Nature.com သို့လာရောက်လည်ပတ်သည့်အတွက် ကျေးဇူးတင်ပါသည်။ သင်အသုံးပြုနေသောဘရောက်ဆာဗားရှင်းသည် CSS အတွက် အကန့်အသတ်ဖြင့် ပံ့ပိုးမှုရှိပါသည်။ အကောင်းဆုံးအတွေ့အကြုံအတွက်၊ အပ်ဒိတ်လုပ်ထားသောဘရောက်ဆာတစ်ခု (သို့မဟုတ် Internet Explorer တွင် လိုက်ဖက်ညီသောမုဒ်ကိုပိတ်ရန်) အကြံပြုပါသည်။ ထိုအချိန်တွင် ဆက်လက်ပံ့ပိုးကူညီမှုသေချာစေရန်၊ ပုံစံများနှင့် JavaScript မပါဘဲ ဆိုက်ကိုပြသပါမည်။
သေးငယ်သောဆီလီကာအမှုန်အမွှားများကို သေးငယ်သောအမှုန်များရရှိရန် ပြုပြင်မွမ်းမံမှုအချို့ဖြင့် sol-gel နည်းလမ်းဖြင့် ပြင်ဆင်ခဲ့သည်။ ဤအမှုန်များကို N-phenylmaleimide အဆင့် (PMI) နှင့် စတီရင်းစတိရင်းစတိရင်းစတိနနယ်စတီယာရီအဆင့် (N-phencalylmaleimide) ပရိုလင်စတီယာရီစတိန်းပရိုစတိန်းပရိုစတိန်းပရိုစတိန်းပရိုစတိန်းပရိုစတိန်းပရိုစတိန်းပရိုစတိန်းပရိုစတိန်းနိတ်စတီယာရီအဆင့် N-phencalylmaleimide-MPN-PEN-phenylmaleimide အဆင့်စတီးလ်စတီယာရီအဆင့်တို့ကိုပြင်ဆင်ရန်၊ (100 × 1.8 မီလီမီတာ id) ကို slurry ထုပ်ပိုးခြင်းဖြင့် ထုပ်ပိုးထားပါသည်။ အကဲဖြတ်ထားသော PMP ကော်လံကို ခွဲခြားထားသော peptide အရောအနှော (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg၊ human leucine enrichestums) (လူ့အယ်လ်ဘမ်ဒစ်ဂျန်အက်စခရမ်) ၏ leucineatSer-Arg၊ အကောင်းဆုံး elution အခြေအနေများ၊ peptide အရောအနှော၏ သီအိုရီ ပန်းကန်ပြားအရေအတွက်သည် 280,000 plates/m² အထိ မြင့်မားသည်။ စီးပွားဖြစ် Ascentis Express RP-Amide ကော်လံနှင့် တီထွင်ထားသော ကော်လံ၏ ခွဲထွက်ခြင်းစွမ်းဆောင်ရည်ကို နှိုင်းယှဉ်ကြည့်လျှင် PMP ကော်လံ၏ ခွဲထွက်ခြင်းစွမ်းဆောင်ရည်သည် ခွဲထွက်မှု ထိရောက်မှုနှင့် ကြည်လင်ပြတ်သားမှုဆိုင်ရာ စီးပွားရေးကော်လံထက် သာလွန်ကြောင်း တွေ့ရှိရပါသည်။
မကြာသေးမီနှစ်များအတွင်း၊ ဇီဝဆေးဝါးလုပ်ငန်းသည် စျေးကွက်ဝေစု သိသိသာသာတိုးမြင့်လာသဖြင့် ကမ္ဘာတဝှမ်းတွင် စျေးကွက်တစ်ခုဖြစ်လာခဲ့သည်။ ဇီဝဆေးဝါးလုပ်ငန်း1,2,3 ၏ ပေါက်ကွဲကြီးထွားမှုနှင့်အတူ၊ peptides နှင့် ပရိုတင်းများကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းမှာ အလွန်အလိုရှိသည်၊ ပစ်မှတ် peptide အပြင်၊ peptide ပေါင်းစပ်မှုအတွင်း အညစ်အကြေးများစွာကို ထုတ်ပေးပါသည်။ ထို့ကြောင့် အဆိုပါ peptide သန့်စင်မှုကို ရယူရန် လိုအပ်ပါသည်။ ခန္ဓာကိုယ်အရည်များ၊ တစ်ရှူးများနှင့် ဆဲလ်များတွင် ပရိုတိန်းများကို ခွဲခြားသတ်မှတ်ခြင်းသည် နမူနာတစ်ခုတည်းတွင် တွေ့ရှိနိုင်သော ဖြစ်နိုင်ချေရှိသောမျိုးစိတ်များ များပြားခြင်းကြောင့် အလွန်ခက်ခဲသောအလုပ်ဖြစ်သည်။ mass spectrometry သည် peptide နှင့် protein sequencing အတွက် ထိရောက်သောကိရိယာတစ်ခုဖြစ်သော်လည်း၊ ထိုနမူနာများကို mass spectrometer ထဲသို့ ထိုးသွင်းပါက၊ ခွဲထွက်ခြင်းသည် စံပြဖြစ်မည်မဟုတ်ပါ။ ဤပြဿနာကို LC ဖြင့် ကြိုတင်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းဖြင့် ခွဲထုတ်ခြင်း (အရည်ချင်းခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု) ကို လျှော့ချနိုင်မည်ဖြစ်ပါသည်။ သတ်မှတ်ထားသောအချိန် 4,5,6 တွင်အစုလိုက်အပြုံလိုက်ဝင်ရောက်သည့် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအရေအတွက် 4,5,6.ထို့အပြင် အရည်အဆင့်ခွဲခြားမှုအတွင်း၊ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုများကို ကျဉ်းမြောင်းသောဒေသများတွင် အာရုံစိုက်နိုင်သည်၊ ထို့ကြောင့် ဤခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုများကို အာရုံစူးစိုက်ပြီး MS ထောက်လှမ်းမှုအာရုံခံနိုင်စွမ်းကို တိုးတက်စေပါသည်။Liquid chromatography (LC) သည် လွန်ခဲ့သောဆယ်စုနှစ်များအတွင်း သိသာထင်ရှားစွာတိုးတက်လာပြီး ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုတစ်ခု၊ 18 proteom တွင် လူကြိုက်များသောနည်းပညာတစ်ခုဖြစ်လာသည်။
Reversed-phase liquid chromatography (RP-LC) သည် octadecyl-modified silica (ODS) ကို အသုံးပြု၍ peptide အရောအနှောများကို သန့်စင်ခြင်းနှင့် ခွဲထုတ်ခြင်းအတွက် တွင်ကျယ်စွာ အသုံးပြုပါသည်။ သို့သော်၊ ၎င်းတို့၏ ရှုပ်ထွေးသောအဆင့်၊ အထူးဖွဲ့စည်းပုံနှင့် ပရိုတိန်းများသည် amphi 15 အဆင့်၊ အထူးဖွဲ့စည်းပုံနှင့် အထူးဖွဲ့စည်းပုံတို့ကြောင့် amphi 15 ၏ အထူးဖွဲ့စည်းပုံနှင့် ပရိုတင်းများကို ကျေနပ်လောက်အောင် ခွဲထုတ်နိုင်ခြင်း မရှိပါ။ ဤခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာချက်များနှင့် တုံ့ပြန်ထိန်းသိမ်းရန်အတွက် ဝင်ရိုးစွန်းနှင့် ဝင်ရိုးစွန်းမဟုတ်သော moieties များပါရှိသော peptides များနှင့် ပရိုတိန်းများကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန် လိုအပ်ပါသည်။16. Multimodal interactions ကိုပံ့ပိုးပေးသော Mixed-mode chromatography သည် peptides၊ ပရိုတိန်းများနှင့် အခြားရှုပ်ထွေးသောအရောအနှောများကို ခွဲထုတ်ရန်အတွက် RP-LC ၏ အခြားရွေးချယ်စရာတစ်ခုဖြစ်သည်။ ပရိုတိန်းအရောအနှောများကို ရောစပ်မုဒ်နှင့် ခွဲထွက်အဆင့်များအတွက် 7 ကော်လံများကို ပြင်ဆင်ပြီးပါပြီ၊ 18,19,20,21.ရောနှော-မုဒ် စာရေးကိရိယာအဆင့်များ (WAX/RPLC၊ HILIC/RPLC၊ ဝင်ရိုးစွန်းအဆက်ဖြတ်ခြင်း/RPLC) များသည် ဝင်ရိုးစွန်းနှင့် ဝင်ရိုးစွန်းမဟုတ်သော အုပ်စုများ နှစ်ခုလုံးပါဝင်နေခြင်းကြောင့် peptide နှင့် ပရိုတင်းခွဲထွက်ခြင်းအတွက် သင့်လျော်သည်22,23,24,25,26,27,28 ပါဝါဝင်ရိုးစွန်းအုပ်စုများကို သီးခြားခွဲထွက်ပြီး ပိုလာပိုလာအုပ်စုများကို ခွဲထုတ်ရာတွင် ကောင်းမွန်သော၊ ပိုလာနှင့် ဝင်ရိုးစွန်းမဟုတ်သော ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွက် ရွေးချယ်နိုင်မှုအား ခွဲထုတ်ခြင်းသည် ပိုင်းခြားစိတ်ဖြာချက်နှင့် စာရေးကိရိယာအဆင့်ကြား အပြန်အလှန်အကျိုးသက်ရောက်မှုအပေါ် မူတည်သည်။Multimodal အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှုများ 29၊ 30၊ 31၊ 32။မကြာသေးမီက၊ Zhang et al။30 သည် dodecyl-terminated polyamine stationary အဆင့်ကို ပြင်ဆင်ပြီး ဟိုက်ဒရိုကာဗွန်များ၊ စိတ်ကျဆေးများ၊ flavonoids၊ nucleosides၊ estrogens နှင့် အခြားသော ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုများစွာကို အောင်မြင်စွာ ခွဲထုတ်ခဲ့သည်။ ပိုလာ intercalator တွင် ဝင်ရိုးစွန်းနှင့် ဝင်ရိုးစွန်းမဟုတ်သော အုပ်စုနှစ်ခုစလုံးပါရှိသောကြောင့် ၎င်းကို hydrophobieded columns နှင့် hydrophilic နှစ်မျိုးလုံးပါရှိသော peptides နှင့် ပရိုတင်းများကို ခွဲခြားရန် အသုံးပြုနိုင်သည်။ ကော်လံများ) သည် ကုန်သွယ်မှုအမည် Ascentis Express RP-Amide ကော်လံများအောက်တွင် စီးပွားဖြစ်ရရှိနိုင်သော်လည်း ဤကော်လံများကို amine 33 ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန်အတွက်သာ အသုံးပြုပါသည်။
လက်ရှိလေ့လာမှုတွင်၊ ဝင်ရိုးစွန်း-ထည့်သွင်းထားသော စာရေးကိရိယာအဆင့် (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) ကို ပြင်ဆင်ပြီး HSA ၏ peptides နှင့် trypsin ချေဖျက်မှုများကို ခွဲထုတ်ရန်အတွက် အကဲဖြတ်ထားပါသည်။ အောက်ဖော်ပြပါ နည်းဗျူဟာကို အသုံးပြု၍ ပါလုတ်ကျင်းအဆင့်ကို ပြင်ဆင်ထားပါသည်။ Porous silica အမှုန်များကို ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်ထုတ်ဝေမှုတွင် ပေးထားသော လုပ်ထုံးလုပ်နည်းအရ၊ G ၏ အချို့သော ပြုပြင်မွမ်းမံမှုများဖြင့် အချိုးအစားအလိုက်၊ TMOS၊ ရေအက်ဆစ်အက်ဆစ်ကို ချွေးပေါက်အရွယ်အစားကြီးမားသော ဆီလီကာအမှုန်အမွှားများကို ပြင်ဆင်ရန် ချိန်ညှိထားပါသည်။ ဒုတိယ၊ လစ်ဂန်အသစ်၊ phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate ကို ပေါင်းစပ်ထုတ်လုပ်ထားပြီး ဝင်ရိုးစွန်းတွင်ထည့်ထားသော စာရေးကိရိယာအဆင့်ကို ပြင်ဆင်ရန်အတွက် အသုံးပြုသော ဆီလီကာအမှုန်အမွှားများကို ပြုပြင်ရန် အသုံးပြုပါသည်။ ရရှိလာသော စာရေးကိရိယာအဆင့်ကို ကော်လံ (10 မီလီမီတာ × 8 မီလီမီတာ) သံမဏိဖြင့် ထုပ်ပိုးထားပါသည်။ ကော်လံထုပ်ပိုးခြင်းကို စက်တုန်ခါမှုဖြင့် ထောက်ကူပေးပါသည်။ ကော်လံအတွင်း တစ်သားတည်းဖြစ်တည်နေသော အိပ်ယာကို ဖွဲ့စည်းပါသည်။(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) နှင့် Trypsin digest of human serum albumin (HAS)။HSA ၏ peptide ရောနှောခြင်းနှင့် trypsin ချေဖျက်ခြင်းကို ကောင်းမွန်သော ကြည်လင်ပြတ်သားမှုနှင့် ထိရောက်မှုဖြင့် ခွဲခြားထားသည်ကို လေ့လာတွေ့ရှိခဲ့သည်။ PMP ကော်လံကို Express-Bo ၏ စွမ်းဆောင်ရည်နှင့် နှိုင်းယှဉ်ထားသည်။ eptides နှင့် ပရိုတင်းများကို Ascentis Express RP-Amide ကော်လံထက် ပိုထိရောက်သော PMP ကော်လံတွင် ကောင်းစွာဖြေရှင်းပြီး ထိရောက်ကြောင်းတွေ့ရှိရသည်။
PEG (Polyethylene Glycol), Urea, Acetic Acid, Trimethoxy Orthosilicate (TMOS), Trimethyl Chlorosilane (TMCS), Trypsin, Human Serum Albumin (HSA), Ammonium Chloride, Urea, Hexane Methyldisilazane (HMDS), Methacryloyl Chloride (MC), Beneta-HP4HP, Steryde, Acetonitrile (ACN)၊ Methanol၊ 2-Propanol နှင့် Sigma-Aldrich (စိန့်လူးဝစ်၊ MO၊ USA) မှ ဝယ်ယူထားသော Acetone
ယူရီးယား (8 g)၊ polyethylene glycol (8 g) နှင့် 0.01 N acetic acid 8 mL တို့ကို ရောနှောပြီး 10 မိနစ်ကြာ မွှေပြီးနောက် TMOS ၏ 24 mL ကို ရေခဲအေးသောအခြေအနေအောက်တွင် ပေါင်းထည့်ခဲ့သည်။ တုံ့ပြန်မှုအရောအနှောကို 40°C တွင် အပူပေးပြီး 6 နာရီကြာ အပူပေးပြီး 120°C တွင် သံမဏိကို အခြောက်ခံကာ 8 နာရီကြာအောင် ပေါင်းထားသည်။ 70°C ကို 12 နာရီကြာအောင် ပြုလုပ်ထားသည်။ အခြောက်လှန်းထားသော ပျော့ပျောင်းသော အစုလိုက်အပြုံလိုက်ကို မီးဖိုတစ်ခုထဲတွင် ချောမွေ့အောင်ပြုလုပ်ထားပြီး 550°C တွင် 12 နာရီကြာ ကယ်လ်ဆီစီယမ်ပြုလုပ်ထားသည်။ အမှုန်အမွှားအရွယ်အစား၊ ချွေးပေါက်အရွယ်အစားနှင့် မျက်နှာပြင်ဧရိယာတို့တွင် မျိုးပွားနိုင်စွမ်းကို စစ်ဆေးရန်အတွက် သုံးသုတ်ပြင်ဆင်ထားပါသည်။
ဆီလီကာအမှုန်အမွှားများ၏ မျက်နှာပြင်ကို ပြုပြင်မွမ်းမံခြင်းဖြင့် အကြိုပေါင်းစပ်ထားသော ligand phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) ဖြင့် အချင်းအရာပေါ်လီမာပြုလုပ်ခြင်းဖြင့် စတီရင်းဖြင့် ဝင်ရိုးစွန်းအုပ်စုပါဝင်သော ဒြပ်ပေါင်းကို ပြင်ဆင်ခဲ့သည်။စုစည်းမှုများနှင့် polystyrene ကြိုးများ အတွက် stationary အဆင့်။ပြင်ဆင်မှုလုပ်ငန်းစဉ်ကို အောက်တွင်ဖော်ပြထားသည်။
N-phenylmaleimide (200 mg) နှင့် methyl vinyl isocyanate (100 mg) ကို ခြောက်သွေ့သော toluene တွင် ပျော်ဝင်ခဲ့ပြီး 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ၏ 0.1 mL ကို phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate 6° CPPM စစ်ထုတ်ပြီး အပူပေးထားသည့် ဓါတ်ဘူးထဲသို့ ထည့်ထားသည်။ 40°C ရှိသော Oven တွင် ၃ နာရီကြာ အခြောက်ခံပါ။
အခြောက်လှန်းထားသော ဆီလီကာအမှုန်များ (2 g) ကို တိုလူနေး (100 mL) ဖြင့် ရောမွှေပြီး 500 မီလီလီတာ အောက်ခြေပုလင်းတွင် 10 မိနစ်ကြာ မွှေနှောက်၍ သန့်စင်ထားသော PMCP (10 မီလီဂရမ်) ကို တိုလူအေးတွင် ပျော်ဝင်စေပြီး ကျဆင်းနေသော လမ်းကြောင်းမှတစ်ဆင့် တုံ့ပြန်မှုဘူးထဲသို့ ရောနှောထည့်ထားသည်။ ထိုအရောအနှောကို 100°C တွင် အခြောက်ခံပြီး 100°C တွင် ဇကာဖြင့် အခြောက်ခံထားသည်။ 3 နာရီကြာသည်။ထို့နောက် PMCP-bonded silica particles (100 g) ကို toluene (200 ml) တွင် ပျော်ဝင်ပြီး 4-hydroxy-TEMPO (2 mL) ကို ဓါတ်ကူပစ္စည်းအဖြစ် dibutyltin dilaurate 100 µL ၏ရှေ့မှောက်တွင် ပေါင်းထည့်ခဲ့သည်။ အရောအနှောကို 50°C တွင် 8 နာရီကြာ မွှေပြီး အခြောက်ခံကာ 3 နာရီကြာအောင် စစ်ထားပါ။
Styrene (1 mL)၊ benzoyl peroxide BPO (0.5 mL) နှင့် TEMPO-PMCP ပါရှိသော ဆီလီကာအမှုန်များ (1.5 g) ကို တိုလူအေးတွင် ပြန့်ကျဲစေပြီး နိုက်ထရိုဂျင်ဖြင့် သန့်စင်ထားသည်။ စတီရင်းကို ပိုလီမာဖြစ်စေခြင်းကို 100°C တွင် 12 နာရီကြာ ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ ရရှိလာသော ထုတ်ကုန်ကို မီသနော 6°C ဖြင့် ဆေးကြောပြီး တစ်ညလုံး အခြောက်ခံထားသည်။
နမူနာများကို 393 K ဖြင့် 1 နာရီကြာ ချေမှုန်းပြီး 10-3 Torr ထက်နည်းသော ကျန်ဖိအားကိုရရှိရန် ဖယ်ထုတ်ထားပါသည်။ P/P0 = 0.99 ၏ နှိုင်းရဖိအားတစ်ခုတွင် N2 စုပ်ယူထားသော ပမာဏကို စုစုပေါင်း pore volume ကိုဆုံးဖြတ်ရန် အသုံးပြုပါသည်။ ဗလာနှင့် ligand-bonded silica အမှုန်များ၏ ပုံသဏ္ဍာန်ကို Japan မှ မိုက်ခရိုစကင်န်ဖြင့် အီလက်ထရောနစ်နည်းပညာဖြင့် စစ်ဆေးပါသည်။ (ဆီလီကာဗလာနှင့် ligand-bonded silica အမှုန်များ) ကို ကော်ကာဗွန်တိပ်သုံးပြီး အလူမီနီယံကော်လံပေါ်တွင် ကပ်ထားသည်။ ရွှေကို Q150T sputter coater အသုံးပြု၍ နမူနာများပေါ်တွင် ချထားပြီး 5 nm Au အလွှာကို နမူနာများပေါ်တွင် အပ်နှံထားသည်။ ၎င်းသည် ဗို့အားနိမ့်များကို အသုံးပြု၍ လုပ်ငန်းစဉ်ကို ပိုမိုကောင်းမွန်စေပြီး စပါးစေ့များ၊ အေးသော sputtering ကို ပံ့ပိုးပေးပါသည်။A Thermo Electron 1 USA အတွက် အသုံးပြုထားသော ဒြပ်စင်ဖြစ်သော Thermo Flash al analysis.A Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 အမှုန်အမွှားအရွယ်အစားခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအား အမှုန်အမွှားအရွယ်အစားခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုရရှိရန်အသုံးပြုခဲ့သည်။ အဝတ်မပါသောဆီလီကာအမှုန်များနှင့် ligand-bonded silica အမှုန်များ (5 မီလီဂရမ်တစ်ခုစီ) ကို isopropanol ၏ 5 mL တွင် ဖြန့်ခွဲခဲ့ပြီး၊ 10 မိနစ်ကြာ sonicated၊ 5 minch တွင် ခွဲခြမ်းစိပ်ဖြာပြီး Master ၏ vortexation ကိုပြုလုပ်ခဲ့သည်။ အပူချိန် 30 မှ 800 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်ထက် တစ်မိနစ်လျှင် 5°C နှုန်းဖြင့် လုပ်ဆောင်သည်။
Ref.31. 1 µm frit ပါရှိသော အံဝင်ခွင်ကျရှိသော ပလပ်ပေါက်တစ်ခုပါရှိသော သံမဏိကော်လံ (Alltech Deerfield, IL, USA)။ slurry ကော်လံတွင် 150 mg ထက် 150 mg ကို သိုလှောင်ရန်အတွက် methanol ကိုဖြေရှင်းချက်အဖြစ်အသုံးပြုနိုင်သော slurry ကော်လံတွင် အသုံးပြုသော သိုလှောင်မှုပမာဏကို ဆိုင်းငံ့ထားခြင်းဖြင့် 1.2 mL ကော်လံကို ပေးပို့ပါသည်။ တွန်းကန်အားအပြင်အဆင်။ 100 MP ဖိအားများကို 10 မိနစ်၊ 80 MP 15 မိနစ်နှင့် 60 MP 30 မိနစ်ကြာအောင် ဖိအားများပေးခြင်းဖြင့် ကော်လံကို ဆက်တိုက်ဖြည့်သွင်းပါ။ ထုပ်ပိုးနေစဉ်အတွင်း၊ ကော်လံ၏ဖိအားကို ဖြည်းညှင်းစွာထုပ်ပိုးခြင်းမှကာကွယ်နိုင်စေရန် GC ကော်လံလှုပ်ခါမှုနှစ်ခု (Alltech၊ Deerfield, IL, USA) ဖြင့် ကော်လံကို ဆက်တိုက်ဖြည့်ပါ။ ကော်လံကို slurry ထုပ်ပိုးခြင်းယူနစ်မှ ချိတ်ဆက်ပြီး ၎င်း၏စွမ်းဆောင်ရည်ကို စစ်ဆေးရန် အခြားအဝင်ပေါက်နှင့် LC စနစ်သို့ ချိတ်ဆက်ပါ။
LC pump (10AD Shimadzu, Japan)၊ injector (Valco (USA) C14 W.05) နှင့် 50nL ဆေးထိုးသည့်ကွင်း၊ အမြှေးပါး degasser (Shimadzu DGU-14A)၊ UV-VIS သွေးကြောမျှင်ပြတင်းပေါက်ကို အထူး µLC ကိရိယာ detector (UV-2075) နှင့် glass-lined အလွန်ကျဉ်းမြောင်းသော မိုက်ခရိုကော်လံများကို ကြိုးနှင့် ချိတ်ဆက်ပေးသည့် ကော်လံများကို ချဲ့ထွင်ထားပါသည်။ ထုပ်ပိုးပြီးနောက်၊ သွေးကြောမျှင်များ (50 μm id 365 နှင့် union သွေးကြောမျှင်များ (50 μm) ကို လျှော့ချထားသော union ၏ 1/16" ထွက်ပေါက်တွင် တပ်ဆင်ခဲ့သည်။ ဒေတာစုဆောင်းခြင်းနှင့် ခရိုမာတိုဂရပ်ဖစ်လုပ်ဆောင်ခြင်းတို့ကို Multichro 2000 ဆော့ဖ်ဝဲလ်ကို အသုံးပြု၍ လုပ်ဆောင်ခဲ့သည်။ 254 nm ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုများကို စောင့်ကြည့်ခြင်းအား UV ဒေတာစုပ်ယူနိုင်မှုအတွက် MA မှ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုပြုလုပ်ခဲ့သည်။ (NmA) (Chromat) 8 (Chromat) ကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။
လူ့သွေးရည်ကြည်မှ အယ်လ်ဘမ်မင်၊ lyophilized အမှုန့်၊ ≥ 96% (agarose gel electrophoresis) 3 mg နှင့် trypsin (1.5 mg)၊ 4.0 M ယူရီးယား (1 mL) နှင့် 0.2 M ammonium bicarbonate (1 mL) တို့ကို ရောနှော၍ ဖြေရှင်းချက်အား 10 မိနစ်ခန့် မွှေပြီး 37 ဒီဂရီ ဖာရင်ဟိုက်ဒရိတ်တွင် ရေချိုး 1 မီလီမီတာ၊ ဖျော်ရည်ကို ဖြတ်ပြီး 4°C အောက်တွင် သိမ်းဆည်းပါ။
peptide အရောအနှောများနှင့် HSA trypsin ချေဖျက်မှုများကို သီးခြားစီ PMP ကော်လံများတွင် အကဲဖြတ်ထားပါသည်။ PMP ကော်လံဖြင့် HSA ၏ peptide အရောအနှောနှင့် trypsin digest ကို ခွဲခြားစစ်ဆေးပြီး ရလဒ်များကို Ascentis Express RP-Amide ကော်လံနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါသည်။ သီအိုရီအရ ပြားနံပါတ်ကို အောက်ပါအတိုင်း တွက်ချက်သည်-
ဆီလီကာအမှုန်များနှင့် လစ်ဂန်-နှောင်ဖွဲ့ထားသော ဆီလီကာအမှုန်များ၏ SEM ပုံများကို FIG တွင် ပြသထားသည်။2 .SEM ရုပ်ပုံများသည် ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်လေ့လာမှုများနှင့်မတူဘဲ ဤအမှုန်များသည် ရှည်လျားသော သို့မဟုတ် ပုံမမှန်သော အချိုးညီညီရှိနေသည့် အမှုန်အမွှားများဖြစ်သည်။ ligand-bonded silica အမှုန်များ (C, D) ၏မျက်နှာပြင်သည် ပိုလီစီလီကာအမှုန်များ၏မျက်နှာပြင်ထက် ပိုချောသောကြောင့်၊ ica မှုန်.
အီလက်ထရွန် အဏုစကုပ်ကို စကင်န်ဖတ်ခြင်းဖြင့် ဆီလီကာအမှုန်များ (A, B) နှင့် ligand-bonded silica အမှုန်များ (C, D) တို့၏ ရုပ်ပုံများ။
ဆီလီကာအမှုန်အမွှားများ၏ အမှုန်အမွှားအရွယ်အစား ဖြန့်ဖြူးမှုကို ပုံ 3(A) တွင် ပြထားသည်။ ထုထည်-အခြေခံသည့် အမှုန်အမွှားအရွယ်အစားဖြန့်ဖြူးမှုမျဉ်းကွေးများကို ဓာတုဗေဒပြုပြင်မွမ်းမံပြီးနောက် ဆီလီကာအမှုန်များ၏အရွယ်အစား တိုးလာကြောင်းပြသခဲ့သည် (ပုံ 3A)။ စီလီကာအမှုန်များ၏ အရွယ်အစားဖြန့်ဖြူးမှုဒေတာကို လက်ရှိလေ့လာချက် 1 အရွယ်အစား၊ ယခင်လေ့လာနိုင်သော ပမာဏနှင့် နှိုင်းယှဉ်နိုင်သည်။ 5) ၏ PMP သည် 3.36 μm ဖြစ်သည် ယခင်က ကျွန်ုပ်တို့လေ့လာခဲ့သော ဆီလီကာအမှုန်အမွှားအဆင့်ကို ချည်နှောင်ထားသည်။ ဆိုလိုသည်မှာ စတီရင်းဖြင့် ဆီလီကာအမှုန်များ၏ မျက်နှာပြင်လုပ်ဆောင်နိုင်စွမ်းသည် ဆီလီကာမျက်နှာပြင်ပေါ်တွင် 1.38 µm (0.97 µm) သာရှိပြီး၊ PMP အဆင့်တွင် အလွှာအထူမှာ 1.38 µm ဖြစ်သည်။
အမှုန်အရွယ်အစား ဖြန့်ဖြူးခြင်း (A) နှင့် ချွေးပေါက် အရွယ်အစား ဖြန့်ဖြူးခြင်း (B) တို့သည် ဗလာ ဆီလီကာ အမှုန်များနှင့် လစ်ဂန်-ဘောင်းစီလီကာ အမှုန်များ ဖြစ်သည်။
လက်ရှိလေ့လာမှု၏ ဆီလီကာအမှုန်များ၏ ချွေးပေါက်အရွယ်အစား၊ ချွေးပေါက်ထုထည်နှင့် မျက်နှာပြင်ဧရိယာကို ဇယား 1(B) တွင် ဖော်ပြထားပါသည်။ ဆီလီကာအမှုန်များနှင့် လစ်ဂန်-နှောင်ဖွဲ့ထားသော ဆီလီကာအမှုန်များ၏ PSD ပရိုဖိုင်များကို ပုံ 3(B) တွင် ပြထားသည်။ ရလဒ်များသည် ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်လေ့လာမှုနှင့် နှိုင်းယှဉ်နိုင်ပါသည်။ အဆိုပါ ပေါက်ပေါက်အရွယ်အစားသည် silica နှင့် ligands 10-2 တို့ကို လေးလေးစားစားဖော်ပြထားသည်။ ဇယား 1(B) တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း ဓာတုပြုပြင်မွမ်းမံပြီးနောက် ချွေးပေါက်အရွယ်အစားသည် 69 လျော့နည်းသွားကာ မျဉ်းကွေးပြောင်းလဲမှုကို ပုံ 3(B) တွင်ပြသထားသည်။ထို့အတူ၊ စီလီကာအမှုန်များ၏ ချွေးပေါက်ပမာဏသည် 0.67 မှ 0.58 cm3/g သို့ လျော့နည်းသွားသည်ကို ဓာတုပြုပြင်မွမ်းမံပြီးနောက် 1g ၏ မျက်နှာပြင်ဧရိယာသည် လက်ရှိလေ့လာထားသော silica 1g ၏ တိကျသောမျက်နှာပြင်ဧရိယာဖြစ်သည်၊ (124 m2/g) ဇယား 1(B) တွင် ပြထားသည့်အတိုင်း၊ ဆီလီကာအမှုန်များ၏ မျက်နှာပြင်ဧရိယာ (m2/g) သည် ဓာတုပြုပြင်မွမ်းမံပြီးနောက် 116 m2/g မှ 105 m2/g သို့ လျော့နည်းသွားသည်။
စာရေးကိရိယာအဆင့်၏ဒြပ်စင်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု၏ရလဒ်များကိုဇယား 2 တွင်ပြသထားသည်။ လက်ရှိ stationary phase ၏ကာဗွန်တင်ဆောင်မှုသည် 6.35% ဖြစ်ပြီး ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်လေ့လာမှု၏ကာဗွန်တင်ဆောင်မှုထက်နိမ့်သည် (polystyrene bonded silica particles, 7.93% 35 နှင့် 10.21% အသီးသီး) 42. အချို့သောလက်ရှိ stationary အဆင့်တွင် ကာဗွန် loading နည်းပါးသောကြောင့်၊ အဘယ်ကြောင့်ဆိုသော် အချို့သောလက်ရှိ stationary အဆင့်တွင် ကာဗွန်တင်ခြင်းမှာ နည်းပါးသောကြောင့်၊ phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) နှင့် 4-hydroxy-TEMPO ကဲ့သို့သော နိုက်ထရိုဂျင်အလေးချိန် ရာခိုင်နှုန်းသည် 2.21% ဖြစ်သည် ) နှင့် (5) တို့သည် 2.7% နှင့် 2.9% အသီးသီးရှိကြပြီး နောက်ဆုံးထုတ်ကုန် (6) ၏ကာဗွန်တင်ဆောင်မှုသည် 6.35% ဖြစ်သည် ။ဇယား 2 တွင်ဖော်ပြထားသည့်အတိုင်း ကိုယ်အလေးချိန်ကျခြင်းကို PMP stationary အဆင့်ဖြင့်စစ်ဆေးပြီး TGA မျဉ်းကွေးကိုပုံ 4 တွင်ပြသထားသည်။ TGA မျဉ်းကွေးသည် အလေးချိန်ဆုံးရှုံးမှု 8.6% ကိုပြသထားသည်။ 5% နှင့် C သာပါဝင်သောကြောင့် (6) နှင့် တူညီသော ကာဗွန်ပါ၀င်ခြင်းမရှိသောကြောင့်၊ ဇ
phenylmaleimide-methylvinylisocyanate ligand သည် ဆီလီကာအမှုန်များ၏ မျက်နှာပြင်ကို ပြုပြင်မွမ်းမံရန်အတွက် ရွေးချယ်ခဲ့ခြင်းဖြစ်ပြီး ၎င်းတွင် ဝင်ရိုးစွန်း phenylmaleimide အုပ်စုများနှင့် vinylisocyanate အုပ်စုများပါရှိသည်။ Vinyl isocyanate အုပ်စုများသည် သက်ရှိအစွန်းရောက်ပေါ်လီမာပြုခြင်းဖြင့် styrene နှင့် ထပ်မံတုံ့ပြန်နိုင်သည်။ ဒုတိယအကြောင်းရင်းမှာ ပြင်းထန်သောအဆင့်နှင့် phenylleyte အကြား အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှုရှိသော electrolyte နှင့် တည်ငြိမ်မှုမရှိသော အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှုရှိသော အုပ်စုကို ထည့်သွင်းရခြင်းဖြစ်သည်၊ imide moiety သည် ပုံမှန် pH တွင် virtual charge မရှိပါ။ stationary phase ၏ polarity ကို အကောင်းဆုံး styrene ပမာဏနှင့် free radical polymerization ၏ တုံ့ပြန်မှုအချိန်ဖြင့် ထိန်းချုပ်နိုင်သည်။ တုံ့ပြန်မှု၏ နောက်ဆုံးအဆင့် (free-radical polymerization) သည် အရေးကြီးပြီး stationary phase ၏ polarity ကို ပြောင်းလဲနိုင်သည်။ ဒြပ်စင်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုသည် ကာဗွန် loading ၏ ကာဗွန်တင်ဆောင်မှုပမာဏကို စစ်ဆေးရန်အတွက် stationary phase ၏ အချိန်တိုးလာခြင်းနှင့် ၎င်းသည် stationary phase ၏ တုံ့ပြန်မှုပမာဏကို စစ်ဆေးရန်ဖြစ်သည်။ ary phase နှင့် vice versa.SP များတွင် ကွဲပြားသောပြင်းအားများဖြင့် ပြင်ဆင်ထားသော styrene တွင် မတူညီသော ကာဗွန် loadings များရှိသည်။ တစ်ဖန် ဤ stationary phases များကို stainless steel ကော်လံများတွင် တင်ပြီး ၎င်းတို့၏ chromatographic စွမ်းဆောင်ရည် (ရွေးချယ်မှု၊ ကြည်လင်ပြတ်သားမှု၊ N တန်ဖိုး စသည်ဖြင့်) ကိုစစ်ဆေးပါ။ ဤစမ်းသပ်မှုများအပေါ်အခြေခံ၍ PMP stationary အဆင့်ကို ထိန်းထားနိုင်စေရန်နှင့် ကောင်းမွန်သော analalyte ကိုပြင်ဆင်ရန် အကောင်းဆုံးပုံစံကို ရွေးချယ်ထားပါသည်။
peptide အရောအနှောငါးမျိုး (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) ကိုလည်း မိုဘိုင်းအဆင့်ကို အသုံးပြု၍ PMP ကော်လံကို အသုံးပြု၍ အကဲဖြတ်ခဲ့ပါသည်။60/40 (v/v) acetonitrile/water (0.1% TFA) သည် 80 μL/min ဖြင့် စီးဆင်းမှုနှုန်းတွင် ပိုမိုကောင်းမွန်သော elution အခြေအနေများအောက်တွင်၊ ကော်လံတစ်ခုလျှင် သီအိုရီပိုင်းပန်းကန်နံပါတ် (N) (100 × 1.8 mm id) သည် 20,000 ± 100 (200,000 Plates/m²) အတွက် 3 ကော်လံအတွက် T သည် တန်ဖိုး 3. နှင့် ခရိုမာတိုဂရမ်များကို ပုံ 5A တွင်ပြသထားသည်။ မြင့်မားသောစီးဆင်းမှုနှုန်း (700 μL/min) တွင် PMP ကော်လံပေါ်တွင် လျင်မြန်စွာခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုတွင် peptides ငါးခုကို တစ်မိနစ်အတွင်း ဖယ်ထုတ်ခံရသည်၊ N တန်ဖိုးများသည် အလွန်ကောင်းမွန်သည်၊ ကော်လံတစ်ခုလျှင် 13,500 ± 330 (100 × 1.8 mm id)၊ Correspond 0g (100 × 1.8 မီလီမီတာ)၊ မျိုးပွားနိုင်မှုကို စစ်ဆေးရန်အတွက် စေ့စပ်အရွယ်အစား ကော်လံများ (100 × 1.8 မီလီမီတာ id) များကို မတူညီသော PMP စာရေးကိရိယာ အဆင့်သုံးမျိုးဖြင့် ထုပ်ပိုးထားပါသည်။ ကော်လံတစ်ခုစီအတွက် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု အာရုံစူးစိုက်မှုအား အကောင်းဆုံး elution အခြေအနေများနှင့် သီအိုရီပိုင်းပြား N အရေအတွက်နှင့် ကော်လံတစ်ခုစီရှိ တူညီသောစမ်းသပ်မှုအရောအနှောကို ခွဲထုတ်ရန် ထိန်းသိမ်းထားချိန်ကို အသုံးပြုထားသည်။ ကော်လံတစ်ခုစီတွင် တူညီသောစမ်းသပ်မှုအရောအနှောကို ခွဲထုတ်ရန် ခိုင်ခံ့သည့်အချိန်ဖြစ်သည်။ ကော်လံတစ်ခုစီအတွက် မျိုးပွားနိုင်စွမ်းမရှိသော TMP ကော်လံများအတွက် အလွန်နည်းသော ဒေတာများဖြစ်သည်။ ဇယား 3 တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း %RSD တန်ဖိုးများ။
PMP ကော်လံ (B) နှင့် Ascentis Express RP-Amide ကော်လံ (A) ရှိ peptide အရောအနှောကို ပိုင်းခြားခြင်း။မိုဘိုင်းအဆင့် 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%)၊ PMP ကော်လံအတိုင်းအတာ (100 × 1.8 မီလီမီတာ id);ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း ဒြပ်ပေါင်းများ၏ elution အစီအစဉ်- 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) နှင့် 5 (leucine) acid enkephalin))။
PMP ကော်လံ (100 × 1.8 မီလီမီတာ id) ကို စွမ်းဆောင်ရည်မြင့်မားသော အရည် chromatography တွင် လူ့သွေးရည်ကြည်အယ်လ်ဘမ်၏ tryptic digests များကို ပိုင်းခြားရန်အတွက် အကဲဖြတ်ထားပါသည်။ ပုံ 6 တွင် chromatogram သည် နမူနာအား ကောင်းစွာခွဲထုတ်ပြီး ကြည်လင်ပြတ်သားမှု အလွန်ကောင်းမွန်ကြောင်းပြသထားသည်။HSA ချေဖျက်မှုများကို 100 µL/wateraceit/min A မိုဘိုင်းအဆင့် 100 µL/water 100ri အဆင့်ဖြင့် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာထားပါသည်။ s ကို chromatogram (ပုံ 6 တွင်ပြထားသည်)၊ HSA အစာခြေခြင်းကို 17 peptides နှင့်သက်ဆိုင်သော 17 peptides နှင့် သက်ဆိုင်သော peaks များအဖြစ် ပိုင်းခြားထားပါသည်။ HSA digest ရှိ အထွတ်အထိပ်တစ်ခုစီ၏ ခွဲထွက်မှုထိရောက်မှုကို တွက်ချက်ပြီး တန်ဖိုးများကို ဇယား 5 တွင်ပေးထားပါသည်။
HSA ၏ tryptic digest (100 × 1.8 mm ID) ကို PMP ကော်လံတွင် ပိုင်းခြားထားသည်။စီးဆင်းမှုနှုန်း (100 µL/မိနစ်)၊ မိုဘိုင်းအဆင့် 60/40 acetonitrile/ရေ 0.1% TFA ပါရှိသည်။
L သည် ကော်လံအလျားဖြစ်ပြီး η သည် မိုဘိုင်းအဆင့်၏ ပျစ်ဆ၊ ΔP သည် ကော်လံနောက်ပြန်ဖိအားဖြစ်ပြီး u သည် မိုဘိုင်းအဆင့်၏မျဉ်းဖြောင့်အလျင်ဖြစ်သည်။ PMP ကော်လံ၏စိမ့်ဝင်နိုင်စွမ်းမှာ 2.5 × 10-14 m2 ဖြစ်ပြီး စီးဆင်းမှုနှုန်းမှာ 25 μL/min ဖြစ်ပြီး 60/40 v/v PACN perme (10 မီလီမီတာ) ကော်လံကို အသုံးပြုထားသည်။ ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်လေ့လာမှုနှင့်ဆင်တူသော Ref.34.The permeability of the column of the permeability is- 1.7 × 10-15 for 1.3 μm particles, 1.7 μm particles အတွက် 3.1 × 10-15, 5.2 × 10-15 Form25 marticles. အမှုန်များ 43.ထို့ကြောင့် PMP အဆင့်၏ စိမ့်ဝင်နိုင်စွမ်းသည် 5 μm core-shell အမှုန်များနှင့် ဆင်တူသည်။
Wx သည် ကလိုရိုဖောင်ဖြင့်ထုပ်ပိုးထားသောကော်လံ၏အလေးချိန်ဖြစ်ပြီး Wy သည် မီသနောဖြင့်ထုပ်ပိုးထားသောကော်လံ၏အလေးချိန်ဖြစ်ပြီး ρ သည် ဆားဗေး၏သိပ်သည်းဆဖြစ်သည်။ မီသနော၏သိပ်သည်းဆ (ρ = 0.7866) နှင့် ကလိုရိုဖောင် (ρ = 1.484)။ စုစုပေါင်း porosity of SILICA PARTICLES-18 mm (10.8mm) ကျွန်ုပ်တို့ယခင်လေ့လာခဲ့သည့် ယူရီးယားကော်လံ 31 သည် 0.63 နှင့် 0.55 အသီးသီးဖြစ်သည်။ ဆိုလိုသည်မှာ ယူရီးယားလစ်ဂန်များပါဝင်မှုမှာ stationary phase ၏ permeability ကိုလျော့နည်းစေသည်။ အခြားတစ်ဖက်တွင်၊ PMP ကော်လံ၏စုစုပေါင်း porosity (100 × 1.8 mm id) သည် 0.60 ဖြစ်သည်။ အဘယ်ကြောင့်ဆိုသော် PMP ကော်လံများတွင် 1 ကော်လံများထက် silica ပါ၀င်သော ကော်လံများထက် 1 ကော်လံများ၏ sil permeability နည်းပါးသောကြောင့်ဖြစ်သည်။ C18-type stationary phases C18 ligands များသည် ဆီလီကာအမှုန်အမွှားများကို linear chains များအဖြစ် ချိတ်ဆက်ထားပြီး၊ polystyrene-type stationary phases တွင်၊ A အတော်လေးထူသော ပိုလီမာအလွှာကို ၎င်းအနီးတစ်ဝိုက်တွင် ဖွဲ့စည်းထားသည်။ ပုံမှန်စမ်းသပ်မှုတစ်ခုတွင်၊ column porosity ကို တွက်ချက်သည်-
ပုံ 7A၊B သည် PMP ကော်လံ (100 × 1.8 မီလီမီတာ id) နှင့် Ascentis Express RP-Amide ကော်လံ (100 × 1.8 မီလီမီတာ id) ကို တူညီသော elution အခြေအနေများ (ဆိုလိုသည်မှာ၊ 60/40 ACN/H2O နှင့် 0.1% TFA) ကို ပြသထားသည်။van Deemter ၏)။ရွေးချယ်ထားသော peptide အရောအနှောများ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) ကို 20 µL/ ကော်လံနှစ်ခုလုံးအတွက် အနိမ့်ဆုံးစီးဆင်းမှုနှုန်းသည် 800 µL/min ဖြစ်သည်။ ကော်လံအတွက် အနိမ့်ဆုံး HETP တန်ဖိုးများ µMP နှုန်း (800 µL/min) အဖြစ် အနိမ့်ဆုံး HETP တန်ဖိုးများ Express RP-Amide ကော်လံသည် 2.6 µm နှင့် 3.9 µm အသီးသီးရှိသည်။ HETP တန်ဖိုးများသည် PMP ကော်လံ (100 × 1.8 mm id) သည် စီးပွားဖြစ်ရရှိနိုင်သော Ascentis Express RP-Amide ကော်လံ (100 × 1.8 mm id တွင် စီးဆင်းမှုကျဆင်းခြင်းမရှိကြောင်း) ဗန်တန်ဖိုး (100 × 1.8 မီလီမီတာ id 7) တွင် လျော့သွားခြင်းမရှိကြောင်း HETP တန်ဖိုးများကဖော်ပြသည်။ ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်လေ့လာမှုနှင့်နှိုင်းယှဉ်ပါက သိသာထင်ရှားပါသည်။ PMP ကော်လံ (100 × 1.8 မီလီမီတာ id) ကို Ascentis Express RP-Amide ကော်လံနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက ပိုမိုမြင့်မားသော ခွဲထွက်မှုစွမ်းဆောင်ရည်သည် လက်ရှိအလုပ် 34 တွင်အသုံးပြုသည့် အမှုန်အမွှားပုံသဏ္ဍာန်၊ အရွယ်အစားနှင့် ရှုပ်ထွေးသောကော်လံထုပ်ပိုးခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်များအပေါ် အခြေခံထားသည်။
(က) van Deemter plot (HETP versus mobile phase linear velocity) PMP column (100 × 1.8 mm id) တွင် 60/40 ACN/H2O တွင် ရရှိသော 0.1% TFA.(B) van Deemter plot (HETP versus mobile phase linear velocity) Ascentis ကော်လံ (10m × 10A RP-8) ကို အသုံးပြု၍ ရရှိသော 0.1% TFA ပါသော CN/H2O။
စွမ်းဆောင်ရည်မြင့်မားသော အရည် chromatography တွင် ပိုလာ-embedded polystyrene stationary အဆင့်ကို ပေါင်းစပ်ဖွဲ့စည်းထားသော peptide အရောအနှောများနှင့် trypsin များကို ခွဲထုတ်ရန်အတွက် အကဲဖြတ်ခြင်းအား စွမ်းဆောင်ရည်မြင့်မားသော အရည် chromatography တွင် PMP ကော်လံများ၏ chromatographic စွမ်းဆောင်ရည်သည် ခွဲထွက်မှု ထိရောက်မှုနှင့် ကြည်လင်ပြတ်သားမှုတွင် အထူးကောင်းမွန်ပါသည်။ PMP အမှုန်များ၏ အရွယ်အစားနှင့် အရွယ်အစား အမျိုးမျိုးကြောင့် ခွဲထွက်ခြင်းဆိုင်ရာ စွမ်းဆောင်ရည်မှာ အကြောင်းရင်းများဖြစ်သောကြောင့်၊ ၊ စာရေးကိရိယာအဆင့်၏ထိန်းချုပ်ထားသောပေါင်းစပ်မှုနှင့်ရှုပ်ထွေးသောကော်လံထုပ်ပိုးမှု။ မြင့်မားသောခွဲထွက်မှုထိရောက်မှုအပြင်၊ မြင့်မားသောစီးဆင်းမှုနှုန်းဖြင့်ကော်လံနိမ့်သောကော်လံများသည်ဤ stationary phase ၏နောက်ထပ်အားသာချက်ဖြစ်သည်။PMP ကော်လံများသည်ပြန်လည်ပွားနိုင်မှုကိုပြသပြီး peptide အရောအနှောများနှင့် trypsin များကိုခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းအတွက်အသုံးပြုနိုင်ပါသည်။ ပရိုတိန်းအမျိုးမျိုး၏ peptides များကိုအစာခြေခြင်းအတွက်အသုံးပြုနိုင်ပါသည်။ သဘာဝထုတ်ကုန်များနှင့်ပျော်စရာကောင်းသောအပင်များမှထုတ်လွှတ်သောဇီဝဒြပ်ပေါင်းများကိုခွဲထုတ်ရန်အတွက်ဤကော်လံကိုအသုံးပြုပါသည်။ ပရိုတိန်းများနှင့် monoclonal antibodies ခွဲခြားခြင်းအတွက် MP ကော်လံများကိုလည်း အကဲဖြတ်မည်ဖြစ်သည်။
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Reversed Phase Chromatography Part I ဖြင့် ပြောင်းလဲထားသော Phase Chromatography အပိုင်း 1- ကော်လံ Characterization Protocol.J.Chromatography.1603၊ 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019)။
Gomez, B. et al.Improved active peptides.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018)။
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic therapeutic peptides: science and the market.drug discovery.15 (1-2) ယနေ့၊ 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.10.
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.Chromatography.A 1261၊ 78–90 (2012)။
Liu, W. et al.အဆင့်မြင့်အရည် ခရိုမာတိုဂရမ်-ဒြပ်ထု spectrometry သည် ကျယ်ပြန့်စွာ ပစ်မှတ်ထားသော ဇီဝဖြစ်စဉ်များနှင့် proteomics.anus.Chim.Acta 1069၊ 89–97 (2019) တို့ကို ပေါင်းစပ်ထည့်သွင်းနိုင်စေပါသည်။
Chesnut၊ SM & Salisbury၊ JJ ဆေးဝါးဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုတွင် UHPLC ၏အခန်းကဏ္ဍ။J.စက်တင်ဘာ. သိပ္ပံ.၃၀(၈)၊ ၁၁၈၃-၁၁၉၀ (၂၀၀၇)။
Wu, N. & Clausen, AM သည် လျင်မြန်စွာ ခွဲထွက်ခြင်းအတွက် ultrahigh pressure liquid chromatography ၏ အခြေခံကျပြီး လက်တွေ့ကျသော ရှုထောင့်များ။J.စက်တင်ဘာ.၃၀(၈)၊ ၁၁၆၇-၁၁၈၂။https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007)။
Wren, SA & Tchelitcheff, P. ဆေးတီထွင်မှုတွင် အလွန်မြင့်မားသောစွမ်းဆောင်ရည်အရည် chromatography အသုံးချမှု။J.Chromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006)။
Gu, H. et al.Monolithic macroporous hydrogels များသည် enteroviruses.Chemical.Britain.J.ကို ထိရောက်စွာ သန့်စင်ရန်အတွက် ဆီတွင်းအဆင့်မြင့် အတွင်းပိုင်း emulsions များမှ ပြင်ဆင်သော ပစ္စည်းများ။401၊ 126051 (2020)။
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA ပရိုတီအိုမစ်တွင် အရည် chromatography အခန်းကဏ္ဍ။Chromatography.A 1053(1-2), 27-36 (2004)။
Fekete, S., Veuthey, J.-L.& Guillarme, D. ကုထုံး peptides နှင့် proteins များ၏ ပြောင်းပြန်-အဆင့်အရည် chromatography ခွဲခြားမှုတွင် ပေါ်ထွက်နေသော ခေတ်ရေစီးကြောင်းများ- သီအိုရီနှင့် applications.J.Pharmacy.Biomedical Science.anus.69၊ 9-27 (2012)။
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC သည် RP-RP-HPLC စနစ်ဖြင့် မတူညီသော pH တန်ဖိုးများကို ပထမနှင့် ဒုတိယပိုင်းခြားသည့်အတိုင်းအတာများတွင် အသုံးပြုထားသော peptides နှစ်ဘက်မြင် ခွဲထွက်ခြင်း။J.စက်တင်ဘာ ၂၈(၁၄)၊ ၁၆၉၄-၁၇၀၃ (၂၀၀၅)။
Feletti, S. et al. C18 ခွဲ-2 μm အပြည့်နှင့် အပေါ်ယံအမှုန်များဖြင့် ထုပ်ပိုးထားသော မြင့်မားသော ထိရောက်မှုရှိသော chromatographic ကော်လံများ၏ အစုလိုက်အပြုံလိုက် လွှဲပြောင်းခြင်းဝိသေသလက္ခဏာများနှင့် kinetic စွမ်းဆောင်ရည်ကို စုံစမ်းစစ်ဆေးခဲ့သည်။J.စက်တင်ဘာ. Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020)။
Piovesana, S. et al. အထီးကျန်ခြင်းတွင် မကြာသေးမီက ခေတ်ရေစီးကြောင်းနှင့် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုဆိုင်ရာ စိန်ခေါ်မှုများ၊ အပင်ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ peptides.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s0018x16-10.1007/s0018x16.
Mueller၊ JB et al. သက်ရှိနိုင်ငံတော်၏ ထင်ရှားသောရှုခင်း။ သဘာဝ 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020)။
DeLuca, C. et al.Downstream processing of therapeutic peptides of preparative liquid chromatography.Molecule (Basel, Switzerland) 26(15), 4688(2021)။
Yang, Y. & Geng, X. Mixed-mode chromatography နှင့် biopolymers.J တွင် ၎င်း၏အသုံးချမှု။Chromatography.A 1218(49), 8813–8825 (2011)။
Zhao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. Ligands ရောစပ်မုဒ် ပရိုတင်း ခရိုမာတီဂရာအတွက် နိယာမ၊ စရိုက်လက္ခဏာနှင့် ဒီဇိုင်း။J.Biotechnology.144(1), 3-11 (2009)။