Nature.com भ्रमण गर्नुभएकोमा धन्यवाद।तपाईंले प्रयोग गरिरहनुभएको ब्राउजर संस्करणमा सीमित CSS समर्थन छ।उत्तम अनुभवको लागि, हामी तपाईंलाई अपडेट गरिएको ब्राउजर प्रयोग गर्न सिफारिस गर्छौं (वा इन्टरनेट एक्सप्लोररमा अनुकूलता मोड असक्षम गर्नुहोस्)।यस बीचमा, निरन्तर समर्थन सुनिश्चित गर्न, हामी शैली र जाभास्क्रिप्ट बिना साइट रेन्डर गर्नेछौं।
Angustifolius lupin (NLL, Lupinus angustifolius L.) खाद्य उत्पादन र माटो सुधार गर्न प्रयोग गरिने फलफूल बिरुवा हो।बालीको रूपमा एनएलएलको विश्वव्यापी विस्तारले लुपिन एन्थ्राकनोज लगायत धेरै रोगजनक फंगाईहरू आकर्षित गरेको छ, जसले विनाशकारी एन्थ्राकनोज रोग निम्त्याउँछ।दुई एलेलहरू, Lanr1 र AnMan, जसले बढ्दो प्रतिरोध प्रदान गर्दछ, NLL प्रजननमा प्रयोग गरिएको छ, तर अन्तर्निहित आणविक संयन्त्रहरू अज्ञात छन्।यस अध्ययनमा, Lanr1 र AnMan मार्करहरू युरोपेली NLL नमूनाहरू स्क्रिन गर्न प्रयोग गरिएको थियो।नियन्त्रित वातावरणमा खोपको परीक्षणले दुवै प्रतिरोधी दाताहरूको प्रभावकारिता पुष्टि गर्‍यो।भिन्न जीन अभिव्यक्ति प्रोफाइलिंग प्रतिनिधि प्रतिरोधी र संवेदनशील रेखाहरूमा प्रदर्शन गरिएको थियो।एन्थ्राकनोज प्रतिरोध जीन ओन्टोलजी सर्तहरू "GO: 0006952 रक्षा प्रतिक्रिया", "GO: 0055114 Redox प्रक्रिया", र "GO: 0015979 प्रकाश संश्लेषण" को ओभरएक्सप्रेसनसँग सम्बन्धित थियो।थप रूपमा, Lanr1 (83A: 476) रेखाले इनोकुलेशन पछि द्रुत रूपमा महत्त्वपूर्ण ट्रान्सक्रिप्टोम पुन: प्रोग्रामिंग देखाउँदछ, जबकि अन्य लाइनहरूले यस प्रतिक्रियामा लगभग 42 घण्टा ढिलाइ देखाउँदछ।रक्षा प्रतिक्रियाहरू TIR-NBS, CC-NBS-LRR र NBS-LRR जीनहरू, रोगजननमा संलग्न 10 प्रोटीनहरू, लिपिड स्थानान्तरण प्रोटीनहरू, एन्डोग्लुकन-1,3-β-ग्लुकोसिडेस, ग्लाइसिन-युक्त कोशिका भित्ता प्रोटीनहरू, र अक्सिजनको प्रतिक्रियाशील मार्गबाट ​​जीनहरूसँग सम्बन्धित छन्।83A:476 को प्रारम्भिक प्रतिक्रियाहरू, प्रकाश संश्लेषणसँग सम्बन्धित जीनहरूको सावधानीपूर्वक दमन सहित, फंगल जीवविज्ञानको वनस्पति वृद्धि चरणमा सफल सुरक्षासँग मेल खान्छ, जसले प्रभावकारीले प्रतिरक्षा ट्रिगर गर्छ भन्ने सुझाव दिन्छ।Mandeloop प्रतिक्रिया ढिलो छ, समग्र तेर्सो ड्र्याग जस्तै।
संकीर्ण-लेभ ल्युपिन (NLL, Lupinus angustifolius L.) पश्चिमी भूमध्य क्षेत्र १,२ मा उत्पन्न हुने उच्च प्रोटीन अनाज हो।यो हाल जनावर र मानिसको लागि खाद्य बालीको रूपमा उब्जनी गरिन्छ।सिम्बायोटिक नाइट्रोजन फिक्सिङ ब्याक्टेरियाद्वारा नाइट्रोजन फिक्सेसन र माटोको संरचनाको समग्र सुधारको कारणले बाली घुमाउने प्रणालीमा यसलाई हरियो मल पनि मानिन्छ।गत शताब्दीमा एनएलएलले घरपालुवाताको द्रुत प्रक्रिया पार गरेको छ र अझै पनि उच्च प्रजनन दबाब 3,4,5,6,7,8,9,10,11,12 मा छ।NLL को व्यापक खेती संग, रोगजनक कवक को उत्तराधिकारले नयाँ कृषि निचहरू विकास गर्यो र नयाँ बाली नष्ट गर्ने रोगहरू निम्त्यायो। लुपिन किसानहरू र प्रजनकहरूका लागि सबैभन्दा उल्लेखनीय एन्थ्राकनोजको उपस्थिति थियो, जुन रोगजनक फंगस, कोलेटोट्रिचम लुपिनी (बोन्डर) निरेनबर्ग, फेइलर र हेगेडोर्न 13 को कारणले हुन्छ। लुपिन किसानहरू र प्रजनकहरूका लागि सबैभन्दा उल्लेखनीय एन्थ्राकनोजको उपस्थिति थियो, जुन रोगजनक फंगस, कोलेटोट्रिचम लुपिनी (बोन्डर) निरेनबर्ग, फेइलर र हेगेडोर्न 13 को कारणले हुन्छ। Наиболее примечательным для фермеров и селекционеров люпина было появление антракноза, вызванного примечательным для фермеров и селекционеров Hagedorn13. लुपिन किसानहरू र प्रजनकहरूका लागि सबैभन्दा उल्लेखनीय रोगजनक फंगस कोलेटोट्रिचम लुपिनी (बोन्डर) निरेनबर्ग, फेलर र हेगेडोर्न 13 को कारणले हुने एन्थ्राकनोजको उदय थियो।对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原农民和饲养者来说orn13 引起的।对于羽扇豆农民和饲养者来说,最引人注目的是炭疽病的出现,它是由病原真赏 Наиболее поразительным для фермеров и селекционеров люпина является появление antракноза, вызываемого патоибергенного вызываемого патомеров , Feiler र Hagedorn13। लुपिन कृषक र प्रजनकहरूका लागि सबैभन्दा बढी असर पार्ने रोग कोलेटोट्रिचम लुपिनी (बोन्डर) निरेनबर्ग, फेइलर र हेगेडर्न१३ नामक रोगजनक फंगसले गर्दा हुने एन्थ्राकोनोजको उत्पत्ति हो।यस रोगको प्रारम्भिक रिपोर्टहरू ब्राजिल र संयुक्त राज्यबाट आएका थिए, जसका सामान्य लक्षणहरू क्रमशः 1912 र 1929 मा देखा परेका थिए।तर, करिब ३० वर्षपछि यो रोगजनक कोलेटोट्रिचम ग्लोओस्पोरियोइड्स (पेन्ज) पेन्ज भनिन्छ। र सैक।, टेलिमोर्फ ग्लोमेरेला सिंगुलाटा (स्टोनम्यान) स्पाउल्ड। र सैक।, टेलिमोर्फ ग्लोमेरेला सिंगुलाटा (स्टोनम्यान) स्पाउल्ड। र Sacc।, teleomorph Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld। र Sacc।, Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld को टेलिमोर्फ। & Sacc।,有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld। & Sacc।,有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld। & Sacc।, Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld в Целенаправленной морфологии। र Sacc।, Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld in Targeted Morphology। र एच. श्रेंक,। र एच. श्रेंक, .र H. Schrenk। & H. 施伦克,। & H. 施伦克,।र H. Schlenk, .20 औं शताब्दीको मध्यमा गरिएको प्रारम्भिक रोग फेनोटाइपिङले NLL र पहेंलो लुपिन (L. luteus L.) मा केही प्रतिरोध देखाएको थियो, तर परीक्षण गरिएका सबै सेतो लुपिन (L. albus L.) एक्सेसहरू अत्यधिक संवेदनशील थिए।अध्ययनले देखाएको छ कि एन्थ्राकनोजको विकास बढ्दो वर्षा (हावाको आर्द्रता) र तापमान (१२-२८ डिग्री सेल्सियसको दायरामा) संग सम्बन्धित छ, जसले उच्च तापमानमा प्रतिरोधको उल्लङ्घन निम्त्याउँछ 17, 18। वास्तवमा, कोनिडिया अंकुरण हुन र रोग सुरु हुनको लागि आवश्यक समय, चार गुणा कम थियो। सर्तहरू 19।यसरी, चलिरहेको ग्लोबल वार्मिंगले एन्थ्राकनोज फैलाएको छ।यद्यपि, यो रोग फ्रान्स (1982) र युक्रेन (1983) मा एक आसन्न खतराको हार्बिंगरको रूपमा अवलोकन गरिएको थियो, तर 20,21 मा लुपिन उद्योगले स्पष्ट रूपमा बेवास्ता गरेको थियो।केही वर्ष पछि, यो विनाशकारी रोग विश्वभर फैलियो र अष्ट्रेलिया, पोल्याण्ड र जर्मनी जस्ता प्रमुख लुपिन उत्पादन गर्ने देशहरूलाई पनि असर गर्‍यो।1990 को मध्यमा एन्थ्राकनोजको प्रकोप पछि, व्यापक स्क्रिनिङको परिणामस्वरूप NLL19 नमूनाहरूमा धेरै प्रतिरोधी दाताहरूको पहिचान भयो।एन्थ्राकोनोजको एनएलएल प्रतिरोध विभिन्न जर्मप्लाज्म स्रोतहरूमा पाइने दुई अलग-अलग प्रभावशाली एलिलहरूद्वारा नियन्त्रित हुन्छ: ल्यान्र१ खेतीमा तान्जिल र वोंगा र खेतीमा अनमान।मण्डले 25, 26. यी एलिलहरूले प्रजनन कार्यक्रमहरूमा प्रतिरोधी जर्मप्लाज्मको चयनलाई समर्थन गर्ने आणविक मार्करहरूलाई पूरक बनाउँछन् 25,26,27,28,29,30।एन्थ्राक्नोज प्रतिरोधका लागि छुट्याइएको RIL जनसंख्या प्राप्त गर्न Lanr1 एलेल बोक्ने प्रतिरोधी प्रजनन रेखा 83A:476 लाई अतिसंवेदनशील जंगली रेखा P27255 सँग पार गरिएको थियो, जसले क्रोमोजोम NLL-1131, 32.32 को नक्सा 32.32 मा क्रोमोजोममा Lanr1 लोकस प्रदान गर्न सम्भव बनायो। जीनोमिक फ्रेमवर्कको साथ एन्थ्राकनोज गर्न, NLL ले एउटै क्रोमोजोम (NLL-11) मा सबै तीन एलिलहरूको स्थान प्रकट गर्यो, तर फरक स्थितिमा 29,34,35।यद्यपि, आरआईएलहरूको सानो संख्या र मार्करहरू र सम्बन्धित एलिलहरू बीचको ठूलो आनुवंशिक दूरीको कारणले गर्दा, तिनीहरूको अन्तर्निहित जीनहरूको बारेमा कुनै भरपर्दो निष्कर्ष निकाल्न सकिँदैन।अर्कोतर्फ, लुपिनहरूमा उल्टो आनुवंशिकीहरूको प्रयोग तिनीहरूको धेरै कम पुनरुत्थान क्षमताको कारणले गाह्रो छ, जसले आनुवंशिक हेरफेरलाई गाह्रो बनाउँछ37।
83A:476 (Lanr1) र Mandelup (AnMan) जस्ता होमोजाइगस अवस्थामा वांछित एलिल बोक्ने घरेलु जर्मप्लाज्मको विकासले जंगली जनसंख्यामा एलिलहरूको विरोधी संयोजनहरूको उपस्थितिमा एन्थ्राकनोज प्रतिरोधको अध्ययन गर्ने ढोका खोलेको छ।आणविक संयन्त्रको सम्भावनाहरू।विशिष्ट जीनोटाइपहरू द्वारा उत्पन्न रक्षा प्रतिक्रियाहरू तुलना गर्नुहोस्।यस अध्ययनले C. लुपिनी खोपमा NLL को प्रारम्भिक ट्रान्सक्रिप्टोम प्रतिक्रियाको मूल्याङ्कन गर्‍यो।पहिले, 215 लाइनहरू भएको युरोपेली एनएलएल जर्मप्लाज्म प्यानललाई ल्यान्र1 र एनमान एलिलहरू चिन्ह लगाउने आणविक मार्करहरू प्रयोग गरेर स्क्रिन गरिएको थियो।एन्थ्राकनोज फेनोटाइपिङ त्यसपछि 50 NLL लाइनहरूमा प्रदर्शन गरिएको थियो, पहिले आणविक मार्करहरूको लागि चयन गरिएको, नियन्त्रित अवस्थाहरूमा।यी प्रयोगहरूको आधारमा, एन्थ्राकोनोज प्रतिरोध र Lanr1/AnMan एलेलिक संरचनामा फरक चार लाइनहरू दुई पूरक दृष्टिकोणहरू प्रयोग गरेर भिन्न रक्षा जीन अभिव्यक्ति प्रोफाइलको लागि चयन गरिएको थियो: उच्च-थ्रुपुट आरएनए अनुक्रमण र वास्तविक-समय PCR मात्रा।
मार्कर Lanr1 (Anseq3 र Anseq4) र AnMan (AnManM1) र AnMan (AnManM1) सहितको NLL जर्मप्लाज्म (N = 215) को सेटको स्क्रिनिङले देखाएको छ कि केवल एक रेखा (95726, Salamanca-b नजिकै) सबैका लागि "प्रतिरोध" मार्करहरू फेला परे, सबैका लागि "प्रतिरोधी" मार्करहरू फेला पर्यो। 158 (~73.5%) रेखाहरूमा सबै मार्करहरूको अनुपात।तेह्र रेखाहरूले Lanr1 मार्करका दुई "प्रतिरोधी" एलिलहरू उत्पादन गरे, र 8 रेखाहरूले Lanr1 को "प्रतिरोधी" एलिलहरू उत्पादन गरे।मार्कर।AnMan मार्करको "प्रतिरोध" एलिल (पूरक तालिका S1)।Anseq3 मार्करका लागि दुई लाइनहरू हेटेरोजाइगस र AnManM1 मार्करका लागि एक हेटेरोजाइगस थिए।42 रेखाहरू (19.5%) Anseq3 र Anseq4 alleles को विपरित चरणहरू बोक्छन्, यी दुई स्थानहरू बीचको पुन: संयोजनको उच्च आवृत्तिलाई संकेत गर्दछ।एन्थ्राकनोज फेनोटाइपहरू नियन्त्रित अवस्थाहरूमा (पूरक तालिका S2) ले परीक्षण गरिएका जीनोटाइपहरूको प्रतिरोधमा परिवर्तनशीलता प्रकट गर्‍यो, जुन एन्थ्राकनोजको गम्भीरतामा प्रतिबिम्बित भएको थियो।औसत स्कोरमा भिन्नताहरू 1.8 (मध्यम प्रतिरोधी) देखि 6.9 (संवेदनशील) र बिरुवाको वजन भिन्नताहरू 0.62 (संवेदनशील) देखि 4.45 ग्राम (प्रतिरोधी) सम्मका थिए। त्यहाँ प्रयोगको दुई प्रतिकृतिहरूमा अवलोकन गरिएको मानहरू बीचको महत्त्वपूर्ण सम्बन्ध थियो (रोगको गम्भीरता स्कोरहरूको लागि 0.51, P = 0.00017 र 0.61 बिरुवाको वजनको लागि, P < 0.0001) साथै यी दुई प्यारामिटरहरू (− 0.59 र − 0.77, P < 0.000) बीच। त्यहाँ प्रयोगको दुई प्रतिकृतिहरूमा अवलोकन गरिएको मानहरू बीचको महत्त्वपूर्ण सम्बन्ध थियो (रोगको गम्भीरता स्कोरहरूको लागि 0.51, P = 0.00017 र 0.61 बिरुवाको वजनको लागि, P <0.0001) साथै यी दुई प्यारामिटरहरू (− 0.59 र − 0.77, P <100) बीच। Выявлена ​​достоверная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях эксперимента (०,५१ для баловя, баловями, ०,५१ и 0,61 для массы растения, P < 0,0001), а также между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,77, Р < 0,0001) 0,0001)। प्रयोगको दुई पुनरावृत्तिहरूमा अवलोकन गरिएका मानहरू (रोगको गम्भीरता स्कोरका लागि ०.५१, बिरुवाको तौलको लागि P = ०.००१७ र ०.६१, पी <०.००१), साथै यी दुई प्यारामिटरहरू (- ०.५९ र -०.७७, पी <०।०।) बीचको महत्त्वपूर्ण सम्बन्ध फेला पर्‍यो।在两次重复实验中观察到的值之间存在显着相关性（疾病严重程度评分为程度评分为0.0.51. 0.61, P < 0.0001）以及这两个参数之间（- 0.59 和- 0.77, P <0.0001)।在 两 次 重复 实验 中 观察 的 值 之间 存在 相关性 （疾病 严重 程度 严重 程度 评 分丆 5 0.00017 ， 植物 为 0.61 ， p <0.0001） 以及 两 个 参数 之间 （（（（- 0.59 和–59 和–59和- ०.७७, पी <०.००१)। Наблюдалась значительная корреляция между значениями , наблюдаемыми в двух повторностях растения 0,61, P <0,0001), и между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,0001) 0,77, P <0,0001। डुप्लिकेटमा अवलोकन गरिएका मानहरू (रोग गम्भीरता स्कोर ०.५१, पी = ०.००१७ र बोटको तौल ०.६१, पी <०.००१) र यी दुई प्यारामिटरहरू (-०.५९ र -० ०.००१) ०.७००, पी<१०। ).अतिसंवेदनशील बोटबिरुवाहरूमा देखिने विशिष्ट लक्षणहरूमा "गोठालोको धनुष" संरचना जस्तो देखिने काँडको काँडा घुम्नु, त्यसपछि सुन्तला/गुलाबी स्पोरोजोइट्सको साथ अंडाकार घाउहरू (पूरक चित्र १) समावेश छन्।Lanr1 (83A:476 र Tanjil) र AnMan (Mandelup) जीनहरू बोक्ने अस्ट्रेलियाली एक्सेसहरू मध्यम प्रतिरोधी छन्, 0.0331 र 0.0036)।"प्रतिरोधी" Lanr1 र/वा AnMan एलिलहरू बोक्ने केही रेखाहरूले रोगका लक्षणहरू देखाउँछन्।
चाखलाग्दो कुरा के छ भने, कुनै पनि "प्रतिरोधी" मार्कर एलेल नभएका केही NLL लाइनहरूले एन्थ्राक्नोज प्रतिरोधको उच्च स्तर (Lanr1 वा AnMan जीनोटाइपहरूका लागि तुलनात्मक वा उच्च) प्रकट गर्‍यो, जस्तै Boregine (P value <0.0001 दुवै प्यारामिटरहरूका लागि), Bojar (P value <0.0001 र B-091/B-095/4/4 बिरुवाको वजन)। (अङ्कको लागि P मान <0.0001 र वजनको लागि गैर-महत्वपूर्ण)। चाखलाग्दो कुरा के छ भने, कुनै पनि "प्रतिरोधी" मार्कर एलेल नभएका केही NLL लाइनहरूले एन्थ्राक्नोज प्रतिरोधको उच्च स्तर (Lanr1 वा AnMan जीनोटाइपहरूका लागि तुलनात्मक वा उच्च) प्रकट गर्‍यो, जस्तै Boregine (P value <0.0001 दुवै प्यारामिटरहरूका लागि), Bojar (P value <0.0001 र B-091/B-095/4/4 बिरुवाको वजन)। (अङ्कको लागि P मान <0.0001 र वजनको लागि गैर-महत्वपूर्ण)। Интересно, что несколько линий NLL, лишенных какого-либо «резистентного» маркерного аллеля, показали высокий уровень увоастовости вимый или более высокий, чем для генотипов Lanr1 или AnMan), таких как Boregine (значение P <0,0001 для обоих параметров), Bojar1, Bojar и 0,001 для массы растения) и популяции B-549/79b (значение P <0,0001 для оценки и незначимо для массы)। चाखलाग्दो कुरा के छ भने, कुनै पनि 'प्रतिरोधी' मार्कर एलेल नभएका धेरै NLL रेखाहरूले एन्थ्राकोनोज (Lanr1 वा AnMan जीनोटाइपहरूका लागि तुलनात्मक वा उच्च) को प्रतिरोधको उच्च स्तर देखाए, जस्तै बोरेजिन (P मान <0.0001 दुवै प्यारामिटरहरूको लागि), Bojar (P मान <0.0001 र बिरुवाको लागि वजन <0.0401) /79b (मूल्याङ्कनको लागि P मान <0.0001 र वजनको लागि महत्त्वपूर्ण छैन)।有趣的是，一些缺乏任何“抗性”标记等位基因的NLL 系显示出高水平的炭疽病抗怗型相当或更高），例如Boregine（两个参数的P 值< 0.0001）、Bojar（P 值<得分为0.0001）得分为0.0001）得分为0.0001.种群B-549/79b（得分P 值< 0.0001, 重量不显着）। यो चाखलाग्दो छ कि कुनै पनि "एन्टिजेनिक" मार्करहरू नभएका केही NLL प्रणालीहरूले उच्च क्षैतिज प्रतिरोध (Lanr1 वा AnMan जीन वा माथिको बराबर) देखाउँछन्, जस्तै बोरेगिन (दुवै प्यारामिटरहरू P < 0.0001), Bojar (P मान < 0.0001, बिरुवाको वजन) 0.0/70 b 0.0/70 मूल्य <0.0001। 1, वजन महत्त्वपूर्ण छैन)। Интересно, что некоторые линии NLL, лишенные каких-либо маркерных аллей "резистентности" или выше, чем у генотипов Lanr1 или AnMan), такие как Boregine (значение P для обоих параметров <0,0001), Bojar (значение P <0,000п,0001, ляция B-549/79b (оценка P-значение <0,0001, масса незначительна)। चाखलाग्दो कुरा के छ भने, कुनै पनि 'प्रतिरोध' मार्कर एलिलहरू नभएका केही NLL रेखाहरूले एन्थ्राक्नोज प्रतिरोधको उच्च स्तर (Lanr1 वा AnMan genotypes सँग तुलनात्मक वा उच्च) देखाएको छ, जस्तै Boregine (दुवै प्यारामिटरहरूका लागि P मान <0.0001), Bojar (P-value <0.70/b-90, b.490, b.490 <b) तौल P-मान <0.0001, वजन महत्त्वपूर्ण छैन)।यो घटनाले प्रतिरोधको उपन्यास आनुवंशिक स्रोतको सम्भावनाको सुझाव दिन्छ, मार्कर जीनोटाइपहरू र रोग फेनोटाइपहरू (~ ०.४२ देखि ~ ०.९८ सम्मको पी मानहरू) बीचको सहसम्बन्धको कमीलाई व्याख्या गर्दै।तसर्थ, कोल्मोगोरोभ-स्मिर्नोभ परीक्षणले एन्थ्राकोनोज प्रतिरोधको डेटा लगभग सामान्य रूपमा अंकहरू (P-मानहरू 0.25 र 0.11) र बिरुवाको मास (P-मानहरू 0.47 र 0.55) को लागि वितरण गरिएको देखाएको छ, मैले सुझाव दिन्छ कि मैले ल्यान 1 भन्दा बढी एलिलहरू समावेश गरेको अनुमान गर्छु।
एन्थ्राक्नोज प्रतिरोधी स्क्रिनिङको नतिजाको आधारमा, ट्रान्सक्रिप्टोम विश्लेषणको लागि ४ लाइनहरू चयन गरिएको थियो: 83A:476, बोरेजिन, मन्डेलप, र जनसंख्या 22660। यी लाइनहरूलाई आरएनए अनुक्रमणद्वारा इनोकुलेशन प्रयोगहरूमा एन्थ्र्याक्स प्रतिरोधको लागि पुन: परीक्षण गरिएको थियो, प्रदान गरिएको थियो कि तिनीहरू अघिल्लो परीक्षणमा थिए।स्कोर मानहरू निम्नानुसार थिए: बोरेगिन (1.71 ± 1.39), 83A: 476 (2.09 ± 1.38), Mandelup (3.82 ± 1.42) र जनसंख्या 22660 (6.11 ± 1.29)।
Illumina NovaSeq 6000 प्रोटोकलले प्रति नमूना (29.7 देखि 54.4 Mreads) (पूरक तालिका S3) को औसत 40.5 Mread जोडी हासिल गर्यो।सन्दर्भ अनुक्रममा पङ्क्तिबद्धता स्कोर 75.5% देखि 88.6% सम्म थियो।जैविक प्रतिकृतिहरू बीचको प्रयोगात्मक भेरियन्टहरू बीच पढ्ने गणना डेटाको औसत सम्बन्ध ०.८१२ देखि ०.९९७ (अर्थ ०.९५९) सम्म थियो। विश्लेषण गरिएको 35,170 जीनहरू मध्ये, 2917 ले कुनै अभिव्यक्ति प्रकट गरेन, र अन्य 4785 जीनहरू नगण्य स्तरमा व्यक्त गरिएका थिए (आधार अर्थ <5)। विश्लेषण गरिएको 35,170 जीनहरू मध्ये, 2917 ले कुनै अभिव्यक्ति प्रकट गरेन, र अन्य 4785 जीनहरू नगण्य स्तरमा व्यक्त गरिएका थिए (आधार अर्थ <5)। IS 35 170 проанализированных генов 2917 не проявляли экспрессии, а остальные 4785 генов экспрессировались на незвначированных генов е <5)। विश्लेषण गरिएको 35,170 जीनहरू मध्ये, 2917 ले कुनै अभिव्यक्ति देखाएन, र बाँकी 4785 जीनहरू नगण्य स्तरमा व्यक्त गरियो (आधार अर्थ <5)।在分析的35,170 个基因中，2917 个没有表达，其他4785 个基因的表达可以因的表达可以忽略不计！。३५,१७० IS 35 170 проанализированных генов 2917 не экспрессировались, а остальные 4785 генов имели незначительную экспрессировались (<< )। विश्लेषण गरिएको 35,170 जीनहरू मध्ये, 2917 व्यक्त गरिएको थिएन र बाँकी 4785 जीनहरूमा नगण्य अभिव्यक्ति थियो (आधार अर्थ <5)।यसरी, प्रयोगको क्रममा व्यक्त गरिएको (आधार माध्य ≥ 5) मानिएको जीनको संख्या 27,468 (78.1%) (पूरक तालिका S4) थियो।
पहिलो पटक बिन्दुबाट, सबै NLL लाइनहरूले ट्रान्सक्रिप्टोम (तालिका 1) को पुन: प्रोग्रामिंग गरेर C. लुपिनी (स्ट्रेन Col-08) को टीकाकरणलाई प्रतिक्रिया दिए, तथापि, रेखाहरू बीच महत्त्वपूर्ण भिन्नताहरू अवलोकन गरियो।यसरी, प्रतिरोध रेखा 83A:476 (Lanr1 जीन बोक्ने) ले यस समय बिन्दुमा अन्य समय बिन्दुहरूको तुलनामा पृथक अप-र डाउन-जीनहरूको संख्यामा 31-69-गुणा वृद्धिको साथ पहिलो पटक बिन्दु (6 hpi) मा महत्त्वपूर्ण ट्रान्सक्रिप्टोम पुन: प्रोग्रामिंग देखाएको छ।थप रूपमा, यो शिखर अल्पकालीन थियो, किनकि केवल केहि जीनको अभिव्यक्ति दोस्रो पटक बिन्दु (12 hpi) मा उल्लेखनीय रूपमा परिवर्तन भएको थियो।चाखलाग्दो कुरा के छ भने, बोरेजिन, जसले ग्राफ्ट परीक्षणमा उच्च स्तरको प्रतिरोध पनि देखाएको थियो, प्रयोगको क्रममा त्यस्तो ठूलो ट्रान्सक्रिप्शनल पुन: प्रोग्रामिंगबाट गुज्रिएको थिएन।जे होस्, भिन्नता व्यक्त गरिएको जीन (DEG) को संख्या बोरेजिन र 83A:476 को लागि 12 HPI मा समान थियो।दुबै Mandelup र जनसंख्या 22660 ले अन्तिम समय बिन्दु (48 l/s) मा DEG शिखरहरू देखाए, रक्षा प्रतिक्रियाहरूमा सापेक्ष ढिलाइ संकेत गर्दछ।
किनकि 83A: 476 ले अन्य सबै रेखाहरूको तुलनामा 6 HPI मा C. lupini को प्रतिक्रियामा ठूलो ट्रान्सक्रिप्टोम पुन: प्रोग्रामिङ गर्यो, यस समयमा अवलोकन गरिएको DEGs को ~ 91% वंश-विशिष्ट थिए (चित्र 1)।यद्यपि, अध्ययन रेखाहरू बीचको प्रारम्भिक प्रतिक्रियाहरूमा केही ओभरल्याप थियो, जस्तै 68.5%, 50.9%, र 52.6% DEG बोरेगिन, मन्डेलप, र जनसंख्या 22660, क्रमशः 83A:476 मा भेटिएकाहरूसँग ओभरल्याप गरिएको थियो।यद्यपि, यी DEGs ले हाल 83A:476 प्रयोग गरेर पत्ता लगाइएका सबै DEG हरूको सानो अंश (0.97–1.70%) मात्र हो।थप रूपमा, सबै रेखाहरूबाट 11 DEGs यस समयमा सुसंगत थिए (पूरक तालिकाहरू S4-S6), बिरुवा प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाहरूको सामान्य कम्पोनेन्टहरू सहित: लिपिड ट्रान्सफर प्रोटीन (TanjilG_32225), endoglucan-1,3-β-ग्लुकोसाइड इन्जाइम (TanjilG_233384), दुई प्रोटीनहरू (TanjilG_233384), र दुई ट्यान्जिल-233384 प्रोटीन। jilG_31531), आधारभूत लेटेक्स प्रोटीन (TanjilG_32352), र दुई ग्लाइसिन युक्त संरचनात्मक सेल भित्ता प्रोटीन (TanjilG_19701 र TanjilG_19702)।24 HPI (कुल 16-38% DEG) र Mandelup र जनसंख्या 22660 बीच 48 HPI (कुल 14-20% DEG) मा 83A:476 र Boregine बीच ट्रान्सक्रिप्टोम प्रतिक्रियाहरूमा अपेक्षाकृत उच्च ओभरल्याप पनि थियो।
कोलेटोट्रिचम लुपिनी (Wierzhenice, पोल्याण्ड, 1999 मा लुपिन क्षेत्रहरूबाट प्राप्त स्ट्रेन Col-08) को साथ इनोकुलेटेड संकीर्ण-लेभ लुपिन (NLL) लाइनहरूमा भिन्नता व्यक्त गरिएको जीन (DEG) को संख्या देखाउँदै भेन रेखाचित्र।NLL लाइनहरू विश्लेषण गरिएका थिए: 83A: 476 (प्रतिरोधी, Lanr1 एलेल बोक्ने), बोरेगिन (प्रतिरोधी, आनुवंशिक पृष्ठभूमि अज्ञात), मन्डेलप (मध्यम प्रतिरोधी, AnMan एलेल बोक्ने) र जनसंख्या 22660 (धेरै संवेदनशील)।संक्षिप्त नाम hpi खोप लगाएको घण्टा पछि खडा हुन्छ।ग्राफलाई सरल बनाउन शून्य मानहरू हटाइएको छ।
6 hpi मा overexpressed जीन को सेट क्यानोनिकल R जीन डोमेन (पूरक तालिका S7) को उपस्थिति को लागी विश्लेषण गरिएको थियो।यस अध्ययनले 83A:476 मा मात्र NBS-LRR डोमेनहरूसँग क्लासिक रोग प्रतिरोधी जीनहरूको ट्रान्सक्रिप्टोम इन्डक्शन पत्ता लगाएको छ।यो सेटमा एक TIR-NBS-LRR जीन (tanjilg_05042), पाँच CC-NBS-LRR जीनहरू (tanjilg_06165, tanjilg_06162, tanjilg_22773, tanjilg_22640, र F_16R_BS, tanjilg_22640, र F_1616, tanjilg, tanjilg_22640) थिए। 62), र चार NBS-LRRE (tanjilg_16162) साथै चार NBS-Lrr (tanjilg_16162) र चार NBS-LRR (TANJILG_16162)।यी सबै जीनहरूमा संरक्षित अनुक्रमहरूमा व्यवस्थित गरिएका क्यानोनिकल डोमेनहरू छन्।NBS-LRR डोमेन जीनहरू बाहेक, धेरै RLL किनासहरू 6 hpi मा सक्रिय गरिएको थियो, अर्थात् एक बोरेगिन (TanjilG_19877), दुई Mandelup मा (TanjilG_07141 र TanjilG_19877) र जनसंख्या 22660 मा (TanjilG_19877 र TanjilG1302 र TanjilG_19877) मा दुई। २७:४७६।
C. lupini (स्ट्रेन Col-08) को साथ टीकाकरणको प्रतिक्रियामा उल्लेखनीय रूपमा परिवर्तन गरिएको अभिव्यक्ति भएका जीनहरू Gene Ontology (GO) संवर्धन विश्लेषण (पूरक तालिका S8) को अधीनमा थिए। सबैभन्दा धेरै पटक प्रस्तुत गरिएको जैविक प्रक्रिया शब्द "GO: 0006952 रक्षा प्रतिक्रिया" थियो जुन 16 मध्ये 6 मा देखा पर्‍यो (समय × रेखा) उच्च महत्व (P मान <0.001) (चित्र 2) संग संयोजन। सबैभन्दा धेरै पटक प्रस्तुत गरिएको जैविक प्रक्रिया शब्द "GO: 0006952 रक्षा प्रतिक्रिया" थियो जुन 16 मध्ये 6 मा देखा पर्‍यो (समय × रेखा) उच्च महत्व (P मान <0.001) (चित्र 2) संग संयोजन। Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 защитный ответ, защитный ответ» время × линия) комбинаций с высокой значимостью (значение P <0,001) (RIS. 2)। सबैभन्दा बारम्बार प्रस्तुत गरिएको जैविक प्रक्रिया शब्द 'GO: 0006952 रक्षा प्रतिक्रिया' थियो, जुन 6 को 16 मा देखा पर्‍यो (समय × वंश) उच्च महत्त्व (P मान <0.001) (चित्र 2) संग संयोजन।最常被过度代表的生物过程术语是“GO:0006952 防御反应”，它出现在16 个（时间程个（时间程具有高显着性（P 值< 0.001）（图2）। सबैभन्दा प्रतिनिधि जैविक प्रक्रिया शब्द "GO: 0006952 रक्षा प्रतिक्रिया" हो, जुन 16 को 6 (时间×线) संयोजनहरूमा देखा पर्दछ, उच्च महत्वको साथ (P मान <0.001) (图2)। Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 रक्षा प्रतिक्रिया», который появленным мя × линия) с высокой значимостью (значение P <0,001) (RIS. 2)। सबैभन्दा धेरै बारम्बार प्रस्तुत गरिएको जैविक प्रक्रिया शब्द 'GO: 0006952 रक्षा प्रतिक्रिया' थियो, जुन 16 मध्ये 6 संयोजनहरूमा देखा पर्‍यो (समय × रेखा) उच्च महत्त्वको साथ (P मान <0.001) (चित्र 2)।यो शब्द 83A: 476 र बोरेगिन (6 र 24 hpi) मा दुई समय बिन्दुहरूमा र एक समय मान्डेलप र जनसंख्या 22660 (क्रमशः 12 र 6 hpi) मा ओभरप्रिजेन्ट गरिएको थियो।यो एक अपेक्षित परिणाम हो, प्रतिरोधी रेखाहरूको एन्टिफंगल प्रतिक्रियालाई हाइलाइट गर्दै।थप रूपमा, 83A:476 ले C. lupini लाई "GO:0055114 redox process" शब्दले प्रतिनिधित्व गर्ने अक्सिडेटिभ बर्स्टसँग सम्बन्धित जीनहरू तीव्र गतिमा उत्प्रेरित गरेर प्रतिक्रिया दियो, जसले एक विशिष्ट रक्षा प्रतिक्रिया जनाउँछ, जबकि बोरेगिनले 'GO' शब्दसँग सम्बन्धित विशिष्ट रक्षा प्रतिक्रियाहरू प्रकट गर्यो।:0006950 तनाव प्रतिक्रिया"।जनसंख्या 22660 ले माध्यमिक चयापचयहरू समावेश गर्ने तेर्सो प्रतिरोध प्रतिक्रिया सक्रिय गर्यो, "GO:0016104 Triterpene biosynthesis को प्रक्रिया" र "GO:0006722 Triterpene metabolism को प्रक्रिया" (दुबै सर्तहरू enGO को रिच खातामा लिने) शब्दहरूको अत्यधिक संख्या हाइलाइट गर्दै। sis, Mandelup प्रतिक्रिया स्थिरता Boregine र जनसंख्या 22660 बीच थियो। साथै, प्रारम्भिक प्रतिक्रिया 83A:476 (6 hpi) र ढिलाइ प्रतिक्रिया Mandelup र जनसंख्या 22660 मा GO:0015979 'फोटोसिन्थेसिस' र अन्य सम्बन्धित जैविक प्रक्रियाहरू समावेश छन्।
एनथ्र्याक्स ल्युपिन (1999 मा पोल्याण्डको Wierzhenice मा लुपिन क्षेत्रहरूबाट प्राप्त गरिएको Col-08 स्ट्रेन) को ट्रान्सक्रिप्टोम प्रतिक्रियाहरूको क्रममा संकीर्ण-लेभ ल्युपिन (NLL) को ट्रान्सक्रिप्टोम प्रतिक्रियाहरूको क्रममा चयन गरिएको बायोप्रोसेस जीन ओन्टोलोजी सर्तहरू धेरै विस्तारित छन्।NLL लाइनहरू विश्लेषण गरिएका थिए: 83A: 476 (प्रतिरोधी, homozygous Lanr1 एलिल बोक्ने), बोरेगिन (प्रतिरोधी, अज्ञात आनुवंशिक पृष्ठभूमि), Mandelup (मध्यम प्रतिरोधी, homozygous AnMan एलेल बोक्ने) र जनसंख्या 22660 (संवेदनशील)।
किनभने यस अध्ययनले एन्थ्राक्नोज प्रतिरोधमा योगदान गर्ने जीनहरू पहिचान गर्ने उद्देश्य राखेको थियो, GO “GO: 0006952 डिफेन्सिभ प्रतिक्रियाहरू” र “GO: 0055114 Redox प्रक्रियाहरू” लाई तोकिएको जीनहरूलाई कट-अफको साथ विश्लेषण गरिएको थियो किनभने आधार रेखाको अर्थ कम्तिमा ≥ 30 लाई हुन्छ।लग २ को सांख्यिकीय रूपमा महत्त्वपूर्ण मानहरू संयोजन गर्दै × समयको बिन्दु (फोल्ड परिवर्तन)।यी मापदण्डहरू पूरा गर्ने जीनहरूको संख्या GO: 0006952 को लागि 65 र GO: 0055114 को लागि 524 थियो।
83A:476 ले GO:0006952 शब्दसँग एनोटेट गरिएका दुई DEG शिखरहरू पत्ता लगाए, पहिलो 6 जीन प्रति इन्च (64 जीन, माथि र डाउन नियमन) र दोस्रो 24 जीन प्रति इन्च (15 जीन, माथि नियमन मात्र)।Boregine ले पनि देखाएको छ कि GO:0006952 उही समय बिन्दुमा उक्लियो, तर कम DEG (11 र 8) र प्राथमिकता सक्रियता संग।Mandeloop ले 12 र 48 HPI मा GO:0006952 को दुई चोटी देखाउनुभयो, दुबै 12 जीनहरू (सक्रिय गर्ने जीनहरू सहितको पहिलो, र दोस्रो मात्र दमन गर्ने जीनहरू सहित), जबकि 6 HPI (13 जीनहरू) मा 22660 जनसङ्ख्यामा वृद्धिको ठूलो प्रबलता थियो।नियमन।यो ध्यान दिनु पर्छ कि यी चुचुराहरूमा GO:0006952 DEG को 96.4% ले एउटै प्रकारको प्रतिक्रिया (माथि वा तल) थियो, जसले संलग्न जीनको संख्यामा भिन्नता भए तापनि रक्षा प्रतिक्रियाहरूमा महत्त्वपूर्ण ओभरल्यापलाई संकेत गर्दछ।GO:0006952 शब्दसँग सम्बन्धित अनुक्रमहरूको सबैभन्दा ठूलो समूहले Starvation Stress-Associated Message Protein 22 (SAM22-like) लाई एन्कोड गर्दछ, जुन कक्षा 10 रोगजनन-सम्बद्ध प्रोटीन (PR-10) प्रोटीन क्लेड र कोर प्रोटीन लेटेक्ससँग सम्बन्धित छ।समान (MLP-जस्तै) प्रोटीन) प्रोटीन (चित्र 3)।दुई समूहहरू अभिव्यक्तिको प्रकृति र प्रतिक्रियाको दिशामा भिन्न थिए।SAM22-जस्तै प्रोटीनहरू एन्कोड गर्ने जीनहरूले प्रारम्भिक समय बिन्दुहरू (6 वा 12 hpi) मा लगातार र महत्त्वपूर्ण प्रेरणा देखाए र प्रयोगको अन्त्यमा सामान्यतया अनुत्तरदायी थिए (48 hpi), जबकि MLP-जस्तो प्रोटीनहरूले 6 hpi मा समन्वय देखाए।hpi।83A:476 र Mandelup 48 hp/in मा, लगभग सबै अन्य डाटा पोइन्टहरू अनुत्तरदायी थिए।थप रूपमा, SAM22-जस्तै प्रोटीन जीनहरूको अभिव्यक्ति प्रोफाइलहरूमा भिन्नताहरूले एन्थ्राक्नोज प्रतिरोधमा अवलोकन गरिएको परिवर्तनशीलतालाई पछ्याउँदछ, किनकि अधिक प्रतिरोधी रेखाहरूले यी जीनहरूलाई बढी संवेदनशील जीनहरू भन्दा बढी समय बिन्दुहरू उत्प्रेरित गर्दछ।अर्को LlR18A/B-जस्तै PR-10 जीनले SAM22-जस्तो प्रोटीन जीनसँग धेरै समान अभिव्यक्ति ढाँचा देखायो।
जैविक प्रक्रिया शब्द "GO: 0006952 रक्षा प्रतिक्रिया" को मुख्य घटक र Lanr1 र AnMan alleles को उम्मेदवार जीन को अभिव्यक्ति ढाँचा पहिचान गरियो।Log2 स्केलले log2 मानहरू (फोल्ड परिवर्तन) को प्रतिनिधित्व गर्दछ inoculated (Colletotrichum lupini, strain Col-08, lupin fields बाट प्राप्त, Wizhenica, Poland, 1999) र नियन्त्रण (sham-inoculated) बिरुवाहरू एकै समयमा।निम्न साँघुरो लीफ लुपिन लाइनहरू विश्लेषण गरियो: 83A: 476 (प्रतिरोधी, homozygous Lanr1 एलेल बोक्ने), बोरेगिन (प्रतिरोधी, आनुवंशिक पृष्ठभूमि अज्ञात), मन्डेलप (मध्यम प्रतिरोधी, होमोजिगस AnMan एलेल बोक्ने), र जनसंख्या 22660 ()।
थप रूपमा, RNA-seq उम्मेद्वार जीन Lanr1 (TanjilG_05042) र AnMan (TanjilG_12861) को अभिव्यक्ति प्रोफाइलहरू मूल्याङ्कन गरियो (चित्र 3)।TanjilG_05042 जीनले 83A:476 मा मात्र पहिलो पटक बिन्दु (6 hpi) मा महत्त्वपूर्ण प्रतिक्रिया (सक्रियता) देखायो, जबकि TanjilG_12861 Mandeloop मा मात्र दुई समय बिन्दुहरूमा महत्त्वपूर्ण थियो: 6 hpi (डाउन रेगुलेसन) र 24 hpi (6 hpi)।संग।)समायोज्य))।
GO:0055114 “redox process” शब्दमा सबैभन्दा धेरै ओभरएक्सप्रेस गरिएका जीनहरू साइटोक्रोम P450 प्रोटिन र पेरोक्सिडेज (चित्र 4) इन्कोडिङ गर्ने जीनहरू थिए।6 HPI मा 83A:476 बाट पृथक नमूनाहरूको लागि, अधिकतम वा न्यूनतम लग2 (फोल्ड परिवर्तन) मानहरू (86.6% जीनहरूको लागि) सामान्यतया इनोकुलेटेड र कन्ट्रोल प्लान्टहरू बीच अवलोकन गरिएको थियो, यस जीनोटाइपको उच्च प्रतिक्रियालाई हाइलाइट गर्दै।83A:476 ले सबैभन्दा महत्त्वपूर्ण GO: 0055114 DEG 6 hpi (503 जीन) मा देखाएको छ, जबकि बाँकी रेखाहरू 48 hpi मा (बोरेजिन, 31 जीन; मन्डेलप, 85 जीनहरू; र जनसंख्या 22660, 78 जीनहरू)।GO:0055114 परिवारका धेरै जसो जीनहरूमा, खोप (सक्रियता र अवरोध) को दुई प्रकारका प्रतिक्रियाहरू अवलोकन गरियो।चाखलाग्दो कुरा के छ भने, GO: 0055114 मा 48 hp मा मन्डेलुपमा GO: 0055114 शब्दका लागि पहिचान गरिएको DEGs को 97.6% सम्म यी अवलोकनहरूले सुझाव दिन्छ कि, उल्लेखनीय रूपमा सानो स्केल (अर्थात, उत्परिवर्तित रेडक्स जीनको संख्या, 85 बनाम 503) को बावजुद, विलम्बित ट्रान्सक्रिप्टोमको ढाँचामा प्रारम्भिक ट्रान्सक्रिप्टोमको प्रतिक्रियाको ढाँचा हो। ७६।बोरेजिन र जनसंख्या 22660 मा, यो अभिसरण क्रमशः 51.6% र 75.6% मा कम छ।
जैविक प्रक्रिया "GO: 0055114 Redox प्रक्रिया" को शब्द को मुख्य घटक को अभिव्यक्ति को ढाँचा प्रकट भएको थियो।Log2 स्केलले log2 मानहरू (फोल्ड परिवर्तन) को प्रतिनिधित्व गर्दछ inoculated (Colletotrichum lupini, strain Col-08, lupin fields बाट प्राप्त, Wizhenica, Poland, 1999) र नियन्त्रण (sham-inoculated) बिरुवाहरू एकै समयमा।निम्न साँघुरो लीफ लुपिन लाइनहरू विश्लेषण गरियो: 83A: 476 (प्रतिरोधी, homozygous Lanr1 एलेल बोक्ने), बोरेगिन (प्रतिरोधी, आनुवंशिक पृष्ठभूमि अज्ञात), मन्डेलप (मध्यम प्रतिरोधी, होमोजिगस AnMan एलेल बोक्ने), र जनसंख्या 22660 ()।
83A:476 C. lupini (strain Col-08) को साथ टीकाकरणमा ट्रान्सक्रिप्टोमिक प्रतिक्रियाहरूमा GO:0015979 "फोटोसिन्थेसिस" र अन्य सम्बन्धित जैविक प्रक्रियाहरू (FIG. 5) लाई एट्रिब्यूट गरिएको जीनको समन्वित मौनता पनि समावेश थियो।यो GO:0015979 DEG सेटमा 105 जीनहरू थिए जुन 6 hpi मा 83A:476 मा उल्लेखनीय रूपमा दबाइयो।यस उपसमूहमा, 22660 जनसंख्यामा 37 जीनहरू पनि मन्डेलपमा 48 HPI मा र 35 लाई एकै समयमा डाउनरेगुलेट गरिएको थियो, जसमा दुवै जीनोटाइपहरूमा सामान्य 19 DEG हरू समावेश थिए।शब्द GO: 0015979 सँग सम्बन्धित कुनै पनि DEGs कुनै पनि संयोजनमा (लाइन x समय) उल्लेखनीय रूपमा सक्रिय भएन।
जैविक प्रक्रिया "GO:0015979 प्रकाश संश्लेषण" को शब्द को मुख्य घटक को अभिव्यक्ति को ढाँचा प्रकट भएको थियो।Log2 स्केलले log2 मानहरू (फोल्ड परिवर्तन) को प्रतिनिधित्व गर्दछ inoculated (Colletotrichum lupini, strain Col-08, lupin fields बाट प्राप्त, Wizhenica, Poland, 1999) र नियन्त्रण (sham-inoculated) बिरुवाहरू एकै समयमा।निम्न साँघुरो लीफ लुपिन लाइनहरू विश्लेषण गरियो: 83A: 476 (प्रतिरोधी, homozygous Lanr1 एलेल बोक्ने), बोरेगिन (प्रतिरोधी, आनुवंशिक पृष्ठभूमि अज्ञात), मन्डेलप (मध्यम प्रतिरोधी, होमोजिगस AnMan एलेल बोक्ने), र जनसंख्या 22660 ()।
भिन्न अभिव्यक्ति विश्लेषणको नतिजाको आधारमा र सम्भवतः रोगजनक कवक विरुद्ध प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाहरूमा संलग्न, सात जीनको यो सेट वास्तविक-समय PCR (पूरक तालिका S9) द्वारा अभिव्यक्ति प्रोफाइलहरूको परिमाणीकरणको लागि चयन गरिएको थियो।
कन्ट्रोल (नक्कल) बिरुवाहरू (पूरक तालिकाहरू S10, S11) को तुलनामा सबै अध्ययन गरिएका रेखाहरू र समय बिन्दुहरूमा पुटेटिभ प्रोटीन जीन TanjilG_10657 उल्लेखनीय रूपमा प्रेरित थियो।थप रूपमा, TanjilG_10657 को अभिव्यक्ति प्रोफाइलले सबै रेखाहरूको लागि प्रयोगको क्रममा बढ्दो प्रवृत्ति देखाएको छ।जनसंख्या 22660 ले 24 HPI (चित्र 6a) मा 114-गुणा सक्रियता र उच्चतम सापेक्ष अभिव्यक्ति स्तर (4.4 ± 0.4) को साथ टीकाकरण गर्न TanjilG_10657 को उच्चतम संवेदनशीलता देखायो।PR10 LlR18A प्रोटीन जीन TanjilG_27015 ले सबै रेखाहरू र समय बिन्दुहरूमा सक्रियता देखाएको छ, धेरै डेटा बिन्दुहरूमा सांख्यिकीय महत्त्वका साथ (चित्र 6b)।TanjilG_10657 जस्तै, TanjilG_27015 को उच्चतम सापेक्ष अभिव्यक्ति स्तर 24 HPI (19.5 ± 2.4) मा 22660 टीका लगाइएको जनसंख्यामा अवलोकन गरिएको थियो।एसिड एन्डोचिटिनेज जीन TanjilG_04706 सबै रेखाहरूमा र सबै समय बिन्दुहरूमा Boregine 6 hpi (चित्र 6c) बाहेक महत्त्वपूर्ण रूपमा अपरेगुलेट गरिएको थियो।यो पहिलो पटक बिन्दु (6 HPI) मा 83A: 476 (10.5 पटक) मा बलियो रूपमा प्रेरित गरिएको थियो र अन्य रेखाहरूमा (6.6-7.5 पटक) मा मध्यम वृद्धि भयो।प्रयोगको क्रममा, TanjilG_04706 को अभिव्यक्ति 83A:476 र Boregine मा समान स्तरमा रह्यो, जबकि Mandelup र जनसंख्या 22660 मा यो उल्लेखनीय रूपमा बढ्यो, अपेक्षाकृत उच्च मानहरूमा पुग्यो (क्रमशः 5.9 ± 1.5 र 6.2 ± 1.5)।Endoglucan-1,3-β-glucosidase-like जीन TanjilG_23384 ले जनसंख्या 22660 (चित्र 6d) बाहेक सबै रेखाहरूमा पहिलो दुई समय बिन्दुहरू (6 र 12 hpi) मा उच्च सक्रियता देखायो।TanjilG_23384 को उच्चतम सापेक्ष अभिव्यक्ति स्तर दोस्रो पटक बिन्दु (12 hpi) मान्डेलप (2.7 ± 0.3) र 83A: 476 (1.5 ± 0.1) मा अवलोकन गरिएको थियो।24 HPI मा, TanjilG_23384 अभिव्यक्ति सबै अध्ययन गरिएका रेखाहरूमा अपेक्षाकृत कम थियो (0.04 ± 0.009 देखि 0.44 ± 0.12 सम्म)।
मात्रात्मक PCR द्वारा प्रकट गरिएको चयनित जीन (ag) को अभिव्यक्ति प्रोफाइल।संख्या 6, 12 र 24 खोप पछि घण्टा को प्रतिनिधित्व गर्दछ।LanDExH7 र LanTUB6 जीनहरू सामान्यीकरणको लागि प्रयोग गरिएको थियो र LanTUB6 अन्तर-श्रृंखला क्यालिब्रेसनको लागि प्रयोग गरिएको थियो।त्रुटि बारहरूले तीन जैविक प्रतिकृतिहरूमा आधारित मानक विचलनलाई प्रतिनिधित्व गर्दछ, जसमध्ये प्रत्येक तीन प्राविधिक प्रतिकृतिहरूको औसत हो। इनोकुलेटेड (Colletotrichum lupini, strain Col-08, 1999 मा Wierzenica, Poland मा लुपिन फिल्डबाट प्राप्त गरिएको) र नियन्त्रण (Mock-inoculated) बिरुवाहरू बीचको अभिव्यक्ति स्तरहरूमा भिन्नताहरूको तथ्याङ्कीय महत्त्व डेटा बिन्दुहरू (*P value <0.05, ***P value <0.05, ***⤉0. ०१)। इनोकुलेटेड (Colletotrichum lupini, strain Col-08, 1999 मा Wierzenica, Poland मा लुपिन फिल्डबाट प्राप्त गरिएको) र नियन्त्रण (Mock-inoculated) बिरुवाहरू बीचको अभिव्यक्ति स्तरहरूमा भिन्नताहरूको तथ्याङ्कीय महत्त्व डेटा बिन्दुहरू (*P value <0.05, ***P value <0.05, ***⤉0. ०१)। STATISTICHеская значимость различий в уровнях экспрессии между инокулированныmi (Colletotrichum lupini, штамм Col-08, полувнях видео рженице, Польша) и контрольными (ложно инокулированными) растениями отмечена над точками данных (*значение P < 0,05, P <0,05, P**01*** ≤ ०,००१)। अंकित (Colletotrichum lupini, strain Col-08, 1999 मा Wierzhenice, Poland मा लुपिन क्षेत्रबाट प्राप्त गरिएको) र नियन्त्रण (sham-inoculated) बिरुवाहरू बीचको अभिव्यक्ति स्तरहरूमा सांख्यिकीय रूपमा महत्त्वपूर्ण भिन्नताहरू डेटा बिन्दुहरू (*P value <0.05, **P-value **P-value 0.05, **P-value 1999) माथि उल्लेख गरिएको छ। )।接种（Colletotrichum lupini, Col-08株, 1999年从波兰Wierzenica的羽扇豆田获得）和对照（模拟接素苗顉澩復接草龍差异的统计学显着性标记在数据点上方（*P值<0.05, **P 值≤ 0.01, ***P 值≤ 0.001)।接种 （colletotrichum lupini ， color-08 株 ， 1999 年 波兰 波兰 wierzenica 的 羽扇 获得） 和 对照 弈湴 鍤 和 湴礤差异 的 统计学 显着性 标记 数据点 上方*p 值 <0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001)। STATISTICHESKI значимые различия в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамм Col-08, полученный Полученный, Полученный Полученный, ओल्शा, १९९९ मा ENIE ≤ 0,001)। इनोकुलेटेड (Colletotrichum lupini, strain Col-08, Verzhenice, Poland, 1999 मा लुपिन क्षेत्रहरूबाट प्राप्त गरिएको) र नियन्त्रण (sham-inoculated) बिरुवाहरू बीचको अभिव्यक्ति स्तरहरूमा सांख्यिकीय रूपमा महत्त्वपूर्ण भिन्नताहरू डेटा बिन्दुहरू (*P value <0.05, **P-value <0.05, **P-value ≤0.***P-value) माथि उल्लेख गरिएको छ। १)NLL रेखाहरू विश्लेषण गरिएका थिए: 83A: 476 (प्रतिरोधी, homozygous Lanr1 allele बोक्ने), Mandelup (मध्यम प्रतिरोधी, homozygous AnMan allele बोक्ने), बोरेगिन (प्रतिरोधी, अज्ञात आनुवंशिक पृष्ठभूमि) र जनसंख्या 22660 (संवेदनशील)।
Lanr1 लोकसमा उम्मेद्वार जीन TanjilG_05042 ले RNA-seq अध्ययनहरू (चित्र 6e) बाट प्राप्त प्रोफाइलहरूबाट स्पष्ट रूपमा फरक अभिव्यक्ति ढाँचा देखायो।यस जीनको महत्त्वपूर्ण सक्रियता मन्डेलुप र 22660 जनसंख्या (क्रमशः 39.7 र 11.7 पटक सम्म) मा अवलोकन गरिएको थियो, परिणामस्वरूप अपेक्षाकृत उच्च अभिव्यक्ति स्तरहरू (क्रमशः 1.4 ± 0.14 र 7.2 ± 1.3 सम्म)।83A:476 ले TanjilG_05042 जीन (3.8-गुणा सम्म) को केही अपरेग्युलेसन पनि प्रकट गर्‍यो, तथापि, प्राप्त सापेक्ष अभिव्यक्ति स्तरहरू (0.044 ± 0.002) Mandelup र 22660 जनसंख्यामा अवलोकन गरिएका भन्दा 30-गुना भन्दा कम थिए।qPCR द्वारा विश्लेषणले नक्कली खोप (नियन्त्रण) भेरियन्टहरूमा जीनोटाइपहरू बीचको अभिव्यक्ति स्तरहरूमा महत्त्वपूर्ण भिन्नताहरू देखायो, जनसंख्या 22660 र 83A: 476 बीचको 58-गुणा भिन्नतामा पुग्यो, साथै जनसंख्या 22660 र 22660 बीचमा। एक दुई गुणा र Boddalupine बीचको भिन्नता प्राप्त भयो।
AnMan लोकस, TanjilG_12861 मा उम्मेदवार जीन, 83A:476 मा खोपको प्रतिक्रियामा सक्रिय भएको थियो र Mandelup, 22660 जनसंख्यामा तटस्थ थियो, र बोरेजिन (चित्र 6f) मा घटाइएको थियो।TanjilG_12861 जीनको सापेक्ष अभिव्यक्ति 83A: 476 (0.14±0.01) मा उच्चतम थियो।17.4 kDa क्लास I गर्मी झटका प्रोटीन जीन TanjilG_05080 HSP17.4 ले सबै अध्ययन गरिएको स्ट्रेन र समय बिन्दुहरूमा कम सापेक्ष अभिव्यक्ति स्तरहरू देखायो (चित्र 6g)।उच्चतम मान 22660 जनसंख्यामा 24 HPI मा अवलोकन गरिएको थियो (0.14 ± 0.02, खोपको प्रतिक्रियामा आठ गुणा वृद्धि)।
जीन अभिव्यक्ति प्रोफाइलहरूको तुलना (चित्र 7) ले TanjilG_10657 र अन्य चार जीनहरू बीच उच्च सहसंबंध प्रकट गर्‍यो: TanjilG_27015 (r = 0.89), TanjilG_05080 (r = 0.85), TanjilG_05042 (r = 0.708), र = 0.70 tanjil।त्यस्ता नतिजाहरूले रक्षा प्रतिक्रियाहरूको समयमा यी जीनहरूको सह-नियमनलाई संकेत गर्न सक्छ।TanjilG_12861 र TanjilG_23384 जीनहरूले अन्य जीनको तुलनामा कम पियर्सन सहसम्बन्ध गुणांक मानहरू (क्रमशः ०.०८ देखि ०.४३ र -०.१९ देखि ०.२८ सम्म) विभिन्न अभिव्यक्ति प्रोफाइलहरू देखाए।
जीन अभिव्यक्ति प्रोफाइलहरू बीचको सम्बन्ध मात्रात्मक पीसीआर प्रयोग गरेर पत्ता लगाइयो।निम्न संकीर्ण लुपिन लाइनहरू विश्लेषण गरियो: 83A: 476 (प्रतिरोधी, homozygous Lanr1 एलिल बोक्ने), Mandelup (मध्यम प्रतिरोधी, homozygous AnMan एलेल बोक्ने), बोरेजिन (प्रतिरोधी, आनुवंशिक पृष्ठभूमि अज्ञात), र जनसंख्या 22660 (प्रतिरोधी)।तीन समय बिन्दुहरू गणना गरिएको थियो (इनोकुलेशन पछि 6, 12 र 24 घण्टा), इनोकुलेटेड (Colletotrichum lupini, strain Col-08, Wierzhenice, Poland, 1999 मा लुपिन क्षेत्रहरूबाट प्राप्त गरिएको) र नियन्त्रण (sham-inoculation) बिरुवाहरू सहित।मापनले Pearson सहसंबंध गुणांकको मान देखाउँछ।
6 अश्वशक्ति प्रति इन्चमा प्राप्त डाटाको आधारमा, WGCNA प्रारम्भिक प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाहरूमा ध्यान केन्द्रित गर्न inoculated र नियन्त्रण प्लान्टहरू तुलना गरेर पहिचान गरिएको 9981 DEG मा प्रदर्शन गरिएको थियो (पूरक तालिका S12)।जीनोटाइपहरू र प्रयोगात्मक भेरियन्टहरू बीचको सहसम्बन्धित (सकारात्मक वा नकारात्मक) अभिव्यक्ति प्रोफाइलहरूसँग बाईस जीन मोड्युलहरू (क्लस्टरहरू) फेला परे। औसतमा, जीन अभिव्यक्ति स्तरहरू 83A:476 > Mandelup > Boregine > जनसंख्या 22660 मा घट्दै गएको थियो (यद्यपि, यो प्रवृत्ति नियन्त्रण बिरुवाहरूमा बलियो थियो)। औसतमा, जीन अभिव्यक्ति स्तरहरू 83A:476 > Mandelup > Boregine > जनसंख्या 22660 मा घट्दै गएको थियो (यद्यपि, यो प्रवृत्ति नियन्त्रण बिरुवाहरूमा बलियो थियो)। В среднем уровни экспрессии генов снижались в порядке 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 ट्रोलन्ых растений)। औसतमा, 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 मा जीन अभिव्यक्तिको स्तर घट्यो (यद्यपि, यो प्रवृत्ति नियन्त्रण बिरुवाहरूमा बलियो थियो)।平均而言，基因表达水平按83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660植物中更强)।平均 而 言, 基因 水平 按 83a: 476> mandelup> boregine> जनसंख्या २२६६०更)।।।।।।।।।।।।।।।।।।।।।।।।।।।।। В среднем уровни экспрессии генов снижались в ряду 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 х растений)। औसतमा, 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 श्रृंखलामा जीन अभिव्यक्तिको स्तर घट्यो (यद्यपि, दुवै भेरियन्टहरूमा, यो प्रवृत्ति नियन्त्रण बिरुवाहरूमा बलियो थियो)।खोपले विशेष गरी मोड्युल 18, 19, 14, 6 र 1 (प्रभावको घट्दो क्रममा), नकारात्मक नियमन (जस्तै मोड्युल 9 र 20) वा तटस्थ प्रभावहरू (जस्तै मोड्युल 11, 22, 8 र 13) मा जीन अभिव्यक्तिको अपरेग्युलेसनको परिणाम दिन्छ।GO शब्द संवर्धन विश्लेषण (पूरक तालिका S13) ले qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_233381, TanjilG_233381, TanjilG_233381, TanjilG_233381, TanjilG_04706, TanjilG_233381, TanjilG_04706, TanjilG_233381, TanjilG_04706, TanjilG_233381, TanjilG_04706) सहित अधिकतम सक्रियता सहितको इनोकुलेटेड मोड्युल (18) को लागि "GO: 0006952 सुरक्षात्मक प्रतिक्रियाहरू" प्रकट गरेको छ। धेरै इनोक्युलेट सबैभन्दा दबाइएका प्रकाश संश्लेषण मोड्युलहरू (९)।मोड्युल 18 कन्सेन्ट्रेटर (चित्र 8) लाई PR-10-जस्तो LlR18B प्रोटिनलाई एन्कोड गर्ने TanjilG_26536 जीनको रूपमा पहिचान गरिएको थियो, र मोड्युल 9 कन्सेन्ट्रेटरलाई TanjilG_28955 जीनको रूपमा फोटोसिस्टम II PsbQ प्रोटिनलाई सङ्केत गर्ने गरी पहिचान गरिएको थियो।एक उम्मेद्वार एन्थ्राकोनोज प्रतिरोधी जीन Lanr1, TanjilG_05042, मोड्युल 22 (चित्र 9) मा फेला परेको थियो र "GO:0044260 सेल्युलर म्याक्रोमोलिक्युलर मेटाबोलिक प्रक्रियाहरू" र "GO:0006355 ट्रान्सक्रिप्शनल टेम्प्लेटिङ, ट्यान्जिल 20201000200006355 ट्रान्सक्रिप्शनल टेम्प्लेटिङ, टेम्प्लेटिङ टेम्प्लेटिङ"जीनले तातो तनाव ट्रान्सक्रिप्शन कारक A-4a (HSFA4a) लाई एन्कोड गर्दछ।
ओभरप्रेजेन्टेड जैविक प्रक्रिया सर्तहरू "GO: 0006952 रक्षा प्रतिक्रियाहरू" को साथ मोड्युलहरूको जीन सह-अभिव्यक्तिको भारित नेटवर्क विश्लेषण।qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 र TanjilG_27015) द्वारा विश्लेषण गरिएका चार जीनहरूलाई हाइलाइट गर्न Ligation सरलीकृत गरिएको थियो।
एक ओभरप्रिजेन्टेड जैविक प्रक्रिया शब्द "GO: 0006355: ट्रान्सक्रिप्शनल नियमन, DNA टेम्प्लेटिंग" र एक उम्मेदवार एन्थ्राकनोज प्रतिरोध जीन Lanr1 TanjilG_05042 बोक्ने एक मोड्युलको जीन सह-अभिव्यक्तिको भारित नेटवर्क विश्लेषण।TanjilG_05042 जीन र केन्द्रीय TanjilG_01212 जीनलाई अलग गर्न Ligation सरलीकृत गरिएको थियो।
अष्ट्रेलियामा सङ्कलन गरिएको एन्थ्राकनोज प्रतिरोधी स्क्रिनिङले देखायो कि प्रारम्भिक रिलीज गरिएका धेरैजसो प्रजातिहरू संवेदनशील थिए;काल्या, कोरोमप र मन्डेलपलाई मध्यम प्रतिरोधीका रूपमा वर्णन गरिएको छ, जबकि वोंगा, तान्जिल र 83A:476 लाई अत्यधिक प्रतिरोधी २६,२७,३१ को रूपमा वर्णन गरिएको छ।एउटै रेजिस्टेन्स एलील थियो, नामित Lanr1, र Coromup र Mandelup सँग फरक एलिल थियो, नामित AnMan10, 26, 39, जबकि Kalya फरक एलेलमा गए।, Lanr2।जर्मनीमा एन्थ्राकनोज प्रतिरोधको लागि स्क्रिनिङले LanrBo36 नामित Lanr1 बाहेक अन्य उम्मेद्वार एलेलसँग प्रतिरोधी रेखा Bo7212 को पहिचान गर्‍यो।
हाम्रो अध्ययनले परीक्षण गरिएको जर्मप्लाज्ममा Lanr1 एलिलको धेरै कम आवृत्ति (लगभग 6%) प्रकट गर्‍यो।यो अवलोकन Anseq3 र Anseq4 मार्करहरू प्रयोग गरेर पूर्वी युरोपेली जर्मप्लाज्मको स्क्रिनिङको नतिजासँग मिल्दोजुल्दो छ, जसले Lanr1 एलेल मात्र दुई बेलारूसी रेखाहरूमा रहेको देखाएको छ।यसले सुझाव दिन्छ कि Lanr1 एलेल अझै पनि स्थानीय प्रजनन कार्यक्रमहरू द्वारा व्यापक रूपमा प्रयोग गरिएको छैन, अस्ट्रेलियामा विपरीत, जहाँ यो मार्कर-सहायता प्रजननका लागि प्रमुख एलिलहरू मध्ये एक हो।यो अष्ट्रेलियाको रिपोर्टको तुलनामा युरोपेली क्षेत्र परिस्थितिहरूमा Lanr1 एलेलद्वारा प्रदान गरिएको प्रतिरोधको निम्न स्तरको कारण हुन सक्छ।थप रूपमा, अष्ट्रेलियामा उच्च वर्षा हुने क्षेत्रहरूमा एन्थ्राकोनोजको अध्ययनले देखायो कि Lanr1 एलिलद्वारा मध्यस्थता गरिएको प्रतिरोधात्मक प्रतिक्रियाहरू रोगजनकको वृद्धि र द्रुत विकासलाई समर्थन गर्ने मौसममा प्रभावकारी नहुन सक्छ।वास्तवमा, हालको अध्ययनमा, एन्थ्राकनोजका केही लक्षणहरू Lanr1 एलिल बोक्ने जीनोटाइपहरूमा पनि देखिएका थिए, जसले सी. लुपिनीको विकासको लागि इष्टतम परिस्थितिहरूमा प्रतिरोध हराउन सक्छ भन्ने सुझाव दिन्छ।थप रूपमा, Anseq3 र Anseq4 मार्करहरूको उपस्थितिको गलत सकारात्मक व्याख्याहरू, जुन Lanr1 लोकसबाट लगभग 1 सेमी हो, सम्भव छ 28,30,43।
हाम्रो अध्ययनले देखायो कि 83A:476, Lanr1 एलेल बोक्ने, पहिलो विश्लेषण गरिएको समय बिन्दु (6 hpi) मा ठूलो मात्रामा ट्रान्सक्रिप्टोम रिप्रोग्रामिङको साथ C. लुपिनी इनोकुलेशनलाई प्रतिक्रिया दियो, जबकि Mandelup मा, AnMan एलेल बोक्ने, ट्रान्सक्रिप्टोमिक प्रतिक्रियाहरू धेरै पछि अवलोकन गरियो।(24 देखि 48 hp सम्म)।प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाहरूमा यी अस्थायी भिन्नताहरू रोग लक्षणहरूमा भिन्नताहरूसँग सम्बन्धित छन्, प्रतिरोधको सफल प्रतिक्रियाको लागि प्रारम्भिक रोगजनक पहिचानको महत्त्वलाई हाइलाइट गर्दै।बिरुवाको तन्तुलाई संक्रमित गर्नको लागि, एन्थ्र्याक्स स्पोरहरूले मेजबान सतहमा धेरै विकास चरणहरू पार गर्नुपर्छ, जसमा अंकुरण, कोशिका विभाजन, र एप्रेसोरियमको गठन समावेश छ।एपेन्डेज एक संक्रामक संरचना हो जुन होस्टको सतहमा संलग्न हुन्छ र होस्ट टिश्युहरूमा प्रवेशलाई सुविधा दिन्छ।यसरी, मटरको अर्कमा C. gloeosporioides को बीजाणुहरूले इन्क्युबेशनको 75-90 मिनेट पछि न्यूक्लियसको पहिलो विभाजन, 90-120 मिनेट पछि एक कीटाणु ट्यूबको गठन, र 4 घण्टा पछि दमन देखायो।मङ्गो सी. ग्लोओस्पोरियोइड्सले इन्क्युबेशनको ३ घण्टापछि ४०% भन्दा बढी कोनिडियल अंकुरण देखाएको छ र ४ घण्टापछि करिब २०% एप्रेसरको गठन भएको छ।C. gloeosporioides को वायरलन्स-सम्बन्धित CAP20 जीनले 4 घन्टा 46 मिनेट पछि CAP20 प्रोटीनको उच्च सांद्रताको साथ एभोकाडो सतह मोममा 3.5 घन्टा इन्क्युबेशन पछि एपिफाइट-फर्मिंग कोनिडियामा ट्रान्सक्रिप्शनल गतिविधि देखायो।त्यसैगरी, C. trifolii मा मेलानिन बायोसिन्थेसिस जीनको गतिविधि 2-घण्टा इन्क्युबेशनको समयमा प्रेरित भएको थियो र 1 घण्टा पछि एक एप्रेसोरियम गठन भयो।पातको तन्तुहरूको अध्ययनले देखाएको छ कि C. acutatum बाट इनोक्युलेसन गरिएको स्ट्रबेरीमा 8 hpi मा पहिलो दमन हुन्छ, जबकि C. coccodes को साथ टमाटरमा 4 hpi48,49 मा पहिलो दमन हुन्छ।Coletotrichum spp को समय मापन संग धेरै हदसम्म संगत।संक्रामक प्रक्रिया।83A:476 को द्रुत प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाहरूले यस लाइनमा बिरुवा प्रतिरोध र प्रभावकारी-ट्रिगर-ट्रिगर इम्युनिटी (ETI) जीनहरूको संलग्नताको सुझाव दिन्छ, जबकि Mandelup को ढिलाइ प्रतिक्रियाहरूले माइक्रो-सम्बन्धित आणविक ढाँचा-ट्रिगर इम्युनिटी (MTI) परिकल्पनालाई समर्थन गर्दछ।ढिलो प्रतिक्रियामा माथि वा तल-विनियमित जीनहरू बीचको आंशिक ओभरल्यापले पनि यस अवधारणालाई समर्थन गर्दछ, किनकि ETI लाई प्रायः एक द्रुत र परिष्कृत MTI प्रतिक्रिया मानिन्छ जुन संक्रमणको साइटमा प्रोग्राम गरिएको सेल मृत्युमा परिणत हुन्छ, जसलाई anaphylactic shock 51,52 भनिन्छ।
जीन ओन्टोलजी GO: 0006952 "डिफेन्स रिस्पोन्स" लाई ओभरप्रेसेन्ट गरिएको शब्दलाई श्रेय दिएका अधिकांश जीनहरू तनाव-प्रेरित उपवास सन्देश 22 प्रोटीन (एसएएम२२ जस्तै) र सात प्रमुख लेटेक्स प्रोटीन-लाइक (एमएलपी) को 11 होमलोगहरू हुन्।-जस्तै प्रोटीन 31, 34, 43 र 423 ले अनुक्रम समानता देखायो।SAM22-जस्तै जीनहरूले लामो समयसम्म चल्ने महत्त्वपूर्ण सक्रियता देखाए, एन्थ्राकनोज प्रतिरोधको बढ्दो स्तरहरू देखाउँदै (83A:476 र Boregine)।यद्यपि, MLP-जस्तै जीनहरू उम्मेदवार प्रतिरोधी एलेल (८३ए:४७६/ल्यान्र१ मा ६ एचपीआई र २४ एचपीआईमा मन्डेलप/अनमान) बोक्ने लाइनहरूमा मात्रै घटाइएको थियो।यो ध्यान दिनुपर्छ कि सबै पहिचान गरिएका SAM22-जस्तै होमोलोगहरू लगभग 105 kb फैलिएको जीन क्लस्टरबाट उत्पन्न हुन्छन्, जबकि MLP-जस्तो जीनहरू जीनोमको अलग-अलग क्षेत्रहरूबाट उत्पन्न हुन्छन्।त्यस्ता SAM22-जस्तै जीनहरूको समन्वित सक्रियता हाम्रो अघिल्लो अध्ययनमा पनि फेला परेको थियो NLL प्रतिरोधको Diaporthetoxica inoculation, सुझाव दिन्छ कि तिनीहरू प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाको तेर्सो घटकहरूमा संलग्न छन्।यो निष्कर्षलाई SAM22-जस्तो जीनको चोटपटक वा सेलिसिलिक एसिड, फङ्गल इन्ड्युसरहरू, वा हाइड्रोजन पेरोक्साइडको उपचारमा सकारात्मक प्रतिक्रियाको रिपोर्टहरूद्वारा पनि समर्थन गरिएको छ।
MLP-जस्तै जीनहरूले धेरै बिरुवा प्रजातिहरूमा ब्याक्टेरिया, भाइरल र रोगजनक फंगल संक्रमण सहित विभिन्न अजैविक र जैविक तनावहरूमा प्रतिक्रिया देखाएको छ।बोटबिरुवा र रोगजनकहरू बीचको केही अन्तरक्रियाको प्रतिक्रियाको दिशाहरू कडा रूपमा बढेको (अर्थात्, भर्टिसिलियम डाहलियाको साथ कपासको प्रकोपको समयमा) देखि उल्लेखनीय रूपमा घट्ने (अर्थात्, अल्टरनेरिया एसपीपीसँग स्याउको रूखको संक्रमण पछि।) 56,57 सम्म।F. नाइजर संक्रमण र स्याउको रूख Botryosphaeria berengeriana f को संक्रमणको समयमा एभोकाडो प्रतिरक्षाको क्रममा MLP-जस्तो 423 जीनको महत्त्वपूर्ण डाउनरेगुलेसन देखियो।cn।पिरिकोला र अल्टरनेरिया अल्टरनाटा स्याउ रोगको प्रकार ५८,५९ हुन्।थप रूपमा, सेब कालीले MLP-जस्तो 423 जीनलाई ओभरएक्सप्रेस गर्ने प्रतिरोध-सम्बन्धित जीनको कम अभिव्यक्ति थियो र फंगल संक्रमणको लागि बढी संवेदनशील थियो।Fusarium oxysporum f पछि, MLP-जस्तो 423 जीनलाई प्रतिरोधी साझा बीन जर्मप्लाज्ममा पनि दबाइयो।cn।बीन संक्रमण 60.
हाम्रो RNA-seq अध्ययनमा पहिचान गरिएका PR-10 परिवारका अन्य सदस्यहरू अपरेगुलेसनको प्रतिक्रियामा LlR18A र LlR18B जीनहरू थिए, साथै लिपिड ट्रान्सफर प्रोटीन DIR1 को लागि अपरेगुलेट (1 जीन) वा डाउनरेगुलेट (3 जीन) जीन।।थप रूपमा, WGCNA ले LlR18B जीनलाई यस मोड्युलमा हबको रूपमा हाइलाइट गर्दछ, जुन खोपको लागि अत्यधिक संवेदनशील छ र धेरै सुरक्षात्मक प्रतिक्रिया जीनहरू बोक्छ।LlR18A र LlR18B जीनहरू रोगजनक ब्याक्टेरियाको प्रतिक्रियामा पहेँलो लुपिन पातहरूमा उत्प्रेरित भएका थिए, साथै D. toxica inoculation पछि NLL काण्डहरूमा, जबकि यी जीनहरूको चामल होमोलोग, RSOsPR10, द्रुत रूपमा फंगल एसिड संक्रमणमा संलग्न भएको थियो। DIR1 जीनले प्रणालीगत अधिग्रहण प्रतिरोध (SAR) को शुरुवातको लागि आवश्यक नॉन-स्पेसिफिक लिपिड ट्रान्सपोर्ट प्रोटीनहरू एन्कोड गर्दछ।सुरक्षात्मक प्रतिक्रियाहरूको विकासको साथ, DIR1 प्रोटिनलाई संक्रमणको केन्द्रबिन्दुबाट टाढाका अंगहरूमा SAR उत्प्रेरित गर्न फ्लोम मार्फत सारिन्छ।चाखलाग्दो कुरा के छ भने, TanjilG_02313 DIR1 जीन लाई 84A:476 र जनसंख्या 22660 लाई पहिलो पटक बिन्दुमा उल्लेखनीय रूपमा प्रेरित गरिएको थियो, तर एन्थ्राकनोज प्रतिरोध केवल लाइन 84A:476 मा सफलतापूर्वक विकसित भयो।यसले NLL मा DIR1 जीनको केही सब-फंक्शनलाइजेसनलाई संकेत गर्न सक्छ, किनकि बाँकी तीन homologues 6 hpi मा 83A: 476 लाइनमा मात्र टीकाकरणलाई प्रतिक्रिया दिए, र यो प्रतिक्रिया तलतिर निर्देशित गरिएको थियो।
हाम्रो अध्ययनमा, "GO: 0055114 Redox प्रक्रिया" भनिने जैविक प्रक्रियासँग मिल्दोजुल्दो सबैभन्दा सामान्य कम्पोनेन्टहरू साइटोक्रोम P450 प्रोटीन, पेरोक्सिडेज, लिनोलिक एसिड 9S-/13S-lipoxygenase, र 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase थिए।थप रूपमा, हाम्रो WGCNA ले HSFA4a homologue लाई Lanr1 प्रतिरोध जीन उम्मेद्वार TanjilG_05042 जस्ता मोड्युलहरू बोक्ने हबको रूपमा परिभाषित गर्दछ।HSFA4a बिरुवाहरूमा आणविक ट्रान्सक्रिप्शनको रेडक्स-निर्भर नियमनको एक भाग हो।
Cytochrome P450 प्रोटीनहरू oxidoreductases हुन् जसले NADPH र/वा O2-निर्भर हाइड्रोक्सीलेसन प्रतिक्रियाहरूलाई प्राथमिक र माध्यमिक चयापचयमा उत्प्रेरित गर्दछ, जसमा xenobiotics को चयापचय, साथै हर्मोन, फ्याटी एसिड, स्टेरोल, सेल पर्खाल कम्पोनेन्टहरू, बायोपोलिमरहरू, र हाम्रो अध्ययनमा बायोपोलिमर, र 6 को बायोपोलिमरको सुरक्षा हुन्छ। प्लान्ट साइटोक्रोम P450 प्रकार्य -10.6 लग2 (फोल्ड परिवर्तन) बाट 5.7 मा घटाइएको होमोलोगहरू (37) र विशिष्ट जीनहरू बीचको प्रतिक्रिया ढाँचामा भिन्नताहरूको कारणले गर्दा, माथिको संशोधनलाई प्रतिबिम्बित गर्दछ।।यति ठूलो प्रोटीन सुपरफैमिलीमा एनएलएल जीनको पुटेटिभ जैविक कार्यलाई स्पष्ट गर्न केवल आरएनए-सेक डाटा प्रयोग गर्नु अत्यधिक सट्टा हो।यद्यपि, यो ध्यान दिन लायक छ कि केहि साइटोक्रोम P450 जीनहरू एलर्जी प्रतिक्रियाहरू 69,70,71 मा योगदान सहित, रोगजनक फंगी वा ब्याक्टेरियाको प्रतिरोध वृद्धिसँग सम्बन्धित छन्।
क्लास III पेरोक्सिडेसहरू बिरुवाको बृद्धि र विकासको क्रममा चयापचय प्रक्रियाहरूको विस्तृत श्रृंखलामा संलग्न हुने बहु-कार्यात्मक प्लान्ट इन्जाइमहरू हुन्, साथै लवणता, खडेरी, उच्च प्रकाश तीव्रता, र रोगजनक आक्रमण72 जस्ता वातावरणीय तनावहरूको प्रतिक्रियामा।पेरोक्सिडेसहरू एन्थ्रासिससँग धेरै बोट प्रजातिहरूको अन्तरक्रियामा संलग्न छन्, जसमा स्टाइलोस्यान्थेस ह्युमिलिस र सी. ग्लोओस्पोरियोइड्स, लेन्स कुलिनारिस र सी. ट्रनकाटम, फेसेओलस वल्गारिस र सी. लिन्डेमुथियानम, कुकुमिस सेटिभस र सी. लेजेनेरियम 73,76,74, 73।प्रतिक्रिया धेरै छिटो हुन्छ, कहिलेकाहीँ 4 HPI मा पनि, फंगसले बिरुवाको तन्तुमा प्रवेश गर्नु अघि73।पेरोक्सिडेज जीनले पनि D. toxica NLL टीकाकरणलाई प्रतिक्रिया दियो।अक्सिडेटिभ फटलाई विनियमित गर्न वा अक्सिडेटिभ तनाव हटाउनको लागि तिनीहरूको विशिष्ट कार्यहरूको अतिरिक्त, पेरोक्सिडेसहरूले लिग्निफिकेशन, सब्युनिट वा विशिष्ट यौगिकहरूको क्रस-लिङ्किङको क्रममा सेल पर्खाल सुदृढीकरणमा आधारित भौतिक अवरोधहरू सिर्जना गरेर रोगजनक वृद्धिमा हस्तक्षेप गर्न सक्छ।यस प्रकार्यलाई सिलिकोमा श्रेय दिन सकिन्छ TanjilG_03329 जीन एन्कोडिङ पुटेटिभ लिग्निन-फर्मिंग एनियन पेरोक्सिडेज जुन हाम्रो अध्ययनमा 6 HPI मा 83A:476 प्रतिरोधी रेखामा महत्त्वपूर्ण रूपमा अपरेगुलेट गरिएको थियो, तर प्रतिक्रिया नगर्ने अन्य स्ट्रेन र समय बिन्दुहरूमा होइन।
लिनोलिक एसिडको 9S-/13S-lipoxygenase लिपिड जैव संश्लेषण78 को अक्सिडेटिभ मार्गमा पहिलो चरण हो।यस मार्गका उत्पादनहरूले बिरुवाको रक्षामा धेरै कार्यहरू गर्दछ, जसमा कोलोज र पेक्टिन निक्षेपहरूको गठनको माध्यमबाट सेल पर्खाल सुदृढीकरण, र प्रतिक्रियाशील अक्सिजन प्रजातिहरू 79,80,81,82,83 को उत्पादन मार्फत अक्सिडेटिभ तनावको नियमन समावेश छ।हालको अध्ययनमा, लिनोलिक एसिड 9S-/13S-lipoxygenase को अभिव्यक्ति सबै स्ट्रेनहरूमा परिवर्तन गरिएको थियो, तर संवेदनशील जनसंख्या 22660 मा, विभिन्न समय बिन्दुहरूमा अपरेग्युलेसन प्रबल भयो, जबकि प्रतिरोधी Lanr1 र AnMan एलेल बोक्ने स्ट्रेनहरूमा, यसले यी लिपोक्सिजन लेयरहरू बीचको विभिन्न प्रतिक्रियाहरूलाई जोड दिन्छ। ।
1-aminocyclopropane-1-carboxylate oxidase (ACO) homologue महत्वपूर्ण रूपमा अपरेगुलेट गरिएको थियो (9 जीन) वा डाउनरेगुलेट (2 जीन) जब लुपिनको साथ टीका लगाइएको थियो।दुई अपवादको साथ, यी सबै प्रतिक्रियाहरू 6 hp मा भयो।83A:476 मा।ACO प्रोटीनहरू द्वारा मध्यस्थता गरिएको इन्जाइम्याटिक प्रतिक्रिया इथिलीन उत्पादनमा दर-सीमित चरण हो र त्यसैले अत्यधिक विनियमित छ।इथिलीन एक बिरुवा हर्मोन हो जसले बिरुवाको विकास र अजैविक र जैविक तनाव अवस्थाहरूको प्रतिक्रियालाई विनियमित गर्न विभिन्न भूमिका खेल्छ।ACO ट्रान्सक्रिप्शनको इन्डक्शन र इथिलीन सिग्नलिंग मार्गको सक्रियता प्रतिक्रियाशील अक्सिजन प्रजाति र फाइटोअलेक्सिनको उत्पादनलाई विनियमित गरेर हेमिबायोट्रोफिक फंगस ओरिजा ओरिजामा चामलको प्रतिरोध बढाउनमा संलग्न छ।M. oryzae र C. lupini88,89 को बीचमा पाइने धेरै समान पात संक्रमण प्रक्रिया, यस अध्ययनमा रिपोर्ट गरिएको 83A:476 रेखामा ACO homologues को एक महत्वपूर्ण अपरेग्युलेसनको पृष्ठभूमिमा, NLL anthracnose Ethylene लाई एक मोटोक्युलर सेन्ट्रल स्टेपमा प्रतिरोध प्रदान गर्ने सम्भावनालाई परिवर्तन गर्दछ।
हालको अध्ययनमा, 83A:476 मा 6 hpi मा र Mandeloop र 22660 जनसंख्यामा 48 hpi मा प्रकाश संश्लेषणसँग सम्बन्धित धेरै जीनहरूको ठूलो मात्रामा दमन देखियो।यी परिवर्तनहरूको विस्तार र प्रगति स्तरको समानुपातिक छ।यस प्रयोगमा एन्थ्राकनोज प्रतिरोधी देखियो।भर्खरै, रोगजनक ब्याक्टेरिया र कवक सहित बोट-प्याथोजेन अन्तरक्रियाका धेरै मोडेलहरूमा प्रकाश संश्लेषण-सम्बन्धित ट्रान्सक्रिप्टहरूको बलियो र प्रारम्भिक दमन रिपोर्ट गरिएको छ।हतार (केही अन्तरक्रियामा 2 HPI बाट) र संक्रमणको प्रतिक्रियामा प्रकाश संश्लेषणसँग सम्बन्धित जीनहरूको विश्वव्यापी दमनले प्रतिक्रियाशील अक्सिजन प्रजातिहरूको तैनाती र एलर्जी प्रतिक्रियाहरू मध्यस्थता गर्न सैलिसिलिक एसिड मार्गसँग तिनीहरूको अन्तरक्रियामा आधारित बिरुवाको प्रतिरोधात्मक क्षमतालाई ट्रिगर गर्न सक्छ 90,94।
अन्तमा, सबैभन्दा प्रतिरोधी वंश (83A:476) को लागि प्रस्तावित प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया संयन्त्रहरूमा R जीन (सम्भवतः TIR-NBS-LRR TanjilG_05042) द्वारा द्रुत रोगजनक पहिचान र एलर्जी प्रतिक्रिया-मध्यस्थता सेलिसिलिक एसिड र एथिलीन एस-एआरको लामो-रेन्ज संकेत, स्थापना।कार्य DIR-1 प्रोटीन द्वारा समर्थित छ।यो ध्यान दिनुपर्छ कि सी. लुपिनी संक्रमणको लागि बायोट्रोफिक अवधि धेरै छोटो हुन्छ (लगभग 2 दिन), त्यसपछि नेक्रोटिक वृद्धि 95।यी चरणहरू बीचको संक्रमण नेक्रोसिस र इथिलीन-इन्ड्युसिबल प्रोटीनहरूको अभिव्यक्तिसँग सम्बन्धित हुन सक्छ जुन होस्ट बिरुवाहरूमा अतिसंवेदनशीलता प्रतिक्रियाहरूको लागि ट्रिगरको रूपमा कार्य गर्दछ।तसर्थ, बायोट्रोफिक चरणमा सी. लुपिनीको सफल क्याप्चरको लागि समय विन्डो धेरै साँघुरो छ।83A:476 मा 6 hpi मा अवलोकन गरिएको redox र प्रकाश संश्लेषणसँग सम्बन्धित जीनको पुनप्रोग्रामिङ फङ्गल हाइफेको प्रगतिसँग मेल खान्छ र बायोट्रोफिक चरणमा सफल सुरक्षात्मक प्रतिक्रियाको विकासको घोषणा गर्दछ।Mandelup र 22660 जनसंख्याको ट्रान्सक्रिप्टोमिक प्रतिक्रियाहरू नेक्रोटिक वृद्धिमा स्विच गर्नु अघि फंगस कब्जा गर्न धेरै ढिलाइ हुन सक्छ, तथापि, मन्डेलप 22660 जनसंख्या भन्दा बढी प्रभावकारी हुन सक्छ किनभने PR-10 प्रोटीनको तुलनात्मक रूपमा छिटो नियमनले तेर्सो प्रतिरोधलाई बढावा दिन्छ।
ईटीआई, क्यानोनिकल आर जीन द्वारा संचालित, एन्थ्राकोनोज को बीन प्रतिरोध को लागी एक सामान्य संयन्त्र जस्तो देखिन्छ।यसरी, मोडेल फलफूल Medicago truncatula मा, anthracnose को प्रतिरोध RCT1 जीन द्वारा प्रदान गरिएको छ, TIR-NBS-LRR97 प्लान्ट R जीन वर्ग को सदस्य।यो जीनले अतिसंवेदनशील बिरुवाहरूमा स्थानान्तरण गर्दा अल्फाल्फामा व्यापक-स्पेक्ट्रम एन्थ्राकनोज प्रतिरोध पनि प्रदान गर्दछ।साधारण बीन (P. vulgaris) मा, दुई दर्जन भन्दा बढी anthracnose प्रतिरोध जीन आज सम्म पहिचान गरिएको छ।यी मध्ये केही जीनहरू कुनै पनि क्यानोनिकल आर जीन नभएको क्षेत्रहरूमा पाइन्छ, तर अरू धेरैहरू TIR-NBS-LRRs99 सहित NBS-LRR जीन क्लस्टर बोक्ने क्रोमोजोमहरूको किनारमा अवस्थित छन्।जीनोम-विस्तृत SSR अध्ययनले एनबीएस-एलआरआर जीनको साझा बीनमा एन्थ्राकनोज प्रतिरोधको साथको सम्बन्धलाई पनि पुष्टि गर्‍यो।क्यानोनिकल आर जीन पनि सेतो लुपिन 101 मा प्रमुख एन्थ्राकनोज प्रतिरोधी लोकस बोक्ने जीनोमिक क्षेत्रमा फेला पर्यो।
हाम्रो कामले देखाउँछ कि बिरुवाको संक्रमणको प्रारम्भिक चरणमा सक्रिय गरिएको तत्काल प्रतिरोधात्मक प्रतिक्रिया (अधिमानतः 12 hpi भन्दा पछि होइन), प्रभावकारी रूपमा कोलेलोट्रिचम लुपिनी रोगजनक फंगसले हुने एन्थ्राकोनोजबाट साँघुरो-बायाँ लुपिनलाई जोगाउँछ।उच्च थ्रुपुट अनुक्रमण प्रयोग गरेर, हामीले Lanr1 र AnMan प्रतिरोध जीनहरू द्वारा मध्यस्थता गरिएको NLL बिरुवाहरूमा एन्थ्राकनोज प्रतिरोध जीनहरूको भिन्न अभिव्यक्ति प्रोफाइलहरू प्रदर्शन गर्यौं।सफल प्रतिरक्षामा बिरुवाको रोगजनकसँग पहिलो सम्पर्क भएको केही घण्टाभित्रै रेडक्स, प्रकाश संश्लेषण र रोगजननमा संलग्न प्रोटिनहरूका लागि जीनहरू सावधानीपूर्वक डिजाइन गर्नु समावेश छ।समान सुरक्षात्मक प्रतिक्रियाहरू, तर समयमै ढिलो गरी, बिरुवाहरूलाई रोगहरूबाट जोगाउन धेरै कम प्रभावकारी हुन्छन्।Lanr1 जीन द्वारा मध्यस्थता गरिएको एन्थ्र्याक्स प्रतिरोध R जीन (प्रभाव-ट्रिगर इम्युनिटी) को विशिष्ट द्रुत प्रतिक्रिया जस्तै देखिन्छ, जबकि AnMan जीनले सम्भवतः एक तेर्सो प्रतिक्रिया प्रदान गर्दछ (एक माइक्रोब-सम्बन्धित आणविक ढाँचा द्वारा ट्रिगर गरिएको प्रतिरक्षा), स्थिरता को मध्यम स्तर प्रदान गर्दछ।
एन्थ्राकनोज मार्करहरूका लागि स्क्रिन गर्न प्रयोग गरिने 215 NLL लाइनहरूमा 74 वटा प्रजातिहरू, क्रसिङ वा प्रजननद्वारा प्राप्त 60 लाइनहरू, 5 म्युटेन्टहरू, र 76 वटा जंगली वा मूल जर्मप्लाज्महरू समावेश थिए।लाइनहरू 17 देशहरूबाट आएका थिए, मुख्यतया पोल्याण्ड (58), स्पेन (47), जर्मनी (27), अष्ट्रेलिया (26), रूस (19), बेलारुस (7), इटाली (5) र अन्य लाइनहरू।10 देशहरूबाट।सेटले सन्दर्भ प्रतिरोधी रेखाहरू पनि समावेश गर्दछ: 83A:476, तान्जिल, ल्यान्र1 एलेल बोक्ने वोंगा, र मन्डेलपले अनमान एलेल बोक्ने।लाइनहरु Poznań Plant Breeding Ltd., Wiatrowo, Poland (पूरक तालिका S1) द्वारा राखिएको यूरोपीयन लुपिन जेनेटिक रिसोर्स डाटाबेसबाट प्राप्त गरिएको थियो।
बिरुवाहरू नियन्त्रित अवस्थाहरूमा हुर्किन्थ्यो (फोटोपीरियड 16 घण्टा, तापमान 25 डिग्री सेल्सियस दिनमा र 18 डिग्री सेल्सियस रातमा)।दुई जैविक प्रतिकृतिहरू विश्लेषण गरियो।प्रोटोकल अनुसार DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany) को प्रयोग गरेर तीन हप्ता पुराना पातहरूबाट DNA अलग गरिएको थियो।पृथक DNA को गुणस्तर र एकाग्रता स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक विधिहरू द्वारा मूल्याङ्कन गरिएको थियो (NanoDrop 2000; थर्मो फिशर वैज्ञानिक, Waltham, MA, USA)।AnManM1 मार्कर AnMan (cv. Mandelup बाट व्युत्पन्न) र Anseq3 र Anseq4 जीन Lanr1 (cv. Tanjil बाट व्युत्पन्न) लाई 11,26,28 लाई विश्लेषण गरिएको थियो।प्रतिरोधी एलिलका लागि होमोजाइगोटहरू "1" को रूपमा, संवेदनशील - "0" को रूपमा, र हेटरोजाइगोटहरू - 0.5 को रूपमा स्कोर गरियो।
मार्कर AnManM1, AnSeq3 र AnSeq4 र अन्तिम फलो-अप प्रयोगहरूको लागि बीउको उपलब्धताको लागि स्क्रिनिङको नतिजाको आधारमा, 50 NLL लाइनहरू एन्थ्राक्नोज प्रतिरोधी फेनोटाइपिङका लागि चयन गरिएको थियो।यो विश्लेषण कम्प्युटर नियन्त्रित ग्रीनहाउसमा 22 डिग्री सेल्सियस र रातमा 19 डिग्री सेल्सियसको तापमान दायराको साथ 14 घण्टाको फोटोपीरियडमा डुप्लिकेटमा प्रदर्शन गरिएको थियो।बीउ कोट धेरै कडा भएको कारण बीउ सुप्त हुनबाट जोगाउन र एकसमान अंकुरण सुनिश्चित गर्न रोप्नु अघि बीउहरू खरानी गरिन्छ (भ्रूणको विपरित छेउमा रहेको बीउको कोटलाई धारिलो ब्लेडले काट्ने)।बिरुवाहरू बाँझो माटो (TS-1 REC 085 Medium Basic, Klasmann-Deilmann Polska, Warsaw, Poland) भएको भाँडो (11 × 11 × 21 सेमी) मा हुर्किन्थ्यो।ग्रेटर पोल्याण्डको Verzhenitsa (52° 27′ 42″ N 17° 04′ 05″ E) को खेतमा उब्जाइएको साँघुरो-पात भएका लुपिन बोटबिरुवाको काण्डबाट सन् १९९९ मा उब्जाइएको कोलेटोट्रिचम लुपिनी Col-08 स्ट्रेनको प्रयोग गरी टीकाकरण गरिएको थियो।क्षेत्र प्राप्त गर्नुहोस्।पृथकहरू SNA माध्यममा २० डिग्री सेल्सियसमा कालो प्रकाशमा २१ दिनसम्म स्पोरुलेशन उत्प्रेरित गर्नका लागि कल्चर गरिएको थियो।रोपेको चार हप्ता पछि, जब बिरुवाहरू 4-6 पातको चरणमा पुगेका थिए, प्रति एमएल 0.5 x 106 कोनिडियाको एकाग्रतामा कोनिडियाको सस्पेन्सनसँग स्प्रे गरेर टीकाकरण गरिन्छ।इनोकुलेशन पछि, बिरुवाहरू कोनिडियाको अंकुरण र संक्रमण प्रक्रियालाई सहज बनाउन लगभग 98% आर्द्रता र 25 डिग्री सेल्सियसको तापक्रममा 24 घण्टा अँध्यारोमा राखिएको थियो।त्यसपछि बिरुवाहरू 22°C दिन/19°C रात र 70% आर्द्रतामा 14-घण्टा फोटोपीरियड अन्तर्गत हुर्किन्थ्यो।रोगको स्कोर खोप लगाएको २२ दिन पछि बनाइएको थियो र काण्ड र पातहरूमा नेक्रोटिक घावहरूको उपस्थिति वा अनुपस्थितिको आधारमा ० (प्रतिरक्षा) देखि ९ (धेरै संवेदनशील) को दायरा थियो।थप रूपमा, स्कोर पछि, बिरुवाहरूको वजन मापन गरिएको थियो।मार्कर जीनोटाइपहरू र रोग फेनोटाइपहरू बीचको सम्बन्धलाई बिन्दु दुई-अनुक्रम सहसंबंधको रूपमा गणना गरिएको थियो (एन्थ्राकनोज प्रतिरोध फेनोटाइपको विश्लेषणको लागि रेखाहरूको सेटमा हेटरोजाइगस मार्करहरूको अनुपस्थिति)।