Nature.com मा जानुभएकोमा धन्यवाद।तपाईँले प्रयोग गरिरहनुभएको ब्राउजर संस्करणमा CSS को लागि सीमित समर्थन छ।उत्तम अनुभवको लागि, हामी तपाईंलाई अपडेट गरिएको ब्राउजर प्रयोग गर्न सुझाव दिन्छौं (वा इन्टरनेट एक्सप्लोररमा अनुकूलता मोड बन्द गर्नुहोस्)।यस बीचमा, निरन्तर समर्थन सुनिश्चित गर्न, हामी शैलीहरू र जाभास्क्रिप्ट बिना साइट प्रदर्शन गर्नेछौं।
सच्छिद्र सिलिका कणहरू म्याक्रोपोरस कणहरू प्राप्त गर्न केही परिमार्जनहरू सहित सोल-जेल विधिद्वारा तयार गरिएको थियो। यी कणहरू एन-फेनिलमालेइमाइड-मेथाइलभिनिलिसोसाइनेट (PMI) र स्टाइरेनको साथ एन-फेनिलमालेइमाइड-मेथाइलभिनिलिसोसाइनेट (PMI) र स्टाइरेन फेज एन-फेनेलरोओएमपी स्टेशन तयार गर्नका लागि रिभर्सिबल एडिशन फ्रेग्मेन्टेसन चेन ट्रान्सफर (RAFT) पोलिमराइजेशनद्वारा व्युत्पन्न गरिएको थियो। पुन: स्टेनलेस स्टील स्तम्भहरू (100 × 1.8 मिमी id) स्लरी प्याकिङद्वारा प्याक गरिएको थियो। पाँच पेप्टाइडहरू (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, lenerg-Tyrol-Arg, lgly-Gly-Tyr-Arg, en-Gly-Gly-Tyr-Arg-Tyr-G-Tyr-Arg, 100 × 1.8 mm id) पेप्टाइड मिश्रणको मूल्याङ्कन गरिएको PMP स्तम्भ विभाजन। ic प्रदर्शन) र मानव सीरम एल्बमिन (HAS) को ट्रिप्सिन पाचन। इष्टतम उत्सर्जन अवस्थाहरूमा, पेप्टाइड मिश्रणको सैद्धान्तिक प्लेट गणना 280,000 प्लेट/m² जति उच्च हुन्छ। विकसित स्तम्भको पृथकता कार्यसम्पादनलाई व्यावसायिक एसेन्टिस एक्सप्रेस RP-एमाइड स्तम्भमा व्यावसायिक स्तम्भको निरीक्षण गरिएको थियो। विभाजन दक्षता र संकल्प को सर्तहरू।
हालैका वर्षहरूमा, बायोफार्मास्युटिकल उद्योग बजार सेयरमा पर्याप्त वृद्धिको साथ एक विस्तारित विश्वव्यापी बजार भएको छ। बायोफार्मास्युटिकल उद्योगको विस्फोटक वृद्धि 1,2,3 संग, पेप्टाइड र प्रोटीन को विश्लेषण अत्यधिक वांछित छ। लक्ष्य पेप्टाइड को अतिरिक्त, धेरै अशुद्धता उत्पन्न हुन्छ, peptides reclusion to peptides synthetic recension. वांछित शुद्धताको। शरीरको तरल पदार्थ, तन्तु र कोशिकाहरूमा प्रोटीनहरूको विश्लेषण र विशेषता एउटै नमूनामा ठूलो संख्यामा सम्भावित रूपमा पत्ता लगाउन सकिने प्रजातिहरूको कारणले अत्यन्त चुनौतीपूर्ण कार्य हो। यद्यपि मास स्पेक्ट्रोमेट्री पेप्टाइड र प्रोटिन अनुक्रमणिका लागि प्रभावकारी उपकरण हो, यदि त्यस्ता नमूनाहरू एक मास स्पेक्ट्रममा इन्जेक्सन गरिएमा यो समस्या समाधान गर्न सकिँदैन। ing तरल क्रोमेटोग्राफी (LC) MS विश्लेषण भन्दा पहिले विभाजन, जसले मास स्पेक्ट्रोमिटरमा दिइएको समयमा 4,5,6 मा प्रवेश गर्ने विश्लेषकहरूको संख्या घटाउनेछ। साथै, तरल चरण विभाजनको समयमा, विश्लेषकहरूलाई साँघुरो क्षेत्रहरूमा केन्द्रित गर्न सकिन्छ, जसले गर्दा यी विश्लेषकहरूलाई केन्द्रित गरी एलसीएमएसले महत्त्वपूर्ण रूपमा पत्ता लगाउने क्षमतामा सुधार गर्दछ। गत दशकमा र प्रोटोमिक विश्लेषण 7,8,9,10 मा एक लोकप्रिय प्रविधि भएको छ।
रिभर्स्ड-फेज लिक्विड क्रोमेटोग्राफी (RP-LC) लाई स्थिर फेज ११,१२,१३ को रूपमा अक्टेडेसाइल-परिमार्जित सिलिका (ODS) को प्रयोग गरेर पेप्टाइड मिश्रणको शुद्धीकरण र विभाजनको लागि व्यापक रूपमा प्रयोग गरिन्छ। यद्यपि, RP स्थिर चरणहरूले सन्तोषजनक विभाजन प्रदान गर्दैनन्। पहिले, विशेष रूपमा डिजाइन गरिएको स्थिर चरणहरू ध्रुवीय र गैर-ध्रुवीय भागहरू भएका पेप्टाइडहरू र प्रोटीनहरूको विश्लेषण गर्न आवश्यक छ र यी विश्लेषणहरू अन्तर्क्रिया गर्न र कायम राख्नको लागि 16। मिश्रित-मोड क्रोमेटोग्राफी, जसले बहुविध अन्तरक्रियाहरू प्रदान गर्दछ, पेप्टाइडहरू, प्रोटीनहरू, र अन्य मिश्रित चरणहरूको विभाजनको लागि RP-LC को विकल्प हुन सक्छ। यी चरणहरूसँग प्याक गरिएको पेप्टाइड र प्रोटीन विभाजनको लागि प्रयोग गरिएको छ17,18,19,20,21। मिश्रित-मोड स्थिर चरणहरू (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, ध्रुवीय अन्तर्क्रिया/RPLC) दुबै ध्रुवीय र गैर-ध्रुवीय समूहहरूको उपस्थितिको कारणले पेप्टाइड र प्रोटीन विभाजनको लागि उपयुक्त छन्। कोभ्यालेन्टली बन्डेड ध्रुवीय समूहहरूसँग स्थिर चरणहरू क्यालेटिंगले राम्रो विभाजन शक्ति र ध्रुवीय र गैर-ध्रुवीय विश्लेषकहरूको लागि अद्वितीय चयनशीलता देखाउँदछ, किनकि विभाजन विश्लेषक र स्थिर चरण बीचको अन्तरक्रियामा निर्भर गर्दछ।बहुविध अन्तरक्रिया 29, 30, 31, 32. हालसालै, Zhang et al।30 ले एक डोडेसिल-टर्मिनेटेड पोलिमाइन स्थिर चरण तयार पार्यो र सफलतापूर्वक हाइड्रोकार्बन, एन्टीडिप्रेसन्ट, फ्लेभोनोइड्स, न्यूक्लियोसाइड्स, एस्ट्रोजेनहरू, र अन्य धेरै विश्लेषकहरू अलग गर्यो। ध्रुवीय इन्टरकलेटरमा ध्रुवीय र गैर-ध्रुवीय समूहहरू छन्, त्यसैले यसलाई पेप्टाइडहरू र प्रोटीनहरू छुट्याउन प्रयोग गर्न सकिन्छ जसमा molice-hydropholic hydrocarbons, 20000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000। जस्तै, एमाइड-इम्बेडेड C18 स्तम्भहरू) व्यापारिक रूपमा Ascentis Express RP-Amide स्तम्भहरू अन्तर्गत उपलब्ध छन्, तर यी स्तम्भहरू amine 33 को विश्लेषणको लागि मात्र प्रयोग गरिन्छ।
हालको अध्ययनमा, एक ध्रुवीय-इम्बेडेड स्थिर चरण (N-phenylmaleimide-एम्बेडेड polystyrene) HSA को पेप्टाइड र ट्रिप्सिन डाइजेस्टहरू अलग गर्नको लागि तयार र मूल्याङ्कन गरिएको थियो। स्थिर चरण निम्न रणनीति प्रयोग गरी तयार गरिएको थियो। पोरस सिलिका कणहरू हाम्रो अघिल्लो प्रकाशनमा दिइएको प्रक्रिया अनुसार तयार गरिएको थियो। (PEG), TMOS, वाटर एसिटिक एसिडलाई ठूला पोर साइज भएका सिलिका कणहरू तयार गर्न समायोजन गरिएको थियो। दोस्रो, नयाँ लिगान्ड, फेनिलमालेइमाइड-मिथाइल विनाइल आइसोसाइनेट, संश्लेषित गरी सिलिका कणहरूलाई ध्रुवीय इम्बेडेड स्थिर चरण तयार गर्न प्रयोग गरियो। परिणामस्वरूप स्थिर चरणको प्रयोग गरी 1 मिमी 0 स्टेसन 0 स्टेसन 1 मिमी रहित प्याक गरिएको थियो। अनुकूलित प्याकिङ योजना। स्तम्भ भित्र एकसमान ओछ्यान बनेको सुनिश्चित गर्न स्तम्भ प्याकिङलाई मेकानिकल कम्पनले सहयोग गरिन्छ। पाँच पेप्टाइडहरू समावेश भएको पेप्टाइड मिश्रणको प्याक गरिएको स्तम्भ विभाजनको मूल्याङ्कन गर्नुहोस्;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) र मानव सीरम albumin (HAS) को ट्रिप्सिन डाइजेस्ट। HSA को पेप्टाइड मिश्रण र trypsin डाइजेस्ट राम्रो संग अलग गर्न को लागी अवलोकन गरियो। पीआरपीसेन्ट को प्रदर्शन को MPS को तुलना संग संगतता को रूप मा प्रदर्शन को तुलना मा राम्रो रिजोल्युशन र दक्षता संग थियो। -एमाइड स्तम्भ।पीएमपी स्तम्भमा दुबै पेप्टाइड्स र प्रोटीनहरू राम्रोसँग समाधान र प्रभावकारी भएको देखियो, जुन एसेन्टिस एक्सप्रेस आरपी-एमाइड स्तम्भ भन्दा बढी कुशल थियो।
PEG (Polyethylene Glycol), यूरिया, एसिटिक एसिड, Trimethoxy Orthosilicate (TMOS), Trimethyl Chlorosilane (TMCS), Trypsin, Human Serum Albumin (HSA), अमोनियम क्लोराइड, यूरिया, Hexane Methyldisilazane (HMDS), Methacryloyl Chloride, Bend-Microxy-4-एमसीपीओक्साइड, पेरोक्साइड (BPO), HPLC ग्रेड Acetonitrile (ACN), Methanol, 2-Propanol, र Acetone Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) बाट खरिद गरिएको।
युरिया (8 ग्राम), पोलिथिलीन ग्लाइकोल (8 ग्राम), र 0.01 एन एसिटिक एसिडको 8 एमएलको मिश्रणलाई 10 मिनेटको लागि हलचल गरियो, र त्यसपछि 24 एमएल TMOS बरफ-चिसो अवस्थामा थपियो। प्रतिक्रिया मिश्रणलाई 40 डिग्री सेल्सियसमा 6 घण्टाको लागि तताइएको थियो र त्यसपछि 120 डिग्री सेल्सियसमा 120 डिग्री सेल्सियस पानीमा 120 डिग्री सेन्टिग्रेड अटोअभ र अफ स्टेल अफ पानी। अवशिष्ट पदार्थलाई ७० डिग्री सेल्सियसमा १२ घण्टासम्म सुकाइयो। सुकेको नरम पिण्डलाई चुलोमा चिल्लो भुइँमा राखिएको थियो र १२ घण्टासम्म ५५० डिग्री सेल्सियसमा क्याल्साइन गरिएको थियो। कणको आकार, छिद्रको आकार र सतहको क्षेत्रफलमा प्रजनन योग्यता परीक्षण गर्न तीनवटा ब्याचहरू तयार गरी चित्रण गरिएको थियो।
सिलिका कणहरूको सतह परिमार्जन गरेर पूर्व-संश्लेषित लिगान्ड फेनिल्मालेइमाइड-मेथाइलभिनिलिसोसाइनेट (PCMP) को साथ रेडियल पोलिमराइजेसन स्टायरिनको साथ, एक ध्रुवीय समूह-युक्त यौगिक तयार गरियो।समुच्चय र polystyrene चेन लागि स्थिर चरण। तयारी प्रक्रिया तल वर्णन गरिएको छ।
N-phenylmaleimide (200 mg) र मिथाइल vinyl isocyanate (100 mg) लाई ड्राई टोल्युइनमा भंग गरियो, र 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) को 0.1 mL को प्रतिक्रिया फ्लास्कमा phenylmaleimide-methyl washemered-Mithyl-Mythyl-Mythyl-Mythyl 600 मिलीग्राम तापक्रम तयार गर्न थपियो। ३ घण्टाको लागि ० डिग्री सेल्सियस, फिल्टर गरी ४० डिग्री सेल्सियसमा ३ घण्टाको लागि ओभनमा सुकाइन्छ।
सुख्खा सिलिका कणहरू (2 ग्राम) सुक्खा टोल्युनि (100 एमएल) मा छरिएका थिए, 10 मिनेटको लागि 500 ​​एमएल राउन्ड तल्लो फ्लास्कमा हलचल र सोनिकेटेड थिए। पीएमसीपी (10 मिलीग्राम) टोल्युइनमा विघटन गरिएको थियो र ड्रपिङ फनेल मार्फत प्रतिक्रिया फ्लास्कमा ड्रपवाइज थपियो। मिश्रण 10 डिग्री सेल्सियसमा 10 डिग्री सेल्सियसमा राखिएको थियो। एसीटोन र 60 डिग्री सेल्सियसमा 3 घण्टाको लागि सुकाइयो। त्यसपछि, पीएमसीपी-बन्डेड सिलिका कणहरू (100 ग्राम) टोल्युइन (200 एमएल) र 4-हाइड्रोक्सी-टेम्पो (2 एमएल) लाई 100 μL डिब्युटाइल्टिन डाइलोरेटको उपस्थितिमा थपिएको थियो। 3 घण्टाको लागि 50 डिग्री सेल्सियसमा सुकाइन्छ।
Styrene (1 mL), benzoyl peroxide BPO (0.5 mL), र TEMPO-PMCP-संलग्न सिलिका कणहरू (1.5 ग्राम) टोल्युइनमा छरिएका थिए र नाइट्रोजनको साथ शुद्ध गरियो। 12 घण्टाको लागि 100 डिग्री सेल्सियसमा स्टाइरिनको पोलिमराइजेशन गरिएको थियो। नतिजामा 12 घण्टाको लागि 100 डिग्री सेल्सियस र रातमा 6 डिग्री सेल्सियसमा उत्पादन भएको प्रतिक्रिया थियो। चित्र १ मा देखाइएको छ।
नमूनाहरू 10-3 Torr भन्दा कमको अवशिष्ट दबाव प्राप्त गर्न 1 घण्टाको लागि 393 K मा डिग्यास गरिएको थियो। P/P0 = 0.99 को सापेक्षिक दबाबमा सोसिएको N2 को मात्रा कुल छिद्रको मात्रा निर्धारण गर्न प्रयोग गरिएको थियो। बेयर र लिगान्ड-बन्डेड सिलिका कणहरूको आकारविज्ञान, इलेक्ट्रोचिनोचिनो, माइक्रोचिनोको साथमा परीक्षण गरिएको थियो। जापान)। सुक्खा नमूनाहरू (बेयर सिलिका र लिगान्ड-बन्डेड सिलिका कणहरू) टाँसिने कार्बन टेप प्रयोग गरेर एक एल्युमिनियम स्तम्भमा राखिएको थियो। Q150T स्पटर कोटर प्रयोग गरेर नमूनाहरूमा सुनको प्लेट लगाइएको थियो, र नमूनाहरूमा 5 nm Au तह जम्मा गरिएको थियो। यसले प्रक्रियालाई सुधार गर्दछ, चिसो क्षमतामा सुधार गर्दछ। ron (Waltham, MA, USA) फ्ल्यास EA1112 एलिमेन्टल एनालाइजर एलिमेन्टल एनालाइसिसको लागि प्रयोग गरिएको थियो। ए माल्वरन (वर्सेस्टरशायर, यूके) मास्टरसाइजर 2000 कण साइज एनालाइजर कण साइज वितरण प्राप्त गर्न प्रयोग गरिएको थियो। नग्न सिलिका कणहरू र m5 मा सिलिका कणहरू (m5) mL5g का डिस्प्लेड गरिएको थियो। isopropanol, 10 मिनेटको लागि सोनिकेटेड, 5 मिनेटको लागि भोर्टेक्स गरिएको, र मास्टरसाइजरको अप्टिकल बेन्चमा राखियो। Thermogravimetric विश्लेषण 30 देखि 800 °C को तापमान दायरामा 5 °C प्रति मिनेटको दरमा प्रदर्शन गरिएको थियो।
ग्लास-लाइन स्टेनलेस स्टील साँघुरो-बोर आयामहरू (100 × 1.8 मिमी id) को स्तम्भहरू स्लरी प्याकिङ विधि प्रयोग गरेर प्याक गरिएको थियो, रेफमा प्रयोग गरिएको उही प्रक्रिया लागू गर्दै।31.A स्टेनलेस स्टील स्तम्भ (ग्लास-लाइन, 100 × 1.8 मिमी id) आउटलेट फिटिंग सहित 1 µm फ्रिट एक स्लरी प्याकर (Alltech Deerfield, IL, USA) मा जडान गरिएको थियो। स्टेशनरी चरण स्लरी तयार गर्नुहोस् र यसलाई 150 m.l.m.150 मिटर भण्डारणमा स्टेसनरी कोलम पठाउनुहोस्। .Methanol को स्लरी विलायक र प्रोपेलिंग विलायकको रूपमा प्रयोग गरिएको थियो। 10 मिनेटको लागि 100 MP, 15 मिनेटको लागि 80 MP, र 30 मिनेटको लागि 60 MP को दबाब दिएर स्तम्भ क्रमिक रूपमा भर्नुहोस्। प्याकिङको क्रममा, मेकानिकल कम्पन लागू गरिएको थियो। स्तम्भ।स्लरी प्याकर बन्द गर्नुहोस् र स्तम्भ भित्र कुनै पनि क्षति हुनबाट जोगाउन बिस्तारै दबाब छोड्नुहोस्।स्लरी प्याकिङ एकाइबाट स्तम्भ विच्छेद गर्नुहोस् र यसको कार्यसम्पादन जाँच गर्न इनलेट र LC प्रणालीमा अर्को फिटिङ जडान गर्नुहोस्।
एक LC पम्प (10AD Shimadzu, जापान), इन्जेक्टर (Valco (USA) C14 W.05) 50nL इन्जेक्शन लुप, झिल्ली डेगासर (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS केशिका विन्डो निर्माण गरिएको थियो विशेष µLC उपकरण डिटेक्टर (UV-2075 मा माइक्रोकोलिङमा जडान गरिएको छ। अतिरिक्त स्तम्भ ब्यान्ड फराकिलोको प्रभावलाई प्रभाव पार्नुहोस्। प्याकेजिङ पछि, केशिकाहरू (50 μm id 365 र reducing Union capillaries (50 μm) रिड्युसिङ युनियनको 1/16″ आउटलेटमा स्थापना गरिएको थियो। डाटा सङ्कलन र क्रोमेटोग्राफिक प्रशोधन Multichro 200n4 सफ्टवेयरको प्रयोग गरी गरिएको थियो। ब्यान्स। क्रोमेटोग्राफिक डेटा OriginPro8 (Northampton, MA) द्वारा विश्लेषण गरिएको थियो।
मानव सीरमबाट एल्बुमिन, लायोफिलाइज्ड पाउडर, ≥ 96% (एगारोज जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस) 3 मिलीग्राम ट्रिप्सिन (1.5 मिलीग्राम), 4.0 एम यूरिया (1 एमएल), र 0.2 एम अमोनियम बाइकार्बोनेट (1 एमएल) संग मिसाइएको। घोललाई 10 मिनेटको लागि हलचल गरियो र त्यसपछि 6 डिग्री सेन्टीग्रेड पानीमा 3 डिग्री सेल्सियस सम्म राखियो। ०.१% TFA को। समाधान फिल्टर गर्नुहोस् र 4 डिग्री सेल्सियस भन्दा कम भण्डार गर्नुहोस्।
पेप्टाइड मिश्रण र HSA ट्रिप्सिन डाइजेस्टको विभाजनलाई PMP स्तम्भहरूमा अलग-अलग मूल्याङ्कन गरिएको थियो। PMP स्तम्भद्वारा HSA को पेप्टाइड मिश्रण र ट्रिप्सिन डाइजेस्टको पृथकीकरण जाँच गर्नुहोस् र परिणामहरूलाई Ascentis Express RP-Amide स्तम्भसँग तुलना गर्नुहोस्। सैद्धान्तिक प्लेट नम्बर निम्नानुसार छ:
बेयर सिलिका कणहरू र लिगान्ड-बन्डेड सिलिका कणहरूको SEM छविहरू FIG मा देखाइएको छ।2. बेयर सिलिका कणहरू (A, B) को SEM छविहरूले देखाउँदछ कि, हाम्रो अघिल्लो अध्ययनहरूको विपरित, यी कणहरू गोलाकार हुन्छन् जसमा कणहरू लामो हुन्छन् वा अनियमित सममिति हुन्छन्। लिगान्ड-बन्डेड सिलिका कणहरूको सतह (C, D) को सतहको तुलनामा चिल्लो हुन्छ, जसको कारणले सिलिकाको सतहमा सिलिकाको पोलिस्टिक भाग हुन सक्छ। ica कणहरू।
बेयर सिलिका कणहरू (A, B) र ligand-bonded सिलिका कणहरू (C, D) को इलेक्ट्रोन माइक्रोस्कोप छविहरू स्क्यान गर्दै।
बेयर सिलिका कणहरू र लिगान्ड-बन्डेड सिलिका कणहरूको कण आकार वितरण चित्र 3(A) मा देखाइएको छ। भोल्युम-आधारित कण आकार वितरण वक्रहरूले देखाएको छ कि सिलिका कणहरूको आकार रासायनिक परिमार्जन पछि बढेको छ (चित्र 3A)। कण आकार वितरण डेटा सिलिका कणहरूको तुलनामा अघिल्लो अध्ययन-अध्ययनयोग्य कणहरू र Tbased1 कणहरूमा तुलना गरिएको छ। le साइज, d(0.5), PMP को 3.36 μm हो, हाम्रो अघिल्लो अध्ययनको विज्ञापन (0.5) 3.05 μm (पोलिस्टिरिन-बाउन्ड सिलिका कणहरू) को मूल्यको तुलनामा। 34. यो ब्याचमा हाम्रो अघिल्लो अध्ययनको तुलनामा सानो कण आकार वितरण थियो किनभने PEG र miture एसिडको आकारमा PEG र माइचर एसिडको भिन्न अनुपातहरू। MP चरण हामीले पहिले अध्ययन गरेको polystyrene-बाउन्ड सिलिका कण चरणको भन्दा थोरै ठूलो छ। यसको मतलब styrene संग सिलिका कणहरूको सतह कार्यात्मककरणले सिलिका सतहमा मात्र polystyrene तह (0.97 µm) जम्मा गरेको छ, जबकि PMP चरणमा तह मोटाई 1.38 µm थियो।
पार्टिकल साइज डिस्ट्रिब्युसन (A) र पोर साइज डिस्ट्रिब्युसन (B) बेयर सिलिका कण र लिगान्ड-बाउन्ड सिलिका कणहरूको।
हालको अध्ययनको सिलिका कणहरूको छिद्र आकार, छिद्र भोल्युम र सतह क्षेत्र तालिका 1 (B) मा दिइएको छ। बेयर सिलिका कणहरू र लिगान्ड-बन्डेड सिलिका कणहरूको PSD प्रोफाइलहरू चित्र 3 (B) मा देखाइएको छ। परिणामहरू हाम्रो अघिल्लो अध्ययनसँग तुलनात्मक छन्। बेयर र ligand-बाउन्ड सिलिका कणहरूको ध्रुव आकारले संकेत गर्दछ, जुन po21 र सिलिका-बाउन्ड, 3410 सिलिका कणहरू छन्। re साइज रासायनिक परिमार्जन पछि 69 ले घट्छ, तालिका 1(B) मा देखाइए अनुसार, र वक्र को परिवर्तन चित्र 3(B) मा देखाइएको छ। त्यसै गरी, रासायनिक परिमार्जन पछि सिलिका कणहरु को छिद्र मात्रा 0.67 बाट 0.58 cm3/g मा घट्यो। हाम्रो अध्ययन को विशिष्ट सतह क्षेत्र सिलिका को हालको अध्ययन m1g/1/1 छ पहिलेको अध्ययन गर्न योग्य भाग सिलिका 24 m2/g। तालिका 1(B) मा देखाइए अनुसार, सिलिका कणहरूको सतह क्षेत्र (m2/g) पनि रासायनिक परिमार्जन पछि 116 m2/g बाट 105 m2/g मा घट्यो।
स्थिर चरणको प्रारम्भिक विश्लेषणको नतिजा तालिका २ मा देखाइएको छ। हालको स्थिर चरणको कार्बन लोडिङ ६.३५% छ, जुन हाम्रो अघिल्लो अध्ययनको कार्बन लोडिङभन्दा कम छ (पोलिस्टिरिन बन्डेड सिलिका कणहरू, क्रमशः ७.९३% ३५ र १०.२१%) हालको स्टेसनमा कार्बन लोडिङ 42, हालको स्टेसनको कम लोडिङ चरणमा SP छ। स्टायरिनको अतिरिक्त, केहि ध्रुवीय लिगान्डहरू जस्तै phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) र 4-hydroxy-TEMPO प्रयोग गरिएको थियो। हालको स्थिर चरणको नाइट्रोजन वजन प्रतिशत 2.21% हो, 0.1735 र 0.85% को तुलनामा, अघिल्लो अध्ययनहरूमा यो नाइट्रोजनको वजन क्रमशः उच्च स्टेसनमा% भन्दा बढी हो। phenylmaleimide को कारण चरण। त्यसै गरी, उत्पादनहरु (4) र (5) को कार्बन लोडिंग क्रमशः 2.7% र 2.9% थियो, जबकि अन्तिम उत्पादन (6) को कार्बन लोडिंग 6.35% थियो, तालिका 2 मा देखाइए अनुसार। वजन घटाने PMP स्थिर चरण संग जाँच गरिएको थियो, र TGA curve को TGA curve% देखाइएको छ। , जुन कार्बन लोडिङ (6.35%) सँग राम्रो सम्झौतामा छ किनभने ligands मा C मात्र होइन N, O, र H पनि हुन्छन्।
फिनाइलमालेइमाइड-मिथाइलभिनिलिसोसाइनेट लिगान्डलाई सिलिका कणहरूको सतह परिमार्जनको लागि छनोट गरिएको थियो किनभने यसमा ध्रुवीय फेनिलमालेइमाइड समूहहरू र विनाइलिसोसाइनेट समूहहरू छन्। विनाइल आइसोसाइनेट समूहहरूले जीवित कट्टरपन्थी पोलिमराइजेशनद्वारा स्टायरिनसँग थप प्रतिक्रिया गर्न सक्छन्। दोस्रो कारण भनेको एउटा समूह सम्मिलित गर्नु हो जुन बीचको अन्तरक्रिया र इलेक्ट्रोनिक स्टेसन बीचको अन्तरक्रिया छैन। ary चरण, किनकि phenylmaleimide moiety को सामान्य pH मा कुनै भर्चुअल चार्ज छैन। स्थिर चरणको ध्रुवता styrene को इष्टतम मात्रा र फ्री रेडिकल पोलिमराइजेशनको प्रतिक्रिया समय द्वारा नियन्त्रण गर्न सकिन्छ। प्रतिक्रियाको अन्तिम चरण (फ्री-रेडिकल पोलिमराइजेशन) महत्वपूर्ण छ र यी स्टेशनरी स्टेशनल स्टेसन फेजको ध्रुवतालाई परिवर्तन गर्न सक्छ। स्टायरिनको मात्रा र प्रतिक्रिया समय बढ्नाले स्थिर चरणको कार्बन लोडिङ बढेको देखियो र यसको विपरित। स्टायरिनको विभिन्न सांद्रताका साथ तयार पारिएका एसपीहरूमा फरक कार्बन लोड हुन्छ। फेरि, यी स्थिर चरणहरूलाई स्टेनलेस स्टील स्तम्भहरूमा लोड गर्नुहोस् र तिनीहरूको क्रोमेटोग्राफिक कार्यसम्पादन जाँच गर्नुहोस् (चयनित, एन रिजोल्युसन, रिजोल्युसन, रिजोल्युसन आदिमा चयन गरिएको परीक्षण, रिजोल्युसन आदि)। PMP स्थिर चरण नियन्त्रित ध्रुवता र राम्रो विश्लेषक अवधारण सुनिश्चित गर्न।
पाँच पेप्टाइड मिश्रणहरू (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) पनि मोबाइल चरण प्रयोग गरेर PMP स्तम्भ प्रयोग गरेर मूल्याङ्कन गरियो;80 μL/min को प्रवाह दरमा 60/40 (v/v) acetonitrile/water (0.1% TFA)। इष्टतम इल्युसन अवस्थाहरूमा, सैद्धान्तिक प्लेट नम्बर (N) प्रति स्तम्भ (100 × 1.8 मिमी id) 20,000 ± 0,00m/100 200m 20,00m 20,0000000000000 मिटर उपलब्ध मान उपलब्ध हुन्छ। PMP स्तम्भहरू र क्रोमेटोग्रामहरू चित्र 5A मा देखाइएको छ। PMP स्तम्भमा उच्च प्रवाह दर (700 μL/मिनेट) मा द्रुत विश्लेषण, पाँच पेप्टाइडहरू एक मिनेट भित्र एल्युट गरिएका थिए, N मानहरू धेरै राम्रो थिए, 13,500 ± 330 प्रति स्तम्भ (10.30 × 10.30mm, Corponds500, Corpontes) m (चित्र 5B)। तीन समान आकारका स्तम्भहरू (100 × 1.8 mm id) पुन: उत्पादनशीलता जाँच गर्न PMP स्थिर चरणका तीनवटा विभिन्न लटहरूले प्याक गरिएको थियो। प्रत्येक स्तम्भको लागि विश्लेषक एकाग्रता इष्टतम इल्युसन अवस्थाहरू र सैद्धान्तिक प्लेटहरूको संख्या प्रयोग गरेर रेकर्ड गरिएको थियो। lumns तालिका 4 मा देखाइएको छ। PMP स्तम्भको पुन: उत्पादन क्षमता धेरै कम % RSD मानहरूसँग राम्रोसँग सम्बन्धित छ, तालिका 3 मा देखाइएको छ।
पीएमपी स्तम्भ (बी) र एसेन्टिस एक्सप्रेस आरपी-एमाइड स्तम्भ (ए) मा पेप्टाइड मिश्रणको विभाजन;मोबाइल चरण 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP स्तम्भ आयामहरू (100 × 1.8 मिमी आईडी);विश्लेषणात्मक यौगिकहरूको उत्सर्जन क्रम: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) र 5 (leucine) एसिड enkephalin))।
एक PMP स्तम्भ (100 × 1.8 mm id) उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमेटोग्राफी मा मानव सीरम एल्बमिन को ट्राइप्टिक डाइजेस्ट को विभाजन को लागी मूल्याङ्कन गरियो। चित्र 6 मा क्रोमेटोग्राम नमूना राम्रो संग अलग गरिएको छ र रिजोल्युशन धेरै राम्रो छ भनेर देखाउँछ। HSA डाइजेस्ट को एक मोबाइल रेट 0/t0 µt0 µt 0/min 0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.20.2.2000 को प्रयोग गरी विश्लेषण गरिएको थियो। rile/water र 0.1% TFA। क्रोमेटोग्राम (चित्र 6) मा देखाइए अनुसार, HSA पाचनलाई 17 पेप्टाइडहरूसँग सम्बन्धित 17 शिखरहरूमा विभाजित गरिएको छ। HSA डाइजेस्टमा प्रत्येक चोटीको पृथकता दक्षता गणना गरिएको थियो र मानहरू T तालिका 5 मा दिइएको छ।
HSA (100 × 1.8 मिमी आईडी) को एक ट्रिप्टिक डाइजेस्ट PMP स्तम्भमा अलग गरिएको थियो;प्रवाह दर (100 μL/मिनेट), मोबाइल चरण 60/40 acetonitrile/पानी 0.1% TFA संग।
जहाँ L स्तम्भको लम्बाइ हो, η मोबाइल चरणको चिपचिपाहट हो, ΔP स्तम्भ पछाडिको दबाब हो, र u मोबाइल चरणको रैखिक वेग हो। PMP स्तम्भको पारगम्यता 2.5 × 10-14 m2 थियो, प्रवाह दर 25 μL/min थियो, र 60/40 AC/40MP को प्रयोग गरिएको थियो। 0 × 1.8 mm id) हाम्रो अघिल्लो अध्ययन Ref.34 सँग मिल्दोजुल्दो थियो। सतही रूपमा छिद्रपूर्ण कणहरूले भरिएको स्तम्भको पारगम्यता हो: 1.7 μm कणहरूको लागि 1.7 × 10-15, 1.7 μm कणहरूको लागि 3.1 × 10-15 र 1.7 μm कणहरूको लागि 3.1 × 10-15 × 251 × 52-1,। .6 μm कणहरू 5 μm कणहरूको लागि 43. त्यसकारण, PMP चरणको पारगम्यता 5 μm कोर-शेल कणहरूको जस्तै छ।
जहाँ Wx क्लोरोफर्मले प्याक गरिएको स्तम्भको वजन हो, Wy मेथानोलले प्याक गरिएको स्तम्भको वजन हो, र ρ भनेको विलायकको घनत्व हो। मेथानोल (ρ = 0.7866) र क्लोरोफर्म (ρ = 1.484) को घनत्व। SIIClum1-8mm को कुल छिद्रता ) 34 र C18-यूरिया स्तम्भहरू 31 जुन हामीले पहिले अध्ययन गरेका थियौं, क्रमशः 0.63 र 0.55 थिए। यसको मतलब यो हो कि यूरिया लिगान्डहरूको उपस्थितिले स्थिर चरणको पारगम्यतालाई कम गर्छ। अर्कोतर्फ, PMP स्तम्भको कुल पोरोसिटी (100 × 1.8 mm को Pidns को कम छ। C18-बन्डेड सिलिका कणहरूले भरिएको हुनाले C18-प्रकारको स्थिर चरणहरूमा C18 ligands सिलिका कणहरूमा रैखिक चेनको रूपमा जोडिएको हुन्छ, जबकि polystyrene-प्रकार स्थिर चरणहरूमा, यसको वरिपरि एक अपेक्षाकृत बाक्लो पोलिमर तह बनाइन्छ। एक सामान्य प्रयोगमा, स्तम्भ पोरोसिटीको रूपमा गणना गरिन्छ:
चित्र 7A,B ले PMP स्तम्भ (100 × 1.8 mm id) र Ascentis Express RP-Amide स्तम्भ (100 × 1.8 mm id) उही इल्युसन अवस्थाहरू (अर्थात, 60/40 ACN/H2O र 0.1% TFA) प्रयोग गरेर देखाउँछ।) भ्यान डिम्टर प्लटको।चयन गरिएका पेप्टाइड मिश्रणहरू (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) 20 µL/ दुवै स्तम्भहरूको लागि न्यूनतम प्रवाह दर 800 µminL/mint umimt um μt μL/mint मान प्रवाह दर हो। L/min) PMP स्तम्भ र Ascentis Express RP-Amide स्तम्भको लागि क्रमशः 2.6 µm र 3.9 µm थिए। HETP मानहरूले PMP स्तम्भ (100 × 1.8 mm id) को पृथकता दक्षता संकेत गर्दछ कि व्यापारिक रूपमा उपलब्ध RPlum-1 RP-1.8 mm id RP-0 सेन्ट व्यावसायिक रूपमा उपलब्ध छ। Fig. 7(A) मा रहेको भ्यान डिमटर प्लटले हाम्रो अघिल्लो अध्ययनको तुलनामा बढ्दो प्रवाहको साथ N मानमा भएको कमी महत्त्वपूर्ण छैन भनेर देखाउँछ। Ascentis Express RP-Amide स्तम्भको तुलनामा PMP स्तम्भको उच्च पृथकता दक्षता (100 × 1.8 mm id) कणको आकारमा सुधार, हालको प्रक्रियामा प्रयोग गरिएको pack colum3 आकार, जटिल कार्यमा आधारित छ।
(A) भ्यान डिम्टर प्लट (HETP बनाम मोबाइल चरण रैखिक वेग) 60/40 ACN/H2O मा 0.1% TFA सँग PMP स्तम्भ (100 × 1.8 mm id) प्रयोग गरेर प्राप्त गरियो। (B) भ्यान Deemter प्लट (HETP बनाम मोबाइल चरण रैखिक वेग) RP0m x1m एक्सप्रेस co-1m RPlum एक्स्प्रेस को प्रयोग गरेर। .8 mm id) 60/40 ACN/H2O मा ०.१% TFA सँग।
एक ध्रुवीय-इम्बेडेड polystyrene स्थिर चरण उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमेटोग्राफी मा मानव सीरम एल्बमिन (HAS) को सिंथेटिक पेप्टाइड मिश्रण र ट्रिप्सिन डाइजेस्ट को अलग गर्न को लागी तैयार र मूल्याङ्कन गरिएको थियो। पेप्टाइड मिश्रण को लागी PMP स्तम्भ को क्रोमेटोग्राफिक प्रदर्शन PMP को पृथकता को रिजोल्युशन को भिन्नता को कारण उत्कृष्ट छ र PMP को रिजोल्युशन को विभिन्न प्रकार को प्रदर्शन को सुधार को कारण छ। s, जस्तै सिलिका कणहरूको कण आकार र छिद्र आकार, स्थिर चरणको नियन्त्रित संश्लेषण, र जटिल स्तम्भ प्याकिङ। उच्च पृथक दक्षताको अतिरिक्त, उच्च प्रवाह दरहरूमा कम स्तम्भ ब्याक प्रेसर यो स्थिर चरणको अर्को फाइदा हो। PMP स्तम्भहरूले राम्रो प्रजनन क्षमता प्रदर्शन गर्दछ र विभिन्न प्रोटिनहरू प्रयोग गर्न सकिन्छ। यस स्तम्भलाई प्राकृतिक उत्पादनहरू, औषधीय वनस्पतिहरूबाट बायोएक्टिभ यौगिकहरू र तरल क्रोमेटोग्राफीमा फङ्गल अर्कहरू अलग गर्न प्रयोग गर्नुहोस्। भविष्यमा, PMP स्तम्भहरू पनि प्रोटिन र मोनोक्लोनल एन्टिबडीहरूको विभाजनको लागि मूल्याङ्कन गरिनेछ।
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. रिभर्स्ड फेज क्रोमेटोग्राफी भाग I द्वारा पेप्टाइड विभाजन प्रणालीमा अनुसन्धान: स्तम्भ क्यारेक्टराइजेशन प्रोटोकलको विकास।Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019)।
Gomez, B. et al. संक्रामक रोगहरूको उपचारको लागि डिजाइन गरिएको सक्रिय पेप्टाइडहरू सुधारिएको। Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018)।
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. सिंथेटिक थेराप्युटिक पेप्टाइड्स: साइंस एण्ड द मार्केट. ड्रग डिस्कवरी.15 (1-2) टुडे, 40-56.
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.क्रोमेटोग्राफी।ए 1261, 78-90 (2012)।
Liu, W. et al.Advanced Liquid chromatography-mas spectrometry ले व्यापक रूपमा लक्षित मेटाबोलोमिक्स र proteomics.anus.Chim.Acta 1069, 89-97 (2019) को समावेश गर्न सक्षम बनाउँछ।
Chesnut, SM र Salisbury, JJ ड्रग विकासमा UHPLC को भूमिका।सेप्टेम्बर Sci.30(8), 1183-1190 (2007)।
Wu, N. & Clausen, AM द्रुत पृथकीकरणका लागि अल्ट्राहाई प्रेसर लिक्विड क्रोमेटोग्राफीका आधारभूत र व्यावहारिक पक्षहरू।सेप्टेम्बर Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007)।
Wren, SA र Tchelitcheff, P. लागूपदार्थ विकासमा अल्ट्रा-उच्च प्रदर्शन लिक्विड क्रोमेटोग्राफी।Chromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006)।
गु, एच. एट अल. मोनोलिथिक म्याक्रोपोरस हाइड्रोजेलहरू इन्टरोभाइरसहरूको कुशल शुद्धिकरणको लागि तेल-इन-पानी उच्च आन्तरिक चरण इमल्सनहरूबाट तयार गरिन्छ। केमिकल। ब्रिटेन।४०१, १२६०५१ (२०२०)।
शि, वाई., जियांग, आर., होर्भाथ, सी. र विल्किन्स, जेए प्रोटियोमिक्समा तरल क्रोमेटोग्राफीको भूमिका।क्रोमेटोग्राफी।ए 1053(1-2), 27-36 (2004)।
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. उपचारात्मक पेप्टाइड्स र प्रोटीनहरूको उल्टो चरण तरल क्रोमेटोग्राफी विभाजनमा उभरिरहेको प्रवृत्ति: सिद्धान्त र अनुप्रयोगहरू।फार्मेसी.बायोमेडिकल विज्ञान.एनस.69, 9-27 (2012)।
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC पहिलो र दोस्रो विभाजन आयामहरूमा विभिन्न pH मानहरू प्रयोग गरेर RP-RP-HPLC प्रणाली प्रयोग गरेर पेप्टाइडहरूको द्वि-आयामी विभाजन।सेप्टेम्बर Sci.28 (14), 1694-1703 (2005)।
Feletti, S. et al. C18 उप-2 μm पूर्ण र सतही रूपमा छिद्रपूर्ण कणहरूले भरिएको उच्च-दक्षता क्रोमेटोग्राफिक स्तम्भहरूको जन स्थानान्तरण विशेषताहरू र गतिज प्रदर्शनको अनुसन्धान गरियो।सेप्टेम्बर Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020)।
Piovesana, S. et al. बिरुवा बायोएक्टिभ peptides.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s0182610.1007/s018266 () को अलगाव, पहिचान र प्रमाणीकरण मा हालको प्रवृत्ति र विश्लेषणात्मक चुनौतीहरू।
Mueller, JB et al.The proteomic landscape of the kingdom of life।Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020)।
DeLuca, C. et al. तयारी तरल क्रोमेटोग्राफी द्वारा उपचारात्मक पेप्टाइड्स को डाउनस्ट्रीम प्रशोधन। अणु (बासेल, स्विट्जरल्याण्ड) 26(15), 4688(2021)।
Yang, Y. & Geng, X. मिश्रित-मोड क्रोमेटोग्राफी र बायोपोलिमर्समा यसको आवेदन।क्रोमेटोग्राफी।ए १२१८(४९), ८८१३–८८२५ (२०११)।
Zhao, G., Dong, X.-Y. & Sun, Y. Ligands for मिश्रित-मोड प्रोटीन क्रोमेटोग्राफी: सिद्धान्त, चरित्र, र डिजाइन।बायोटेक्नोलोजी।144(1), 3-11 (2009)।