतर संबंधित जैविक प्रक्रियांचा समावेश आहे.
ऍन्थ्रॅक्स ल्युपिन (1999 मध्ये पोलंडच्या विएर्झेनिस येथील ल्युपिन फील्डमधून प्राप्त झालेल्या कोल-08 स्ट्रेन) सह टोचलेल्या अरुंद-लीव्हड ल्युपिन (NLL) च्या ट्रान्सक्रिप्टोम प्रतिसादादरम्यान भिन्न व्यक्त केलेल्या जनुकांच्या भाष्यात निवडलेल्या बायोप्रोसेस जीन ऑन्टोलॉजी संज्ञा मोठ्या प्रमाणात वाढवल्या गेल्या आहेत.विश्लेषण केलेल्या NLL रेषा होत्या: 83A:476 (प्रतिरोधक, होमोजिगस लॅनर1 अ‍ॅलील वाहून नेणारे), बोरेजिन (प्रतिरोधक, अज्ञात अनुवांशिक पार्श्वभूमी), मँडेलप (मध्यम प्रतिरोधक, होमोजिगस एनमॅन अ‍ॅलेल वाहून नेणारे) आणि लोकसंख्या 22660 (संवेदनशील).
या अभ्यासाचे उद्दिष्ट ऍन्थ्रॅकनोज प्रतिरोधनात योगदान देणाऱ्या जनुकांची ओळख पटवण्याचे असल्यामुळे, GO “GO: 0006952 बचावात्मक प्रतिसाद” आणि “GO: 0055114 रेडॉक्स प्रक्रिया” या संज्ञांना नियुक्त केलेल्या जनुकांचे कट-ऑफसह विश्लेषण करण्यात आले कारण बेसलाइन म्हणजे किमान ≥ 30 रेषा.लॉग 2 (फोल्ड चेंज) च्या सांख्यिकीयदृष्ट्या महत्त्वपूर्ण मूल्ये एकत्रित करणारा × बिंदू.हे निकष पूर्ण करणाऱ्या जनुकांची संख्या GO:0006952 साठी 65 आणि GO:0055114 साठी 524 होती.
83A:476 ने GO:0006952 या शब्दासह भाष्य केलेले दोन DEG शिखर उघड केले, पहिले 6 जीन्स प्रति इंच (64 जीन्स, अप आणि डाउन रेग्युलेशन) आणि दुसरे 24 जीन्स प्रति इंच (15 जीन्स, केवळ अप रेग्युलेशन)बोरेगिनने हे देखील दाखवले की GO:0006952 एकाच वेळी शिखरावर आहे, परंतु कमी DEG (11 आणि 8) आणि प्राधान्य सक्रियतेसह.Mandeloop ने GO:0006952 ची दोन शिखरे 12 आणि 48 HPI वर दाखवली, दोन्हीमध्ये 12 जीन्स आहेत (पहिले सक्रिय जनुकांसह, आणि दुसरे केवळ दडपशाही जनुकांसह), तर 6 HPI (13 जीन्स) मधील 22660 लोकसंख्येमध्ये वाढीचे मोठे प्राबल्य होते.नियमनहे लक्षात घेतले पाहिजे की या शिखरांमधील GO:0006952 DEG च्या 96.4% मध्ये समान प्रकारचा प्रतिसाद (वर किंवा खाली) होता, जो समाविष्ट असलेल्या जनुकांच्या संख्येत फरक असूनही संरक्षण प्रतिसादांमध्ये लक्षणीय ओव्हरलॅप दर्शवितो.GO:0006952 या शब्दाशी संबंधित अनुक्रमांचा सर्वात मोठा गट भुखमरी तणाव-संबंधित संदेश प्रथिने 22 (SAM22-like) एन्कोड करतो, जो वर्ग 10 पॅथोजेनेसिस-संबंधित प्रोटीन (PR-10) प्रोटीन क्लेड आणि कोर प्रोटीन लेटेक्सशी संबंधित आहे.समान (MLP-सारखी) प्रथिने) प्रथिने (चित्र 3).दोन्ही गटांमध्ये अभिव्यक्तीचे स्वरूप आणि प्रतिसादाची दिशा भिन्न होती.SAM22 सारखी प्रथिने एन्कोड करणार्‍या जनुकांनी सुरुवातीच्या बिंदूंवर (6 किंवा 12 hpi) सातत्यपूर्ण आणि लक्षणीय प्रेरण दाखवले आणि प्रयोगाच्या शेवटी (48 hpi) सामान्यत: प्रतिसादहीन होते, तर MLP सारखी प्रथिने 6 hpi वर समन्वय दर्शवितात.hpi83A:476 आणि Mandelup 48 hp/in वर, जवळजवळ इतर सर्व डेटा पॉइंट्स प्रतिसाद देत नाहीत.याव्यतिरिक्त, SAM22-सदृश प्रथिन जनुकांच्या अभिव्यक्ती प्रोफाइलमधील फरकांनी अॅन्थ्रॅकनोज प्रतिरोधकतेमध्ये बदल दिसून आला, कारण अधिक प्रतिरोधक रेषांमध्ये या जनुकांना अधिक संवेदनाक्षम जनुकांपेक्षा लक्षणीयपणे प्रेरित करणारे अधिक वेळ गुण होते.दुसर्‍या LlR18A/B-समान PR-10 जनुकाने SAM22-सदृश प्रथिन जनुकाशी अगदी समान अभिव्यक्ती नमुना दर्शविला.
"GO:0006952 डिफेन्स रिस्पॉन्स" या जैविक प्रक्रिया शब्दाचे मुख्य घटक आणि Lanr1 आणि AnMan alleles च्या उमेदवार जनुकांचे अभिव्यक्ती नमुने ओळखले गेले.Log2 स्केल log2 मूल्ये (फोल्ड चेंज) दर्शवते (कोलेटोट्रिचम ल्युपिनी, स्ट्रेन कोल-08, ल्युपिन फील्डमधून मिळवलेले, विझेनिका, पोलंड, 1999) आणि नियंत्रण (शॅम-इनोक्युलेटेड) वनस्पतींमधील एकाच वेळी.खालील अरुंद पानांच्या ल्युपिन रेषांचे विश्लेषण करण्यात आले: 83A:476 (प्रतिरोधक, एकसंध लॅनर1 अ‍ॅलील वाहून नेणारे), बोरेजिन (प्रतिरोधक, अनुवांशिक पार्श्वभूमी अज्ञात), मँडेलप (मध्यम प्रतिरोधक, एकसंध AnMan अ‍ॅलील वाहून नेणारे), आणि लोकसंख्या 22660 (अ‍ॅलेल).
याव्यतिरिक्त, RNA-seq उमेदवार जीन्स Lanr1 (TanjilG_05042) आणि AnMan (TanjilG_12861) च्या अभिव्यक्ती प्रोफाइलचे मूल्यांकन केले गेले (चित्र 3).TanjilG_05042 जनुकाने 83A:476 वर लक्षणीय प्रतिसाद (सक्रियकरण) दाखवला फक्त पहिल्या वेळेच्या बिंदूवर (6 hpi), तर TanjilG_12861 मँडेलूपमध्ये फक्त दोन वेळेच्या बिंदूंवर लक्षणीय होता: 6 hpi (डाउन रेग्युलेशन) आणि 24 hpi (6 hpi).सह.).समायोज्य)).
GO:0055114 “रेडॉक्स प्रक्रिया” या शब्दात सर्वाधिक ओव्हरएक्सप्रेस केलेली जीन्स ही सायटोक्रोम P450 प्रोटीन्स आणि पेरोक्सिडेस एन्कोडिंग जीन्स होती (चित्र 4).6 HPI वर 83A:476 पासून विलग केलेल्या नमुन्यांसाठी, जास्तीत जास्त किंवा किमान लॉग 2 (फोल्ड चेंज) मूल्ये (86.6% जीन्ससाठी) सामान्यत: लसीकरण केलेल्या आणि नियंत्रण वनस्पतींमध्ये आढळून आले, जे लैंगिक टोचण्याला या जीनोटाइपच्या उच्च प्रतिसादावर प्रकाश टाकतात.83A:476 ने सर्वात लक्षणीय GO: 0055114 DEG 6 hpi (503 जीन्स) वर दाखवले, तर उर्वरित रेषा 48 hpi वर (बोर्गिन, 31 जीन्स; मँडेलप, 85 जीन्स; आणि लोकसंख्या 22660, 78 जीन्स)).GO:0055114 कुटुंबातील बहुतेक जनुकांमध्ये, लसीकरणास दोन प्रकारचे प्रतिसाद (सक्रियीकरण आणि प्रतिबंध) आढळून आले.विशेष म्हणजे, GO: 0055114 या शब्दासाठी GO: 0055114 48 hp वर ओळखले गेलेले 97.6% पर्यंत डीईजी हे निरिक्षण सूचित करतात की, लक्षणीयरीत्या लहान प्रमाणात (म्हणजे, उत्परिवर्तित रेडॉक्स जनुकांची संख्या, 85 विरुद्ध 503) असूनही, विलंबित ट्रान्सक्रिप्टोमच्या प्रत्युत्तराची पद्धत 48 एचपी प्रमाणेच आहे. ७६.बोरेगिन आणि लोकसंख्या 22660 मध्ये, हे अभिसरण अनुक्रमे 51.6% आणि 75.6% इतके कमी आहे.
"GO:0055114 Redox प्रक्रिया" या जैविक प्रक्रियेच्या टर्मच्या मुख्य घटकांच्या अभिव्यक्तीचे नमुने उघड झाले.Log2 स्केल log2 मूल्ये (फोल्ड चेंज) दर्शवते (कोलेटोट्रिचम ल्युपिनी, स्ट्रेन कोल-08, ल्युपिन फील्डमधून मिळवलेले, विझेनिका, पोलंड, 1999) आणि नियंत्रण (शॅम-इनोक्युलेटेड) वनस्पतींमधील एकाच वेळी.खालील अरुंद पानांच्या ल्युपिन रेषांचे विश्लेषण करण्यात आले: 83A:476 (प्रतिरोधक, एकसंध लॅनर1 अ‍ॅलील वाहून नेणारे), बोरेजिन (प्रतिरोधक, अनुवांशिक पार्श्वभूमी अज्ञात), मँडेलप (मध्यम प्रतिरोधक, एकसंध AnMan अ‍ॅलील वाहून नेणारे), आणि लोकसंख्या 22660 (अ‍ॅलेल).
83A:476 C. lupini (स्ट्रेन Col-08) सह लसीकरणासाठी ट्रान्सक्रिप्टोमिक प्रतिसादांमध्ये GO:0015979 "प्रकाशसंश्लेषण" आणि इतर संबंधित जैविक प्रक्रिया (FIG. 5) या शब्दाला श्रेय दिलेल्या जनुकांचे समन्वित सायलेन्सिंग देखील समाविष्ट होते.या GO:0015979 DEG सेटमध्ये 105 जीन्स आहेत जी 83A:476 वर 6 hpi वर लक्षणीयरीत्या दाबली गेली.या उपसमूहात, 22660 लोकसंख्येमध्ये एकाच वेळी 48 एचपीआय आणि 35 मध्ये मँडेलपमध्ये 37 जीन्स देखील कमी करण्यात आली, ज्यामध्ये दोन्ही जीनोटाइपसाठी सामान्य असलेल्या 19 डीईजीचा समावेश आहे.टर्म GO: 0015979 शी संबंधित कोणतेही DEGs कोणत्याही संयोजनात (लाइन x वेळ) लक्षणीयरित्या सक्रिय केले गेले नाहीत.
"GO:0015979 प्रकाशसंश्लेषण" या जैविक प्रक्रियेच्या टर्मच्या मुख्य घटकांच्या अभिव्यक्तीचे नमुने उघड झाले.Log2 स्केल log2 मूल्ये (फोल्ड चेंज) दर्शवते (कोलेटोट्रिचम ल्युपिनी, स्ट्रेन कोल-08, ल्युपिन फील्डमधून मिळवलेले, विझेनिका, पोलंड, 1999) आणि नियंत्रण (शॅम-इनोक्युलेटेड) वनस्पतींमधील एकाच वेळी.खालील अरुंद पानांच्या ल्युपिन रेषांचे विश्लेषण करण्यात आले: 83A:476 (प्रतिरोधक, एकसंध लॅनर1 अ‍ॅलील वाहून नेणारे), बोरेजिन (प्रतिरोधक, अनुवांशिक पार्श्वभूमी अज्ञात), मँडेलप (मध्यम प्रतिरोधक, एकसंध AnMan अ‍ॅलील वाहून नेणारे), आणि लोकसंख्या 22660 (अ‍ॅलेल).
विभेदक अभिव्यक्ती विश्लेषणाच्या परिणामांवर आधारित आणि संभाव्यत: रोगजनक बुरशीविरूद्ध संरक्षण प्रतिसादांमध्ये सामील असलेल्या, सात जनुकांचा हा संच रिअल-टाइम पीसीआर (पूरक सारणी S9) द्वारे अभिव्यक्ती प्रोफाइलच्या परिमाणासाठी निवडला गेला.
नियंत्रण (नक्कल) वनस्पती (पूरक तक्ते S10, S11) च्या तुलनेत तंजिलजी_10657 हे पुटेटिव्ह प्रोटीन जनुक सर्व अभ्यासलेल्या रेषा आणि वेळ बिंदूंमध्ये लक्षणीयरित्या प्रेरित होते.याव्यतिरिक्त, TanjilG_10657 च्या अभिव्यक्ती प्रोफाइलने सर्व ओळींसाठी प्रयोगादरम्यान वाढता कल दर्शविला.22660 लोकसंख्येने 24 HPI (Fig. 6a) वर 114-पट सक्रियतेसह टोचण्यासाठी TanjilG_10657 ची सर्वोच्च संवेदनशीलता आणि सर्वोच्च सापेक्ष अभिव्यक्ती पातळी (4.4 ± 0.4) दर्शविली.PR10 LlR18A प्रथिन जनुक TanjilG_27015 ने देखील सर्व रेषा आणि वेळ बिंदूंवर सक्रियता दर्शविली, बहुतेक डेटा बिंदूंवर सांख्यिकीय महत्त्व आहे (चित्र 6b).TanjilG_10657 प्रमाणेच, TanjilG_27015 ची सर्वोच्च सापेक्ष अभिव्यक्ती पातळी 24 HPI (19.5 ± 2.4) वर 22660 टोचलेल्या लोकसंख्येमध्ये दिसून आली.बोरेजिन 6 hpi (चित्र 6c) वगळता सर्व रेषांमध्ये आणि सर्व वेळ बिंदूंमध्ये TanjilG_04706 ऍसिड एन्डोकिटिनेज जनुक लक्षणीयरीत्या वाढले होते.हे 83A:476 (10.5 पटीने) वर प्रथम वेळेच्या बिंदूवर (6 HPI) जोरदारपणे प्रेरित झाले आणि इतर ओळींमध्ये (6.6-7.5 पटीने) माफक प्रमाणात वाढ झाली.प्रयोगादरम्यान, TanjilG_04706 ची अभिव्यक्ती 83A:476 आणि Boregine मध्ये समान पातळीवर राहिली, तर Mandelup आणि Population 22660 मध्ये ते लक्षणीय वाढले, तुलनेने उच्च मूल्यांपर्यंत पोहोचले (अनुक्रमे 5.9 ± 1.5 आणि 6.2 ± 1.5).एंडोग्लुकन-1,3-β-ग्लुकोसीडेस-सदृश जनुक TanjilG_23384 ने लोकसंख्या 22660 (चित्र 6d) वगळता सर्व ओळींमध्ये पहिल्या दोन टाइम पॉइंट्स (6 आणि 12 hpi) वर उच्च सक्रियता दर्शविली.Mandelup (2.7 ± 0.3) आणि 83A:476 (1.5 ± 0.1) मध्ये दुसऱ्या वेळेच्या बिंदूवर (12 hpi) TanjilG_23384 ची सर्वोच्च सापेक्ष अभिव्यक्ती पातळी दिसून आली.24 HPI वर, TanjilG_23384 अभिव्यक्ती सर्व अभ्यासलेल्या ओळींमध्ये तुलनेने कमी होती (0.04 ± 0.009 ते 0.44 ± 0.12 पर्यंत).
परिमाणवाचक PCR द्वारे प्रकट केलेल्या निवडलेल्या जनुकांचे (ag) अभिव्यक्ती प्रोफाइल.6, 12 आणि 24 ही संख्या लसीकरणानंतरचे तास दर्शवते.LanDExH7 आणि LanTUB6 जनुकांचा वापर सामान्यीकरणासाठी केला गेला आणि LanTUB6 आंतर-मालिका कॅलिब्रेशनसाठी वापरला गेला.एरर बार तीन जैविक प्रतिकृतींवर आधारित मानक विचलनाचे प्रतिनिधित्व करतात, त्यापैकी प्रत्येक तीन तांत्रिक प्रतिकृतींची सरासरी आहे. इंक्युलेटेड (Colletotrichum lupini, strain Col-08, 1999 मध्ये Wierzenica, पोलंड येथील ल्युपिन फील्डमधून मिळवलेले) आणि नियंत्रण (मॉक-इनोक्युलेटेड) वनस्पती यांच्यातील अभिव्यक्ती पातळीमधील फरकांचे सांख्यिकीय महत्त्व डेटा पॉइंट्स (*P मूल्य < 0.05, ***⤉ 0.05, ***⤉ मूल्य < 0.05, ***⤉ 0.05 मूल्य) वर चिन्हांकित केले आहे. 01). इंक्युलेटेड (Colletotrichum lupini, strain Col-08, 1999 मध्ये Wierzenica, पोलंड येथील ल्युपिन फील्डमधून मिळवलेले) आणि नियंत्रण (मॉक-इनोक्युलेटेड) वनस्पती यांच्यातील अभिव्यक्ती पातळीमधील फरकांचे सांख्यिकीय महत्त्व डेटा पॉइंट्स (*P मूल्य < 0.05, ***⤉ 0.05, ***⤉ मूल्य < 0.05, ***⤉ 0.05 मूल्य) वर चिन्हांकित केले आहे. 01). Статистическая значимость различий в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамм Col-08, полувнях экспрессии между инокулированными) рженице, Польша) и контрольными (ложно инокулированными) растениями отмечена над точками данных (*значение P < 0,05, P <0,05, P*01*** ≤ ०,००१). इंक्युलेटेड (Colletotrichum lupini, strain Col-08, 1999 मध्ये Wierzhenice, पोलंड येथील ल्युपिन फील्डमधून मिळवलेले) आणि नियंत्रण (शॅम-इनोक्युलेटेड) वनस्पती यांच्यातील अभिव्यक्ती पातळीतील सांख्यिकीयदृष्ट्या महत्त्वपूर्ण फरक डेटा पॉइंट्सच्या वर नोंदवले गेले आहेत (*P मूल्य < 0.05, ***P-value **P-05≤01, **P-value. ).接种（Colletotrichum lupini，Col-08株，1999年从波兰Wierzenica的羽扇豆田获得）和对照（模拟接苴草顏龍模拟接苴草龍）差异的统计学显着性标记在数据点上方（*P值< 0.05, **P 值≤ 0.01, ***P 值≤ 0.001).接种 （colletotrichum lupini ， color-08 株 ， 1999 年 波兰 波兰 wierzenica 的 羽扇 获得） 和 对照 弈湴鍤狍鍉差异 的 统计学 显着性 标记 数据点 上方*p 值 <0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001). Статистически значимые различия в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамм Col-08, полученный Полученный Полученный, Видео ольша, в 1999 г.) и контрольными (ложно инокулированными) растениями отмечены над точками данных (* значение данных (* значение P < 0,0,05, *** значение P < 0,0,05, 0,05 з** ение ≤ 0,001). इंक्युलेटेड (कोलेटोट्रिचम ल्युपिनी, स्ट्रेन कोल-08, व्हर्झेनिस, पोलंड, 1999 मध्ये ल्युपिन फील्डमधून मिळवलेले) आणि नियंत्रण (शॅम-इनोक्युलेटेड) वनस्पती यांच्यातील अभिव्यक्ती पातळीमधील सांख्यिकीयदृष्ट्या महत्त्वपूर्ण फरक डेटा पॉईंट्सच्या वर नोंदवले गेले आहेत (*P मूल्य < 0.05 , ***P-value **P-value ≤0. 1).विश्लेषण केलेल्या NLL रेषा होत्या: 83A:476 (प्रतिरोधक, एकसंध लॅनर1 ऍलील वाहून नेणारे), मँडेलप (मध्यम प्रतिरोधक, एकसंध AnMan ऍलील वाहून नेणारे), बोरेजिन (प्रतिरोधक, अज्ञात अनुवांशिक पार्श्वभूमी) आणि लोकसंख्या 22660 (संवेदनशील).
Lanr1 लोकसमधील उमेदवार जनुक TanjilG_05042 ने RNA-seq अभ्यासातून (Fig. 6e) मिळवलेल्या प्रोफाइलमधून स्पष्टपणे भिन्न अभिव्यक्ती नमुना दर्शविला.मँडेलप आणि 22660 लोकसंख्येमध्ये (अनुक्रमे 39.7 आणि 11.7 वेळा) या जनुकाचे महत्त्वपूर्ण सक्रियकरण दिसून आले, परिणामी उच्च अभिव्यक्ती पातळी (अनुक्रमे 1.4 ± 0.14 आणि 7.2 ± 1.3 पर्यंत).83A:476 मध्ये TanjilG_05042 जनुकाचे काही अपरेग्युलेशन (3.8-पटीपर्यंत) देखील दिसून आले, तथापि, गाठलेली सापेक्ष अभिव्यक्ती पातळी (0.044 ± 0.002) मँडेलप आणि 22660 लोकसंख्येपेक्षा 30 पटीने कमी होती.qPCR द्वारे विश्‍लेषित केलेल्‍या मॉक-लसीकरण (नियंत्रण) प्रकारांमधील जीनोटाइपमधील अभिव्यक्ती पातळीमध्‍ये लक्षणीय फरक दिसून आला, 22660 आणि 83A:476 लोकसंख्‍येमध्‍ये 58-पट फरक, तसेच 22660 आणि 22660 लोकसंख्येमध्‍ये पोहोचला. मॅनडालअप आणि मॅनडलअपमधील फरक दोन पटीने गाठला गेला.
AnMan लोकस, TanjilG_12861 येथील उमेदवार जनुक, 83A:476 मध्ये लसीकरणाच्या प्रतिसादात सक्रिय झाले होते आणि Mandelup, 22660 लोकसंख्येमध्ये तटस्थ होते, आणि बोरेजीन (चित्र 6f) मध्ये कमी करण्यात आले होते.TanjilG_12861 जनुकाची सापेक्ष अभिव्यक्ती 83A: 476 (0.14±0.01) मध्ये सर्वाधिक होती.17.4 kDa वर्ग I हीट शॉक प्रोटीन जनुक TanjilG_05080 HSP17.4 ने सर्व अभ्यासलेल्या स्ट्रेन आणि टाइम पॉइंट्स (चित्र 6g) मध्ये कमी सापेक्ष अभिव्यक्ती पातळी दर्शविली.22660 लोकसंख्येमध्ये 24 HPI वर सर्वोच्च मूल्य दिसून आले (0.14 ± 0.02, लसीकरणाच्या प्रतिसादात आठ पट वाढ).
जनुक अभिव्यक्ती प्रोफाइलची तुलना (Fig. 7) TanjilG_10657 आणि इतर चार जनुकांमधील उच्च सहसंबंध प्रकट करते: TanjilG_27015 (r = 0.89), TanjilG_05080 (r = 0.85), TanjilG_05042 (r = 0.70), आणि TanjilG_05042 (r = 0.78).असे परिणाम संरक्षण प्रतिसादांदरम्यान या जनुकांचे सह-नियमन दर्शवू शकतात.TanjilG_12861 आणि TanjilG_23384 जनुकांनी इतर जनुकांच्या तुलनेत कमी पीअरसन सहसंबंध गुणांक मूल्यांसह (अनुक्रमे 0.08 ते 0.43 आणि -0.19 ते 0.28 पर्यंत) भिन्न अभिव्यक्ती प्रोफाइल दर्शविली.
परिमाणवाचक पीसीआर वापरून जनुक अभिव्यक्ती प्रोफाइलमधील परस्परसंबंध शोधले गेले.खालील अरुंद पानांच्या ल्युपिन रेषांचे विश्लेषण केले गेले: 83A:476 (प्रतिरोधक, एकसंध लॅनर1 ऍलील वाहून नेणारे), मँडेलप (मध्यम प्रतिरोधक, एकसंध अँमन ऍलील वाहून नेणारे), बोरेजिन (प्रतिरोधक, अनुवांशिक पार्श्वभूमी अज्ञात), आणि लोकसंख्या 22660 (संवेदनशील).तीन वेळा गुणांची गणना करण्यात आली (लसीकरणानंतर 6, 12 आणि 24 तास), इनोक्युलेटेड (कोलेटोट्रिचम ल्युपिनी, स्ट्रेन कोल-08, 1999 मध्ये पोलंडच्या विएर्झेनिस येथील ल्युपिन फील्डमधून मिळवलेले) आणि नियंत्रण (शॅम-इनोक्युलेट) वनस्पती.स्केल पियर्सन सहसंबंध गुणांकाचे मूल्य दर्शविते.
6 हॉर्सपॉवर प्रति इंच या प्रमाणात मिळालेल्या डेटाच्या आधारे, WGCNA 9981 DEG वर केले गेले जे लवकर संरक्षण प्रतिसादांवर लक्ष केंद्रित करण्यासाठी inoculated आणि नियंत्रण वनस्पतींची तुलना करून ओळखले गेले (पूरक तक्ता S12).जीनोटाइप आणि प्रायोगिक रूपे यांच्यातील सहसंबंधित (सकारात्मक किंवा नकारात्मक) अभिव्यक्ती प्रोफाइलसह बावीस जीन मॉड्यूल (क्लस्टर) आढळले. सरासरी, जनुक अभिव्यक्ती पातळी 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 या क्रमाने उतरत होती (दोन्ही प्रकारांमध्ये, तथापि, नियंत्रण वनस्पतींमध्ये हा कल अधिक मजबूत होता). सरासरी, जनुक अभिव्यक्ती पातळी 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 या क्रमाने उतरत होती (दोन्ही प्रकारांमध्ये, तथापि, नियंत्रण वनस्पतींमध्ये हा कल अधिक मजबूत होता). В среднем уровни экспрессии генов снижались в порядке 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 त्ररोल्नых растений). सरासरी, 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 या क्रमाने जनुक अभिव्यक्ती पातळी कमी झाली (दोन्ही प्रकारांमध्ये, तथापि, नियंत्रण वनस्पतींमध्ये हा कल अधिक मजबूत होता).平均而言，基因表达水平按83A:476 > Mandelup > Boregine > लोकसंख्या 22660植物中更强).平均 而 言 ， 基因 水平 按 83a: 476 > mandelup > boregine > लोकसंख्या 22660 的 顺序 下降 在漈，在种 荭翰，在种中更) ... ... ... ... ... В среднем уровни экспрессии генов снижались в ряду 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 х растений). सरासरी, 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 या मालिकेत जनुक अभिव्यक्ती पातळी कमी झाली (तथापि, दोन्ही प्रकारांमध्ये, नियंत्रण वनस्पतींमध्ये हा कल अधिक मजबूत होता).लसीकरणामुळे जनुक अभिव्यक्तीचे नियमन झाले, विशेषत: मॉड्यूल 18, 19, 14, 6 आणि 1 (परिणामाच्या उतरत्या क्रमाने), नकारात्मक नियमन (उदा. मॉड्यूल 9 आणि 20) किंवा तटस्थ प्रभावांसह (उदा. मॉड्यूल 11, 22, 8 आणि 13).GO टर्म एनरिचमेंट अॅनालिसिस (पूरक तक्ता S13) ने qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_233384, TanjilG_233384, TanjilG_233874, TanjilG_23374, TanjilG_04706, TanjilG_233874, TanjilG_23374, TanjilG_04706, TanjilG_233374, TanjilG_04706) द्वारे विश्लेषित केलेल्या जनुकांसह जास्तीत जास्त सक्रियतेसह (18) टोचलेल्या मॉड्यूलसाठी “GO: 0006952 संरक्षणात्मक प्रतिसाद” उघड झाले. अनेक इनोक्युलेट सर्वात दाबलेले प्रकाशसंश्लेषण मॉड्यूल (9).मॉड्यूल 18 कॉन्सेंट्रेटर (चित्र 8) हे PR-10-सारखे LlR18B प्रथिने एन्कोड करणारे TanjilG_26536 जनुक म्हणून ओळखले गेले आणि फोटोसिस्टम II PsbQ प्रोटीन एन्कोड करणारे TanjilG_28955 जनुक म्हणून मॉड्यूल 9 कॉन्सन्ट्रेटर ओळखले गेले.उमेदवार अँथ्रॅकनोज रेझिस्टन्स जनुक Lanr1, TanjilG_05042, मॉड्यूल 22 (Fig. 9) मध्ये आढळून आले आणि ते “GO:0044260 सेल्युलर मॅक्रोमोलेक्युलर मेटाबॉलिक प्रक्रिया” आणि “GO:0006355 ट्रान्सक्रिप्शनल टेम्प्लेटिंग डीएनए 2012, टॅन्क्रिप्शनल रेग्युलेशन” या शब्दांशी संबंधित आहे.जीन हीट स्ट्रेस ट्रान्सक्रिप्शन फॅक्टर A-4a (HSFA4a) एन्कोड करते.
"GO: 0006952 संरक्षण प्रतिसाद" या जैविक प्रक्रिया अटींसह मॉड्यूल्सच्या जनुक सह-अभिव्यक्तीचे भारित नेटवर्क विश्लेषण.qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 आणि TanjilG_27015) द्वारे विश्लेषित केलेल्या चार जनुकांना हायलाइट करण्यासाठी लिगेशन सरलीकृत केले गेले.
"GO: 0006355: ट्रान्सक्रिप्शनल रेग्युलेशन, DNA टेम्प्लेटिंग" आणि Lanr1 TanjilG_05042 उमेदवार अॅन्थ्रॅकनोज रेझिस्टन्स जनुक घेऊन जाणाऱ्या एका मॉड्यूलच्या जनुक सह-अभिव्यक्तीचे भारित नेटवर्क विश्लेषण.TanjilG_05042 जनुक आणि मध्यवर्ती TanjilG_01212 जनुक वेगळे करण्यासाठी लिगेशन सरलीकृत केले गेले.
ऑस्ट्रेलियात गोळा केलेल्या अँथ्रॅकनोज रेझिस्टन्स स्क्रिनिंगमध्ये असे दिसून आले आहे की बहुतेक लवकर सोडलेल्या जाती संवेदनाक्षम होत्या;काल्या, कोरोमप आणि मँडेलपचे वर्णन मध्यम प्रतिरोधक म्हणून केले गेले आहे, तर वोंगा, तंजिल आणि 83A:476 चे वर्णन अत्यंत प्रतिरोधक म्हणून केले गेले आहे 26,27,31.समान प्रतिरोधक अ‍ॅलील होते, ज्याला Lanr1 नियुक्त केले होते, आणि कोरोमप आणि मँडेलपचे वेगळे अ‍ॅलील होते, ज्याचे नाव AnMan10, 26, 39 होते, तर काल्या वेगळ्या अ‍ॅलीलवर जात होते., Lanr2.जर्मनीमध्ये ऍन्थ्रॅकनोज प्रतिकारासाठी स्क्रीनिंग केल्याने लॅनर1 व्यतिरिक्त, नामित LanrBo36 व्यतिरिक्त एक उमेदवार अॅलील असलेली प्रतिरोधक रेषा Bo7212 ओळखण्यात आली.
आमच्या अभ्यासात चाचणी केलेल्या जर्मप्लाझममध्ये लॅनर1 ऍलीलची फारच कमी वारंवारता (सुमारे 6%) दिसून आली.हे निरीक्षण Anseq3 आणि Anseq4 मार्कर वापरून पूर्व युरोपीय जर्मप्लाझमच्या तपासणीच्या परिणामांशी सुसंगत आहे, ज्याने दर्शविले की Lanr1 अॅलील फक्त दोन बेलारशियन ओळींमध्ये आहे.यावरून असे सूचित होते की लॅनर 1 अॅलील अद्याप स्थानिक प्रजनन कार्यक्रमांद्वारे मोठ्या प्रमाणावर वापरले जात नाही, ऑस्ट्रेलियाच्या विपरीत, जेथे ते मार्कर-सहाय्यित प्रजननासाठी प्रमुख एलीलांपैकी एक आहे.हे ऑस्ट्रेलियन अहवालाच्या तुलनेत युरोपियन फील्ड परिस्थितीत Lanr1 एलीलद्वारे प्रदान केलेल्या निम्न पातळीच्या प्रतिकारामुळे असू शकते.याव्यतिरिक्त, ऑस्ट्रेलियातील उच्च पर्जन्यमान असलेल्या भागात ऍन्थ्रॅकनोजच्या अभ्यासातून असे दिसून आले आहे की लॅनर 1 ऍलीलद्वारे मध्यस्थी केलेले प्रतिकार प्रतिसाद रोगजनक 19,42 च्या वाढीस आणि जलद विकासास अनुकूल हवामानाच्या परिस्थितीत प्रभावी असू शकत नाहीत.खरं तर, सध्याच्या अभ्यासात, अँथ्रॅकनोजची काही लक्षणे Lanr1 एलील असलेल्या जीनोटाइपमध्येही आढळून आली आहेत, जे सूचित करतात की सी. ल्युपिनीच्या विकासासाठी इष्टतम परिस्थितीत प्रतिकार नाहीसा होऊ शकतो.याव्यतिरिक्त, Anseq3 आणि Anseq4 मार्करच्या उपस्थितीचे चुकीचे सकारात्मक अर्थ लावणे, जे Lanr1 लोकसपासून अंदाजे 1 सेमी आहेत, 28,30,43 शक्य आहेत.
आमच्या अभ्यासात असे दिसून आले आहे की 83A:476, Lanr1 अ‍ॅलील घेऊन, C. lupini inoculation ला मोठ्या प्रमाणात ट्रान्सक्रिप्टोम रीप्रोग्रामिंगसह पहिल्या विश्‍लेषित टाइम पॉइंटवर (6 hpi) प्रतिसाद दिला, तर Mandelup मध्ये, AnMan अ‍ॅलेल वाहून, ट्रान्सक्रिप्टोमिक प्रतिसाद खूप नंतर दिसून आले.(24 ते 48 एचपी पर्यंत).संरक्षण प्रतिसादातील हे तात्पुरते भिन्नता रोगाच्या लक्षणांमधील फरकांशी संबंधित आहेत, प्रतिकाराला यशस्वी प्रतिसादासाठी लवकर रोगजनक ओळखण्याचे महत्त्व अधोरेखित करतात.वनस्पतींच्या ऊतींना संक्रमित करण्यासाठी, ऍन्थ्रॅक्स बीजाणूंना यजमान पृष्ठभागावर अनेक विकासात्मक टप्प्यांतून जावे लागते, ज्यामध्ये उगवण, पेशी विभाजन आणि ऍप्रेसोरियमची निर्मिती समाविष्ट असते.परिशिष्ट ही एक संसर्गजन्य रचना आहे जी यजमानाच्या पृष्ठभागाला जोडते आणि यजमान ऊतकांमध्ये प्रवेश सुलभ करते.अशा प्रकारे, वाटाणा अर्कातील C. gloeosporioides च्या बीजाणूंनी उष्मायनाच्या 75-90 मिनिटांनंतर केंद्रकांचे प्रथम विभाजन, 90-120 मिनिटांनंतर जंतूची नळी तयार होणे आणि 4 तासांनंतर दाबणे 45 दर्शविले.आंबा सी. ग्लोओस्पोरिओइड्सने उष्मायनाच्या 3 तासांनंतर 40% पेक्षा जास्त कोनिडियल उगवण आणि 4 तासांनंतर सुमारे 20% ऍप्रेसर तयार केले.C. gloeosporioides च्या विषाणू-संबंधित CAP20 जनुकाने 4 तास 46 मिनिटांनंतर CAP20 प्रथिने उच्च सांद्रता असलेल्या एवोकॅडो पृष्ठभागाच्या मेणमध्ये 3.5 तास उष्मायनानंतर एपिफाइट-फॉर्मिंग कोनिडियामध्ये ट्रान्सक्रिप्शनल क्रियाकलाप दर्शविला.त्याचप्रमाणे, सी. ट्रायफोली मधील मेलेनिन बायोसिंथेसिस जनुकांची क्रिया 2 तासांच्या उष्मायनात प्रेरित होते आणि त्यानंतर 1 तासानंतर ऍप्रेसोरियम तयार होते.पानांच्या ऊतींच्या अभ्यासातून असे दिसून आले आहे की C. acutatum सह टोमॅटोचे प्रथम दडपण 8 hpi वर असते, तर C. coccodes सह टोमॅटोचे प्रथम दाब 4 hpi48,49 वर असते.Colletotrichum spp च्या टाइम स्केलशी मुख्यत्वे सुसंगत.संसर्गजन्य प्रक्रिया.83A:476 ला जलद संरक्षण प्रतिसाद या ओळीत वनस्पती प्रतिरोधकता आणि इफेक्टर-ट्रिगर्ड इम्युनिटी (ETI) जनुकांचा सहभाग सूचित करतात, तर मँडेलपचे विलंबित प्रतिसाद मायक्रो-संबंधित आण्विक पॅटर्न-ट्रिगर्ड इम्युनिटी (MTI) गृहीतकांना समर्थन देतात 50. Mandelup आणि Mandelup 763A ला लवकर प्रतिसाद.विलंबित प्रतिसादातील अप-किंवा डाउन-रेग्युलेटेड जनुकांमधील आंशिक आच्छादन देखील या संकल्पनेला समर्थन देते, कारण ETI हा एक प्रवेगक आणि वर्धित MTI प्रतिसाद मानला जातो जो संक्रमणाच्या ठिकाणी प्रोग्राम केलेल्या पेशींच्या मृत्यूमध्ये समाप्त होतो, ज्याला अॅनाफिलेक्टिक शॉक 51,52 म्हणून ओळखले जाते.
जीन ऑन्टोलॉजी GO:0006952 "डिफेन्स रिस्पॉन्स" या अतिप्रस्तुत शब्दाला श्रेय दिलेली बहुतेक जीन्स तणाव-प्रेरित उपवास संदेशाचे 11 समरूप आहेत 22 प्रोटीन (एसएएम22 प्रमाणे) आणि सात प्रमुख लेटेक्स प्रोटीन-लाइक्स (एमएलपी).-प्रथिने 31, 34, 43 आणि 423 प्रमाणे अनुक्रम समानता दर्शविली.SAM22-सदृश जनुकांनी लक्षणीय सक्रियता दर्शविली जी जास्त काळ टिकली, अॅन्थ्रॅकनोज प्रतिरोधक पातळी (83A:476 आणि बोरेगिन) वाढली.तथापि, एमएलपी सारखी जीन्स फक्त उमेदवार रेझिस्टन्स अॅलील (6 hpi वर 83A:476/Lanr1 आणि 24 hpi वर Mandelup/AnMan) वाहून नेणाऱ्या ओळींमध्ये कमी केली गेली.हे लक्षात घेतले पाहिजे की सर्व ओळखले गेलेले SAM22-सदृश होमोलॉग्स अंदाजे 105 kb पसरलेल्या जनुक क्लस्टरमधून उद्भवतात, तर MLP सारखी जीन्स जीनोमच्या स्वतंत्र क्षेत्रांमधून उद्भवतात.अशा SAM22-सदृश जनुकांचे समन्वित सक्रियकरण आमच्या पूर्वीच्या NLL प्रतिकारशक्तीच्या डायपोर्थेटॉक्सिका इनोक्यूलेशनच्या अभ्यासात आढळून आले होते, जे सूचित करते की ते संरक्षण प्रतिसादाच्या क्षैतिज घटकांमध्ये सामील आहेत.सॅलिसिलिक ऍसिड, फंगल इंड्यूसर्स किंवा हायड्रोजन पेरोक्साईडसह दुखापत किंवा उपचारांसाठी SAM22 सारख्या जनुकांच्या सकारात्मक प्रतिसादाच्या अहवालाद्वारे देखील या निष्कर्षाला समर्थन मिळते.
MLP सारखी जीन्स अनेक वनस्पतींच्या प्रजातींमध्ये जिवाणू, विषाणूजन्य आणि रोगजनक बुरशीजन्य संसर्गासह विविध अजैविक आणि जैविक ताणांना प्रतिसाद देत असल्याचे दिसून आले आहे55.वनस्पती आणि रोगजनक यांच्यातील काही परस्परसंवादांना प्रतिसादाची दिशा जोरदारपणे वाढण्यापासून (म्हणजे, व्हर्टिसिलियम डहलियाच्या कपाशीच्या प्रादुर्भावाच्या वेळी) लक्षणीयरीत्या कमी होण्यापर्यंत (म्हणजे, अल्टरनेरिया एसपीपीने सफरचंदाच्या झाडाच्या संसर्गानंतर) ५६,५७.एवोकॅडोच्या संरक्षणादरम्यान एफ. नायगर संसर्ग आणि सफरचंद झाडाच्या बोट्रोस्फेरिया बेरेनजेरियाना एफच्या संसर्गादरम्यान एमएलपी-सदृश 423 जनुकाचे लक्षणीय घट दिसून आले आहे.cn.पिरिकोला आणि अल्टरनेरिया अल्टरनाटा हे ऍपल पॅथोटाइप आहेत 58,59.याव्यतिरिक्त, ऍपल कॉलीमध्ये एमएलपी सारख्या 423 जनुकाची जास्त एक्सप्रेस होते ज्यामध्ये प्रतिकार-संबंधित जनुकांची कमी अभिव्यक्ती होती आणि ते बुरशीजन्य संसर्गास अधिक संवेदनाक्षम होते.Fusarium oxysporum f नंतर, MLP सारखे 423 जनुक देखील प्रतिरोधक सामान्य बीन जर्मप्लाझममध्ये दाबले गेले.cn.बीन संसर्ग 60.
आमच्या RNA-seq अभ्यासात ओळखले गेलेले PR-10 कुटुंबातील इतर सदस्य अपरेग्युलेशनच्या प्रतिसादात LlR18A आणि LlR18B जीन्स होते, तसेच लिपिड ट्रान्सफर प्रोटीन DIR1 साठी अपरेग्युलेटेड (1 जीन) किंवा डाउनरेग्युलेट (3 जीन्स) जनुक होते..याव्यतिरिक्त, WGCNA या मॉड्यूलमध्ये LlR18B जनुकाला एक केंद्र म्हणून हायलाइट करते, जे लसीकरणासाठी अत्यंत संवेदनाक्षम आहे आणि अनेक संरक्षणात्मक प्रतिसाद जीन्स आहेत.LlR18A आणि LlR18B जनुके रोगजनक बॅक्टेरियाच्या प्रतिसादात पिवळ्या ल्युपिनच्या पानांमध्ये, तसेच डी. टॉक्सिका टोचल्यानंतर NLL देठांमध्ये प्रेरित होते, तर या जनुकांचे तांदूळ समरूपता, RSOsPR10, फंगल ऍसिडच्या संसर्गामुळे वेगाने प्रेरित होते. DIR1 जनुक नॉन-स्पेसिफिक लिपिड ट्रान्सपोर्ट प्रोटीन्स एन्कोड करतो जे सिस्टीमिक ऍक्वायर्ड रेझिस्टन्स (SAR) च्या प्रारंभासाठी आवश्यक असतात.संरक्षणात्मक प्रतिक्रियांच्या विकासासह, DIR1 प्रथिने संसर्गाच्या केंद्रस्थानापासून दूरच्या अवयवांमध्ये एसएआर प्रवृत्त करण्यासाठी फ्लोएमद्वारे वाहून नेले जाते.विशेष म्हणजे, TanjilG_02313 DIR1 जनुक 84A:476 आणि लोकसंख्या 22660 या ओळींमध्ये प्रथमच बिंदूवर लक्षणीयरित्या प्रेरित झाले, परंतु अँथ्रॅकनोज प्रतिरोधक क्षमता केवळ 84A:476 ओळीत यशस्वीपणे विकसित झाली.हे NLL मधील DIR1 जनुकाचे काही सबफंक्शनलायझेशन सूचित करू शकते, कारण उर्वरित तीन होमोलॉग्सने 6 hpi वर फक्त 83A:476 ओळीत टोचण्याला प्रतिसाद दिला आणि हा प्रतिसाद खालच्या दिशेने निर्देशित केला गेला.
आमच्या अभ्यासात, "GO:0055114 Redox प्रक्रिया" नावाच्या जैविक प्रक्रियेशी संबंधित सर्वात सामान्य घटक म्हणजे सायटोक्रोम P450 प्रोटीन, पेरोक्सिडेस, लिनोलिक ऍसिड 9S-/13S-लिपॉक्सीजेनेस आणि 1-अमीनोसायक्लोप्रोपेन-1-कार्बोक्झिलिक ऍसिड ऑक्सिडेस.याव्यतिरिक्त, आमची WGCNA HSFA4a homologue ला Lanr1 रेझिस्टन्स जनुक उमेदवार TanjilG_05042 सारखे मॉड्यूल वाहून नेणारे केंद्र म्हणून परिभाषित करते.HSFA4a हा वनस्पतींमधील विभक्त प्रतिलेखनाच्या रेडॉक्स-आश्रित नियमनाचा एक घटक आहे.
सायटोक्रोम P450 प्रथिने हे ऑक्सिडोरेक्टेसेस आहेत जे प्राथमिक आणि दुय्यम चयापचय मध्ये NADPH आणि/किंवा O2-आश्रित हायड्रॉक्सिलेशन प्रतिक्रिया उत्प्रेरित करतात, ज्यामध्ये xenobiotics च्या चयापचय, तसेच हार्मोन्स, फॅटी ऍसिडस्, स्टेरॉल्स, सेल भिंतीचे घटक, बायोपॉलिमर, आणि 6 9 च्या अभ्यासातील बायोपॉलिमर, आणि 9 च्या संमिश्रतेचे संरक्षण होते. मोठ्या संख्येने बदललेले समरूप (37) आणि विशिष्ट जनुकांमधील प्रतिसाद नमुन्यांमधील फरक, वरच्या दिशेने पुनरावृत्ती दर्शविल्यामुळे प्लांट सायटोक्रोम P450 फंक्शन -10.6 लॉग2 (फोल्ड चेंज) वरून 5.7 पर्यंत कमी केले गेले..एवढ्या मोठ्या प्रथिनांच्या सुपरफॅमिलीमध्ये NLL जनुकांचे पुटेटिव्ह जैविक कार्य स्पष्ट करण्यासाठी फक्त RNA-seq डेटा वापरणे अत्यंत सट्टा असेल.तथापि, हे लक्षात घेण्यासारखे आहे की काही सायटोक्रोम P450 जीन्स रोगजनक बुरशी किंवा बॅक्टेरियाच्या वाढीव प्रतिकाराशी संबंधित आहेत, ज्यात एलर्जीक प्रतिक्रियांचे योगदान 69,70,71 आहे.
वर्ग III पेरोक्सिडेस हे बहु-कार्यक्षम वनस्पती एन्झाईम आहेत जे वनस्पतींच्या वाढ आणि विकासादरम्यान चयापचय प्रक्रियांच्या विस्तृत श्रेणीत गुंतलेले असतात, तसेच क्षारता, दुष्काळ, उच्च प्रकाशाची तीव्रता आणि रोगजनक आक्रमण 72 सारख्या पर्यावरणीय ताणांना प्रतिसाद म्हणून.स्टायलोसॅन्थेस ह्युमिलिस आणि सी. ग्लोओस्पोरिओइड्स, लेन्स क्युलिनरिस आणि सी. ट्रंकॅटम, फेसेओलस वल्गारिस आणि सी. लिंडेमुथियानम, कुकुमिस सॅटिव्हस आणि सी. लॅजेनेरियम 73,774, 73, 76, 73, 74, 2000बुरशीने वनस्पतीच्या ऊतीमध्ये प्रवेश करण्यापूर्वी, प्रतिसाद खूप जलद असतो, कधीकधी 4 HPI वर देखील.पेरोक्सिडेस जनुकाने डी. टॉक्सिका एनएलएल टोचण्याला देखील प्रतिसाद दिला.ऑक्सिडेटिव्ह स्फोटांचे नियमन करण्यासाठी किंवा ऑक्सिडेटिव्ह तणाव दूर करण्यासाठी त्यांच्या विशिष्ट कार्यांव्यतिरिक्त, पेरोक्सिडेसेस विशिष्ट संयुगांच्या लिग्निफिकेशन, सब्यूनिट किंवा क्रॉस-लिंकिंग दरम्यान सेल भिंतीच्या मजबुतीवर आधारित भौतिक अडथळे निर्माण करून रोगजनकांच्या वाढीस व्यत्यय आणू शकतात.या कार्याचे श्रेय सिलिकोमध्ये TanjilG_03329 जनुकास दिले जाऊ शकते जे पुटेटिव्ह लिग्निन-फॉर्मिंग आयन पेरोक्सिडेस एन्कोडिंग करते जे 6 HPI वर 83A:476 प्रतिरोधक रेषेमध्ये आमच्या अभ्यासात लक्षणीयरीत्या अपरेग्युलेट केले गेले होते, परंतु प्रतिसाद न देणाऱ्या इतर स्ट्रेन आणि टाइम पॉइंट्समध्ये नाही.
लिनोलिक ऍसिडचे 9S-/13S-लिपॉक्सीजनेज हे लिपिड जैवसंश्लेषण78 च्या ऑक्सिडेटिव्ह मार्गाची पहिली पायरी आहे.या मार्गाच्या उत्पादनांमध्ये वनस्पतींच्या संरक्षणामध्ये अनेक कार्ये आहेत, ज्यामध्ये कॉलोज आणि पेक्टिन ठेवींच्या निर्मितीद्वारे सेल भिंत मजबूत करणे आणि प्रतिक्रियाशील ऑक्सिजन प्रजाती79,80,81,82,83 च्या निर्मितीद्वारे ऑक्सिडेटिव्ह तणावाचे नियमन यांचा समावेश आहे.सध्याच्या अभ्यासात, लिनोलिक ऍसिड 9S-/13S-lipoxygenase ची अभिव्यक्ती सर्व स्ट्रेनमध्ये बदलण्यात आली होती, परंतु संवेदनाक्षम लोकसंख्येमध्ये 22660, वेगवेगळ्या वेळी अपरेग्युलेशन प्रचलित होते, तर प्रतिरोधक Lanr1 आणि AnMan allele वाहून नेणार्‍या स्ट्रॅन्समध्ये, हे लिपॉक्सीजन लेयरच्या विविधतेच्या संरक्षणावर भर देते. .
1-अमीनोसायक्लोप्रोपेन-1-कार्बोक्झिलेट ऑक्सिडेस (ACO) होमोलॉग लक्षणीयरीत्या अपरेग्युलेट (9 जीन्स) किंवा डाउनरेग्युलेट (2 जीन्स) होते जेव्हा ल्युपिनसह लसीकरण केले जाते.दोन अपवादांसह, हे सर्व प्रतिसाद 6 hp वर आले.83A:476 वर.एसीओ प्रथिनांनी मध्यस्थी केलेली एन्झाईमॅटिक प्रतिक्रिया इथिलीन उत्पादनातील दर-मर्यादित पायरी आहे आणि म्हणून ती अत्यंत नियंत्रित आहे84.इथिलीन हा एक वनस्पती संप्रेरक आहे जो वनस्पतींच्या विकासाचे नियमन करण्यासाठी आणि अजैविक आणि जैविक तणावाच्या परिस्थितीला प्रतिसाद देण्यासाठी विविध भूमिका बजावते.ACO ट्रान्सक्रिप्शनचे इंडक्शन आणि इथिलीन सिग्नलिंग पाथवे सक्रिय करणे हे रिऍक्टिव्ह ऑक्सिजन प्रजाती आणि फायटोअलेक्झिन्सच्या उत्पादनाचे नियमन करून हेमिबायोट्रॉफिक बुरशी ओरिझा ओरिझाला भाताचा प्रतिकार वाढविण्यात गुंतलेले आहे.M. oryzae आणि C. lupini88,89 यांच्यात आढळणारी पानांच्या संसर्गाची प्रक्रिया, या अभ्यासात नोंदवलेल्या 83A:476 रेषेतील ACO समरूपांच्या लक्षणीय वाढीच्या पार्श्‍वभूमीवर, एनएलएल ऍन्थ्रॅकनोज इथिलीनला मोनोपथ सिग्नलिंग स्टेपमध्ये प्रतिकार करण्याची शक्यता बदलते.
सध्याच्या अभ्यासात, 83A:476 मध्ये 6 hpi आणि मँडेलूपमध्ये 48 hpi आणि 22660 लोकसंख्येमध्ये प्रकाशसंश्लेषणाशी संबंधित अनेक जनुकांचे मोठ्या प्रमाणावर दडपण दिसून आले.या बदलांची व्याप्ती आणि प्रगती पातळीच्या प्रमाणात आहे.या प्रयोगात अँथ्रॅकनोजचा प्रतिकार दिसून आला.अलीकडे, रोगजनक बॅक्टेरिया आणि बुरशीसह, वनस्पती-रोगकारक परस्परसंवादाच्या अनेक मॉडेल्समध्ये प्रकाशसंश्लेषण-संबंधित प्रतिलेखांचे मजबूत आणि लवकर दडपण नोंदवले गेले आहे.घाई (काही परस्परसंवादांमध्ये 2 HPI पासून) आणि संसर्गाच्या प्रतिसादात प्रकाशसंश्लेषणाशी संबंधित जनुकांचे जागतिक दडपण, प्रतिक्रियाशील ऑक्सिजन प्रजातींच्या तैनातीवर आधारित वनस्पती प्रतिकारशक्तीला चालना देऊ शकते आणि ऍलर्जीक प्रतिक्रिया 90,94 मध्ये मध्यस्थी करण्यासाठी सॅलिसिलिक ऍसिड मार्गाशी त्यांच्या परस्परसंवादावर आधारित आहे.
शेवटी, सर्वात प्रतिरोधक वंशासाठी (83A:476) प्रस्तावित संरक्षण प्रतिसाद यंत्रणेमध्ये R जनुकाद्वारे जलद रोगजनक ओळख (शक्यतो TIR-NBS-LRR TanjilG_05042) आणि ऍलर्जीक प्रतिसाद-मध्यस्थ सॅलिसिलिक ऍसिड आणि एथिलीन एस-एआर सिग्नलिंग, फॉलोरेंज-एआर.क्रिया DIR-1 प्रथिने समर्थित आहे.हे लक्षात घेतले पाहिजे की सी. ल्युपिनी संसर्गाचा बायोट्रॉफिक कालावधी खूप लहान असतो (अंदाजे 2 दिवस), त्यानंतर नेक्रोटिक वाढ ९५.या टप्प्यांमधील संक्रमण नेक्रोसिस आणि इथिलीन-इंड्युसिबल प्रोटीनच्या अभिव्यक्तीशी संबंधित असू शकते जे यजमान वनस्पतींमध्ये अतिसंवेदनशीलता प्रतिक्रियांसाठी ट्रिगर म्हणून कार्य करतात.त्यामुळे, बायोट्रॉफिक स्टेजवर C. ल्युपिनी यशस्वीपणे कॅप्चर करण्याची वेळ खूपच अरुंद आहे.6 hpi वर 83A:476 मध्ये आढळलेल्या रेडॉक्स आणि प्रकाशसंश्लेषणाशी संबंधित जनुकांचे पुनर्प्रोग्रामिंग हे बुरशीजन्य हायफेच्या प्रगतीशी सुसंगत आहे आणि बायोट्रॉफिक टप्प्यावर यशस्वी संरक्षणात्मक प्रतिसादाच्या विकासाची घोषणा करते.मँडेलप आणि 22660 लोकसंख्येच्या ट्रान्सक्रिप्टोमिक प्रतिसादांना नेक्रोटिक वाढीकडे जाण्यापूर्वी बुरशी पकडण्यासाठी खूप विलंब होऊ शकतो, तथापि, मँडेलप 22660 लोकसंख्येपेक्षा अधिक प्रभावी असू शकते कारण PR-10 प्रोटीनचे तुलनेने वेगवान नियमन क्षैतिज प्रतिकारांना प्रोत्साहन देते.
कॅनोनिकल आर जनुकाद्वारे चालविलेली ETI, ऍन्थ्रॅकनोजला बीनच्या प्रतिकारासाठी एक सामान्य यंत्रणा असल्याचे दिसते.अशाप्रकारे, मेडिकागो ट्रंकॅटुला या मॉडेल शेंगामध्ये, TIR-NBS-LRR97 वनस्पती R जनुक वर्गाचा सदस्य असलेल्या RCT1 जनुकाद्वारे ऍन्थ्रॅकनोजला प्रतिकार प्रदान केला जातो.हे जनुक अतिसंवेदनशील वनस्पतींमध्ये हस्तांतरित केल्यावर अल्फाल्फामध्ये ब्रॉड-स्पेक्ट्रम अँथ्रॅकनोज प्रतिरोध देखील प्रदान करते.सामान्य बीन (पी. वल्गारिस) मध्ये, आजपर्यंत दोन डझनहून अधिक अँथ्रॅकनोज प्रतिरोधक जनुकांची ओळख पटली आहे.यापैकी काही जनुके अशा प्रदेशात आढळतात ज्यामध्ये कोणत्याही प्रामाणिक R जनुकांचा अभाव असतो, तथापि इतर अनेक TIR-NBS-LRRs99 सह NBS-LRR जनुक क्लस्टर वाहून नेणाऱ्या गुणसूत्रांच्या काठावर असतात.जीनोम-व्यापी SSR अभ्यासाने NBS-LRR जनुकाचा कॉमन बीनमधील ऍन्थ्रॅकनोज रेझिस्टन्सशी संबंध असल्याची पुष्टी केली.व्हाईट ल्युपिन 101 मधील प्रमुख अँथ्रॅकनोज रेझिस्टन्स लोकस असलेल्या जीनोमिक प्रदेशात कॅनोनिकल आर जनुक देखील आढळून आले.
आमचे कार्य असे दर्शविते की वनस्पती संसर्गाच्या सुरुवातीच्या टप्प्यावर (शक्यतो 12 hpi नंतर) सक्रिय झालेली तात्काळ प्रतिकार प्रतिक्रिया, कोलेलोट्रिचम ल्युपिनी या रोगजनक बुरशीमुळे होणार्‍या अँथ्रॅकनोजपासून अरुंद पाने असलेल्या ल्युपिनचे प्रभावीपणे संरक्षण करते.उच्च थ्रूपुट सिक्वेन्सिंगचा वापर करून, आम्ही एनएलएल वनस्पतींमध्ये अँथ्रॅकनोज प्रतिरोधक जनुकांचे भिन्न अभिव्यक्ती प्रोफाइल प्रदर्शित केले ज्यामध्ये Lanr1 आणि AnMan प्रतिरोधक जनुकांनी मध्यस्थी केली.यशस्वी संरक्षणामध्ये रेडॉक्स, प्रकाशसंश्लेषण आणि पॅथोजेनेसिसमध्ये गुंतलेल्या प्रथिनांसाठी जनुके काळजीपूर्वक तयार करणे समाविष्ट असते ज्यात वनस्पतीचा रोगजनकांशी पहिला संपर्क होतो.तत्सम संरक्षणात्मक प्रतिक्रिया, परंतु वेळेत उशीर झाल्यामुळे, रोगांपासून वनस्पतींचे संरक्षण करण्यासाठी कमी प्रभावी आहेत.Lanr1 जनुकाद्वारे मध्यस्थी केलेला ऍन्थ्रॅक्स प्रतिकार R जनुकाच्या ठराविक जलद प्रतिसादासारखा असतो (प्रभावकारक-ट्रिगर प्रतिकारशक्ती), तर AnMan जनुक बहुधा क्षैतिज प्रतिसाद (सूक्ष्मजीव-संबंधित आण्विक पॅटर्नद्वारे ट्रिगर केलेली प्रतिकारशक्ती) प्रदान करते, मध्यम पातळीवर टिकावूपणा प्रदान करते.
अँथ्रॅकनोज मार्करसाठी स्क्रिन करण्यासाठी वापरल्या जाणार्‍या 215 NLL ओळींमध्ये 74 जाती, 60 ओळी क्रॉसिंग किंवा प्रजनन करून मिळवलेल्या, 5 उत्परिवर्ती आणि 76 जंगली किंवा मूळ जर्मप्लाझम्स यांचा समावेश होतो.या ओळी 17 देशांमधून आल्या, प्रामुख्याने पोलंड (58), स्पेन (47), जर्मनी (27), ऑस्ट्रेलिया (26), रशिया (19), बेलारूस (7), इटली (5) आणि इतर ओळी.10 देशांमधून.संचामध्ये संदर्भ प्रतिरोधक रेषा देखील समाविष्ट आहेत: 83A:476, तंजिल, लॅनर1 अ‍ॅलेल वाहून नेणारी वोंगा आणि अनमन अ‍ॅलील वाहून नेणारी मांडेलप.पॉझ्नान प्लांट ब्रीडिंग लिमिटेड, वायट्रोवो, पोलंड (पूरक सारणी S1) द्वारे देखरेख केलेल्या युरोपियन ल्युपिन जेनेटिक रिसोर्स डेटाबेसमधून ओळी प्राप्त केल्या गेल्या आहेत.
रोपे नियंत्रित परिस्थितीत उगवली गेली (फोटोपीरियड 16 तास, तापमान दिवसा 25°C आणि रात्री 18°C).दोन जैविक प्रतिकृतींचे विश्लेषण केले गेले.प्रोटोकॉलनुसार DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany) वापरून तीन आठवडे जुन्या पानांपासून डीएनए वेगळे केले गेले.पृथक DNA ची गुणवत्ता आणि एकाग्रतेचे मूल्यमापन स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक पद्धतींद्वारे केले गेले (NanoDrop 2000; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA).AnManM1 मार्कर अॅन्थ्रॅकनोज रेझिस्टन्स जनुक AnMan (cv. Mandelup वरून व्युत्पन्न केलेले) आणि Anseq3 आणि Anseq4 चे मार्कर Lanr1 (cv. Tanjil वरून व्युत्पन्न) चे 11,26,28 विश्लेषण करण्यात आले.प्रतिरोधक अ‍ॅलीलसाठी होमोजिगोट्सला “1″, संवेदनाक्षम – “0″ म्हणून, आणि हेटरोझायगोट्स – 0.5 म्हणून स्कोअर केले गेले.
AnManM1, AnSeq3 आणि AnSeq4 मार्करच्या स्क्रीनिंगच्या परिणामांवर आणि अंतिम फॉलो-अप प्रयोगांसाठी बियाण्यांच्या उपलब्धतेच्या आधारे, 50 NLL रेषा अँथ्रॅकनोज रेझिस्टन्स फेनोटाइपिंगसाठी निवडल्या गेल्या.दिवसा 22 डिग्री सेल्सिअस आणि रात्री 19 डिग्री सेल्सिअस तापमान श्रेणीसह 14 तासांच्या फोटोपीरियडसह संगणक नियंत्रित ग्रीनहाऊसमध्ये डुप्लिकेटमध्ये विश्लेषण केले गेले.पेरणीपूर्वी बियाणे स्क्रॅच केले जाते (भ्रूणाच्या विरुद्ध बाजूला असलेल्या बियांचे आवरण धारदार ब्लेडने कापून) बियाणे कोट खूप कठीण असल्यामुळे बियाणे सुप्त होऊ नये म्हणून आणि एकसमान उगवण सुनिश्चित करण्यासाठी.निर्जंतुक माती (TS-1 REC 085 Medium Basic, Klasmann-Deilmann Polska, Warsaw, Poland) असलेल्या भांडीमध्ये (11 × 11 × 21 सें.मी.) झाडे उगवली गेली.ग्रेटर पोलंड (52° 27′ 42″ N 17° 04′ 05″ E) येथील वेर्झेनित्सा येथील शेतात उगवलेल्या अरुंद-पानांच्या ल्युपिन वनस्पतींच्या देठापासून 1999 मध्ये उगवलेल्या कोलेटोट्रिचम ल्युपिनी कोल-08 स्ट्रेनसह लसीकरण करण्यात आले.क्षेत्र मिळवा.स्पोर्युलेशन प्रवृत्त करण्यासाठी 21 दिवसांसाठी काळ्या प्रकाशाखाली 20 डिग्री सेल्सिअस तापमानात एसएनए माध्यमात पृथक्करण केले गेले.पेरणीनंतर चार आठवड्यांनंतर, जेव्हा झाडे 4-6 पानांच्या टप्प्यावर पोहोचली होती, तेव्हा 0.5 x 106 कोनिडिया प्रति मिली या प्रमाणात कोनिडियाच्या सस्पेन्शनसह फवारणी करून लसीकरण केले जाते.लसीकरणानंतर, कोनिडियाची उगवण आणि संसर्ग प्रक्रिया सुलभ करण्यासाठी सुमारे 98% आर्द्रता आणि 25 डिग्री सेल्सिअस तापमानात झाडांना 24 तास अंधारात ठेवण्यात आले.त्यानंतर 22°C दिवस/19°C रात्र आणि 70% आर्द्रतेवर 14-तासांच्या फोटोपीरियडमध्ये रोपे उगवली गेली.रोगाचा स्कोअर लसीकरणानंतर 22 दिवसांनी तयार केला गेला आणि 0 (प्रतिरक्षा) ते 9 (अत्यंत संवेदनाक्षम) स्टेम आणि पानांवर नेक्रोटिक जखमांच्या उपस्थिती किंवा अनुपस्थितीवर अवलंबून असतो.याव्यतिरिक्त, स्कोअर केल्यानंतर, वनस्पतींचे वजन मोजले गेले.मार्कर जीनोटाइप आणि रोग फिनोटाइपमधील संबंध बिंदू दोन-अनुक्रम सहसंबंध म्हणून मोजले गेले (अँथ्रॅकनोज प्रतिरोधक फिनोटाइपच्या विश्लेषणासाठी रेषांच्या संचामध्ये हेटरोझिगस मार्करची अनुपस्थिती).