Nature.com ପରିଦର୍ଶନ କରିଥିବାରୁ ଆପଣଙ୍କୁ ଧନ୍ୟବାଦ। ଆପଣ ବ୍ୟବହାର କରୁଥିବା ବ୍ରାଉଜର୍ ସଂସ୍କରଣରେ CSS ପାଇଁ ସୀମିତ ସମର୍ଥନ ଅଛି | ସର୍ବୋତ୍ତମ ଅଭିଜ୍ଞତା ପାଇଁ, ଆମେ ପରାମର୍ଶ ଦେଉଛୁ ଯେ ଆପଣ ଏକ ଅପଡେଟ୍ ବ୍ରାଉଜର୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ (କିମ୍ବା ଇଣ୍ଟରନେଟ୍ ଏକ୍ସପ୍ଲୋରରରେ ସୁସଙ୍ଗତତା ମୋଡ୍ ବନ୍ଦ କରନ୍ତୁ)। ଏହି ସମୟ ମଧ୍ୟରେ, ନିରନ୍ତର ସମର୍ଥନ ନିଶ୍ଚିତ କରିବାକୁ, ଆମେ ଷ୍ଟାଇଲ୍ ଏବଂ ଜାଭାସ୍କ୍ରିପ୍ଟ ବିନା ସାଇଟ୍ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିବୁ |
ହ୍ୟୁମାନ୍ ଗୁଟ୍ ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ 3D ଏପିଟେଲିଆଲ୍ ମାଇକ୍ରୋ ଆର୍କିଟେକଚର୍ ଏବଂ ସ୍ପେସାଲ୍ ସଂଗଠନର କ୍ରିପ୍ଟ-ଭିଲସ୍ ବ features ଶିଷ୍ଟ୍ୟ ପ୍ରତିଷ୍ଠା କରେ | ଏହି ଅନନ୍ୟ ଗଠନଟି ଏକ୍ସୋଜେନସ୍ ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ଆଣ୍ଟିଜେନ୍ ଏବଂ ସେମାନଙ୍କ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ ରୁ ବେସାଲ୍ କ୍ରିପ୍ଟରେ ଷ୍ଟେମ୍ ସେଲ୍ ନିଚ୍ ରକ୍ଷା କରି ଅନ୍ତ gut ସ୍ଥଳୀ ଭିଲି ଏବଂ ଗୁପ୍ତ ମକ୍ୟୁସ୍ ସିକ୍ରେଟ କରିବା ଦ୍ int ାରା ଅନ୍ତର୍ନିହିତ ଭିଟ୍ରାଲ୍ ମକ୍ୟୁସ୍ ସୃଷ୍ଟି କରିଥାଏ। ଉଲ୍ଲେଖଯୋଗ୍ୟ, ଜ organic ବିକ ମିମେଟିକ୍ ଗୁଟ୍-ଅନ୍-ଚିପ୍ ବର୍ଦ୍ଧିତ ଶାରୀରିକ କାର୍ଯ୍ୟ ଏବଂ ବାୟୋମେକାନିକ୍ସ ସହିତ ଅନ୍ତ int ସ୍ଥ ଏପିଟେଲିୟମ୍ ର ସ୍ୱତ aneous ପ୍ରବୃତ୍ତ 3D ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ସୃଷ୍ଟି କରିପାରିବ | ଏଠାରେ, ଆମେ ଏକ ପୁନ oduc ପ୍ରବୃତ୍ତି ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ ପ୍ରଦାନ କରୁ, ଅନ୍ତ int ସ୍ଥ ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍କୁ ଏକ ମାଇକ୍ରୋଫ୍ଲୁଇଡିକ୍ ଚିପ୍ ଏବଂ ଏକ ଟ୍ରାନ୍ସବ୍ଲେଡ୍ ଏମ୍ବେଡେଡ୍ ହାଇବ୍ରିଡ୍ ପାଇଁ ଏକ ମାଇକ୍ରୋଫ୍ଲୁଇଡିକ୍ ଚିପ୍ସ ପାଇଁ ବର୍ଣ୍ଣିତ | ପାରମ୍ପାରିକ ସେଟିଂସମୂହରେ ତଥା ମାଇକ୍ରୋଫ୍ଲଏଡିକ୍ ପ୍ଲାଟଫର୍ମରେ ଏପିଥେଲିଆଲ୍ କୋଷଗୁଡିକ, 3D ମୋର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ର ଇନଡକ୍ସନ୍, ଏବଂ ଏକାଧିକ ଇମେଜିଙ୍ଗ୍ ମୋଡାଲିଟି ବ୍ୟବହାର କରି ପ୍ରତିଷ୍ଠିତ 3D ଏପିଥେଲିଆର ଚରିତ୍ରକରଣ .ଏହି ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ 5 ଡି ପାଇଁ ବେସୋଲେଟେରାଲ୍ ଫ୍ଲୁଇଡ୍ ପ୍ରବାହକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରି କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମ ଅନ୍ତ gut ସ୍ଥ ମାଇକ୍ରୋ ଆର୍କିଟେକଚରର ପୁନ en ନିର୍ମାଣ ହାସଲ କରେ | ଜ omed ବ ଚିକିତ୍ସା ଅନୁସନ୍ଧାନ ସମ୍ପ୍ରଦାୟ ପାଇଁ ପ୍ରଭାବ, ବାୟୋମେଟିକାଲ୍, କ୍ଲିନିକାଲ୍ ଏବଂ ଫାର୍ମାସ୍ୟୁଟିକାଲ୍ ପ୍ରୟୋଗଗୁଡ଼ିକ ପାଇଁ ଭିଟ୍ରୋରେ 3D ଅନ୍ତ est ନଳୀ ଏପିଥେଲିଆଲ୍ ସ୍ତରଗୁଡିକ ପୁନ ener ନିର୍ମାଣ ପାଇଁ ଏକ ପଦ୍ଧତି ପ୍ରଦାନ କରିଥାଏ |
ପରୀକ୍ଷଣଗୁଡିକ ଦର୍ଶାଏ ଯେ ଅନ୍ତ gut ସ୍ଥ ଏପିଥେଲିଆଲ୍ କାକୋ-୨ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ଗୁଟ୍-ଅନ୍-ଚିପ୍ 1,2,3,4,5 କିମ୍ବା ବିଲାୟର୍ ମାଇକ୍ରୋଫ୍ଲୁଇଡିକ୍ ଡିଭାଇସ୍ 6,7 ରେ ଅନ୍ତର୍ନିହିତ ଯନ୍ତ୍ରକ of ଶଳର ସ୍ପଷ୍ଟ ବୁ understanding ାମଣା ବିନା ଭିଟ୍ରୋରେ ସ୍ୱତ aneous ପ୍ରବୃତ୍ତ 3D ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ଅତିକ୍ରମ କରିପାରନ୍ତି। ୨ ଏବଂ ରୋଗୀ-ପ୍ରାପ୍ତ ଅନ୍ତ est ନଳୀ ଅର୍ଗାନଏଡ୍ |ଏପିଥେଲିଆଲ୍ କୋଷଗୁଡିକ ବ valid ଧ ହେଲା | ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, ଆମେ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଭାବରେ ସେଲ୍ ଉତ୍ପାଦନ ଏବଂ ଏକ ଶକ୍ତିଶାଳୀ Wnt ଆଣ୍ଟାଗନାଷ୍ଟ୍, ଡିକ୍କୋଫ୍ -1 (DKK-1) ର ଗୁଟ୍-ଅନ୍-ଚିପ୍ ଏବଂ ଟ୍ରାନ୍ସଫର୍ଭ ଇନ୍ସର୍ଟ ଧାରଣ କରିଥିବା ମାଇକ୍ରୋଫ୍ଲୁଇଡିକ୍ ଉପକରଣଗୁଡ଼ିକରେ “ହାଇବ୍ରିଡ୍ ଚିପ୍” କୁହାଯାଏ | -1) ଅନ୍-ଚିପ୍ ଗୁଟ୍କୁ ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ପ୍ରତିରୋଧ କରେ କିମ୍ବା ସଂରକ୍ଷିତ 3D ଏପିଟେଲିଆଲ୍ ସ୍ତରକୁ ବ୍ୟାଘାତ କରେ, ପରାମର୍ଶ ଦେଇଥାଏ ଯେ ଭିଟ୍ରୋରେ ଅନ୍ତ int ସ୍ଥ ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ପାଇଁ ସଂସ୍କୃତି ସମୟରେ ଆଣ୍ଟାଗନାଷ୍ଟିକ୍ ଚାପ ଦାୟୀ ଅଟେ | ତେଣୁ, ଏପିଟେଲିଆଲ୍ ଇଣ୍ଟରଫେସରେ ଦୃ ust ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ହାସଲ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ବ୍ୟବହାରିକ ଉପାୟ ହେଉଛି, ବାସ୍ଫୁଲ୍ ଚିପ୍-ଅନ୍-ହାଇବ୍ରିଡ୍-ପ୍ଲାଟଫର୍ମରେ ଏକ ସକ୍ରିୟ ଚିପ୍-ଅନ୍-ହାଇବ୍ରିଡ୍ ସ୍ତର ଉପରେ | ବିସ୍ତାର
ଏହି ପ୍ରୋଟୋକଲରେ, ଆମେ ପଲିଟାଇମେଥାଇଲସିଲକ୍ସନ୍ (PDMS) ଆଧାରିତ ପୋରସ୍ ମେମ୍ବ୍ରେନ୍ (ଷ୍ଟେପ୍ 6A, 7A, 8, 9) କିମ୍ବା ଟ୍ରାନ୍ସୱେଲ ଇନ୍ସର୍ଟ (ଷ୍ଟେପ୍ 6B, ଷ୍ଟେପ୍ 6B, ଷ୍ଟେପ୍ 6B, ଷ୍ଟେପ୍ 6B, ଷ୍ଟେପ୍ 6B, ଷ୍ଟେପ୍ 6B, ଷ୍ଟେପ୍ 6B, ଷ୍ଟେପ୍ 6B, ଷ୍ଟେପ୍ 6B, ଷ୍ଟେପ୍ 6B) ସେଲୁଲାର୍ ଏବଂ ମଲିକୁଲାର ବ features ଶିଷ୍ଟ୍ୟଗୁଡିକ ଟିସୁ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ହିଷ୍ଟୋଜେନେସିସ୍ ଏବଂ ବଂଶାନୁକ୍ରମିକ ନିର୍ଭରଶୀଳ ସେଲୁଲାର୍ ଭିନ୍ନତାକୁ ସୂଚାଇଥାଏ ଯାହା ଏକାଧିକ ଇମେଜିଙ୍ଗ୍ ମୋଡାଲୀ (ଷ୍ଟେପ୍ 11-24) ପ୍ରୟୋଗ କରିଥାଏ | 2D ଏପିଥେଲିଆଲ୍ ମୋନୋଲାୟର୍ସରୁ 3D ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍, ଆମେ ସଂସ୍କୃତିର ବେସୋଲେଟେରାଲ୍ କମ୍ପାର୍ଟମେଣ୍ଟରେ ମଧ୍ୟମ ପ୍ରବାହିତ କରି ଉଭୟ ସଂସ୍କୃତ ରୂପରେ ମର୍ଫୋଜେନ୍ ଆଣ୍ଟାଗନାଷ୍ଟସ୍ ଅପସାରଣ କରିଥିଲୁ | ଶେଷରେ, ଆମେ ଏକ ପୁନ ener ନିର୍ମାଣ ଯୋଗ୍ୟ 3D ଏପିଥେଲିଆଲ୍ ସ୍ତରର ଉପଯୋଗିତାକୁ ଉପସ୍ଥାପନ କରୁ ଯାହା ମର୍ଫୋଜେନ୍-ନିର୍ଭରଶୀଳ ଏପିଥେଲିଆଲ୍ ବୃଦ୍ଧି, ଦ୍ରାଘିମା ହୋଷ୍ଟ-ମାଇକ୍ରୋବିଓମ୍ ସଂକ୍ରମଣ, ରୋଗ luences।
ଆମର ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ ମ basic ଳିକ (ଯଥା, ଅନ୍ତ int ସ୍ଥ ମ୍ୟୁକୋଜାଲ୍ ବାୟୋଲୋଜି, ଷ୍ଟେମ୍ ସେଲ୍ ବାୟୋଲୋଜି, ଏବଂ ଡେଭଲପମେଣ୍ଟାଲ୍ ବାୟୋଲୋଜି) ଏବଂ ପ୍ରୟୋଗ ଅନୁସନ୍ଧାନ (ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ପ୍ରିକ୍ଲିନିକାଲ୍ drug ଷଧ ପରୀକ୍ଷଣ, ରୋଗ ମଡେଲିଂ, ଟିସୁ ଇଞ୍ଜିନିୟରିଂ, ଏବଂ ଗ୍ୟାଷ୍ଟ୍ରୋଏଣ୍ଟେରୋଲୋଜି) ର ବ୍ୟାପକ ବ scientists ଜ୍ଞାନିକମାନଙ୍କ ପାଇଁ ଉପଯୋଗୀ ହୋଇପାରେ | ଏହା ସହିତ, ଆମର ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ ବିଭିନ୍ନ ସଂକ୍ରାମକ ଏଜେଣ୍ଟ ଯଥା ନୋରୋଭାଇରସ୍ ,, ଗୁରୁତର ତୀବ୍ର ଶ୍ ir ାସକ୍ରିୟା ସିଣ୍ଡ୍ରୋମ କରୋନାଭାଇରସ୍ ୨ (SARS-CoV-2), କ୍ଲୋଷ୍ଟ୍ରିଡିୟମ୍ ଡିଫାଇସିଲ୍, ସଲମାନେଲା ଟାଇଫାଇମରିୟମ୍ 9 କିମ୍ବା ଭିବ୍ରିଓ କଲେରା ଭଳି ସଂକ୍ରମଣ ବିଷୟରେ ପଚରାଯିବା ପାଇଁ ଉପଯୋଗୀ |ରୋଗ ପାଥୋଲୋଜି ଏବଂ ପାଥୋଜେନେସିସ୍ ର ଶ୍ରୋତାମାନେ ମଧ୍ୟ ଉପଯୋଗୀ ଅଟନ୍ତି | ଏକ ଅନ୍-ଚିପ୍ ଗୁଟ୍ ମାଇକ୍ରୋଫିଜିଓଲୋଜି ସିଷ୍ଟମର ବ୍ୟବହାର ଦ୍ରାଘିମା କୋ-ସଂସ୍କୃତି 10 ଏବଂ ପରବର୍ତ୍ତୀ ପ୍ରତିରକ୍ଷା, ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଏବଂ ପାକସ୍ଥଳୀ ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଆଘାତ ମରାମତି ପାଇଁ ଅନୁମତି ଦେଇପାରେ | ରୋଗୀର 3D ଅନ୍ତନଳୀ ଏପିଥେଲିଆଲ୍ ସ୍ତର, ଏହି ରୋଗଗୁଡ଼ିକରେ ଭିଲୋସ୍ ଆଟ୍ରୋଫି, କ୍ରିପ୍ଟ ସର୍ଟନିଂ, ମ୍ୟୁକୋଜାଲ୍ କ୍ଷତି, କିମ୍ବା ଦୁର୍ବଳ ଏପିଟେଲିଆଲ୍ ବ୍ୟାରେଜ୍ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ | ବାୟୋପସି କିମ୍ବା ଷ୍ଟେମ୍ ସେଲ୍ ଦ୍ ived ାରା ଉତ୍ପନ୍ନ ଅନ୍ତ est ସ୍ଥ ଅଙ୍ଗ 12,13।ଟିସୁ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରତିରକ୍ଷା କୋଷ, 5 |
ଯେହେତୁ 3D ଏପିଥେଲିଆଲ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍ଟ୍ରଷ୍ଟ୍ରକଚର୍ ସେକ୍ସିଂ ପ୍ରକ୍ରିୟା ବିନା ସ୍ଥିର ଏବଂ ଭିଜୁଆଲାଇଜ୍ ହୋଇପାରିବ, ସ୍ପେସାଲ୍ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟୋମିକ୍ସ ଏବଂ ହାଇ-ରିଜୋଲ୍ୟୁସନ୍ କିମ୍ବା ସୁପର-ରିଜୋଲ୍ୟୁସନ୍ ଇମେଜିଙ୍ଗରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରୁଥିବା ଦର୍ଶକମାନେ ଏପିଟେଲିଆଲ୍ ନେଚ୍ ଉପରେ ଜିନ୍ ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନର ସ୍ପାଟିଓଟୋମପୋରାଲ୍ ଡାଇନାମିକ୍ସର ମ୍ୟାପିଂ ପାଇଁ ଆଗ୍ରହୀ ହୋଇପାରନ୍ତି |ଟେକ୍ନୋଲୋଜିରେ ଆଗ୍ରହୀ | ମାଇକ୍ରୋବାୟାଲ୍ କିମ୍ବା ଇମ୍ୟୁନ ଉତ୍ସାହର ପ୍ରତିକ୍ରିୟାମକୋଜାଲ୍ ଇମ୍ୟୁନୋଲୋଜି, ଗ୍ୟାଷ୍ଟ୍ରୋଏଣ୍ଟେରୋଲୋଜି, ମାନବ ମାଇକ୍ରୋବିଓମ୍, କଲଚୁରୋମିକ୍ସ ଏବଂ କ୍ଲିନିକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋବିଓଲୋଜି ଅଧ୍ୟୟନ କରୁଥିବା ଦର୍ଶକଙ୍କ ପାଇଁ ଏହି ପଦ୍ଧତି ବିଶେଷ ଆକର୍ଷଣୀୟ ଅଟେ ଯଦି ଲାବୋରେଟୋରୀରେ ପୂର୍ବରୁ ଅଣସଂରକ୍ଷିତ ଗୁମ୍ଫ ମାଇକ୍ରୋବୋଟା ଚାଷ କରିବାକୁ ଚେଷ୍ଟା କରେ, ଯଦି ଆମର ଭିଟ୍ରୋ ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ ମାପନୀୟ ସଂସ୍କୃତି ଫର୍ମାଟରେ ଆଡାପ୍ଟ୍ଟ୍ ହୋଇପାରିବ, ଯେପରି ମଲ୍ଟିୱେଲ୍ ଇନ୍ସର୍ଟଗୁଡିକ 24, 96 କିମ୍ବା 384 ଭଲ ପ୍ଲେଟ୍ରେ ବିକଶିତ ହୋଇପାରିବ | ଖାଦ୍ୟ ଶିଳ୍ପ ପାଇଁ ଓମେଡିକାଲ୍ କିମ୍ବା ହାଇ-ଥ୍ରୋପଟ୍ ସ୍କ୍ରିନିଂ କିମ୍ବା ବ valid ଧତା ପ୍ଲାଟଫର୍ମ | ଏକ ପ୍ରୁଫ୍-ପ୍ରିନ୍ସିପ୍ ଭାବରେ, ଆମେ ନିକଟରେ ଏକ ମଲ୍ଟିପ୍ଲେକ୍ସ ହାଇ-ଥ୍ରୋପଟ୍ ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ସିଷ୍ଟମର 24-କୂଅ ପ୍ଲେଟ୍ ଫର୍ମାଟରେ ମାପନୀୟ ହେବାର ସମ୍ଭାବନା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଛୁ। ଏଥିସହ ଏକାଧିକ ଅଙ୍ଗ-ଅନ୍-ଚିପ୍ ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକ ବାଣିଜ୍ୟିକ ହୋଇଛି 16,17,18 | ଡ୍ରଗ୍ କିମ୍ବା ବାୟୋଥେରାପିଟିକ୍ସ ପରୀକ୍ଷା କରିବା ପାଇଁ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟୋମିକ୍ ସ୍ତରରେ ଭିଟ୍ରୋ ଗୁଟ୍ ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ର 3D ଗୁଟ୍ ସରୋଗେଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରି କିମ୍ବା ଅନ୍ତ gut ସ୍ଥ ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟାର ପୁନ oduc ପ୍ରବୃତ୍ତି ଆକଳନ କରିବା ପାଇଁ କଷ୍ଟମ୍ କିମ୍ବା ବାଣିଜ୍ୟିକ ଅଙ୍ଗ-ଅନ୍-ଚିପ୍ ମଡେଲ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଡ୍ରଗ୍ ପ୍ରାର୍ଥୀଙ୍କ ଅବଶୋଷଣ ଏବଂ ପରିବହନକୁ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା |
ଅନ୍ତ int ସ୍ଥ ଏପିଥେଲିଆଲ୍ ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ଅଧ୍ୟୟନ ପାଇଁ ସୀମିତ ସଂଖ୍ୟକ ମାନବ ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ମଡେଲଗୁଡିକ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଛି, ମୁଖ୍ୟତ vit ଭିଟ୍ରୋରେ 3D ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ସୃଷ୍ଟି କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରଯୁଜ୍ୟ ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ ଅଭାବରୁ | ପ୍ରକୃତରେ, ଅନ୍ତ gut ସ୍ଥଳୀ ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ବିଷୟରେ ବର୍ତ୍ତମାନର ଜ୍ଞାନ ପଶୁ ଅଧ୍ୟୟନ ଉପରେ ଆଧାରିତ (ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ଜେବ୍ରାଫିସ୍ 20, ମୂଷା 21 କିମ୍ବା କୁକୁଡ଼ା 22), ତଥାପି ସେମାନେ ଶ୍ରମ, ଏବଂ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ, ଏବଂ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ | ବହୁମୁଖୀ ମାପନୀୟ manner ଙ୍ଗରେ ପରୀକ୍ଷଣ କରାଯିବାର କ୍ଷମତାରେ ମଡେଲଗୁଡିକ ମଧ୍ୟ ସୀମିତ ଅଟେ | ତେଣୁ, ଭିଭୋ ପ୍ରାଣୀ ମଡେଲରେ ଭିଟ୍ରୋ ଆଉଟଫର୍ମରେ 3D ଟିସୁ ସଂରଚନାକୁ ପୁନ ener ନିର୍ମାଣ କରିବା ପାଇଁ ଆମର ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ପାରମ୍ପାରିକ ଷ୍ଟାଟିକ୍ 2D ସେଲ୍ ସଂସ୍କୃତି ମଡେଲଗୁଡିକ ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣନା କରାଯାଇଛି, 3D ଏପିଟେଲିଆଲ୍ ସଂରଚନାକୁ ବ୍ୟବହାର କରି ଆମକୁ ବିଭିନ୍ନ ମ୍ୟୁକୋଜାଲ୍ କିମ୍ବା ଇମ୍ୟୁନିଟି ସ୍ତରର ବିଭିନ୍ନ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ସ୍ପେସାଲ୍ ଲୋକାଲାଇଜ୍ ପରୀକ୍ଷା କରିବାକୁ ଅନୁମତି ଦେଇଛି | ହୋଷ୍ଟ ଫ୍ୟାକ୍ଟରଗୁଡିକର ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଓଲୋଜିକାଲ୍ ବିବର୍ତ୍ତନ (ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ଭିତର ବନାମ ବାହ୍ୟ ମକୁସ୍ ସ୍ତର, IgA ର ଗୁପ୍ତତା ଏବଂ ଆଣ୍ଟିମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ପେପ୍ଟାଇଡ୍) | ଅଧିକନ୍ତୁ, 3D ଏପିଥେଲିଆଲ୍ ମର୍ଫୋଲୋଜି ଆମକୁ ବୁ to ିବାକୁ ଅନୁମତି ଦେଇପାରେ ଯେ ଅନ୍ତ gut ସ୍ଥ ମାଇକ୍ରୋବୋଏଟା କିପରି ଏହାର ସମ୍ପ୍ରଦାୟ ଗଠନ କରେ ଏବଂ ସିନର୍ଜିଷ୍ଟିକ୍ ଭାବରେ ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ ଉତ୍ପାଦନ କରେ (ଯେପରିକି ସର୍ଟ-ଚେନ୍ ଫ୍ୟାଟି ଏସିଡ୍) କେବଳ ସେଲୁଲାର୍ ସଂଗଠନ ଏବଂ ଷ୍ଟେମ୍ ସେଲ୍ ନିଚ୍ ଗୁଡିକ ବେସାଲ୍ କ୍ରିପ୍ଟରେ ପ୍ରଦର୍ଶିତ ହୁଏ |
3D ଅନ୍ତ int ନଳୀ ଏପିଥେଲିଆଲ୍ ଗଠନ ସୃଷ୍ଟି କରିବାର ପଦ୍ଧତି ସହିତ, ସେଠାରେ ଅନେକ ଭିଟ୍ରୋ ପ୍ରଣାଳୀ ଅଛି | ଅନ୍ତ int ସ୍ଥ ଅର୍ଗାନଏଡ୍ ସଂସ୍କୃତି ହେଉଛି ଏକ ଅତ୍ୟାଧୁନିକ ଟିସୁ ଇଞ୍ଜିନିୟରିଂ କ techni ଶଳ ଯାହାକି ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ମର୍ଫୋଜେନ୍ ଅବସ୍ଥାରେ ଅନ୍ତ est ନଳୀ ଷ୍ଟେମ୍ କୋଷଗୁଡିକର ଚାଷ ଉପରେ ଆଧାରିତ 23,24,25 | ତଥାପି, ପରିବହନ ବିଶ୍ଳେଷଣ କିମ୍ବା ହୋଷ୍ଟ-ମାଇକ୍ରୋବିଅମ୍ କୋ-କଲଚର୍ସ ମଧ୍ୟରେ 3D ଅର୍ଗାନଏଡ୍ ମଡେଲଗୁଡିକର ବ୍ୟବହାର ପ୍ରାୟତ ing ଆହ୍ is ାନ ଅଟେ | ial କୋଷ ବା ଏକ୍ସୋଜେନସ୍ ଆଣ୍ଟିଜେନ୍ ସୀମିତ ଅଟେ |ମାଇକ୍ରୋ ଇଞ୍ଜେକ୍ଟର ବ୍ୟବହାର କରି ଅର୍ଗାନଏଡ ଲ୍ୟୁମେନଗୁଡିକର ପ୍ରବେଶକୁ ଉନ୍ନତ କରାଯାଇପାରିବ, 26,27 କିନ୍ତୁ ଏହି ପଦ୍ଧତି ଆକ୍ରମଣକାରୀ ଏବଂ ଶ୍ରମ-ଆବଶ୍ୟକ ଏବଂ ଏହା କରିବା ପାଇଁ ବିଶେଷ ଜ୍ଞାନ ଆବଶ୍ୟକ କରେ | ଅଧିକନ୍ତୁ, ସ୍ଥିର ଅବସ୍ଥାରେ ହାଇଡ୍ରୋଜେଲ ସ୍କାଫୋଲ୍ଡରେ ପରିଚାଳିତ ପାରମ୍ପାରିକ ଅର୍ଗାନଏଡ ସଂସ୍କୃତିଗୁଡିକ ଭିଭୋ ବାୟୋମେକାନିକ୍ସରେ ସକ୍ରିୟ ଭାବରେ ପ୍ରତିଫଳିତ ହୁଏ ନାହିଁ |
ଅନେକ ଗବେଷଣା ଗୋଷ୍ଠୀ ଦ୍ୱାରା ନିୟୋଜିତ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ପଦ୍ଧତିଗୁଡ଼ିକ ଜେଲ୍ ପୃଷ୍ଠଭୂମିରେ ଅଲଗା ମଣିଷର ଅନ୍ତ intest ସତ୍ତ୍ୱ କୋଷଗୁଡିକୁ ସଂସ୍କୃତ କରି ଗେଟ୍ ଏପିଥେଲିଆଲ୍ ଗଠନକୁ ଅନୁକରଣ କରିବା ପାଇଁ ସଂରକ୍ଷିତ 3D ହାଇଡ୍ରୋଜେଲ୍ ସ୍କେଫୋଲ୍ଡସ୍ ବ୍ୟବହାର କରେ। ସ୍କାଫୋଲ୍ଡରେ ଷ୍ଟ୍ରୋମାଲ୍ କୋଷଗୁଡିକ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରି ଷ୍ଟଲ୍ | ତଥାପି, ସଂରକ୍ଷିତ ସ୍କାଫୋଲ୍ଡର ପ୍ରକୃତି ସ୍ ont ତ aneous ସ୍ପୃତ ମର୍ଫୋଜେନେଟିକ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟାର ପ୍ରଦର୍ଶନକୁ ରୋକିପାରେ | ଏହି ମଡେଲଗୁଡିକ ମଧ୍ୟ ଗତିଶୀଳ ଲ୍ୟୁମିନାଲ୍ କିମ୍ବା ଇଣ୍ଟରସ୍ଟିସିଆଲ୍ ପ୍ରବାହ ପ୍ରଦାନ କରେ ନାହିଁ, ଫ୍ଲୁଇଡ୍ ଶିଅର ଚାପ ଅଭାବରୁ ଅନ୍ତ int ସ୍ଥ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଫିଜିଓଲୋଜିକାଲ୍ ଫଙ୍କସନ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତି | ମାଉସ୍ ଅନ୍ତ est ନଳୀ ଅର୍ଗାନଏଡଗୁଡିକ ଅନ୍ତ int ସ୍ଥ ଟ୍ୟୁବଲାର୍ ଗଠନ ଗଠନ ପାଇଁ ଇଚ୍ ହୋଇଥିବା s ାଞ୍ଚାଗୁଡ଼ିକୁ ଅନୁସରଣ କରନ୍ତି, ଏବଂ ମାଇକ୍ରୋଫ୍ଲାଇଡିକ୍ସ ମଡ୍ୟୁଲ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଇଣ୍ଟ୍ରାଲୁମାଇନାଲ୍ ଫ୍ଲୁଇଡ୍ ପ୍ରବାହକୁ ପୁନ ap ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ | ତଥାପି, ଏହି ମଡେଲ୍ ସ୍ ont ତ aneous ସ୍ପୃତ ମର୍ଫୋଜେନେଟିକ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରେ ନାହିଁ କିମ୍ବା ଅନ୍ତ gut ସ୍ଥ ମେକାନୋବିଓଲୋଜିକାଲ୍ ଗତିବିଧିକୁ ମଧ୍ୟ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରେ ନାହିଁ | ତରଳ ପ୍ରବାହ ଏବଂ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ବିକୃତି ଅତିରିକ୍ତ ଭାବରେ, ବାୟୋପ୍ରିଣ୍ଟିଂ ପ୍ରକ୍ରିୟା ସମାପ୍ତ ହେବା ପରେ, ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଅବସ୍ଥା କିମ୍ବା ସେଲ୍-ଟୁ-ସେଲ୍ ପାରସ୍ପରିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ମଡେଲ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା ସୀମିତ ହୋଇପାରେ | ଏହା ପରିବର୍ତ୍ତେ, ଆମର ପ୍ରସ୍ତାବିତ ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ ସ୍ ont ତ aneous ସ୍ପୃତ ଗୁମ୍ଫ ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍, ଶାରୀରିକ ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ପ୍ରଯୁଜ୍ୟ ଶିର ଚାପ, ବାୟୋମେକାନିକ୍ସ ଯାହା ଆମ ଭିତରର ଗତିଶୀଳତା, ଜ ological ବିକ ମଡ୍ୟୁରିଟି, ମ ical ଳିକ ପରିବେଶର ଜଟିଳତା | ବିଦ୍ୟମାନ ପଦ୍ଧତିଗୁଡିକର ଆହ୍ overcome ାନକୁ ଦୂର କରିବା ପାଇଁ ଜେନେସିସ୍ ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ ଏକ ପରିପକ୍ୱ ଆଭିମୁଖ୍ୟ ପ୍ରଦାନ କରିପାରେ |
ଆମର ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ ସମ୍ପୁର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ 3D ଏପିଥେଲିଆଲ୍ ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ଉପରେ ଧ୍ୟାନ ଦିଆଯାଇଛି, କେବଳ ସଂସ୍କୃତିରେ ଏପିଥେଲିଆଲ୍ କୋଷ ଏବଂ ଅନ୍ୟ କ surrounding ଣସି ପ୍ରକାରର ଆଖପାଖ କୋଷ ଯେପରିକି ମେସେଞ୍ଚାଇମାଲ୍ କୋଷ, ଏଣ୍ଡୋଥେଲିଆଲ୍ କୋଷ ଏବଂ ଇମ୍ୟୁନ କୋଷ। ଅନାବଶ୍ୟକ 3D ଏପିଥେଲିଆଲ୍ ସ୍ତର ଖାଇଲା, ଅତିରିକ୍ତ ଜ ological ବିକ ଜଟିଳତା ଯେପରିକି ଏପିଥେଲିଆଲ୍-ମେସେଞ୍ଚାଇମାଲ୍ ଇଣ୍ଟରାକସନ 33,34, ଏକ୍ସଟ୍ରାସେଲୁଲାର୍ ମ୍ୟାଟ୍ରିକ୍ସ (ECM) ଡିପୋଜିଟେସନ୍ 35 ଏବଂ ଆମ ମଡେଲରେ କ୍ରିପ୍ଟ-ଭିଲସ୍ ବ features ଶିଷ୍ଟ୍ୟ ଯାହା ବେସାଲ୍ କ୍ରିପ୍ଟରେ ଷ୍ଟେମ୍ ସେଲ୍ ନିଚ୍ ପ୍ରଦାନ କରେ ତାହା ଅଧିକ ବିଚାର କରିବାକୁ ବାକି ରହିଲା | ଆମ ମଡେଲରେ ଏନକାଇମାଲ୍ କୋଷଗୁଡିକ ମର୍ଫୋଜେନେଟିକ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟା ଏବଂ କୋଷ ସଂଲଗ୍ନକ ଦକ୍ଷତାକୁ ବ anced ାଇଥାଏ | ଏଣ୍ଡୋଥେଲିଆଲ୍ ସ୍ତର (ଅର୍ଥାତ୍ କ୍ୟାପିଲାରୀ କିମ୍ବା ଲିମ୍ଫାଟିକ୍ସ) ମଲିକୁଲାର ପରିବହନ 39 ଏବଂ ଇମ୍ୟୁନ ସେଲ୍ ନିଯୁକ୍ତି 40 ରେ ନିୟନ୍ତ୍ରିତ କରିବାରେ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରିଥାଏ | ରେଜୋଲୁସନ। ଅନ୍ତର୍ନିହିତ ରୋଗର ଅନୁକରଣ ପ୍ରସଙ୍ଗରେ ଅନ୍ତର୍ନିହିତ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପ୍ରତିକ୍ରିୟା, ଆଣ୍ଟିଜେନ୍ ଉପସ୍ଥାପନା, ଅନ୍ତର୍ନିହିତ ଆଡାପ୍ଟିଭ୍ ଇମ୍ୟୁନ କ୍ରସଷ୍ଟାଲ୍ ଏବଂ ଟିସୁ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପ୍ରଦର୍ଶନ ପାଇଁ ରୋଗୀ-ଉତ୍ପାଦିତ ପ୍ରତିରକ୍ଷା କୋଷଗୁଡ଼ିକ ମଧ୍ୟ ଜରୁରୀ |
ହାଇବ୍ରିଡ୍ ଚିପ୍ସର ବ୍ୟବହାର ଗୁଟ୍-ଅନ୍-ଚିପ୍ ଅପେକ୍ଷା ଅଧିକ ସରଳ କାରଣ ଡିଭାଇସ୍ ସେଟଅପ୍ ସରଳ ଏବଂ ଟ୍ରାନ୍ସୱେଲ ଇନ୍ସର୍ଟ ବ୍ୟବହାର ଗୁଟ ଏପିଥେଲିୟମର ମାପନୀୟ ସଂସ୍କୃତି ପାଇଁ ଅନୁମତି ଦେଇଥାଏ | ତଥାପି, ପଲିଷ୍ଟର ମେମ୍ବ୍ରାନ ସହିତ ବାଣିଜ୍ୟିକ ଭାବରେ ଟ୍ରାନ୍ସୱେଲ ଇନ୍ସର୍ଟ ଇଲାଷ୍ଟିକ୍ ନୁହେଁ ଏବଂ ପେରିଷ୍ଟାଲ୍ଟିକ୍ ପରି ଗତିକୁ ଅନୁକରଣ କରିପାରିବ ନାହିଁ | ହାଇବ୍ରିଡ୍ ଚିପ୍ସରେ ଦୀର୍ଘକାଳୀନ ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ ସହ-ସଂସ୍କୃତିକୁ କ୍ୱଚିତ୍ ସକ୍ଷମ କରିଥାଏ | ଯେତେବେଳେ ଆମେ ହାଇବ୍ରିଡ୍ ଚିପ୍ସ ବ୍ୟବହାର କରିବା ସମୟରେ ଟ୍ରାନ୍ସୱେଲ ଇନ୍ସର୍ଟରେ 3D ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ସୃଷ୍ଟି କରିପାରିବା, ଶାରୀରିକ ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ପ୍ରଯୁଜ୍ୟ ବାୟୋମେକାନିକ୍ସର ଅଭାବ ଏବଂ ଆପିକାଲ୍ ଫ୍ଲୁଇଡ୍ ପ୍ରବାହ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ପ୍ରୟୋଗଗୁଡ଼ିକ ପାଇଁ ହାଇବ୍ରିଡ୍ ଚିପ୍ ପ୍ଲାଟଫର୍ମର ସମ୍ଭାବନାକୁ ସୀମିତ କରିପାରେ |
ଗୁଟ୍-ଅନ୍-ଚିପ୍ ଏବଂ ହାଇବ୍ରିଡ୍-ଅନ୍-ଚିପ୍ ସଂସ୍କୃତିରେ ମାନବ କ୍ରିପ୍ଟ-ଭିଲସ୍ ଅକ୍ଷାର ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ-ପୁନ recon ନିର୍ମାଣ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ରୂପେ ସ୍ଥାପିତ ହୋଇପାରି ନାହିଁ | ଯେହେତୁ ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ଏକ ଏପିଟେଲିଆଲ୍ ମୋନୋଲାୟର୍ ଠାରୁ ଆରମ୍ଭ ହୁଏ, 3D ମାଇକ୍ରୋ ଆର୍କିଟେକଚର୍ସ ଭିଭୋରେ କ୍ରିପ୍ଟଗୁଡିକ ସହିତ ମର୍ଫୋଲୋଜିକାଲ୍ ସମାନତା ପ୍ରଦାନ କରେ ନାହିଁ, ଯଦିଓ ଆମେ ବେସାଲ୍ କ୍ରିପ୍ଟ ଡୋମେନ୍ ନିକଟରେ ବିସ୍ତାରିତ ସେଲ୍ ଜନସଂଖ୍ୟାକୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ କରିଥିଲୁ | ଚିପ୍ ଉପରେ ଉପର ଚ୍ୟାନେଲଗୁଡିକ ମାଇକ୍ରୋ ଇଞ୍ଜିନିୟର୍ ଏପିଥେଲିୟମ୍ ର ଉଚ୍ଚତାକୁ ବ lead ାଇଥାଏ, ସର୍ବାଧିକ ଉଚ୍ଚତା ଏପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ~ 300–400 µm ମଧ୍ୟରେ ସୀମିତ | ଛୋଟ ଏବଂ ବଡ଼ ଅନ୍ତନଳୀରେ ମାନବ ଅନ୍ତ est ନଳୀ କ୍ରିପ୍ଟର ପ୍ରକୃତ ଗଭୀରତା ଯଥାକ୍ରମେ ~ 135 µm ଏବଂ ~ 400 µm, ଏବଂ କ୍ଷୁଦ୍ର ଅନ୍ତ est ସ୍ଥ ଭିଲିର ଉଚ୍ଚତା ~ 600 µm41 |
ଏକ ଇମେଜିଙ୍ଗ୍ ଦୃଷ୍ଟିକୋଣରୁ, 3D ମାଇକ୍ରୋ ଆର୍କିଟେକଚରର ସିଟୁ ସୁପର-ରିଜୋଲ୍ୟୁସନ୍ ଇମେଜିଙ୍ଗ୍ ଏକ ଚିପ୍ ଉପରେ ଥିବା ଅନ୍ତ gut ସ୍ଥଳୀରେ ସୀମିତ ହୋଇପାରେ, କାରଣ ଅବଜେକ୍ଟିଭ୍ ଲେନ୍ସରୁ ଏପିଥେଲିଆଲ୍ ସ୍ତର ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଆବଶ୍ୟକ କାର୍ଯ୍ୟ ଦୂରତା କିଛି ମିଲିମିଟର କ୍ରମରେ ଅଛି | ଏହି ସମସ୍ୟାକୁ ଦୂର କରିବା ପାଇଁ ଏକ ଦୂର ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟ ଆବଶ୍ୟକ ହୋଇପାରେ | ଅଧିକନ୍ତୁ, ଇମେଜିଙ୍ଗ୍ ନମୁନା ପ୍ରସ୍ତୁତି ପାଇଁ ପତଳା ବିଭାଗ ତିଆରି କରିବା, PDMS.Fricor ର ଚିରାଚରିତ ସ୍ତର, ସ୍ତର, ଏପିଟେଲିଆଲ୍ ସ୍ତରର ଭୂପୃଷ୍ଠ ଗଠନ ଯାଞ୍ଚ କରିବା ପାଇଁ ଉପର ସ୍ତରକୁ ଖୋଲିବା କିମ୍ବା ଅପସାରଣ କରିବା ଅତ୍ୟନ୍ତ ଚ୍ୟାଲେଞ୍ଜ ଅଟେ | ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ସ୍କାନିଂ ଇଲେକ୍ଟ୍ରନ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ୍ (SEM) ବ୍ୟବହାର କରି |
ହାଇଡ୍ରୋଫୋବିକ୍ କ୍ଷୁଦ୍ର ଅଣୁଗୁଡ଼ିକ ସହିତ କାରବାର କରୁଥିବା ମାଇକ୍ରୋଫ୍ଲୁଇଡିକ୍-ଆଧାରିତ ଅଧ୍ୟୟନରେ PDMS ର ହାଇଡ୍ରୋଫୋବିସିଟି ଏକ ସୀମିତ କାରକ ଅଟେ, ଯେହେତୁ PDMS ଏହିପରି ହାଇଡ୍ରୋଫୋବିକ୍ ଅଣୁଗୁଡିକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଭାବରେ ଆଡର୍ସବ କରିପାରିବ | PDMS ର ଆଲର୍ନେଟିଭ୍ ଅନ୍ୟ ପଲିମେରିକ୍ ସାମଗ୍ରୀ ସହିତ ବିବେଚନା କରାଯାଇପାରେ |
ପରିଶେଷରେ, ଏକ ଉଚ୍ଚ-ଥ୍ରୋପୁଟ ସ୍କ୍ରିନିଂ କିମ୍ବା “ଏକ-ଆକାର-ଫିଟ୍-ସମସ୍ତ” ଉପଭୋକ୍ତା-ଅନୁକୂଳ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପ୍ଲାଟଫର୍ମ ଯୋଗାଇବାରେ ଆମର ପଦ୍ଧତି ଭଲ ଭାବରେ ବର୍ଣ୍ଣିତ ହୋଇନାହିଁ | ବର୍ତ୍ତମାନର ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ ପ୍ରତି ମାଇକ୍ରୋଡେଭାଇସ୍ ପାଇଁ ଏକ ସିରିଞ୍ଜ୍ ପମ୍ପ ଆବଶ୍ୟକ କରେ, ଯାହା ଏକ CO2 ଇନକ୍ୟୁବେଟରରେ ସ୍ଥାନ ନେଇଥାଏ ଏବଂ ବଡ଼ ଆକାରର ପରୀକ୍ଷଣକୁ ରୋକିଥାଏ | ମିଡିଆ) |
ଭିଟ୍ରୋରେ ମାନବ ଅନ୍ତ est ନଳୀ ଏପିଥେଲିୟମର 3D ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ସୃଷ୍ଟି କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ ଏକ ମାଇକ୍ରୋଫ୍ଲଏଡିକ୍ ଚିପ୍ ଅନ୍ତନଳୀ ଉପକରଣ ବ୍ୟବହାର କରି ଦୁଇଟି ସମାନ୍ତରାଳ ମାଇକ୍ରୋଚାନେଲ୍ ଏବଂ ଏକ ଇଲେଷ୍ଟିକ୍ ପୋରସ୍ ମେମ୍ବ୍ରେନ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଏକ ଲ୍ୟୁମେନ-କ୍ୟାପିଲାରୀ ଇଣ୍ଟରଫେସ୍ ସୃଷ୍ଟି କରିଥାଉ | ବେସୋଲେଟେରାଲ୍ କମ୍ପାର୍ଟମେଣ୍ଟରୁ ମର୍ଫୋଜେନ୍ ଆଣ୍ଟାଗନାଷ୍ଟମାନଙ୍କୁ ହଟାଇବା ପାଇଁ ପ୍ରବାହର ଦିଗଦର୍ଶନ ପ୍ରୟୋଗ କରି ପ୍ରଦର୍ଶିତ ହୁଅନ୍ତୁ | ସମଗ୍ର ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପ୍ରଣାଳୀ (ଚିତ୍ର 1) ପାଞ୍ଚଟି ଅଂଶକୁ ନେଇ ଗଠିତ ହୋଇଛି:ବାକ୍ସ 2-5), (iii) ଅନ୍ତ int ସ୍ଥ ଚିପ୍ସ କିମ୍ବା ହାଇବ୍ରିଡ୍ ଚିପ୍ସ ଉପରେ ଅନ୍ତ int ସ୍ଥ ଏପିଥେଲିଆଲ୍ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ସଂସ୍କୃତି (ଷ୍ଟେପ୍ 6-9), (iv) ଭିଟ୍ରୋ (ଷ୍ଟେପ୍ 10) ଏବଂ (v)) 3D ଏପିଟେଲିଆଲ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍ଟ୍ରଷ୍ଟ୍ରକଚର୍ (ଷ୍ଟେପ୍ 11-24) କୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ଉପଯୁକ୍ତ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ (ଟେମ୍ପଲ୍ ମୋର୍ଫେଲେସିସ୍, ସ୍ପେସାଲ୍ ମର୍ଫେନ୍ଥେସିସ୍, ସ୍ପେସାଲ୍ ମର୍ଫେନ୍ଥେସିସ୍, ସ୍ପେସାଲ୍ ମୋର୍ଟେଲିଜେସ୍, ସ୍ପେସାଲ୍ ମର୍ଫେନ୍ଥେସିସ୍ ଦ୍ by ାରା ପରିକଳ୍ପିତ ହୋଇଛି) ନିୟନ୍ତ୍ରଣ
ଆମେ ଦୁଇଟି ଭିନ୍ନ ସଂସ୍କୃତି ପ୍ଲାଟଫର୍ମ ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲୁ: ସିଧାସଳଖ ଚ୍ୟାନେଲ କିମ୍ବା ଅଣ-ଲାଇନ୍ କନ୍ଭୋଲ୍ୟୁଟେଡ୍ ଚ୍ୟାନେଲ ସହିତ ଗୁଟ୍-ଅନ୍-ଚିପ୍, କିମ୍ବା ମାଇକ୍ରୋଫ୍ଲାଇଡିକ୍ ଉପକରଣରେ ଟ୍ରାନ୍ସୱେଲ (TW) ଇନ୍ସର୍ଟ ଧାରଣ କରିଥିବା ହାଇବ୍ରିଡ୍ ଚିପ୍ସ, ବକ୍ସ 1 ରେ ବର୍ଣ୍ଣନା କରାଯାଇଥିବା ପରି ତିଆରି ହୋଇଛି ଏବଂ ଷ୍ଟେପ୍ 1 -5। ପ୍ରୋଟୋକଲ୍। ”ଇନ୍ ଭିଟ୍ରୋ ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍” ସାମଗ୍ରିକ ପଦକ୍ଷେପଗୁଡ଼ିକୁ ଦର୍ଶାଏ ଯେଉଁଥିରେ କାକୋ-୨ କିମ୍ବା ଅର୍ଗାନଏଡ୍-ଉତ୍ପାଦିତ ଏପିଥେଲିଆଲ୍ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ଏକ ଅନ୍ତ est ନଳୀ ଚିପ୍ ଉପରେ କିମ୍ବା ହାଇବ୍ରିଡ୍ ଚିପ୍ ର ଟ୍ରାନ୍ସୱେଲ ଇନ୍ସର୍ଟରେ ସଂସ୍କୃତି ପ୍ରାପ୍ତ ହୁଏ, ତା’ପରେ 3D ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ଏବଂ ଏକ ବର୍ଣ୍ଣିତ ଏପିଟେଲିଆଲ୍ ଗଠନ ଗଠନ ହୁଏ | ପ୍ରୋଗ୍ରାମ ଷ୍ଟେପ୍ ନମ୍ବର କିମ୍ବା ବକ୍ସ ନମ୍ବର ପ୍ରତ୍ୟେକ ତୀର ତଳେ ପ୍ରଦର୍ଶିତ ହୁଏ | ହୋଷ୍ଟ-ମାଇକ୍ରୋବାୟୋମ୍ ଇକୋସିଷ୍ଟମ୍ ଏବଂ ରୋଗ ମଡେଲିଙ୍ଗ୍ agglutinin। “ହୋଷ୍ଟ-ମାଇକ୍ରୋବ କୋ-କଲଚର୍ସ” ରେ ଦୁଇଟି ଓଭରଲିପ୍ ହୋଇଥିବା ଚିତ୍ରଗୁଡ଼ିକ ଏକ ଚିପ୍‌ରେ ପ୍ରତିନିଧୀ ହୋଷ୍ଟ-ମାଇକ୍ରୋବିଓମ କୋ-କଲଚର୍ସ ଦେଖାଏ | ବାମ ପ୍ୟାନେଲରେ ଇ-କୋଲିର ସହ-ସଂସ୍କୃତି ପ୍ରଦର୍ଶିତ ହୋଇଛି ଯାହା ମାଇକ୍ରୋ ଫ୍ଲୋରେସେଣ୍ଟ ପ୍ରୋଟିନ୍ (GFP) ସହିତ ମାଇକ୍ରୋ ଇଞ୍ଜିନିୟର୍ 3D କାକୋ-୨ ଏପିଥେଲିଆଲ୍ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ସହିତ ସ୍ଥାନିତ ହୋଇଛି | ଆକ୍ଟିନ୍ (ଲାଲ୍) ଏବଂ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟ (ନୀଳ)। ରୋଗ ମଡେଲିଂ ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ ଆଣ୍ଟିଜେନ୍ (ଯଥା, ଲିପୋପଲିସାକାରାଇଡ୍, LPS) ଏବଂ ପ୍ରତିରକ୍ଷା କୋଷ (ଯଥା, PBMC) ସହିତ ଶାରୀରିକ ଚ୍ୟାଲେଞ୍ଜ ଅନ୍ତର୍ଗତ ଗୁପ୍ତ ପ୍ରଦାହ ଚିପ୍ସରେ ସୁସ୍ଥ ବନାମ ଲିକ୍ ଗୁଣ୍ଡକୁ ବର୍ଣ୍ଣନା କରେ |ସବୁଜ) .କାକୋ-୨ କୋଷଗୁଡିକ ଏକ 3D ଏପିଥେଲିଆଲ୍ ସ୍ତର ପ୍ରତିଷ୍ଠା କରିବା ପାଇଁ ସଂସ୍କୃତି ପ୍ରାପ୍ତ ହୋଇଥିଲା | ସ୍କେଲ୍ ବାର୍, 50 µ ମି। ତଳ ଧାଡିରେ ଚିତ୍ରଗୁଡ଼ିକ: “କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଭିନ୍ନତା” ରେଫରେନ୍ସ ଅନୁମତି ସହିତ ଆଡାପ୍ଟ୍ଟ୍ |ଅକ୍ସଫୋର୍ଡ ୟୁନିଭରସିଟି ପ୍ରେସ୍;Ref.5 ରୁ ଅନୁମତି ସହିତ ପୁନ oduc ପ୍ରକାଶିତ |NAS;“ହୋଷ୍ଟ-ମାଇକ୍ରୋବ କୋ-ସଂସ୍କୃତି” ରେଫ .3 ର ଅନୁମତି ସହିତ ଅନୁକୂଳ |NAS;“ରୋଗ ମଡେଲିଂ” ରେଫରେନ୍ସରୁ ଅନୁମତି ସହିତ ଆଡାପ୍ଟ୍ଟ୍ ହୋଇଛି |ନାସ୍
ଉଭୟ ଗୁଟ୍-ଅନ୍-ଚିପ୍ ଏବଂ ହାଇବ୍ରିଡ୍ ଚିପ୍ସ PDMS ପ୍ରତିକୃତି ବ୍ୟବହାର କରି ତିଆରି କରାଯାଇଥିଲା ଯାହା ସିଲିକନ୍ ମଡ୍ଡରୁ କୋମଳ ଲିଥୋଗ୍ରାଫି 1,44 ଦ୍ୱାରା ଡିମୋଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ SU-8 ସହିତ ନମୁନା କରାଯାଇଥିଲା | ପ୍ରତ୍ୟେକ ଚିପରେ ଥିବା ମାଇକ୍ରୋଚାନେଲଗୁଡିକର ଡିଜାଇନ୍ ହାଇଡ୍ରୋଡାଇନାମିକ୍ସକୁ ବିଚାର କରି ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଏ ଯେପରିକି ଶିଅର ଚାପ ଏବଂ ହାଇଡ୍ରୋଡାଇନାମିକ୍ ପ୍ରେସର 1,4,12। ଗୁଟ୍-ଅନ୍-ଚିପ୍ (ବିସ୍ତାରିତ ଡାଟା ଡ଼ିମ୍। 1 ବି) ଯେଉଁଥିରେ ବର୍ଦ୍ଧିତ ଫ୍ଲୁଇଡ୍ ବାସ ସମୟ, ଅଣନ ar ତିକ ପ୍ରବାହ s ାଞ୍ଚା, ଏବଂ ସଂସ୍କୃତ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ମଲ୍ଟିଆକ୍ସିଆଲ୍ ଡିଫର୍ମେସନ୍ (ଚିତ୍ର 2a - f) ସୃଷ୍ଟି କରିବା ପାଇଁ ଏକ ଯୁଗଳ ବକ୍ର ମାଇକ୍ରୋଚାନେଲ୍ ଅନ୍ତର୍ଭୂକ୍ତ ହୁଏ | ମୂଳ ଗୁଟ୍-ଚିପ୍ ତୁଳନାରେ ଏପିଟେଲିଆଲ୍ ଅଭିବୃଦ୍ଧିର, ସଂସ୍କୃତ କୋଷ ପ୍ରକାରକୁ ଖାତିର ନକରି | ତେଣୁ, 3D ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ସୃଷ୍ଟି କରିବା ପାଇଁ, ର line ଖ୍ୟ ଏବଂ ଜଟିଳ ଅନ୍-ଚିପ୍ ଗୁଟ୍ ଡିଜାଇନ୍ଗୁଡ଼ିକ ଅଦଳବଦଳ ହୋଇଥାଏ |2a)। ଏକ ଚିପ୍ ଉପରେ ଅନ୍ତ gut କରଣ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିବା ପାଇଁ, ପ୍ରସ୍ତୁତ ଉପର PDMS ସ୍ତର କ୍ରମାଗତ ଭାବରେ ଏକ ଖଣ୍ଡିଆ PDMS ଚଳଚ୍ଚିତ୍ର ସହିତ ବନ୍ଧା ହେଲା ଏବଂ ତା’ପରେ କରୋନା ଟ୍ରିଟର୍ (ଚିତ୍ର 2b - f) ବ୍ୟବହାର କରି ଅଦଳବଦଳ ବନ୍ଧନ ଦ୍ୱାରା ନିମ୍ନ PDMS ସ୍ତର ସହିତ ସମାନ୍ତରାଳ ହେଲା | ଅମ୍ଳଜାନ ପ୍ଲାଜମା କିମ୍ବା କରୋନା ଚିକିତ୍ସା ସହିତ PDMS ପ୍ରତିକୃତି ଏବଂ ଗ୍ଲାସର ପୃଷ୍ଠଗୁଡିକର ଚିକିତ୍ସା ଦ୍ୱାରା ସଂପାଦିତ | ସିଲିକନ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ ସହିତ ସଂଲଗ୍ନ ହୋଇଥିବା ମାଇକ୍ରୋଫ୍ୟାବ୍ରିକେଡ୍ ଡିଭାଇସର ଷ୍ଟେରିଲାଇଜେସନ୍ ପରେ, ଡିଭାଇସ୍ ସେଟଅପ୍ ଅନ୍ତ int ସ୍ଥ ଏପିଟେଲିୟମର 3D ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ (ଚିତ୍ର 2g) କରିବାକୁ ପ୍ରସ୍ତୁତ ଥିଲା |
a, SU-8 ନମୁନା ସିଲିକନ୍ old ା from ୍ଚା ଠାରୁ PDMS ଅଂଶଗୁଡ଼ିକର ପ୍ରସ୍ତୁତିର ସ୍କିମେଟିକ୍ ଦୃଷ୍ଟାନ୍ତ ଉପର ଏବଂ ତଳ PDMS ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ ଏବଂ ଏକତ୍ରିତ ଅନ୍-ଚିପ୍ ଅନ୍ତ int ସ୍ଥ ଉପକରଣ | ଉପର, ମେମ୍ବ୍ରେନ୍, ଏବଂ ନିମ୍ନ PDMS ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକର ଆଲାଇନ୍ମେଣ୍ଟର ସ୍କିମେଟିକ୍ | ପ୍ରତ୍ୟେକ ସ୍ତର ପ୍ଲାଜମା କିମ୍ବା କରୋନା ଚିକିତ୍ସା ଦ୍ f ାରା ଅବିସ୍ମରଣୀୟ ଭାବରେ ବନ୍ଧା ହୋଇଛି | ଗୋଟିଏ ଟ୍ୟୁବ୍ ଏବଂ ସିରିଞ୍ଜକୁ ଏକ କଭର୍ଲିପ୍ ଉପରେ ରଖାଯାଇଥିଲା | ଚିପ୍ ଡିଭାଇସ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ପାଇଁ 150 ମିଲିମିଟର ପେଟ୍ରି ଡିସ୍ ର lid ାଙ୍କୁଣୀରେ ରଖାଯାଇଥିଲା | ବାଇଣ୍ଡର୍ ସିଲିକନ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ ବନ୍ଦ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ | ଟ୍ରାନ୍ସୱେଲ ଇନ୍ସର୍ଟ ଉପରେ ସ୍ଥାପିତ ସେଲ୍ ସ୍ତର ତଳେ | ସ୍କେଲ୍ ବାର୍, 1 cm.h ରେଫରେନ୍ସରୁ ଅନୁମତି ସହିତ ପୁନ int ମୁଦ୍ରିତ |ଏଲସେଭିଆର |
ଏହି ପ୍ରୋଟୋକଲରେ, କାକୋ-୨ ସେଲ୍ ଲାଇନ୍ ଏବଂ ଅନ୍ତନଳୀ ଅର୍ଗାନଏଡଗୁଡିକ ଏପିଥେଲିଆଲ୍ ଉତ୍ସ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 3a)। ଉଭୟ ପ୍ରକାରର କୋଷଗୁଡିକ ସ୍ ently ାଧୀନ ଭାବରେ ସଂସ୍କୃତ ହୋଇଥିଲେ (ବକ୍ସ ୨ ଏବଂ ବକ୍ସ)) ଏବଂ ଅନ୍-ଚିପ୍ ଗୁଟ୍ କିମ୍ବା ଟ୍ରାନ୍ସୱେଲ ଇନ୍ସର୍ଟଗୁଡିକର ECM- ଆବୃତ ମାଇକ୍ରୋ ଚ୍ୟାନେଲଗୁଡିକ ବିହନ ବୁଣିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା | ଟ୍ରାଇପିସିନାଇଜେସନ୍ ଫ୍ଲୁଇଡ୍ (ବାକ୍ସ)) ଦ୍ at ାରା ଆଟେଡ୍ ସେଲ୍ ସସପେନ୍ସନ୍ ଏକ ଚିପ୍ (ବାକ୍ସ)) ରେ ଗୁଣ୍ଡ କିମ୍ବା ଟ୍ରାନ୍ସୱେଲ ଇନ୍ସର୍ଟ ପାଇଁ ବିହନ ପାଇଁ ଏକକ କୋଷରେ ଅମଳ କରାଯାଏ ଏବଂ ପୃଥକ କରାଗଲା .ଆପଣ ପୂର୍ବରୁ ରିପୋର୍ଟ କରିସାରିଛୁ ଯେ ଏହା ରୋଗ ପ୍ରକାର 12,13 (ଯେପରିକି ଅଲସରାଟିଭ କୋଲାଇଟିସ୍, କ୍ରୋନ୍ ରୋଗ, କଲୋରେକ୍ଟାଲ୍ କର୍କଟ, କିମ୍ବା ସାଧାରଣ ଦାତା), କ୍ଷତ ସ୍ଥାନ (ଯଥା, କ୍ଷତ ବନାମ ଅଣ-କ୍ଷତ୍ରିୟ ସ୍ଥାନ) ) .କଲୋନିକ୍ ଅର୍ଗାନଏଡ୍ (କୋଲଏଡ୍) କୁ ସଂସ୍କୃତି କରିବା ପାଇଁ ଆମେ ବାକ୍ସ 5 ରେ ଏକ ଅପ୍ଟିମାଇଜଡ୍ ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ ପ୍ରଦାନ କରୁ ଯାହା ସାଧାରଣତ small କ୍ଷୁଦ୍ର ଅନ୍ତନଳୀ ଅର୍ଗାନଏଡ ଅପେକ୍ଷା ମର୍ଫୋଜେନ୍ର ଅଧିକ ଏକାଗ୍ରତା ଆବଶ୍ୟକ କରେ |
a, ଗୁଟ୍ ଚିପ୍ ରେ ଗୁଟ୍ ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ପାଇଁ କାର୍ଯ୍ୟ ପ୍ରବାହ ପ୍ରଥମ 2 ଦିନ (ପ୍ରବାହ, AP, D0-D2) .ବସୋଲେଟେରାଲ୍ (BL) ପ୍ରବାହ ମଧ୍ୟ ସାଇକ୍ଲିକ୍ ଷ୍ଟ୍ରେଚିଂ ଗତି (ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍, ଫ୍ଲୋ, AP ଏବଂ BL) ସହିତ ଆରମ୍ଭ ହୁଏ ଯେତେବେଳେ ଏକ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ 2D ମୋନୋଲାୟର୍ ସୃଷ୍ଟି ହୁଏ | ଅନ୍ତ int ସ୍ଥ 3D ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ସ୍ days ତ ously ସ୍ପୃତ ଭାବରେ 5 ଦିନ ପରେ ମାଇକ୍ରୋଫ୍ଲୁଇଡିକ୍ ସଂସ୍କୃତି (ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍, D5) ଷ୍ଟେଜ୍ ପ୍ରତିମୂର୍ତ୍ତୀ ପ୍ରତିପାଦନ କରେ | ଆମର ସ୍କିମେଟିକ୍ ଚିତ୍ରଗୁଡ଼ିକ ଗୁଟ୍ ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ (ଉପର ଡାହାଣ) ର ଅନୁରୂପ କ୍ୟାସକେଡ୍ ବର୍ଣ୍ଣନା କରେ | ସ୍କିମେଟିକ୍ ରେ ଡ୍ୟାଶ୍ ହୋଇଥିବା ତୀରଗୁଡ଼ିକ ତରଳ ପ୍ରବାହର ଦିଗକୁ ପ୍ରତିପାଦିତ କରେ | SEM ପ୍ରତିଛବି ସ୍ଥାପିତ 3D କାକୋ-୨ ଏପିଥେଲିୟମ୍ (ବାମ) ର ଭୂପୃଷ୍ଠ ଟପୋଲୋଜିକୁ ଦର୍ଶାଉଛି | ବର୍ଦ୍ଧିତ କ୍ଷେତ୍ର (ଧଳା ଡ୍ୟାଶ୍ ବାକ୍ସ) ର ପୁନ ener ନିର୍ମାଣିତ ମାଇକ୍ରୋଭିଲି 2 ସ୍ତର (Cacac) (ZO-1, ଲାଲ୍) ଏବଂ କ୍ରମାଗତ ବ୍ରଶ୍ ସୀମା br ୁଲା ଗୁଡିକରେ F-actin (ସବୁଜ) ଏବଂ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟ (ନୀଳ) ଇମ୍ମ୍ୟୁନୋଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ କନଫୋକାଲ୍ ଭିଜୁଆଲାଇଜେସନ୍ ଅନ୍ତ int ସ୍ଥ ଚିପ୍ସରେ ଏପିଟେଲିଆଲ୍ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଭିଜୁଆଲାଇଜେସନ୍ | ମଧ୍ୟମ ସ୍କିମେଟିକ୍ କୁ ସୂଚାଉଥିବା ତୀରଗୁଡିକ ପ୍ରତ୍ୟେକ କନୋକାଲ୍ ଦୃଶ୍ୟ ପାଇଁ ଫୋକାଲ୍ ପ୍ଲେନର ଅବସ୍ଥାନ ସୂଚାଇଥାଏ | ପ୍ରଦତ୍ତ ପ୍ରତିଛବିର ification, 7 ଦିନ ଦିନ ନିଆଯାଇଥିବା ସ୍ଲାଇସରେ ଅର୍ଗାନଏଡ 3D ଏପିଥେଲିୟମର DIC ଫୋଟୋମିକ୍ରୋଗ୍ରାଫ୍, ଷ୍ଟେମ୍ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ପାଇଁ ମାର୍କର ଦେଖାଉଥିବା ଇମ୍ୟୁନୋଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ପ୍ରତିଛବିଗୁଡ଼ିକୁ ଆଚ୍ଛାଦନ କରନ୍ତୁ |ମ୍ୟାଜେଣ୍ଟା), ଗୋବଲେଟ୍ କୋଷଗୁଡିକ (MUC2; ସବୁଜ), ଏଫ୍-ଆକ୍ଟିନ୍ (ଧୂସର) ଏବଂ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟ (ସିଆନ୍) ଯଥାକ୍ରମେ (ବାମ) ଏବଂ 13 ଦିନିଆ (ମଧ୍ୟମ) ଅର୍ଗାନଏଡଗୁଡିକ ଏପିଟେଲିଆଲ୍ ସ୍ତରରେ ଦେଖନ୍ତୁ | ସଂସ୍କୃତିର 13 ଦିନରେ ରଙ୍ଗ (ଡାହାଣ) କୁ ପଚାରନ୍ତୁ | ଅନ୍ୟଥା ଉଲ୍ଲେଖ ନହେଲେ ସ୍କେଲ୍ ବାର୍ 50 μm ଅଟେ | ରେଫରେନ୍ସରୁ ଅନୁମତି ସହିତ ପୁନ int ମୁଦ୍ରିତ |ଅକ୍ସଫୋର୍ଡ ୟୁନିଭରସିଟି ପ୍ରେସ୍;c ସନ୍ଦର୍ଭରୁ ଅନୁମତି ସହିତ ଆଡାପ୍ଟ୍ଟ୍ ହୋଇଛି |ଅକ୍ସଫୋର୍ଡ ୟୁନିଭରସିଟି ପ୍ରେସ୍;e ଏବଂ f ରେଫରେନ୍ସ ଦ୍ୱାରା ଅନୁମତି ସହିତ ଆଡାପ୍ଟ୍ଟ୍ ହୋଇଛି 12 କ୍ରିଏଟିଭ କମନ୍ସ ଲାଇସେନ୍ସ CC BY 4.0 ଅଧୀନରେ |
ଏକ ଚିପ ଉପରେ ଥିବା ଗୁପ୍ତରେ, ସଫଳ ECM ଆବରଣ ପାଇଁ PDMS ପୋରସ୍ ମେମ୍ବ୍ରାନ୍ର ହାଇଡ୍ରୋଫୋବିକ୍ ପୃଷ୍ଠକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିବା ଆବଶ୍ୟକ | ଏହି ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ ରେ, PDMS br ାଞ୍ଚାଗୁଡ଼ିକର ହାଇଡ୍ରୋଫୋବିସିଟି ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିବା ପାଇଁ ଆମେ ଦୁଇଟି ଭିନ୍ନ ପଦ୍ଧତି ପ୍ରୟୋଗ କରୁ | କାକୋ-୨ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ସଂସ୍କୃତି ପାଇଁ, UV / ଓଜୋନ୍ ଚିକିତ୍ସା ଦ୍ surface ାରା ଭୂପୃଷ୍ଠ ଆକ୍ଟିଭେସନ୍ ଏବଂ PDMS ପୃଷ୍ଠର ହାଇଡ୍ରୋଫୋବିକ୍, PDM ପୃଷ୍ଠର ହାଇଡ୍ରୋଫୋବିକ୍ ହ୍ରାସ କରିବା ପାଇଁ ଯଥେଷ୍ଟ ଥିଲା | ଅର୍ଗାନଏଡ ଏପିଥେଲିୟମର ସଂସ୍କୃତି ରାସାୟନିକ-ଆଧାରିତ ଭୂପୃଷ୍ଠ କାର୍ଯ୍ୟକାରିତା ଆବଶ୍ୟକ କରେ ଯାହା କ୍ରମାଗତ ଭାବରେ ପଲିଥିନାଇମାଇନ୍ (PEI) ଏବଂ ଗ୍ଲୁଟାରାଲଡିହାଇଡକୁ PDMS ମାଇକ୍ରୋ ଚ୍ୟାନେଲରେ ପ୍ରୟୋଗ କରି ECM ପ୍ରୋଟିନଗୁଡିକ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମ PDMS ପୃଷ୍ଠକୁ ଆଚ୍ଛାଦନ କରିବା ପାଇଁ ଜମା କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତାପରେ ପୃଥକ ଅର୍ଗାନଏଡ ଏପିଥେଲିୟମ ଦ୍ cells ାରା ପୃଥକ ପୃଥକ ପୃଥକ ପୃଥକ ପୃଥକ ପୃଥକ ପୃଥକ ପୃଥକ ପୃଥକ ପୃଥକ ପୃଥକ ପୃଥକ ପୃଥକ ପୃଥକ ପୃଥକ ପୃଥକ ଭାବରେ , ଯେତେବେଳେ ନିମ୍ନ ମାଇକ୍ରୋଚାନେଲ୍ ସ୍ଥିର ସ୍ଥିତିକୁ ବଜାୟ ରଖେ | ଭୂପୃଷ୍ଠ ସକ୍ରିୟତା ଏବଂ ECM ଆବରଣ ପାଇଁ ଏହି ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ପଦ୍ଧତି PDMS ପୃଷ୍ଠରେ 3D ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ସୃଷ୍ଟି କରିବାକୁ ଅର୍ଗାନଏଡ୍ ଏପିଥେଲିୟମ୍ ସଂଲଗ୍ନକୁ ସକ୍ଷମ କରିଥାଏ |
କୋଷ ବିହନ ପୂର୍ବରୁ ଟ୍ରାନ୍ସୱେଲ ସଂସ୍କୃତିରେ ECM ଆବରଣ ମଧ୍ୟ ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ |ତଥାପି, ଟ୍ରାନ୍ସୱେଲ ସଂସ୍କୃତିଗୁଡିକ ଜଟିଳ ସନ୍ନିବେଶର ପୃଷ୍ଠକୁ ସକ୍ରିୟ କରିବା ପାଇଁ ଜଟିଳ ପ୍ରାକୃତିକ ପଦକ୍ଷେପ ଆବଶ୍ୟକ କରେ ନାହିଁ | ଟ୍ରାନ୍ସୱେଲ ଇନ୍ସର୍ଟରେ ବ C ୁଥିବା କାକୋ-୨ କୋଷଗୁଡିକ ପାଇଁ, ପୋରସ୍ ଇନ୍ସର୍ଟରେ ECM ଆବରଣ ବିଚ୍ଛିନ୍ନ କାକୋ-୨ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ସଂଲଗ୍ନକୁ ତ୍ୱରାନ୍ୱିତ କରେ (<1-2 ଦିନ)। ପ୍ରତିବନ୍ଧକ ଅଖଣ୍ଡତା ସହିତ oids ଏକ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ମୋନୋଲାୟର୍ ଗଠନ କରେ .ଏହି ହାଇବ୍ରିଡ୍ ଚିପ୍ସ ବ୍ୟବହାର ନକରି 24-ଭଲ ପ୍ଲେଟରେ ଟ୍ରାନ୍ସୱେଲ ସଂସ୍କୃତି କରାଯାଏ |
ଏକ ପ୍ରତିଷ୍ଠିତ ଏପିଥେଲିଆଲ୍ ସ୍ତରର ବେସୋଲେଟେରାଲ୍ ଦିଗରେ ଫ୍ଲୁଇଡ୍ ପ୍ରବାହ ପ୍ରୟୋଗ କରି ଭିଟ୍ରୋ 3D ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ଆରମ୍ଭ କରାଯାଇପାରେ | ଏକ ଚିପ୍ ଉପରେ, ଏପିଥେଲିଆଲ୍ ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ଆରମ୍ଭ ହୋଇଥିଲା ଯେତେବେଳେ ମଧ୍ୟମ ଉପର ଏବଂ ତଳ ମାଇକ୍ରୋଚାନେଲରେ ସୁଗନ୍ଧିତ ହୋଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 3a)। ରେନ୍ ଏବଂ ଲ୍ୟୁମିନାଲ୍ ଶିଅର୍ ଷ୍ଟ୍ରେସ୍ ସୃଷ୍ଟି କରେ, ଆମେ ସାଧାରଣତ a ଏକ ଚିପ୍ ଉପରେ ଗୁପ୍ତରେ ଦ୍ୱ ual ତ ପ୍ରବାହ ପ୍ରୟୋଗ କରିଥାଉ | ହାଇବ୍ରିଡ୍ ଚିପ୍ସରେ, ହାଇପ୍ରିଡ୍ ଚିପ୍ସରେ ଏପିଟେଲିଆଲ୍ ମୋନୋଲାୟର୍ସ ଧାରଣ କରିଥିବା ଟ୍ରାନ୍ସୱେଲ ଇନ୍ସର୍ଟଗୁଡିକ ହାଇବ୍ରିଡ୍ ଚିପ୍ସରେ ଭର୍ତ୍ତି କରାଯାଇଥିଲା | ତା’ପରେ, ମାଇକ୍ରୋଚାନେଲ୍ ମାଧ୍ୟମରେ ପୋରସ୍ ଟ୍ରାନ୍ସୱେଲ ଇନ୍ସର୍ଟର ମ bas ଳିକ ପାର୍ଶ୍ୱରେ ପ୍ରୟୋଗ କରାଯାଇଥିଲା |
ମାଇକ୍ରୋ ଇଞ୍ଜିନିୟରିଂ 3D ଏପିଥେଲିଆଲ୍ ସ୍ତରଗୁଡିକର ମର୍ଫୋଲୋଜିକାଲ୍ ବ features ଶିଷ୍ଟ୍ୟଗୁଡିକ ବିଭିନ୍ନ ଇମେଜିଙ୍ଗ୍ ମୋଡାଲିଟି ପ୍ରୟୋଗ କରି ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇପାରିବ, ଫେଜ୍ କଣ୍ଟ୍ରାସ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି, ଡିଫେରିଏଲ୍ ଇଣ୍ଟରଫେରେସନ୍ କଣ୍ଟ୍ରାସ (DIC) ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି, SEM, କିମ୍ବା ଇମ୍ୟୁନୋଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ କନଫୋକାଲ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି (ଚିତ୍ର and ଏବଂ))। ଚିପ୍ ପ୍ଲାଟଫର୍ମଗୁଡିକ ଡିଭାଇସ୍ ର ବିଭାଗ କିମ୍ବା ବିଛିନ୍ନତାର ଆବଶ୍ୟକତା ବିନା ସିଟୁ ଇମେଜିଙ୍ଗରେ ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ ପ୍ରଦାନ କରିପାରିବ | ଯେତେବେଳେ ଇମ୍ୟୁନୋଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ଇମେଜିଙ୍ଗ୍ (ଚିତ୍ର 1, 3c, f ଏବଂ 4b, c) କାର୍ଯ୍ୟ କରେ, କୋଷଗୁଡ଼ିକ ସାଧାରଣତ 4 4% (wt / vol) ପାରାଫର୍ମାଲଡିହାଇଡ୍ (PFA) ସହିତ ସ୍ଥିର କରାଯାଇଥାଏ, ତା’ପରେ ଟ୍ରାଇଟନ୍ ଏକ୍ସ -100 ଏବଂ 2% (wt / vol) ସେଲ୍ ବୋର୍ଡିମ୍ ସେବନ, ସି.ଡି. ଏରସ୍, ଏବଂ ବ୍ଲକିଂ ଏଜେଣ୍ଟଗୁଡିକ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ | ପ୍ରାଥମିକ ଆଣ୍ଟିବଡିଗୁଡିକ ଲାଇନ୍ ଉପରେ ନିର୍ଭରଶୀଳ କୋଷ କିମ୍ବା ଅଞ୍ଚଳ ମାର୍କର୍ ଗୁଡିକୁ ଚିପ୍ ଉପରେ ସ୍ଥିତ ଅସ୍ଥିର କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ହାଇଲାଇଟ୍ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, ଏବଂ ଦ୍ secondary ିତୀୟ ଆଣ୍ଟିବଡି ଦ୍ nuc ାରା ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟସକୁ ଟାର୍ଗେଟ କରୁଥିବା କାଉଣ୍ଟର ଷ୍ଟେନ୍ ରଙ୍ଗ ସହିତ (ଯଥା, 4 ′, 6-ଡାଇମିଡିନୋ-୨-ଫେନିଲିନ) ଇଣ୍ଡୋ, DAPI) କିମ୍ବା ଏଫ୍-ଆକ୍ଟିନ୍ (ଫ୍ଲୁ ଫ୍ଲୋସିନ୍) ଚିହ୍ନିତ ଫ୍ଲୁ ଫ୍ଲୋସିଡେନ୍ (ଫ୍ଲୁ ଫ୍ଲୋରେସିନ୍) ଆଧାରିତ ଫ୍ଲୁ ଫ୍ଲୋସିଡେନ୍ ଫ୍ଲୁ-ଫ୍ଲୁ ଆକ୍ଟିନ୍ (ଫ୍ଲୁ ଫ୍ଲୋସିନ୍) (ଚିତ୍ର1, “ସେଲ୍ ଭିନ୍ନତା” ଏବଂ “ଗୁଟ୍ ଫିଜିଓଲୋଜି”), ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଅନିୟମିତ ଉପନିବେଶ (ଚିତ୍ର 1, “ହୋଷ୍ଟ-ମାଇକ୍ରୋବ କୋ-ସଂସ୍କୃତି”), ପ୍ରତିରକ୍ଷା କୋଷଗୁଡ଼ିକର ନିଯୁକ୍ତି (ଚିତ୍ର 1, 'ରୋଗ ମଡେଲିଂ') କିମ୍ବା 3D ଏପିଟେଲିଆଲ୍ ମର୍ଫୋଲୋଜିର ଚିତ୍ର (ଚିତ୍ର 3c, f ଏବଂ 4b, c) | ଏପିଟେଲିଆଲ୍ ମର୍ଫୋଲୋଜି ସହିତ ଆପିକାଲ୍ ବ୍ରଶ୍ ସୀମାରେ ଥିବା ମାଇକ୍ରୋଭିଲି ମଧ୍ୟ SEM (ଚିତ୍ର 3 ବି) ଦ୍ୱାରା ଭିଜୁଆଲ୍ ହୋଇପାରିବ | ପରିମାଣିକ PCR5 କିମ୍ବା ଏକକ-ସେଲ୍ RNA କ୍ରମାଙ୍କ ଦ୍ୱାରା ଭିନ୍ନତା ମାର୍କର ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇପାରେ | ଏହି କ୍ଷେତ୍ରରେ, ଗୁଟ୍ ଚିପ୍ସ କିମ୍ବା ହାଇବ୍ରିଡ୍ ଚିପ୍ସରେ ବ grown ଼ୁଥିବା ଏପିଟେଲିଆଲ୍ କୋଷଗୁଡ଼ିକର 3D ସ୍ତରଗୁଡିକ ଟ୍ରାଇପିସିନାଇଜେସନ୍ ଦ୍ୱାରା ଅମଳ କରାଯାଏ ଏବଂ ପରେ ମଲିକୁଲାର କିମ୍ବା ଜେନେଟିକ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |
ଏକ, ହାଇବ୍ରିଡ୍ ଚିପ୍ ରେ ଅନ୍ତ int ସ୍ଥ ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ର କାର୍ଯ୍ୟ ପାଇଁ କାର୍ଯ୍ୟ ପ୍ରବାହ ଦିନ, ଏପିଥେଲିଆଲ୍ କୋଷଗୁଡିକର 2D ମୋନୋଲାୟର୍ ଧାରଣ କରିଥିବା ଏକ ଟ୍ରାନ୍ସୱେଲ୍ ଇନ୍ସର୍ଟ ଏକ ବେସୋଲେଟେରାଲ୍ ଫ୍ଲୋ (ଫ୍ଲୋ, ବିଏଲ୍) ପ୍ରବର୍ତ୍ତନ ପାଇଁ ଏକ ହାଇବ୍ରିଡ୍ ଚିପ୍ ସହିତ ସଂଯୁକ୍ତ ହୋଇଥିଲା, ଯାହା ଶେଷରେ ଏକ 3D ଏପିଥେଲିଆଲ୍ ସ୍ତର (ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍) ସୃଷ୍ଟି କରିଥିଲା। ଚିପ୍ସ (ବାମ ସ୍କିମେଟିକ୍) ବିଭିନ୍ନ Z ସ୍ଥିତିରେ (ଉପର, ମଧ୍ୟମ ଏବଂ ତଳ) ନିଆଯାଇଥିବା ଟପ୍-ଡାଉନ୍ କନଫୋକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି ଦୃଶ୍ୟ ସହିତ ଅର୍ଗାନଏଡ୍ ଏପିଥେଲିଆଲ୍ କୋଷଗୁଡ଼ିକର 3D ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ହୋଇପାରେ |ସଠିକ୍ ସ୍କିମେଟିକ୍ ଏବଂ ଅନୁରୂପ ବିନ୍ଦୁ ରେଖା ଦେଖନ୍ତୁ) |ସ୍ପଷ୍ଟ ମୋର୍ଫୋଲୋଜିକାଲ୍ ବ characteristics ଶିଷ୍ଟ୍ୟଗୁଡିକ ଦେଖାଇଲା | c ରେଫରେନ୍ସରୁ ଅନୁମତି ସହିତ ପୁନ int ମୁଦ୍ରିତ |ଏଲସେଭିଆର |
ସମାନ କୋଷଗୁଡିକ (କାକୋ-୨ କିମ୍ବା ଅନ୍ତନଳୀ ଅର୍ଗାନଏଡ୍ ଏପିଟେଲିଆଲ୍ କୋଷଗୁଡିକ) କୁ ପାରମ୍ପାରିକ ଷ୍ଟାଟିକ୍ ସଂସ୍କୃତି ଅବସ୍ଥାରେ ଦୁଇ-ଡାଇମେନ୍ସନାଲ୍ ମୋନୋଲାୟର୍ରେ ସଂସ୍କୃତି ଦ୍ୱାରା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇପାରିବ | ବିଶେଷ ଭାବରେ, ମାଇକ୍ରୋଚାନେଲଗୁଡିକର ସୀମିତ ପରିମାଣ କ୍ଷମତା ହେତୁ ପୁଷ୍ଟିକର ହ୍ରାସ ହୋଇପାରେ (ଅର୍ଥାତ୍ ମୂଳ ଗୁଟ୍-ଚିପ୍ ଡିଜାଇନ୍ ଉପରେ ଉପର ଚ୍ୟାନେଲରେ ~ 4 µL), ଏପିଟେଲିଆଲ୍ ମର୍ଫୋଲୋଜି ମଧ୍ୟ ପ୍ରୟୋଗ ହୋଇପାରେ |
ସଫ୍ଟ ଲିଥୋଗ୍ରାଫି ପ୍ରକ୍ରିୟା ଏକ ପରିଷ୍କାର କୋଠରୀରେ କରାଯିବା ଉଚିତ୍ | ଚିପ୍ (ଉପର ଏବଂ ତଳ ସ୍ତର ଏବଂ ମେମ୍ବ୍ରେନ୍) ଏବଂ ହାଇବ୍ରିଡ୍ ଚିପ୍ସ ପାଇଁ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଫୋଟୋମାସ୍କ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଅଲଗା ସିଲିକନ୍ ୱାଫର୍ ଉପରେ ତିଆରି କରାଯାଇଥିଲା କାରଣ ମାଇକ୍ରୋ ଚ୍ୟାନେଲଗୁଡିକର ଉଚ୍ଚତା ଭିନ୍ନ ଥିଲା | ଚିପ୍ ଉପରେ ଥିବା ଉପର ଏବଂ ତଳ ମାଇକ୍ରୋଚାନେଲଗୁଡିକର ଲକ୍ଷ୍ୟ ଉଚ୍ଚତା ଯଥାକ୍ରମେ 500 µm ଏବଂ 200 µm ଉଚ୍ଚତା ଅଟେ |
ଏସିଟୋନ୍ ସହିତ ଏକ ଥାଳିରେ 3-ଇଞ୍ଚ୍ ସିଲିକନ୍ ୱେଫର୍ ରଖନ୍ତୁ | ପ୍ଲେଟକୁ ଧୀରେ ଧୀରେ 30 ସେକେଣ୍ଡ ପାଇଁ ଘୁଞ୍ଚାନ୍ତୁ, ତା’ପରେ ୱେଫରକୁ ବାୟୁ ଶୁଖାନ୍ତୁ | ୱେଫରକୁ IPA ସହିତ ଏକ ପ୍ଲେଟକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରନ୍ତୁ, ତାପରେ ସଫା କରିବା ପାଇଁ ପ୍ଲେଟକୁ 30 s ପାଇଁ ଘୂର୍ଣ୍ଣନ କରନ୍ତୁ |
ସିଲିକନ୍ ୱେଫର୍ ପୃଷ୍ଠରୁ ଜ organic ବ ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶକୁ ଅପସାରଣକୁ ବ imize ାଇବା ପାଇଁ ଏକ ପିରାନହା ସମାଧାନ (ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ପେରକ୍ସାଇଡ୍ ଏବଂ ଏକାଗ୍ର ସଲଫୁରିକ୍ ଏସିଡ୍, 1: 3 (ଭଲ / ଭଲମ୍) ର ମିଶ୍ରଣ) ବ ally କଳ୍ପିକ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ |
ପିରାନହା ସମାଧାନ ଅତ୍ୟନ୍ତ କ୍ଷତିକାରକ ଏବଂ ଉତ୍ତାପ ସୃଷ୍ଟି କରେ | ଅତିରିକ୍ତ ସୁରକ୍ଷା ସାବଧାନତା ଆବଶ୍ୟକ | ବର୍ଜ୍ୟବସ୍ତୁ ନିଷ୍କାସନ ପାଇଁ, ସମାଧାନକୁ ଥଣ୍ଡା ଏବଂ ଶୁଖିଲା ବର୍ଜ୍ୟବସ୍ତୁକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରିବାକୁ ଅନୁମତି ଦିଅନ୍ତୁ | ଦ୍ secondary ିତୀୟ ପାତ୍ରଗୁଡିକ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ ଏବଂ ବର୍ଜ୍ୟବସ୍ତୁଗୁଡ଼ିକୁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ଲେବଲ୍ କରନ୍ତୁ। ଅଧିକ ବିସ୍ତୃତ ପ୍ରକ୍ରିୟା ପାଇଁ ଦୟାକରି ସୁବିଧା ସୁରକ୍ଷା ନିର୍ଦ୍ଦେଶାବଳୀ ଅନୁସରଣ କରନ୍ତୁ |
ୱାଫର୍ଗୁଡ଼ିକୁ 200 ° C ଗରମ ପ୍ଲେଟରେ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ରଖି ଡିହାଇଡ୍ରେଟ୍ କରନ୍ତୁ | ଡିହାଇଡ୍ରେସନ୍ ପରେ, ୱେଫର୍ ଥଣ୍ଡା ହେବା ପାଇଁ ପାଞ୍ଚଥର ବାୟୁରେ କମ୍ପିତ ହେଲା |
ସଫା ହୋଇଥିବା ସିଲିକନ୍ ୱେଫରର ମଧ୍ୟଭାଗରେ ~ 10 g ଫୋଟୋରେସିଷ୍ଟ SU-8 2100 our ାଳନ୍ତୁ | ଫୋଟୋରେଷ୍ଟକୁ ୱେଫର୍ ଉପରେ ସମାନ ଭାବରେ ବିସ୍ତାର କରିବା ପାଇଁ ଟ୍ୱିଜର ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ |
ସ୍ପିନ୍ ଆବରଣ ଚଳାଇ ୱେଫର୍ ଉପରେ SU-8 ସମାନ ଭାବରେ ବଣ୍ଟନ କରାଯାଇଥିଲା | 100 rpm / s ତ୍ୱରାନ୍ୱିତରେ 500 rpm ରେ ପ୍ରସାର କରିବା ପାଇଁ SU-8 ର ଏକ ଆସୁଥିବା ଘୂର୍ଣ୍ଣନକୁ ପ୍ରୋଗ୍ରାମ କରନ୍ତୁ | 1500 rpm ରେ 200 µm ମୋଟା ମୋଟା ପାଇଁ ମୂଖ୍ୟ ସ୍ପିନ୍ ସେଟ୍ କରନ୍ତୁ, କିମ୍ବା 250 µm ମୋଟା (500 ସେକେଣ୍ଡ ଉଚ୍ଚତାରେ 500 r ଉଚ୍ଚତା ପାଇଁ) ଅପରାହ୍ନ
ସିଲିକନ୍ ୱେଫର୍ ଉପରେ SU-8 ପ୍ୟାଟର୍ ର ଲକ୍ଷ୍ୟ ଘନତା ଅନୁଯାୟୀ ମୁଖ୍ୟ ସ୍ପିନ୍ ସ୍ପିଡ୍ ଆଡଜଷ୍ଟ ହୋଇପାରିବ |
ଚିପ ଉପରେ ଅନ୍ତରର ଉପର ସ୍ତର ପାଇଁ 500 µm ଉଚ୍ଚତାର SU-8 s ାଞ୍ଚା ତିଆରି କରିବା ପାଇଁ, ଏହି ବକ୍ସର ସ୍ପିନ୍ ଆବରଣ ଏବଂ କୋମଳ ବେକ୍ ଷ୍ଟେପ୍ (ଷ୍ଟେପ୍ 9 ଏବଂ 8) କ୍ରମାଗତ ଭାବରେ ପୁନରାବୃତ୍ତି ହେଲା (ଷ୍ଟେପ୍ 9 ଦେଖନ୍ତୁ) SU-8 ର ଦୁଇଟି ସ୍ତର ଉତ୍ପାଦନ କରିବାକୁ, ଯାହା ଏହି ସ୍ତରର ବାକ୍ସର 12 ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ UV ଏକ୍ସପୋଜର୍ ଦ୍ୱାରା ଏକ ସ୍ତର 500 µm ଉଚ୍ଚରେ ତିଆରି ହୋଇପାରେ |
ସଫ୍ଟକୁ SU-8 ଆଚ୍ଛାଦିତ ୱାଫର୍ଗୁଡ଼ିକୁ ସାବଧାନତାର ସହିତ ଏକ ଗରମ ପ୍ଲେଟରେ 65 ° C ରେ 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ରଖନ୍ତୁ, ତାପରେ ସେଟିଂକୁ 95 ° C କୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ଅତିରିକ୍ତ 40 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ |
ଉପର ମାଇକ୍ରୋଚାନେଲରେ SU-8 pattern ାଞ୍ଚାର 500 μ ମିଟର ଉଚ୍ଚତା ହାସଲ କରିବାକୁ, ଦୁଇଟି 250 μ ମିଟର ମୋଟା SU-8 ସ୍ତର ସୃଷ୍ଟି କରିବାକୁ 7 ଏବଂ 8 ପଦାଙ୍କ ପୁନରାବୃତ୍ତି କରନ୍ତୁ |
UV ମାସ୍କ ଆଲାଇଜର୍ ବ୍ୟବହାର କରି, ୱେଫରର ଏକ୍ସପୋଜର ସମୟ ଗଣିବା ପାଇଁ ନିର୍ମାତାଙ୍କ ନିର୍ଦ୍ଦେଶ ଅନୁଯାୟୀ ଏକ ଲ୍ୟାମ୍ପ ପରୀକ୍ଷା କର |
ଏକ୍ସପୋଜର ସମୟ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପରେ, ଫୋଟୋମାସ୍କକୁ UV ମାସ୍କ ଆଲାଇନ୍ସର ମାସ୍କ ଧାରକ ଉପରେ ରଖନ୍ତୁ ଏବଂ ଫୋଟୋମାସ୍କକୁ SU-8 ଆବୃତ ୱେଫର୍ ଉପରେ ରଖନ୍ତୁ |
UV ବିଚ୍ଛେଦକୁ କମ୍ କରିବା ପାଇଁ ଫୋଟୋମାସ୍କର ମୁଦ୍ରିତ ପୃଷ୍ଠକୁ ସିଲିକନ୍ ୱେଫର୍ ର SU-8 ଆବୃତ ପାର୍ଶ୍ୱରେ ସିଧାସଳଖ ରଖନ୍ତୁ |
ପୂର୍ବ ନିର୍ଦ୍ଧାରିତ ଏକ୍ସପୋଜର ସମୟ ପାଇଁ SU-8 ଆବୃତ ୱେଫର୍ ଏବଂ ଫୋଟୋମାସ୍କକୁ UV ଆଲୋକର 260 mJ / cm2 ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଭୂଲମ୍ବ ଭାବରେ ପ୍ରକାଶ କରନ୍ତୁ (ଏହି ବାକ୍ସର ପଦାଙ୍କ 10 ଦେଖନ୍ତୁ) |
ୟୁ.ଭି.
ଡେଭଲପର୍ ଏକ ଗ୍ଲାସ୍ ଥାଳିରେ poured ାଳି ଦିଆଯାଏ, ଏବଂ ପାକ ହୋଇଥିବା ୱେଫର୍ ଥାଳିରେ ରଖାଯାଇଥାଏ | ଗ୍ଲାସ୍ ପ୍ଲେଟର ଆକାର ଉପରେ ନିର୍ଭର କରି SU-8 ଡେଭଲପର୍ ର ପରିମାଣ ଭିନ୍ନ ହୋଇପାରେ | ଅପ୍ରତ୍ୟାଶିତ SU-8 କୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣରୂପେ ହଟାଇବା ପାଇଁ ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ SU-8 ଡେଭଲପର୍ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ନିଶ୍ଚିତ କରନ୍ତୁ |
ପାଇପ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ସମାଧାନ ସ୍ପ୍ରେ କରି IPA ଦ୍ followed ାରା ତାଜା ଡେଭଲପର୍ ସହିତ ~ 10 ଏମଏଲ୍ ସହିତ ବିକଶିତ ଛାଞ୍ଚକୁ ଧୋଇଦିଅ |
ୱାଫରକୁ ଏକ ପ୍ଲାଜମା କ୍ଲିନର୍ରେ ରଖନ୍ତୁ ଏବଂ ଅମ୍ଳଜାନ ପ୍ଲାଜମା (ବାୟୁମଣ୍ଡଳୀୟ ଗ୍ୟାସ୍, ଟାର୍ଗେଟ୍ ଚାପ 1 × 10−5 ଟୋର, ପାୱାର୍ 125 ୱାଟ) କୁ 1.5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ପ୍ରକାଶ କରନ୍ତୁ |
ୱାଫରକୁ ଏକ ଗ୍ଲାସ୍ ସ୍ଲାଇଡ୍ ସହିତ ଏକ ଭାକ୍ୟୁମ୍ ଡେସିକେଟରରେ ରଖନ୍ତୁ | ୱାଫର୍ ଏବଂ ସ୍ଲାଇଡ୍ ଗୁଡିକ ପାର୍ଶ୍ୱରେ ରଖାଯାଇପାରିବ | ଯଦି ଭାକ୍ୟୁମ୍ ଡେସିକେଟରକୁ ଏକ ପ୍ଲେଟ୍ ଦ୍ several ାରା ବିଭିନ୍ନ ସ୍ତରରେ ବିଭକ୍ତ କରାଯାଏ, ସ୍ଲାଇଡ୍ଗୁଡ଼ିକୁ ନିମ୍ନ ଚାମ୍ବରରେ ଏବଂ ୱାଫର୍ସକୁ ଉପର ଚାମ୍ବରରେ ରଖନ୍ତୁ।
37 ° C ଜଳ ସ୍ନାନରେ ଫ୍ରିଜ୍ ହୋଇଥିବା କାକୋ -2 କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଏକ ପାତ୍ରକୁ ଫୋପାଡି ଦିଅ, ତାପରେ ଥୱାଡ୍ କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ଏକ T75 ଫ୍ଲାସ୍କକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କର ଯାହାକି 15 ମି.ଲି.
~ 90% ମିଳନ ସ୍ଥଳରେ କାକୋ -2 କୋଷଗୁଡିକ ପାସ୍ କରିବାକୁ, ପ୍ରଥମେ ଉଷ୍ମ କାକୋ -2 ମାଧ୍ୟମ, ପିବିଏସ୍, ଏବଂ 37 ° C ଜଳ ସ୍ନାନରେ 0.25% ଟ୍ରାଇପିସିନ୍ / 1 ମିଟର EDTA |
ଭାକ୍ୟୁମ୍ ଆକାଂକ୍ଷା ଦ୍ medium ାରା ମାଧ୍ୟମକୁ ଆକାଂକ୍ଷା କରନ୍ତୁ | ଭ୍ୟାକ୍ୟୁମ୍ ଆକାଂକ୍ଷାକୁ ପୁନରାବୃତ୍ତି କରି ଏବଂ ତାଜା PBS ଯୋଗକରି 5 ମିଲି ମିଟର ଉଷ୍ମ PBS ସହିତ କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ଦୁଇଥର ଧୋଇ ଦିଅନ୍ତୁ |