केही LC समस्या निवारण विषयहरू कहिल्यै पुरानो हुँदैनन्, किनकि LC अभ्यासमा समस्याहरू छन्, साधन प्रविधिले समयसँगै सुधार गर्दै जाँदा पनि। त्यहाँ धेरै तरिकाहरू छन् जसमा समस्याहरू LC प्रणालीमा उत्पन्न हुन सक्छन् र खराब शिखर आकारमा समाप्त हुन्छन्। जब शिखर आकारसँग सम्बन्धित समस्याहरू उत्पन्न हुन्छन्, यी परिणामहरूको लागि सम्भावित कारणहरूको छोटो सूचीले हाम्रो समस्या निवारण अनुभवलाई सरल बनाउन मद्दत गर्छ।
यो "LC समस्या निवारण" स्तम्भ लेख्न र हरेक महिना विषयहरूको बारेमा सोच्न रमाइलो भएको छ, किनकि केहि विषयहरू कहिल्यै शैलीबाट बाहिर जान सक्दैनन्। क्रोमेटोग्राफी अनुसन्धानको क्षेत्रमा केही विषय वा विचारहरू अप्रचलित हुन्छन् किनभने तिनीहरू नयाँ र राम्रो विचारहरू द्वारा विस्थापित हुन्छन्, समस्या निवारणको क्षेत्रमा, किनभने पहिलो समस्या निवारण लेखमा ज्युरनलमा केही विषयहरू प्रकाशित भएदेखि। evant) 1983 (1) मा। पछिल्ला केही वर्षहरूमा, मैले तरल क्रोमेटोग्राफी (LC) लाई असर गर्ने समसामयिक प्रवृतिहरूमा धेरै LC समस्या निवारण खण्डहरूमा ध्यान केन्द्रित गरेको छु (उदाहरणका लागि, रिटेन्सनमा दबाबको प्रभावको हाम्रो बुझाइको सापेक्ष तुलना [२] नयाँ अग्रिमहरू) LC महिनाको समस्याको हाम्रो व्याख्या, LC मा कसरी परिणाम हुन्छ र आधुनिक तरिकामा। डिसेम्बर २०२१ मा सुरु भएको मेरो शृङ्खला (३) जारी राख्दै, जसले LC समस्या निवारणका केही “जीवन र मृत्यु” विषयहरूमा केन्द्रित थियो — जुनसुकै समस्या निवारकका लागि उत्कृष्ट तत्वहरू आवश्यक छन्, हामीले प्रयोग गरिरहेको प्रणाली जुनसुकै भए पनि। यस शृङ्खलाको मुख्य विषय LCGC को प्रख्यात “LC Troubleshooting 4 श्रृङ्खलाहरू” लेबरिङ वालिङको तेस्रो भागमा धेरै सान्दर्भिक छ। , मैले शिखर आकार वा शिखर विशेषताहरूसँग सम्बन्धित मुद्दाहरूमा ध्यान केन्द्रित गर्न रोजेको छु। अविश्वसनीय रूपमा, पर्खाल चार्टले खराब शिखर आकारको 44 विभिन्न सम्भावित कारणहरू सूचीबद्ध गर्दछ! हामी यी सबै मुद्दाहरूलाई एउटा लेखमा विस्तृत रूपमा विचार गर्न सक्दैनौं, त्यसैले यस विषयमा पहिलो किस्तामा, म प्रायः देख्ने केहीमा ध्यान केन्द्रित गर्नेछु। मलाई आशा छ कि यो युवा र पुराना प्रयोगकर्ताहरूले LC मा केही महत्त्वपूर्ण retopic फेला पार्नुहुनेछ।
म आफैलाई "केही पनि सम्भव छ" को साथ समस्या निवारण प्रश्नहरूको जवाफ दिन खोज्छु। व्याख्या गर्न गाह्रो पर्यवेक्षणहरू विचार गर्दा यो प्रतिक्रिया सजिलो लाग्न सक्छ, तर मलाई यो प्राय: उपयुक्त लाग्छ। कमजोर चोटी आकारको धेरै सम्भावित कारणहरूको साथ, समस्या के हुन सक्छ भनेर विचार गर्दा खुला दिमाग राख्नु महत्त्वपूर्ण छ, र सम्भावित कारणहरूलाई प्राथमिकता दिन सक्षम हुनको लागि, ती समस्याहरू समाधान गर्न धेरै महत्त्वपूर्ण बिन्दुहरूमा ध्यान केन्द्रित गर्ने प्रयास हो। sible
कुनै पनि समस्या निवारण अभ्यासमा एक प्रमुख चरण - तर एउटा जुन मलाई अण्डररेट गरिएको छ - समाधान गर्न आवश्यक समस्या छ भनेर पहिचान गर्नु हो। प्राय: त्यहाँ समस्या छ भनेर पहिचान गर्नु भनेको सिद्धान्त, अनुभवजन्य ज्ञान, र अनुभव (५) द्वारा आकार भएका हाम्रा अपेक्षाहरू भन्दा फरक छ भनेर पहिचान गर्नु हो (५)। "शिखर आकार" लाई यहाँ उल्लेख गरिएको छ, वास्तवमा pesmetric आकारको रूपमा उल्लेख गरिएको छैन। oth, fluffy, leading edge, tailing, etc.), तर चौडाइमा पनि। वास्तविक चोटी आकारको लागि हाम्रो अपेक्षाहरू सरल छन्। सिद्धान्त (6) ले पाठ्यपुस्तकको अपेक्षालाई राम्रोसँग समर्थन गर्दछ कि, प्रायजसो अवस्थामा, क्रोमेटोग्राफिक चुचुराहरू सममित हुनुपर्छ र गौसियन वितरणको आकारसँग मिल्दोजुल्दो हुनुपर्छ, जसमा हामी peighat w1 मा देखाइएको छ। हामी यस विषयलाई भविष्यको लेखमा छलफल गर्नेछौं। चित्र 1 मा अन्य शिखर आकारहरूले अवलोकन गर्न सकिने अन्य सम्भावनाहरू देखाउँछन् - अर्को शब्दमा, केहि तरिकाहरू गलत हुन सक्छन्। यस किस्ताको बाँकी भागमा, हामी यी आकार प्रकारहरू निम्त्याउन सक्ने परिस्थितिहरूको केही विशिष्ट उदाहरणहरू छलफल गर्न समय खर्च गर्नेछौं।
कहिलेकाहीँ क्रोमेटोग्राममा चुचुराहरू अवलोकन गरिँदैन जहाँ तिनीहरू इल्युट हुने अपेक्षा गरिन्छ। माथिको पर्खाल चार्टले शिखरको अनुपस्थितिलाई संकेत गर्दछ (नमूनाले वास्तवमा लक्ष्य विश्लेषकलाई एकाग्रतामा समावेश गर्दछ जसले डिटेक्टर प्रतिक्रियालाई शोर भन्दा माथि हेर्नको लागि पर्याप्त बनाउनु पर्छ) सामान्यतया केही उपकरण मुद्दासँग सम्बन्धित छ वा सबै अवस्थाहरूमा गलत अवलोकन गरिएको छ।शिखरहरू, सामान्यतया धेरै "कमजोर"। यस श्रेणीमा सम्भावित समस्या र समाधानहरूको छोटो सूची तालिका I मा फेला पार्न सकिन्छ।
माथि उल्लेख गरिएझैं, ध्यान दिनु र यसलाई ठीक गर्न प्रयास गर्नु अघि शिखर फराकिलोलाई कति सहन गर्नुपर्छ भन्ने प्रश्न एउटा जटिल विषय हो जसलाई म भविष्यको लेखमा छलफल गर्नेछु। मेरो अनुभव यो छ कि महत्त्वपूर्ण शिखर फराकिलो हुनु अक्सर शिखरको आकारमा महत्त्वपूर्ण परिवर्तनको साथमा हुन्छ, र पीक टेलिंग प्रि-पीक वा स्प्लिटिंग भन्दा बढी सामान्य हुन्छ। यद्यपि, पीक ब्रोडिङको कारणले गर्दा फरक फरक हुन सक्छ। कारण:
यी प्रत्येक मुद्दाहरू समस्या निवारण LC को अघिल्लो अंकहरूमा विस्तृत रूपमा छलफल गरिएको छ, र यी विषयहरूमा रुचि राख्ने पाठकहरूले यी मुद्दाहरूको मूल कारणहरू र सम्भावित समाधानहरूको जानकारीको लागि यी अघिल्ला लेखहरूलाई सन्दर्भ गर्न सक्छन्।थप विवरण।
पीक टेलिंग, पीक फ्रन्टिङ, र विभाजन सबै रासायनिक वा भौतिक घटनाहरूको कारणले हुन सक्छ, र यी समस्याहरूको सम्भावित समाधानहरूको सूची व्यापक रूपमा भिन्न हुन्छ, हामी रासायनिक वा भौतिक समस्यासँग काम गरिरहेका छौं भन्ने आधारमा। प्रायः, क्रोमेटोग्राममा विभिन्न चुचुराहरू तुलना गरेर, तपाईंले महत्त्वपूर्ण संकेतहरू फेला पार्न सक्नुहुन्छ, जसको कारण सबै भन्दा बढी पीकको आकारमा समानताको कारण हो। भौतिक होइन। यदि केवल एक वा केही चुचुराहरू प्रभावित छन्, तर बाँकी राम्रो देखिन्छ, कारण सम्भवतः रासायनिक हुन सक्छ।
पीक टेलिंगको रासायनिक कारणहरू यहाँ संक्षिप्त रूपमा छलफल गर्न धेरै जटिल छन्। इच्छुक पाठकलाई थप गहिरो छलफलको लागि "LC समस्या निवारण" को हालैको मुद्दामा उल्लेख गरिएको छ (१०)। यद्यपि, प्रयास गर्न सजिलो कुरा भनेको इन्जेक्टेड एनालिटको द्रव्यमान घटाउनु हो र शिखरको आकारमा सुधार हुन्छ कि भनेर हेर्नुहोस्। यदि त्यसो हो भने, यो समस्या ओभरलोड गर्नको लागि यो एक राम्रो विधि हो। सानो विश्लेषक मासहरू निकाल्दै, वा क्रोमेटोग्राफिक अवस्थाहरू परिवर्तन गरिनु पर्छ ताकि ठूला मासहरू इन्जेक्ट गरेर पनि राम्रो शिखर आकारहरू प्राप्त गर्न सकिन्छ।
पीक टेलिंगको लागि धेरै सम्भावित भौतिक कारणहरू पनि छन्। सम्भाव्यताहरूको विस्तृत छलफलमा रुचि राख्ने पाठकहरूलाई "LC समस्या निवारण" (११) को अर्को हालैको मुद्दामा उल्लेख गरिएको छ। चोटी टेलिंगको सबैभन्दा सामान्य भौतिक कारणहरू मध्ये एक इन्जेक्टर र डिटेक्टर (१२) बीचको बिन्दुमा कमजोर जडान हो। यो चरम उदाहरण हामीले F ल्याबमा बनाइएको केही हप्ता अगाडि देखाइएको छ। हामीले पहिले प्रयोग नगरेको नयाँ इन्जेक्शन भल्भ भएको प्रणाली, र एउटा सानो भोल्युम इन्जेक्शन लूप स्थापना गर्‍यौं जसलाई स्टेनलेस स्टील केशिकामा मोल्ड गरिएको थियो। केही प्रारम्भिक समस्या निवारण प्रयोगहरू पछि, हामीले बुझ्यौं कि इन्जेक्शन भल्भ स्टेटरमा पोर्टको गहिराई धेरै गहिरो थियो जुन हामीले सजिलैसँग डेड भोल्युममा समस्या समाधान गर्न प्रयोग गरेका थियौं। अर्को ट्यूबको साथ इंजेक्शन लूप, हामी पोर्टको फेदमा मृत भोल्युम हटाउनको लागि उपयुक्त स्थितिमा फेरुल समायोजन गर्न सक्छौं।
चित्र 1e मा देखाइएका पीक फ्रन्टहरू पनि भौतिक वा रासायनिक समस्याहरूको कारणले हुन सक्छ। अग्रगामी किनाराको एक सामान्य भौतिक कारण भनेको स्तम्भको कणको ओछ्यान राम्रोसँग प्याक नभएको हो, वा कणहरू समयसँगै पुन: संगठित भएका छन्। यस भौतिक घटनाको कारणले गर्दा पीक टेलिङको साथमा, यसलाई ठीक गर्ने उत्तम तरिका भनेको रासायनिक रूपमा लिडको आकार राख्नु हो। उत्पत्ति प्राय जसो हामी "गैर-रेखीय" अवधारण अवस्थाहरूबाट उत्पन्न हुन्छ। आदर्श (रैखिक) अवस्थाहरूमा, स्थिर चरण (यसैले, अवधारण कारक) द्वारा राखिएको विश्लेषकको मात्रा स्तम्भमा विश्लेषकको एकाग्रतासँग रैखिक रूपमा सम्बन्धित छ। क्रोमेटोग्राफिक रूपमा, यसको मतलब यो हो कि कोलोमको द्रव्यमान बढ्दै गएको रूपमा, पेलेटरमा ठूलो मात्रामा वृद्धि हुँदैन। यो सम्बन्ध टुटेको छ जब रिटेन्सन व्यवहार गैर-रेखीय हुन्छ, र चुचुराहरू अग्लो मात्र होइन तर फराकिलो पनि हुन्छन् किनकि अधिक द्रव्यमान इन्जेक्ट हुन्छ। साथै, गैररेखीय आकारहरूले क्रोमेटोग्राफिक चुचुराहरूको आकार निर्धारण गर्दछ, जसको परिणामस्वरूप अगाडी वा पछाडि किनारहरू हुन्छन्। मास ओभरलोडको कारणले गर्दा पीक टेलिंग (10) लाई ननलाइनर रिजेक्शनले गर्दा पुन: रेखाहरू पनि हुन सक्छ। विश्लेषक मास। यदि शिखर आकार सुधार भयो भने, विधिलाई प्रमुख किनाराको कारण हुने इन्जेक्शन गुणस्तर भन्दा बढि नहुनको लागि परिमार्जन गरिनुपर्छ, वा यो व्यवहारलाई कम गर्न क्रोमेटोग्राफिक अवस्थाहरू परिवर्तन गरिनुपर्छ।
कहिलेकाहीँ हामीले चित्र 1f मा देखाइए अनुसार "विभाजन" शिखर जस्तो देखिन्छ भनेर अवलोकन गर्छौं। यो समस्या समाधान गर्ने पहिलो चरण भनेको चोटी आकार आंशिक सह-इल्युसन (अर्थात्, दुई अलग तर नजिकबाट इल्युटिंग यौगिकहरूको उपस्थिति) को कारणले हो कि भनेर निर्धारण गर्नु हो। यदि त्यहाँ वास्तवमा दुई फरक विश्लेषकहरू सँगै नजिक छन् भने, तब यो तिनीहरूको उदाहरण, पुन: रिजोल्युशन, पुन: गणना र एप चयन गरेर, पुन: रिजोल्युसन चयन गर्ने कुरा हो। "विभाजित" चुचुराहरू भौतिकसँग सम्बन्धित छैनन् कार्यसम्पादनको स्तम्भसँग कुनै सरोकार छैन। प्रायः, यो निर्णयको सबैभन्दा महत्त्वपूर्ण संकेत भनेको क्रोमेटोग्रामका सबै चुचुराहरूले विभाजन आकारहरू देखाउँछन् वा एक वा दुई मात्र। यदि यो केवल एक वा दुई हो भने, यो सम्भवतः सह-उत्थान मुद्दा हो;यदि सबै चुचुराहरू विभाजित छन् भने, यो सायद भौतिक समस्या हो, सम्भवतः स्तम्भ आफैंसँग सम्बन्धित छ।
स्तम्भको भौतिक गुणहरूसँग सम्बन्धित स्प्लिट पीकहरू सामान्यतया आंशिक रूपमा अवरुद्ध इनलेट वा आउटलेट फ्रिट्स, वा स्तम्भमा कणहरूको पुनर्गठनका कारण हुन्छन्, जसले मोबाइल चरणलाई स्तम्भ च्यानल गठनको निश्चित क्षेत्रहरूमा मोबाइल चरण भन्दा छिटो प्रवाह गर्न अनुमति दिन्छ। अन्य क्षेत्रहरूमा (११)। आंशिक रूपमा जमेको फ्रिटहरू कहिलेकाहीं कोलम मार्फत पुन: प्रवाह गर्न सकिन्छ।जे होस्, मेरो अनुभवमा, यो सामान्यतया दीर्घकालीन समाधानको सट्टा छोटो अवधि हो। यदि कणहरू स्तम्भ भित्र पुन: संयोजित भएमा आधुनिक स्तम्भहरूमा यो प्रायः घातक हुन्छ। यस बिन्दुमा, स्तम्भ प्रतिस्थापन र जारी राख्नु उत्तम हुन्छ।
चित्र 1g मा शिखर, मेरो आफ्नै प्रयोगशालामा भर्खरको उदाहरणबाट पनि, सामान्यतया संकेत यति उच्च छ कि यो प्रतिक्रिया दायराको उच्च छेउमा पुगेको छ भनेर संकेत गर्दछ। अप्टिकल अवशोषण डिटेक्टरहरू (यस अवस्थामा UV-vis) को लागि, जब विश्लेषक एकाग्रता धेरै उच्च हुन्छ, विश्लेषकले धेरै जसो अवशोषित गर्दछ, यी प्रकाश कोशिका मार्फत धेरै थोरै प्रकाशको प्रवाह पत्ता लगाउँदछ। फोटोडेटेक्टरबाट al सिग्नल आवाजका विभिन्न स्रोतहरूबाट धेरै प्रभावित हुन्छ, जस्तै स्ट्रे लाइट र "डार्क करेन्ट" जसले सिग्नललाई धेरै "अस्पष्ट" बनाउँछ र विश्लेषणात्मक एकाग्रताबाट स्वतन्त्र हुन्छ।जब यो हुन्छ, समस्या प्रायः विश्लेषकको इंजेक्शन भोल्युम घटाएर सजिलैसँग समाधान गर्न सकिन्छ - इंजेक्शन भोल्युम घटाएर, नमूना पातलो गरेर, वा दुवै।
क्रोमेटोग्राफी स्कूलमा, हामीले डिटेक्टर संकेत (जस्तै, क्रोमाटोग्राममा y-अक्ष) नमूनामा विश्लेषक एकाग्रताको सूचकको रूपमा प्रयोग गर्छौं। त्यसैले यो शून्यभन्दा तलको संकेत भएको क्रोमेटोग्राम देख्नु अनौठो देखिन्छ, किनकि सरल व्याख्या यो हो कि यसले संकेत गर्दछ कि नकारात्मक विश्लेषणात्मक एकाग्रताको प्रयोग गर्दा प्रायः नकारात्मक रूपमा शारीरिक रूपमा देखाइएको अनुभवमा नकारात्मक विश्लेषणात्मक एकाग्रता होईन। अप्टिकल अवशोषण डिटेक्टरहरू (जस्तै, UV-vis)।
यस अवस्थामा, नकारात्मक शिखरको अर्थ भनेको स्तम्भबाट बाहिर निस्केका अणुहरूले चुचुरो भन्दा पहिले र पछि मोबाइल चरण भन्दा कम प्रकाश अवशोषित गर्दछ। यो हुन सक्छ, उदाहरणका लागि, तुलनात्मक रूपमा कम पत्ता लगाउने तरंग दैर्ध्य (<230 nm) र मोबाइल फेज एडिटिभहरू जसले यी तरंग दैर्ध्यमा अधिकांश प्रकाश अवशोषित गर्दछ। एसीटेट वा ढाँचा। एकले वास्तवमा क्यालिब्रेसन वक्र तयार गर्न र सही मात्रात्मक जानकारी प्राप्त गर्न नकारात्मक चुचुराहरू प्रयोग गर्न सक्छ, त्यसैले तिनीहरूबाट जोगिनको लागि कुनै आधारभूत कारण छैन (यस विधिलाई कहिलेकाहीँ "अप्रत्यक्ष UV पत्ता लगाउने" भनिन्छ) (१३)। यद्यपि, यदि हामी वास्तवमै नकारात्मक चुचुराहरूलाई पूरै बेवास्ता गर्न चाहन्छौं भने, तरंग पत्ता लगाउनको लागि उत्तम समाधान प्रयोग गर्नुहोस्। विश्लेषकले मोबाइल चरण भन्दा बढी अवशोषित गर्दछ, वा मोबाइल चरणको संरचना परिवर्तन गर्नुहोस् ताकि तिनीहरू विश्लेषकहरू भन्दा कम प्रकाश अवशोषित गर्छन्।
अपवर्तक अनुक्रमणिका (RI) पत्ता लगाउने प्रयोग गर्दा नकारात्मक शिखरहरू पनि देखा पर्न सक्छन् जब नमूनामा विश्लेषक बाहेक अन्य घटकहरूको अपवर्तक अनुक्रमणिका, जस्तै सॉल्भेन्ट म्याट्रिक्स, मोबाइल चरणको अपवर्तक अनुक्रमणिका भन्दा भिन्न हुन्छ। यो UV-vis पत्ता लगाउने क्रममा पनि हुन्छ, तर यो प्रभावलाई कम गर्न सकिन्छ। RI को तुलनामा अधिक कम्पोनाइज्ड मामिलाहरू पत्ता लगाउने सापेक्षमा यो प्रभाव कम हुन सक्छ। मोबाइल चरणको नमूना म्याट्रिक्सको आयन।
LC समस्या निवारणको आधारभूत विषयको तेस्रो भागमा, मैले अवलोकन गरिएको शिखर आकार अपेक्षित वा सामान्य शिखर आकारभन्दा फरक हुने अवस्थाहरूबारे छलफल गरेको छु। त्यस्ता समस्याहरूको प्रभावकारी समस्या निवारण अपेक्षित शिखर आकारहरूको ज्ञानबाट सुरु हुन्छ (सिद्धान्त वा अवस्थित विधिहरूसँगको पूर्व अनुभवमा आधारित), त्यसैले यी अपेक्षाहरूबाट विचलनहरू स्पष्ट छन्। पीक, विभिन्न प्रकारका सम्भाव्यताहरू, नेतृत्व आदिमा धेरै समस्याहरू छन्। किस्तमा, म प्रायः देख्ने केही कारणहरू विस्तारमा छलफल गर्छु। यी विवरणहरू थाहा पाउँदा समस्या निवारण सुरु गर्नको लागि राम्रो ठाउँ प्रदान गर्दछ, तर सबै सम्भावनाहरू कब्जा गर्दैन। कारण र समाधानहरूको थप गहिरो सूचीमा रुचि राख्ने पाठकहरूले LCGC "LC समस्या निवारण गाइड" भित्ता चार्टलाई सन्दर्भ गर्न सक्छन्।
(4) LCGC "LC समस्या निवारण गाइड" वाल चार्ट।https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021)।
(6) ए फेलिंगर, क्रोमेटोग्राफीमा डेटा विश्लेषण र सिग्नल प्रोसेसिङ (एल्सेभियर, न्यूयोर्क, NY, 1998), pp. 43-96।
(8) वहाब एमएफ, दासगुप्ता पीके, कड्जो एएफ र आर्मस्ट्रंग डीडब्ल्यू, अनल.चिम. जर्नल. रेव।907, 31–44 (2016)।https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043।