Javascript sedang dilumpuhkan dalam penyemak imbas anda. Sesetengah ciri tapak web ini tidak akan berfungsi apabila javascript dilumpuhkan.
Daftar dengan butiran khusus anda dan ubat khusus yang menarik dan kami akan memadankan maklumat yang anda berikan dengan artikel dalam pangkalan data kami yang luas dan segera menghantar e-mel kepada anda salinan PDF.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7 Klinik Perubatan Cat2, 6, 7 Livia Universiti ania, 95123, Itali;2 Pusat Onkologi Eksperimen dan Hematologi, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania , 95123, Itali;3 Onkologi Perubatan, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Itali;4 Genetik Perubatan, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Itali;5 Genetik Perubatan, ASP, Syracuse, 96100, Itali;6 Jabatan Sains Bioperubatan dan Bioteknologi, Universiti Catania, Genetik Perubatan, Catania, Itali, 95123;7Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, Itali Komunikasi: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, e-mel [e-mel dilindungi];[email protected] Tujuan: Mutasi Germline dalam BRCA1 dan BRCA2 dan kanser payudara (BC), ovari (OC) dan lain-lain yang dikaitkan dengan risiko kanser seumur hidup. Pengujian untuk gen BRCA adalah kunci untuk menilai risiko individu, serta untuk mencari kaedah pencegahan dalam pembawa yang sihat dan menyesuaikan rawatan dalam pesakit kanser. Kelaziman variasi data BRCA1 dan BRCA2 secara meluas pada wilayah patogenik berbeza-beza dan secara meluas di kawasan BRCA2 dan Sici. keluarga lian, kajian yang khusus menyasarkan populasi di timur Sicily adalah kurang. Matlamat kajian kami adalah untuk menyiasat kejadian dan pengedaran perubahan germanium patogen BRCA dalam kohort pesakit BC dari timur Sicily dan untuk menilai perkaitan mereka dengan ciri-ciri BC tertentu menggunakan penjujukan generasi akan datang. Kehadiran pengubahan proliferasi patogen BRCA .9% mempunyai korelasi yang lebih tinggi dengan indeks gred 5 patogen dengan indeks 5.9%). varian ic, 17 (49%) dalam BRCA1 dan 18 (51%) dalam BRCA2. Perubahan BRCA1 lazim dalam pesakit BC triple-negatif, manakala mutasi BRCA2 lebih kerap berlaku pada pesakit BC luminal. Berbanding dengan bukan pembawa, subjek dengan varian BRCA1 mempunyai gred tumor yang lebih tinggi dan status gambaran keseluruhan BRCA bagi pesakit-pesakit yang lebih tinggi daripada indeks gambaran keseluruhan BRCA e-proliferasi kami. cily dan mengesahkan peranan analisis NGS dalam mengenal pasti pesakit dengan BC keturunan. Secara keseluruhan, data ini konsisten dengan bukti terdahulu yang menyokong pemeriksaan BRCA untuk pencegahan dan rawatan kanser yang betul dalam pembawa mutasi.
Kanser payudara (BC) ialah keganasan yang paling biasa di seluruh dunia dan kanser yang paling mematikan dalam kalangan wanita.1 Ciri-ciri biologi yang menentukan prognosis BC dan tingkah laku klinikal telah dikaji secara meluas dan sebahagiannya dijelaskan dari semasa ke semasa. Malah, beberapa penanda pengganti kini digunakan untuk mengklasifikasikan BC ke dalam subjenis molekul yang berbeza. Ia adalah reseptor estrogen (ER) dan/atau progesteron faktor pertumbuhan manusia (PglR2) amplifikasi esterogen indeks catuan Ki-67 dan gred tumor (G).2 Gabungan pembolehubah ini mengenal pasti kategori BC berikut: 1) Tumor luminal, menunjukkan ekspresi ER dan/atau PgR, menyumbang 75% daripada BC. Tumor ini dibahagikan lagi kepada Luminal A, apabila Ki-67 berada di bawah 20% dan kehadiran HER2 dan HER2 negatif, dan Luminal % lebih tinggi daripada amplifikasi, dan HER62 B, dan Luminal 60 B di atas. tanpa mengira indeks percambahan;2) Tumor HER2+ yang ER dan PgR negatif tetapi menunjukkan penguatan HER2. Kumpulan ini menyumbang 10% daripada semua tumor payudara;3) Kanser payudara tiga kali ganda negatif (TNBC), yang tidak menunjukkan ekspresi ER dan PgR serta amplifikasi HER2, menyumbang kira-kira 15% daripada kanser payudara.2-4
Di antara subtipe BC ini, gred tumor dan indeks percambahan mewakili biomarker keratan rentas yang secara langsung dan bebas dikaitkan dengan keagresifan dan prognosis tumor.5,6
Sebagai tambahan kepada ciri biologi yang disebutkan di atas, peranan perubahan genetik yang diwarisi yang membawa kepada perkembangan BC telah menjadi semakin penting sejak beberapa tahun kebelakangan ini.7 Kira-kira 1 dalam 10 tumor payudara diwarisi disebabkan oleh perubahan garis germinal dalam gen tertentu.8 Dua kajian epidemiologi besar yang melibatkan lebih daripada 180,000 wanita, 180,000 wanita BRARD, lapan gen CHARD, BRCA2, lapan BRCA baru-baru ini LB2, RAD51C, dan RAD51D) yang bertanggungjawab terutamanya untuk BC keturunan. Antara gen ini, BRCA1 dan BRCA2 (selepas ini dirujuk sebagai BRCA1/2) menunjukkan korelasi yang paling kuat dengan perkembangan tumor payudara.9-12 Malah, mutasi BRCA1/2 germanium BRCA1/2 dengan ketara meningkatkan risiko seumur hidup BC, warna, ovarian BC, serta ovarian BC yang lain, serta ovarian BC lain. Dari umur 13 hingga 80 tahun, kejadian kumulatif BC ialah 72% pada wanita dengan varian patogenik BRCA1 (PV) dan 69% pada wanita dengan BRCA2 PV.14
Terutama sekali, penerbitan baru-baru ini menunjukkan bahawa risiko BC bergantung pada jenis PV. Malah, berbanding dengan varian pemotongan patogenik, varian missense yang ketara, terutamanya dalam gen BRCA1, dikaitkan dengan pengurangan risiko BC, terutamanya pada wanita yang lebih tua.15
Kehadiran BRCA1 atau BRCA2 PV dikaitkan dengan ciri biologi dan klinikopatologi yang berbeza.16,17 BC yang berkaitan dengan BRCA1 cenderung agresif secara klinikal, dibezakan dengan baik dan sangat proliferatif. Tumor ini biasanya negatif tiga kali ganda dan mempunyai permulaan usia yang awal. Tumor yang berlaku pada pesakit bermutasi tidak tipikal BRCA2 yang bermutasi dengan baik. tumor se lebih biasa dalam lumen B dan biasanya berlaku pada orang dewasa yang lebih tua.16-18 Terutamanya, mutasi dalam BRCA1 dan BRCA2 meningkatkan kepekaan terhadap rawatan tertentu, termasuk garam platinum dan ubat yang disasarkan seperti perencat polimerase poli(ADP-ribose) (PARPi).19,20
Sejak beberapa tahun kebelakangan ini, pelaksanaan penjujukan generasi akan datang (NGS) dalam amalan klinikal telah membolehkan peningkatan bilangan pesakit BC menjalani ujian molekul untuk sindrom kerentanan kanser, termasuk BRCA1/2.21 Pada masa yang sama, takrifan berdasarkan kriteria yang tepat berkenaan sejarah keluarga, demografi dan ciri klinikopatologi untuk mengenal pasti individu yang lebih baik/23 yang layak untuk ujian BRCA1/23 dalam konteks BRCA1/23 ini. dalam populasi tertentu, menonjolkan perbezaan di seluruh wilayah geografi.24–27 Walaupun terdapat laporan tentang kohort SM di barat Sicily, lebih sedikit data tersedia pada penyaringan BRCA1/2 dalam populasi Sicily timur.28,29
Kami menerangkan di sini hasil pemeriksaan germline BRCA1/2 pada pesakit BC dari timur Sicily, mengaitkan lagi kehadiran mutasi BRCA1 atau BRCA2 dengan ciri klinikopatologi utama tumor ini.
Kajian retrospektif telah dijalankan di "Pusat Onkologi Eksperimen dan Hematologi" di Hospital Policlinico.Rodolico – San Marco di Catania.Dari Januari 2017 hingga Mac 2021, sejumlah 455 pesakit dengan payudara dan ovari, melanoma, pankreas atau kanser prostat telah dirujuk ke makmal diagnostik BRCA/Decla 2 kami. , dan semua peserta memberikan persetujuan termaklum bertulis sebelum analisis molekul.
Ciri-ciri histologi dan biologi (ER, PgR, status HER2, Ki-67, dan gred) BC dinilai pada biopsi teras atau sampel pembedahan, dengan mengambil kira hanya komponen tumor yang agresif. Berdasarkan ciri-ciri ini, BC dikelaskan seperti berikut: luminal A (ER+ dan/atau PgR+, HER2-, Ki-67/7-R+, HER2-, Ki-67/7-R+, HER2-, Ki-67<20%) ≥20%), luminal B-HER2+ (ER dan/atau PgR+, HER2+), HER2+ (ER dan PgR-, HER2+) atau tiga kali ganda negatif (ER dan PgR-, HER2-).
Sebelum menilai status mutasi BRCA1 dan BRCA2, pasukan pelbagai disiplin termasuk pakar onkologi, pakar genetik dan ahli psikologi menjalankan perundingan genetik tumor untuk setiap pesakit untuk menentukan kehadiran BRCA1 dan/atau BRCA1.atau individu yang mempunyai risiko tinggi PV dalam gen BRCA2. Pemilihan pesakit dilakukan mengikut garis panduan Persatuan Onkologi Perubatan Itali (AIOM) dan cadangan Sicily tempatan.30,31 Kriteria ini termasuk: (i) sejarah keluarga varian patogen yang diketahui dalam gen kerentanan (cth, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN);(ii) lelaki dengan BC;(iii) mereka yang mempunyai BC dan OC;(iv) wanita dengan SM <36 tahun, TNBC <60 tahun, atau dua hala SM <50 tahun;(v) sejarah perubatan peribadi BC <50 tahun dan sekurang-kurangnya seorang saudara darjah pertama: (a) BC < 50 tahun;(b) OC bukan mucinous dan bukan sempadan pada sebarang umur;(c) dua hala BC;(d) lelaki BC;(e) kanser pankreas;(f) kanser prostat;(vi) dua atau lebih Sejarah peribadi BC > 50 tahun dan sejarah keluarga BC, OC, atau kanser pankreas untuk saudara-mara yang merupakan saudara darjah satu antara satu sama lain (termasuk saudara-mara dengannya saudara darjah satu);(vii) Sejarah peribadi OC dan sekurang-kurangnya seorang saudara darjah pertama: (a) BC <50 tahun;(b) NOC;(c) dua hala BC;(d) lelaki BC;(vii) perempuan dengan OC serous gred tinggi.
Sampel darah periferi sebanyak 20 mL diperolehi daripada setiap pesakit dan dikumpulkan ke dalam tiub EDTA (BD Biosciences). DNA genomik telah diasingkan daripada 0.7 mL sampel darah keseluruhan menggunakan Kit Pengasingan kit QIAsymphony DSP DNA Midi (QIAGEN, Hilden, Itali) mengikut arahan pengilang dan melalui Qubitor®, Scientific Flowometer, USA (The Perfic Flumeter, USA) Walmeter Ikan 3.0. kuantifikasi.Sasaran pengayaan dan penyediaan perpustakaan dilakukan oleh Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, sedia untuk dimuatkan ke dalam Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit untuk penyediaan perpustakaan automatik mengikut arahan pengilang. Kit ini terdiri daripada dua kumpulan primer PCR multipleks yang boleh digunakan untuk mengkaji semua BRCA1 (NM_00730000.3) dan BRCA1 gene. , 15 µL setiap DNA sampel yang dicairkan (10 ng) telah ditambahkan pada plat berkod bar untuk penyediaan perpustakaan dan semua reagen dan bahan habis pakai telah dimuatkan pada instrumen Ion Chef™. Penyediaan perpustakaan automatik dan pengumpulan perpustakaan sampel berkod bar kemudiannya dilakukan pada instrumen Ion Chef™. Bilangan perpustakaan yang disediakan kemudiannya dinilai oleh Qubitor®, MA, Flumometer, USA. arahan pengilang.Akhir sekali, perpustakaan digabungkan dalam nisbah ekuimolar dalam tiub sampel perpustakaan Ion Chef™ (tiub berkod bar) dan dimuatkan pada instrumen Ion Chef™. Penjujukan dilakukan menggunakan instrumen Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) menggunakan analisis Ion 510Scientific Fisher (Thermo Fisher Scientific). Seq srl) dan Perisian Wartawan Ion.
Semua tatanama varian mengikut garis panduan semasa Konsortium Variasi Genom Manusia, tersedia dalam talian (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Kepentingan klinikal bagi varian BRCA1/2 telah ditakrifkan menggunakan klasifikasi Konsortium Antarabangsa ENIGMA (Rangkaian Berasaskan Bukti untuk Mentafsir Germline Mutant Alleles dan ARCCA yang berbeza seperti perunding ARGMA/BReles, https://orgg. HANGE , ClinVar, IARC_LOVD, dan UMD. Klasifikasi termasuk lima kategori risiko yang berbeza: jinak (kategori I), berkemungkinan jinak (kategori II), varian kepentingan yang tidak pasti (VUS, kategori III), kemungkinan patogenik (kategori IV) dan patogenik (kategori V).VarSome juga menganalisis kesan struktur dan fungsi pangkalan data protein2.
Untuk memberikan kepentingan klinikal yang berpotensi kepada setiap VUS, algoritma ramalan protein pengiraan berikut telah digunakan: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) dan Align-Agvgd./httpvgd.//hcvgvgd.//hciagvgd. arian yang dikelaskan sebagai kelas 1 dan 2 dianggap jenis liar.
Penjujukan Sanger mengesahkan kehadiran setiap varian patogenik. Secara ringkas, sepasang primer khusus telah direka bentuk untuk setiap varian yang dikesan dengan menggunakan jujukan rujukan gen BRCA1 dan BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 dan NG_012772.3, NM_000059.3 masing-masing, penurutan PCrefore, diikuti oleh PCrefore).
Pesakit yang diuji negatif untuk gen BRCA1/2 telah diuji oleh amplifikasi probe bergantung ligation multiplex (MLPA) mengikut arahan pengilang untuk menilai kehadiran penyusunan semula genomik besar (LGR). Secara ringkas, sampel DNA didenaturasi dan sehingga 60 BRCA1 dan BRCA2 gen-specific probe pengesanan probe lebih kurang panjang probe pengesanan nuklear 6 DNA digunakan secara khusus, setiap satu probe pengesanan nuklear spesifik gen 6 digunakan, masing-masing. produk, yang terdiri daripada set unik amplikon PCR, kemudian dianalisis oleh elektroforesis kapilari dan oleh perisian Cofalyser.Net bersama-sama dengan jadual Cofalyser khusus kelompok yang sesuai (www.mrcholland.com).
Pembolehubah klinikopatologi terpilih (gred histologi dan indeks proliferasi Ki-67%) dikaitkan dengan kehadiran BRCA1/2 PV, dikira menggunakan perisian Prism v. 8.4 menggunakan ujian tepat Fisher dengan mengandaikan nilai-p <0.05 adalah signifikan.
Antara Januari 2017 dan Mac 2021, 455 pesakit telah disaring untuk mutasi germline BRCA1/2. Ujian mutasi telah dilakukan di Pusat Onkologi dan Hematologi Eksperimen Hospital Policlinico. Menurut garis panduan Sicily (//www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.hì20, GenVdì20, Gen. ), the Rodolico of Catania – San Marco” secara keseluruhan, 389 pesakit Terdapat kanser payudara, 37 kanser ovari, 16 kanser pankreas, 8 kanser prostat dan 5 melanoma.Taburan pesakit mengikut jenis kanser dan keputusan analisis ditunjukkan dalam Rajah 1.
Rajah 1 menunjukkan carta alir yang menunjukkan gambaran keseluruhan kajian. Pesakit dengan tumor payudara, melanoma, pankreas, prostat atau ovari telah diuji untuk mutasi dalam gen BRCA1 dan BRCA2.
Singkatan: PV, varian patogenik;VUS, varian dengan kepentingan yang tidak pasti;WT, jujukan BRCA1/2 jenis liar.
Kami secara selektif memfokuskan kajian kami pada kohort kanser payudara. Pesakit mempunyai umur median 49 tahun (julat 23-89) dan kebanyakannya wanita (n=376, atau 97%).
Daripada subjek ini, 64 (17%) mempunyai mutasi BRCA1/2 dan kesemuanya adalah perempuan. Tiga puluh lima (9%) mempunyai PV dan 29 (7.5%) mempunyai VUS. Tujuh belas (48.6%) daripada 35 varian patogenik berlaku dalam BRCA1 dan 18 (51.4%) dalam BRCA2, manakala BRCA2 VUS (12%) (1.8.2%) dan BRCA17 (12%). gures 1 dan 2). LGR tidak terdapat dalam analisis MLPA.
Rajah 2. Analisis mutasi BRCA1 dan BRCA2 dalam 389 pesakit kanser payudara.(A) Taburan varian patogen (PV) (merah), varian kepentingan tidak pasti (VUS) (oren), dan WT (biru) dalam 389 pesakit kanser payudara;(B) 389 pesakit kanser payudara Tiga puluh lima (9%) mempunyai varian patogenik BRCA1/2 (PV). Antaranya, 17 (48.6%) adalah pembawa PV BRCA1 (merah gelap) dan 18 (51.4%) adalah pembawa BRCA2 (merah muda);(C) 29 (7.5%) daripada 389 subjek membawa VUS, 5 (17.2%) gen BRCA1 (oren gelap) dan 24 (82.8%) gen BRCA2 (oren muda).
Singkatan: PV, varian patogenik;VUS, varian dengan kepentingan yang tidak pasti;WT, jujukan BRCA1/2 jenis liar.
Kami seterusnya menyiasat kelaziman subtipe molekul BC pada pesakit dengan BRCA1/2 PV. Pengagihan termasuk 2 (5.7%) luminal A, 15 (42.9%) luminal B, 3 (8.6%) luminal B-HER2+, 2 (5.7%) HER2+ dan 13 (37.1%) pesakit BRTNBC 1.2.9% (37.1%) berluminal B-HER2+ (5.7%) (37.1%) positif BRTNBC 1. . %) adalah luminal A (Rajah 3). Tiada tumor HER2+ hadir dalam kumpulan ini. Oleh itu, mutasi BRCA1 lazim dalam pesakit TNBC, manakala pengubahan BRCA2 adalah dominan dalam individu lumen B.
Rajah 3 Kelaziman subjenis kanser payudara dalam pesakit dengan varian patogenik dalam BRCA1 dan BRCA2.Histogram menunjukkan taburan PV BRCA1- (merah gelap) dan BRCA2- (merah muda) di kalangan subjenis molekul pesakit kanser payudara. Nombor yang dilaporkan dalam setiap kotak mewakili peratusan pesakit dengan subjenis kanser payudara BRCA1 dan BRCA2.
Singkatan: PV, varian patogenik;HER2+, reseptor faktor pertumbuhan epidermis manusia 2 positif;TNBC, kanser payudara tiga kali ganda negatif.
Selepas itu, kami menilai jenis dan penyetempatan gen BRCA1 dan BRCA2 PV. Dalam BRCA1 PV, kami memerhatikan 7 varian nukleotida tunggal (SNV), 6 pemadaman, 3 penduaan dan 1 sisipan. Hanya satu mutasi (c.5522delG) mewakili penemuan baharu. Subjek BRAT.0359CTA yang paling biasa dikesan dalam BRAT.03515. .Pengubahan ini melibatkan pemadaman lima nukleotida (CTAAT) dalam BRCA1 exon 15, mengakibatkan penggantian asid amino leucine oleh tirosin pada kodon 1679, dan disebabkan anjakan kerangka terjemahan dengan kodon henti alternatif yang diramalkan membawa kepada pemotongan protein pramatang. Semua perubahan lain yang dilaporkan dalam satu kawasan sp. tidak dapat dikesan hanya dalam satu kawasan sp. .4357+1G>T) (Jadual 1).
Berkenaan BRCA2 PV, kami memerhatikan 6 pemadaman, 6 SNV dan 2 penduaan. Tiada satu pun daripada perubahan yang ditemui adalah novel. Tiga mutasi berulang dalam populasi kami, c.428dup dan c.8487+1G>A diperhatikan dalam 3 subjek, diikuti oleh c.5851_5854c.c.5854delAGTT yang berulang dalam dua kes yang berulang. pada 5 BRCA2, diramalkan akan mengekod protein tidak berfungsi yang dipenggal. Mutasi c.8487+1G>A berlaku di kawasan intronik BRCA2 intron 19 (± 1,2) dan menjejaskan jujukan konsensus penyambungan, mengakibatkan penyambungan diubah yang mengakibatkan varian protein yang tidak normal atau tidak ada pada 441_AG5858 Patogen yang disebabkan oleh . pemadaman daripada kedudukan nukleotida 5851 hingga 5854 dalam pengekodan exon 10 gen BRCA2 dan menghasilkan anjakan rangka translasi dengan kodon henti alternatif yang diramalkan (p.S1951WfsTer). Terutamanya, seperti yang dilaporkan sebelum ini, kedua-dua perubahan c.631G>A dan c.7008-2A yang sama melibatkan penggantian pertama pesakit dalam mu. (A) dalam BRCA2 exon 7 dengan guanine (G) yang mengandungi nukleotida yang mengakibatkan perubahan valin kepada isoleucine pada kodon 211, isoleucine Asid amino ialah asid amino dengan sifat yang sangat serupa.Perubahan ini menjejaskan penyambungan mRNA biasa. Varian kedua terletak di kawasan intronik dan menghasilkan substitusi A berganda BR30 c.20 sebelum gen. BR30 pengekodan gandaan (T). Perubahan 8-2A>T boleh menjana berbilang transkrip dengan panjang yang berbeza. Tambahan pula, dalam kumpulan PV BRCA2, 4 daripada 18 perubahan (22.2%) adalah intronik.
Kami kemudiannya memetakan mutasi BRCA1/2 yang memudaratkan dalam domain berfungsi dan kawasan pengikat protein (Rajah 4). Dalam gen BRCA1, 50% daripada PV terletak di kawasan gugusan kanser payudara (BCCR), manakala 22% daripada mutasi terletak di kawasan gugusan kanser ovari (OCCR) (Rajah 4A). Dalam varian BRCA2 PV, 4A, 4A). % daripada mutasi terletak dalam OCCR (Rajah 4B).Seterusnya, kami menilai lokasi PV dalam domain protein BRCA1 dan BRCA2. Untuk protein BRCA1, kami menemui tiga PV dalam domain gelung dan gegelung bergelung, dan dua mutasi dalam domain BRCT (Rajah 4A). Bagi domain BRCA2 ionic, 4A yang dipetakan, 4A). dalam domain oligo/oligosaccharide-binding (OB) dan menara (T) (Rajah 4B).
Rajah 4 Perwakilan skematik protein BRCA1 dan BRCA2 dan penyetempatan varian patogen. Angka ini menunjukkan taburan varian patogen BRCA1 (A) dan BRCA2 (B) dalam pesakit kanser payudara. Mutasi eksonik ditunjukkan dalam warna biru, manakala varian intronik ditunjukkan dalam oren. Ketinggian bar mewakili bilangan kes. Domain BRCA1 dan BRCAA2 yang dilaporkan adalah protein dan domain BRCA1 dan BRCAA2 yang dilaporkan adalah protein (domain BRCA1 dan BRCAA2). jujukan penyetempatan nuklear (NLS), domain gegelung bergelung, domain kluster SQ/TQ (SCD), dan domain terminal C BRCA1 (BRCT).(B) Protein BRCA2 mengandungi lapan ulangan BRC, domain pengikat DNA dengan domain heliks (Helical), tiga domain oligonukleotida/oligosaccharide-binding (ALS) pada domain lipatan sisi (ALS) oligonucleotide/oligosaccharide (aOligosakarida). Wilayah Kluster Kanser Payudara (BCCR) dan Wilayah Kluster Kanser Ovari (OCCR) ditunjukkan di bahagian bawah.*Mewakili mutasi yang menentukan kodon hentian.
Kami kemudiannya menyiasat ciri klinikopatologi BC yang mungkin berkait dengan kehadiran BRCA1/2 PV. Rekod klinikal lengkap tersedia untuk 181 pesakit BRCA1/2-negatif (bukan pembawa) dan semua pembawa (n = 35). Terdapat korelasi antara kadar percambahan tumor dan gred.
Kami mengira taburan Ki-67 berdasarkan median kohort kami (25%, julat <10-90%). Subjek dengan Ki-67 < 25% ditakrifkan sebagai "Ki-67 rendah", manakala individu dengan nilai ≥ 25% dianggap "Ki-67 tinggi". g. 5A).
Rajah 5 Korelasi Ki-67 dengan taburan gred dalam wanita kanser payudara dengan dan tanpa BRCA1 dan BRCA2 PV.(A) Boxplot menunjukkan nilai median Ki-67 ​​dalam 181 pesakit BC bukan pembawa berbanding pesakit BRCA1 (18) atau BRCA2 (17) PV. Nilai P di bawah 0.5 (gram) bagi pesakit PV dianggap secara statistik sebagai gred bagi pesakit kansernya (gram BC) secara statistik (di bawah 0.5BC) G2 dan G3) mengikut status mutasi BRCA1 dan BRCA2 (subjek WT, pembawa PV BRCA1 dan BRCA2).
Begitu juga, kami mengkaji sama ada gred tumor berkorelasi dengan kehadiran BRCA1/2 PV. Memandangkan G1 BC tidak hadir dalam populasi kami, kami membahagikan pesakit kepada dua kumpulan (G2 atau G3). Selaras dengan keputusan Ki-67, analisis menunjukkan korelasi yang signifikan secara statistik antara gred tumor dan mutasi BRCA1, dengan perkadaran yang lebih tinggi bagi tumor bukan pembawa G3 <p50. B ).
Kemajuan dalam teknologi penjujukan DNA telah membolehkan kemajuan yang tidak pernah berlaku sebelum ini dalam ujian genetik BRCA1/2, dengan implikasi penting bagi pesakit yang mempunyai sejarah keluarga kanser. Sehingga kini, kira-kira 20.000 varian BRCA1/2 telah dikenal pasti dan diklasifikasikan mengikut American Society of Medical Genetics 35 dan sistem ENIGMA.35,36 BRCA7 yang terkenal di rantau ini secara meluas dengan spektrum geografi BRCA1/2 yang berbeza. Itali, kadar BRCA1/2 PV berjulat dari 8% hingga 37%, menunjukkan kebolehubahan intra-negara yang luas.38,39 Dengan populasi hampir 5 juta, Sicily ialah wilayah kelima terbesar di Itali dari segi bilangan penduduk. Walaupun data wujud mengenai pengedaran BRCA1/2 di bahagian barat Sicily, tiada bukti di bahagian barat pulau itu.
Kajian kami adalah salah satu laporan pertama tentang kejadian BRCA1/2 PV dalam pesakit BC di timur Sicily.28 Kami menumpukan analisis kami pada BC, kerana ini adalah penyakit yang paling biasa dalam kohort kami.
Apabila menguji 389 pesakit SM, 9% membawa BRCA1/2 PV, diedarkan sama rata antara BRCA1 dan BRCA2. Keputusan ini konsisten dengan yang dilaporkan sebelum ini dalam populasi Itali.28 Menariknya, 3% (13/389) kohort kami adalah lelaki. Kadar ini lebih tinggi daripada jangkaan untuk kanser payudara lelaki (1% daripada semua populasi BRCA/140 berdasarkan pilihan BC kami), tanpa mengira risiko BC. Satu daripada lelaki ini telah membangunkan PV BRCA1/2, jadi mereka adalah calon untuk analisis molekul selanjutnya untuk menolak kehadiran mutasi yang kurang biasa seperti PALB2, RAD51C dan D, antara lain. Varian yang tidak mempunyai kepentingan yang pasti telah diambil dalam 7% subjek yang BRCA2 VUS terbukti. Malah keputusan ini konsisten dengan bukti sedia ada.42,41.
Apabila kami menganalisis pengedaran subtipe molekul BC dalam wanita mutan BRCA1/2, kami mengesahkan persatuan yang diketahui antara TNBC dan BRCA1 PV (58.8%) dan antara luminal B BC dan BRCA2 PV (55.6%).16,43 Tumor luminal A dan HER2+ dalam pembawa data BRCA1 dan BRCA2 PV3 yang sedia ada adalah selaras dengan pembawa data PV3 BRCA1 dan BRCA2 yang sedia ada.
Kami kemudian menumpukan pada jenis dan lokasi PV BRCA1/2. Dalam kohort kami, PV BRCA1 yang paling biasa ialah c.5035_5039delCTAAT. Walaupun Incorvaia et al.tidak menerangkan varian ini dalam kohort Sicily mereka, pengarang lain telah melaporkannya sebagai garis germa BRCA1 PV.34 Beberapa PV BRCA1 ditemui dalam kohort kami – contohnya c.181T>G, c.514del, c.3253dupA dan c.5266dupC – yang telah diperhatikan dalam kedua-dua BRCA1 dan 18 mutations ini. .5266dupC) biasanya ditemui dalam Yahudi Ashkenazi di Eropah Timur dan Tengah (Poland, Czech), Slovenia, Austria, Hungary, Belarusia dan Jerman ), 44,45 dan, di Amerika Syarikat dan Argentina, baru-baru ini ditakrifkan sebagai "varian germanium berulang" dalam pesakit Itali dengan BC dan OC. Varian 34c.8 yang dikenal pasti di bahagian utara Messi dan kanser payudara sebelum ini adalah pada pesakit Pacidel 514 dalam Pacidelna 514 di utara. yang menarik, malah Incorvaia et al.menemui varian c.3253dupA dalam sesetengah keluarga di Catania.28 PV BRCA2 yang paling mewakili ialah c.428dup, c.5851_5854delAGTT dan varian intronik c.8487+1G>A, yang telah dilaporkan dengan lebih terperinci 28 dalam pesakit di Palermo dengan c.5858dup isi rumah c.5858dup dengan c.4258dup. di barat laut Sicily, terutamanya di wilayah Trapani dan Palermo, manakala c.5851_5854delAGTT PV diperhatikan dalam isi rumah di barat laut Sicily. Varian 8487+1G>A adalah lebih biasa dalam subjek dari Messina, Palermo dan Caltanissetta.28 Rebbeck et al.sebelum ini menerangkan perubahan c.5851_5854delAGTT di Colombia.37 Satu lagi BRCA2 PV, c.631+1G>A, telah ditemui pada pesakit BC dan OC dari Sicily (Agrigento, Siracusa dan Ragusa).28 Terutama, kami memerhatikan kewujudan bersama dua varian BRCA2 dan c.63170>c.A. yang kami anggap diasingkan dalam mod cis, seperti yang dilaporkan sebelum ini seperti itu.34,46 Mutasi uble BRCA2 ini memang kerap diperhatikan di rantau Itali dan didapati memperkenalkan kodon henti pramatang, yang menjejaskan penyambungan RNA messenger dan menyebabkan protein BRCA2 gagal.47,48
Kami juga memetakan PV BRCA1 dan BRCA2 dalam kawasan OCCR dan BCCR domain protein dan gen yang diduga. Kawasan ini diterangkan oleh Rebbeck et al.sebagai kawasan berisiko untuk membangunkan kanser ovari dan payudara, masing-masing.49 Walau bagaimanapun, bukti mengenai perkaitan antara lokasi varian germanium dan risiko kanser payudara atau ovari masih menjadi kontroversi.28,50-52 Dalam populasi kami, PV BRCA1 kebanyakannya terletak di rantau BCCR, manakala PV BRCA2 kebanyakannya terletak di OCCR, mana-mana rantau tidak boleh didapati di OCCR. s dan ciri BC. Ini mungkin disebabkan oleh bilangan pesakit yang terhad dengan mutasi BRCA1/2. Dari perspektif domain protein, PV BRCA1 diedarkan di sepanjang keseluruhan protein, dan pengubahan BRCA2 lebih disukai ditemui dalam domain ulangan BRC.
Akhir sekali, kami mengaitkan ciri klinikopatologi BC dengan BRCA1/2 PV. Disebabkan bilangan pesakit yang terhad, kami hanya menemui korelasi yang ketara antara Ki-67 dan gred tumor. Walaupun penilaian dan tafsiran Ki-67 masih agak kontroversial, sudah pasti kadar proliferatif yang tinggi dikaitkan dengan peningkatan risiko penyakit berulang dan kelangsungan hidup yang berkurangan di antara "Ketinggian-6" tarikh "Kelangsungan hidup". 20%.Walau bagaimanapun, ambang ini tidak terpakai kepada populasi pesakit mutasi BRCA1/2 kami, yang mempunyai nilai median Ki-67 sebanyak 25%. Trend dalam kadar Ki-67 yang tinggi ini boleh dijelaskan oleh kelaziman dalam kohort luminal B dan TNBC kami, di mana beberapa tumor luminal A hadir. Walau bagaimanapun, beberapa bukti nampaknya menunjukkan bahawa pronosis Ki2-67 yang lebih tinggi boleh dicadangkan kepada pronosis yang lebih tinggi (5-67%). 53,54 Daripada keputusan analisis kami, korelasi yang ketara tidak menghairankan. Berlaku antara Ki-67 dan gred tinggi dan kehadiran BRCA1 PV. Malah, tumor berkaitan BRCA1 adalah tipikal TNBC dan mempamerkan ciri yang lebih agresif.16,17
Kesimpulannya, kajian ini menyediakan laporan tentang status mutasi BRCA1/2 dalam kohort BC dari timur Sicily. Secara keseluruhannya, penemuan kami adalah konsisten dengan bukti sedia ada, kedua-duanya dari segi kelaziman mutasi dan ciri klinikopatologi di BC. Lebih banyak kajian dalam populasi BRCA1/2-mutant BCome yang lebih besar, seperti menggunakan analisis frekuensi mutasi yang lebih kecil adalah untuk menilai kehadiran PV berbilang gen yang berbeza dan lebih rendah daripada analisis mutasi yang berbeza. nt daripada BRCA1/2. Ini akan membolehkan pengenalpastian dan pengurusan yang betul bagi peningkatan bilangan subjek yang berisiko tinggi mendapat kanser akibat mutasi genetik.
Kami mengesahkan bahawa pesakit telah menandatangani persetujuan termaklum untuk melepaskan sampel tumor mereka secara tanpa nama untuk tujuan penyelidikan. Semua pesakit menandatangani persetujuan termaklum bertulis mengikut Deklarasi Helsinki. Menurut dasar AOU Policlinico "G.Rodolico - S.Marco", kajian ini dikecualikan daripada semakan etika kerana semua pesakit BRCA1/2 dimaklumkan analisis juga telah dilakukan untuk mendapatkan kebenaran bertulis untuk analisis amalan klinikal. data mereka untuk tujuan penyelidikan.
Kami mengucapkan terima kasih kepada Prof. Paolo Vigneri atas bantuannya dalam penjagaan pesakit kanser payudara seperti yang diminta oleh Jawatankuasa Etika.
Federica Martorana melaporkan honoraria daripada Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Pengarang lain mengisytiharkan tiada konflik kepentingan dalam karya ini.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al.Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN menganggarkan kejadian dan kematian 36 kanser di 185 negara di seluruh dunia.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.6caac.3