Nature.com भ्रमण गर्नुभएकोमा धन्यवाद। तपाईं सीमित CSS समर्थन भएको ब्राउजर संस्करण प्रयोग गर्दै हुनुहुन्छ। उत्तम अनुभवको लागि, हामी तपाईंलाई अद्यावधिक गरिएको ब्राउजर प्रयोग गर्न सिफारिस गर्छौं (वा इन्टरनेट एक्सप्लोररमा अनुकूलता मोड असक्षम गर्नुहोस्)। यसको अतिरिक्त, निरन्तर समर्थन सुनिश्चित गर्न, हामी शैली र जाभास्क्रिप्ट बिना साइट देखाउँछौं।
एकै पटकमा तीन स्लाइडहरूको क्यारोसेल प्रदर्शन गर्दछ। एक पटकमा तीन स्लाइडहरू मार्फत सार्न अघिल्लो र अर्को बटनहरू प्रयोग गर्नुहोस्, वा एक पटकमा तीन स्लाइडहरू मार्फत सार्न अन्त्यमा स्लाइडर बटनहरू प्रयोग गर्नुहोस्।
छिद्रयुक्त सिलिका कणहरू सोल-जेल विधिद्वारा केही परिमार्जनहरूद्वारा तयार पारिएका थिए जसमा चौडा-छिद्रयुक्त कणहरू प्राप्त गरिएका थिए। यी कणहरूलाई N-phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate (PMI) र styrene सँग रिभर्स चेन ट्रान्सफर-फ्र्याग्मेन्टेसन (RAFT) पोलिमराइजेसन मार्फत N-phenylmaleimide इन्टरकलेटेड पोलिमाइडहरू उत्पादन गर्न व्युत्पन्न गरिएको थियो। Styrene (PMP) स्थिर चरण। साँघुरो बोर स्टेनलेस स्टील स्तम्भहरू (१०० × १.८ मिमी भित्री व्यास) स्लरी प्याकिङले प्याक गरिएको थियो। PMP स्तम्भको क्रोमेटोग्राफिक प्रदर्शनलाई पाँच पेप्टाइडहरू (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu एमिनो एसिड एन्केफालिन) र मानव सीरम एल्बुमिन (HAS) को ट्रिप्टिक हाइड्रोलाइजेट मिलेर बनेको सिंथेटिक पेप्टाइडहरूको मिश्रण अलग गर्न मूल्याङ्कन गरिएको थियो। इष्टतम उत्सर्जन अवस्थाहरूमा, पेप्टाइड्सको मिश्रण भएको प्लेटहरूको सैद्धान्तिक संख्या २८०,००० प्लेटहरू/वर्गमीटर पुग्यो। विकसित स्तम्भको पृथकीकरण कार्यसम्पादनलाई व्यावसायिक एसेन्टिस एक्सप्रेस आरपी-एमाइड स्तम्भसँग तुलना गर्दा, यो अवलोकन गरियो कि पृथकीकरण दक्षता र रिजोल्युसनको सन्दर्भमा पीएमपी स्तम्भको पृथकीकरण दक्षता व्यावसायिक स्तम्भभन्दा उच्च थियो।
बायोफार्मास्युटिकल उद्योग हालैका वर्षहरूमा बजार हिस्सामा उल्लेखनीय वृद्धि भएको विस्तार भइरहेको विश्वव्यापी बजार बनेको छ। बायोफार्मास्युटिकल उद्योग १,२,३ को विस्फोटक वृद्धिसँगै पेप्टाइड र प्रोटिन विश्लेषणको ठूलो आवश्यकता छ। लक्ष्य पेप्टाइडको अतिरिक्त, पेप्टाइड संश्लेषणको क्रममा विभिन्न अशुद्धताहरू बन्छन्, त्यसैले पेप्टाइडको इच्छित शुद्धता प्राप्त गर्न क्रोमेटोग्राफिक शुद्धीकरण आवश्यक छ। एउटै नमूनामा सम्भावित रूपमा पत्ता लगाउन सकिने प्रजातिहरूको ठूलो संख्याको कारणले गर्दा शरीरको तरल पदार्थ, तन्तु र कोशिकाहरूमा प्रोटिनहरूको विश्लेषण र विशेषताकरण अत्यन्तै चुनौतीपूर्ण कार्य हो। यद्यपि मास स्पेक्ट्रोमेट्री पेप्टाइडहरू र प्रोटिनहरू अनुक्रमण गर्नको लागि एक प्रभावकारी उपकरण हो, यदि त्यस्ता नमूनाहरू सिधै मास स्पेक्ट्रोमिटरमा परिचय गराइयो भने, पृथकीकरण असन्तोषजनक हुनेछ। एमएस विश्लेषण अघि तरल क्रोमेटोग्राफी (एलसी) गरेर यो समस्या समाधान गर्न सकिन्छ, जसले दिइएको समयमा मास स्पेक्ट्रोमिटरमा प्रवेश गर्ने विश्लेषकहरूको मात्रा घटाउनेछ ४,५,६। थप रूपमा, विश्लेषकहरूले तरल चरण विभाजनको समयमा साँघुरो क्षेत्रमा ध्यान केन्द्रित गर्न सक्छन्, जसले गर्दा यी विश्लेषणहरूलाई केन्द्रित गर्न र एमएस पत्ता लगाउने संवेदनशीलता बढाउन सकिन्छ। लिक्विड क्रोमेटोग्राफी (LC) ले विगत एक दशकमा उल्लेखनीय रूपमा प्रगति गरेको छ र प्रोटियोमिक विश्लेषणको लागि व्यापक रूपमा प्रयोग हुने विधि बनेको छ7,8,9,10।
अक्टाडेसिल-परिमार्जित सिलिका (ODS) लाई स्थिर चरणको रूपमा प्रयोग गरेर पेप्टाइडहरूको मिश्रणलाई शुद्ध पार्न र अलग गर्न रिभर्स-फेज लिक्विड क्रोमेटोग्राफी (RP-LC) व्यापक रूपमा प्रयोग गरिन्छ। यद्यपि, तिनीहरूको जटिल संरचना र एम्फोटेरिक प्रकृतिको कारणले गर्दा, 14,15 RP स्थिर चरणहरूले पेप्टाइडहरू र प्रोटीनहरूको सन्तोषजनक पृथकीकरण प्रदान गर्न सक्दैनन्। त्यसकारण, ध्रुवीय र गैर-ध्रुवीय टुक्राहरू भएका पेप्टाइडहरू र प्रोटीनहरूको विश्लेषणलाई यी विश्लेषकहरूलाई अन्तरक्रिया गर्न र कायम राख्न विशेष रूपमा डिजाइन गरिएको स्थिर चरणहरू आवश्यक पर्दछ। मल्टिमोडल अन्तरक्रियाहरू प्रदान गर्ने मिश्रित क्रोमेटोग्राफी, पेप्टाइडहरू, प्रोटीनहरू, र अन्य जटिल मिश्रणहरू अलग गर्न RP-LC को विकल्प हुन सक्छ। धेरै मिश्रित-प्रकारका स्थिर चरणहरू तयार पारिएका थिए र पेप्टाइडहरू र प्रोटीनहरू अलग गर्न यी स्थिर चरणहरूले भरिएका स्तम्भहरू प्रयोग गरिएका थिए17,18,19,20,21। ध्रुवीय र गैर-ध्रुवीय समूहहरूको उपस्थितिको कारण, मिश्रित मोड स्थिर चरणहरू (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, ध्रुवीय अन्तर्क्रिया/RPLC) पेप्टाइडहरू र प्रोटीनहरू 22,23,24,25,26,27,28 को पृथकीकरणको लागि उपयुक्त छन्। , सहसंयोजक रूपमा बन्धित ध्रुवीय समूहहरू भएका ध्रुवीय अन्तर्क्रियात्मक स्थिर चरणहरूले ध्रुवीय र गैर-ध्रुवीय विश्लेषकहरूको लागि राम्रो पृथकीकरण क्षमताहरू र अद्वितीय चयनशीलता देखाउँछन् किनभने पृथकीकरण विश्लेषक र स्थिर चरण बहु-मोडल अन्तर्क्रियाहरू बीचको अन्तरक्रियामा निर्भर गर्दछ 29,30,31,32। हालै, झाङ एट अल. 30 ले पोलिमाइनहरूको बेहेनाइल-टर्मिनेटेड स्थिर चरणहरू प्राप्त गरे र हाइड्रोकार्बन, एन्टीडिप्रेसन्ट, फ्लेभोनोइड्स, न्यूक्लियोसाइड्स, एस्ट्रोजेन्स, र केही अन्य विश्लेषकहरूलाई सफलतापूर्वक अलग गरे। ध्रुवीय एम्बेडेड स्थिर सामग्रीमा ध्रुवीय र गैर-ध्रुवीय दुवै समूहहरू छन्, त्यसैले यसलाई पेप्टाइडहरू र प्रोटीनहरूलाई हाइड्रोफोबिक र हाइड्रोफिलिक भागहरूमा अलग गर्न प्रयोग गर्न सकिन्छ। ध्रुवीय इनलाइन स्तम्भहरू (जस्तै, एमाइड इनलाइन भएका C18 स्तम्भहरू) एसेन्टिस एक्सप्रेस RP-एमाइड स्तम्भहरू नामक व्यापारिक नाम अन्तर्गत उपलब्ध छन्, तर यी स्तम्भहरू एमाइन ३३ को विश्लेषणको लागि मात्र प्रयोग गरिएका छन्।
हालको अध्ययनमा, पेप्टाइड पृथकीकरण र ट्रिप्टिक HSA क्लीभेजको लागि ध्रुवीय इम्बेडिङ स्थिर चरण (N-फेनाइलमेलिमाइड, इम्बेडिङ पोलिस्टाइरिन) तयार पारिएको थियो र मूल्याङ्कन गरिएको थियो। स्थिर चरण तयार गर्न निम्न रणनीति प्रयोग गरिएको थियो। तयारी योजनाहरू ३१, ३४, ३५, ३६, ३७, ३८, ३९ मा केही परिवर्तनहरू सहित, हाम्रा अघिल्ला प्रकाशनहरूमा वर्णन गरिएका प्रक्रियाहरू अनुसार छिद्रयुक्त सिलिका कणहरू तयार पारिएको थियो। ठूला छिद्र आकारहरू भएका सिलिका कणहरू प्राप्त गर्न युरिया, पोलिथिलीन ग्लाइकोल (PEG), TMOS र जलीय-एसिटिक एसिडको अनुपात समायोजन गरिएको थियो। दोस्रो, नयाँ फिनाइलमेलिमाइड-मिथाइलभिनाइल आइसोसाइनेट लिगान्ड संश्लेषित गरिएको थियो र यसको व्युत्पन्न सिलिका कणहरू ध्रुवीय इम्बेडेड स्थिर चरणहरू तयार गर्न प्रयोग गरिएको थियो। प्राप्त स्थिर चरणलाई अनुकूलित प्याकिङ योजना अनुसार स्टेनलेस स्टील स्तम्भ (भित्री व्यास १०० × १.८ मिमी) मा प्याक गरिएको थियो। स्तम्भ भित्र एक समान तह सुनिश्चित गर्न स्तम्भको प्याकिङ मेकानिकल कम्पनद्वारा सहयोग गरिएको छ। प्याक गरिएको स्तम्भलाई पाँच पेप्टाइडहरू (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin पेप्टाइड) र मानव सीरम एल्बुमिन (HSA) को ट्रिप्टिक हाइड्रोलाइसेट्स मिलेर बनेको पेप्टाइडहरूको मिश्रणको विभाजनको लागि मूल्याङ्कन गरिएको थियो। पेप्टाइड मिश्रण र HSA ट्रिप्टिक डाइजेस्ट राम्रो रिजोल्युसन र दक्षताका साथ अलग भएको अवलोकन गरिएको थियो। PMP स्तम्भको पृथकीकरण दक्षतालाई Ascentis Express RP-Amide स्तम्भसँग तुलना गरिएको थियो। यो अवलोकन गरिएको थियो कि PMP स्तम्भमा पेप्टाइडहरू र प्रोटीनहरूको राम्रो रिजोल्युसन र उच्च पृथकीकरण दक्षता छ, र PMP स्तम्भको पृथकीकरण दक्षता Ascentis Express RP-Amide स्तम्भको भन्दा उच्च छ।
PEG (पोलिइथिलिन ग्लाइकोल), युरिया, एसिटिक एसिड, ट्राइमेथोक्सियोर्थोसिलिकेट (TMOS), ट्राइमेथाइलक्लोरोसिलेन (TMCS), ट्रिप्सिन, मानव सीरम एल्बुमिन (HSA), अमोनियम क्लोराइड, युरिया, हेक्सामेथाइलमेथाएक्रिलोयल्डिसिलाजेन (HMDS), मेथाएक्रिलोयल क्लोराइड (MC), स्टाइरीन, ४-हाइड्रोक्सी-टेम्पो, बेन्जोयल पेरोक्साइड (BPO), HPLC को लागि एसिटोनिट्राइल (ACN), मेथानोल, २-प्रोपानोल र एसीटोन। सिग्मा-एल्ड्रिच कम्पनी (सेन्ट लुइस, मिसौरी, संयुक्त राज्य अमेरिका)।
युरिया (८ ग्राम), पोलिथिलीन ग्लाइकोल (८ ग्राम) र ०.०१ एन. एसिटिक एसिडको ८ मिलिलिटरको मिश्रण १० मिनेटसम्म चलाइयो र त्यसमा २४ मिलिलिटर TMOS आइस-कूलिंग अन्तर्गत थपियो। प्रतिक्रिया मिश्रणलाई ४० डिग्री सेल्सियसमा ६ घण्टा र त्यसपछि १२० डिग्री सेल्सियसमा ८ घण्टा स्टेनलेस स्टील अटोक्लेभमा तताइएको थियो। पानीलाई डिक्यान्ट गरिएको थियो र अवशेषलाई ७० डिग्री सेल्सियसमा १२ घण्टासम्म सुकाइएको थियो। सुकेका नरम ब्लकहरूलाई सहज रूपमा पिसेर ५५० डिग्री सेल्सियसमा १२ घण्टासम्म ओभनमा क्याल्साइन गरिएको थियो। कण आकार, छिद्र आकार र सतह क्षेत्रफलको पुनरुत्पादन क्षमता परीक्षण गर्न तीनवटा ब्याचहरू तयार पारिएका थिए र विशेषताहरू बनाइएका थिए।
पोलिस्टाइरिन चेनका लागि ध्रुवीय समूह र स्थिर चरण। तयारी प्रक्रिया तल वर्णन गरिएको छ।
एन-फेनाइलमेलिमाइड (२०० मिलीग्राम) र मिथाइल भिनाइल आइसोसाइनेट (१०० मिलीग्राम) लाई निर्जल टोल्युइनमा घोलियो, र त्यसपछि फेनाइलमेलिमाइड र मिथाइल भिनाइल आइसोसाइनेट (PMPC) को कोपोलिमर प्राप्त गर्न प्रतिक्रिया फ्लास्कमा ०.१ मिलीलीटर २,२′-एजोइसोब्युटाइरोनिट्राइल (AIBN) थपियो। ) मिश्रणलाई ६० डिग्री सेल्सियसमा ३ घण्टाको लागि तताइएको थियो, फिल्टर गरिएको थियो र ४० डिग्री सेल्सियसमा ३ घण्टाको लागि ओभनमा सुकाइएको थियो।
सुकेका सिलिका कणहरू (२ ग्राम) लाई सुख्खा टोल्युइन (१०० मिलिलिटर) मा छरियो, ५०० मिलिलिटर गोलो तल्लो फ्लास्कमा १० मिनेटको लागि हलचल गरियो र सोनिकेट गरियो। PMCP (१० मिलिग्राम) लाई टोल्युइनमा घुलाइयो र थप फनेल मार्फत प्रतिक्रिया फ्लास्कमा ड्रपवाइज थपियो। मिश्रणलाई १००°C मा ८ घण्टाको लागि रिफ्लक्स गरियो, फिल्टर गरियो, एसीटोनले धोइयो र ६०°C मा ३ घण्टाको लागि सुकाइयो। त्यसपछि, PMCP (१०० ग्राम) सँग सम्बन्धित सिलिका कणहरूलाई टोल्युइन (२०० मिलिलिटर) मा घुलाइयो, र उत्प्रेरकको रूपमा १०० μl डिब्युटिलटिन डाइलाउरेटको उपस्थितिमा ४-हाइड्रोक्सी-टेम्पो (२ मिलिलिटर) थपियो। मिश्रणलाई ५०°C मा ८ घण्टाको लागि हलचल गरियो, फिल्टर गरियो र ५०°C मा ३ घण्टाको लागि सुकाइयो।
TEMPO-PMPC (१.५ ग्राम) मा जोडिएका स्टाइरिन (१ मिलि), बेन्जोयल पेरोक्साइड BPO (०.५ मिलि) र सिलिका कणहरूलाई टोल्युइनमा छरियो र नाइट्रोजनले शुद्ध पारियो। स्टाइरिनलाई १०० डिग्री सेल्सियसमा १२ घण्टाको लागि पोलिमराइजेसन गरियो। परिणामस्वरूप उत्पादनलाई मेथानोलले धोइयो र ६० डिग्री सेल्सियसमा रातभर सुकाइयो। प्रतिक्रियाको सामान्य योजना चित्र १ मा देखाइएको छ।
१०-३ टोर भन्दा कमको अवशिष्ट दबाब प्राप्त नभएसम्म नमूनाहरूलाई १ घण्टाको लागि ३९३ K मा डिग्यास गरिएको थियो। कुल छिद्रको मात्रा निर्धारण गर्न सापेक्षिक दबाब P/P0 = ०.९९ मा सोसिएको N2 को मात्रा प्रयोग गरिएको थियो। शुद्ध र लिगान्ड-बाउन्ड सिलिका कणहरूको आकारविज्ञान स्क्यानिङ इलेक्ट्रोन माइक्रोस्कोप (हिताची हाई टेक्नोलोजीज, टोकियो, जापान) प्रयोग गरेर जाँच गरिएको थियो। कार्बन टेप प्रयोग गरेर सुख्खा नमूनाहरू (शुद्ध सिलिका र लिगान्ड बाउन्ड सिलिका कणहरू) एल्युमिनियम रडहरूमा राखिएको थियो। Q150T स्पटरिङ उपकरण प्रयोग गरेर नमूनामा सुन जम्मा गरिएको थियो, र नमूनामा ५ nm बाक्लो Au तह जम्मा गरिएको थियो। यसले कम भोल्टेज प्रक्रियाको दक्षता सुधार गर्दछ र राम्रो चिसो स्प्रेइङ प्रदान गर्दछ। थर्मो इलेक्ट्रोन (वाल्थम, एमए, संयुक्त राज्य अमेरिका) फ्ल्यास EA1112 एलिमेन्टल कम्पोजिसन विश्लेषक प्रयोग गरेर एलिमेन्टल विश्लेषण गरिएको थियो। कण आकार वितरण प्राप्त गर्न माल्भर्न कण आकार विश्लेषक (वर्सेस्टरशायर, युके) मास्टरसाइजर २००० प्रयोग गरिएको थियो। कोटिंग नगरिएका सिलिका कणहरू र लिगान्ड-बाउन्ड सिलिका कणहरू (प्रत्येक ५ मिलीग्राम) लाई ५ मिली आइसोप्रोपानोलमा छरिएको थियो, १० मिनेटको लागि सोनिकेट गरिएको थियो, ५ मिनेटको लागि हलचल गरिएको थियो, र मास्टरसाइजर अप्टिकल बेन्चमा राखिएको थियो। थर्मोग्राभिमेट्रिक विश्लेषण ३० देखि ८०० डिग्री सेल्सियसको तापमान दायरामा प्रति मिनेट ५ डिग्री सेल्सियसको दरमा गरिन्छ।
सन्दर्भ ३१ मा जस्तै प्रक्रिया अपनाएर ग्लास फाइबर लाइन गरिएको साँघुरो बोर स्टेनलेस स्टील स्तम्भहरू (ID १०० × १.८ मिमी) स्लरी फिलिंग विधिद्वारा प्याक गरिएको थियो। स्टेनलेस स्टील स्तम्भ (ग्लास लाइन गरिएको, ID १०० × १ .८ मिमी) र १ µm फ्रिट भएको आउटलेट स्लरी प्याकेजिङ मेसिन (Alltech Deerfield, IL, USA) मा जडान गरिएको थियो। १.२ मिलीलीटर मिथेनोलमा १५० मिलीग्राम स्थिर चरणलाई निलम्बन गरेर र यसलाई जलाशय स्तम्भमा खुवाएर स्थिर चरणको निलम्बन तयार गर्नुहोस्। मिथेनोललाई स्लरी विलायक र नियन्त्रण विलायकको रूपमा प्रयोग गरिएको थियो। १० मिनेटको लागि १०० MP, १५ मिनेटको लागि ८० MP, र ३० मिनेटको लागि ६० MP को दबाब अनुक्रम लागू गरेर स्तम्भ प्याक गर्नुहोस्। प्याकिङ प्रक्रियाले एकरूप स्तम्भ प्याकिङ सुनिश्चित गर्न मेकानिकल कम्पनको लागि दुई ग्यास क्रोमेटोग्राफी स्तम्भ भाइब्रेटरहरू (Alltech, Deerfield, IL, USA) प्रयोग गर्‍यो। स्लरी प्याकर बन्द गर्नुहोस् र स्ट्रिङलाई क्षति हुनबाट रोक्न बिस्तारै दबाब छोड्नुहोस्। स्तम्भलाई स्लरी नोजलबाट विच्छेद गरिएको थियो र अर्को फिटिंग इनलेटमा जोडिएको थियो र यसको सञ्चालन परीक्षण गर्न LC प्रणालीमा जडान गरिएको थियो।
LC पम्प (१०AD Shimadzu, जापान), ५० nL इन्जेक्सन लूप (Valco (USA) C14 W.05), झिल्ली डिगासर (Shimadzu DGU-14A), र UV-VIS केशिका विन्डो प्रयोग गरेर एउटा अनुकूलित MLC निर्माण गरिएको थियो। डिटेक्टर उपकरण (UV-2075) र इनामेल गरिएको माइक्रोकोलम। अतिरिक्त स्तम्भ विस्तारको प्रभावलाई कम गर्न धेरै साँघुरो र छोटो जडान गर्ने ट्यूबहरू प्रयोग गर्नुहोस्। स्तम्भ भरेपछि, १/१६″ रिड्युसिङ जंक्शनको आउटलेटमा केशिका (५० µm id ३६५) स्थापना गर्नुहोस् र रिड्युसिङ जंक्शनको केशिका (५० µm) स्थापना गर्नुहोस्। डेटा सङ्कलन र क्रोमेटोग्राम प्रशोधन Multichro २००० सफ्टवेयर प्रयोग गरेर गरिन्छ। २५४ nm मा, विषय विश्लेषणकर्ताहरूको UV अवशोषण ० मा निगरानी गरिएको थियो। OriginPro8 (Northampton, MA) प्रयोग गरेर क्रोमेटोग्राफिक डेटा विश्लेषण गरिएको थियो।
मानव सीरम एल्बुमिन, लियोफिलाइज्ड पाउडर, ≥ ९६% (एगारोज जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस) ३ मिलीग्राम ट्रिप्सिन (१.५ मिलीग्राम), ४.० मिलीग्राम युरिया (१ मिलीग्राम) र ०.२ मिलीग्राम अमोनियम बाइकार्बोनेट (१ मिलीग्राम) सँग मिसाइएको। घोललाई १० मिनेटको लागि चलाइएको थियो र ३७°C मा ६ घण्टाको लागि पानीको नुहाउने ठाउँमा राखिएको थियो, त्यसपछि १ मिलीग्राम ०.१% TFA ले शान्त पारिएको थियो। घोललाई फिल्टर गर्नुहोस् र ४°C भन्दा कम तापक्रममा भण्डार गर्नुहोस्।
PMP स्तम्भमा पेप्टाइड्स र ट्रिप्टिक डाइजेस्ट HSA को मिश्रणको पृथक्करण छुट्टै मूल्याङ्कन गरिएको थियो। PMP स्तम्भद्वारा छुट्याइएको पेप्टाइड्स र HSA को मिश्रणको ट्रिप्टिक हाइड्रोलिसिस जाँच गर्नुहोस् र परिणामहरूलाई एसेन्टिस एक्सप्रेस RP-Amide स्तम्भसँग तुलना गर्नुहोस्। सैद्धान्तिक प्लेटहरूको संख्या निम्न समीकरण प्रयोग गरेर गणना गरिन्छ:
शुद्ध सिलिका कणहरू र लिगान्ड बाउन्ड सिलिका कणहरूको SEM छविहरू चित्र २ मा देखाइएका छन्। शुद्ध सिलिका कणहरू (A, B) का SEM छविहरूले गोलाकार आकार देखाउँछन् जसमा कणहरू लामो हुन्छन् वा हाम्रा अघिल्ला अध्ययनहरूको तुलनामा अनियमित सममिति हुन्छन्। लिगान्ड (C, D) द्वारा बाँधिएका सिलिका कणहरूको सतह शुद्ध सिलिका कणहरूको भन्दा चिल्लो हुन्छ, जुन सिलिका कणहरूको सतहलाई ढाक्ने पोलिस्टीरिन चेनहरूको कारणले हुन सक्छ।
शुद्ध सिलिका कणहरू (A, B) र लिगान्ड बाउन्ड सिलिका कणहरू (C, D) को इलेक्ट्रोन माइक्रोग्राफहरू स्क्यान गर्दै।
शुद्ध सिलिका कणहरू र लिगान्ड-बाउन्ड सिलिका कणहरूको कण आकार वितरण चित्र २.३(A) मा देखाइएको छ। भोल्युमेट्रिक कण आकार वितरण वक्रहरूले रासायनिक परिमार्जन पछि सिलिका कण आकार बढेको देखाएको छ (चित्र ३A)। हालको अध्ययन र अघिल्लो अध्ययनबाट सिलिका कण आकार वितरण डेटा तालिका १(A) मा तुलना गरिएको छ। PMP को भोल्युमेट्रिक कण आकार d(0.5) 3.36 µm थियो, हाम्रो अघिल्लो अध्ययन (पोलिस्टीरिन बाउन्डेड सिलिका कणहरू) मा 3.05 µm को ad(0.5) मानको तुलनामा। प्रतिक्रिया मिश्रणमा PEG, युरिया, TMOS र एसिटिक एसिडको अनुपातमा परिवर्तनको कारण, यस ब्याचको कण आकार वितरण हाम्रो अघिल्लो अध्ययनको तुलनामा साँघुरो थियो। PMP चरणको कण आकार हामीले पहिले अध्ययन गरेको पोलिस्टीरिन बाउन्ड सिलिका कण चरणको भन्दा थोरै ठूलो छ। यसको अर्थ स्टाइरिनको साथ सिलिका कणहरूको सतह कार्यात्मककरणले सिलिका सतहमा पोलिस्टाइरिन तह (०.९७ µm) मात्र जम्मा गर्‍यो, जबकि PMP चरणमा तहको मोटाई १.३८ µm थियो।
शुद्ध सिलिका कणहरू र लिगान्ड बाउन्ड सिलिका कणहरूको कण आकार वितरण (A) र छिद्र आकार वितरण (B)।
यस अध्ययनमा प्रयोग गरिएका सिलिका कणहरूको छिद्र आकार, छिद्रको मात्रा र सतह क्षेत्र तालिका १ (B) मा देखाइएको छ। शुद्ध सिलिका कणहरू र लिगान्ड-बाउन्ड सिलिका कणहरूको PSD प्रोफाइलहरू चित्र ३ (B) मा देखाइएको छ। परिणामहरू हाम्रो अघिल्लो अध्ययन ३४ सँग तुलनात्मक थिए। शुद्ध र लिगान्ड-बाउन्ड सिलिका कणहरूको छिद्र आकार क्रमशः ३१० Å र २४१ Å थियो, जसले रासायनिक परिमार्जन पछि, तालिका १ (B) मा देखाइए अनुसार, छिद्र आकार ६९ Å ले घटेको र चित्रमा शिफ्ट कर्भ देखाइएको संकेत गर्दछ। हालको अध्ययनमा सिलिका कणहरूको विशिष्ट सतह क्षेत्र ११६ m2/g छ, जुन हाम्रो अघिल्लो अध्ययन (१२४ m2/g) सँग तुलना गर्न सकिन्छ। तालिका १ (B) मा देखाइए अनुसार, रासायनिक परिमार्जन पछि सिलिका कणहरूको सतह क्षेत्र (m2/g) पनि ११६ m2/g बाट घटेर १०५ m2/g भएको छ।
स्थिर चरणको मौलिक विश्लेषणको नतिजा तालिका २ मा प्रस्तुत गरिएको छ। हालको स्थिर चरणको कार्बन सामग्री ६.३५% छ, जुन हाम्रो अघिल्लो अध्ययन (पोलिस्टाइरिनसँग सम्बन्धित सिलिका कणहरू, क्रमशः ७.९३%३५ र १०.२१%) भन्दा कम छ। ४२. तलको हालको स्थिर चरणको कार्बन सामग्री, किनकि SP को तयारीमा स्टाइरिनको अतिरिक्त केही ध्रुवीय लिगान्डहरू जस्तै फिनाइलमलेइमाइड मिथाइल भिनाइल आइसोसाइनेट (PCMP) र ४-हाइड्रोक्सी-टेम्पो प्रयोग गरिएको छ। हालको स्थिर चरणमा नाइट्रोजनको तौल प्रतिशत २.२१% छ जुन अघिल्लो अध्ययनहरूमा ०.१७३५ र ०.८५% थियो। यसको मतलब हालको स्थिर चरणमा फिनाइलमलेइमाइडको कारणले नाइट्रोजनको उच्च तौल प्रतिशत छ। त्यस्तै गरी, उत्पादनहरू (४) र (५) मा क्रमशः २.७% र २.९% कार्बन सामग्री छ, जबकि अन्तिम उत्पादन (६) मा कार्बन सामग्री ६.३५% छ, जुन तालिका २ मा देखाइएको छ। तौल घटाउने परीक्षण गर्न PMP को स्थिर चरणमा थर्मोग्राभिमेट्रिक विश्लेषण (TGA) प्रयोग गरिएको थियो, र TGA वक्र चित्र ४ मा देखाइएको छ। TGA वक्रले ८.६% को तौल घटाउने देखाउँछ, जुन कार्बन सामग्री (६.३५%) सँग राम्रोसँग सहमत छ, किनकि लिगान्डहरूमा C मात्र नभई N, O र H पनि हुन्छन्।
सिलिका कणहरूको सतह परिमार्जन गर्न लिगान्ड फेनाइलमेलिमाइड-मिथाइलभिनाइल आइसोसाइनेटलाई यसको ध्रुवीय फेनाइलमेलिमाइड र भिनिलिसोसाइनेट समूहहरूको कारणले छनौट गरिएको थियो। भिनाइल आइसोसाइनेट समूहहरूले जीवित रेडिकल पोलिमराइजेसनद्वारा स्टाइरिनको साथ थप प्रतिक्रिया दिन सक्छन्। दोस्रो कारण भनेको विश्लेषकसँग मध्यम अन्तरक्रिया भएको र विश्लेषक र स्थिर चरण बीच कुनै बलियो इलेक्ट्रोस्टेटिक अन्तरक्रिया नभएको समूह घुसाउनु हो, किनकि फिनाइलमेलिमाइड मोइटीमा सामान्य pH मा कुनै भर्चुअल चार्ज हुँदैन। स्थिर चरणको ध्रुवीकरणलाई स्टाइरिनको इष्टतम मात्रा र फ्री रेडिकल पोलिमराइजेसनको प्रतिक्रिया समयद्वारा नियन्त्रण गर्न सकिन्छ। प्रतिक्रियाको अन्तिम चरण (फ्री रेडिकल पोलिमराइजेसन) महत्त्वपूर्ण छ किनकि यसले स्थिर चरणको ध्रुवीकरणलाई परिवर्तन गर्दछ। यी स्थिर चरणहरूमा कार्बन सामग्री जाँच गर्न तत्व विश्लेषण गरिएको थियो। यो अवलोकन गरिएको छ कि स्टाइरिनको मात्रा र प्रतिक्रिया समय बढाउँदा स्थिर चरणको कार्बन सामग्री बढ्छ र यसको विपरीत। स्टाइरिनको विभिन्न सांद्रताका साथ तयार पारिएका SP हरूमा फरक कार्बन भार हुन्छ। त्यसैगरी, यी स्थिर चरणहरू स्टेनलेस स्टील स्तम्भहरूमा राखिएका थिए र तिनीहरूको क्रोमेटोग्राफिक विशेषताहरू (चयनात्मकता, रिजोल्युसन, N मान, आदि) जाँच गरिएको थियो। यी प्रयोगहरूको आधारमा, नियन्त्रित ध्रुवता र विश्लेषकको राम्रो अवधारण प्रदान गर्न PMP स्थिर चरणको तयारीको लागि एक अनुकूलित संरचना छनोट गरिएको थियो।
मोबाइल चरणको क्षमता प्रयोग गरेर पेप्टाइड्सका पाँच मिश्रणहरू (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin) को विश्लेषणको लागि PMP स्तम्भको पनि मूल्याङ्कन गरिएको थियो। ८० µl/मिनेटको प्रवाह दरमा ६०/४० (v/v) ACN/पानी (०.१% TFA)। इष्टतम उत्सर्जन अवस्थाहरू (२००,००० प्लेटहरू/m), प्रति स्तम्भ (१०० × १.८ मिमी) सैद्धान्तिक प्लेटहरू (N) को संख्या २०,००० ± १०० छ। तीन PMP स्तम्भहरूको लागि N मानहरू तालिका ३ मा देखाइएको छ र क्रोमेटोग्रामहरू चित्र ५A मा देखाइएको छ। PMP स्तम्भमा उच्च प्रवाह दर (७०० µl/मिनेट) मा द्रुत विश्लेषण, एक मिनेट भित्र पाँच पेप्टाइडहरू निस्किए, प्रति स्तम्भ १३,५०० ± ३३० को उत्कृष्ट N मान (१०० x १.८ मिमी व्यास), १३५,००० प्लेटहरू/m बराबर (चित्र ५B)। पुनरुत्पादन क्षमता परीक्षण गर्न समान आकारका तीन स्तम्भहरू (भित्री व्यास १०० x १.८ मिमी) PMP स्थिर चरणका तीन फरक ब्याचहरूले भरिएका थिए। इष्टतम उत्सर्जन अवस्थाहरू, सैद्धान्तिक प्लेटहरूको संख्या N, र अवधारण समय प्रयोग गरेर प्रत्येक स्तम्भमा समान परीक्षण मिश्रण अलग गरेर प्रत्येक स्तम्भको लागि विश्लेषणहरू रेकर्ड गरिएको थियो। PMP स्तम्भहरूको लागि पुनरुत्पादन क्षमता डेटा तालिका ४ मा देखाइएको छ। तालिका ३ मा देखाइए अनुसार PMP स्तम्भको पुनरुत्पादन क्षमता धेरै कम %RSD मानहरूसँग राम्रोसँग सम्बन्धित छ।
PMP स्तम्भ (B) र Ascentis Express RP-Amide स्तम्भ (A), मोबाइल चरण 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP स्तम्भ आयाम (100 x 1.8 mm id), विश्लेषण यौगिकहरूको एल्युसन क्रम: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) र 5 (leucic acid enkephalin) मा पेप्टाइड मिश्रणहरूको पृथकीकरण।
HPLC द्वारा मानव सीरम एल्बुमिनको ट्रिप्टिक हाइड्रोलाइजेटको पृथकीकरणको लागि PMP स्तम्भ (भित्री व्यास १०० x १.८ मिमी) को मूल्याङ्कन गरिएको थियो। चित्र ६ मा रहेको क्रोमेटोग्रामले देखाउँछ कि नमूनाहरू धेरै राम्रो रिजोल्युसनको साथ राम्रोसँग छुट्याइएको छ। HSA समाधानहरू १०० μl/मिनेटको प्रवाह दर, ७०/३० एसिटोनिट्राइल/पानीको मोबाइल चरण र ०.१% TFA प्रयोग गरेर विश्लेषण गरिएको थियो। HSA को क्लीभेजलाई १७ शिखरहरूमा विभाजन गरिएको थियो, जस्तै क्रोमेटोग्राम (चित्र ६) मा देखाइएको थियो, जुन १७ पेप्टाइडहरूसँग मेल खान्छ। HSA हाइड्रोलाइजेटबाट व्यक्तिगत शिखरहरूको पृथकीकरण दक्षता गणना गरिएको थियो र मानहरू तालिका ५ मा देखाइएको छ।
HSA ट्रिप्टिक हाइड्रोलाइसेट्सलाई PMP स्तम्भ (भित्री व्यास १०० x १.८ मिमी), प्रवाह दर (१०० μl/मिनेट), मोबाइल चरण ६०/४० एसिटोनिट्राइल/पानी, र ०.१% TFA मा छुट्याइएको थियो।
जहाँ L स्तम्भको लम्बाइ हो, η मोबाइल चरणको चिपचिपापन हो, ΔP स्तम्भको पछाडिको चाप हो, र u मोबाइल चरणको रेखीय वेग हो। PMP स्तम्भको पारगम्यता २.५ × १०–१४ m२ थियो, प्रवाह दर २५ µl/मिनेट थियो, ६०/४० v/v प्रयोग गरिएको थियो। ACN/पानी। PMP स्तम्भको पारगम्यता (ID १०० × १.८ मिमी) हाम्रो अघिल्लो Ref.34 अध्ययन जस्तै थियो। सतही रूपमा छिद्रपूर्ण कणहरूले भरिएको स्तम्भको पारगम्यता १.७×१० .६ µm, ५ µm कणहरूको लागि २.५×१०-१४ m२ छ। ४३। त्यसैले, PMP चरणको पारगम्यता ५ μm आकारको कोर-शेल कणहरूको पारगम्यता जस्तै छ।
जहाँ Wx क्लोरोफर्मले भरिएको स्तम्भको द्रव्यमान हो, Wy मिथेनोलले भरिएको स्तम्भको द्रव्यमान हो, र ρ विलायकको घनत्व हो। मिथेनोलको घनत्व (ρ = 0.7866) र क्लोरोफर्म (ρ = 1.484)। सिलिका-C18 कण स्तम्भ (100 × 1.8 मिमी ID)34 र हाम्रो पहिले अध्ययन गरिएको C18-urea31 स्तम्भको कुल छिद्रता क्रमशः 0.63 र 0.55 थियो। यसको अर्थ युरिया लिगान्डहरूको उपस्थितिले स्थिर चरणको पारगम्यता कम गर्छ। अर्कोतर्फ, PMP स्तम्भको कुल छिद्रता (भित्री व्यास 100 × 1.8 मिमी) 0.60 छ। PMP स्तम्भहरू C18 बाउन्ड सिलिका कणहरूले भरिएका स्तम्भहरू भन्दा कम पारगम्य हुन्छन् किनभने C18 प्रकारका स्थिर चरणहरूमा C18 लिगान्डहरू सिलिका कणहरूसँग रेखीय चेनमा जोडिएका हुन्छन्, जबकि पोलिस्टाइरिन प्रकारका स्थिर चरणहरूमा कणहरूको वरिपरि अपेक्षाकृत बाक्लो पोलिमर बनाइन्छ। तह A. एक सामान्य प्रयोगमा, स्तम्भको पोरोसिटी निम्नानुसार गणना गरिन्छ:
चित्र ७A, B मा PMP स्तम्भ (id १०० x १.८ मिमी) र Ascentis Express RP-Amide स्तम्भ (id १०० x १.८ मिमी) को लागि भ्यान डिमिटर प्लटहरू देखाउनुहोस्, समान उत्सर्जन अवस्थाहरूमा, ६०/४० ACN/H2O र ०.१% TFA २० µl/मिनेट देखि ८०० µl/मिनेट दुवै स्तम्भहरूमा। इष्टतम प्रवाह दर (८० µl/मिनेट) मा न्यूनतम HETP मानहरू PMP स्तम्भ र Ascentis Express RP-Amide स्तम्भको लागि क्रमशः २.६ µm र ३.९ µm थिए। HETP मानहरूले PMP स्तम्भ (१०० x १.८ मिमी आईडी) को पृथकीकरण दक्षता व्यावसायिक रूपमा उपलब्ध Ascentis Express RP-Amide स्तम्भ (१०० x १.८ मिमी आईडी) भन्दा धेरै उच्च छ भनेर देखाउँछन्। चित्र ७(A) मा रहेको भ्यान डिमिटर ग्राफले देखाउँछ कि हाम्रो अघिल्लो अध्ययनको तुलनामा बढ्दो प्रवाहको साथ N मानमा कमी उल्लेखनीय रूपमा बढी छैन। एसेन्टिस एक्सप्रेस RP-Amide स्तम्भको तुलनामा PMP स्तम्भ (id १०० × १.८ मिमी) को उच्च पृथकीकरण दक्षता सुधारिएको कण आकार र आकार र हालको कार्यमा प्रयोग गरिएको परिष्कृत स्तम्भ प्याकिङ प्रक्रियामा आधारित छ।
(A) ०.१% TFA सहित ६०/४० ACN/H2O मा PMP स्तम्भ (id १०० x १.८ मिमी) मा प्राप्त भ्यान डिमिटर प्लट (HETP बनाम मोबाइल फेज रेखीय वेग)। (B) ०.१% TFA सहित ६०/४० ACN/H2O मा एसेन्टिस एक्सप्रेस RP-एमाइड स्तम्भ (id १०० x १.८ मिमी) मा प्राप्त भ्यान डिमिटर प्लट (HETP बनाम मोबाइल फेज रेखीय वेग)।
उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमेटोग्राफीमा मानव सीरम एल्बुमिन (HSA) को सिंथेटिक पेप्टाइड्स र ट्रिप्टिक हाइड्रोलाइजेटको मिश्रणको पृथकीकरणको लागि इन्टरकलेटेड पोलिस्टाइरिनको ध्रुवीय स्थिर चरण तयार पारिएको थियो र मूल्याङ्कन गरिएको थियो। पेप्टाइड मिश्रणहरूको लागि PMP स्तम्भहरूको क्रोमेटोग्राफिक प्रदर्शन पृथकीकरण दक्षता र रिजोल्युसनको सन्दर्भमा उत्कृष्ट छ। PMP स्तम्भहरूको सुधारिएको पृथकीकरण दक्षता सिलिका कण आकार र छिद्र आकार, स्थिर चरणहरूको नियन्त्रित संश्लेषण, र जटिल स्तम्भ प्याकिङ सामग्री जस्ता धेरै कारणहरूले गर्दा हो। उच्च पृथकीकरण दक्षताको अतिरिक्त, यस स्थिर चरणको अर्को फाइदा उच्च प्रवाह दरहरूमा कम स्तम्भ ब्याक प्रेसर हो। PMP स्तम्भहरू अत्यधिक पुनरुत्पादन योग्य छन् र पेप्टाइडहरूको मिश्रण र विभिन्न प्रोटीनहरूको ट्रिप्टिक पाचन विश्लेषण गर्न प्रयोग गर्न सकिन्छ। हामी तरल क्रोमेटोग्राफीमा प्राकृतिक उत्पादनहरू, औषधीय बोटबिरुवाहरूको अर्क र च्याउबाट जैविक सक्रिय यौगिकहरू अलग गर्न यो स्तम्भ प्रयोग गर्ने इरादा राख्छौं। भविष्यमा, प्रोटीन र मोनोक्लोनल एन्टिबडीहरूको पृथकीकरणको लागि PMP स्तम्भहरूको पनि मूल्याङ्कन गरिनेछ।
फिल्ड, जेके, युर्बी, एमआर, लाउ, जे., थोगरसन, एच. र पिटरसन, पी. उल्टो चरण क्रोमेटोग्राफी पेप्टाइड पृथकीकरण प्रणाली भाग I मा अनुसन्धान: स्तम्भ विशेषताको लागि प्रोटोकलको विकास। फिल्ड, जेके, युर्बी, एमआर, लाउ, जे., थोगरसन, एच. र पिटरसन, पी. उल्टो चरण क्रोमेटोग्राफी पेप्टाइड पृथकीकरण प्रणाली भाग I मा अनुसन्धान: स्तम्भ विशेषताको लागि प्रोटोकलको विकास।फिल्ड, जेके, ओवरबी, एमआर, लाउ, जे., टोगरसन, एच., र पिटरसन, पी. रिभर्स-फेज क्रोमेटोग्राफी द्वारा पेप्टाइड पृथकीकरण प्रणालीहरूको अनुसन्धान, भाग I: स्तम्भ क्यारेक्टराइजेसनको लागि प्रोटोकल विकास गर्दै। फिल्ड, जेके, युर्बी, एमआर, लाउ, जे., थोगरसन, एच. र पिटरसन, पी. उल्टो चरण क्रोमेटोग्राफी पेप्टाइड पृथकीकरण प्रणाली भाग I मा अनुसन्धान: स्तम्भ विशेषताहरूको लागि प्रोटोकलको विकास। फिल्ड, जेके, युर्बी, एमआर, लाउ, जे., थोगरसन, एच. र पिटरसन, पी. उल्टो चरण क्रोमेटोग्राफी पेप्टाइड पृथकीकरण प्रणाली भाग I मा अनुसन्धान: स्तम्भ विशेषताहरूको लागि प्रोटोकलको विकास।फिल्ड, जेके, ओवरबी, एमआर, लाउ, जे., टोगरसन, एच., र पिटरसन, पी. रिभर्स-फेज क्रोमेटोग्राफी द्वारा पेप्टाइड पृथकीकरण प्रणालीहरूको अनुसन्धान, भाग I: स्तम्भ क्यारेक्टराइजेसनको लागि प्रोटोकल विकास गर्दै।J.色谱法. 1603,113-129. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019)।
गोमेज, बी. एट अल। संक्रामक रोगहरूको उपचारको लागि सुधारिएको सक्रिय पेप्टाइडहरू सिर्जना गर्ने विधिहरू। जैव प्रविधि। उपलब्धिहरू 36(2), 415–429। https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018)।
भ्लिघे, पी., लिसोव्स्की, भी., मार्टिनेज, जे. र ख्रेस्टचाटिस्की, एम. सिंथेटिक थेराप्युटिक पेप्टाइड्स: विज्ञान र बजार। भ्लिघे, पी., लिसोव्स्की, भी., मार्टिनेज, जे. र ख्रेस्टचाटिस्की, एम. सिंथेटिक थेराप्युटिक पेप्टाइड्स: विज्ञान र बजार।भ्लिगे पी, लिसोव्स्की वी, मार्टिनेज जे र क्रेस्चाटिस्की एम। सिंथेटिक थेराप्युटिक पेप्टाइड्स: विज्ञान र बजार।भ्लिगे पी, लिसोव्स्की वी, मार्टिनेज जे र ख्रेस्चात्स्की एम। सिंथेटिक थेराप्युटिक पेप्टाइड्स: विज्ञान र बजार। औषधि खोज। टुडे १५ (१–२), ४०–५६। https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (२०१०)।
झी, एफ., स्मिथ, आरडी र शेन, वाई. उन्नत प्रोटियोमिक लिक्विड क्रोमेटोग्राफी। झी, एफ., स्मिथ, आरडी र शेन, वाई. उन्नत प्रोटियोमिक लिक्विड क्रोमेटोग्राफी।हेर्नुहोस् एफ., स्मिथ आरडी र शेन यु। उन्नत प्रोटियोमिक लिक्विड क्रोमेटोग्राफी। Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱। Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. उन्नत प्रोटीन संरचना 液相色谱।हेर्नुहोस् एफ., स्मिथ आरडी र शेन यु। उन्नत प्रोटियोमिक लिक्विड क्रोमेटोग्राफी।जे. क्रोमेटोग्राफी। ए १२६१, ७८–९० (२०१२)।
लिउ, डब्ल्यू. एट अल। उन्नत तरल क्रोमेटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्रीले व्यापक-आधारित मेटाबोलोमिक्स र प्रोटियोमिक्सलाई संयोजन गर्न सक्षम छ। गुदा। चिम। एक्टा १०६९, ८९–९७ (२०१९)।
चेसनट, एसएम र सालिसबरी, जेजे औषधि विकासमा UHPLC को भूमिका। चेसनट, एसएम र सालिसबरी, जेजे औषधि विकासमा UHPLC को भूमिका।चेसनट, एसएम र सालिसबरी, जेजे औषधि विकासमा UHPLC को भूमिका।चेसनट, एसएम र सालिसबरी, जेजे औषधि विकासमा UHPLC को भूमिका। जे. सेप्टेम्बर साइन्स। ३०(८), ११८३–११९० (२००७)।
वू, एन. र क्लाउसेन, एएम द्रुत विभाजनको लागि अति उच्च दबाव तरल क्रोमेटोग्राफीको आधारभूत र व्यावहारिक पक्षहरू। वू, एन. र क्लाउसेन, एएम द्रुत विभाजनको लागि अति उच्च दबाव तरल क्रोमेटोग्राफीको आधारभूत र व्यावहारिक पक्षहरू।वू, एन. र क्लाउसेन, एएम द्रुत पृथकीकरणको लागि उच्च दबाव तरल क्रोमेटोग्राफीको आधारभूत र व्यावहारिक पक्षहरू। Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面। वू, एन. र क्लाउसेन, एएम द्रुत पृथकीकरणको लागि अति-उच्च दबाव तरल क्रोमेटोग्राफीको आधारभूत र व्यावहारिक पक्षहरू।वू, एन. र क्लाउसेन, एएम द्रुत पृथकीकरणको लागि उच्च दबाव तरल क्रोमेटोग्राफीको आधारभूत र व्यावहारिक पक्षहरू।जे. सेप्टेम्बर विज्ञान। ३०(८), ११६७–११८२। https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (२००७)।
रेन, एसए र चेलिचेफ, पी। औषधि विकासमा अल्ट्रा-प्रदर्शन तरल क्रोमेटोग्राफीको प्रयोग। रेन, एसए र चेलिचेफ, पी। औषधि विकासमा अल्ट्रा-प्रदर्शन तरल क्रोमेटोग्राफीको प्रयोग।रेन, एसए र चेलिशेफ, पी। औषधि विकासमा अति उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमेटोग्राफीको प्रयोग। Wren, SA र Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用। रेन, एसए र चेलिचेफ, पी।रेन, एसए र चेलिशेफ, पी. औषधि विकासमा अल्ट्रा-प्रदर्शन तरल क्रोमेटोग्राफीको प्रयोग।जे. क्रोमेटोग्राफी। १११९(१-२), १४०-१४६। https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (२००६)।
गु, एच. एट अल। इन्टेरोभाइरसको कुशल शुद्धीकरणको लागि उच्च आन्तरिक चरण भएको तेल-इन-पानी इमल्सनबाट व्युत्पन्न एक मोनोलिथिक म्याक्रोपोरस हाइड्रोजेल ७१। रासायनिक। परियोजना। जर्नल ४०१, १२६०५१ (२०२०)।
शि, वाई., सियाङ, आर., होर्भाथ, सी. र विल्किन्स, जेए प्रोटियोमिक्समा तरल क्रोमेटोग्राफीको भूमिका। शि, वाई., सियाङ, आर., होर्भाथ, सी. र विल्किन्स, जेए प्रोटियोमिक्समा तरल क्रोमेटोग्राफीको भूमिका।शि, वाई., सियाङ, आर., होर्भाथ, सी. र विल्किन्स, जेए प्रोटियोमिक्समा तरल क्रोमेटोग्राफीको भूमिका। Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用। शि, वाई, जियांग, आर., होर्भाथ, सी. र विल्किन्स, जेएशि, वाई., सियाङ, आर., होर्भाथ, सी. र विल्किन्स, जेए प्रोटियोमिक्समा तरल क्रोमेटोग्राफीको भूमिका।जे. क्रोमेटोग्राफी। ए १०५३ (१-२), २७-३६ (२००४)।
फेकेटे, एस., भुटे, जे.-एल. र गुइलार्मे, डी. चिकित्सीय पेप्टाइड्स र प्रोटीनहरूको उल्टो-चरण तरल क्रोमेटोग्राफिक पृथकीकरणमा नयाँ प्रवृत्तिहरू: सिद्धान्त र अनुप्रयोगहरू। र गुइलार्मे, डी. चिकित्सीय पेप्टाइड्स र प्रोटीनहरूको उल्टो-चरण तरल क्रोमेटोग्राफिक पृथकीकरणमा नयाँ प्रवृत्तिहरू: सिद्धान्त र अनुप्रयोगहरू। & Guillarme, D. Новые тенденции в разделении терапевтических пептидов и белков с помощью жидкостной хроматограбрафищи: टिओरिया र प्रिलोजेनिया। र गुइलार्मे, डी. रिभर्स फेज लिक्विड क्रोमेटोग्राफीद्वारा चिकित्सीय पेप्टाइड्स र प्रोटीनहरूको पृथकीकरणमा नयाँ प्रवृत्तिहरू: सिद्धान्त र अनुप्रयोगहरू। & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用। र गुइलार्मे, डी.र गुइलार्मे, डी. रिभर्स फेज लिक्विड क्रोमेटोग्राफीद्वारा चिकित्सीय पेप्टाइड्स र प्रोटीनहरूको पृथकीकरणमा नयाँ प्रवृत्तिहरू: सिद्धान्त र अनुप्रयोगहरू।जे. फार्म. बायोमेडिकल साइन्स. एनस. ६९, ९–२७ (२०१२)।
गिलार, एम., ओलिभोभा, पी., डेली, एई र गेबलर, जेसी पहिलो र दोस्रो पृथकीकरण आयामहरूमा फरक pH भएको RP-RP-HPLC प्रणाली प्रयोग गरेर पेप्टाइडहरूको दुई-आयामी पृथकीकरण। गिलार, एम., ओलिभोभा, पी., डेली, एई र गेबलर, जेसी पहिलो र दोस्रो पृथकीकरण आयामहरूमा फरक pH भएको RP-RP-HPLC प्रणाली प्रयोग गरेर पेप्टाइडहरूको दुई-आयामी पृथकीकरण।गिलार एम., ओलिभोभा पी., डाली एई र गेबलर जेके पहिलो र दोस्रो पृथकीकरण आयामहरूमा फरक pH भएको RP-RP-HPLC प्रणाली प्रयोग गरेर पेप्टाइडहरूको दुई-आयामी पृथकीकरण।गिलार एम., ओलिभोभा पी., डाली एई र गेबलर जेके RP-RP-HPLC प्रणाली प्रयोग गरेर पहिलो र दोस्रो पृथकीकरण आयामहरूमा फरक pH मानहरू प्रयोग गरेर पेप्टाइडहरूको दुई-आयामी पृथकीकरण। जे. सेप्टेम्बर विज्ञान। २८ (१४), १६९४–१७०३ (२००५)।
फेलिट्टी, एस. एट अल। २ µm भन्दा सानो पूर्ण रूपमा छिद्रपूर्ण र सतही रूपमा छिद्रपूर्ण C18 कणहरूले भरिएका उच्च-प्रदर्शन क्रोमेटोग्राफी स्तम्भहरूको मास ट्रान्सफर र गतिज विशेषताहरूको अनुसन्धान। जे. सेप्टेम्बर विज्ञान। ४३ (९-१०), १७३७-१७४५ (२०२०)।
पिओवेसाना, एस. एट अल। बिरुवाको जैविक सक्रिय पेप्टाइड्सको अलगाव, पहिचान र प्रमाणीकरणमा हालका प्रवृत्तिहरू र विश्लेषणात्मक चुनौतीहरू। गुदा। प्राणी गुदा। रासायनिक। ४१०(१५), ३४२५-३४४४। https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (२०१८)।
मुलर, जेबी एट अल। जीवनको राज्यको प्रोटियोमिक परिदृश्य। प्रकृति ५८२ (७८१३), ५९२–५९६। https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (२०२०)।
डे लुका, के. एट अल। तयारी तरल क्रोमेटोग्राफी द्वारा चिकित्सीय पेप्टाइड्सको पोस्ट-उपचार। अणुहरू (बासेल, स्विट्जरल्याण्ड) 26(15), 4688 (2021)।
याङ, वाई. र गेङ, एक्स. मिश्रित-मोड क्रोमेटोग्राफी र बायोपोलिमरहरूमा यसको प्रयोग। याङ, वाई. र गेङ, एक्स. मिश्रित-मोड क्रोमेटोग्राफी र बायोपोलिमरहरूमा यसको प्रयोग।याङ, यु. र गेङ, एक्स. मिश्रित मोड क्रोमेटोग्राफी र बायोपोलिमरहरूमा यसको प्रयोग। Yang, Y. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用। याङ, वाई. र गेङ, एक्स. मिश्रित मोड क्रोमेटोग्राफी र बायोपोलिमरहरूमा यसको प्रयोग।याङ, यु. र जीन, एक्स. मिश्रित मोड क्रोमेटोग्राफी र बायोपोलिमरहरूमा यसको प्रयोग।जे. क्रोमेटोग्राफी। ए १२१८(४९), ८८१३–८८२५ (२०११)।