Javascript is momenteel uitgeschakeld in uw browser. Sommige functies van deze website werken niet wanneer javascript is uitgeschakeld.
Registreer u met uw specifieke gegevens en specifieke geneesmiddel waarin u geïnteresseerd bent, en wij zullen de door u verstrekte informatie matchen met artikelen in onze uitgebreide database en u onmiddellijk een pdf-kopie e-mailen.
Met Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7 Livia Manzella1,21 Afdeling Klinische en Experimentele Geneeskunde, Universiteit van Catania, Catania, 95123, Italië;2 Centrum voor Experimentele Oncologie en Hematologie, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italië;3 Medische Oncologie, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italië;4 Medical Genetics, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Italië;5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Italië;6 Afdeling Biomedische en Biotechnologische Wetenschappen, Universiteit van Catania, Medische Genetica, Catania, Italië, 95123;7Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, Italië Communicatie: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, e-mail [email protected];[email protected] Doel: Kiembaanmutaties in BRCA1 en BRCA2 en vastgestelde borstkanker (BC), eierstokkanker (OC) en andere kanker geassocieerd met een levenslang risico op kanker. Testen op het BRCA-gen is essentieel voor het beoordelen van het individuele risico, evenals voor het vinden van preventiemethoden bij gezonde dragers en het afstemmen van behandelingen bij kankerpatiënten. De prevalentie van BRCA1- en BRCA2-veranderingen varieert sterk tussen geografische regio's, en hoewel er gegevens bestaan ​​over BRCA-pathogene varianten in Siciliaanse families, zijn studies specifiek gericht op populaties in Oost-Sicilië ontbreken. Het doel van onze studie was om de incidentie en verspreiding van BRCA-pathogene kiembaanveranderingen in een cohort van BC-patiënten uit Oost-Sicilië te onderzoeken en om hun associatie met specifieke BC-kenmerken te beoordelen met behulp van sequencing van de volgende generatie. De aanwezigheid van veranderingen correleerde met tumorgraad en proliferatie-index. RESULTATEN: In totaal hadden 35 patiënten (9%) een BRCA-pathogene variant, 17 (49%) in BRCA1 en 18 (51%) in BRCA2.BRCA1-verandering s komen veel voor bij triple-negatieve BC-patiënten, terwijl BRCA2-mutaties vaker voorkomen bij luminale BC-patiënten. Vergeleken met niet-dragers hadden patiënten met BRCA1-varianten een significant hogere tumorgraad en proliferatieve index. Conclusies: Onze bevindingen geven een overzicht van de BRCA-mutatiestatus bij BC-patiënten uit Oost-Sicilië en bevestigen de rol van NGS-analyse bij het identificeren van patiënten met erfelijke BC. Over het algemeen komen deze gegevens overeen met eerder bewijs dat BRCA-screening ondersteunt voor een juiste preventie en behandeling van kanker bij mutatiedragers.
Borstkanker (BC) is wereldwijd de meest voorkomende maligniteit en de dodelijkste kanker bij vrouwen.1 De biologische kenmerken die de prognose en het klinisch gedrag van BC bepalen, zijn uitgebreid bestudeerd en in de loop van de tijd gedeeltelijk opgehelderd. In feite worden momenteel verschillende surrogaatmarkers gebruikt om BC te classificeren in verschillende moleculaire subtypen. Dit zijn oestrogeen (ER) en/of progesteronreceptor (PgR), human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) amplificatie, proliferatie-index Ki-67 en tumorgraad (G).2 De combinatie van deze variabelen identificeerde de volgende BC-categorieën: 1) Luminale tumoren, die ER- en/of PgR-expressie vertoonden, waren goed voor 75% van de BC's. Deze tumoren werden verder onderverdeeld in Luminal A, wanneer Ki-67 lager was dan 20% en HER2 negatief, en Luminal B, wanneer Ki-67 gelijk was aan of hoger dan 20% en in aanwezigheid van HER2-amplificatie, ongeacht de proliferatie-index;2) HER2+-tumoren die ER- en PgR-negatief zijn maar HER2-amplificatie vertonen. Deze groep vertegenwoordigt 10% van alle borsttumoren;3) Triple-negatieve borstkanker (TNBC), die geen ER- en PgR-expressie en HER2-amplificatie vertoont, is goed voor ongeveer 15% van de borstkankers.2-4
Onder deze BC-subtypen vertegenwoordigen tumorgraad en proliferatie-index cross-sectionele biomarkers die direct en onafhankelijk geassocieerd zijn met tumoragressiviteit en prognose.5,6
Naast de bovengenoemde biologische kenmerken is de rol van erfelijke genetische veranderingen die leiden tot de ontwikkeling van BC steeds belangrijker geworden in de afgelopen jaren.7 Ongeveer 1 op de 10 borsttumoren wordt overgeërfd als gevolg van veranderingen in de kiembaan in specifieke genen.8 Twee grote epidemiologische studies waarbij meer dan 180.000 vrouwen betrokken waren, hebben onlangs een groep van acht genen geïdentificeerd (dwz ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C, en RAD51D) die primair verantwoordelijk zijn voor erfelijke BC. Van deze genen vertoonden BRCA1 en BRCA2 (hierna BRCA1/2 genoemd) de sterkste correlatie met de ontwikkeling van borsttumoren.9-12 In feite verhogen BRCA1/2-mutaties in de kiembaan het levenslange risico op BC aanzienlijk, evenals andere maligniteiten, waaronder ovarium-, prostaat-, pancreas-, colorectale en melanoom. Van 13 tot 80 jaar is de cumulatieve de incidentie van BC is 72% bij vrouwen met een BRCA1 pathogene variant (PV) en 69% bij vrouwen met een BRCA2 PV.14
Met name suggereert een recente publicatie dat het BC-risico afhangt van het type PV. In feite zijn opvallende missense-varianten, vooral in het BRCA1-gen, in vergelijking met pathogene afkappende varianten geassocieerd met een verminderd risico op BC, vooral bij oudere vrouwen.15
De aanwezigheid van BRCA1 of BRCA2 PV werd in verband gebracht met verschillende biologische en klinisch-pathologische kenmerken.16,17 BRCA1-geassocieerde BC's hebben de neiging klinisch agressief, slecht gedifferentieerd en zeer proliferatief te zijn. .16-18 Met name verhogen mutaties in BRCA1 en BRCA2 de gevoeligheid voor specifieke behandelingen, waaronder platinazouten en gerichte geneesmiddelen zoals poly(ADP-ribose)-polymeraseremmers (PARPi).19,20
In de afgelopen paar jaar heeft de implementatie van next-generation sequencing (NGS) in de klinische praktijk een toenemend aantal BC-patiënten in staat gesteld moleculaire testen te ondergaan op kankergevoeligheidssyndromen, waaronder BRCA1/2.21 Tegelijkertijd zijn definities gebaseerd op precieze criteria met betrekking tot familiegeschiedenis, demografische en klinisch-pathologische kenmerken om individuen beter te kunnen identificeren die geschikt zijn voor BRCA1/2-testen.22,23 In deze context stapelt het bewijs zich op over BRCA1/2-screening in specifieke populaties, wat de verschillen tussen geografische regio's benadrukt. 24-27 Hoewel er rapporten zijn over het BC-cohort in West-Sicilië, zijn er minder gegevens beschikbaar over BRCA1/2-screening in de bevolking van Oost-Sicilië.28,29
We beschrijven hier de resultaten van de kiembaan-BRCA1/2-screening bij BC-patiënten uit Oost-Sicilië, waarbij de aanwezigheid van BRCA1- of BRCA2-mutaties verder wordt gecorreleerd met de belangrijkste klinisch-pathologische kenmerken van deze tumoren.
Een retrospectieve studie werd uitgevoerd in het "Center for Experimental Oncology and Hematology" in het Policlinico Hospital.Rodolico - San Marco in Catania. Van januari 2017 tot maart 2021, een totaal van 455 patiënten met borst- en eierstok, melanoom, pancreatisch of prostaatkanker was gepresenteerd met de Decording met de Decording met de Decorded Incrca/2 Genetic Testing. Thishis -Testing. Sinki, en alle deelnemers gaven schriftelijke geïnformeerde toestemming voorafgaand aan moleculaire analyse.
Histologische en biologische kenmerken (ER, PgR, HER2-status, Ki-67 en graad) van BC werden beoordeeld op kernbiopsie of chirurgische monsters, waarbij alleen agressieve tumorcomponenten werden overwogen. Op basis van deze kenmerken werden BC's als volgt geclassificeerd: luminaal A (ER+ en/of PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminaal B (ER+ en/of PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminaal B-HER 2+ (ER en/of PgR+, HER2+), HER2+ (ER en PgR-, HER2+) of triple negatief (ER en PgR-, HER2-).
Voordat de BRCA1- en BRCA2-mutatiestatus werd beoordeeld, voerde een multidisciplinair team met onder meer een oncoloog, een geneticus en een psycholoog een tumorgenetisch consult uit voor elke patiënt om de aanwezigheid van BRCA1 en/of BRCA1 vast te stellen.of personen met een hoog risico op PV in het BRCA2-gen. Patiëntselectie werd uitgevoerd volgens de richtlijnen van de Italian Society of Medical Oncology (AIOM) en lokale Siciliaanse aanbevelingen.30,31 Deze criteria omvatten: (i) familiegeschiedenis van bekende pathogene varianten in gevoeligheidsgenen (bijv. BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN);(ii) reuen met BC;(iii) die met BC en OC;(iv) vrouwen met BC <36 jaar, TNBC <60 jaar of bilaterale BC <50 jaar;(v) persoonlijke medische geschiedenis van BC < 50 jaar en ten minste één eerstegraads familielid: (a) BC < 50 jaar;(b) niet-slijmvlies en niet-borderline OC van elke leeftijd;(c) bilaterale BC;(d) mannelijke BC;(e) alvleesklierkanker;(f) prostaatkanker;(vi) twee of meer persoonlijke voorgeschiedenis van BC > 50 jaar en familiegeschiedenis van BC, OC of pancreaskanker voor familieleden die eerstegraads familieleden van elkaar zijn (inclusief familieleden met wie zij eerstegraads familieleden is);(vii) Persoonlijke geschiedenis van OC en ten minste één familielid in de eerste graad: (a) BC <50 jaar;(b) NOC;(c) bilaterale BC;(d) mannelijke BC;(vii) vrouw met hoogwaardige sereuze OC.
Van elke patiënt werd een monster van 20 ml perifeer bloed afgenomen en verzameld in EDTA-buisjes (BD Biosciences). Genomisch DNA werd geïsoleerd uit volbloedmonsters van 0,7 ml met behulp van de QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Italië) volgens de instructies van de fabrikant en passeerde een Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, VS). Voer kwantificering uit.Doelverrijking en bibliotheekvoorbereiding worden uitgevoerd door de Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, klaar om te worden geladen in de Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit voor geautomatiseerde bibliotheekvoorbereiding volgens de instructies van de fabrikant. De kit bestaat uit twee multiplex PCR-primerpools die kunnen worden gebruikt om alle BRCA1 (NM_007300.3) en BRCA2 (NM_000059.3) genen te bestuderen. In het kort: 15 µL van elk verdund DNA-monster (10 ng) werd toegevoegd aan platen met streepjescode voor bibliotheekvoorbereiding en alle reagentia en verbruiksartikelen werden in het Ion Chef™-instrument geladen. Vervolgens werden geautomatiseerde bibliotheekvoorbereiding en bundeling van monsterbibliotheken met streepjescode uitgevoerd op het Ion Chef™-instrument. Het aantal voorbereide bibliotheken werd vervolgens beoordeeld door een Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, VS) volgens de instructies van de fabrikant. Ten slotte worden de bibliotheken gecombineerd in equimolaire verhoudingen in Ion Chef™-bibliotheekmonsterbuizen (buisjes met streepjescode) en geladen op het Ion Chef™-instrument. Sequencing werd uitgevoerd met behulp van een Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) instrument (Thermo Fisher Scientific) met behulp van een Ion 510 Chip (Thermo Fisher Scientific). Gegevensanalyse werd uitgevoerd door Amplicon Suite (SmartSeq srl) en Ion Reporter Software.
Alle variantnomenclatuur volgde de huidige richtlijnen van het Human Genome Variation Consortium, online beschikbaar (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). De klinische betekenis van BRCA1/2-varianten werd gedefinieerd met behulp van de classificatie van het International Consortium ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/) en het raadplegen van verschillende databases zoals ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar , IARC_LOVD en UMD. De classificatie omvat vijf verschillende risicocategorieën: goedaardig (categorie I), waarschijnlijk goedaardig (categorie II), variant van onzekere significantie (VUS, categorie III), waarschijnlijk pathogeen (categorie IV) en pathogeen (categorie V). VarSome analyseerde ook het effect van mutaties op eiwitstructuur en -functie, een informatief hulpmiddel met toegang tot 30 databases.32
Om potentiële klinische significantie aan elke VUS toe te kennen, werden de volgende computationele eiwitvoorspellingsalgoritmen gebruikt: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (//provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (//genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) en Align-GVGD (//agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Varianten geclassificeerd aangezien klasse 1 en 2 als wildtype werden beschouwd.
Sanger-sequencing bevestigde de aanwezigheid van elke pathogene variant. In het kort werd voor elke gedetecteerde variant een paar specifieke primers ontworpen met behulp van de BRCA1- en BRCA2-genreferentiesequenties (respectievelijk NG_005905.2, NM_007294.3 en NG_012772.3, NM_000059.3). Daarom werd gerichte PCR uitgevoerd gevolgd door Sanger-sequencing.
Patiënten die negatief testten op het BRCA1/2-gen werden getest door multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) volgens de instructies van de fabrikant om de aanwezigheid van grote genomische herrangschikkingen (LGR) vast te stellen. In het kort: DNA-monsters worden gedenatureerd en tot 60 BRCA1- en BRCA2-genspecifieke probes worden gebruikt, die elk een specifieke DNA-sequentie van ongeveer 60 nucleotiden lang detecteren. Probe-amplificatieproducten, bestaande uit een unieke set PCR-amplicons, werden vervolgens geanalyseerd door capillaire elektroforese en door Cofalyser.Net-software in combinatie met de juiste batchspecifieke Cofalyser-tabellen (www.mrcholland.com).
Geselecteerde klinisch-pathologische variabelen (histologische graad en Ki-67% proliferatie-index) waren geassocieerd met de aanwezigheid van BRCA1/2 PV, berekend met behulp van de Prism-software v. 8.4 met behulp van Fisher's exact-test, uitgaande van een significante p-waarde <0,05.
Tussen januari 2017 en maart 2021 werden 455 patiënten gescreend op BRCA1/2-mutaties in de kiembaan. Mutatietesten werden uitgevoerd in het Policlinico Hospital's Center for Experimental Oncology and Hematology. Olico van Catania – San Marco” in totaal waren er 389 patiënten borstkanker, 37 eierstokkanker, 16 alvleesklierkanker, 8 prostaatkanker en 5 melanoom.De verdeling van patiënten naar kankertype en analyseresultaten wordt weergegeven in figuur 1.
Figuur 1 toont een stroomschema dat een overzicht van de studie weergeeft. Patiënten met borst-, melanoom-, alvleesklier-, prostaat- of eierstoktumoren werden getest op mutaties in de BRCA1- en BRCA2-genen.
Afkortingen: PV's, pathogene variant;VUS, variant van onzekere betekenis;WT, wildtype BRCA1/2-sequentie.
We hebben onze onderzoeken selectief gericht op borstkankercohorten. De patiënten hadden een mediane leeftijd van 49 jaar (bereik 23-89) en waren overwegend vrouwelijk (n=376, of 97%).
Van deze proefpersonen hadden 64 (17%) BRCA1/2-mutaties en waren allemaal vrouwelijk. Vijfendertig (9%) hadden PV en 29 (7,5%) hadden VUS. Zeventien (48,6%) van de 35 pathogene varianten kwamen voor in BRCA1 en 18 (51,4%) in BRCA2, terwijl 5 VUS voorkwamen in BRCA1 (17,2%) en 24 (82,8%) in BRCA2 (figuren 1 en 2).LGR was niet aanwezig in de MLPA-analyse.
Figuur 2. Analyse van BRCA1- en BRCA2-mutaties bij 389 borstkankerpatiënten.(A) Verdeling van pathogene varianten (PV) (rood), varianten met onzekere significantie (VUS) (oranje) en WT (blauw) bij 389 borstkankerpatiënten;(B) 389 borstkankerpatiënten Vijfendertig (9%) hadden BRCA1/2 pathogene varianten (PV's). Van hen waren er 17 (48,6%) BRCA1 PV-dragers (donkerrood) en 18 (51,4%) BRCA2-dragers (lichtrood);(C) 29 (7,5%) van de 389 proefpersonen droegen VUS, 5 (17,2%) BRCA1-genen (donkeroranje) en 24 (82,8%) BRCA2-genen (lichtoranje).
Afkortingen: PV's, pathogene variant;VUS, variant van onzekere betekenis;WT, wildtype BRCA1/2-sequentie.
Vervolgens onderzochten we de prevalentie van BC-moleculaire subtypen bij patiënten met BRCA1/2 PV. De verdeling omvatte 2 (5,7%) luminale A, 15 (42,9%) luminale B, 3 (8,6%) luminale B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ en 13 (37,1%) TNBC-patiënten. Van de BRCA1-positieve patiënten hadden 5 (29,4%) luminale B BC, 2 (11. 8%) had HER2+-ziekte en 10 (58,8%) had TNBC. Tumoren zonder BRCA1-mutaties waren ofwel luminaal A of luminaal B-HER2+ (figuur 3). In de BRCA2-positieve subgroep waren 10 (55,6%) tumoren luminaal B, 3 (16,7%) luminaal B-HER2+, 3 (16,7%) TNBC en 2 (11,1%) luminaal A (figuur 3). Er waren geen HER2+-tumoren aanwezig in deze groep. BRCA1-mutaties komen dus veel voor bij TNBC-patiënten, terwijl BRCA2-veranderingen overheersen bij lumen B-individuen.
Afbeelding 3 Prevalentie van subtypes van borstkanker bij patiënten met pathogene varianten in BRCA1 en BRCA2. Histogrammen die de verdeling van BRCA1- (donkerrood) en BRCA2- (lichtrood) PV's tonen over moleculaire subtypes van borstkankerpatiënten. De cijfers die in elk kader worden vermeld, vertegenwoordigen het percentage patiënten met BRCA1 en BRCA2 PV voor elk subtype van borstkanker.
Afkortingen: PV's, pathogene variant;HER2+, humane epidermale groeifactorreceptor 2 positief;TNBC, triple-negatieve borstkanker.
Vervolgens hebben we het type en de genlokalisatie van BRCA1- en BRCA2-PV's beoordeeld. In BRCA1 PV hebben we 7 enkele nucleotidevarianten (SNV's), 6 deleties, 3 duplicaties en 1 insertie waargenomen. Slechts één mutatie (c.5522delG) vertegenwoordigt een nieuwe ontdekking. De meest voorkomende BRCA1 PV die bij beide proefpersonen werd gedetecteerd, was c.5035_5039delCTAAT. BRCA1 exon 15, resulterend in de vervanging van het aminozuur leucine door tyrosine bij codon 1679, en als gevolg van een translatieframeshift met een voorspeld alternatief stopcodon leidde tot voortijdige eiwitafknotting. Alle andere veranderingen worden slechts in één geval gedetecteerd. Met name één van de gerapporteerde PV's bevond zich in het consensusgebied van de splitsingsplaats (c.4357+1G>T) (Tabel 1).
Met betrekking tot BRCA2 PV hebben we 6 deleties, 6 SNV's en 2 duplicaties waargenomen. Geen van de gevonden veranderingen is nieuw. Drie mutaties kwamen terug in onze populatie, c.428dup en c.8487+1G>A waargenomen bij 3 proefpersonen, gevolgd door c.5851_5854delAGTT teruggevonden in twee gevallen. De wijziging van c.428dup omvat een herhaling van C in exon 5 van BRCA2, waarvan wordt voorspeld dat het codeert een afgeknot, niet-functioneel eiwit. De c.8487+1G>A-mutatie vindt plaats in het intronische gebied van BRCA2 intron 19 (± 1,2) en beïnvloedt de splitsingsconsensussequentie, resulterend in veranderde splitsing resulterend in abnormaal of afwezig eiwit. De c.5851_5854delAGTT pathogene variant is het gevolg van een deletie van 4 nucleotiden van nucleotideposities 5851 tot 5854 in het coderende exon 10 van het BRCA2-gen en resulteert in een translationele frameshift met een voorspeld alternatief stopcodon (p.S1951WfsTer). Met name, zoals eerder gerapporteerd, werden beide wijzigingen c.631G>A en c.7008-2A>T gedetecteerd bij dezelfde patiënt.34 De eerste mutatie omvat de vervanging van adenosine (A) in BRCA2 exon 7 door een guanine (G) bevattende nucleotide resulterend in een verandering van valine in isoleucine bij codon 211, isoleucine Aminozuur is een aminozuur met sterk vergelijkbare eigenschappen. Deze verandering beïnvloedt de normale mRNA-splitsing. De tweede variant bevindt zich in een intronisch gebied en resulteert in een dubbele A-naar-thymine (T)-substitutie vóór exon 13 van het gen dat codeert voor BRCA2. De c.7008-2A>T-verandering kan meerdere transcripten van verschillende lengtes genereren. Bovendien waren in de groep van BRCA2 PV's 4 van de 18 veranderingen (22,2%) intronisch.
Vervolgens brachten we BRCA1/2 schadelijke mutaties in functionele domeinen en eiwitbindende regio's in kaart (Fig. 4). In het BRCA1-gen bevond 50% van de PV's zich in het borstkankerclustergebied (BCCR), terwijl 22% van de mutaties zich bevond in het ovariumkankerclustergebied (OCCR) (Fig. 4A). In BRCA2 PV bevond 35,7% van de varianten zich in het BCCR-gebied en 42,8% van de mutaties in het OCCR (Fig. 4B). Vervolgens hebben we de locatie van PV binnen de BRCA1- en BRCA2-eiwitdomeinen beoordeeld. Voor het BRCA1-eiwit vonden we drie PV's in de lus- en coiled-coil-domeinen en twee mutaties in het BRCT-domein (Fig. 4A). Voor het BRCA2-eiwit werden 4 PV's toegewezen aan het BRC-herhalingsdomein, terwijl 3 intronische en 3 exonische veranderingen werden gedetecteerd in de oligo / oligosaccharide-binding (OB) en toren (T ) domeinen (Figuur 4B).
Figuur 4 Schematische weergave van BRCA1- en BRCA2-eiwitten en lokalisatie van pathogene varianten. Deze figuur toont de verdeling van BRCA1 (A) en BRCA2 (B) pathogene varianten bij borstkankerpatiënten. Exonische mutaties worden weergegeven in blauw, terwijl intronische varianten worden weergegeven in oranje. De balkhoogte vertegenwoordigt het aantal gevallen. De BRCA1- en BRCA2-eiwitten en hun functionele domeinen worden gerapporteerd. (A) Het BRCA1-eiwit bevat een lusdomein (RING) en een nucleaire lokalisatiesequentie (NLS), een coiled-coil-domein, een SQ/TQ-clusterdomein (SCD) en een BRCA1 C-terminaal domein (BRCT). (B) Het BRCA2-eiwit bevat acht BRC-herhalingen, een DNA-bindend domein met een helixvormig domein (Helical), drie oligonucleotide/oligosaccharide-bindende (OB) vouwen, een torendomein (T) en een NLS aan de C-zijde. Gebieden genaamd de Breast Cancer Cluster Region (BCCR) en Ovarian Cancer Cluster Region (OCCR ) worden onderaan weergegeven. * Vertegenwoordigt mutaties die stopcodons bepalen.
Vervolgens hebben we klinisch-pathologische kenmerken van BC onderzocht die zouden kunnen correleren met de aanwezigheid van BRCA1/2 PV. Volledige klinische gegevens waren beschikbaar voor 181 BRCA1/2-negatieve patiënten (niet-dragers) en alle dragers (n = 35). Er was een correlatie tussen tumorproliferatiesnelheid en graad.
We berekenden de verdeling van Ki-67 op basis van de mediaan van ons cohort (25%, bereik <10-90%). Proefpersonen met Ki-67 < 25% werden gedefinieerd als "lage Ki-67", terwijl individuen met waarden ≥ 25% werden beschouwd als "hoge Ki-67". ).
Figuur 5 Correlatie van Ki-67 met graadverdeling bij vrouwen met borstkanker met en zonder BRCA1- en BRCA2-PV's.(A) Boxplot met mediane Ki-67-waarden bij 181 BC-patiënten zonder drager versus BRCA1 (18) of BRCA2 (17) PV-patiënten. P-waarden onder 0,5 werden als statistisch significant beschouwd. (B) Histogram dat de indeling van BC-kankerpatiënten in histologische graadgroepen (G2 en G3) weergeeft volgens BRCA1 en BRCA2-mutatiestatus (WT-proefpersonen, BRCA1- en BRCA2-PV-dragers).
Evenzo onderzochten we of de tumorgraad correleerde met de aanwezigheid van BRCA1/2 PV. Aangezien G1 BC afwezig was in onze populatie, verdeelden we de patiënten in twee groepen (G2 of G3). In overeenstemming met de Ki-67-resultaten onthulde de analyse een statistisch significante correlatie tussen tumorgraad en BRCA1-mutatie, met een hoger aandeel G3-tumoren bij BRCA1-dragers in vergelijking met niet-dragers (p<0,005) (Figuur 5B).
Vooruitgang in de DNA-sequencingtechnologie heeft ongekende vooruitgang in genetische testen van BRCA1/2 mogelijk gemaakt, met cruciale implicaties voor patiënten met een familiegeschiedenis van kanker. Tot op heden zijn ongeveer 20.000 BRCA1/2-varianten geïdentificeerd en geclassificeerd volgens de American Society of Medical Genetics 35 en het ENIGMA-systeem. 35,36 Het is algemeen bekend dat het BRCA1/2-mutatiespectrum sterk varieert tussen geografische regio's. 37 Binnen Italië varieerde het aantal BRCA1/2 PV's van 8 % tot 37%, wat een grote intra-landelijke variabiliteit laat zien.38,39 Met een bevolking van bijna 5 miljoen is Sicilië de op vier na grootste regio in Italië wat betreft het aantal inwoners. Hoewel er gegevens bestaan ​​over de verspreiding van BRCA1/2 in West-Sicilië, is er geen uitgebreid bewijs in het oostelijke deel van het eiland.
Onze studie is een van de eerste rapporten over de incidentie van BRCA1/2 PV bij BC-patiënten in Oost-Sicilië.28 We hebben onze analyse gericht op BC, aangezien dit verreweg de meest voorkomende ziekte is in ons cohort.
Bij het testen van 389 BC-patiënten droeg 9% BRCA1/2 PV's, gelijkmatig verdeeld over BRCA1 en BRCA2. Deze resultaten komen overeen met de eerder gerapporteerde resultaten in de Italiaanse populatie.28 Interessant is dat 3% (13/389) van ons cohort man was. Dit percentage is hoger dan verwacht voor mannelijke borstkanker (1% van alle BC's),40 als gevolg van onze selectie van populaties op basis van BRCA1/2-mutatierisico. Geen van deze mannen ontwikkelde echter een BRCA1/2 PV, dus ze waren kandidaten voor verdere moleculaire analyse om de aanwezigheid van minder vaak voorkomende mutaties zoals onder andere PALB2, RAD51C en D uit te sluiten. Varianten van onzekere significantie werden gevonden bij 7% van de proefpersonen bij wie BRCA2 VUS duidelijk was. Zelfs dit resultaat is consistent met reeds bestaand bewijs.28,41,42
Toen we de verdeling van de moleculaire subtypes van BC in BRCA1/2-gemuteerde vrouwen analyseerden, bevestigden we bekende associaties tussen TNBC en BRCA1 PV (58,8%) en tussen luminale B BC en BRCA2 PV (55,6%).16,43 De luminale A- en HER2+-tumoren in BRCA1- en BRCA2-PV-dragers komen overeen met bestaande literatuurgegevens.16,43
Vervolgens richten we ons op het type en de locatie van de BRCA1/2 PV. In ons cohort was de meest voorkomende BRCA1 PV c.5035_5039delCTAAT.Hoewel Incorvaia et al.hebben deze variant niet beschreven in hun Siciliaanse cohort, andere auteurs hebben het gerapporteerd als een kiemlijn BRCA1 PV.34 Verschillende BRCA1 PV's werden gevonden in ons cohort - bijv. vaak aangetroffen bij Asjkenazische joden in Oost- en Midden-Europa (Polen, Tsjechisch), Sloveens, Oostenrijks, Hongaars, Wit-Russisch en Duits), 44,45 en werd in de Verenigde Staten en Argentinië onlangs gedefinieerd als een "terugkerende kiembaanvariant" bij Italiaanse patiënten met BC en OC. De 34c.514del-variant werd eerder geïdentificeerd bij 8 borstkankerpatiënten uit Noord-Sicilië in Palermo en Messina. Interessant is dat zelfs Incorvaia et al.vond de c.3253dupA-variant in sommige families in Catania.28 De meest representatieve BRCA2 PV's zijn c.428dup, c.5851_5854delAGTT en de intronische variant c.8487+1G>A, die in meer detail zijn gerapporteerd28 bij een patiënt in Palermo met c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV werd waargenomen in huishoudens in het noordwesten van Sicilië, voornamelijk in de Trap ani en Palermo-regio's, terwijl c.5851_5854delAGTT PV werd waargenomen in huishoudens in het noordwesten van Sicilië. De 8487+1G>A-variant kwam vaker voor bij proefpersonen uit Messina, Palermo en Caltanissetta.28 Rebbeck et al.beschreven eerder de wijziging van c.5851_5854delAGTT in Colombia.37 Een andere BRCA2 PV, c.631+1G>A, is gevonden bij BC- en OC-patiënten uit Sicilië (Agrigento, Siracusa en Ragusa).28 We hebben met name het naast elkaar bestaan ​​waargenomen van twee BRCA2-varianten (BRCA2 c.631G>A en c.7008-2A>T) bij dezelfde patiënt, waarvan we aannamen dat het segreg was uitgevoerd in cis-modus, zoals eerder op die manier gerapporteerd.34,46 Deze BRCA2-mutaties worden inderdaad vaak waargenomen in de Italiaanse regio en bleken voortijdige stopcodons te introduceren, waardoor de splitsing van boodschapper-RNA wordt beïnvloed en het BRCA2-eiwit faalt.47,48
We hebben ook BRCA1- en BRCA2-PV's in kaart gebracht in vermeende OCCR- en BCCR-regio's van eiwitdomeinen en genen. Deze regio's werden beschreven door Rebbeck et al.als risicogebieden voor het ontwikkelen van respectievelijk eierstok- en borstkanker.49 Het bewijs met betrekking tot het verband tussen de locatie van kiembaanvarianten en het risico op borst- of eierstokkanker blijft echter controversieel.28,50-52 In onze populatie bevonden BRCA1-PV's zich voornamelijk in de BCCR-regio, terwijl BRCA2-PV's zich voornamelijk in de OCCR-regio bevonden. We konden echter geen verband vinden tussen vermeende OCCR- en BCCR-regio's en BC-kenmerken. 1/2 mutaties. Vanuit het perspectief van het eiwitdomein zijn BRCA1-PV's verdeeld over het gehele eiwit en worden BRCA2-veranderingen bij voorkeur gevonden in het BRC-herhalingsdomein.
Ten slotte hebben we klinisch-pathologische kenmerken van BC gecorreleerd met BRCA1/2 PV. Vanwege het beperkte aantal geïncludeerde patiënten vonden we alleen een significante correlatie tussen Ki-67 en tumorgraad. Hoewel de beoordeling en interpretatie van Ki-67 enigszins controversieel blijft, is het zeker dat hoge proliferatiesnelheden geassocieerd zijn met een verhoogd risico op terugkeer van de ziekte en verminderde overleving. Tot op heden is de grens voor het onderscheid tussen "hoge" en "lage" Ki-67 20%. Patiëntenpopulatie met CA1/2-mutatie, die een mediane Ki-67-waarde van 25% heeft. Deze trend in hoge Ki-67-percentages kan worden verklaard door de prevalentie in onze luminale B- en TNBC-cohorten, waarvan er weinig luminale A-tumoren aanwezig waren. Er lijkt echter enig bewijs te zijn dat suggereert dat een hogere Ki-67-grenswaarde (25-30%) patiënten beter kan stratificeren op basis van hun prognose.53,54 Uit de resultaten van onze analyse is een significante correlatie niet verrassend.Occ tussen hoge Ki-67 en cijfers en de aanwezigheid van BRCA1 PV. In feite zijn BRCA1-gerelateerde tumoren typerend voor TNBC en vertonen agressievere kenmerken.16,17
Concluderend biedt deze studie een rapport over de mutatiestatus van BRCA1/2 in een BC-cohort uit Oost-Sicilië. Al met al zijn onze bevindingen consistent met reeds bestaand bewijs, zowel wat betreft mutatieprevalentie als klinisch-pathologische kenmerken in BC. Meer studies in grotere populaties van BRCA1/2-gemuteerde BC-patiënten, zoals het gebruik van multigenoom uitgebreide mutatieanalyse, zijn gerechtvaardigd om de aanwezigheid van PV's te beoordelen die verschillend en minder frequent zijn dan BRCA1/2. Dit zal de identificatie en het juiste beheer van de toenemend aantal proefpersonen met een verhoogd risico op kanker als gevolg van genetische mutaties.
We hebben bevestigd dat patiënten geïnformeerde toestemming hebben ondertekend om hun tumormonsters anoniem vrij te geven voor onderzoeksdoeleinden. Alle patiënten ondertekenden schriftelijke geïnformeerde toestemming volgens de Verklaring van Helsinki. Volgens het beleid van AOU Policlinico "G.Rodolico - S.Marco" was deze studie vrijgesteld van ethische beoordeling omdat de BRCA1/2-analyse werd uitgevoerd volgens de klinische praktijk en alle patiënten schriftelijke geïnformeerde toestemming gaven. Patiënten stemmen ook in met het gebruik van hun gegevens voor onderzoeksdoeleinden.
We danken prof. Paolo Vigneri voor zijn hulp bij de zorg voor borstkankerpatiënten zoals gevraagd door de ethische commissie.
Federica Martorana meldt honoraria van Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. De andere auteurs verklaren geen belangenverstrengeling in dit werk.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN schat de incidentie en mortaliteit van 36 kankers in 185 landen over de hele wereld.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660