Nature.com သို့လာရောက်လည်ပတ်သည့်အတွက် ကျေးဇူးတင်ပါသည်။ သင်အသုံးပြုနေသောဘရောက်ဆာဗားရှင်းသည် CSS အတွက် အကန့်အသတ်ဖြင့် ပံ့ပိုးမှုရှိပါသည်။ အကောင်းဆုံးအတွေ့အကြုံအတွက်၊ အပ်ဒိတ်လုပ်ထားသောဘရောက်ဆာတစ်ခု (သို့မဟုတ် Internet Explorer တွင် လိုက်ဖက်ညီသောမုဒ်ကိုပိတ်ရန်) အကြံပြုပါသည်။ ထိုအချိန်တွင် ဆက်လက်ပံ့ပိုးကူညီမှုသေချာစေရန်၊ ပုံစံများနှင့် JavaScript မပါဘဲ ဆိုက်ကိုပြသပါမည်။
သေးငယ်သောဆီလီကာအမှုန်အမွှားများကို မက်ခရိုပိုရတ်အမှုန်များရရှိရန် ပြုပြင်မွမ်းမံမှုအချို့ဖြင့် sol-gel နည်းလမ်းဖြင့် ပြင်ဆင်ခဲ့သည်။ ဤအမှုန်များကို N-phenylmaleimide-methylvinylvinylisocyanate (PMI) နှင့် စတီရင်းစတီရင်းစတီရင်းစတီရိန်းအကြားပြောင်းလဲနိုင်သော N-phencalylmaleimide (ပိုလီမာလီစတီရီနမ်စတီရီယမ်) (PMI) ၏ကြားခြားလုပ်ဆောင်မှု (PMI) နှင့် စတီရင်းစတီရိန်းဖြင့် ပြောင်းပြန်ပြန်လှန်နိုင်သော ထပ်တိုးအကွဲကွဲကွဲခြင်းကွင်းဆက်လွှဲပြောင်းခြင်း (RAFT) ဖြင့် ဆင်းသက်လာသည်။ အဆင့်။ ကျဉ်းမြောင်းသော သံမဏိကော်လံများ (100 × 1.8 မီလီမီတာ id) များကို slurry ထုပ်ပိုးခြင်းဖြင့် ထုပ်ပိုးထားပါသည်။ အကဲဖြတ်ထားသော PMP ကော်လံကို ခွဲထုတ်ထားသော peptide အရောအနှော (Gly-Tyr၊ Gly-Leu-Tyr၊ Gly-Gly-Tyr-Arg၊ Tyr-Ile-Argly-S) နှင့် leucatographic စွမ်းဆောင်ရည်) လူ၏သွေးရည်ကြည်အယ်လ်ဘမ် (HAS) ၏ trypsin သည် အစာခြေခြင်း)။ အကောင်းဆုံး elution အခြေအနေများအောက်တွင်၊ peptide အရောအနှော၏သီအိုရီအပြားအရေအတွက်သည် 280,000 plates/m² အထိမြင့်မားသည်။ တီထွင်ထုတ်လုပ်ထားသောကော်လံ၏စွမ်းဆောင်ရည်ကို စီးပွားဖြစ် Ascentis Express RP-Amide ကော်လံနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက၊ ကော်လံခွဲထွက်ခြင်း၏ စွမ်းဆောင်ရည်နှင့် PMP ကော်လံ၏ ခွဲထွက်ခြင်းဆိုင်ရာ စွမ်းဆောင်ရည်မှာ စီးပွားဖြစ်ကော်လံ၏ ခွဲထွက်ခြင်းဆိုင်ရာ စွမ်းဆောင်ရည်ထက် သာလွန်ကြောင်း သတိပြုမိပါသည်။
မကြာသေးမီနှစ်များအတွင်း၊ ဇီဝဆေးဝါးလုပ်ငန်းသည် စျေးကွက်ဝေစု သိသိသာသာတိုးမြင့်လာသဖြင့် ကမ္ဘာလုံးဆိုင်ရာစျေးကွက်ဖြစ်လာခဲ့သည်။ ဇီဝဆေးဝါးလုပ်ငန်း1,2,3 ၏ပေါက်ကွဲကြီးထွားမှုနှင့်အတူ၊ peptides နှင့် ပရိုတိန်းများကိုခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းမှာ အလွန်အလိုရှိသည်၊ ပစ်မှတ် peptide အပြင်၊ peptide ပေါင်းစပ်မှုအတွင်း အညစ်အကြေးအများအပြားကို ထုတ်ပေးသည်၊ ထို့ကြောင့် peptide ကို သန့်စင်ရန်လိုအပ်ပါသည်။ သန့်စင်မှု။ခန္ဓာကိုယ်အရည်များ၊ တစ်ရှူးများနှင့်ဆဲလ်များရှိ ပရိုတိန်းများကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းနှင့် လက္ခဏာပြခြင်းသည် နမူနာတစ်ခုတည်းတွင် တွေ့ရှိနိုင်သောမျိုးစိတ်များများပြားခြင်းကြောင့် အလွန်ခက်ခဲသောအလုပ်ဖြစ်သည်။ mass spectrometry သည် peptide နှင့် ပရိုတင်းဓာတ်စီခွဲခြင်းအတွက် ထိရောက်သောကိရိယာတစ်ခုဖြစ်သော်လည်း၊ ထိုနမူနာများကို mass spectrometer ထဲသို့ထိုးသွင်းပါက၊ တစ်မျိုးတည်းတွင်၊ ခွဲထွက်ခြင်းမှာ LC ပြဿနာဖြစ်မည်မဟုတ်ပါ။ သတ်မှတ်ထားသောအချိန်4,5,6တွင်အစုလိုက်အပြုံလိုက်တိုင်းတာမှုသို့ဝင်ရောက်သည့်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအရေအတွက်ကိုလျှော့ချမည့် MS ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းမပြုမီ ခွဲထုတ်မှုများ။ထို့အပြင် အရည်အဆင့်ခွဲခြားမှုအတွင်း၊ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုများကို ကျဉ်းမြောင်းသောဒေသများတွင် အာရုံစိုက်နိုင်သည်၊ ထို့ကြောင့် ဤခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုများကို အာရုံစူးစိုက်ပြီး MS ထောက်လှမ်းမှုအာရုံခံနိုင်စွမ်းကိုတိုးတက်စေပါသည်။ Liquid chromatography (LC) သည် ခေတ်စားလာသည်နှင့်အမျှ သိသိသာသာအဆင့်မြင့်လာသည် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း ၇၊၈၊၉၊၁၀။
Reversed-phase liquid chromatography (RP-LC) သည် octadecyl-modified silica (ODS) ကို အသုံးပြု၍ peptide အရောအနှောများကို သန့်စင်ခြင်းနှင့် ခွဲထုတ်ခြင်းအတွက် တွင်ကျယ်စွာ အသုံးပြုပါသည်။သို့သော်၊ ၎င်းတို့၏ ရှုပ်ထွေးသော သဘာဝနှင့် ပရိုတိန်းဓာတ်များသည် amphi 15 ၏ အထူးဖွဲ့စည်းပုံနှင့် အထူးဖွဲ့စည်းပုံကြောင့် amphi1၊ ဤခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုကို ထိန်းသိမ်းရန်နှင့် တုံ့ပြန်ရန်အတွက် ဝင်ရိုးစွန်းနှင့် ဝင်ရိုးစွန်းမဟုတ်သော moieties များပါရှိသော peptides နှင့် ပရိုတိန်းများကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန် ဒီဇိုင်းထုတ်ထားသော stationary phases သည် လိုအပ်ပါသည်။ Mixed-mode chromatography သည် peptides၊ ပရိုတိန်းများနှင့် အခြားရှုပ်ထွေးသောအရောအနှောများကို ခွဲထုတ်ရန်အတွက် RP-LC ၏ အစားထိုးတစ်ခုဖြစ်သည်။ peptide နှင့် ပရိုတင်းကို ပိုင်းခြားခြင်း 17,18,19,20,21.ရောနှော-မုဒ် လျှို့ဝှက်အဆင့်များ (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polar intercalation/RPLC) သည် ဝင်ရိုးစွန်းနှင့် ဝင်ရိုးစွန်းမဟုတ်သော အုပ်စုများ နှစ်ခုလုံးပါဝင်ခြင်းကြောင့် peptide နှင့် ပရိုတိန်းခွဲထွက်ခြင်းအတွက် သင့်လျော်သည်22,23,24,25,26,27,27,22,23,24,25,26,27,27,27,22,23,24,25,26,27,27၊ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု နှင့် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု အဆင့်အကြား အပြန်အလှန်အကျိုးသက်ရောက်မှုအပေါ် မူတည်သောကြောင့် ခွဲထွက်နိုင်စွမ်းနှင့် ဝင်ရိုးစွန်းမဟုတ်သော ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုများအတွက် ထူးခြားသော ရွေးချယ်နိုင်စွမ်းကို ကောင်းစွာ ချိတ်ဆက်ထားသော ဝင်ရိုးစွန်းအုပ်စုများက ပြသသည်။ Multimodal အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှုများ 29၊ 30၊ 31၊ 32။မကြာသေးမီက၊ Zhang et al။ 30 သည် dodecyl-terminated polyamine stationary အဆင့်ကို ပြင်ဆင်ပြီး ဟိုက်ဒရိုကာဗွန်များ၊ စိတ်ကျဆေးများ၊ flavonoids၊ nucleosides၊ estrogens နှင့် အခြားသော ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုများစွာကို အောင်မြင်စွာ ခွဲထုတ်ခဲ့သည်။ ပိုလာ intercalator တွင် ဝင်ရိုးစွန်းနှင့် ဝင်ရိုးစွန်းမဟုတ်သော အုပ်စုများပါရှိသောကြောင့် ၎င်းကို hydrophobie နှင့် hydrophilic ကော်လံနှစ်ခုလုံးပါရှိသော peptides နှင့် ပရိုတိန်းများကို ခွဲခြားရန် အသုံးပြုနိုင်ပါသည်။ amide-embedded C18 ကော်လံများ) သည် ကုန်သွယ်မှုအမည် Ascentis Express RP-Amide ကော်လံများအောက်တွင် စီးပွားဖြစ်ရရှိနိုင်သော်လည်း ဤကော်လံများကို amine 33 ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန်အတွက်သာ အသုံးပြုပါသည်။
လက်ရှိလေ့လာမှုတွင်၊ ဝင်ရိုးစွန်း-ထည့်သွင်းထားသော စာရေးကိရိယာအဆင့် (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) ကို ပြင်ဆင်ပြီး HSA ၏ peptides နှင့် trypsin ချေဖျက်မှုများကို ခွဲထုတ်ရန်အတွက် အကဲဖြတ်ထားပါသည်။ အောက်ဖော်ပြပါ နည်းဗျူဟာကို အသုံးပြု၍ ငုတ်လျှိုးသောအဆင့်ကို ပြင်ဆင်ထားပါသည်။ ပွန်းပဲ့သောဆီလီကာအမှုန်များကို ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်ထုတ်ဝေမှုတွင် ပြုပြင်မွမ်းမံထားသော အချိုးအစားအချို့ဖြင့် polyyleneta အချိုးအစားအလိုက် ပြင်ဆင်ထားပါသည်။ (PEG)၊ TMOS၊ ရေအက်ဆစ်အက်ဆစ်ကို ချွေးပေါက်အရွယ်အစားကြီးမားသော ဆီလီကာအမှုန်အမွှားများကို ပြင်ဆင်ရန် ချိန်ညှိထားပါသည်။ ဒုတိယ၊ လစ်ဂန်အသစ်၊ phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate ကို ပေါင်းစပ်ထုတ်လုပ်ထားပြီး ဝင်ရိုးစွန်းတစ်ခု × မြှုပ်သွင်းထားသည့် စတီးလ်ကိုပြင်ဆင်ရန်အတွက် စီလီကာအမှုန်အမွှားများကို ထုတ်ယူရန်အတွက် အသုံးပြုပါသည်။ ရရှိလာသော 8 မီလီမီတာ စာရေးကိရိယာအဆင့် (10 မီလီမီတာ) သံမဏိကို ထုပ်ပိုးထားသည်။ အကောင်းဆုံးထုပ်ပိုးခြင်းအစီအစဉ်။ကော်လံထုပ်ပိုးခြင်းအား ကော်လံအတွင်း တစ်သားတည်းဖြစ်တည်နေသော အိပ်ရာတစ်ခုဖွဲ့စည်းကြောင်းသေချာစေရန်အတွက် ကော်လံထုပ်ပိုးခြင်းကို စက်တုန်ခါမှုဖြင့် ကူညီပေးပါသည်။ ကော်လံအတွင်း ထုပ်ပိုးထားသော peptide အရောအနှောများ၏ ကော်လံခွဲထုတ်ခြင်းကို အကဲဖြတ်ပါ။ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) နှင့် လူ့သွေးရည်ကြည်အယ်လ်ဘမ် (HAS) ၏ Trypsin ချေဖျက်မှု။ HSA ၏ peptide ရောနှောခြင်းနှင့် trypsin ချေဖျက်မှုကို ကောင်းမွန်သော ကြည်လင်ပြတ်သားမှုနှင့် ထိရောက်မှုတို့ဖြင့် ခွဲခြားထားသည်ကို လေ့လာတွေ့ရှိရပါသည်။ PMP ကော်လံတစ်ပိုင်းခြားခြင်း၏ စွမ်းဆောင်ရည်ကို Express နှင့် နှိုင်းယှဉ်ထားသည်နှင့်အညီ၊ ကော်လံ။ Ascentis Express RP-Amide ကော်လံထက် ပိုထိရောက်သော PMP ကော်လံတွင် peptides နှင့် proteins နှစ်ခုစလုံးကို ကောင်းစွာဖြေရှင်းနိုင်ပြီး ထိရောက်ကြောင်း တွေ့ရှိရပါသည်။
PEG (Polyethylene Glycol)၊ ယူရီးယား၊ အက်ဆစ်အက်ဆစ်၊ Trimethoxy Orthosilicate (TMOS)၊ Trimethyl Chlorosilane (TMCS)၊ Trypsin၊ Human Serum Albumin (HSA)၊ Ammonium Chloride၊ Urea၊ Hexane Methyldisilazane (HMDS)၊ Methacryloyl Chloride (MC4)၊ Styrene၊ (BPO)၊ HPLC အဆင့် Acetonitrile (ACN)၊ မီသနော၊ 2-Propanol နှင့် Sigma-Aldrich (စိန့်လူးဝစ်၊ MO၊ USA) မှဝယ်ယူထားသော Acetone။
ယူရီးယား (8 g)၊ polyethylene glycol (8 g) နှင့် 0.01 N acetic acid 8 mL တို့ကို ရောနှောပြီး 10 မိနစ်ကြာ မွှေပြီးနောက် TMOS ၏ 24 mL ကို ရေခဲအေးသော အခြေအနေအောက်တွင် ပေါင်းထည့်ခဲ့သည်။ တုံ့ပြန်မှုအရောအနှောကို 40°C တွင် အပူပေးပြီး 6 နာရီကြာ အပူပေးပြီး 120°C ဖြင့် သံမဏိဖြင့် 8 နာရီကြာအောင် လောင်းပေးသည်။ အကြွင်းအကျန်များကို 70°C တွင် 12 နာရီကြာ အခြောက်လှန်းထားသည်။ အခြောက်လှန်းထားသော ပျော့ပျောင်းသောအမှုန်အမွှားကို မီးဖိုတစ်ခုထဲတွင် ချောမွေ့အောင်ပြုလုပ်ထားပြီး 550°C တွင် 12 နာရီကြာ ကယ်လ်စီယမ်ပြုလုပ်ထားသည်။ အမှုန်အမွှားအရွယ်အစား၊ ချွေးပေါက်အရွယ်အစားနှင့် မျက်နှာပြင်ဧရိယာတို့တွင် မျိုးပွားနိုင်စွမ်းကို စစ်ဆေးရန် အပိုင်းသုံးပိုင်းကို ပြင်ဆင်ထားပါသည်။
ဆီလီကာအမှုန်အမွှားများ၏ မျက်နှာပြင်ကို ပြုပြင်မွမ်းမံခြင်းဖြင့် အကြိုပေါင်းစပ်ထားသော ligand phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) ဖြင့် အချင်းအရာပေါ်လီမာပြုလုပ်ခြင်းဖြင့် စတီရင်းဖြင့် ဝင်ရိုးစွန်းအုပ်စုပါဝင်သော ဒြပ်ပေါင်းကို ပြင်ဆင်ခဲ့သည်။ စုစည်းမှုများနှင့် polystyrene ကြိုးများ အတွက် stationary အဆင့်။ပြင်ဆင်မှုလုပ်ငန်းစဉ်ကို အောက်တွင်ဖော်ပြထားသည်။
N-phenylmaleimide (200 mg) နှင့် methyl vinyl isocyanate (100 mg) ကို ခြောက်သွေ့သော Toluene တွင် ပျော်ဝင်ခဲ့ပြီး 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ၏ 0.1 mL ကို phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate 6° CPPM ရောစပ်ထားသော အပူပေးထားသော ဓါတ်ဘူးထဲသို့ ထည့်ထားသည်။ နာရီ၊ ၄၀ ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင် ၃ နာရီကြာအောင် စစ်ပြီး အခြောက်ခံပါ။
ဆီလီကာအခြောက်အမှုန် (2 ဂရမ်) ကို တိုလူနေး (100 မီလီမီတာ) ဖြင့် ရောမွှေပြီး 500 မီလီလီတာ အောက်ခြေပုလင်းတွင် 10 မိနစ်ကြာ မွှေနှောက်၍ အသံချဲ့ထွင်ကာ တိုလူနေး (10 မီလီဂရမ်) ကို တိုလူအေးတွင် ပျော်ဝင်စေပြီး ကျဆင်းနေသော လမ်းကြောင်းမှတစ်ဆင့် တုံ့ပြန်မှုပုလင်းထဲသို့ ရောနှောထည့်ထားသည်။ အဆိုပါအရောအနှောကို 100°C တွင် အခြောက်ခံပြီး ဇကာဖြင့် အခြောက်ခံထားသည်။ 60°C သည် 3 နာရီကြာသည်။ထို့နောက် PMCP-bonded silica particles (100 g) သည် toluene (200 ml) တွင် ပျော်ဝင်ပြီး 4-hydroxy-TEMPO (2 mL) ကို dibutyltin dilaurate 100 µL ၏ရှေ့မှောက်တွင် ပေါင်းထည့်ကာ ဓာတ်ကူပစ္စည်းအဖြစ် 100 µL ကို အခြောက်ခံ၍ အရောအနှောကို 50°C တွင် 50°C တွင် အခြောက်လှန်းပြီး 8 နာရီကြာအောင် စစ်ထားပါ။
Styrene (1 mL)၊ benzoyl peroxide BPO (0.5 mL) နှင့် TEMPO-PMCP ကပ်ထားသည့် ဆီလီကာအမှုန်များ (1.5 g) ကို တိုလူအေးတွင် ပြန့်ကျဲစေပြီး နိုက်ထရိုဂျင်ဖြင့် သန့်စင်ထားသည်။ စတီရင်းကို ပေါ်လီမာပြုခြင်းအား 100°C တွင် ၁၂ နာရီကြာ ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ ရရှိလာသော ထုတ်ကုန်ကို မီသနော 60°C ဖြင့် ဆေးကြောပြီး တစ်ညလုံး အခြောက်ခံထားသည်။ ပုံ ၁။
နမူနာများကို 393 K ဖြင့် 1 နာရီကြာ ချေဖျက်ပြီး 10-3 Torr ထက်နည်းသော ကျန်ဖိအားကိုရရှိရန် ဖယ်ထုတ်ထားပါသည်။ P/P0 = 0.99 ၏ နှိုင်းရဖိအားတစ်ခုတွင် N2 စုပ်ယူထားသော ပမာဏကို စုစုပေါင်း pore volume ကိုဆုံးဖြတ်ရန် အသုံးပြုပါသည်။ ဗလာနှင့် ligand-bonded silica အမှုန်များ၏ ပုံသဏ္ဍာန်ကို တိုကျိုတွင် အီလက်ထရွန်းနစ်နည်းပညာဖြင့် မိုက်ခရိုစကင်န်ဖြင့် စစ်ဆေးခဲ့သည်။ Japan)။အခြောက်ခံထားသောနမူနာများ (ဆီလီကာဗလာနှင့် ligand-bonded silica အမှုန်များ) ကို ကော်ကာဗွန်တိပ်ဖြင့် အလူမီနီယံကော်လံပေါ်တွင် ထားခဲ့သည်။ရွှေကို Q150T sputter coater အသုံးပြု၍ နမူနာများပေါ်တွင် ချထားပြီး 5 nm Au အလွှာကို နမူနာများပေါ်တွင် အပ်နှံထားသည်။ ၎င်းသည် ဗို့အားနည်းပါးသော၊ စပါးကောင်း၊ အအေးမိဖလက်ရှ်ဖလက်စထရွန်ကို ပံ့ပိုးပေးပါသည်။ EA1112 ဒြပ်စင်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအား ဒြပ်စင်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာချက်အတွက် အသုံးပြုခဲ့သည်။ Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 အမှုန်အမွှားအရွယ်အစားခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအား အမှုန်အရွယ်အစားခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုရရှိရန် အသုံးပြုခဲ့သည်။ အမှုန်အမွှားအရွယ်အစားခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုရရှိရန် ဆီးလီကာအမှုန်အမွှားများနှင့် ligand-bonded silica အမှုန်များ (5 မီလီဂရမ်တစ်ခုစီ) ကို minated isopropanol 5 နှင့် 10s တွင် ဖြန့်ခွဲထားသည်။ Mastersizer ၏ optical ခုံတန်းလျားကို အပူချိန် 30 မှ 800°C ထက် တစ်မိနစ်လျှင် 5°C နှုန်းဖြင့် ပြုလုပ်ခဲ့ပါသည်။
Ref. 31. 1 µm frit ပါရှိသော ပလပ်ပေါက်တစ်ခုပါသော အံဝင်ခွင်ကျရှိသော သံမဏိကော်လံ (မှန်စီထားသော၊ 100 × 1.8 မီလီမီတာ) ကို slurry packer (Alltech Deerfield, IL, USA) သို့ ချိတ်ဆက်ထားပါသည်။ ၎င်းကို 1.2 mL တွင် သိုလှောင်ရန်အတွက် methanol ကော်လံသို့ 150 mg ကိုအသုံးပြုပြီး သိုလှောင်မှုအဆင့်သို့ 150 mg ကို ဆိုင်းငံ့ထားခြင်းဖြင့် သိုလှောင်မှုအဆင့် slurry ကိုပြင်ဆင်ပါ။ slurry solvent နှင့် propelling solvent။ 100 MP ၏ ဖိအားများကို 10 မိနစ်၊ 80 MP မှ 15 မိနစ်နှင့် 60 MP တို့ကို မိနစ် 30 ကြာ အသုံးပြုခြင်းဖြင့် ကော်လံကို ဆက်တိုက်ဖြည့်သွင်းပြီး တူညီသော တူညီသော ဖိအားများကို ထုတ်ပေးရန်အတွက် Slrry ကော်လံကို ထုတ်ပိုးခြင်းအား သေချာစေရန်၊ ကော်လံအတွင်း ပျက်စီးမှုမှန်သမျှကို ကာကွယ်ရန် ဖြည်းညှင်းစွာ ကော်လံကို slurry ထုပ်ပိုးသည့် ယူနစ်မှ ချိတ်ဆက်ပြီး ၎င်း၏ စွမ်းဆောင်ရည်ကို စစ်ဆေးရန်အတွက် အခြားအကွက်များနှင့် အဝင်ပေါက်နှင့် LC စနစ်သို့ ချိတ်ဆက်ပါ။
LC pump (10AD Shimadzu, Japan)၊ injector (Valco (USA) C14 W.05) နှင့် 50nL ဆေးထိုးကွင်း၊ အမြှေးပါး degasser (Shimadzu DGU-14A)၊ UV-VIS သွေးကြောမျှင်ပြတင်းပေါက်ကို အထူး µLC ကိရိယာ detector (UV-2075) နှင့် သေးငယ်သော ကော်လံများကို ချိတ်ဆက်ခြင်းအတွက် အလွန်ကျဉ်းသော မိုက်ခရိုကော်လံကို ဖန်သားဖြင့် စီတန်းထားသော သေးငယ်သော ကော်လံကို တီးခတ်ပေးသည်။ ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့် ထုပ်ပိုးပြီးနောက်၊ သွေးကြောမျှင်များ (50 μm id 365 နှင့် union capillaries (50 μm) ကို လျှော့ချထားသော union ၏ 1/16″ ထွက်ပေါက်တွင် တပ်ဆင်ခဲ့သည်။ ဒေတာစုဆောင်းခြင်းနှင့် ခရိုမာတိုဂရာဂရပ်ဖစ်များကို Multichro 2000 ဆော့ဖ်ဝဲကို အသုံးပြု၍ လုပ်ဆောင်ခဲ့သည်။ 254 nm သို့မဟုတ် UV ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာချက်အတွက် ဒေတာစုပ်ယူမှုဆိုင်ရာ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာချက် 8 တွင် စောင့်ကြည့်စစ်ဆေးခဲ့သည်။ (နော့သမ်တန်၊ MA)။
လူ့သွေးရည်ကြည်၊ lyophilized အမှုန့်၊ ≥ 96% (agarose gel electrophoresis) 3 mg နှင့် trypsin (1.5 mg)၊ 4.0 M ယူရီးယား (1 mL) နှင့် 0.2 M ammonium bicarbonate (1 mL) တို့ကို ရော၍ 10 မိနစ် (agarose gel electrophoresis) 3 mg ကို trypsin (1.5 mg)၊ 4.0 M ယူရီးယား (1 mL) နှင့် 0.2 M ammonium bicarbonate (1 mL)။ထိုဖြေရှင်းချက်ကို 10 မိနစ် မွှေပြီး 37°C ဖြင့် ရေချိုးပြီး 1 မီလီမီတာ၊ TFA။အဖြေကို စစ်ထုတ်ပြီး 4°C အောက်တွင် သိမ်းဆည်းပါ။
peptide အရောအနှောများနှင့် HSA trypsin ချေဖျက်မှုများကို သီးခြားစီ PMP ကော်လံများတွင် အကဲဖြတ်ထားပါသည်။ PMP ကော်လံဖြင့် HSA ၏ peptide အရောအနှောနှင့် trypsin digest ကို ခွဲခြားစစ်ဆေးပြီး ရလဒ်များကို Ascentis Express RP-Amide ကော်လံနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါသည်။ သီအိုရီအရ ပြားနံပါတ်ကို အောက်ပါအတိုင်း တွက်ချက်သည်-
ဆီလီကာအမှုန်များနှင့် လစ်ဂန်-နှောင်ဖွဲ့ထားသော ဆီလီကာအမှုန်များ၏ SEM ပုံများကို FIG တွင် ပြသထားသည်။ 2 .SEM ရုပ်ပုံများသည် ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်လေ့လာမှုများနှင့်မတူဘဲ၊ ဤအမှုန်များသည် ရှည်လျားသော သို့မဟုတ် ပုံမမှန်သော အချိုးညီညီရှိနေသည့် အမှုန်အမွှားများဖြစ်သည်။ လစ်ဂန်-နှောင်ဖွဲ့ထားသော ဆီလီကာအမှုန်များ (C, D) ၏မျက်နှာပြင်သည် ပိုလီရန်အမှုန်များပေါ်ရှိ စီလီကာကွင်းဆက်ကြောင့်ဖြစ်နိုင်သည့် ပိုလီရင်ဗလာဆီလီကာအမှုန်များထက် ပိုမိုချောမွေ့သည်။ ဆီလီကာအမှုန်များ၏မျက်နှာပြင်။
အီလက်ထရွန် အဏုစကုပ်ကို စကင်န်ဖတ်ခြင်းဖြင့် ဆီလီကာအမှုန်များ (A, B) နှင့် ligand-bonded silica အမှုန်များ (C, D) တို့၏ ရုပ်ပုံများ။
ဆီလီကာအမှုန်အမွှားများ၏ အမှုန်အမွှားအရွယ်အစား ဖြန့်ဖြူးမှုကို ပုံ 3(A) တွင် ပြထားသည်။ ထုထည်-အခြေခံသည့် အမှုန်အမွှားအရွယ်အစားဖြန့်ဖြူးမှုမျဉ်းကွေးများကို ဓာတုဗေဒပြုပြင်မွမ်းမံပြီးနောက် ဆီလီကာအမှုန်များ၏အရွယ်အစား တိုးလာကြောင်းပြသခဲ့သည် (ပုံ 3A)။ ဆီလီကာအမှုန်များ၏ အရွယ်အစားဖြန့်ကျက်မှုဒေတာကို လက်ရှိလေ့လာချက် 1 အရွယ်အစား၊ ယခင်လေ့လာနိုင်သော ပမာဏနှင့် နှိုင်းယှဉ်နိုင်သည်။ PMP ၏ d(0.5) သည် 3.36 μm ဖြစ်သည် ကျွန်ုပ်တို့ယခင်လေ့လာခဲ့သည့် ပိုလီစတီရင်း-ချည်နှောင်ထားသော ဆီလီကာအမှုန်အမွှားအဆင့်ထက် ပိုကြီးသည်။ ဆိုလိုသည်မှာ စတီရင်းဖြင့် ဆီလီကာအမှုန်များ၏ မျက်နှာပြင်လုပ်ဆောင်နိုင်စွမ်းသည် ဆီလီကာမျက်နှာပြင်ပေါ်တွင် ပိုလီစတီရင်းအလွှာ (0.97 µm) သာရှိပြီး PMP အဆင့်တွင် အလွှာအထူမှာ 1.38 µm ဖြစ်သည်။
အမှုန်အရွယ်အစား ဖြန့်ဖြူးခြင်း (A) နှင့် ချွေးပေါက် အရွယ်အစား ဖြန့်ဖြူးခြင်း (B) တို့သည် ဗလာ ဆီလီကာ အမှုန်များနှင့် လစ်ဂန်-ဘောင်းစီလီကာ အမှုန်များ ဖြစ်ကြသည်။
လက်ရှိလေ့လာမှု၏ ဆီလီကာအမှုန်များ၏ ချွေးပေါက်အရွယ်အစား၊ ချွေးပေါက်ထုထည်နှင့် မျက်နှာပြင်ဧရိယာကို ဇယား 1(B) တွင် ဖော်ပြထားပါသည်။ ဆီလီကာအမှုန်များနှင့် လစ်ဂန်-နှောင်ဖွဲ့ထားသော ဆီလီကာအမှုန်များ၏ PSD ပရိုဖိုင်များကို ပုံ 3(B) တွင် ပြထားသည်။ ရလဒ်များသည် ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်လေ့လာမှုနှင့် နှိုင်းယှဉ်နိုင်သည်။ ဆီးလ်နှင့် လစ်ကာအမှုန်များ 10 နှင့် ပေါင်းထားသော ချွေးပေါက်အရွယ်အစား 23 ခုရှိသည်။ ဇယား 1(B) တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း ဓာတုပြုပြင်မွမ်းမံပြီးနောက် ချွေးပေါက်အရွယ်အစား 69 လျော့နည်းသွားကြောင်း ညွှန်ပြပြီး မျဉ်းကွေးပြောင်းလဲမှုကို ပုံ 3(B) တွင်ပြသထားသည်။ထို့အတူ၊ ဓာတုအမှုန်အမွှားများ၏ ချွေးပေါက်ပမာဏသည် 0.67 မှ 0.58 cm3/g တွင် လျော့နည်းသွားသည်ကို လောလောဆယ် ဓာတုဗေဒအပိုဒ်ခွဲများလေ့လာပြီးနောက် မျက်နှာပြင်ဧရိယာ 16 စင်တီမီတာဖြစ်သည်။ ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်လေ့လာမှု (124 m2/g) နှင့် နှိုင်းယှဉ်နိုင်သော m2/g) ဇယား 1(B) တွင် ပြထားသည့်အတိုင်း၊ ဓာတုပြုပြင်မွမ်းမံပြီးနောက် ဆီလီကာအမှုန်များ၏ မျက်နှာပြင်ဧရိယာ (m2/g) သည်လည်း 116 m2/g မှ 105 m2/g သို့ လျော့နည်းသွားသည်။
စာရေးကိရိယာအဆင့်၏ဒြပ်စင်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုရလဒ်များကိုဇယား 2 တွင်ပြသထားသည်။ လက်ရှိ stationary အဆင့်၏ကာဗွန်တင်ဆောင်မှုသည် 6.35% ဖြစ်ပြီး ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်လေ့လာမှု၏ကာဗွန်တင်ဆောင်မှုထက်နိမ့်သည် (polystyrene bonded silica particles, 7.93% 35 နှင့် 10.21% အသီးသီး) 42. အဘယ်ကြောင့်ဆိုသော် လက်ရှိ stationary အဆင့်တွင် ကာဗွန်တင်ဆောင်မှုသည် နည်းပါးသောကြောင့်၊ SP ၏လက်ရှိပြင်ဆင်မှုတွင် နည်းပါးသောကြောင့်၊ phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) နှင့် 4-hydroxy-TEMPO ကဲ့သို့သော ဝင်ရိုးစွန်းလစ်ဂန်းအချို့ကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ယခင်လေ့လာမှုများတွင် နိုက်ထရိုဂျင်အလေးချိန်အားဖြင့် 0.1735% နှင့် 0.85% နှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက နိုက်ထရိုဂျင်၏လက်ရှိ stationary အဆင့်၏ wt % ပိုများသောကြောင့် ဆိုလိုသည်။ phenylmaleimide.ထို့အတူ၊ ထုတ်ကုန် (၄) နှင့် (၅) ၏ ကာဗွန်တင်ဆောင်မှုသည် 2.7% နှင့် 2.9% အသီးသီးရှိပြီး နောက်ဆုံးထုတ်ကုန် (6) ၏ ကာဗွန်တင်ဆောင်မှုသည် 6.35% ဖြစ်သည် ကာဗွန် loading (6.35%) ဖြင့် ligands များတွင် C သာမက N၊ O နှင့် H တို့ပါ၀င်သောကြောင့်ဖြစ်သည်။
phenylmaleimide-methylvinylisocyanate ligand သည် ဆီလီကာအမှုန်များ၏ မျက်နှာပြင်ကို ပြုပြင်မွမ်းမံရန်အတွက် ရွေးချယ်ခဲ့ခြင်းဖြစ်ပြီး ၎င်းတွင် ဝင်ရိုးစွန်း phenylmaleimide အုပ်စုများနှင့် vinylisocyanate အုပ်စုများပါရှိသည်။ ဗီနိုင်းအိုင်ဆိုစီနိတ်အုပ်စုများသည် သက်ရှိအစွန်းရောက်ပေါ်လီမာပြုခြင်းဖြင့် styrene နှင့် ပိုမိုတုံ့ပြန်နိုင်သည်။ ဒုတိယအကြောင်းရင်းမှာ ပြင်းထန်သောအဆင့်နှင့် staticyte အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှုရှိသော အုပ်စုကို ထည့်သွင်းရခြင်းမှာ၊ phenylmaleimide moiety သည် ပုံမှန် pH တွင် virtual charge မရှိပါ။ stationary phase ၏ polarity ကို အကောင်းဆုံး styrene ပမာဏနှင့် free radical polymerization ၏ တုံ့ပြန်မှုအချိန်ဖြင့် ထိန်းချုပ်နိုင်သည်။ တုံ့ပြန်မှု၏ နောက်ဆုံးအဆင့် (free-radical polymerization) သည် အရေးကြီးပြီး stationary phase ၏ polarity ကို ပြောင်းလဲနိုင်သည်။ ၎င်းသည် တိုးလာနေသော ကာဗွန်စတီရယ်ပမာဏကို စစ်ဆေးရန်နှင့် stationary phase ၏ ပမာဏကို စစ်ဆေးရန် ဒြပ်စင်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုကို လုပ်ဆောင်ခဲ့သည်။ တုံ့ပြန်မှုအချိန်ကို တိုးမြှင့်ပေးပြီး styrene ၏ မတူညီသော ပြင်းအားများဖြင့် ပြင်ဆင်ထားသော SPs များသည် မတူညီသော ကာဗွန် loadings များရှိသည်။ တစ်ဖန်၊ ဤ stationary အဆင့်များကို stainless steel ကော်လံများတွင် တင်ပြီး ၎င်းတို့၏ chromatographic စွမ်းဆောင်ရည်ကို စစ်ဆေးပါ (ရွေးချယ်မှု၊ ကြည်လင်ပြတ်သားမှု၊ N တန်ဖိုး စသည်ဖြင့်)။ ဤစမ်းသပ်မှုများအပေါ် အခြေခံ၍ PMP stationary polarity ကို ကောင်းစွာထိန်းချုပ်ရန်နှင့် ကောင်းမွန်သေချာစေရန်အတွက် ပိုမိုကောင်းမွန်သော ဖော်မြူလာကို ရွေးချယ်ထားသည်။
peptide အရောအနှောငါးမျိုး (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) ကိုလည်း မိုဘိုင်းအဆင့်ကို အသုံးပြု၍ PMP ကော်လံကို အသုံးပြု၍ အကဲဖြတ်ခဲ့ပါသည်။ 60/40 (v/v) acetonitrile/water (0.1% TFA) သည် 80 μL/min ဖြင့် စီးဆင်းမှုနှုန်းတွင် ပိုမိုကောင်းမွန်သော elution အခြေအနေများအောက်တွင်၊ ကော်လံတစ်ခုလျှင် သီအိုရီပိုင်းပန်းကန်နံပါတ် (N) (100 × 1.8 mm id) သည် 20,000 ± 100 (200,000) တန်ကြေးအတွက် T 3. PMP ကော်လံသုံးခုနှင့် chromatograms များကို ပုံ 5A တွင်ပြသထားသည်။ မြင့်မားသောစီးဆင်းမှုနှုန်း (700 μL/min) တွင် PMP ကော်လံပေါ်တွင် လျင်မြန်စွာခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းဖြင့် တစ်မိနစ်အတွင်း peptides ငါးခုကို ထုတ်ပစ်သည်၊ N တန်ဖိုးများသည် အလွန်ကောင်းသည်၊ ကော်လံတစ်ခုလျှင် 13,500 ± 330 (100 × 1.5 Corpons မှ 1.8 mmid)၊ (ပုံ 5B)။ ထပ်တူကျသော အရွယ်အစား ကော်လံသုံးခု (100 × 1.8 မီလီမီတာ id) သည် မျိုးပွားနိုင်မှုကို စစ်ဆေးရန်အတွက် မတူညီသော PMP စာရေးကိရိယာအဆင့် သုံးမျိုးဖြင့် ထုပ်ပိုးထားသည်။ ကော်လံတစ်ခုစီအတွက် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု အာရုံစူးစိုက်မှုအား အကောင်းဆုံး elution အခြေအနေများနှင့် သီအိုရီဇယားပြားများ၏ အရေအတွက် N နှင့် တူညီသောစမ်းသပ်မှုအရောအနှောကို ကော်လံတစ်ခုစီရှိ TMP ကော်လံများတွင် ခွဲထုတ်ရန် သိုလှောင်ချိန်တို့ကို အသုံးပြုထားသည်။ 4. PMP ကော်လံ၏ ပြန်ထုတ်နိုင်စွမ်းသည် ဇယား 3 တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း အလွန်နိမ့်သော % RSD တန်ဖိုးများနှင့် ဆက်စပ်နေသည်။
PMP ကော်လံ (B) နှင့် Ascentis Express RP-Amide ကော်လံ (A) ရှိ peptide အရောအနှောကို ပိုင်းခြားခြင်း။ မိုဘိုင်းအဆင့် 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%)၊ PMP ကော်လံအတိုင်းအတာ (100 × 1.8 မီလီမီတာ id); ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း ဒြပ်ပေါင်းများ၏ elution အစီအစဉ်- 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) နှင့် 5 (leucine) acid enkephalin))။
PMP ကော်လံ (100 × 1.8 မီလီမီတာ id) ကို စွမ်းဆောင်ရည်မြင့်မားသော အရည် chromatography တွင် လူ့သွေးရည်ကြည်အယ်လ်ဘမ်၏ tryptic digests များကို ပိုင်းခြားရန်အတွက် အကဲဖြတ်ထားပါသည်။ ပုံ 6 တွင် chromatogram သည် နမူနာအား ကောင်းစွာခွဲထုတ်ပြီး ကြည်လင်ပြတ်သားမှု အလွန်ကောင်းမွန်ကြောင်းပြသထားသည်။HSA ချေဖျက်မှုများကို 100 µL/wateraceit/minle အဆင့်၊ မိုဘိုင်းလ်အဆင့် 100 µL/water 70 နှင့် မိုဘိုင်းအဆင့်ကို အသုံးပြု၍ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာထားပါသည်။ 0.1% TFA. chromatogram (ပုံ 6) တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း HSA အစာခြေခြင်းကို 17 peptides နှင့်သက်ဆိုင်သော 17 peptides နှင့် သက်ဆိုင်သော အထွတ်အထိပ်များအဖြစ် ပိုင်းခြားထားပါသည်။ HSA digest ရှိ အထွတ်အထိပ်တစ်ခုစီ၏ ခွဲထွက်မှုထိရောက်မှုကို တွက်ချက်ပြီး တန်ဖိုးများကို ဇယား 5 တွင်ပေးထားသည်။
HSA ၏ tryptic digest (100 × 1.8 mm ID) ကို PMP ကော်လံတွင် ပိုင်းခြားထားသည်။ စီးဆင်းမှုနှုန်း (100 µL/မိနစ်)၊ မိုဘိုင်းအဆင့် 60/40 acetonitrile/ရေ 0.1% TFA ပါရှိသည်။
L သည် ကော်လံအရှည်ဖြစ်ပြီး η သည် မိုဘိုင်းအဆင့်၏ viscosity ဖြစ်ပြီး ΔP သည် ကော်လံနောက်ပြန်ဖိအားဖြစ်ပြီး u သည် မိုဘိုင်းအဆင့်၏ linear velocity ဖြစ်သည်။ PMP ကော်လံ၏ စိမ့်ဝင်နိုင်စွမ်းမှာ 2.5 × 10-14 m2 ဖြစ်ပြီး စီးဆင်းမှုနှုန်းမှာ 25 μL/min ဖြစ်ပြီး 60/40 v/v PACN perme (ကော်လံ 10) ကို အသုံးပြုထားသည်။ mm id) သည် ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်လေ့လာချက် Ref.34 နှင့်ဆင်တူပါသည်။ အပေါ်ယံအညစ်အကြေးများပါရှိသော ကော်လံ၏စိမ့်ဝင်နိုင်စွမ်းမှာ- 1.3 μm အမှုန်အတွက် 1.7 × 10-15၊ μm အမှုန်များ 5 μm အမှုန်များအတွက် 43. ထို့ကြောင့် PMP အဆင့်၏ စိမ့်ဝင်နိုင်စွမ်းသည် 5 μm core-shell အမှုန်များနှင့် ဆင်တူသည်။
Wx သည် ကလိုရိုဖောင်ဖြင့်ထုပ်ထားသောကော်လံ၏အလေးချိန်ဖြစ်ပြီး Wy သည် မီသနောဖြင့်ထုပ်ပိုးထားသောကော်လံ၏အလေးချိန်ဖြစ်ပြီး ρ သည် ဆားဗေး၏သိပ်သည်းဆဖြစ်သည်။ မီသနော၏သိပ်သည်းဆ (ρ = 0.7866) နှင့် ကလိုရိုဖောင် (ρ = 1.484)။ စုစုပေါင်း porosity of SILICA PARTICLES-108 mm. ကျွန်ုပ်တို့ယခင်လေ့လာခဲ့သည့် C18-Urea ကော်လံ 31 သည် 0.63 နှင့် 0.55 အသီးသီးဖြစ်သည်။ ဆိုလိုသည်မှာ ယူရီးယား ligand များပါဝင်မှုသည် stationary phase ၏ permeability ကိုလျော့နည်းစေသည်။ အခြားတစ်ဖက်တွင်၊ PMP ကော်လံ၏စုစုပေါင်း porosity (100 × 1.8 mm id) သည် ကော်လံများ၏ perme ထက် 0.60 နိမ့်ပါသည်။ C18-bonded silica အမှုန်များသည် C18-type stationary phases တွင် C18 ligands များသည် silica particles များကို linear chains များအဖြစ် ချိတ်ဆက်ထားပြီး polystyrene-type stationary phases တွင်၊ ၎င်းပတ်လည်တွင် အတော်လေးထူသော ပိုလီမာအလွှာကို ဖွဲ့စည်းထားပါသည်။ ပုံမှန်စမ်းသပ်မှုတစ်ခုတွင် column porosity ကို တွက်ချက်သည်-
ပုံ 7A၊B သည် PMP ကော်လံ (100 × 1.8 မီလီမီတာ id) နှင့် Ascentis Express RP-Amide ကော်လံ (100 × 1.8 မီလီမီတာ id) ကို တူညီသော elution အခြေအနေများ (ဆိုလိုသည်မှာ၊ 60/40 ACN/H2O နှင့် 0.1% TFA) ကို ပြသထားသည်။ van Deemter ၏)။ ရွေးချယ်ထားသော peptide အရောအနှောများ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) ကို 20 µL/ ကော်လံနှစ်ခုလုံးအတွက် အနိမ့်ဆုံးစီးဆင်းမှုနှုန်းသည် 800 µL/min ဖြစ်သည်။ အနိမ့်ဆုံး HETP ကော်လံအတွက် အကောင်းဆုံးနှုန်း 0 µL (800 µL/min) HETP တန်ဖိုးများ နှင့် Ascentis Express RP-Amide ကော်လံသည် 2.6 µm နှင့် 3.9 µm အသီးသီးရှိသည်။ HETP တန်ဖိုးများသည် PMP ကော်လံ (100 × 1.8 mm id) သည် စီးပွားဖြစ်ရရှိနိုင်သော Ascentis Express RP-Amide ကော်လံ (100 × 7) တွင် Defem ကော်လံ (100 × 7) ကိုပြသထားသည်ကို ဖော်ပြသည်။ ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်လေ့လာမှုနှင့်နှိုင်းယှဉ်ပါက N တန်ဖိုး ကျဆင်းခြင်းသည် သိသာထင်ရှားခြင်းမရှိပါ။ PMP ကော်လံ (100 × 1.8 မီလီမီတာ id) သည် Ascentis Express RP-Amide ကော်လံနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက ပိုမိုမြင့်မားသော ခွဲထွက်မှုစွမ်းရည်ကို လက်ရှိအလုပ်တွင်အသုံးပြုသည့် အမှုန်အမွှားပုံသဏ္ဍာန်၊ အရွယ်အစားနှင့် ရှုပ်ထွေးသောကော်လံထုပ်ပိုးမှုလုပ်ငန်းစဉ်များပေါ်တွင် အခြေခံထားသည်။
(က) van Deemter plot (HETP versus mobile phase linear velocity) PMP column (100 × 1.8 mm id) တွင် 60/40 ACN/H2O တွင် ရရှိသော 0.1% TFA.(B) van Deemter plot (HETP versus mobile phase linear velocity) Ascentis ကော်လံ (10m × 1.A in RP8) ကို အသုံးပြု၍ ရရှိသော 0.1% TFA ပါသော 60/40 ACN/H2O
စွမ်းဆောင်ရည်မြင့်မားသော အရည် chromatography တွင် ပိုလာ-embedded polystyrene stationary အဆင့်ကို ပေါင်းစပ်ဖွဲ့စည်းထားသော peptide အရောအနှောများနှင့် trypsin များကို ခွဲထုတ်ခြင်းအတွက် အကဲဖြတ်ခြင်းအား စွမ်းဆောင်ရည်မြင့်မားသော အရည် chromatography တွင် PMP ကော်လံများ၏ chromatographic စွမ်းဆောင်ရည်သည် ခွဲထွက်မှု ထိရောက်မှုနှင့် ကြည်လင်ပြတ်သားမှုတွင် အထူးကောင်းမွန်ပါသည်။ PMP ကော်လံများ၏ အရွယ်အစားနှင့် အရွယ်အစား အမျိုးမျိုးကြောင့် ခွဲထွက်ခြင်းဆိုင်ရာ စွမ်းဆောင်ရည်မှာ အကြောင်းရင်းများဖြစ်သောကြောင့် ပိုမိုကောင်းမွန်လာပါသည်။ ဆီလီကာအမှုန်အမွှားများ၊ စာရေးကိရိယာအဆင့်၏ထိန်းချုပ်ထားသောပေါင်းစပ်မှုနှင့် ရှုပ်ထွေးသောကော်လံထုပ်ပိုးမှု။ မြင့်မားသောခွဲထွက်မှုထိရောက်မှုအပြင်၊ မြင့်မားသောစီးဆင်းမှုနှုန်းဖြင့်ကော်လံနိမ့်သောကော်လံနောက်ပြန်ဖိအားသည်ဤ stationary phase ၏နောက်ထပ်အားသာချက်ဖြစ်သည်။PMP ကော်လံများသည် ကောင်းမွန်သောမျိုးပွားမှုကိုပြသပြီး peptide အရောအနှောများနှင့် trypsin အမျိုးမျိုးတို့ကို ခွဲခြမ်းစိပ်ဖြာခြင်းအတွက်အသုံးပြုနိုင်ပါသည်။ သဘာဝပရိုတိန်းဒြပ်ပေါင်းများကိုခွဲထုတ်ရန်အတွက်ကျွန်ုပ်တို့သည်ဤကော်လံကိုအသုံးပြုရန်ရည်ရွယ်ပါသည်။ အရည် chromatography. အနာဂတ်တွင်၊ PMP ကော်လံများကို ပရိုတိန်းများနှင့် monoclonal antibodies ခွဲခြားခြင်းအတွက် အကဲဖြတ်မည်ဖြစ်သည်။
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Reversed Phase Chromatography Part I ဖြင့် ပြောင်းလဲထားသော Phase Chromatography အပိုင်း 1- ကော်လံ Characterization Protocol.J. Chromatography.1603၊ 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019)။
Gomez, B. et al.Improved active peptides.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018)။
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic therapeutic peptides: science and the market.drug discovery.15 (1-2) ယနေ့၊ 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.(10.10.2009)။
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J. Chromatography.A 1261၊ 78–90 (2012)။
Liu, W. et al.အဆင့်မြင့်အရည် ခရိုမာတိုဂရမ်-ဒြပ်ထု spectrometry သည် ကျယ်ပြန့်စွာ ပစ်မှတ်ထားသော ဇီဝဖြစ်စဉ်များနှင့် proteomics.anus.Chim.Acta 1069၊ 89–97 (2019) တို့ကို ပေါင်းစပ်ထည့်သွင်းနိုင်စေပါသည်။
Chesnut၊ SM & Salisbury၊ JJ ဆေးဝါးဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုတွင် UHPLC ၏အခန်းကဏ္ဍ။J. စက်တင်ဘာ. သိပ္ပံ.၃၀(၈)၊ ၁၁၈၃-၁၁၉၀ (၂၀၀၇)။
Wu, N. & Clausen, AM သည် လျင်မြန်စွာ ခွဲထွက်ခြင်းအတွက် ultrahigh pressure liquid chromatography ၏ အခြေခံကျပြီး လက်တွေ့ကျသော ရှုထောင့်များ။J. စက်တင်ဘာ.၃၀(၈)၊ ၁၁၆၇-၁၁၈၂။https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007)။
Wren, SA & Tchelitcheff, P. ဆေးတီထွင်မှုတွင် အလွန်မြင့်မားသောစွမ်းဆောင်ရည်အရည် chromatography အသုံးချမှု။J. Chromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006)။
Gu, H. et al.Monolithic macroporous hydrogels များသည် enteroviruses.Chemical.Britain.J.ကို ထိရောက်စွာ သန့်စင်ရန်အတွက် ဆီတွင်းအဆင့်မြင့် အတွင်းပိုင်း emulsions များမှ ပြင်ဆင်သော ပစ္စည်းများ။ 401၊ 126051 (2020)။
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA ပရိုတီအိုမစ်တွင် အရည် chromatography အခန်းကဏ္ဍ။ Chromatography.A 1053(1-2), 27-36 (2004)။
Fekete, S., Veuthey, J.-L.& Guillarme, D. ကုထုံးဆိုင်ရာ peptides နှင့် proteins များ၏ ပြောင်းပြန်အဆင့် အရည် chromatography ခွဲခြားမှုများတွင် ပေါ်ထွက်နေသော ခေတ်ရေစီးကြောင်းများ- သီအိုရီနှင့် applications.J. Pharmacy.Biomedical Science.anus.69၊ 9-27 (2012)။
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC သည် RP-RP-HPLC စနစ်ဖြင့် မတူညီသော pH တန်ဖိုးများကို ပထမနှင့် ဒုတိယပိုင်းခြားသည့်အတိုင်းအတာများတွင် အသုံးပြုထားသော peptides နှစ်ဘက်မြင် ခွဲထွက်ခြင်း။J. စက်တင်ဘာ ၂၈(၁၄)၊ ၁၆၉၄-၁၇၀၃ (၂၀၀၅)။
Feletti, S. et al. C18 ခွဲ-2 μm အပြည့်နှင့် အပေါ်ယံအမှုန်များဖြင့် ထုပ်ပိုးထားသော မြင့်မားသော ထိရောက်မှုရှိသော chromatographic ကော်လံများ၏ အစုလိုက်အပြုံလိုက် လွှဲပြောင်းခြင်းဝိသေသလက္ခဏာများနှင့် kinetic စွမ်းဆောင်ရည်ကို စုံစမ်းစစ်ဆေးခဲ့သည်။J. စက်တင်ဘာ. Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020)။
Piovesana, S. et al. အထီးကျန်ခြင်းတွင် မကြာသေးမီက ခေတ်ရေစီးကြောင်းနှင့် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုဆိုင်ရာ စိန်ခေါ်မှုများ၊ အပင်ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ peptides.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s0018x16-10.1007/s0018x16.
Mueller၊ JB et al. သက်ရှိနိုင်ငံတော်၏ ထင်ရှားသောရှုခင်း။ သဘာဝ 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020)။
DeLuca, C. et al.Downstream processing of therapeutic peptides of preparative liquid chromatography.Molecule (Basel, Switzerland) 26(15), 4688(2021)။
Yang, Y. & Geng, X. Mixed-mode chromatography နှင့် biopolymers.J တွင် ၎င်း၏အသုံးချမှု။ Chromatography.A 1218(49), 8813–8825 (2011)။
Zhao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. Ligands ရောစပ်မုဒ် ပရိုတင်း ခရိုမာတီဂရာအတွက် နိယာမ၊ စရိုက်လက္ခဏာနှင့် ဒီဇိုင်း။J. Biotechnology.144(1), 3-11 (2009)။