Pemerolehan dan pengedaran nutrien menyepadukan ciri mencari makan serangga dan sejarah hidup. Untuk mengimbangi kekurangan dalam nutrien tertentu pada peringkat kehidupan yang berbeza, serangga boleh memperoleh nutrien ini melalui pemakanan tambahan, contohnya, dengan memakan rembesan vertebrata dalam proses yang dikenali sebagai lopak. Nyamuk Anopheles arabiani nampaknya dan kedua-duanya kekurangan nutrien untuk kajian ini, dan memerlukan nutrient semula. menilai sama ada An. arabiensis agitasi pada air kencing lembu untuk pemerolehan nutrien meningkatkan ciri sejarah hidup.
Pastikan ia selamat.arabiensis tertarik dengan bau air kencing lembu segar, 24 jam, 72 jam dan 168 jam, dan betina pencari hos dan diberi makan darah (48 jam selepas makan darah) diukur dalam olfaktorometer tiub-Y, dan wanita hamil dinilai untuk analisis biofisiologi gabungan dan A digunakan untuk analisis kimia bertelur. air kencing lembu pada keempat-empat kelas umur. Campuran sintetik sebatian bioaktif dinilai dalam tiub-Y dan ujian lapangan. Untuk menyiasat air kencing lembu dan urea sebatian nitrogen utamanya sebagai diet tambahan yang berpotensi untuk vektor malaria, parameter pemakanan dan ciri sejarah hayat diukur. Perkadaran nyamuk betina dan jumlah air kencing dan air kencing betina yang diserap telah dinilai. kelangsungan hidup, penerbangan tertambat, dan pembiakan.
Cari darah dan makanan perumah.Dalam kajian makmal dan lapangan, orang Arab tertarik kepada bau semula jadi dan sintetik air kencing lembu segar dan tua. Wanita hamil tidak peduli terhadap tindak balas air kencing lembu di tempat bertelur. Wanita pencari hos dan penghisap darah secara aktif menyerap air kencing lembu dan urea dan memperuntukkan sumber-sumber ini mengikut keadaan fizik, penerbangan atau kelangsungan hidup. pembiakan.
Pemerolehan dan pengedaran air kencing lembu Anopheles arabinis untuk ciri sejarah kehidupan yang lebih baik. Pemakanan tambahan air kencing lembu menjejaskan kapasiti vektor secara langsung dengan meningkatkan kemandirian harian dan kepadatan vektor, dan secara tidak langsung dengan mengubah aktiviti penerbangan dan oleh itu perlu dipertimbangkan dalam model akan datang.
Pemerolehan dan pengedaran nutrien menyepadukan ciri mencari makan serangga dan sejarah hidup [1,2,3]. Serangga dapat memilih dan memperoleh makanan dan melakukan pemakanan pampasan berdasarkan ketersediaan makanan dan keperluan nutrien [1, 3]. Pengagihan nutrien bergantung pada proses sejarah hidup dan mungkin membawa kepada keperluan yang berbeza untuk kualiti dan kuantiti diet dalam kompaun hidup serangga yang berbeza. nutrien, serangga boleh memperoleh nutrien ini melalui makanan tambahan, seperti pada lumpur, pelbagai najis dan rembesan vertebrata, dan bangkai, proses yang dikenali sebagai lopak [2]. Walaupun pelbagai spesies rama-rama dan rama-rama diterangkan terutamanya, lubang berair juga berlaku dalam pesanan serangga lain, dan tarikan kepada dan memberi makan kepada jenis sumber, 4, kesan yang ketara dan lain-lainnya [5] 6] ,7].Nyamuk malaria Anopheles gambiae sensu lato (sl) muncul sebagai orang dewasa yang 'kurang zat' [8], jadi penyiraman mungkin memainkan peranan penting dalam ciri-ciri sejarah hidupnya, tetapi tingkah laku ini setakat ini telah diabaikan . Penggunaan pergolakan sebagai cara untuk meningkatkan pengambilan nutrien dalam kenderaan penting ini mungkin memerlukan perhatian epidemiologi yang penting kerana ini memerlukan perhatian epidemiologi yang penting.
Pengambilan nitrogen dalam nyamuk Anopheles betina dewasa adalah terhad disebabkan oleh rizab kalori yang rendah yang dibawa dari peringkat larva dan penggunaan makanan darah yang tidak cekap [9]. Ann.gambiae sl betina biasanya mengimbanginya dengan menambah makanan darah tambahan [10, 11], dengan itu meletakkan lebih ramai orang berisiko tinggi untuk dijangkiti penyakit ini dan berisiko lebih tinggi daripada penyakit ini. nyamuk boleh menggunakan makanan tambahan najis vertebrata untuk memperoleh sebatian nitrogen yang meningkatkan penyesuaian dan kebolehgerakan penerbangan, seperti yang ditunjukkan oleh serangga lain [2]. Dalam hal ini, daya tarikan yang kuat dan berbeza bagi salah satu spesies adik-beradik dalam kompleks An.The Gambian sl spesies, Anopheles arabinis, segar dan tua lembu air kencing [12],13,14 adalah menarik dalam air kencing perumah Anopheles,13,14. keutamaan dan diketahui berkait dengan dan memberi makan kepada lembu.Air kencing lembu ialah sumber yang kaya dengan sebatian nitrogen, dengan urea menyumbang 50-95% daripada jumlah nitrogen dalam air kencing segar [15, 16]. Apabila air kencing lembu semakin tua, mikroorganisma menggunakan sumber ini untuk mengurangkan kerumitan sebatian nitrogen dan alkalori dalam tempoh 24 jam, peningkatan pesat nitrogen dalam amoniak [15]. mikroorganisma (kebanyakan daripadanya menghasilkan sebatian toksik kepada nyamuk) berkembang maju [15], yang mungkin Ann.arabiensis betina lebih disukai tertarik kepada air kencing berumur 24 jam atau kurang [13, 14].
Dalam kajian ini, hos dan Ans yang diberi makan darah telah dicari. Semasa kitaran gonadotropin pertamanya, arabiensis telah dinilai untuk pemerolehan sebatian nitrogen, termasuk urea, dengan mencampurkan air kencing.Seterusnya, satu siri eksperimen telah dijalankan untuk menilai bagaimana nyamuk betina memperuntukkan sumber nutrien yang berpotensi ini untuk kemandirian yang lebih baik, pembiakan air kencing dan pembiakan yang lebih segar. dinilai untuk menentukan sama ada ini memberikan petunjuk yang boleh dipercayai untuk tuan rumah dan An yang diberi makan darah. Dalam pencarian mereka untuk sumber pemakanan yang berpotensi ini, arabiensis menemui korelasi kimia di sebalik daya tarikan pembezaan yang diperhatikan. Campuran bau sintetik sebatian organik meruap (VOC) yang dikenal pasti dalam air kencing berumur 24 jam telah dinilai selanjutnya di bawah keadaan lapangan, memanjangkan keputusan yang diperolehi di bawah keadaan bau air kencing yang berbeza dan menunjukkan bau air kencing yang berbeza pada keadaan makmal yang berbeza. Tarikan nyamuk.Hasil yang diperolehi mengesahkan bahawa An. arabiensis memperoleh dan mengedarkan sebatian nitrogen yang terdapat dalam air kencing vertebrata untuk mempengaruhi ciri sejarah kehidupan. Keputusan ini dibincangkan dalam konteks akibat epidemiologi yang berpotensi dan bagaimana ia boleh digunakan untuk pengawasan dan kawalan vektor.
Anopheles arabicans (Dongola strain) dikekalkan pada 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH dan 12:12 h cahaya: kitaran gelap. Larva dipelihara dalam dulang plastik (20 cm × 18 cm × 7 cm) diisi dengan air suling dan diberi makan Tetramin®, makanan ikan Tetramin®, Melletra 0 dikumpul (Tetramin ® 0 dalam cawan Melletra, ml Purkes). (Nolato Hertila, Åstorp, SE) dan kemudian dipindahkan ke sangkar Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; Sains MegaView, Taichung, Taiwan) untuk membolehkan kemunculan dewasa. Orang dewasa dibekalkan dengan larutan sukrosa 10% secara ad libitum sehingga 4 hari selepas kemunculan (dpe), di mana pada masa itu telah ditawarkan air untuk hos atau diet wanita serta-merta. sebelum eksperimen, seperti yang diterangkan di bawah. Betina yang digunakan untuk eksperimen tiub penerbangan mengalami kebuluran hanya selama 4-6 jam dengan air ad libitum. Untuk menyediakan nyamuk penghisap darah untuk bioassay berikutnya, 4 dpe betina dibekalkan dengan darah biri-biri defibrotik (Håtunalab, Bro, SE) menggunakan sistem penyusuan membran (Hemotek Accringullyton Workshops, dipindahkan ke Bengkel wanita secara individu). sangkar dan menyediakan diet secara langsung, seperti yang diterangkan di bawah, atau 10% sukrosa ad libitum selama 3 hari sebelum eksperimen yang diterangkan di bawah. Betina yang terakhir digunakan untuk bioassay tiub penerbangan dan dipindahkan ke makmal, dan kemudian mempunyai air suling ad libitum selama 4-6 jam sebelum eksperimen.
Ujian pemakanan digunakan untuk mengukur penggunaan air kencing dan urea pada wanita An.Arab dewasa. Wanita yang mencari tuan rumah dan diberi makan darah disediakan diet yang mengandungi 1% air kencing lembu segar dan tua yang dicairkan, pelbagai kepekatan urea, dan dua kawalan (10% sukrosa dan air) selama 48 jam. Selain itu, pewarna makanan (1 mgS ml-1 FF15; Sigma-Aldrich, Stockholm, SE) telah ditambahkan ke dalam diet dan dibekalkan dalam matriks 4 × 4 dalam tiub mikrosentrifuge 250 µl (Axygen Scientific, Union City, CA, AS; Rajah 1A) Isikan ke tepi (~300 µl). (diameter 12 cm dan ketinggian 6 cm; Semadeni, Ostermundigen, CH; Rajah 1A) dalam kegelapan sepenuhnya pada 25 ± 2 cm °C dan kelembapan relatif 65 ± 5%. Eksperimen ini diulang 5 hingga 10 kali. Selepas terdedah kepada diet, nyamuk diletakkan pada -20 °C sehingga analisis selanjutnya.
Cari air kencing lembu dan urea yang diserap oleh perumah dan Anopheles arabianus betina penghisap darah.Dalam percubaan memberi makan (A), nyamuk betina dibekalkan dengan diet yang terdiri daripada air kencing lembu segar dan tua, pelbagai kepekatan urea, sukrosa (10%) dan air suling (H2O). Pencari hos (B) dan yang diberi makan darah (C) lebih banyak daripada diet betina yang diberi makan (C) yang diserap. betina pencari hos menyerap air kencing lembu 72 jam kurang daripada air kencing lembu (B) 168 jam. Purata jumlah kandungan nitrogen (± sisihan piawai) air kencing diwakili dalam inset. Wanita pencari hos (D, F) dan penghisap darah (E, G) mengambil urea dalam cara yang bergantung kepada dos. Purata isipadu yang disedut adalah berbeza (D, E) yang ketara dengan setiap huruf AN (D, E) Analisis post hoc Tukey; p < 0.05). Bar ralat mewakili ralat piawai bagi min (BE). Garis putus-putus lurus mewakili garis regresi log-linear (F, G)
Untuk melepaskan makanan yang diserap, nyamuk dimasukkan secara individu ke dalam 1.5 ml tiub mikrosentrifuge yang mengandungi 230 µl air suling dan tisu tersebut diganggu menggunakan alu pakai buang dan motor tanpa wayar (VWR International, Lund, SE), diikuti dengan sentrifugasi pada 10 krpm selama 10 min. plat mikro (Sigma-Aldrich) dan penyerapan (λ620) ditentukan menggunakan pembaca plat mikro berasaskan spektrofotometer (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm).Sebagai alternatif, nyamuk dikisar dalam 1 ml air suling, 900 µl daripadanya dipindahkan ke analisis spektrofotometer UV (λ60fotometrik) 1800, Shimadzu, Kista, SE).Untuk mengukur pengambilan diet, lengkung piawai telah disediakan melalui pencairan bersiri untuk menghasilkan 0.2 µl hingga 2.4 µl 1 mg ml-1 xilena sianida. Kemudian, ketumpatan optik kepekatan pewarna yang diketahui digunakan untuk menentukan jumlah makanan yang dimakan setiap nyamuk.
Data volum dianalisis menggunakan analisis varians sehala (ANOVA) diikuti dengan perbandingan berpasangan post hoc Tukey (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, US, 1989–2007).Analisis regresi linear menerangkan pengambilan urea yang bergantung kepada kepekatan dan membandingkan tindak balas antara pencari hosGraph-Pasquito dan penghisap darah. v8.0.0 untuk Mac, Perisian GraphPad, San Diego, CA, AS).
Kira-kira 20 µl sampel air kencing daripada setiap kumpulan umur diikat pada Chromosorb® W/AW (10 mg 80/100 mesh, Sigma Aldrich) dan dikapsulkan dalam kapsul timah (8 mm × 5 mm). Kapsul dimasukkan ke dalam kebuk pembakaran penganalisis CHNS/O (Flash 2000, US toham, Fish toham). tentukan kandungan nitrogen dalam air kencing segar dan tua mengikut protokol pengilang. Jumlah nitrogen (g N l-1) dikira berdasarkan kepekatan urea yang diketahui digunakan sebagai piawai.
Untuk menilai kesan diet ke atas kelangsungan hidup wanita yang mencari perumah dan menghisap darah, nyamuk diletakkan secara individu di dalam cawan Petri yang besar (diameter 12 cm dan ketinggian 6 cm; Semadeni) dengan lubang yang dilitupi mesh pada penutup (diameter 3 cm) dengan Untuk pengudaraan dan bekalan makanan.Diet disediakan terus selepas 4 dpe dan dimasukkan dan 1% kepekatan dicairkan dua dpe dan air kencing segar dicairkan 1% kawalan, 10% sukrosa dan air.Setiap diet disalurkan pada tampon pergigian (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE) dimasukkan ke dalam picagari 5 ml (Thermo Fisher Scientific, Gothenburg, SE), pelocok dikeluarkan dan diletakkan di atas piring petri (rajah 1 di atas diterangkan dalam makmal diet anda.Change. nyamuk dikira dua kali sehari, manakala nyamuk mati dibuang sehingga nyamuk terakhir mati (n = 40 setiap rawatan).Kemandirian nyamuk yang diberi makan pelbagai diet dianalisis secara statistik menggunakan lengkung kelangsungan hidup Kaplan-Meyer dan ujian peringkat log untuk membandingkan perbandingan taburan kemandirian antara diet (IBM SPSS0 Statistics 24.).
Kilang terbang nyamuk tersuai berdasarkan Attisano et al.[17], diperbuat daripada panel akrilik jernih setebal 5 mm (10 cm lebar x 10 cm panjang x 10 cm tinggi) tanpa panel hadapan dan belakang (Rajah 3: atas). Himpunan pangsi dengan tiub menegak yang diperbuat daripada lajur kromatografi gas cm (0.25 mm id L yang perlu digantung) dengan glukos di hujung 7. antara sepasang magnet neodymium dengan jarak 9 cm.Satu tiub mengufuk yang diperbuat daripada bahan yang sama (6.5 cm L) membelah dua tiub menegak untuk membentuk lengan yang ditambat dan lengan yang membawa sekeping kecil kerajang aluminium sebagai isyarat gangguan cahaya.
Betina yang kelaparan 24 jam diberi diet di atas selama 30 minit sebelum dihalang. Nyamuk betina yang diberi makan sepenuhnya kemudian dibius secara individu di atas ais selama 2-3 minit dan dilekatkan pada pin serangga dengan lilin lebah (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE) dan kemudian diikat secara mendatar pada tiub. direkodkan oleh pencatat data tersuai, kemudian disimpan dan dipaparkan menggunakan perisian PC-Lab 2000™ (v4.01; Velleman, Gavere, BE). Kilang penerbangan diletakkan di dalam bilik terkawal iklim (12 h:12 h, terang: gelap, 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH).
Untuk menggambarkan corak aktiviti penerbangan, jumlah jarak yang diterbangkan (m) dan jumlah bilangan aktiviti penerbangan berturut-turut dikira sejam dalam tempoh 24 jam. Di samping itu, jarak purata yang diterbangkan oleh individu wanita dibandingkan merentasi rawatan dan dianalisis menggunakan ANOVA sehala dan analisis post hoc Tukey (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute, sebagai rawatan bebas, di mana purata SAS Institute Inc.). faktor.Selain itu, purata bilangan pusingan dikira dalam kenaikan 10 minit.
Untuk menilai kesan diet ke atas prestasi pembiakan An.arabiensis, enam ekor betina (4 dpe) dipindahkan terus ke sangkar Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm) selepas pengumpulan darah dan kemudian menyediakan diet eksperimen selama 48 jam seperti yang diterangkan di atas. Diet kemudian dikeluarkan dan cawan pemijahan (30 ml; Nolato Hertila) diisi dengan air suling pada hari ketiga untuk 820 ml. jam, tukar setiap 24 jam. Ulangi setiap rejimen pemakanan 20-50 kali. Telur dikira dan direkodkan untuk setiap sangkar eksperimen. Subsampel telur digunakan untuk menilai saiz min dan variasi panjang telur individu (n ≥ 200 setiap diet) menggunakan mikroskop Dialux-20 (DM1000; Letzlarst, Leitzlarst, Weitzica) yang dilengkapi dengan Kamera. 320 R2; Leica Microsystems Ltd., DE). Baki telur disimpan di dalam bilik terkawal iklim di bawah keadaan pemeliharaan standard selama 24 jam, dan subsampel larva instar pertama yang muncul baru-baru ini (n ≥ 200 setiap diet) diukur, seperti yang diterangkan di atas. Bilangan telur dan saiz telur dan larva dibandingkan antara rawatan ANMPOVA sehala dan menggunakan Tukey's ANALISIS HOC. v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Meruap ruang kepala daripada air kencing segar (1 jam selepas pensampelan), 24 jam, 72 jam dan 168 jam dikumpul daripada sampel yang dikumpul daripada lembu Zebu, kaum Arsi. Untuk kemudahan, sampel air kencing dikumpul pada awal pagi manakala lembu masih berada di dalam kandang. Sampel air kencing dikumpul daripada 102-000 ml sampel pembakar individu dan 1000 ml poliamida setiap individu. (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH and Co., Minden, DE) dalam 3 l poliamida dengan penutup Dalam dram plastik vinil klorida. Ruang kepala meruap daripada setiap sampel air kencing lembu dikumpul sama ada secara langsung (segar) atau selepas matang pada suhu bilik selama 24 jam, 72 jam dan 168 jam, iaitu setiap sampel air kencing kumpulan umur adalah mewakili setiap sampel air kencing kumpulan umur.
Untuk pengumpulan meruap ruang kepala, sistem gelung tertutup digunakan untuk mengedarkan aliran gas ditapis karbon diaktifkan (100 ml min-1) melalui beg poliamida ke lajur penjerapan selama 2.5 jam dengan menggunakan pam vakum diafragma (KNF Neuberger, Freiburg, DE). (5.5 cm x 3 mm id) mengandungi 35 mg Porapak Q (50/80 mesh; Waters Associates, Milford, MA, US) di antara palam bulu kaca. Sebelum digunakan, lajur telah disiram dengan 1 ml disuling semula n-heksana (Merck, Darmstadt, DE) dan 1 ml pentana gred Alstima (99.0% pelarut meruap GC). telah dicairkan dengan 400 μl pentana. Koleksi ruang kepala dikumpulkan dan kemudian disimpan pada -20°C sehingga digunakan untuk analisis selanjutnya.
Tindak balas tingkah laku ekstrak meruap An.Headspace yang mencari perumah dan memakan darah yang dikumpul daripada air kencing segar, 24-j, 72-j, dan 168-j telah dianalisis untuk ekstrak meruap daripada nyamuk Arabidopsis menggunakan olfactometer tiub kaca lurus [18]. Eksperimen telah dijalankan semasa tempoh ZT'rab-seeking, aktiviti puncak 13-15. [19].Satu olfactometer tiub kaca (80 cm × 9.5 cm id) telah disinari dengan 3 ± 1 lx cahaya merah dari atas. Aliran udara ditapis dan lembap arang (25 ± 2 °C, 65 ± 2% kelembapan relatif) melepasi bioassay pada 30 cm s-1.Air aliran udara tahan karat, menghasilkan satu siri keluli tahan karat dan sekata. struktur berbulu.Dispenser tampon gigi (4 cm × 1 cm; L:D; DAB Dental AB), digantung daripada gegelung 5 cm pada hujung angin olfaktorometer, dengan perubahan perangsang setiap 5 minit. Untuk analisis, 10 μl setiap ekstrak ruang kepala, dicairkan 1:10, digunakan sebagai amaun stimulus perumah atau pentaneevid yang sama. Nyamuk penghisap darah diletakkan di dalam sangkar pelepasan individu 2-3 jam sebelum permulaan eksperimen. Sangkar pelepas diletakkan pada bahagian bawah angin olfactometer, dan nyamuk dibenarkan menyesuaikan diri selama 1 minit, dan kemudian injap rama-rama sangkar dibuka untuk dilepaskan. Tarikan kepada rawatan atau kawalan dianalisis apabila perkadaran nyamuk bersentuhan dengan 5 minit. pelepasan.Setiap ekstrak dan kawalan yang tidak menentu ruang kepala telah direplikasi sekurang-kurangnya 30 kali, dan untuk mengelakkan kesan mana-mana satu hari, bilangan rawatan dan kawalan yang sama telah diuji pada setiap hari percubaan. Dapatkan respons daripada hos dan set Ans.Arab berbanding ruang kepala yang diberi makan darah telah dianalisis menggunakan regresi logistik nominal diikuti dengan perbandingan berpasangan untuk nisbah ganjil 1JMP, v.SAS Institut 14JMP.
Tindak balas pemijahan An. Ekstrak ruang kepala daripada air kencing lembu segar dan tua telah dianalisis dalam sangkar Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; Sains MegaView). Cawan plastik (30 mL; Nolato Hertila) diisi dengan 20 mL air suling dengan syarat substrat pemijahan dan diletakkan di sudut 24 cm bertentang. dilaraskan dengan 10 μl setiap ekstrak ruang kepala pada pencairan 1:10. Jumlah pentana yang sama digunakan untuk melaraskan cawan kawalan. Cawan rawatan dan kawalan ditukar antara setiap eksperimen untuk mengawal kesan kedudukan. Sepuluh ekor betina yang diberi makan darah telah dilepaskan ke dalam sangkar eksperimen pada ZT 9-11 dan telur dalam cawan dikira rumusan 24 jam kemudian. telur yang diletakkan di dalam cawan rawatan – bilangan telur yang diletakkan di dalam cawan kawalan)/(jumlah bilangan telur yang diletakkan).Setiap rawatan diulang 8 kali.
Analisis kromatografi gas dan pengesanan corak antena elektron (GC-EAD) bagi An.arabiensis betina telah dilakukan seperti yang diterangkan sebelum ini [20]. Secara ringkas, ekstrak meruap ruang kepala segar dipisahkan menggunakan Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA, AS) yang dilengkapi dengan lajur HP-5 (30 m × 0.25 mm ketebalan teknologi, Agilent id). dan air kencing yang menua.Hidrogen digunakan sebagai fasa bergerak dengan kadar aliran linear purata 45 cm s-1.Setiap sampel (2 μl) disuntik selama 30 saat dalam mod tanpa belah dengan suhu masukan 225 °C. Suhu ketuhar GC telah diprogramkan daripada 35 °C (3 minit penahanan) hingga 300 °C penahanan min-1.00 °C (100 °C). pemisah efluen, 4 psi nitrogen telah ditambah dan dipecahkan 1:1 dalam satu silangan isipadu mati rendah Gerstel 3D/2 (Gerstel, Mülheim, DE) di antara pengesan pengionan nyalaan dan EAD. Kapilari efluen GC untuk EAD telah disalurkan melalui garisan pemindahan Gerstel ODP-2, yang menjejaki tiub kaca 5 °C 1 cm, di mana ia menjejaki tiub 5 °C mm10 cm ke dalam 5 °C GC 1 cm. bercampur dengan udara yang ditapis karbon dan lembap (1.5 l min−1). Antena diletakkan 0.5 cm dari saluran keluar tiub. Setiap nyamuk individu menyumbang satu replika, dan untuk nyamuk yang mencari hos, sekurang-kurangnya tiga ulangan dilakukan pada sampel air kencing setiap umur.
Pengenalpastian sebatian bioaktif dalam koleksi ruang kepala air kencing lembu segar dan tua menggunakan gabungan GC dan spektrometer jisim (GC-MS; 6890 GC dan 5975 MS; Agilent Technologies) untuk mendapatkan tindak balas antena dalam analisis GC-EAD, beroperasi dalam mod pengionan impak elektron pada 70 eV. GC5 tiang silika HP dilengkapi dengan tiang HP-GC5. (60 m × 0.25 mm diameter dalam, ketebalan filem 0.25 μm) menggunakan helium sebagai fasa bergerak dengan kadar aliran linear purata 35 cm s-1. Sampel 2 μl disuntik menggunakan tetapan penyuntik dan suhu ketuhar yang sama seperti untuk analisis GC-EAD. Kompaun dikenal pasti berdasarkan masa pengekalannya (Kovát s-1. pustaka tersuai) dan pustaka NIST4 tersuai (Agilent).Kompaun yang dikenal pasti telah disahkan dengan menyuntik piawaian tulen (Fail Tambahan 1: Jadual S2).Untuk kuantifikasi, heptyl acetate (10 ng, 99.8% ketulenan kimia, Aldrich) telah disuntik sebagai standard luaran.
Menilai keberkesanan campuran bau sintetik yang terdiri daripada sebatian bioaktif yang dikenal pasti dalam air kencing segar dan tua untuk menarik minat mencari hos dan menghisap darah Ans.arabiensis, menggunakan olfactometer dan protokol yang sama seperti di atas. Campuran sintetik meniru komposisi dan perkadaran sebatian dalam ekstrak meruap ruang kepala bercampur segar, 24 jam, air kencing 16 jam, 728 jam dan 48 jam (Rajah 5D-G; Fail Tambahan 1: Jadual S2).Untuk analisis, gunakan 10 μl pencairan 1:100 bagi campuran sintetik sepenuhnya, dengan kadar pelepasan keseluruhan antara kira-kira 140-2400 ng h-1, untuk menilai daya tarikan kepada perumah dan nyamuk yang menghisap darah. Selepas itu, ujian penolakan lengkap bagi campuran lengkap dilakukan dalam campuran tunggal, dalam campuran lengkap. dialih keluar. Dapatkan maklum balas daripada tuan rumah dan campuran Ans.Arab vs sintetik dan tolak dianalisis menggunakan regresi logistik nominal diikuti dengan perbandingan berpasangan untuk nisbah ganjil (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Untuk menilai sama ada air kencing lembu boleh berfungsi sebagai isyarat habitat perumah untuk nyamuk malaria, air kencing lembu segar dan tua, yang dikumpul seperti yang diterangkan di atas, dan air diletakkan dalam baldi 3 l (100 ml) dan diletakkan dalam perangkap umpan perumah. (Versi BG-HDT; BioGents, Regensburg, DE). Sepuluh perangkap diletakkan pada jarak 50 m di padang rumput, 400 m dari komuniti kampung (Silay, Ethiopia, 5°53´24´´N, 37°29´24´´E) dan tiada lembu, di tempat pembiakan kekal dan kampung. Lima perangkap telah dipanaskan untuk menjadi perumah E, manakala lima perangkap telah dipanaskan untuk disimulasikan sebagai perumah tanpa rawatan. diputar setiap malam selama lima malam. Nombor nyamuk yang ditangkap dalam perangkap yang diumpan dengan air kencing yang berbeza umur dibandingkan menggunakan regresi logistik dengan taburan binomial beta (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Di sebuah perkampungan endemik malaria berhampiran bandar Maki, wilayah Oromia, Ethiopia (8° 11′ 08″ N, 38° 81′ 70″ E; Rajah 6A).Kajian ini dijalankan antara pertengahan Ogos dan pertengahan September sebelum penyemburan sisa dalaman tahunan, bersama-sama dengan musim hujan yang panjang. kampung telah dipilih untuk kajian (Rajah 6A).Kriteria yang digunakan untuk memilih rumah adalah: tiada haiwan dibenarkan di dalam rumah, tiada masakan dalaman (melukis kayu api atau arang) dibenarkan (sekurang-kurangnya semasa tempoh percubaan), dan rumah dengan maksimum dua penduduk, tidur dalam racun serangga. di bawah kelambu yang dirawat.Kelulusan etika telah diberikan oleh Lembaga Kajian Etika Penyelidikan Institusi (LHDN/022/2016) Fakulti Sains Semula Jadi (CNS-IRB), Universiti Addis Ababa, mengikut garis panduan yang ditetapkan oleh Perisytiharan Persatuan Perubatan Dunia Helsinki. Persetujuan daripada setiap ketua proses pengurusan kesihatan diperolehi oleh kakitangan lanjutan. peringkat daerah dan wad ('kebele'). Reka bentuk eksperimen mengikuti reka bentuk segi empat sama Latin 2 × 2, di mana campuran dan kawalan sintetik diberikan kepada rumah berpasangan pada malam pertama dan bertukar antara rumah pada malam percubaan seterusnya. Proses ini diulang sepuluh kali. Selain itu, untuk menganggarkan aktiviti nyamuk di rumah terpilih, perangkap CDC pada malam yang sama diakhiri di medan yang sama pada malam percubaan yang sama. masa hari.
Campuran sintetik yang mengandungi enam sebatian bioaktif telah dilarutkan dalam heptana (97.0% pelarut gred GC, Sigma Aldrich) dan dilepaskan pada 140 ng h-1 menggunakan dispenser sumbu kapas [20]. Dispenser sumbu membenarkan semua sebatian dilepaskan dalam perkadaran malar sepanjang eksperimen 12 jam. Heptana digunakan sebagai titik masuk Pusat Kawalan dan terampai di sebelah Pusat Kawalan. Perangkap cahaya Pencegahan (CDC) (Syarikat John W. Hock, Gainesville, FL, AS; Rajah 6A). Perangkap itu digantung 0.8 – 1 m di atas tanah, berhampiran kaki katil, dan seorang sukarelawan tidur di bawah kelambu yang tidak dirawat dan dikendalikan antara jam 18:00 dan 06:30. Nyamuk, ditangkap oleh status najis dan tidak fizik. separuh hamil, dan hamil [21] kemudiannya disaring menggunakan analisis tindak balas rantai polimerase (PCR) untuk mengenal pasti spesies yang dikenal pasti secara morfologi sebagai A. gambiae sl Ahli-ahli kompleks [23]. SAS Institute Inc.). Di sini, kami melaporkan nilai χ2 dan p daripada ujian nisbah kemungkinan.
Nilaikan sama ada ia selamat.arabiensis dapat memperoleh air kencing, sumber nitrogen utamanya, urea, melalui pemakanan terus, dalam tempoh 48 jam selepas pentadbiran selama 4 hari selepas (dpe) ujian mencari hos dan wanita yang diberi makan darah (Rajah 1A). Kedua-dua wanita pencari perumah dan penghisap darah menyerap lebih banyak sukrosa (5, 4.02) dengan ketara (F = 5, 2) <15, 402. 0.0001 dan F(5,299) = 56.00, p <0.0001, masing-masing; mM berbanding dengan semua kepekatan dan air lain, manakala tidak dapat dibezakan daripada 10% sukrosa (F(10,813) = 15.72, p < 0.0001; Rajah 1D). Ini berbeza dengan tindak balas wanita yang diberi makan darah, yang biasanya menyerap lebih banyak urea dengan ketara berbanding diet yang mengandungi urea, walaupun kurang ketara 1% daripada air sucro. (F(10,557) = 78.35, p < 0.0001; Rajah 1).1E).Tambahan pula, apabila membandingkan antara kedua-dua keadaan fisiologi, betina phlebotomised menyerap lebih banyak urea berbanding betina pencari hos pada kepekatan terendah, dan betina ini menyerap jumlah urea yang sama (35,7= kepekatan p. 0.0001; Rajah 1F, G). Walaupun pengambilan daripada diet yang mengandungi urea kelihatan mempunyai nilai optimum (Rajah 1D, E), wanita dalam kedua-dua keadaan fisiologi dapat memodulasi jumlah urea yang diserap ke atas keseluruhan julat kepekatan urea dalam bentuk log-linear (Gamb. 1F). ).Begitu juga, nyamuk kelihatan mengawal pengambilan nitrogennya dengan mengawal jumlah air kencing yang diserap, kerana jumlah nitrogen dalam air kencing dicerminkan dalam jumlah yang diserap (Rajah 1B, C dan B sisipan).
Untuk menilai kesan air kencing dan urea pada kelangsungan hidup nyamuk yang mencari tuan rumah dan menghisap darah, wanita diberi air kencing dari semua empat umur (segar, 24 jam, 72 jam, dan 168 jam selepas pemendapan) dan julat kepekatan urea, serta air suling dan 10 % sukrosa berfungsi sebagai kawalan (Analisis kelangsungan hidup secara keseluruhan ini menunjukkan kesan kelangsungan hidup). perempuan (air kencing: χ2 = 108.5, df = 5, p <0.0001; urea: χ2 = 122.8, df = 5, p < 0.0001; Rajah 2B, C) dan perempuan yang diberi makan darah (urin: χ2 = 93.0,0 d = 93.0,0 d χ2 = 137.9, df = 5, p < 0.0001; Rajah 2D, E).Dalam semua eksperimen, wanita yang diberi diet air kencing, urea dan air mempunyai kadar kemandirian yang jauh lebih rendah berbanding wanita yang diberi diet sukrosa (Rajah 2B-E).Betina yang mencari hos mempamerkan air kencing basi yang berbeza dan yang berbeza. (p = 0.016) mempunyai kebarangkalian kelangsungan hidup yang paling rendah (Rajah 2B). Tambahan pula, betina pencari hos yang diberi makan urea 135 mM bertahan lebih lama daripada kawalan air (p < 0.04) (Rajah 2C). Berbanding dengan air, wanita yang diberi makan dengan air kencing segar dan air kencing 24 jam masing-masing bertahan lebih lama (p <0.04) dan 10 p. 2D), manakala wanita yang diberi makan dengan air kencing 72 jam bertahan lebih lama daripada yang diberi Air kencing segar pendek wanita dan air kencing berumur 24 jam (masing-masing p < 0.0001 dan p = 0.013; Rajah 2D). Apabila diberi 135 mM urea, wanita yang diberi makan darah terselamat lebih lama daripada semua kepekatan lain dan 0.2 Purea.
Kemandirian perumah dan Anopheles arabinis betina penghisap darah yang memakan air kencing lembu dan urea. Dalam bioassay (A), nyamuk betina diberikan diet yang terdiri daripada air kencing lembu yang segar dan tua, pelbagai kepekatan urea, sukrosa (10%) dan air suling (H2O). Kemandirian pencarian perumah (B, C) dan darah nyamuk 1 adalah rekod setiap jam menghisap (Doe, E2) sehingga semua wanita yang diberi makan air kencing (B, D) dan urea (C, E), dan kawalan, Sukrosa dan air, mati
Jumlah jarak dan bilangan pusingan yang ditentukan dalam ujian kilang penerbangan dalam tempoh 24 jam berbeza antara nyamuk pencari hos dan nyamuk penghisap darah, yang menunjukkan aktiviti penerbangan yang kurang secara keseluruhan (Rajah 3). Nyamuk pencari hos yang membekalkan air kencing segar dan tua atau sukrosa dan air menunjukkan corak penerbangan yang berbeza (Rajah 3), dengan air kencing betina lebih aktif memberi makan pada waktu subuh-4. Nyamuk berumur 168 jam yang memakan air kencing menunjukkan corak penerbangan yang berbeza dan terutamanya diurnal. Nyamuk betina yang membekalkan sukrosa atau air kencing 72 jam menunjukkan aktiviti sepanjang tempoh 24 jam, manakala nyamuk betina yang membekalkan air lebih aktif pada pertengahan tempoh. Nyamuk yang diberi makan sukrosa mempamerkan pada lewat malam, dan tahap aktiviti yang paling tinggi pada lewat malam Air kencing berumur 72 jam mengalami penurunan berterusan dalam aktiviti selama 24 jam (Rajah 3).
Prestasi penerbangan Anopheles arabinis betina penghisap darah yang mencari pemburu memakan air kencing lembu dan urea. Dalam ujian kilang penerbangan, nyamuk betina yang diberi makan air kencing lembu segar dan tua, pelbagai kepekatan urea, sukrosa (10%), dan air suling (H2O) telah ditambat pada lengan mendatar, berputar bebas (menyedut ke atas) (menyedut darah ke atas) perempuan, jumlah jarak dan bilangan penerbangan sejam untuk setiap diet dalam tempoh 24 jam telah direkodkan (gelap: kelabu; terang: putih). Jarak purata dan purata bilangan serangan ditunjukkan di sebelah kanan graf aktiviti sirkadian. Bar ralat mewakili ralat standard bagi min. Analisis statistik lihat teks
Secara amnya, keseluruhan aktiviti penerbangan bagi wanita pencari hos mengikut corak yang serupa dengan jarak penerbangan dalam tempoh 24 jam. Jarak penerbangan min terjejas dengan ketara oleh diet yang ditelan (F(5, 138) = 28.27, p <0.0001), dan wanita pencari hos menelan 72 jam jarak penerbangan dan air kencing yang jauh lebih jauh (p <100). Nyamuk yang diberi makan sukrosa terbang lebih lama daripada nyamuk segar (p = 0.022) dan nyamuk yang diberi makan air kencing 24 jam (p = 0.022). Berbeza dengan corak aktiviti penerbangan yang diterangkan oleh diet air kencing, betina pencari hos yang diberi makan urea menunjukkan aktiviti penerbangan yang berterusan sepanjang fasa 24 jam (Alhamdulillah, 3 jam). corak adalah serupa, wanita pencari hos yang diberi makan urea meningkat dengan ketara jarak penerbangan purata bergantung kepada kepekatan yang diserap (F(5, 138) = 1310.91, p <0.0001). Wanita pencari hos yang diberi makan sebarang kepekatan urea terbang lebih lama daripada wanita yang diberi makan sama ada air atau sukrosa (p <0.03).
Keseluruhan aktiviti penerbangan nyamuk penghisap darah adalah stabil dan dikekalkan selama 24 jam merentasi semua diet, dengan peningkatan aktiviti air kencing semasa separuh kedua tempoh gelap bagi wanita yang diberi makan dengan air serta pada wanita yang diberi makan segar dan berumur 24 jam (imej 3). Manakala diet air kencing mempengaruhi purata jarak penerbangan pada wanita yang diberi makan darah (F(5, p = 4.8) 0.0004), diet urea tidak (F(5, 138) = 1.36, p = 0.24) .dengan air kencing lain dan diet kawalan (segar, p = 0.0091; 72 jam, p = 0.0022; 168 jam, p = 0.001; sukrosa, p.O1 = 6).
Kesan pengambilan air kencing dan urea pada parameter pembiakan telah dinilai dalam bioassay bertelur (Rajah 4A) dan disiasat mengikut bilangan telur yang dikeluarkan oleh setiap betina, saiz telur dan larva instar pertama yang baru menetas. Bilangan telur bertelur.Betina Arab yang diberi makan air kencing berbeza mengikut diet (F = 40.82; p(5,20.82); Rajah 4B).Betina yang diberi makan air kencing 24 jam, makanan darah menghasilkan lebih banyak telur berbanding wanita yang diberi diet air kencing yang lain dan serupa dengan mereka yang diberi sukrosa (Rajah 4B). Begitu juga, saiz telur yang dikeluarkan oleh wanita yang diberi makan air kencing berbeza mengikut diet (F(5, 209) = 12.85, p01, dan air kencing. betina yang diberi makan sukrosa bertelur jauh lebih besar daripada betina yang diberi makan air, manakala telur betina yang diberi makan dengan 168 jam air kencing adalah lebih kecil dengan ketara (Rajah 4C). Di samping itu, diet air kencing memberi kesan ketara kepada saiz larva (F(5, 187) = 7.86, p < 0.0001, dengan 2 telur-larva yang lebih besar daripada 4-jam dan 2-jam yang muncul dengan ketara. betina yang diberi air kencing berbanding telur yang dikeluarkan daripada larva telur.Betina yang diberi makan air dan 168 jam yang diberi air kencing (Rajah 4D).
Prestasi pembiakan Anopheles arabinis betina memakan air kencing lembu dan urea. Nyamuk betina yang diberi makan darah diberi diet yang terdiri daripada air kencing lembu segar dan tua, pelbagai kepekatan urea, sukrosa (10%), dan air suling (H2O) selama 48 jam sebelum dimasukkan ke dalam bioassays dan mendapatkan substrat bertelur48 (bersaiz telur B). (C, F) dan saiz larva (D, G) terjejas dengan ketara oleh diet yang disediakan (air kencing lembu: BD; urea: EG). Min bagi setiap parameter yang diukur menggunakan nama huruf yang berbeza adalah berbeza dengan ketara antara satu sama lain (ANOVA sehala menggunakan analisis post hoc Tukey; p <0.05). Bar ralat mewakili ralat piawai bagi min
Sebagai komponen nitrogen utama air kencing, urea, apabila diberikan sebagai diet kepada wanita yang diberi makan darah, mempengaruhi parameter pembiakan dengan ketara dalam semua kajian. Bilangan telur yang diletakkan oleh wanita yang diberi makan urea, selepas makan darah, bergantung kepada kepekatan urea (F(11, 360) = 4.69; p < 0.0001a 3 kepekatan µ. mM bertelur lebih banyak (Rajah 4E). Betina yang diberi kepekatan urea 134 µM atau ke atas bertelur lebih besar daripada betina yang diberi makan air (F(10, 4245) = 36.7; p < 0.0001; Rajah 4F), dan saiz larva, walaupun dipengaruhi oleh kepekatan induk (30) (30) yang sama, (F a) 37.9; p < 0.0001) adalah lebih berubah (Rajah 4G).
Tarikan keseluruhan kepada ekstrak meruap ruang kepala air kencing lembu yang mencari hos. Arabiensis yang dinilai dalam olfactometer tiub kaca (Rajah 5A) dipengaruhi dengan ketara oleh umur air kencing (χ2 = 15.9, df = 4, p = 0.0032; Rajah 5B). Analisis post hoc menunjukkan bahawa semua tahap bau air kencing yang lebih tinggi menyebabkan bau air kencing yang lain pada 24 jam yang lebih tinggi berbanding tahap bau air kencing yang lain. (72 jam: p = 0.0060, 168 jam: p = 0.012, pentana: p = 0.00070), Kecuali bau air kencing segar (p = 0.13; Rajah 5B). Walaupun tarikan keseluruhan nyamuk penghisap darah kepada bau air kencing tidak ketara berbeza (p = χ782 = f8 = χ782). 0.067; Rajah 5C), betina ini didapati lebih menarik kepada ekstrak meruap ruang kepala berbanding dengan air kencing berumur 72 jam berbanding kawalan (p = 0.0066; Rajah 5C).
Tindak balas tingkah laku terhadap bau air kencing lembu semula jadi dan sintetik dalam mencari perumah dan diberi makan darah Anopheles arabianus. Skema olfaktorometer tiub kaca (A). Tarikan ekstrak meruap ruang kepala daripada air kencing lembu segar dan tua kepada nyamuk perumah (B) dan penghisap darah (C). Cari tindak balas tentacleatedHeadspace dari Lord isol-jam (4 jam) segar. (E), 72 jam (F) dan 168 jam (G) air kencing lembu berumur ditunjukkan. Surih pengesanan antena elektron (EAD) menunjukkan perubahan voltan sebagai tindak balas kepada sebatian bioaktif dalam ruang kepala yang dicairkan daripada kromatografi gas dan dikesan oleh pengesan pengionan nyalaan (FID). Bar skala mewakili amplitud tindak balas (sifat pengekalan dan masa pelepasan (mV) verrates). h-1) bagi sebatian aktif secara biologi ditunjukkan.Asteris tunggal (*) menunjukkan tindak balas amplitud rendah yang konsisten.Asteris berganda (**) menunjukkan tindak balas yang tidak boleh dihasilkan.Cari perumah (H) dan penghisap darah (I) An.arabiensis mempunyai daya tarikan yang berbeza terhadap campuran sintetik yang menarik daripada bau air kencing lembu segar dan tua yang berbeza. berbeza secara ketara antara satu sama lain (ANOVA sehala menggunakan analisis post hoc Tukey; p <0.05). Bar ralat mewakili ralat piawai skala
Ann.arabiensis betina, 72 jam dan 120 jam selepas makan darah, semasa pemijahan, tiada keutamaan ditunjukkan untuk ekstrak meruap ruang kepala daripada air kencing lembu segar dan tua berbanding dengan kawalan pentana (χ2 = 3.07, p > 0.05; Fail tambahan 1: Rajah S1).
Bagi analisis Ann.arabiensis, GC-EAD dan GC-MS wanita mengenal pasti lapan, enam, tiga dan tiga sebatian bioaktif (Rajah 5D-G). Walaupun perbezaan dalam bilangan sebatian yang menimbulkan tindak balas elektrofisiologi diperhatikan, kebanyakan sebatian ini terdapat dalam setiap ekstrak meruap ruang kepala yang dikumpul daripada air kencing segar dan tua. Oleh itu, hanya sebatian fisiologi yang dihasilkan daripada air kencing wanita yang baru dan berumur. di atas ambang telah dimasukkan dalam analisis lanjut.
Jumlah kadar pelepasan meruap sebatian bioaktif dalam koleksi ruang kepala meningkat daripada 29 µg h-1 dalam air kencing segar kepada 242 µg h-1 dalam air kencing berumur 168 jam, terutamanya disebabkan oleh p-cresol dan m-formaldehid Fenol meningkat serta fenol. Sebaliknya, kadar pembebasan sebatian 2-siklon, dan dekangen yang semakin berkurangan, seperti detoks yang semakin meningkat. umur air kencing, yang dikaitkan dengan penurunan yang diperhatikan dalam intensiti isyarat (kelimpahan) dalam kromatogram (Rajah 5D)-G panel kiri) dan tindak balas fisiologi kepada sebatian ini (Rajah 5D-G panel kanan).
Secara keseluruhannya, campuran sintetik mempunyai nisbah semula jadi yang serupa bagi sebatian bioaktif yang dikenal pasti dalam ekstrak meruap bagi ruang kepala air kencing segar dan tua (Rajah 5D–G) dan nampaknya tidak menimbulkan daya tarikan yang ketara dalam pencarian perumah (χ2 = 8.15, df = 4, p = 0.083; Rajah 5H) atau penghisap darah (χ2 = f. χ4 = f. 4, p = 0.30; Rajah 5I). Walau bagaimanapun, perbandingan berpasangan post hoc antara rawatan menunjukkan bahawa nyamuk yang mencari perumah adalah ketara menarik kepada campuran sintetik air kencing berumur 24 jam berbanding dengan kawalan pentana (p = 0.0086; Rajah 5H).
Untuk menilai peranan komponen individu dalam campuran sintetik air kencing berumur 24 jam, enam campuran penolakan telah dinilai terhadap campuran lengkap dalam ujian tiub-Y, di mana sebatian individu telah dikeluarkan. Bagi nyamuk yang mencari hos, menolak sebatian individu daripada campuran lengkap mempunyai kesan yang ketara ke atas tindak balas tingkah laku (χ2 = 19.63, = 0.2 = Fail tambahan. Rajah S2A), semua campuran penolakan adalah lebih menarik daripada Lebih kecil daripada campuran sepenuhnya. Sebaliknya, penyingkiran sebatian individu daripada campuran sintetik sepenuhnya tidak menjejaskan tindak balas tingkah laku nyamuk yang menghisap darah (χ2 = 11.38, df = 6, p = 0.077), dengan pengecualian tahap dekanal yang lebih rendah (2 = 0. Tarikan yang lengkap, berbanding dengan campuran yang lebih rendah; 2 = 0. Fail 1: Rajah S2B).
Di sebuah perkampungan endemik malaria di Ethiopia, keberkesanan campuran sintetik air kencing lembu 24 jam dalam menarik nyamuk di bawah keadaan padang dinilai selama sepuluh malam (Rajah 6A). Sebanyak 4,861 nyamuk telah ditangkap dan dikenal pasti, di mana 45.7% daripadanya adalah Anthropus.gambiae.9 sharopus dan Anophelesharos% . 35.4% ialah Culex spp.(Fail tambahan 1: Jadual S1).Anopheles arabinis ialah satu-satunya ahli kompleks spesies An.Gambian yang dikenal pasti melalui analisis PCR. Secara purata, 320 nyamuk ditangkap setiap malam, di mana perangkap masa dengan umpan campuran sintetik menangkap lebih banyak nyamuk daripada perangkap berpasangan tanpa campuran (χ1.29) (χ1.29) 0.0001) .Perangkap tidak berumpan telah ditetapkan pada setiap lima malam kawalan pada permulaan, pertengahan dan akhir percubaan.Bilangan nyamuk yang serupa telah ditangkap dalam setiap pasangan perangkap, menunjukkan tiada berat sebelah antara rumah (χ2(0, 1665) = 9 × 10-13ps dalam tempoh kajian, p > 0.0.0.0 populasi dengan penurunan populasi. bilangan nyamuk yang terperangkap dalam perangkap yang mengandungi campuran sintetik telah meningkat dengan ketara: pencarian perumah (χ2(0, 2107) = 138.7, p <0.0001), pemberian darah baru-baru ini (χ2(0, 650) = 32.2, p < 0.0001) dan kehamilan (χ228) dan kehamilan (χ228) 0.0123; Fail tambahan 1: Jadual S1). Ini juga ditunjukkan dalam jumlah bilangan nyamuk yang ditangkap: hos yang mencari > menghisap darah > hamil > separuh hamil > jantan.
Penilaian lapangan terhadap keberkesanan campuran bau air kencing lembu sintetik 24 jam. Percubaan lapangan dijalankan di selatan-tengah Ethiopia (peta), berhampiran bandar Maki (sisipan), menggunakan perangkap cahaya Pusat Kawalan Penyakit (CDC) (kanan) di rumah berpasangan, dengan reka bentuk segi empat sama Latin (imej udara) (A). Sintetik odorpheles B arabetik menangkap fototrap betina (CDC) dan tangkapan Bau B. Anopheles farroes (C), dengan cara yang berbeza, kesan yang bergantung kepada keadaan fisiologi. Selain itu, perangkap ini menangkap bilangan nyamuk Culex perumah yang meningkat dengan ketara.(D) Berbanding dengan kawalan. Bar di sebelah kiri mewakili indeks pemilihan purata nyamuk yang ditangkap dalam pasangan umpan bau (hijau) dan kawalan (terbuka) pada perangkap (N = indeks terbuka) purata (N = indeks terbuka) (terbuka). pasang perangkap kawalan (terbuka; N = 5). ).Asteris menunjukkan tahap keertian statistik (*p = 0.01 dan ***p < 0.0001)
Ketiga-tiga spesies ditangkap secara berbeza dalam perangkap yang mengandungi campuran sintetik. Mencari perumah (χ2(1, 1345) = 71.7, p <0.0001), pemberian darah (χ2(1, 517) = 16.7, p < 0.0001) dan kehamilan (χ2(1, = 4.10) .arabiensis telah terperangkap dalam perangkap yang melepaskan campuran sintetik (Rajah 6B), manakala jumlah An tidak berbeza. Pharoensis dalam keadaan fisiologi yang berbeza ditemui (Rajah 6C). Bagi Culex, hanya peningkatan ketara dalam bilangan nyamuk yang mencari perumah ditemui dalam perangkap yang diumpan dengan campuran sintetik (1,1 = 29) 0.0004; Rajah 6D), berbanding dengan perangkap kawalan.
Perangkap umpan perumah yang terletak di luar perumah berpotensi di antara tapak pembiakan dan komuniti luar bandar di Ethiopia digunakan untuk menilai sama ada nyamuk malaria menggunakan bau air kencing lembu sebagai isyarat habitat perumah. Jika tiada isyarat perumah, haba, dan dengan atau tanpa kehadiran bau air kencing lembu, tiada nyamuk ditangkap (Fail tambahan 1: Rajah S3, bagaimanapun, kehadiran bau air kencing betina, suhu tinggi dan air kencing). nyamuk tertarik dan ditangkap, walaupun dalam jumlah yang kecil, bebas daripada umur air kencing (χ2(5, 25) = 2.29, p = 0.13; Fail tambahan 1: Rajah S3 ).Sebaliknya, kawalan air tidak menangkap nyamuk malaria pada suhu tinggi (Fail Tambahan 1: Rajah S3).
Nyamuk malaria memperoleh dan mengedarkan sebatian yang mengandungi nitrogen melalui pemakanan pampasan pada air kencing lembu (iaitu, lopak air) untuk meningkatkan ciri-ciri sejarah hidup, sama seperti serangga lain [2, 4, 24, 25, 26]. Air kencing lembu adalah sumber boleh diperbaharui yang mudah didapati, seperti tempat rehat yang berdekatan dengan tumbuhan liar di kampung seperti vektor malaria. dan tempat pemijahan. Nyamuk betina mencari sumber ini melalui bau dan mampu mengawal selia pengambilan sebatian nitrogen dalam air kencing, termasuk urea, komponen nitrogen utama dalam air kencing [15, 16]. Bergantung pada keadaan fisiologi nyamuk betina, nutrien dalam air kencing diperuntukkan untuk meningkatkan aktiviti penerbangan dan kemandirian individu yang mencari perumah dan ciri-ciri kemandirian darah, serta kelangsungan hidup individu yang mencari perumah dan nyamuk betina. semasa kitaran gonadotropik pertama.Oleh itu, percampuran air kencing memainkan peranan pemakanan yang penting untuk vektor malaria yang tertutup seperti orang dewasa yang kekurangan zat makanan [8], kerana ia menyediakan nyamuk betina dengan keupayaan untuk memperoleh sebatian nitrogen yang penting dengan melibatkan diri dalam pemakanan berisiko rendah. Penemuan ini mempunyai akibat epidemiologi yang ketara, kerana wanita meningkatkan jangka hayat, aktiviti dan tingkah laku yang lebih besar daripada vektor ini. program pengurusan vektor masa hadapan.