Takk for at du besøker Nature.com. Nettleserversjonen du bruker har begrenset støtte for CSS. For den beste opplevelsen anbefaler vi at du bruker en oppdatert nettleser (eller slår av kompatibilitetsmodus i Internet Explorer). I mellomtiden, for å sikre fortsatt støtte, vil vi vise nettstedet uten stiler og JavaScript.
Porøse silikapartikler ble fremstilt ved hjelp av en sol-gel-metode med noen modifikasjoner for å oppnå makroporøse partikler. Disse partiklene ble derivatisert ved reversibel addisjonsfragmenteringskjedeoverføring (RAFT) polymerisasjon med N-fenylmaleimid-metylvinylisocyanat (PMI) og styren for å fremstille N-fenylmaleimid-fase-innlegg av N-fenylmaleimid-faseløs polystyren (N-PMP) stasjonær polystyren-stakalering (PMP) stasjonært stål-00 1,8 mm id) ble pakket ved oppslemmingspakking. Evaluert PMP-kolonneseparasjon av en peptidblanding bestående av fem peptider (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucin enkefalin) kromatografisk ytelse under humane serum (US-verdier og optimalt for humant serum-album) teoretisk platetall for peptidblandingen er så høyt som 280 000 plater/m². Ved å sammenligne separasjonsytelsen til den utviklede kolonnen med den kommersielle Ascentis Express RP-Amide-kolonnen, ble det observert at separasjonsytelsen til PMP-kolonnen var overlegen den kommersielle kolonnen når det gjelder separasjonseffektivitet og oppløsning.
De siste årene har den biofarmasøytiske industrien blitt et ekspanderende globalt marked med en betydelig økning i markedsandeler.Med den eksplosive veksten i den biofarmasøytiske industrien1,2,3, er analyse av peptider og proteiner svært ønsket.I tillegg til målpeptidet genereres flere urenheter under peptidsyntesen, og krever derfor kromatografisk rensing av vevsproteiner i kroppsvev og rensing av væskeproteiner. s og celler er en ekstremt utfordrende oppgave på grunn av det store antallet potensielt detekterbare arter i en enkelt prøve. Selv om massespektrometri er et effektivt verktøy for peptid- og proteinsekvensering, hvis slike prøver injiseres i massespektrometeret i én omgang, vil ikke separasjonen være ideell. Dette problemet kan reduseres ved å implementere (MS LC-analysemassen, analysemassen og analysemassen) på et gitt tidspunkt4,5,6.I tillegg, under væskefaseseparasjon, kan analytter fokuseres i trange områder, og derved konsentrere disse analyttene og forbedre MS-deteksjonssensitiviteten.Væskekromatografi (LC) har utviklet seg betydelig i løpet av det siste tiåret og har blitt en populær teknikk innen proteomisk analyse7,8,9,10.
Væskekromatografi med omvendt fase (RP-LC) er mye brukt for rensing og separering av peptidblandinger ved bruk av oktadecyl-modifisert silika (ODS) som stasjonær fase11,12,13. RP-stasjonære faser gir imidlertid ikke tilfredsstillende separasjon av peptider og proteiner på grunn av deres komplekse naturfasestruktur og amfirefile 14,1 stasjoner er spesialdesignede for 14,1 stasjonsstruktur. å analysere peptider og proteiner med polare og ikke-polare deler for å interagere med og beholde disse analyttene16.Mixed-mode-kromatografi, som gir multimodale interaksjoner, kan være et alternativ til RP-LC for separasjon av peptider, proteiner og andre komplekse blandinger. Flere blandet-modus stasjonære fasene har blitt preparert med,1 peptider, 1 kolonner og proteiner har blitt brukt, og 1 peptider, 9,20,21.Mixed-mode stasjonære faser (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polar intercalation/RPLC) er egnet for peptid- og proteinseparasjoner på grunn av tilstedeværelsen av både polare og ikke-polare grupper polare og ikke-polare analytter, da separasjon avhenger av interaksjonen mellom analytt og stasjonær fase.Multimodale interaksjoner 29, 30, 31, 32. Nylig har Zhang et al.30 utarbeidet en dodecylterminert polyaminstasjonær fase og med suksess separerte hydrokarboner, antidepressiva, flavonoider, nukleosider, østrogener og flere andre analytter. Den polare interkalatoren har både polare og ikke-polare grupper, så den kan brukes til å skille peptider og proteiner som har både hydrofobe og hydrofile kolonner (C1d-polare-embeds, e. ) er kommersielt tilgjengelige under handelsnavnet Ascentis Express RP-Amide-kolonner, men disse kolonnene brukes kun til analyse av amin 33.
I den nåværende studien ble en polar-innstøpt stasjonær fase (N-fenylmaleimid-innstøpt polystyren) fremstilt og evaluert for separasjon av peptider og trypsin-fordøyelser av HSA. Den stasjonære fasen ble fremstilt ved å bruke følgende strategi.Porøse silikapartikler ble fremstilt i henhold til prosedyren gitt i vår forrige publikasjon, med noen protokoller, Preparatet til polyOS, Preparatet til preparatet med noen modifikasjoner. , ble vanneddiksyre justert for å fremstille silikapartikler med stor porestørrelse. For det andre ble en ny ligand, fenylmaleimid-metylvinylisocyanat, syntetisert og brukt til å derivatisere silikapartikler for å fremstille en polar innebygd stasjonær fase. Den resulterende stasjonære fasen ble pakket inn i en rustfri stålkolonne med hjelp av 180 mm pakking ved hjelp av 180 mm pakking. mekanisk vibrasjon for å sikre at det dannes et homogent sjikt i kolonnen. Vurder pakket kolonneseparasjon av peptidblandinger bestående av fem peptider;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) og Trypsin-fordøyelse av humant serumalbumin (HAS). Peptidblandingen og trypsin-fordøyelsen av HSA ble observert å separere med god oppløsning og effektivitet. Kolonneseparasjonsytelsen til RP-peptidene ble sammenlignet med PMP-søylen. og proteiner ble observert å være godt oppløst og effektive på PMP-kolonnen, som var mer effektiv enn Ascentis Express RP-Amide-kolonnen.
PEG (polyetylenglykol), urea, eddiksyre, trimetoksy-ortosilikat (TMOS), trimetylklorosilan (TMCS), trypsin, humant serumalbumin (HSA), ammoniumklorid, urea, heksanmetyldisilazan (HMDS), metakryloylklorid (MC, hydroxyd), benzogradydroksyd (HPLC, styren, 4-TE) trile (ACN), metanol, 2-propanol og aceton kjøpt fra Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).
En blanding av urea (8 g), polyetylenglykol (8 g) og 8 ml 0,01 N eddiksyre ble omrørt i 10 minutter, og deretter ble 24 ml TMOS tilsatt dertil under iskalde forhold. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 40°C i 6 timer og deretter ved 120 timer i autoklavet stål ble det tørket av i 8 timer. d ved 70°C i 12 timer. Den tørkede myke massen ble glattmalt i en ovn og kalsinert ved 550°C i 12 timer. Tre batcher ble fremstilt og karakterisert for å undersøke reproduserbarhet i partikkelstørrelse, porestørrelse og overflateareal.
Ved overflatemodifisering av silikapartikler med forhåndssyntetisert ligand fenylmaleimid-metylvinylisocyanat (PCMP) etterfulgt av radiell polymerisasjon med styren, ble en polar gruppe-holdig forbindelse fremstilt.Stasjonær fase for tilslag og polystyrenkjeder. Fremstillingsprosessen er beskrevet nedenfor.
N-fenylmaleimid (200 mg) og metylvinylisocyanat (100 mg) ble oppløst i tørr toluen, og 0,1 ml 2,2'-azoisobutyronitril (AIBN) ble tilsatt til reaksjonskolben for å fremstille fenylmaleimid-metylvinyl-isocyanatblandingen i 3,0 timer, tørket ved PMCP-copolymer og 30°C. d i ovn ved 40°C i 3 timer.
Tørkede silikapartikler (2 g) ble dispergert i tørr toluen (100 ml), omrørt og sonikert i en 500 ml rundbunnet kolbe i 10 minutter. PMCP (10 mg) ble oppløst i toluen og tilsatt dråpevis til reaksjonskolben via en dråpetrakt. Blandingen ble kokt under tilbakeløpskjøling ved 100 °C i 80 timer og ble kjølt under tilbakeløpskjøling ved 100 tonn. °C i 3 timer. Deretter ble PMCP-bundne silikapartikler (100 g) oppløst i toluen (200 ml) og 4-hydroksy-TEMPO (2 ml) ble tilsatt i nærvær av 100 µL dibutyltinn-dilaurat som katalysator. Blandingen ble omrørt ved 50 °C ved 50 °C og tørket i 8 timer ved 50 °C i 3 timer.
Styren (1 ml), benzoylperoksyd BPO (0,5 ml) og TEMPO-PMCP-festede silikapartikler (1,5 g) ble dispergert i toluen og spylt med nitrogen. Polymerisasjonen av styren ble utført ved 100 °C i 12 timer. Det resulterende produktet ble vasket med metanol over natten og tørket i metanol over natten i et reaksjonsskjema 60C over natten.
Prøvene ble avgasset ved 393 K i 1 time for å oppnå et resttrykk på mindre enn 10-3 Torr. Mengden av N2 adsorbert ved et relativt trykk på P/P0 = 0,99 ble brukt for å bestemme det totale porevolumet. Morfologien til bare og ligandbundne silikapartikler ble undersøkt med scanning-elektronisk mikroskopi (Hignitan-microscopy, Japan og Tokyo). ed silika-partikler) ble plassert på en aluminiumskolonne ved bruk av selvklebende karbontape. Gull ble belagt på prøvene ved bruk av en Q150T sputter-belegger, og et 5 nm Au-lag ble avsatt på prøvene. Dette forbedrer prosesseffektiviteten ved bruk av lave spenninger og gir finkornet, kald sputtering.A Thermo Electron (Waltham) 2 element ble brukt for EA MalWvernal analyse, MAWaltham analyse. orcestershire, UK) Mastersizer 2000 partikkelstørrelsesanalysator ble brukt for å oppnå partikkelstørrelsesfordelingen.Nakne silikapartikler og ligandbundne silikapartikler (5 mg hver) ble dispergert i 5 mL isopropanol, sonikert i 10 minutter, vortexet i 5 minutter og plassert på den optiske prøvebenken til en °C-analyse på 5 minutter. et temperaturområde på 30 til 800 °C.
Glassforede, smale søyler av rustfritt stål med dimensjoner (100 × 1,8 mm id) ble pakket ved bruk av slurry-pakkemetoden, ved å bruke samme prosedyre som brukt i Ref.31. En kolonne av rustfritt stål (glassforet, 100 × 1,8 mm id) med et utløpsarmatur som inneholdt en fritte på 1 µm ble koblet til en slampakker (Alltech Deerfield, IL, USA). Forbered en stasjonær fase slurry ved å suspendere 150 mg stasjonær fase i 1.2-kolonnen. Metanol ble brukt som lagringsmiddel og metanol. som drivløsningsmiddel.Fyll kolonnen sekvensielt ved å påføre trykk på 100 MP i 10 minutter, 80 MP i 15 minutter, og 60 MP i 30 minutter.Under pakking ble det påført mekanisk vibrasjon med to GC-kolonnerystere (Alltech, Deerfield, IL, USA) for å sikre jevn pakking av kolonnen for å forhindre at kolonnen pakkes langsom. slampakkeenheten og koble en annen kobling til innløpet og til LC-systemet for å kontrollere ytelsen.
En LC-pumpe (10AD Shimadzu, Japan), injektor (Valco (USA) C14 W.05) med 50nL injeksjonssløyfe, membranavgasser (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS kapillærvindu ble konstruert. Spesiell µLC-enhetsdetektor (UV-2075) og tilkobling av mikrosøyler med ekstra kortere glass-linje. båndutvidelse.Etter pakking ble kapillærer (50 μm id 365 og reduserende unionskapillærer (50 μm) installert ved 1/16″-utløpet til den reduserende union. Datainnsamling og kromatografisk prosessering ble utført ved bruk av Multichro 2000-programvare. Overvåking ved 254-analyser ble testet for 254 UV-analyser. (Northampton, MA).
Albumin fra humant serum, lyofilisert pulver, ≥ 96 % (agarosegelelektroforese) 3 mg blandet med trypsin (1,5 mg), 4,0 M urea (1 mL) og 0,2 M ammoniumbikarbonat (1 mL). Løsningen ble omrørt i 10 minutter og holdt i et vannbad på 1 mL i 1 mL, deretter i 1 mL i 1 mL, og deretter kjølt i 1 mL i 1 mL. TFA. Filtrer løsningen og oppbevar under 4 °C.
Separasjon av peptidblandinger og HSA-trypsinfordøyelser ble evaluert separat på PMP-kolonner. Sjekk separasjonen av peptidblandingen og trypsinfordøyelsen av HSA ved PMP-kolonnen og sammenlign resultatene med Ascentis Express RP-Amide-kolonnen. Det teoretiske platenummeret beregnes som følger:
SEM-bilder av bare silikapartikler og ligandbundne silikapartikler er vist i FIG.2 .SEM-bilder av bare silikapartikler (A, B) viser at, i motsetning til våre tidligere studier, er disse partiklene sfæriske der partiklene er forlengede eller har uregelmessig symmetri. Overflaten til de ligandbundne silikapartiklene (C, D) er jevnere enn overflaten til de nakne silikapartiklene, som kan skyldes overflaten av silisiumdioksydkjeden på partiklene.
Skanneelektronmikroskopbilder av bare silikapartikler (A, B) og ligandbundne silikapartikler (C, D).
Partikkelstørrelsesfordelingene til bare silikapartikler og ligandbundne silikapartikler er vist i figur 3(A).Volumbaserte partikkelstørrelsesfordelingskurver viste at størrelsen på silikapartiklene økte etter kjemisk modifikasjon (Fig. 3A).Partikkelstørrelsesfordelingsdataene til silikapartiklene fra den nåværende studien og den forrige studien er sammenlignet med P,(0) partikkelstørrelsen er sammenlignet med P,(0). 3,36 μm, sammenlignet med vår forrige studie med en ad(0,5) verdi på 3,05 μm (polystyrenbundne silikapartikler)34. Denne batchen hadde en smalere partikkelstørrelsesfordeling sammenlignet med vår forrige studie på grunn av de varierende forholdene mellom PEG, urea, TMOS og eddiksyrepartikkelen i reaksjonsblandingen som er litt større i polystyren-silikafasen enn PMP-partikkelfasen. fase vi tidligere studerte. Dette betyr at overflatefunksjonalisering av silikapartikler med styren kun avsatte et polystyrenlag (0,97 µm) på silikaoverflaten, mens lagtykkelsen i PMP-fasen var 1,38 µm.
Partikkelstørrelsesfordeling (A) og porestørrelsesfordeling (B) for bare silikapartikler og ligandbundne silikapartikler.
Porestørrelsen, porevolumet og overflatearealet til silikapartiklene i den nåværende studien er gitt i tabell 1(B). PSD-profilene til bare silikapartikler og ligandbundne silikapartikler er vist i figur 3(B). Resultatene er sammenlignbare med vår forrige studie. Porestørrelsene til de bare og ligandbundne silikapartiklene indikerer at porestørrelsene er henholdsvis 24310 og henholdsvis 24310. 69 etter kjemisk modifikasjon, som vist i tabell 1(B), og endringen av kurven er vist i fig. 3(B). Tilsvarende sank porevolumet til silikapartiklene fra 0,67 til 0,58 cm3/g etter kjemisk modifikasjon. Det spesifikke overflatearealet til de for tiden studerte silikapartiklene er sammenlignet med 1,26 m2/g11 i vår studie (som tidligere viste undersøkelse). stand 1(B), ble overflatearealet (m2/g) av silikapartiklene også redusert fra 116 m2/g til 105 m2/g etter kjemisk modifikasjon.
Resultatene av elementær analyse av den stasjonære fasen er vist i tabell 2. Karbonbelastningen til den nåværende stasjonære fasen er 6,35 %, noe som er lavere enn karbonbelastningen i vår forrige studie (polystyrenbundne silikapartikler, henholdsvis 7,93 %35 og 10,21 %) 42. Karbonbelastningen til den nåværende stasjonære fasen er lav, Fordi SP, polartilsetningen til den nåværende stasjonære fasen er lav, fordi SP, polartilsetningen i den nåværende stasjonære fasen er lav. Det ble brukt fenylmaleimid-metylvinylisocyanat (PCMP) og 4-hydroksy-TEMPO. Nitrogenvektprosenten av den nåværende stasjonære fasen er 2,21 %, sammenlignet med henholdsvis 0,1735 og 0,85 vektprosent nitrogen i tidligere studier. Dette betyr at vektprosenten av nitrogenet er høyere i den nåværende stasjonære karbon- og karbonamiden i den nåværende stasjonære fasen. s av produktene (4) og (5) var henholdsvis 2,7 % og 2,9 %, mens karbonbelastningen til sluttproduktet (6) var 6,35 %, som vist i tabell 2. Vekttapet ble kontrollert med PMP stasjonær fase, og TGA-kurven er vist i figur 4. TGA-kurven viser et vekttap på 3 i 6 %, fordi belastningen er i samsvar med 8 % og kun karbon er god. men også N, O og H.
Fenylmaleimid-metylvinylisocyanatliganden ble valgt for overflatemodifisering av silikapartikler fordi den har polare fenylmaleimidgrupper og vinylisocyanatgrupper. Vinylisocyanatgrupper kan reagere ytterligere med styren ved levende radikal polymerisering. Den andre grunnen er å sette inn en gruppe som har en moderat og ingen interaksjon mellom den analytiske fasen og den analytiske fasen med den analytiske fasen og den analytiske fasen. ylmaleimid-delen har ingen virtuell ladning ved normal pH. Polariteten til den stasjonære fasen kan kontrolleres av den optimale mengden styren og reaksjonstiden for friradikalpolymerisasjon. Det siste trinnet i reaksjonen (friradikalpolymerisasjon) er kritisk og kan endre polariteten til den stasjonære fasen.Elementanalyse ble utført for å sjekke karbonbelastningen til disse stasjonære fasene og økte reaksjonsmengden av styrene stasjoner og viIt var økte reaksjonsmengden av den observerte stasjonære fasen og viIt var økte reaksjonsmengden av den observerte karbonfasen. versa.SP-er tilberedt med forskjellige konsentrasjoner av styren har forskjellige karbonbelastninger. Igjen, last disse stasjonære fasene inn i rustfrie stålkolonner og kontroller deres kromatografiske ytelse (selektivitet, oppløsning, N-verdi, etc.). Basert på disse eksperimentene ble en optimalisert formulering valgt for å klargjøre den stasjonære PMP-fasen for å sikre kontrollert polaritet og god analyttretensjon.
Fem peptidblandinger (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucin-enkefalin) ble også evaluert ved bruk av en PMP-kolonne ved bruk av en mobil fase;60/40 (v/v) acetonitril/vann (0,1 % TFA) ved en strømningshastighet på 80 μL/min. Under optimale elueringsforhold er det teoretiske platenummeret (N) per kolonne (100 × 1,8 mm id) 20 000 ± 100 (200 000 P-platene/3 000 T-verdier for N-platene og 3 T-platene). kromatogrammer er vist i figur 5A. Rask analyse på en PMP-kolonne ved høy strømningshastighet (700 μL/min), fem peptider ble eluert i løpet av ett minutt, N-verdier var veldig gode, 13 500 ± 330 per kolonne (100 × 1,8 mm id), tilsvarer 5-plater/03-søylestørrelse, 0/03 m). (100 × 1,8 mm id) ble pakket med tre forskjellige partier av PMP stasjonær fase for å sjekke reproduserbarheten. Analyttkonsentrasjonen for hver kolonne ble registrert ved bruk av de optimale elueringsforholdene og antall teoretiske plater N og retensjonstid for å separere den samme testblandingen på hver kolonne. Reproduserbarhetsdataene for PMP-kolonnene er vist i tabell 4. Den svært lav reproduserbar verdi i PMP3-kolonnen er vist i %-reproduserbar verdi i % TRD. .
Separasjon av peptidblanding på PMP-kolonne (B) og Ascentis Express RP-Amide-kolonne (A);mobil fase 60/40 ACN/H2O (TFA 0,1%), PMP kolonnedimensjoner (100 × 1,8 mm id);analytisk Elueringsrekkefølgen for forbindelsene: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) og 5 (leucin) surt enkefalin)).
En PMP-kolonne (100 × 1,8 mm id) ble evaluert for separasjon av tryptiske fordøyelser av humant serumalbumin ved høyytelses væskekromatografi. Kromatogrammet i figur 6 viser at prøven er godt separert og oppløsningen er meget god. Som vist i kromatogrammet (Figur 6), har HSA-fordøyelsen blitt delt opp i 17 topper tilsvarende 17 peptider. Separasjonseffektiviteten til hver topp i HSA-fordøyelsen ble beregnet og verdiene er gitt i Tabell 5.
En tryptisk fordøyelse av HSA (100 x 1,8 mm id) ble separert på en PMP-kolonne;strømningshastighet (100 µL/min), mobil fase 60/40 acetonitril/vann med 0,1 % TFA.
hvor L er kolonnelengden, η er viskositeten til den mobile fasen, ΔP er kolonnens mottrykk, og u er den lineære hastigheten til den mobile fasen. Permeabiliteten til PMP-kolonnen var 2,5 × 10-14 m2, strømningshastigheten var 25 μL/min, og 60/40 v/v PMP/1 vann ble brukt til 60/40 v/v. var lik den i vår forrige studie Ref.34. Permeabiliteten til kolonnen pakket med overfladisk porøse partikler er: 1,7 × 10-15 for 1,3 μm partikler, 3,1 × 10-15 for 1,7 μm partikler, 5,2 × 10-15 og 102 m for 102 m partikler. μm-partikler 43. Derfor er permeabiliteten til PMP-fasen lik den for 5 μm kjerne-skallpartikler.
hvor Wx er vekten av kolonnen pakket med kloroform, Wy er vekten av kolonnen pakket med metanol, og ρ er tettheten til løsningsmidlet.Tettheter av metanol (ρ = 0,7866) og kloroform (ρ = 1,484). Den totale porøsiteten til SILICAPARTIKLER-C1008 kolonner-C1008-kolonne-C1008-kolonne-C1008-kolonne (1008-1008-kolonne). s 31 som vi tidligere studerte var henholdsvis 0,63 og 0,55. Dette betyr at tilstedeværelsen av urea-ligander reduserer permeabiliteten til den stasjonære fasen. På den annen side er den totale porøsiteten til PMP-kolonnen (100 × 1,8 mm id) 0,60. Permeabiliteten til PMP-kolonnene er lavere enn de C1-kolonnene som er bundet til PMP-søyle-partikkel-bundet i C8-kolonnene. ære faser er C18-liganden festet til silikapartiklene som lineære kjeder, mens i polystyren-type stasjonære faser dannes det relativt tykke polymerlaget rundt det. I et typisk eksperiment beregnes kolonneporøsiteten som:
Figur 7A,B viser PMP-kolonnen (100 × 1,8 mm id) og Ascentis Express RP-Amide-kolonnen (100 × 1,8 mm id) ved bruk av de samme elueringsbetingelsene (dvs. 60/40 ACN/H2O og 0,1 % TFA).) av van Deemter-tomten.Utvalgte peptidblandinger (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) ble fremstilt i 20 µL/ Minimumsstrømningshastigheten for begge kolonnene er 800 µL/min. Minimum HETP-verdier er optimum for P- og 8 prosent ved P- og 8 cent. er Express RP-Amide-kolonnen var henholdsvis 2,6 µm og 3,9 µm. HETP-verdiene indikerer at separasjonseffektiviteten til PMP-kolonnen (100 × 1,8 mm id) er mye bedre enn den kommersielt tilgjengelige Ascentis Express RP-Amide-søylen (100 × 1,8 mm id-verdien) viser ikke en signifikant reduksjon i N-verdien (fig. til vår forrige studie. Den høyere separasjonseffektiviteten til PMP-kolonnen (100 × 1,8 mm id) sammenlignet med Ascentis Express RP-Amide-kolonnen er basert på forbedringer i partikkelform, størrelse og komplekse kolonnepakkingsprosedyrer brukt i det nåværende arbeidet34.
(A) van Deemter-plott (HETP versus lineær hastighet i mobilfase) oppnådd ved bruk av en PMP-kolonne (100 × 1,8 mm id) i 60/40 ACN/H2O med 0,1 % TFA.(B) van Deemter-plot (HETP versus lineær hastighet i mobilfase) oppnådd ved bruk av en Ascentis Express RP-Amid 4 i 000 mm2-kolonne (Acentis Express RP-Amid 4 in 000 mm2) med 0,1 % TFA.
En polar-innstøpt polystyren-stasjonær fase ble fremstilt og evaluert for separasjon av syntetiske peptidblandinger og trypsin-fordøyelser av humant serumalbumin (HAS) i høyytelses væskekromatografi. Den kromatografiske ytelsen til PMP-kolonner for peptidblandinger er utmerket i separasjonseffektivitet og oppløsning. partikler, kontrollert syntese av den stasjonære fasen, og kompleks kolonnepakking. I tillegg til høy separasjonseffektivitet er lavt kolonnemottrykk ved høye strømningshastigheter en annen fordel med denne stasjonære fasen. PMP-kolonner viser god reproduserbarhet og kan brukes til analyse av peptidblandinger og trypsinfordøyelse av ulike proteiner. Vi har til hensikt å bruke denne kolonnen for separasjon av medisinske funchromografiske produkter fra fremtidige medisiner, bioaktive, naturlige produkter, i bioaktive planteprodukter. , PMP-kolonner vil også bli evaluert for separasjon av proteiner og monoklonale antistoffer.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Research on Peptide Separation Systems by Reversed Phase Chromatography Part I: Development of a Column Characterization Protocol.J.Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al.Forbedrede aktive peptider designet for behandling av infeksjonssykdommer.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic therapeutic peptides: science and the market.drug discovery.15 (1-2) i dag, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (120.009).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.Chromatography.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Avansert væskekromatografi-massespektrometri muliggjør inkorporering av bredt målrettet metabolomics og proteomics.anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Rollen til UHPLC i legemiddelutvikling.J.Sep. Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Grunnleggende og praktiske aspekter ved ultrahøytrykks væskekromatografi for raske separasjoner.J.Sep. Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Anvendelse av væskekromatografi med ultrahøy ytelse i medikamentutvikling.J.Chromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. Monolittiske makroporøse hydrogeler fremstilt fra olje-i-vann emulsjoner med høy indre fase for effektiv rensing av enterovirus. Chemical.Britain.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Rollen til væskekromatografi i proteomikk.J.Chromatography.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. Fremvoksende trender i reversert-fase væskekromatografiseparasjoner av terapeutiske peptider og proteiner: teori og anvendelser.J.Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Todimensjonal separasjon av peptider ved bruk av et RP-RP-HPLC-system som bruker forskjellige pH-verdier i den første og andre separasjonsdimensjonen.J.Sep. Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al. Masseoverføringsegenskapene og kinetisk ytelse til høyeffektive kromatografiske kolonner pakket med C18 sub-2 μm fullstendig og overfladisk porøse partikler ble undersøkt.J.Sep. Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Nylige trender og analytiske utfordringer innen isolering, identifisering og validering av plantebioaktive peptider.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-0218-028-00216-0218-0018-28.
Mueller, JB et al. The proteomic landscape of the rike of life.Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al. Nedstrøms prosessering av terapeutiske peptider ved preparativ væskekromatografi. Molecule (Basel, Sveits) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Blandet-modus kromatografi og dens anvendelse på biopolymerer.J.Chromatography.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y. & Sun, Y. Ligander for blandet-modus proteinkromatografi: prinsipp, karakterisering og design.J.Biotechnology.144(1), 3-11 (2009).