Nature.com ପରିଦର୍ଶନ କରିଥିବାରୁ ଧନ୍ୟବାଦ |ଆପଣ ବ୍ୟବହାର କରୁଥିବା ବ୍ରାଉଜର୍ ସଂସ୍କରଣରେ ସୀମିତ CSS ସମର୍ଥନ ଅଛି |ସର୍ବୋତ୍ତମ ଅଭିଜ୍ଞତା ପାଇଁ, ଆମେ ପରାମର୍ଶ ଦେଉଛୁ ଯେ ଆପଣ ଏକ ଅପଡେଟ୍ ବ୍ରାଉଜର୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ (କିମ୍ବା ଇଣ୍ଟରନେଟ୍ ଏକ୍ସପ୍ଲୋରରରେ ସୁସଙ୍ଗତତା ମୋଡ୍ ଅକ୍ଷମ କରନ୍ତୁ) |ମ meantime ିରେ ମ continued ିରେ, ନିରନ୍ତର ସମର୍ଥନ ନିଶ୍ଚିତ କରିବାକୁ, ଆମେ ଶ yles ଳୀ ଏବଂ ଜାଭାସ୍କ୍ରିପ୍ଟ ବିନା ସାଇଟ୍ ଉପସ୍ଥାପନ କରିବୁ |
ତରଳ ବାୟୋପସି (LB) ହେଉଛି ଏକ ଧାରଣା ଯାହା ଜ omed ବ ଚିକିତ୍ସା କ୍ଷେତ୍ରରେ ଶୀଘ୍ର ଲୋକପ୍ରିୟତା ହାସଲ କରୁଛି |ଏହି ଧାରଣା ମୁଖ୍ୟତ extr ଏକ୍ସଟ୍ରାସେଲୁଲାର୍ DNA (ccfDNA) ର ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଚିହ୍ନଟ ଉପରେ ଆଧାରିତ, ଯାହା ମୁଖ୍ୟତ various ବିଭିନ୍ନ ଟିସୁରେ କୋଷ ମୃତ୍ୟୁ ପରେ ଛୋଟ ଖଣ୍ଡ ଭାବରେ ମୁକ୍ତ ହୋଇଥାଏ |ଏହି ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଏକ ଅଳ୍ପ ଅଂଶ ବିଦେଶୀ (ବିଦେଶୀ) ଟିସୁ ବା ଜୀବମାନଙ୍କଠାରୁ ଉତ୍ପନ୍ନ |ସାମ୍ପ୍ରତିକ କାର୍ଯ୍ୟରେ, ଆମେ ଏହି ଧାରଣାକୁ ମସେଲଗୁଡିକରେ ପ୍ରୟୋଗ କରିଛୁ, ଏକ ଉଚ୍ଚ ସମୁଦ୍ର ଜଳ ଫିଲ୍ଟରେସନ୍ କ୍ଷମତା ପାଇଁ ଜଣାଶୁଣା ଏକ ସେଣ୍ଟିନେଲ୍ ପ୍ରଜାତି |ସାମୁଦ୍ରିକ ଉପକୂଳ ଇକୋସିଷ୍ଟମର ଜ odi ବ ବିବିଧତା ବିଷୟରେ ସୂଚନା ପ୍ରଦାନ କରିବା ପାଇଁ ଆମେ ବିଭିନ୍ନ ଉତ୍ସରୁ ପରିବେଶ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ କ୍ୟାପଚର କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରାକୃତିକ ଫିଲ୍ଟର ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରିବା ପାଇଁ ମସେଲର କ୍ଷମତାକୁ ବ୍ୟବହାର କରୁ |ଆମର ଫଳାଫଳ ଦର୍ଶାଏ ଯେ ମସେଲ ହେମୋଲାଇମ୍ଫରେ DNA ଖଣ୍ଡ ଅଛି ଯାହା ଆକାରରେ ବହୁତ ଭିନ୍ନ, 1 ରୁ 5 kb ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ |ଶଟ୍ଗୁନ୍ କ୍ରମରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି ଯେ ବହୁ ସଂଖ୍ୟକ ଡିଏନ୍ଏ ଖଣ୍ଡ ବିଦେଶୀ ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ଉତ୍ପତ୍ତି ଅଟେ |ସେଥିମଧ୍ୟରୁ ଆମେ ଜୀବାଣୁ, ପ୍ରତ୍ନତତ୍ତ୍ୱ ଏବଂ ଜୀବାଣୁମାନଙ୍କଠାରୁ ଡିଏନ୍ଏ ଖଣ୍ଡ ପାଇଲୁ, ଯେଉଁଥିରେ ଭୂତାଣୁ ସାଧାରଣତ coast ଉପକୂଳ ସାମୁଦ୍ରିକ ଇକୋସିଷ୍ଟମରେ ଦେଖାଯାଉଥିବା ବିଭିନ୍ନ ହୋଷ୍ଟକୁ ସଂକ୍ରମିତ କରେ |ପରିଶେଷରେ, ଆମର ଅଧ୍ୟୟନ ଦର୍ଶାଏ ଯେ ସାମୁଦ୍ରିକ ଉପକୂଳ ଇକୋସିଷ୍ଟମରେ ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ବିବିଧତା ବିଷୟରେ ଜ୍ଞାନର ଏକ ସମୃଦ୍ଧ କିନ୍ତୁ ଏପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଅନ୍ୱେଷିତ ଜ୍ଞାନର ଉତ୍ସକୁ ପ୍ରତିପାଦିତ କରେ LB ର ଧାରଣା |
ଜଳବାୟୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ (CC) ର ସାମୁଦ୍ରିକ ଇକୋସିଷ୍ଟମର ଜ odi ବ ବିବିଧତା ଉପରେ ଏହାର ପ୍ରଭାବ ଦ୍ରୁତ ଗତିରେ ବ research ୁଥିବା ଅନୁସନ୍ଧାନ କ୍ଷେତ୍ର ଅଟେ |ଗ୍ଲୋବାଲ୍ ୱାର୍ମିଂ କେବଳ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଶାରୀରିକ ଚାପ ସୃଷ୍ଟି କରେ ନାହିଁ, ବରଂ ସାମୁଦ୍ରିକ ଜୀବମାନଙ୍କର ତାପଜ ସ୍ଥିରତାର ବିବର୍ତ୍ତନ ସୀମାକୁ ମଧ୍ୟ ଠେଲିଦିଏ, ଅନେକ ପ୍ରଜାତିର ବାସସ୍ଥାନକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରି ସେମାନଙ୍କୁ ଅଧିକ ଅନୁକୂଳ ଅବସ୍ଥା ଖୋଜିବାକୁ ପ୍ରେରିତ କରେ [1, 2] |ମେଟାଜୋନ୍ସର ଜ odi ବ ବିବିଧତାକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିବା ସହିତ, ସିସି ହୋଷ୍ଟ-ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ପାରସ୍ପରିକ ସମ୍ପର୍କର ସୂକ୍ଷ୍ମ ସନ୍ତୁଳନକୁ ବାଧା ଦେଇଥାଏ |ଏହି ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ଡିସବ୍ୟାକ୍ଟେରିଓସିସ୍ ସାମୁଦ୍ରିକ ଇକୋସିଷ୍ଟମ ପାଇଁ ଏକ ଗୁରୁତର ବିପଦ ଅଟେ କାରଣ ଏହା ସାମୁଦ୍ରିକ ଜୀବମାନଙ୍କୁ ସଂକ୍ରାମକ ରୋଗରେ ଆକ୍ରାନ୍ତ କରିଥାଏ [3, 4] |ଜନ ମୃତ୍ୟୁରେ SS ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରିଥାଏ ବୋଲି ବିଶ୍ believed ାସ କରାଯାଏ, ଯାହା ବିଶ୍ global ର ସାମୁଦ୍ରିକ ଇକୋସିଷ୍ଟମ ପରିଚାଳନା ପାଇଁ ଏକ ଗୁରୁତର ସମସ୍ୟା ଅଟେ [5, 6] |ଅନେକ ସାମୁଦ୍ରିକ ପ୍ରଜାତିର ଆର୍ଥିକ, ପରିବେଶ ଏବଂ ପୁଷ୍ଟିକର ପ୍ରଭାବକୁ ଦୃଷ୍ଟିରେ ରଖି ଏହା ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ରସଙ୍ଗ |ଏହା ବିଶେଷ ଭାବରେ ପୋଲାର ଅଞ୍ଚଳରେ ରହୁଥିବା ବିଭାଲ୍ମାନଙ୍କ ପାଇଁ ସତ୍ୟ ଅଟେ, ଯେଉଁଠାରେ CK ର ପ୍ରଭାବ ଅଧିକ ତତକ୍ଷଣାତ୍ ଏବଂ ଭୟଙ୍କର [6, 7] |ବାସ୍ତବରେ, ମାଇଟିଲସ୍ spp ପରି ବିଭାଲ୍ |ସାମୁଦ୍ରିକ ଇକୋସିଷ୍ଟମ ଉପରେ CC ର ପ୍ରଭାବ ଉପରେ ନଜର ରଖିବା ପାଇଁ ବହୁଳ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ ନୁହେଁ, ସେମାନଙ୍କ ସ୍ୱାସ୍ଥ୍ୟ ଉପରେ ନଜର ରଖିବା ପାଇଁ ଅପେକ୍ଷାକୃତ ଅଧିକ ସଂଖ୍ୟକ ଜ om ବ ମାର୍କର୍ ବିକଶିତ କରାଯାଇଛି, ପ୍ରାୟତ en ଏନଜାଇମାଟିଭ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ କିମ୍ବା ସେଲ୍ୟୁଲାର୍ ଫଙ୍କସନ୍ ଯେପରିକି କୋଷର କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା ଏବଂ ଫାଗୋସିଟିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଉପରେ ଆଧାର କରି କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମ ବାୟୋ ମାର୍କର ସହିତ ଜଡିତ ଦୁଇ ସ୍ତରୀୟ ଉପାୟ ବ୍ୟବହାର କରି ବିକଶିତ କରାଯାଇଛି |ଏହି ପଦ୍ଧତିଗୁଡ଼ିକରେ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଚାପ ସୂଚକଗୁଡ଼ିକର ଏକାଗ୍ରତାର ମାପ ମଧ୍ୟ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ ଯାହାକି ବହୁ ପରିମାଣର ସମୁଦ୍ର ଜଳ ଅବଶୋଷଣ ପରେ ନରମ ଟିସୁରେ ଜମା ହୋଇଥାଏ |ଅବଶ୍ୟ, ଉଚ୍ଚ ଫିଲ୍ଟରେସନ୍ କ୍ଷମତା ଏବଂ ବିଭାଲ୍ସର ଅର୍ଦ୍ଧ-ମୁକ୍ତ ରକ୍ତ ସଞ୍ଚାଳନ ପ୍ରଣାଳୀ, ରୋଗୀ ପରିଚାଳନା ପାଇଁ ଏକ ସରଳ ଏବଂ ସର୍ବନିମ୍ନ ଆକ୍ରମଣକାରୀ ପଦ୍ଧତି ତରଳ ବାୟୋପସି (LB) ର ଧାରଣା ବ୍ୟବହାର କରି ନୂତନ ହେମୋଲାଇମ୍ଫ ବାୟୋମାର୍କର ବିକାଶ ପାଇଁ ଏକ ସୁଯୋଗ ପ୍ରଦାନ କରେ |ରକ୍ତ ନମୁନା [9, 10] |ଯଦିଓ ମାନବ LB ରେ ଅନେକ ପ୍ରକାରର ସର୍କୁଲାର୍ ଅଣୁ ମିଳିପାରେ, ଏହି ଧାରଣା ମୁଖ୍ୟତ pl ପ୍ଲାଜାମାରେ ଏକ୍ସଟ୍ରାସେଲୁଲାର୍ DNA (ccfDNA) ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ସଞ୍ଚାର DNA କ୍ରମାଙ୍କ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଉପରେ ଆଧାରିତ |ବାସ୍ତବରେ, ବିଂଶ ଶତାବ୍ଦୀର ମଧ୍ୟଭାଗରୁ ମାନବ ପ୍ଲାଜାମାରେ ଡିଏନ୍ଏ ପ୍ରଚାର କରୁଥିବା ଉପସ୍ଥିତି ଜଣାଶୁଣା [11], କିନ୍ତୁ ନିକଟ ଅତୀତରେ ହିଁ ହାଇ-ଥ୍ରୋପଟ୍ ସିକ୍ୱେନ୍ସିଂ ପଦ୍ଧତିର ଆଗମନ ccfDNA ଉପରେ ଆଧାର କରି କ୍ଲିନିକାଲ୍ ନିରାକରଣର କାରଣ ହୋଇଛି।ଏହି ସଞ୍ଚାରିତ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଉପସ୍ଥିତି କୋଷ ମୃତ୍ୟୁ ପରେ ଜେନୋମିକ୍ DNA (ଆଣବିକ ଏବଂ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍) ର ପାସ୍ ରିଲିଜ୍ ହେତୁ ହୋଇଥାଏ | ସୁସ୍ଥ ବ୍ୟକ୍ତିବିଶେଷରେ, ccfDNA ର ଏକାଗ୍ରତା ସାଧାରଣତ low କମ୍ (<10 ng / mL) କିନ୍ତୁ ବିଭିନ୍ନ ପାଥୋଲୋଜିରେ ପୀଡିତ କିମ୍ବା ଚାପର ଶିକାର ହୋଇ 5-10 ଗୁଣ ବୃଦ୍ଧି କରାଯାଇପାରେ, ଫଳସ୍ୱରୂପ ଟିସୁ ନଷ୍ଟ ହୋଇଯାଏ | ସୁସ୍ଥ ବ୍ୟକ୍ତିବିଶେଷରେ, ccfDNA ର ଏକାଗ୍ରତା ସାଧାରଣତ low କମ୍ (<10 ng / mL) କିନ୍ତୁ ବିଭିନ୍ନ ପାଥୋଲୋଜିରେ ପୀଡିତ କିମ୍ବା ଚାପର ଶିକାର ହୋଇ 5-10 ଗୁଣ ବୃଦ୍ଧି କରାଯାଇପାରେ, ଫଳସ୍ୱରୂପ ଟିସୁ ନଷ୍ଟ ହୋଇଯାଏ | У здоровых людей маря вккДНК в умеме низкая (<10 нг / гир), но может повышаться в 5-10 раз у больных с различной патоголией или подвергающихся аву, при приящемсу к поврежиди ସୁସ୍ଥ ଲୋକମାନଙ୍କରେ, cccDNA ର ଏକାଗ୍ରତା ସାଧାରଣତ low କମ୍ (<10 ng / mL), କିନ୍ତୁ ଏହା ବିଭିନ୍ନ ପାଥୋଲୋଜି ରୋଗୀ କିମ୍ବା ଚାପରେ 5-10 ଗୁଣ ବ increase ିପାରେ ଯାହା ଟିସୁ ନଷ୍ଟ ହୋଇଯାଏ |10 ng 个体 c ccfDNA 的 浓度 通常 10 10 10 ng / mL）在 健康 个体 c ccfdna 10 浓度 较 低 10 10 10 ng / mlКонцентрации ccfDNA обикно низкие (<10 нг / у) у здоровых людей, но могут быть увеличены в 5-10 раз у акинов с различными пидологиями или чисом, что при имитит к повреждению тканей। ସୁସ୍ଥ ବ୍ୟକ୍ତିବିଶେଷରେ ccfDNA ଏକାଗ୍ରତା ସାଧାରଣତ low କମ୍ (<10 ng / ml), କିନ୍ତୁ ବିଭିନ୍ନ ପାଥୋଲୋଜି କିମ୍ବା ଚାପ ଥିବା ରୋଗୀଙ୍କ କ୍ଷେତ୍ରରେ 5-10 ଗୁଣ ବୃଦ୍ଧି କରାଯାଇପାରେ, ଫଳସ୍ୱରୂପ ଟିସୁ ନଷ୍ଟ ହୋଇଯାଏ |CcfDNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଆକାର ବ୍ୟାପକ ଭାବରେ ଭିନ୍ନ ହୋଇଥାଏ, କିନ୍ତୁ ସାଧାରଣତ 150 150 ରୁ 200 bp ମଧ୍ୟରେ ରହିଥାଏ |[12]ସ୍ or ୟଂ ପ୍ରାପ୍ତ ccfDNA ର ବିଶ୍ଳେଷଣ, ଅର୍ଥାତ୍ ସାଧାରଣ କିମ୍ବା ପରିବର୍ତ୍ତିତ ହୋଷ୍ଟ କୋଷରୁ ccfDNA, ଆଣବିକ ଏବଂ / କିମ୍ବା ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଜିନୋମରେ ଉପସ୍ଥିତ ଥିବା ଜେନେଟିକ୍ ଏବଂ ଏପିଜେନେଟିକ୍ ପରିବର୍ତ୍ତନକୁ ଚିହ୍ନଟ କରିବାରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇପାରିବ, ଯାହା ଦ୍ clin ାରା କ୍ଲିନିକାଲ ବିଶେଷଜ୍ଞମାନେ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ମଲିକୁଲାର-ଟାର୍ଗେଟେଡ୍ ଥେରାପି ବାଛିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରିବେ |ଅବଶ୍ୟ, ccfDNA ବିଦେଶୀ ଉତ୍ସରୁ ଯେପରିକି ଗର୍ଭଧାରଣ ସମୟରେ ଭ୍ରୁଣ କୋଷରୁ କିମ୍ବା ଟ୍ରାନ୍ସପ୍ଲାଣ୍ଟ ହୋଇଥିବା ଅଙ୍ଗରୁ ccfDNA ମିଳିପାରିବ [14,15,16,17] |ccfDNA ଏକ ସଂକ୍ରାମକ ଏଜେଣ୍ଟ (ବିଦେଶୀ) ର ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ର ଉପସ୍ଥିତି ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ସୂଚନା ଉତ୍ସ ଅଟେ, ଯାହା ରକ୍ତ ସଂସ୍କୃତି ଦ୍ୱାରା ଚିହ୍ନଟ ହୋଇନଥିବା ବ୍ୟାପକ ସଂକ୍ରମଣର ଅଣ-ଆକ୍ରମଣକାରୀ ଚିହ୍ନଟକୁ ଅନୁମତି ଦେଇଥାଏ, ସଂକ୍ରମିତ ଟିସୁର ଆକ୍ରମଣକାରୀ ବାୟୋପସିରୁ ଦୂରେଇ ରହିଥାଏ |ସାମ୍ପ୍ରତିକ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ମାନବ ରକ୍ତରେ ଏକ ସମୃଦ୍ଧ ସୂଚନା ଉତ୍ସ ରହିଛି ଯାହା ଭାଇରାଲ୍ ଏବଂ ଜୀବାଣୁ ଜନିତ ରୋଗ ଚିହ୍ନଟ କରିବାରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇପାରିବ ଏବଂ ମାନବ ପ୍ଲାଜାମାରେ ମିଳୁଥିବା ccfDNA ର ପ୍ରାୟ 1% ବିଦେଶୀ ମୂଳ ଅଟେ।ଏହି ଅଧ୍ୟୟନଗୁଡିକ ଦର୍ଶାଏ ଯେ ccfDNA ବିଶ୍ଳେଷଣ ବ୍ୟବହାର କରି ଏକ ଅଣୁଜୀବର ସଞ୍ଚାରିତ ମାଇକ୍ରୋବିଓମ୍ର ଜ odi ବ ବିବିଧତାକୁ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇପାରେ |ଅବଶ୍ୟ, ବର୍ତ୍ତମାନ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ, ଏହି ଧାରଣା କେବଳ ମଣିଷମାନଙ୍କରେ ଏବଂ କମ୍ ପରିମାଣରେ, ଅନ୍ୟ ମେରୁଦଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା [20, 21] |
ବର୍ତ୍ତମାନର କାଗଜରେ, ଆମେ Aulacomya atra ର ccfDNA ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିବା ପାଇଁ LB ସମ୍ଭାବନାକୁ ବ୍ୟବହାର କରୁ, ଦକ୍ଷିଣ ପ୍ରଜାତି ସାଧାରଣତ the ସବାଣ୍ଟାର୍କଟିକ୍ କେର୍ଗୁଏଲେନ୍ ଦ୍ୱୀପପୁଞ୍ଜରେ ଦେଖାଯାଏ, ଏକ ବୃହତ ମାଳଭୂମିରେ ଦ୍ୱୀପପୁଞ୍ଜର ଏକ ଗୋଷ୍ଠୀ ଯାହା 35 ନିୟୁତ ବର୍ଷ ପୂର୍ବେ ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିଲା |ଆଗ୍ନେୟଗିରି ଉଦ୍ଗୀରଣ |ଏକ ଭିଟ୍ରୋ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପ୍ରଣାଳୀ ବ୍ୟବହାର କରି, ଆମେ ଜାଣିଲୁ ଯେ ସମୁଦ୍ର ଜଳର DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ଶୀଘ୍ର ମସେଲ ଦ୍ୱାରା ନିଆଯାଏ ଏବଂ ହେମୋଲାଇମ୍ଫ ବିଭାଗରେ ପ୍ରବେଶ କରେ |ଶଟ୍ଗୁନ୍ ସିକ୍ୱେନ୍ସିଙ୍ଗ୍ ଦର୍ଶାଇଛି ଯେ ମସେଲ୍ ହେମୋଲାଇମ୍ଫ୍ ccfDNA ରେ ନିଜସ୍ୱ ଏବଂ ଅଣ-ଉତ୍ପତ୍ତିର DNA ଖଣ୍ଡ ଅଛି, ଏଥିରେ ଶୀତଳ ଆଗ୍ନେୟଗିରି ସାମୁଦ୍ରିକ ଉପକୂଳ ଇକୋସିଷ୍ଟମ୍ର ବାୟୋମ୍ର ସିମ୍ବିଓଟିକ୍ ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ ଏବଂ DNA ଖଣ୍ଡ ଅଛି |ହେମୋଲାଇମ୍ ccfDNA ରେ ବିଭିନ୍ନ ହୋଷ୍ଟ ରେ ges ୍ଜ ଥିବା ଭାଇରସରୁ ମିଳିଥିବା ଭାଇରାଲ୍ କ୍ରମ ମଧ୍ୟ ଥାଏ |ବହୁମୁଖୀ ପ୍ରାଣୀମାନଙ୍କଠାରୁ ଆମେ DNA ଖଣ୍ଡ ମଧ୍ୟ ପାଇଲୁ ଯେପରିକି ଅସ୍ଥି ମାଛ, ସମୁଦ୍ର ଆନିମୋନ୍, ଶାଗ ଏବଂ କୀଟପତଙ୍ଗ |ପରିଶେଷରେ, ଆମର ଅଧ୍ୟୟନ ଦର୍ଶାଏ ଯେ ସାମୁଦ୍ରିକ ଇକୋସିଷ୍ଟମରେ ଏକ ସମୃଦ୍ଧ ଜେନୋମିକ୍ ରେପର୍ଟୋରି ସୃଷ୍ଟି କରିବା ପାଇଁ LB ଧାରଣା ସାମୁଦ୍ରିକ ମେରୁଦଣ୍ଡୀ ପ୍ରାଣୀମାନଙ୍କ ପାଇଁ ସଫଳତାର ସହିତ ପ୍ରୟୋଗ ହୋଇପାରିବ |
ବୟସ୍କମାନେ (55-70 ମିମି ଲମ୍ବ) ମାଇଟିଲସ୍ ପ୍ଲାଟେନିସ୍ (M. platensis) ଏବଂ Aulacomya atra (A. atra) ପୋର୍ଟ-ଅ-ଫ୍ରାନ୍ସର ଆନ୍ତ t ରାଜ୍ୟ ପଥର କୂଳରୁ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା (049 ° 21.235 S, 070 ° 13.490 ଇ।) |ଡିସେମ୍ବର 2018 ରେ କେର୍ଗୁଲେନ୍ ଦ୍ Islands ୀପପୁଞ୍ଜ।(କୃତ୍ରିମ ସମୁଦ୍ର ଲୁଣ ରିଫ୍ କ୍ରିଷ୍ଟାଲ୍, ଇନଷ୍ଟାଣ୍ଟ ମହାସାଗର, ଭର୍ଜିନିଆ, ଆମେରିକା) |ପ୍ରତ୍ୟେକ ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ, ବ୍ୟକ୍ତିଗତ ଶେଲର ଲମ୍ବ ଏବଂ ଓଜନ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା |
ଏହି ପ୍ରୋଗ୍ରାମ ପାଇଁ ଏକ ମାଗଣା ଖୋଲା ପ୍ରବେଶ ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ ଅନଲାଇନରେ ଉପଲବ୍ଧ (https://doi.org/10.17504/protocols.io.81wgb6z9olpk/v1) |ସଂକ୍ଷେପରେ, ବର୍ଣ୍ଣନା ଅନୁଯାୟୀ ଅପହରଣକାରୀ ମାଂସପେଶୀରୁ LB ହେମୋଲାଇମ୍ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା |ହେମୋଲାଇମ୍ଫକୁ 1200 × g ରେ 3 ​​ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍ ଦ୍ୱାରା ସ୍ପଷ୍ଟ କରାଯାଇଥିଲା, ବ୍ୟବହାର ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଅଲ ern କିକ ଶକ୍ତି ଫ୍ରିଜ୍ ହୋଇଯାଇଥିଲା (-20 ° C) |CfDNA ର ବିଚ୍ଛିନ୍ନତା ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧତା ପାଇଁ, ନିର୍ମାତାଙ୍କ ନିର୍ଦ୍ଦେଶ ଅନୁଯାୟୀ ନମୁନାଗୁଡିକ (1.5-2.0 ମିଲି) ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓନାପ୍ cfDNA କିଟ୍ (ମ୍ୟାଚେରୀ-ନାଗେଲ୍, ବ Beth ଥଲେହେନ୍, PA) ବ୍ୟବହାର କରି ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ କରାଯାଇଥିଲା |ପରବର୍ତ୍ତୀ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ccfDNA -80 ° C ରେ ଗଚ୍ଛିତ ହୋଇଥିଲା |କେତେକ ପରୀକ୍ଷଣରେ, QIAamp DNA ଅନୁସନ୍ଧାନକାରୀ କିଟ୍ (QIAGEN, ଟରୋଣ୍ଟୋ, ଅନଟାରିଓ, କାନାଡା) ବ୍ୟବହାର କରି ccfDNA ବିଚ୍ଛିନ୍ନ ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧ କରାଯାଇଥିଲା |ଏକ ମାନକ ପିକୋ ଗ୍ରୀନ୍ ଆସେ ବ୍ୟବହାର କରି ଶୁଦ୍ଧ DNA ପରିମାଣ କରାଯାଇଥିଲା |ବିଚ୍ଛିନ୍ନ ccfDNA ର ଖଣ୍ଡ ବଣ୍ଟନ ଏକ ଉଚ୍ଚ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ DNA କିଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଏକ ଆଜିଲିଣ୍ଟ 2100 ବାୟୋନାଲିଜର (ଆଜିଲିଣ୍ଟ ଟେକ୍ନୋଲୋଜି ଇନକର୍ସ, ସାଣ୍ଟା କ୍ଲାରା, CA) ବ୍ୟବହାର କରି କ୍ୟାପିଲାରୀ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଦ୍ୱାରା ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |ନିର୍ମାତାଙ୍କ ନିର୍ଦ୍ଦେଶ ଅନୁଯାୟୀ ccfDNA ନମୁନାର 1 µl ବ୍ୟବହାର କରି ଏହି ଅନୁସନ୍ଧାନ କରାଯାଇଥିଲା |
ହେମୋଲାଇମ୍ ccfDNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର କ୍ରମ ପାଇଁ, ଜେନୋମ କ୍ୟୁବେକ୍ (ମୋଣ୍ଟ୍ରିଆଲ୍, କ୍ୟୁବେକ୍, କାନାଡା) ଇଲୁମିନା ମିସେକ୍ PE75 କିଟ୍ ର ଇଲୁମିନା ଡିଏନ୍ଏ ମିକ୍ସ କିଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ବନ୍ଧୁକ ଲାଇବ୍ରେରୀ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିଥିଲେ |ଏକ ମାନକ ଆଡାପ୍ଟର (BioO) ବ୍ୟବହୃତ ହେଲା |କଞ୍ଚା ଡାଟା ଫାଇଲଗୁଡ଼ିକ NCBI କ୍ରମ ପଠନ ଅଭିଲେଖାଗାର (SRR8924808 ଏବଂ SRR8924809) ରୁ ଉପଲବ୍ଧ |FastQC [23] ବ୍ୟବହାର କରି ମ reading ଳିକ ପ reading ଼ିବା ଗୁଣକୁ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା |ଟ୍ରାଇମୋମାଟିକ୍ [୨]] ଆଡାପ୍ଟର କ୍ଲିପିଂ ଏବଂ ଖରାପ ଗୁଣାତ୍ମକ ପଠନ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଛି |ଯୁଗ୍ମ ଶେଷ ସହିତ ଶଟଗନ୍ ପ read ଼ା ହେଲା ଫ୍ଲାସ୍ ଲମ୍ୱା ସିଙ୍ଗଲ୍ ରିଡ୍ ସହିତ ମିଶ୍ରିତ ହୋଇ 20 ବିପି ସର୍ବନିମ୍ନ ଓଭରଲପ୍ ସହିତ ମେଳ ଖାଇଲା ନାହିଁ | ମିଶ୍ରିତ ପଠନଗୁଡିକ ଏକ ବିଭାଲ୍ NCBI ଟ୍ୟାକ୍ସୋନୋମି ଡାଟାବେସ୍ (ଇ ମୂଲ୍ୟ <1e - 3 ଏବଂ 90% ହୋମୋଲୋଜି) ବ୍ୟବହାର କରି ବ୍ଲାଷ୍ଟନ୍ ସହିତ ଟିପ୍ପଣୀ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ DUST ବ୍ୟବହାର କରି ନିମ୍ନ ଜଟିଳତା କ୍ରମର ମାସ୍କିଂ କରାଯାଇଥିଲା | ମିଶ୍ରିତ ପଠନଗୁଡିକ ଏକ ବିଭାଲ୍ NCBI ଟ୍ୟାକ୍ସୋନୋମି ଡାଟାବେସ୍ (ଇ ମୂଲ୍ୟ <1e - 3 ଏବଂ 90% ହୋମୋଲୋଜି) ବ୍ୟବହାର କରି ବ୍ଲାଷ୍ଟନ୍ ସହିତ ଟିପ୍ପଣୀ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ DUST ବ୍ୟବହାର କରି ନିମ୍ନ ଜଟିଳତା କ୍ରମର ମାସ୍କିଂ କରାଯାଇଥିଲା | Объединенные чтения были аннотированя с помощуу BLASTN с использованием басыйных так такомии двустворч чатх моллюсков NCBI (значение e <1e-3 и 90% କୋକୋଲୋଜି) зованием DUST [26]। ଏନସିବିଆଇ ବିଭାଲ୍ ଟ୍ୟାକ୍ସୋନୋମି ଡାଟାବେସ୍ (ଇ ମୂଲ୍ୟ <1e-3 ଏବଂ 90% ହୋମୋଲୋଜି) ବ୍ୟବହାର କରି ବ୍ଲାଷ୍ଟେନ୍ ସହିତ ପୁଲ୍ ହୋଇଥିବା ପଠନଗୁଡିକ ଟିପ୍ପଣୀ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ DUST ବ୍ୟବହାର କରି ନିମ୍ନ ଜଟିଳତା କ୍ରମ ମାସ୍କିଂ କରାଯାଇଥିଲା |使用 双壳类 NCBI 分类 数据库 （e 值 <1e-3 和 90% 同源 性 用 用 ବ୍ଲାଷ୍ଟନ UST 合并 的 读数 ， UST DUST [26] 进行 低 复杂 度 的 掩蔽。。使用 双 壳 ncbi 分类 （（<1e-3 和 90% 同源） 用 使用 使用 使用 ଧୂଳି [26] 进行 复杂 使用 使用 。。。。 使用 使用 掩蔽 掩蔽 掩蔽Объединенные чтения были аннотированя с помощу BLASTN с использованием так консомической басы чырных двустворч чатх моллюсков NCBI (значение e <1e-3 и 90% كەجولوكوم پلوسلوۋ) пользованием DUST [26]। NCBI ବିଭାଲ୍ ଟ୍ୟାକ୍ସୋନୋମିକ୍ ଡାଟାବେସ୍ (ଇ ମୂଲ୍ୟ <1e-3 ଏବଂ 90% ହୋମୋଲୋଜି) ବ୍ୟବହାର କରି ବ୍ଲାଷ୍ଟେନ୍ ସହିତ ପୁଲ୍ ହୋଇଥିବା ପଠନଗୁଡିକ ଟିପ୍ପଣୀ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ DUST ବ୍ୟବହାର କରି ନିମ୍ନ ଜଟିଳତା କ୍ରମ ମାସ୍କିଂ କରାଯାଇଥିଲା |ପଠନଗୁଡିକ ଦୁଇଟି ଗୋଷ୍ଠୀରେ ବିଭକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା: ବିଭାଲଭ୍ କ୍ରମ ସହିତ ଜଡିତ (ଏଠାରେ ଆତ୍ମ-ପଠନ କୁହାଯାଏ) ଏବଂ ଅବିଭକ୍ତ (ଆତ୍ମ-ପଠନ ନୁହେଁ) |କଣ୍ଟିଗ୍ ସୃଷ୍ଟି କରିବା ପାଇଁ MEGAHIT ବ୍ୟବହାର କରି ଦୁଇଟି ଗୋଷ୍ଠୀ ପୃଥକ ଭାବରେ ଏକତ୍ରିତ ହୋଇଥିଲେ |ଏହି ସମୟ ମଧ୍ୟରେ, ବିଦେଶୀ ମାଇକ୍ରୋବାୟୋମ୍ ପ read ଼ୁଥିବା ଟ୍ୟାକ୍ସୋନୋମିକ୍ ବିତରଣକୁ କ୍ରାକେନ୍ 2 [28] ବ୍ୟବହାର କରି ଶ୍ରେଣୀଭୁକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଗାଲାକ୍ସିରେ କ୍ରୋନା ପାଇ ଚାର୍ଟ ଦ୍ୱାରା ଆଲେଖୀକ ଭାବରେ ଉପସ୍ଥାପିତ ହୋଇଥିଲା [29, 30] |ଆମର ପ୍ରାଥମିକ ପରୀକ୍ଷଣରୁ ସର୍ବୋଚ୍ଚ kmers kmers-59 ହେବାକୁ ସ୍ଥିର କରାଯାଇଥିଲା | ଚୂଡ଼ାନ୍ତ ଟିପ୍ପଣୀ ପାଇଁ ବ୍ଲାଷ୍ଟଏନ୍ (ବିଭାଲ୍ NCBI ଡାଟାବେସ୍, ଇ ମୂଲ୍ୟ <1e - 10 ଏବଂ 60% ହୋମୋଲୋଜି) ସହିତ ଆଲାଇନ୍ମେଣ୍ଟ୍ ଦ୍ୱାରା ସେଲ୍ଫ୍ କଣ୍ଟିଗ୍ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଥିଲା | ଚୂଡ଼ାନ୍ତ ଟିପ୍ପଣୀ ପାଇଁ ବ୍ଲାଷ୍ଟଏନ୍ (ବିଭାଲ୍ NCBI ଡାଟାବେସ୍, ଇ ମୂଲ୍ୟ <1e - 10 ଏବଂ 60% ହୋମୋଲୋଜି) ସହିତ ଆଲାଇନ୍ମେଣ୍ଟ୍ ଦ୍ୱାରା ସେଲ୍ଫ୍ କଣ୍ଟିଗ୍ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଥିଲା | ЗАТЕМ собственные бастиги были идентифицирован путем сопоставления с BLASTN ଚୂଡ଼ାନ୍ତ ଟିପ୍ପଣୀ ପାଇଁ ବ୍ଲାଷ୍ଟନ୍ (NCBI ବିଭାଲ୍ ଡାଟାବେସ୍, ଇ ମୂଲ୍ୟ <1e-10 ଏବଂ 60% ହୋମୋଲୋଜି) ସହିତ ମେଳ କରି ସେଲ୍ଫ୍ କଣ୍ଟିଗ୍ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଥିଲା |B AST AST ବ୍ଲାଷ୍ଟନ （双 贝类 贝类 NCBI 数据库 ， e 值 <1e-10 和 60% 同源 性） 来 来。。。B 然后 AST ବ୍ଲାଷ୍ଟନ （双 壳 贝类 NCBI 数据库 ， e 值 <1e-10 和 60% Затем были идентифицированя собственные мартиги для окончательной аннотации путем сопоставления с Бластн ତାପରେ ବ୍ଲାଷ୍ଟନ (NCBI ବିଭାଲ୍ ଡାଟାବେସ୍, ଇ ମୂଲ୍ୟ <1e-10 ଏବଂ 60% ହୋମୋଲୋଜି) ସହିତ ମେଳ କରି ଅନ୍ତିମ ଟିପ୍ପଣୀ ପାଇଁ ସେଲ୍ଫ୍ କଣ୍ଟିଗ୍ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଥିଲା | ସମାନ୍ତରାଳ ଭାବରେ, ନିଜେ ନଥିବା ଗୋଷ୍ଠୀ କଣ୍ଟିଗ୍ ବ୍ଲାଷ୍ଟନ୍ (nt NCBI ଡାଟାବେସ୍, ଇ ମୂଲ୍ୟ <1e - 10 ଏବଂ 60% ହୋମୋଲୋଜି) ସହିତ ଟିପ୍ପଣୀ କରାଯାଇଥିଲା | ସମାନ୍ତରାଳ ଭାବରେ, ନିଜେ ନଥିବା ଗୋଷ୍ଠୀ କଣ୍ଟିଗ୍ ବ୍ଲାଷ୍ଟନ୍ (nt NCBI ଡାଟାବେସ୍, ଇ ମୂଲ୍ୟ <1e - 10 ଏବଂ 60% ହୋମୋଲୋଜି) ସହିତ ଟିପ୍ପଣୀ କରାଯାଇଥିଲା | Параллельно чужеродные групповые кыртиги были аннотированя с помощуу ବ୍ଲାଷ୍ଟନ ସମାନ୍ତରାଳ ଭାବରେ, ବିଦେଶୀ ଗୋଷ୍ଠୀ କଣ୍ଟିଗ୍ ବ୍ଲାଷ୍ଟନ୍ (NT NCBI ଡାଟାବେସ୍, ଇ ମୂଲ୍ୟ <1e-10 ଏବଂ 60% ହୋମୋଲୋଜି) ସହିତ ଟିପ୍ପଣୀ କରାଯାଇଥିଲା |平行 地 ， 用 ବ୍ଲାଷ୍ଟନ୍ NC NCBI 数据库 ， e 值 <1e-10 和 60% 同源 性） 注释 非 自身。。。平行 地 ， 用 ବ୍ଲାଷ୍ଟନ୍ NC NCBI 数据库 ， e 值 <1e-10 和 60% 同源 性） 注释 非 自身。。。 Параллельно утитиги, не относящиеся к собственной группе, были аннотирован с помощуу ବ୍ଲାଷ୍ଟନ ସମାନ୍ତରାଳ ଭାବରେ, ଅଣ-ସେଲ୍ ଗ୍ରୁପ୍ କଣ୍ଟିଗ୍ସ ବ୍ଲାଷ୍ଟନ୍ (nt NCBI ଡାଟାବେସ୍, ଇ ମୂଲ୍ୟ <1e-10 ଏବଂ 60% ହୋମୋଲୋଜି) ସହିତ ଟିପ୍ପଣୀ କରାଯାଇଥିଲା | NAST ଏବଂ RefSeq ପ୍ରୋଟିନ୍ NCBI ଡାଟାବେସ୍ (ଇ ମୂଲ୍ୟ <1e - 10 ଏବଂ 60% ହୋମୋଲୋଜି) ବ୍ୟବହାର କରି ବ୍ଲାଷ୍ଟକ୍ସ ମଧ୍ୟ ଅଜ୍ଞାତ କଣ୍ଟିଗ୍ ଉପରେ କରାଯାଇଥିଲା | NAST ଏବଂ RefSeq ପ୍ରୋଟିନ୍ NCBI ଡାଟାବେସ୍ (ଇ ମୂଲ୍ୟ <1e - 10 ଏବଂ 60% ହୋମୋଲୋଜି) ବ୍ୟବହାର କରି ବ୍ଲାଷ୍ଟକ୍ସ ମଧ୍ୟ ଅଜ୍ଞାତ କଣ୍ଟିଗ୍ ଉପରେ କରାଯାଇଥିଲା | ବ୍ଲାଷ୍ଟକ୍ସ ଟାକже был проведен на امамостоятельных кстигах с использованием базанных белка nr һәм RefSeq NCBI (значение e <1e-10 и идология 60%)। ବ୍ଲାଷ୍ଟକ୍ସ nr ଏବଂ RefSeq NCBI ପ୍ରୋଟିନ୍ ଡାଟାବେସ୍ (ଇ ମୂଲ୍ୟ <1e-10 ଏବଂ 60% ହୋମୋଲୋଜି) ବ୍ୟବହାର କରି ଅଣ-ସେଲ୍ଫ୍ କଣ୍ଟିଗ୍ ଉପରେ ମଧ୍ୟ କରାଯାଇଥିଲା |还 使用 nr 和 RefSeq 蛋白 NCBI 数据库 对 非 AST 了 AST BLASTX （e 值 <1e-10 和 60% 同源 性）。还 使用 nr 和 RefSeq 蛋白 NCBI 数据库 对 非 AST 了 AST BLASTX （e 值 <1e-10 和 60% 同源 性）。 ବ୍ଲାଷ୍ଟକ୍ସ также выполняли на амамостоятельных кститигах с использованием базанных белка nr һәм RefSeq NCBI (значение e <1e-10 и идология 60%)। ବ୍ଲାଷ୍ଟକ୍ସ nr ଏବଂ RefSeq NCBI ପ୍ରୋଟିନ୍ ଡାଟାବେସ୍ (ଇ ମୂଲ୍ୟ <1e-10 ଏବଂ 60% ହୋମୋଲୋଜି) ବ୍ୟବହାର କରି ଅଣ-ସେଲ୍ଫ୍ କଣ୍ଟିଗ୍ ଉପରେ ମଧ୍ୟ କରାଯାଇଥିଲା |ଅଣ-ସ୍ୱ-କଣ୍ଟିଗ୍ସର ବ୍ଲାଷ୍ଟନ୍ ଏବଂ ବ୍ଲାଷ୍ଟକ୍ସ ପୁଲ୍ ଅନ୍ତିମ କଣ୍ଟିଗ୍ସକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ (ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ଫାଇଲ୍ ଦେଖନ୍ତୁ) |
PCR ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ପ୍ରାଇମର୍ ଗୁଡିକ ସାରଣୀ S1 ରେ ତାଲିକାଭୁକ୍ତ |ଟ୍ୟାକ୍ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ (ବାୟୋ ମ Basic ଳିକ କାନାଡା, ମାର୍କମ୍, ଅନ୍) ccfDNA ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ଗୁଡ଼ିକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା |ନିମ୍ନଲିଖିତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଅବସ୍ଥା ବ୍ୟବହୃତ ହେଲା: 3 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 95 ° C ରେ ଡେନାଟ୍ରେସନ୍, 1 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 95 ° C, 1 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା, 1 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 72 ° C ରେ ବୃଦ୍ଧି, 35 ଚକ୍ର ଏବଂ ଶେଷରେ 10 ମିନିଟ୍ ମଧ୍ୟରେ 72 ° C |।PCR ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଦ୍ agar ାରା ଅଗରୋଜ୍ ଜେଲରେ (1.5%) SYBRTM ନିରାପଦ DNA ଜେଲ୍ ଦାଗ (ଇନଭାଇଟ୍ରୋଜେନ୍, ବର୍ଲିଂଟନ୍, ଅନ୍, କାନାଡା) 95 V. ରେ ପୃଥକ କରାଯାଇଥିଲା |
ମସେଲ୍ସ (ମାଇଟିଲସ୍ ସ୍ପପି।) 500 ମିଲି ଅମ୍ଳଜାନଯୁକ୍ତ ସମୁଦ୍ର ଜଳ (32 PSU) ରେ 24 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 4 ° C ରେ ଆକ୍ଲିମାଟାଇଜ୍ ହୋଇଥିଲା |ମାନବ ଗାଲେକ୍ଟିନ୍ -7 ସିଡିଏନ୍ଏ କ୍ରମ (NCBI ଯୋଗଦାନ ସଂଖ୍ୟା L07769) ଧାରଣ କରିଥିବା ପ୍ଲାସିମ୍ DNA 190 μg / μl ର ଅନ୍ତିମ ଏକାଗ୍ରତାରେ ଭିଆଲରେ ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା |ଡିଏନ୍ଏ ଯୋଗ ବିନା ସମାନ ଅବସ୍ଥାରେ ଥିବା ମସେଲଗୁଡିକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଥିଲା |ତୃତୀୟ କଣ୍ଟ୍ରୋଲ୍ ଟ୍ୟାଙ୍କରେ ମସେଲ ବିନା DNA ରହିଥିଲା ​​|ସମୁଦ୍ର ଜଳରେ DNA ର ଗୁଣବତ୍ତା ଉପରେ ନଜର ରଖିବା ପାଇଁ, ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ସମୟରେ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଟ୍ୟାଙ୍କରୁ ସମୁଦ୍ର ଜଳର ନମୁନା (20 μl; ତିନୋଟି ପୁନରାବୃତ୍ତି) ନିଆଯାଇଥିଲା |ପ୍ଲାଜାମିଡ୍ ଡିଏନ୍ଏ ଟ୍ରାସେବିଲିଟି ପାଇଁ, LB ମସେଲଗୁଡିକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ସମୟରେ ଅମଳ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ qPCR ଏବଂ ddPCR ଦ୍ୱାରା ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |ସମୁଦ୍ର ଜଳର ଲୁଣର ମାତ୍ରା ଅଧିକ ଥିବାରୁ ସମସ୍ତ PCR ଅନୁଧ୍ୟାନ ପୂର୍ବରୁ PCR ଗୁଣାତ୍ମକ ଜଳ (1:10) ରେ ଆଲିକଟଗୁଡିକ ମିଶ୍ରିତ କରାଯାଇଥିଲା |
BioRad QX200 ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ (Mississauga, Ontario, Canada) ବ୍ୟବହାର କରି ଡିଜିଟାଲ୍ ଡ୍ରପଲେଟ୍ PCR (ddPCR) କରାଯାଇଥିଲା |ସର୍ବୋଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବାକୁ ତାପମାତ୍ରା ପ୍ରୋଫାଇଲ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ (ସାରଣୀ S1) |ଏକ QX200 ଡ୍ରପ୍ ଜେନେରେଟର (BioRad) ବ୍ୟବହାର କରି ଡ୍ରପ୍ ସୃଷ୍ଟି କରାଯାଇଥିଲା |ddPCR ନିମ୍ନଲିଖିତ ଭାବରେ କରାଯାଇଥିଲା: 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 95 ° C, 30 ସେକେଣ୍ଡ୍ ପାଇଁ 50 ° ଚକ୍ର ଏବଂ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 72 ° C ଏବଂ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 72 ° C, 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 4 ° C ଏବଂ 5 ମିନିଟ୍ ମଧ୍ୟରେ 90 ° C |ଡ୍ରପ୍ ସଂଖ୍ୟା ଏବଂ ସକରାତ୍ମକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା (କପି ସଂଖ୍ୟା / µl) ଏକ QX200 ଡ୍ରପ୍ ରିଡର୍ (BioRad) ବ୍ୟବହାର କରି ମାପ କରାଯାଇଥିଲା |10,000 ରୁ କମ୍ ବୁନ୍ଦା ଥିବା ନମୁନାଗୁଡିକ ପ୍ରତ୍ୟାଖ୍ୟାନ କରାଯାଇଥିଲା |ପ୍ରତ୍ୟେକ ଥର ddPCR ଚାଲିବା ସମୟରେ ନମୁନା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରାଯାଇନଥିଲା |
qPCR ରୋଟର୍-ଜିନ୍® 3000 (କର୍ବେଟ୍ ରିସର୍ଚ୍ଚ, ସିଡନୀ, ଅଷ୍ଟ୍ରେଲିଆ) ଏବଂ LGALS7 ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରାଇମର୍ ବ୍ୟବହାର କରି କରାଯାଇଥିଲା |ସମସ୍ତ ପରିମାଣିକ PCR ଗୁଡିକ QuantiFast SYBR ଗ୍ରୀନ୍ PCR କିଟ୍ (QIAGEN) ବ୍ୟବହାର କରି 20 µl ରେ କରାଯାଇଥିଲା |qPCR 15 ମିନିଟ ଇନକ୍ୟୁବେସନ ସହିତ 95 ° C ରେ ଆରମ୍ଭ ହୋଇଥିଲା ଏବଂ ପରେ 40 ଚକ୍ର 95 ° C ରେ 10 ସେକେଣ୍ଡ ଏବଂ 60 ° C ରେ 60 ସେକେଣ୍ଡରେ ଗୋଟିଏ ତଥ୍ୟ ସଂଗ୍ରହ ସହିତ ଆରମ୍ଭ ହୋଇଥିଲା |5 s ପାଇଁ 95 ° C, 60 s ପାଇଁ 65 ° C ଏବଂ qPCR ଶେଷରେ 97 ° C ରେ କ୍ରମାଗତ ମାପ ବ୍ୟବହାର କରି ତରଳିବା ବକ୍ରଗୁଡିକ ସୃଷ୍ଟି କରାଯାଇଥିଲା |ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ନମୁନା ବ୍ୟତୀତ ପ୍ରତ୍ୟେକ qPCR ତ୍ରିଗୁଣରେ କରାଯାଇଥିଲା |
ଯେହେତୁ ମସେଲଗୁଡିକ ସେମାନଙ୍କର ଉଚ୍ଚ ଫିଲ୍ଟରେସନ୍ ହାର ପାଇଁ ଜଣାଶୁଣା, ଆମେ ପ୍ରଥମେ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିଥିଲୁ ଯେ ସେମାନେ ସମୁଦ୍ର ଜଳରେ ଥିବା DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ ଫିଲ୍ଟର୍ କରି ରଖିପାରିବେ |ଏହି ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ସେମାନଙ୍କର ଅର୍ଦ୍ଧ-ଖୋଲା ଲିମ୍ଫାଟିକ୍ ସିଷ୍ଟମରେ ଜମା ହୁଏ କି ନାହିଁ ଆମେ ମଧ୍ୟ ଆଗ୍ରହୀ |ନୀଳ ମସେଲ ଟ୍ୟାଙ୍କରେ ଯୋଡି ହୋଇଥିବା ଦ୍ରବୀଭୂତ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଭାଗ୍ୟ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରି ଆମେ ଏହି ସମସ୍ୟାକୁ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଭାବରେ ସମାଧାନ କଲୁ |ଡିଏନ୍ଏ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଟ୍ରାକିଂକୁ ସୁଗମ କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ ମାନବ ଗାଲେକ୍ଟିନ୍ -7 ଜିନ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା ବିଦେଶୀ (ସ୍ not ୟଂ ନୁହେଁ) ପ୍ଲାସିମ୍ DNA ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲୁ |ddPCR ସମୁଦ୍ର ଜଳ ଏବଂ ମସେଲରେ ପ୍ଲାସିମ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ ଚିହ୍ନିତ କରେ |ଆମର ଫଳାଫଳ ଦର୍ଶାଏ ଯେ ଯଦି ସମୁଦ୍ର ଜଳରେ ଥିବା ଡିଏନ୍ଏ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ପରିମାଣ ସମୟ ସହିତ (7 ଦିନ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ) ମସେଲର ଅନୁପସ୍ଥିତିରେ ଅପେକ୍ଷାକୃତ ସ୍ଥିର ରହିଥାଏ, ତେବେ ମସେଲର ଉପସ୍ଥିତିରେ ଏହି ସ୍ତର ପ୍ରାୟ 8 ଘଣ୍ଟା ମଧ୍ୟରେ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ରୂପେ ଅଦୃଶ୍ୟ ହୋଇଯାଏ (ଚିତ୍ର 1 ଏ, ଖ) |ଇଣ୍ଟ୍ରାଭାଲୁଲାର୍ ଫ୍ଲୁଇଡ୍ ଏବଂ ହେମୋଲାଇମ୍ଫ (ଚିତ୍ର 1c) ରେ 15 ମିନିଟ ମଧ୍ୟରେ ଏକ୍ସୋଜେନସ୍ ଡିଏନ୍ଏର ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ସହଜରେ ଚିହ୍ନଟ ହେଲା |ଏକ୍ସପୋଜରର 4 ଘଣ୍ଟା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଏହି ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ଏପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଚିହ୍ନଟ ହୋଇପାରେ |ଡିଏନ୍ଏ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ସହିତ ଏହି ଫିଲ୍ଟରିଂ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଜୀବାଣୁ ଏବଂ ଶାଗଗୁଡ଼ିକର ଫିଲ୍ଟର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ସହିତ ତୁଳନାତ୍ମକ |ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡିକ ସୂଚିତ କରେ ଯେ ମସେଲଗୁଡିକ ସେମାନଙ୍କର ତରଳ କମ୍ପାର୍ଟମେଣ୍ଟରେ ବିଦେଶୀ DNA ଫିଲ୍ଟର୍ ଏବଂ ଜମା କରିପାରିବେ |
DdPCR ଦ୍ meas ାରା ମାପ କରାଯାଉଥିବା ମସେଲର ଉପସ୍ଥିତି (A) କିମ୍ବା ଅନୁପସ୍ଥିତି (B) ରେ ସମୁଦ୍ର ଜଳରେ ପ୍ଲାସିମ DNA ର ଆପେକ୍ଷିକ ଏକାଗ୍ରତା |A ରେ, ଫଳାଫଳଗୁଡିକ ଶତକଡ଼ା ଭାବରେ ପ୍ରକାଶ କରାଯାଇଥାଏ, ବାକ୍ସର ସୀମା 75 ତମ ଏବଂ 25 ତମ ଶତକଡ଼ା ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ |ଫିଟ୍ ହୋଇଥିବା ଲୋଗାରିଥମିକ୍ ବକ୍ରକୁ ନାଲି ରଙ୍ଗରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି, ଏବଂ ଧୂସର ରଙ୍ଗର ଛାୟା କ୍ଷେତ୍ର 95% ଆତ୍ମବିଶ୍ୱାସର ବ୍ୟବଧାନକୁ ଦର୍ଶାଏ |B ରେ, ଲାଲ୍ ରେଖା ହାରାହାରି ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ ଏବଂ ନୀଳ ରେଖା ଏକାଗ୍ରତା ପାଇଁ 95% ଆତ୍ମବିଶ୍ୱାସ ବ୍ୟବଧାନକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ |ସି ପ୍ଲାଜାମିଡ୍ ଡିଏନ୍ଏ ଯୋଗ ହେବା ପରେ ବିଭିନ୍ନ ସମୟରେ ହେମୋଲାଇମ୍ଫ୍ ଏବଂ ମସଲର ଭାଲଭ୍ୟୁଲାର୍ ଫ୍ଲୁଇଡ୍ ରେ ପ୍ଲାଜ୍ସିଡ୍ ଡିଏନ୍ଏର ଜମା |ଫଳାଫଳଗୁଡିକ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ କପି ଚିହ୍ନଟ / mL (± SE) ଭାବରେ ଉପସ୍ଥାପିତ ହୁଏ |
ପରବର୍ତ୍ତୀ ସମୟରେ, ଆମେ ସୀମିତ ଆନ୍ଥ୍ରୋପୋଜେନିକ୍ ପ୍ରଭାବ ଥିବା ଦ୍ୱୀପପୁଞ୍ଜର ଏକ ଦୂର ଗୋଷ୍ଠୀ କେର୍ଗୁଏଲେନ୍ ଦ୍ୱୀପପୁଞ୍ଜରେ ଥିବା ମସେଲ ବେଡରୁ ସଂଗୃହିତ ମସେଲରେ ccfDNA ର ଉତ୍ପତ୍ତି ବିଷୟରେ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିଥିଲୁ |ଏହି ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟ ପାଇଁ, ମସେଲ ହେମୋଲାଇମ୍ଫରୁ cccDNA ବିଚ୍ଛିନ୍ନ ହୋଇ ସାଧାରଣତ c ମାନବ cccDNA କୁ ଶୁଦ୍ଧ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ପଦ୍ଧତି ଦ୍ pur ାରା ଶୁଦ୍ଧ କରାଯାଇଥିଲା [32, 33] |ଆମେ ଜାଣିଲୁ ଯେ ମସେଲରେ ହାରାହାରି ହେମୋଲାଇମ୍ଫ୍ ccfDNA ଏକାଗ୍ରତା ମିଲ୍ ହେମୋଲାଇମ୍ଫ ପରିସର ପ୍ରତି କମ୍ ମାଇକ୍ରୋଗ୍ରାମ୍ରେ ଅଛି (ସାରଣୀ S2, ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ସୂଚନା ଦେଖନ୍ତୁ) |ସୁସ୍ଥ ଲୋକଙ୍କ ତୁଳନାରେ ଏହି ଏକାଗ୍ରତା ବହୁତ ବଡ (ମିଲିଲିଟର ପିଛା କମ୍ ନାନୋଗ୍ରାମ୍), କିନ୍ତୁ ବିରଳ କ୍ଷେତ୍ରରେ, କର୍କଟ ରୋଗୀଙ୍କ କ୍ଷେତ୍ରରେ, ccfDNA ସ୍ତର ମିଲିଲିଟର ପିଛା ଅନେକ ମାଇକ୍ରୋଗ୍ରାମ୍ରେ ପହଞ୍ଚିପାରେ [34, 35] |ହେମୋଲାଇମ୍ଫ ccfDNA ର ଆକାର ବଣ୍ଟନର ଏକ ବିଶ୍ଳେଷଣରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ଏହି ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ଆକାରରେ ବହୁତ ଭିନ୍ନ, 1000 ବିପି ରୁ 1000 ବିପି ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ |5000 ବିପି ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ (ଚିତ୍ର 2) |ସିଲିକା-ଆଧାରିତ QIAamp ଅନୁସନ୍ଧାନକାରୀ କିଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ସମାନ ଫଳାଫଳ ମିଳିଲା, ccfDNA ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରି ନିମ୍ନ ଏକାଗ୍ରତା DNA ନମୁନାରୁ ଜେନୋମିକ୍ DNA କୁ ଶୀଘ୍ର ପୃଥକ ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧ କରିବା ପାଇଁ ଫୋରେନସିକ୍ ବିଜ୍ଞାନରେ ବ୍ୟବହୃତ ଏକ ପଦ୍ଧତି |
ମସେଲ ହେମୋଲାଇମ୍ଫର ପ୍ରତିନିଧୀ ccfDNA ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେଗ୍ରାମ |NucleoSnap ପ୍ଲାଜମା କିଟ୍ (ଉପର) ଏବଂ QIAamp DNA ଅନୁସନ୍ଧାନକାରୀ କିଟ୍ ସହିତ ବାହାର କରାଯାଇଛି |ବି ଭାୟଲିନ୍ ପ୍ଲଟ୍ ମସେଲରେ ହେମୋଲାଇମ୍ଫ୍ ccfDNA ଏକାଗ୍ରତା (± SE) ବଣ୍ଟନକୁ ଦର୍ଶାଉଛି |କଳା ଏବଂ ନାଲି ରେଖା ଯଥାକ୍ରମେ ମଧ୍ୟମ ଏବଂ ପ୍ରଥମ ଏବଂ ତୃତୀୟ ଚତୁର୍ଥାଂଶକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ |
ମଣିଷ ଏବଂ ପ୍ରାଥମିକମାନଙ୍କରେ ccfDNA ର ପ୍ରାୟ 1% ଏକ ବିଦେଶୀ ଉତ୍ସ ଅଛି [21, 37] |ବିଭାଲ୍, ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ସମୃଦ୍ଧ ସମୁଦ୍ର ଜଳ ଏବଂ ମସେଲ ccfDNA ର ଆକାର ବଣ୍ଟନକୁ ଅର୍ଦ୍ଧ-ଖୋଲା ରକ୍ତ ସଞ୍ଚାଳନ ପ୍ରଣାଳୀକୁ ଦୃଷ୍ଟିରେ ରଖି ଆମେ ଅନୁମାନ କରିଛୁ ଯେ ମସେଲ ହେମୋଲାଇମ୍ଫ ccfDNA ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ DNA ର ଏକ ସମୃଦ୍ଧ ଏବଂ ବିବିଧ ପୁଲ୍ ଧାରଣ କରିପାରେ |ଏହି ଅନୁମାନ ପରୀକ୍ଷା କରିବାକୁ, ଆମେ କେର୍ଗୁଏଲେନ୍ ଦ୍ୱୀପପୁଞ୍ଜରୁ ସଂଗୃହିତ ଆଲାକୋମିଆ ଆଟ୍ରା ନମୁନାରୁ ହେମୋଲାଇମ୍ଫ୍ ccfDNA କ୍ରମରେ କ୍ରମାନୁସାରେ 10 ମିଲିୟନରୁ ଅଧିକ ପ s ଼ୁଛୁ, ଯାହାର 97.6% ଗୁଣାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପାସ କରିଛି |ଏହା ପରେ ବ୍ଲାଷ୍ଟନ ଏବଂ NCBI ବିଭାଲଭ୍ ଡାଟାବେସ୍ (ଚିତ୍ର S1, ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ସୂଚନା) ବ୍ୟବହାର କରି ସ୍ self ୟଂ ଏବଂ ଅଣ-ଆତ୍ମ ଉତ୍ସ ଅନୁଯାୟୀ ପଠନଗୁଡିକ ଶ୍ରେଣୀଭୁକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା |
ମଣିଷମାନଙ୍କ ମଧ୍ୟରେ ଉଭୟ ପରମାଣୁ ଏବଂ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ DNA ରକ୍ତ ପ୍ରବାହରେ ମୁକ୍ତ ହୋଇପାରେ |ଅବଶ୍ୟ, ବର୍ତ୍ତମାନର ଅଧ୍ୟୟନରେ, ଏ.ଆଟ୍ରା ଜିନୋମକୁ କ୍ରମାନ୍ୱୟରେ କିମ୍ବା ବର୍ଣ୍ଣନା କରାଯାଇ ନ ଥିବାରୁ ମସେଲର ଆଣବିକ ଜେନୋମିକ୍ DNA କୁ ବିସ୍ତୃତ ଭାବରେ ବର୍ଣ୍ଣନା କରିବା ସମ୍ଭବ ନୁହେଁ |ତଥାପି, ଆମେ ବିଭାଲ୍ ଲାଇବ୍ରେରୀ (ଚିତ୍ର S2, ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ସୂଚନା) ବ୍ୟବହାର କରି ଆମର ନିଜ ମୂଳର ଅନେକ ccfDNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ ଚିହ୍ନଟ କରିବାରେ ସକ୍ଷମ ହେଲୁ |ଆମେ ମଧ୍ୟ ଆମର ନିଜ ଉତ୍ପତ୍ତିର DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଉପସ୍ଥିତିକୁ ନିଶ୍ଚିତ କରିଥିଲୁ ଯାହା ସେହି A. atra ଜିନଗୁଡିକର ନିର୍ଦ୍ଦେଶିତ PCR ବିସ୍ତାର ଦ୍ୱାରା ନିର୍ଦ୍ଦେଶିତ ହୋଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 3) |ସେହିଭଳି, A. atra ର ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଜିନୋମ୍ ସର୍ବସାଧାରଣ ଡାଟାବେସରେ ଉପଲବ୍ଧ ଥିବାରୁ, A. atra ର ହେମୋଲାଇମ୍ଫରେ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ccfDNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଉପସ୍ଥିତି ପାଇଁ ପ୍ରମାଣ ମିଳିପାରିବ |ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଉପସ୍ଥିତି PCR ବିସ୍ତାର (ଚିତ୍ର 3) ଦ୍ୱାରା ନିଶ୍ଚିତ କରାଯାଇଥିଲା |
ଏ.ଆଟ୍ରା (ଲାଲ୍ ବିନ୍ଦୁ - ଷ୍ଟକ୍ ନମ୍ବର: SRX5705969) ଏବଂ M. platensis (ନୀଳ ବିନ୍ଦୁ - ଷ୍ଟକ୍ ନମ୍ବର: SRX5705968) ର ହେମୋଲାଇମ୍ଫରେ ବିଭିନ୍ନ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଜିନ୍ ଉପସ୍ଥିତ ଥିଲେ |ଚିତ୍ର ବ୍ରେଟନ୍ ଏଟ୍ ଆଲ୍ ରୁ ଆଡାପ୍ଟ୍ଟ୍ ହୋଇଛି, 2011 B ଏଟ୍ରା ଠାରୁ ହେମୋଲାଇମ୍ ସୁପରନେଟାଣ୍ଟର ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ FTA କାଗଜରେ ଗଚ୍ଛିତ |PCR ମିଶ୍ରଣ ଧାରଣ କରିଥିବା PCR ଟ୍ୟୁବରେ ସିଧାସଳଖ ଯୋଡିବା ପାଇଁ 3 ମିମି ପଞ୍ଚ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ |
ସମୁଦ୍ର ଜଳରେ ପ୍ରଚୁର ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ବିଷୟବସ୍ତୁ ପ୍ରଦାନ କରାଯାଇ, ଆମେ ପ୍ରଥମେ ହେମୋଲାଇମ୍ଫରେ ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ DNA କ୍ରମର ଚରିତ୍ରକରଣ ଉପରେ ଧ୍ୟାନ ଦେଇଥିଲୁ |ଏହା କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ ଦୁଇଟି ଭିନ୍ନ ରଣନୀତି ବ୍ୟବହାର କରୁ |ପ୍ରଥମ କ strategy ଶଳ କ୍ରାକେନ୍ 2 ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲା, ଏକ ଆଲଗୋରିଦମ-ଆଧାରିତ କ୍ରମ ବର୍ଗୀକରଣ ପ୍ରୋଗ୍ରାମ ଯାହା ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ କ୍ରମକୁ ବ୍ଲାଷ୍ଟ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଉପକରଣ ସହିତ ତୁଳନାତ୍ମକ ସଠିକତା ସହିତ ଚିହ୍ନଟ କରିପାରିବ |6719 ରୁ ଅଧିକ ପଠନ ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ ମୂଳ ବୋଲି ସ୍ଥିର ହୋଇଥିବାବେଳେ 124 ଏବଂ 64 ଯଥାକ୍ରମେ ପ୍ରତ୍ନତତ୍ତ୍ୱ ଏବଂ ଜୀବାଣୁ ଥିଲେ (ଚିତ୍ର 4) |ସର୍ବାଧିକ ପ୍ରଚୁର ଜୀବାଣୁ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ହେଲା ଫର୍ମିକ୍ୟୁଟ୍ସ (46%), ପ୍ରୋଟୋବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ (27%), ଏବଂ ବ୍ୟାକ୍ଟେରଏଡେଟସ୍ (17%) (ଚିତ୍ର 4a) |ଏହି ବଣ୍ଟନ ସାମୁଦ୍ରିକ ନୀଳ ମସେଲ ମାଇକ୍ରୋବାୟୋମର ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନ ସହିତ ସମାନ ଅଟେ [39, 40] |ଗାମାପ୍ରୋଟୋବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ ପ୍ରୋଟୋବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆର ମୁଖ୍ୟ ଶ୍ରେଣୀ ଥିଲା (44%), ଏଥିରେ ଅନେକ ଭିବ୍ରିଓନାଲେସ୍ (ଚିତ୍ର 4 ବି) ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ |DdPCR ପଦ୍ଧତି A. atra hemolymph (ଚିତ୍ର 4c) ର ccfDNA ରେ Vibrio DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଉପସ୍ଥିତି ନିଶ୍ଚିତ କଲା |CcfDNA ର ଜୀବାଣୁ ଉତ୍ପତ୍ତି ବିଷୟରେ ଅଧିକ ସୂଚନା ପାଇବାକୁ, ଏକ ଅତିରିକ୍ତ ଉପାୟ ଅବଲମ୍ବନ କରାଯାଇଥିଲା (ଚିତ୍ର S2, ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ସୂଚନା) | ଏହି ପରିପ୍ରେକ୍ଷୀରେ, ପ read ଼ାଯାଏ ଯେ ଓଭରଲିପ୍ ହୋଇଥିବା ଯୋଡି-ଏଣ୍ଡ୍ ରିଡ୍ ଭାବରେ ଏକତ୍ରିତ ହୋଇଥିଲା ଏବଂ ବ୍ଲାଷ୍ଟନ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ସ୍ self ୟଂ (ବିଭାଲ୍) କିମ୍ବା ନିଜେ ଉତ୍ପତ୍ତି ଶ୍ରେଣୀଭୁକ୍ତ ହୋଇଥିଲା ଏବଂ 1e - 3 ର ଇ ମୂଲ୍ୟ ଏବଂ> 90% ହୋମୋଲୋଜି ସହିତ କଟଅଫ୍ | ଏହି ପରିପ୍ରେକ୍ଷୀରେ, ପ read ଼ାଯାଏ ଯେ ଓଭରଲିପ୍ ହୋଇଥିବା ଯୋଡି-ଏଣ୍ଡ୍ ରିଡ୍ ଭାବରେ ଏକତ୍ରିତ ହୋଇଥିଲା ଏବଂ ବ୍ଲାଷ୍ଟନ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ସ୍ self ୟଂ (ବିଭାଲ୍) କିମ୍ବା ନିଜେ ଉତ୍ପତ୍ତି ଶ୍ରେଣୀଭୁକ୍ତ ହୋଇଥିଲା ଏବଂ 1e - 3 ର ଇ ମୂଲ୍ୟ ଏବଂ> 90% ହୋମୋଲୋଜି ସହିତ କଟଅଫ୍ | В этом случае перекрывающиеся чтения были собраня как чтения с парными концами и были мсисифицирован как собственные (двустворч мате моллюски) или чужие по происхождению с сспользовы % ଏହି ପରିପ୍ରେକ୍ଷୀରେ, ଓଭରଲିପ୍ ହୋଇଥିବା ପଠନଗୁଡିକ ଯୁଗ୍ମ ସମାପ୍ତ ପଠନ ଭାବରେ ସଂଗୃହିତ ହୋଇଥିଲା ଏବଂ ବ୍ଲାଷ୍ଟନ୍ ଏବଂ 1e-3 ର ଇ ମୂଲ୍ୟ ବ୍ୟବହାର କରି ଦେଶୀ (ବିଭାଲଭ୍) କିମ୍ବା ଅଣ-ମୂଳ ଶ୍ରେଣୀଭୁକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ> 90% ହୋମୋଲୋଜି ସହିତ କଟଅଫ୍ |在 这种 情况 使用 使用 使用 AST AST BLASTN 和 1e-3 的 e 值 和> 90% 同源 性 90 90 90 为。。。。。ବ୍ଲାଷ୍ଟନ 和 1e-3 的 的 90> 90% 同源 90 90 90 90 。。。。。。。。。 。。。。。。。。。 。。。。。。。。。 。。。。。。。。。 。。。。。。。。。 。。。。。。。。。 。。。。。。。。。 。。。。。。。。。 。。。。。。。。。 В ээом сарекыающеыающющающияияаны бычи бычи бычи счианы сарнияаныассифицаы коббттвоччаные (дввттвочч ыые молмюкккки) )и) ииоиоихбоббаыимп сиеьзованем снию сипта м ссниютта и иeгои гে ଖм ଏହି ପରିପ୍ରେକ୍ଷୀରେ, ଓଭରଲିପ୍ ହୋଇଥିବା ପଠନଗୁଡିକ ଯୁଗ୍ମ ସମାପ୍ତ ପଠନ ଭାବରେ ସଂଗୃହିତ ହୋଇଥିଲା ଏବଂ ଇ ବ୍ଲାଷ୍ଟନ୍ ଏବଂ 1e-3 ମୂଲ୍ୟ ଏବଂ ଏକ ହୋମୋଲୋଜି ସୀମା> 90% ବ୍ୟବହାର କରି ନିଜର (ବିଭାଲ୍) କିମ୍ବା ଅଣ-ମୂଳ ଶ୍ରେଣୀଭୁକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା |ଯେହେତୁ A. atra genome ଏପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ କ୍ରମବଦ୍ଧ ହୋଇନାହିଁ, ଆମେ MEGAHIT Next Generation Sequencing (NGS) ଆସେମ୍ବଲର୍ ର ଡି ନୋଭୋ ଆସେମ୍ବଲି ରଣନୀତି ବ୍ୟବହାର କରିଛୁ |ସମୁଦାୟ 147,188 କଣ୍ଟିଗ୍ ଉତ୍ପତ୍ତି ଉପରେ ନିର୍ଭରଶୀଳ (ବିଭାଲ୍) ଭାବରେ ଚିହ୍ନଟ ହୋଇଛି |ଏହି କଣ୍ଟିଗ୍ଗୁଡ଼ିକ ପରେ ବ୍ଲାଷ୍ଟନ୍ ଏବଂ ବ୍ଲାଷ୍ଟକ୍ସ ବ୍ୟବହାର କରି 1e-10 ର ଇ-ମୂଲ୍ୟ ସହିତ ବିସ୍ଫୋରଣ ହେଲା |ଏହି ରଣନୀତି ଆମକୁ A. atra ccfDNA ରେ ଉପସ୍ଥିତ ଥିବା 482 ଅଣ-ବିଭାଲଭ୍ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ ଚିହ୍ନଟ କରିବାକୁ ଅନୁମତି ଦେଲା |ଏହି ଡିଏନ୍ଏ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଅଧାରୁ ଅଧିକ (57%) ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆରୁ ମିଳିଥିଲା, ମୁଖ୍ୟତ g ଗିଲ୍ ସିମ୍ବୋନିଟ୍ସ, ସଲଫୋଟ୍ରୋଫିକ୍ ସିମ୍ବୋନିଟ୍ସ ଏବଂ ଗିଲ୍ ସିମ୍ବୋନିଟ୍ସ ସୋଲେମିଆ ଭେଲୁମ୍ (ଚିତ୍ର 5) ରୁ ମିଳିଥିଲା ​​|
ପ୍ରକାର ସ୍ତରରେ ଆପେକ୍ଷିକ ପ୍ରଚୁରତା |ବି ଦୁଇଟି ମୁଖ୍ୟ ଫାଇଲାର ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ବିବିଧତା (ଫର୍ମିକ୍ୟୁଟ୍ସ ଏବଂ ପ୍ରୋଟୋବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ) |DdPCR C Vibrio spp ର ପ୍ରତିନିଧୀ ବିସ୍ତାର |ଉ: ତିନୋଟି ଆଟ୍ରା ହେମୋଲାଇମ୍ଫରେ 16S rRNA ଜିନ୍ (ନୀଳ) ର ଖଣ୍ଡ |
ସମୁଦାୟ 482 ସଂଗୃହିତ କଣ୍ଟିଗ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |ମେଟେଜେନୋମିକ୍ କଣ୍ଟିଗ୍ ଟିପ୍ପଣୀ (ପ୍ରୋକାରିଓଟ୍ସ ଏବଂ ଇଉକାରିଓଟ୍ସ) ର ଟ୍ୟାକ୍ସୋନୋମିକ୍ ବିତରଣର ସାଧାରଣ ପ୍ରୋଫାଇଲ୍ |B ବ୍ଲାଷ୍ଟେନ୍ ଏବଂ ବ୍ଲାଷ୍ଟକ୍ସ ଦ୍ୱାରା ଚିହ୍ନିତ ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ବିସ୍ତୃତ ବଣ୍ଟନ |
କ୍ରାକେନ୍ 2 ବିଶ୍ଳେଷଣରେ ଏହା ମଧ୍ୟ ଦର୍ଶାଯାଇଛି ଯେ ମସେଲ ccfDNA ରେ ଆର୍ଚିଆଲ୍ ଡିଏନ୍ଏ ଖଣ୍ଡ ଅଛି, ଯେଉଁଥିରେ ଇଉରିଆଚୋଟା (65%), କ୍ରେନାର୍କୋଟା (24%), ଏବଂ ଥ ur ରମାର୍କୋଟା (11%) (ଚିତ୍ର 6a) ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ |ପୂର୍ବରୁ କାଲିଫର୍ନିଆର ମସେଲର ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ସମ୍ପ୍ରଦାୟରେ ମିଳୁଥିବା ଇଉରିଚୋଟା ଏବଂ କ୍ରେନାର୍କୋଟା ଠାରୁ ଉତ୍ପନ୍ନ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଉପସ୍ଥିତି ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ ନୁହେଁ |ଯଦିଓ ଇଉରିଚୋଟା ପ୍ରାୟତ extr ଚରମ ଅବସ୍ଥା ସହିତ ଜଡିତ, ବର୍ତ୍ତମାନ ଏହା ସ୍ recognized ୀକୃତ ହୋଇଛି ଯେ ସାମୁଦ୍ରିକ କ୍ରାୟୋଜେନିକ୍ ପରିବେଶରେ ଉଭୟ ଇଉରିଚୋଟା ଏବଂ କ୍ରେନାର୍କୋଟା ସବୁଠାରୁ ସାଧାରଣ ପ୍ରୋକାରିଓଟ୍ ମଧ୍ୟରେ ଅଛନ୍ତି [43, 44] |ମର୍ସେଲରେ ମିଥାନୋଜେନିକ୍ ମାଇକ୍ରୋଅର୍ଗାନ୍ସର ଉପସ୍ଥିତି ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ ନୁହେଁ, କାରଣ କିର୍ଗୁଏଲେନ୍ ମାଳଭୂମିରେ ତଳ ଲିକରୁ ବ୍ୟାପକ ମିଥେନ ଲିକ୍ ହେବାର ସୂଚନା ଏବଂ କେର୍ଗୁଏଲେନ୍ ଦ୍ୱୀପପୁଞ୍ଜର ସମ୍ଭାବ୍ୟ ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ମିଥେନ ଉତ୍ପାଦନ [46] କୁ ଦେଖି ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ ନୁହେଁ।
ଆମର ଧ୍ୟାନ ତା’ପରେ DNA ଜୀବାଣୁରୁ ପଠନକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ ହେଲା |ଆମର ଉତ୍ତମ ଜ୍ଞାନ ପାଇଁ, ଏହା ହେଉଛି ମସେଲର ଜୀବାଣୁ ବିଷୟବସ୍ତୁର ପ୍ରଥମ ଅଫ୍ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଅଧ୍ୟୟନ |ଆଶା କରାଯାଉଥିବା ପରି, ଆମେ ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆଫେଜ୍ (କାଉଡୋଭିରାଲସ୍) ର DNA ଖଣ୍ଡ ପାଇଲୁ (ଚିତ୍ର 6b) |ଅବଶ୍ୟ, ସବୁଠାରୁ ସାଧାରଣ ଭାଇରାଲ୍ ଡିଏନ୍ଏ ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓସାଇଟୋଭାଇରସ୍ ର ଏକ ଫାଇଲମ୍ ରୁ ଆସିଥାଏ, ଯାହା ପରମାଣୁ ସାଇଟୋପ୍ଲାଜାମିକ୍ ବଡ DNA ଜୀବାଣୁ (NCLDV) ଭାବରେ ମଧ୍ୟ ଜଣାଶୁଣା, ଯେଉଁଥିରେ କ virus ଣସି ଜୀବାଣୁଙ୍କର ବୃହତ୍ତମ ଜିନୋମ ଥାଏ |ଏହି ଫାଇଲମ୍ ମଧ୍ୟରେ, ଅଧିକାଂଶ ଡିଏନ୍ଏ କ୍ରମଗୁଡିକ ମିମିମିଡୋଭିରିଡା (58%) ଏବଂ ପକ୍ସଭିରିଡା (21%) ପରିବାରର ଅଟେ, ଯାହାର ପ୍ରାକୃତିକ ହୋଷ୍ଟରେ ମେରୁଦଣ୍ଡ ଏବଂ ଆର୍ଥ୍ରୋପୋଡ୍ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ, ଏହି DNA କ୍ରମର ଅଳ୍ପ ଅଂଶ ଜଣାଶୁଣା ଭାଇରୋଲୋଜିକାଲ୍ ଆଲଗା ସହିତ ଜଡିତ |ସାମୁଦ୍ରିକ ଇଉକାରିଓଟିକ୍ ଆଲଗାକୁ ସଂକ୍ରମିତ କରେ |ପାଣ୍ଡୋରା ଜୀବାଣୁ, କ known ଣସି ଜଣାଶୁଣା ଭାଇରାଲ୍ ଜେନେରାର ବୃହତ୍ତମ ଜିନୋମ ଆକାର ବିଶିଷ୍ଟ ବିଶାଳ ଜୀବାଣୁରୁ ଏହି କ୍ରମଗୁଡିକ ମଧ୍ୟ ମିଳିଥିଲା ​​|କ Interest ତୁହଳର ବିଷୟ, ହେମୋଲାଇମ୍ଫ ccfDNA କ୍ରମ ଦ୍ determined ାରା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଉଥିବା ହୋଷ୍ଟଗୁଡିକର ପରିସର ଅପେକ୍ଷାକୃତ ବଡ଼ ଥିଲା (ଚିତ୍ର S3, ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ସୂଚନା) |ଏଥିରେ ଜୀବାଣୁ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ ଯାହାକି ବାକୁଲୋଭାଇରିଡା ଏବଂ ଇରିଡୋଭାଇରିଡା ଭଳି କୀଟପତଙ୍ଗକୁ ସଂକ୍ରମିତ କରିବା ସହିତ ଆମୋବା, ଆଲଗା ଏବଂ ମେରୁଦଣ୍ଡକୁ ସଂକ୍ରମିତ କରୁଥିବା ଜୀବାଣୁ ମଧ୍ୟ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରନ୍ତି।ଆମେ ମଧ୍ୟ ପିଥୋଭାଇରସ୍ ସାଇବେରିକମ୍ ଜିନୋମ ସହିତ ମେଳ ଖାଉଥିବା କ୍ରମଗୁଡିକ ପାଇଲୁ |ସାଇଟୋରିଆରେ ପିଟୋଭାଇରସ୍ (“ଜମ୍ବି ଭାଇରସ୍” ଭାବରେ ମଧ୍ୟ ଜଣାଶୁଣା) ପ୍ରଥମେ 30,000 ବର୍ଷ ପୁରୁଣା ପର୍ମାଫ୍ରୋଷ୍ଟରୁ ବିଚ୍ଛିନ୍ନ ହୋଇଥିଲା |ଏହିପରି, ଆମର ଫଳାଫଳଗୁଡିକ ପୂର୍ବ ରିପୋର୍ଟଗୁଡିକ ସହିତ ସମାନ ଅଟେ ଯାହା ଦର୍ଶାଉଛି ଯେ ଏହି ସମସ୍ତ ଜୀବାଣୁ ବିଲୁପ୍ତ ହୋଇ ନାହାଁନ୍ତି [48] ଏବଂ ଏହି ଜୀବାଣୁ ସୁଦୂର ସବାର୍କଟିକ୍ ସାମୁଦ୍ରିକ ଇକୋସିଷ୍ଟମରେ ଉପସ୍ଥିତ ଥାଇପାରନ୍ତି |
ଶେଷରେ, ଆମେ ଅନ୍ୟ ବହୁମୁଖୀ ପ୍ରାଣୀମାନଙ୍କଠାରୁ DNA ଖଣ୍ଡ ପାଇପାରିବା କି ନାହିଁ ଦେଖିବା ପାଇଁ ପରୀକ୍ଷା କରିଥିଲୁ |BLASTN ଏବଂ BLASTX ଦ୍ୱାରା nt, nr ଏବଂ RefSeq ଲାଇବ୍ରେରୀ (ଜେନୋମିକ୍ ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନ୍) ସହିତ ସମୁଦାୟ 482 ବିଦେଶୀ କଣ୍ଟିଗ୍ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଥିଲା |ଆମର ଫଳାଫଳ ଦର୍ଶାଏ ଯେ ମଲ୍ଟିସେଲୁଲାର୍ ପ୍ରାଣୀମାନଙ୍କର ccfDNA ର ବିଦେଶୀ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ମଧ୍ୟରେ ଅସ୍ଥି ହାଡର DNA ପ୍ରାଧାନ୍ୟ ଦେଇଥାଏ (ଚିତ୍ର 5) |କୀଟପତଙ୍ଗ ଏବଂ ଅନ୍ୟ ପ୍ରଜାତିର DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ମଧ୍ୟ ମିଳିଛି |ଡିଏନ୍ଏ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଏକ ଅପେକ୍ଷାକୃତ ବୃହତ ଅଂଶ ଚିହ୍ନଟ ହୋଇପାରି ନାହିଁ, ସମ୍ଭବତ ter ପୃଥିବୀ ପ୍ରଜାତି ତୁଳନାରେ ଜେନୋମିକ୍ ଡାଟାବେସରେ ବହୁ ସଂଖ୍ୟକ ସାମୁଦ୍ରିକ ପ୍ରଜାତିର ଅଳ୍ପ ଉପସ୍ଥାପନା ହେତୁ [49] |
ବର୍ତ୍ତମାନର କାଗଜରେ, ଆମେ ମସେଲରେ LB ଧାରଣା ପ୍ରୟୋଗ କରୁ, ଯୁକ୍ତି କରୁଛୁ ଯେ ହେମୋଲାଇମ୍ଫ ccfDNA ସଟ କ୍ରମ ସାମୁଦ୍ରିକ ଉପକୂଳ ଇକୋସିଷ୍ଟମର ଗଠନ ବିଷୟରେ ଅନ୍ତର୍ନିହିତ ସୂଚନା ଦେଇପାରେ |ବିଶେଷ ଭାବରେ, ଆମେ ଜାଣିଲୁ ଯେ 1) ମସେଲ ହେମୋଲାଇମ୍ଫରେ ଅପେକ୍ଷାକୃତ ବଡ଼ (~ 1-5 kb) ର DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ଅପେକ୍ଷାକୃତ ଅଧିକ ଏକାଗ୍ରତା (ମାଇକ୍ରୋଗ୍ରାମ୍ ସ୍ତର) ଥାଏ |2) ଏହି DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ଉଭୟ ସ୍ independent ାଧୀନ ଏବଂ ଅଣ-ସ୍ independent ାଧୀନ 3) ଏହି DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ବିଦେଶୀ ଉତ୍ସ ମଧ୍ୟରେ ଆମେ ଜୀବାଣୁ, ପ୍ରତ୍ନତତ୍ତ୍ୱ ଏବଂ ଭାଇରାଲ୍ DNA, ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ବହୁମୁଖୀ ପ୍ରାଣୀମାନଙ୍କର DNA ପାଇଲୁ;4) ହେମୋଲାଇମ୍ଫରେ ଏହି ବିଦେଶୀ ccfDNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଜମା ଶୀଘ୍ର ଘଟେ ଏବଂ ମସେଲର ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ଫିଲ୍ଟର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପରେ ସହାୟକ ହୁଏ |ପରିଶେଷରେ, ଆମର ଅଧ୍ୟୟନ ଦର୍ଶାଏ ଯେ LB ର ଧାରଣା, ଯାହା ଏପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ମୁଖ୍ୟତ bi ବାୟୋମେଡିସିନ୍ କ୍ଷେତ୍ରରେ ପ୍ରୟୋଗ ହୋଇଛି, ଏକ ସମୃଦ୍ଧ କିନ୍ତୁ ଅନ୍ୱେଷିତ ଜ୍ଞାନର ଉତ୍ସକୁ ଏନକୋଡ୍ କରେ ଯାହା ସେଣ୍ଟିନେଲ ପ୍ରଜାତି ଏବଂ ସେମାନଙ୍କ ପରିବେଶ ମଧ୍ୟରେ ପାରସ୍ପରିକ ସମ୍ପର୍କକୁ ଭଲ ଭାବରେ ବୁ understand ିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇପାରିବ |
ପ୍ରାଇମେଟସ୍ ବ୍ୟତୀତ, ମୂଷା, କୁକୁର, ବିଲେଇ ଏବଂ ଘୋଡା ସମେତ ସ୍ତନ୍ୟପାୟୀ ପ୍ରାଣୀମାନଙ୍କରେ ccfDNA ବିଚ୍ଛିନ୍ନତା ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଛି [50, 51, 52] |ତଥାପି, ଆମର ଜ୍ଞାନ ଅନୁଯାୟୀ, ଖୋଲା ସର୍କୁଲାର ସିଷ୍ଟମ ସହିତ ସାମୁଦ୍ରିକ ପ୍ରଜାତିରେ ccfDNA ର ଚିହ୍ନଟ ଏବଂ କ୍ରମକୁ ରିପୋର୍ଟ କରିବାରେ ଆମର ଅଧ୍ୟୟନ ହେଉଛି ପ୍ରଥମ |ଏହି ଆନାଟୋମିକାଲ୍ ବ feature ଶିଷ୍ଟ୍ୟ ଏବଂ ମସେଲଗୁଡିକର ଫିଲ୍ଟର କ୍ଷମତା, ଅନ୍ତତ least ପକ୍ଷେ, ଅନ୍ୟ ପ୍ରଜାତି ତୁଳନାରେ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ବିଭିନ୍ନ ଆକାର ବ characteristics ଶିଷ୍ଟ୍ୟ ବର୍ଣ୍ଣନା କରିପାରନ୍ତି |ମଣିଷମାନଙ୍କଠାରେ, ରକ୍ତରେ ବୁଲୁଥିବା ଅଧିକାଂଶ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ହେଉଛି ଛୋଟ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ 150 ରୁ 200 ବିପି ଆକାରରେ |ସର୍ବାଧିକ 167 bp [34, 53] ସହିତ |ଡିଏନ୍ଏ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଏକ ଛୋଟ କିନ୍ତୁ ମହତ୍ portion ପୂର୍ଣ୍ଣ ଅଂଶ 300 ରୁ 500 bp ଆକାରରେ ଏବଂ ପ୍ରାୟ 5% 900 bp ରୁ ଅଧିକ ଅଟେ |[54]ଏହି ଆକାର ବଣ୍ଟନର କାରଣ ହେଉଛି ପ୍ଲାଜାମାରେ ccfDNA ର ମୁଖ୍ୟ ଉତ୍ସ କୋଷ ମୃତ୍ୟୁ ହେତୁ କିମ୍ବା ସୁସ୍ଥ ବ୍ୟକ୍ତିଙ୍କ ହେମାଟୋପିଏଟିକ୍ କୋଷର ନେକ୍ରୋସିସ୍ କାରଣରୁ କିମ୍ବା କର୍କଟ ରୋଗୀଙ୍କ ଟ୍ୟୁମର କୋଷର ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ କାରଣରୁ ଘଟିଥାଏ (ସର୍କୁଲାର୍ ଟ୍ୟୁମର୍ DNA ଭାବରେ ଜଣାଶୁଣା) |, ctDNA)ହେମୋଲାଇମ୍ଫ ccfDNA ର ଆକାର ବଣ୍ଟନ ଯାହା ଆମେ ମସେଲରେ ପାଇଲୁ 1000 ରୁ 5000 bp ମଧ୍ୟରେ, ମସେଲ ccfDNA ର ଏକ ଭିନ୍ନ ଉତ୍ପତ୍ତି ଅଛି ବୋଲି ସୂଚିତ କରେ |ଏହା ଏକ ଯୁକ୍ତିଯୁକ୍ତ ଅନୁମାନ, ଯେହେତୁ ମସେଲଗୁଡିକର ଏକ ଅର୍ଦ୍ଧ ଖୋଲା ଭାସ୍କୁଲାର୍ ସିଷ୍ଟମ୍ ଅଛି ଏବଂ ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ଜେନୋମିକ୍ DNA ର ଅଧିକ ଏକାଗ୍ରତା ଥିବା ସାମୁଦ୍ରିକ ଜଳ ପରିବେଶରେ ବାସ କରନ୍ତି |ବାସ୍ତବରେ, ଏକ୍ସୋଜେନସ୍ ଡିଏନ୍ଏ ବ୍ୟବହାର କରି ଆମର ଲାବୋରେଟୋରୀ ପରୀକ୍ଷଣରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ମସେଲଗୁଡିକ ସମୁଦ୍ର ଜଳରେ DNA ଖଣ୍ଡ ସଂଗ୍ରହ କରନ୍ତି, ଅନ୍ତତ least ପକ୍ଷେ କିଛି ଘଣ୍ଟା ପରେ ସେଲ୍ୟୁଲାର୍ ଅପ୍ଟେକ୍ ଏବଂ / କିମ୍ବା ମୁକ୍ତ ଏବଂ / କିମ୍ବା ବିଭିନ୍ନ ସଂସ୍ଥାରେ ଗଚ୍ଛିତ ହେବା ପରେ ସେଗୁଡିକ ଖରାପ ହୋଇଯାଏ |କୋଷଗୁଡ଼ିକର ବିରଳତାକୁ ଦୃଷ୍ଟିରେ ରଖି (ଉଭୟ ପ୍ରୋକାରିଓଟିକ୍ ଏବଂ ଇଉକାରିଓଟିକ୍), ଇଣ୍ଟ୍ରାଭାଲଭୁଲାର କମ୍ପାର୍ଟମେଣ୍ଟର ବ୍ୟବହାର ସ୍ c ୟଂ ଉତ୍ସରୁ ତଥା ବିଦେଶୀ ଉତ୍ସରୁ ccfDNA ପରିମାଣକୁ ହ୍ରାସ କରିବ |ବିଭାଲଭ୍ ଅନ୍ତର୍ନିହିତ ରୋଗ ପ୍ରତିରୋଧକ ଶକ୍ତି ଏବଂ ବହୁ ସଂଖ୍ୟକ ଫାଗୋସାଇଟ୍ସକୁ ବିଚାରକୁ ନେଇ, ଆମେ ଆହୁରି ଅନୁମାନ କରିଛୁ ଯେ ବିଦେଶୀ ccfDNA ମଧ୍ୟ ଫାଗୋସାଇଟ୍ ପ୍ରଚାର କରିବାରେ ସମୃଦ୍ଧ ଅଟେ ଯାହା ମାଇକ୍ରୋ ଅର୍ଗାନ୍ସ ଏବଂ / କିମ୍ବା ସେଲୁଲାର୍ ଆବର୍ଜନା ଖାଇବା ପରେ ବିଦେଶୀ DNA ସଂଗ୍ରହ କରିଥାଏ |ଏକତ୍ର ନିଆଗଲା, ଆମର ଫଳାଫଳ ଦର୍ଶାଏ ଯେ ବିଭାଲ୍ ହେମୋଲାଇମ୍ଫ୍ ccfDNA ହେଉଛି ମଲିକୁଲାର୍ ସୂଚନାର ଏକ ଅନନ୍ୟ ଭଣ୍ଡାର ଏବଂ ସେଣ୍ଟିନେଲ୍ ପ୍ରଜାତି ଭାବରେ ସେମାନଙ୍କର ସ୍ଥିତିକୁ ଦୃ ces କରେ |
ଆମର ତଥ୍ୟ ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ ଦ୍ ived ାରା ଉତ୍ପନ୍ନ ହେମୋଲାଇମ୍ଫ ccfDNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର କ୍ରମ ଏବଂ ବିଶ୍ଳେଷଣ ହୋଷ୍ଟ ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ ଫ୍ଲୋରା ଏବଂ ଆଖପାଖ ସାମୁଦ୍ରିକ ଇକୋସିଷ୍ଟମରେ ଉପସ୍ଥିତ ଜୀବାଣୁ ବିଷୟରେ ପ୍ରମୁଖ ସୂଚନା ପ୍ରଦାନ କରିପାରିବ |ଶଟ୍ ସିକ୍ୱେନ୍ସିଂ କ ques ଶଳଗୁଡ଼ିକ କମନ୍ସାଲ୍ ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ A. atra gill ର କ୍ରମକୁ ପ୍ରକାଶ କରିଛି ଯାହା ପାରମ୍ପାରିକ 16S rRNA ଚିହ୍ନଟ ପ୍ରଣାଳୀ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥାନ୍ତା, ଯଦି କିଛି ରେଫରେନ୍ସ ଲାଇବ୍ରେରୀ ପକ୍ଷପାତ ହେତୁ ବଞ୍ଚିତ ହୋଇଥାନ୍ତା |ବାସ୍ତବରେ, କେର୍ଗୁଏଲେନରେ ସମାନ ମସେଲ ସ୍ତରରେ M. platensis ରୁ ସଂଗୃହିତ LB ତଥ୍ୟର ବ୍ୟବହାର ଦର୍ଶାଇଲା ଯେ ଗିଲ୍ ସହ ଜଡିତ ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ ସିମ୍ବୋନିଟ୍ ର ଗଠନ ଉଭୟ ମସେଲ ପ୍ରଜାତି ପାଇଁ ସମାନ ଥିଲା (ଚିତ୍ର S4, ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ସୂଚନା) |ଦୁଇଟି ଜେନେଟିକ୍ ଭିନ୍ନ ଭିନ୍ନ ମସେଲର ଏହି ସମାନତା କେର୍ଗୁଏଲେନ୍ ର ଶୀତ, ଗନ୍ଧକ ଏବଂ ଆଗ୍ନେୟଗିରି ଜମାଗୁଡିକରେ ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ ସମ୍ପ୍ରଦାୟର ଗଠନକୁ ପ୍ରତିଫଳିତ କରିପାରେ [55, 56, 57, 58] |ପୋର୍ଟ-ଅ-ଫ୍ରାନ୍ସ ଉପକୂଳ ପରି ଜ ot ବବିରୋଧିତ ଉପକୂଳ ଅଞ୍ଚଳରୁ ମୂଷା ଅମଳ କରିବା ସମୟରେ ଉଚ୍ଚ ସ୍ତରର ସଲଫର୍ ହ୍ରାସ କରୁଥିବା ଅଣୁଜୀବଗୁଡିକ ଭଲ ଭାବରେ ବର୍ଣ୍ଣନା କରାଯାଇଛି |ଅନ୍ୟ ଏକ ସମ୍ଭାବନା ହେଉଛି, ଭୂସମାନ୍ତର ସଂକ୍ରମଣ ଦ୍ୱାରା କମନ୍ସାଲ୍ ମସେଲ ଫ୍ଲୋରା ପ୍ରଭାବିତ ହୋଇପାରେ |ସାମୁଦ୍ରିକ ପରିବେଶ, ସାମୁଦ୍ରିକ ପୃଷ୍ଠ ଏବଂ ମସେଲରେ ସିମ୍ବିବିଓଟିକ୍ ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆର ଗଠନ ମଧ୍ୟରେ ସମ୍ପର୍କ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବାକୁ ଅଧିକ ଅନୁସନ୍ଧାନ ଆବଶ୍ୟକ |ଏହି ଅଧ୍ୟୟନଗୁଡିକ ବର୍ତ୍ତମାନ ଚାଲିଛି |
ହେମୋଲାଇମ୍ଫ ccfDNA ର ଦ length ର୍ଘ୍ୟ ଏବଂ ଏକାଗ୍ରତା, ଏହାର ଶୁଦ୍ଧତାର ସହଜତା, ଏବଂ ଦ୍ରୁତ ବନ୍ଧୁକ କ୍ରମକୁ ଅନୁମତି ଦେବା ପାଇଁ ଉଚ୍ଚ ଗୁଣ ହେଉଛି ସାମୁଦ୍ରିକ ଉପକୂଳ ଇକୋସିଷ୍ଟମରେ ଜ odi ବ ବିବିଧତାକୁ ଆକଳନ କରିବା ପାଇଁ ମସେଲ ccfDNA ବ୍ୟବହାର କରିବାର ଅନେକ ସୁବିଧା |ପ୍ରଦତ୍ତ ଇକୋସିଷ୍ଟମରେ ଭାଇରାଲ୍ ସମ୍ପ୍ରଦାୟ (ଭାଇରୋମ୍) କୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ କରିବା ପାଇଁ ଏହି ପଦ୍ଧତି ବିଶେଷ ଭାବରେ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ [62, 63] |ଜୀବାଣୁ, ପ୍ରତ୍ନତତ୍ତ୍ୱ ଏବଂ ଇଉକାରିଓଟ୍ ପରି, ଭାଇରାଲ୍ ଜେନୋମରେ ଫାଇଲୋଜେନେଟିକ୍ ସଂରକ୍ଷିତ ଜିନ୍ ନାହିଁ ଯେପରିକି 16S କ୍ରମ |ଆମର ଫଳାଫଳ ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ ସୂଚକ ପ୍ରଜାତିରୁ ତରଳ ବାୟୋପସି ଯେପରିକି ମସେଲ ଅପେକ୍ଷାକୃତ ଅଧିକ ସଂଖ୍ୟକ ccfDNA ଜୀବାଣୁ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇପାରେ ଯାହା ସାଧାରଣତ coast ଉପକୂଳ ସାମୁଦ୍ରିକ ଇକୋସିଷ୍ଟମରେ ବାସ କରୁଥିବା ହୋଷ୍ଟମାନଙ୍କୁ ସଂକ୍ରମିତ କରିଥାଏ |ଏଥିରେ ପ୍ରୋଟୋଜୋଆ, ଆର୍ଥ୍ରୋପୋଡ୍, କୀଟପତଙ୍ଗ, ଉଦ୍ଭିଦ ଏବଂ ଜୀବାଣୁ ଜୀବାଣୁ ସଂକ୍ରମିତ ହେଉଥିବା ଜୀବାଣୁ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ (ଯଥା, ଜୀବାଣୁ)।ସମାନ ବଣ୍ଟନ ମିଳିଲା ଯେତେବେଳେ ଆମେ କେର୍ଗୁଏଲେନ୍ (ଟେବୁଲ୍ S2, ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ସୂଚନା) ରେ ସମାନ ମସେଲ ସ୍ତରରେ ସଂଗୃହିତ ନୀଳ ମସେଲର ହେମୋଲାଇମ୍ଫ୍ ccfDNA ଭାଇରୋମ୍ (M. platensis) ପରୀକ୍ଷା କରିଥିଲୁ |CcfDNA ର ଶଟ୍ଗୁନ୍ କ୍ରମ ପ୍ରକୃତରେ ମାନବ କିମ୍ବା ଅନ୍ୟ ପ୍ରଜାତିର ଜୀବାଣୁ ଅଧ୍ୟୟନରେ ଗତି ବ a ଼ାଇବାରେ ଏକ ନୂତନ ପନ୍ଥା ଅଟେ [21, 37, 64] |ଡବଲ୍-ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡେଡ୍ ଡିଏନ୍ଏ ଜୀବାଣୁ ଅଧ୍ୟୟନ ପାଇଁ ଏହି ପଦ୍ଧତି ବିଶେଷ ଉପଯୋଗୀ, ଯେହେତୁ ବାଲ୍ଟିମୋର ବହୁ ବିବିଧ ଏବଂ ବ୍ୟାପକ ଶ୍ରେଣୀର ଜୀବାଣୁକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ all କରୁଥିବା ସମସ୍ତ ଡବଲ୍ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡେଡ୍ DNA ଜୀବାଣୁ ମଧ୍ୟରେ କ single ଣସି ଜିନ୍ ସଂରକ୍ଷିତ ହୋଇନଥାଏ |ଯଦିଓ ଏହି ଜୀବାଣୁଗୁଡ଼ିକ ମଧ୍ୟରୁ ଅଧିକାଂଶ ଅଣସଂଗଠିତ ହୋଇ ରହିଛନ୍ତି ଏବଂ ଭାଇରାଲ୍ ଜଗତର ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଅଜ୍ଞାତ ଅଂଶରୁ ଜୀବାଣୁ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରିପାରନ୍ତି, [66], ଆମେ ଜାଣିଲୁ ଯେ ମସେଲର ଏ।ସମାନ ଭାବରେ (ଚିତ୍ର S3, ଅତିରିକ୍ତ ସୂଚନା ଦେଖନ୍ତୁ) |ଏହି ସମାନତା ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ ନୁହେଁ, କାରଣ ଏହା ପରିବେଶରେ ଉପସ୍ଥିତ ଡିଏନ୍ଏର ଅପଟେକ୍ଟରେ ଚୟନର ଅଭାବକୁ ପ୍ରତିଫଳିତ କରିପାରେ |ଶୁଦ୍ଧ RNA ବ୍ୟବହାର କରି ଭବିଷ୍ୟତ ଅଧ୍ୟୟନଗୁଡିକ ବର୍ତ୍ତମାନ RNA ଜୀବାଣୁକୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ କରିବା ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ |
ଆମର ଅଧ୍ୟୟନରେ, ଆମେ କୋୱାରସ୍କି ଏବଂ ସହକର୍ମୀମାନଙ୍କ କାର୍ଯ୍ୟରୁ ଅନୁକରଣ କରାଯାଇଥିବା ଏକ ଅତ୍ୟନ୍ତ କଠିନ ପାଇପଲାଇନ ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲୁ, ଯିଏ ଦେଶୀ ccfDNA ର ସମାବେଶ ପୂର୍ବରୁ ଏବଂ ପରେ ପୁଲଡ୍ ପ read ଼ା ଏବଂ କଣ୍ଟିଗ୍ସର ଦୁଇ-ଷ୍ଟେପ୍ ଡିଲିଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲେ, ଫଳସ୍ୱରୂପ ବହୁ ସଂଖ୍ୟାରେ ମ୍ୟାପ୍ ହୋଇନଥିଲା |ତେଣୁ, ଆମେ ଏଡ଼ାଇ ଦେଇ ପାରିବୁ ନାହିଁ ଯେ ଏହି ଅନ୍-ମ୍ୟାପ୍ ହୋଇଥିବା ପ read ଼ାଗୁଡ଼ିକ ମଧ୍ୟରୁ କେତେକଙ୍କର ନିଜସ୍ୱ ଉତ୍ପତ୍ତି ଥାଇପାରେ, ମୁଖ୍ୟତ because ଏହି ମସେଲ ପ୍ରଜାତିଗୁଡିକ ପାଇଁ ଆମର ଏକ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନୋମ ନାହିଁ |ଆମେ ମଧ୍ୟ ଏହି ପାଇପଲାଇନ ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲୁ କାରଣ ଆମେ ସ୍ self ୟଂ ଏବଂ ଅଣ-ସେଲ୍ଫ ପଠନ ଏବଂ ଇଲୁମିନା ମିସେକ PE75 ଦ୍ ated ାରା ଉତ୍ପନ୍ନ ପଠନ ଦ s ର୍ଘ୍ୟ ମଧ୍ୟରେ ଥିବା ଚିମେରା ବିଷୟରେ ଚିନ୍ତା କରୁଥିଲୁ |ଅଧିକାଂଶ ଅବିଭାଜିତ ପ ings ଼ିବାର ଅନ୍ୟ ଏକ କାରଣ ହେଉଛି ସାମୁଦ୍ରିକ ମାଇକ୍ରୋବସ୍, ବିଶେଷକରି କେର୍ଗୁଏଲେନ୍ ଭଳି ଦୁର୍ଗମ ଅଞ୍ଚଳରେ, ଟିପ୍ପଣୀ କରାଯାଇ ନାହିଁ |ମାନବ ccfDNA ପରି ccfDNA ଖଣ୍ଡ ଦ s ର୍ଘ୍ୟ ଅନୁମାନ କରି ଆମେ Illumina MiSeq PE75 ବ୍ୟବହାର କଲୁ |ଭବିଷ୍ୟତର ଅଧ୍ୟୟନ ପାଇଁ, ଆମର ଫଳାଫଳକୁ ଦର୍ଶାଉଛି ଯେ ହେମୋଲାଇମ୍ଫ୍ ccfDNA ମଣିଷ ଏବଂ / କିମ୍ବା ସ୍ତନ୍ୟପାୟୀ ପ୍ରାଣୀମାନଙ୍କ ଅପେକ୍ଷା ଅଧିକ ପ read ିଛି, ଆମେ ଅଧିକ ccfDNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ପାଇଁ ଅଧିକ ଉପଯୁକ୍ତ ଏକ ସିକ୍ୱେନ୍ସିଂ ପ୍ଲାଟଫର୍ମ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ସୁପାରିଶ କରୁ |ଏହି ଅଭ୍ୟାସ ଗଭୀର ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ଅଧିକ ସୂଚକ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ଅଧିକ ସହଜ କରିବ |ସମ୍ପ୍ରତି ଅନୁପଲବ୍ଧ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ A. atra ଆଣବିକ ଜିନୋମ କ୍ରମ ପାଇବା ମଧ୍ୟ ccfDNA ର ସ୍ self ୟଂ ଏବଂ ଅଣ-ଉତ୍ସ ଉତ୍ସରୁ ଭେଦଭାବକୁ ବହୁ ସହଜ କରିଥାଏ |ଆମର ଅନୁସନ୍ଧାନ ତରଳ ବାୟୋପସିର ଧାରଣାକୁ ମସେଲରେ ପ୍ରୟୋଗ କରିବାର ସମ୍ଭାବନା ଉପରେ ଧ୍ୟାନ ଦେଇଥିବାରୁ ଆମେ ଆଶା କରୁଛୁ ଯେ ଏହି ଧାରଣା ଭବିଷ୍ୟତରେ ଅନୁସନ୍ଧାନରେ ବ୍ୟବହୃତ ହେଉଥିବାରୁ ମସେଲର ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ବିବିଧତା ଅଧ୍ୟୟନ ପାଇଁ ଏହି ପଦ୍ଧତିର ସମ୍ଭାବନା ବ to ାଇବା ପାଇଁ ନୂତନ ଉପକରଣ ଏବଂ ପାଇପଲାଇନ ବିକଶିତ ହେବ |ସାମୁଦ୍ରିକ ଇକୋସିଷ୍ଟମ୍ |
ଏକ ଅଣ-ଆକ୍ରମଣକାରୀ କ୍ଲିନିକାଲ୍ ବାୟୋମାର୍କର୍ ଭାବରେ, ccfDNA ର ଉଚ୍ଚ ମାନବ ପ୍ଲାଜମା ସ୍ତର ବିଭିନ୍ନ ରୋଗ, ଟିସୁ ନଷ୍ଟ ଏବଂ ଚାପ ଅବସ୍ଥା ସହିତ ଜଡିତ [67,68,69] |ଏହି ବୃଦ୍ଧି ଟିସୁ ନଷ୍ଟ ହେବା ପରେ ଏହାର ନିଜସ୍ୱ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ମୁକ୍ତି ସହିତ ଜଡିତ |ତୀବ୍ର ଉତ୍ତାପ ଚାପ ବ୍ୟବହାର କରି ଆମେ ଏହି ସମସ୍ୟାର ସମାଧାନ କରିଥିଲୁ, ଯେଉଁଥିରେ ମୂଷାମାନେ 30 ° C ତାପମାତ୍ରାରେ ସଂକ୍ଷେପରେ ସଂସ୍ପର୍ଶରେ ଆସିଥିଲେ |ତିନୋଟି ସ୍ independent ାଧୀନ ପରୀକ୍ଷଣରେ ଆମେ ତିନୋଟି ଭିନ୍ନ ପ୍ରକାରର ମସେଲ ଉପରେ ଏହି ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିଥିଲୁ |ତଥାପି, ତୀବ୍ର ଉତ୍ତାପ ଚାପ ପରେ ccfDNA ସ୍ତରରେ ଆମେ କ change ଣସି ପରିବର୍ତ୍ତନ ପାଇଲୁ ନାହିଁ (ଚିତ୍ର S5, ଅତିରିକ୍ତ ସୂଚନା ଦେଖନ୍ତୁ) |ଅନ୍ତତ least ପକ୍ଷେ ଏହି ଆବିଷ୍କାର ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରିପାରେ ଯେ ମୂଷାମାନଙ୍କର ଏକ ଅର୍ଦ୍ଧ ଖୋଲା ରକ୍ତ ସଞ୍ଚାଳନ ପ୍ରଣାଳୀ ଅଛି ଏବଂ ସେମାନଙ୍କର ଉଚ୍ଚ ଫିଲ୍ଟର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ହେତୁ ବହୁ ପରିମାଣର ବିଦେଶୀ DNA ଜମା ହୋଇଥାଏ |ଅନ୍ୟ ପଟେ, ଅନେକ ମେରୁଦଣ୍ଡୀ ଜୀବଙ୍କ ପରି ମସେଲ, ଚାପ ଦ୍ uc ାରା ଉତ୍ପନ୍ନ ଟିସୁ ନଷ୍ଟ ପାଇଁ ଅଧିକ ପ୍ରତିରୋଧୀ ହୋଇପାରେ, ଯାହା ଦ୍ their ାରା ସେମାନଙ୍କର ହେମୋଲାଇମ୍ଫରେ ccfDNA ରିଲିଜ୍ ସୀମିତ ହୋଇପାରେ [70, 71] |
ଆଜି ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ, ଜଳଜୀବ ଇକୋସିଷ୍ଟମରେ ଜ odi ବ ବିବିଧତାର DNA ବିଶ୍ଳେଷଣ ମୁଖ୍ୟତ environmental ପରିବେଶ DNA (eDNA) ମେଟାବାର୍କୋଡିଂ ଉପରେ ଧ୍ୟାନ ଦେଇଛି |ତଥାପି, ଏହି ପଦ୍ଧତି ସାଧାରଣତ bi ଜ od ବ ବିବିଧତା ବିଶ୍ଳେଷଣରେ ସୀମିତ ଥାଏ ଯେତେବେଳେ ପ୍ରାଥମିକ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ |ଶଟ୍ଗୁନ୍ କ୍ରମର ବ୍ୟବହାର PCR ର ସୀମାବଦ୍ଧତା ଏବଂ ପ୍ରାଇମର୍ ସେଟ୍ ର ଦ୍ୱିପାକ୍ଷିକ ଚୟନକୁ ଅତିକ୍ରମ କରେ |ଏହିପରି, ଏକ ଅର୍ଥରେ, ଆମର ପଦ୍ଧତି ନିକଟରେ ବ୍ୟବହୃତ ହାଇ-ଥ୍ରୋପୁଟ eDNA ଶଟଗନ୍ ସିକ୍ୱେନ୍ସିଂ ପଦ୍ଧତିର ନିକଟତର, ଯାହା ଖଣ୍ଡବିଖଣ୍ଡିତ DNA କୁ ସିଧାସଳଖ କ୍ରମାନୁସାରେ ଏବଂ ପ୍ରାୟ ସମସ୍ତ ଜୀବକୁ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିବାରେ ସକ୍ଷମ [72, 73] |ତଥାପି, ସେଠାରେ ଅନେକ ମ fundamental ଳିକ ପ୍ରସଙ୍ଗ ଅଛି ଯାହାକି LB କୁ ମାନକ eDNA ପଦ୍ଧତିରୁ ପୃଥକ କରେ |ଅବଶ୍ୟ, eDNA ଏବଂ LB ମଧ୍ୟରେ ମୁଖ୍ୟ ପାର୍ଥକ୍ୟ ହେଉଛି ପ୍ରାକୃତିକ ଫିଲ୍ଟର ହୋଷ୍ଟଗୁଡିକର ବ୍ୟବହାର |EDNA ଅଧ୍ୟୟନ ପାଇଁ ପ୍ରାକୃତିକ ଫିଲ୍ଟର ଭାବରେ ସ୍ପଞ୍ଜ ଏବଂ ବିଭାଲ୍ (ଡ୍ରେସେନା ସ୍ପପି।) ପରି ସାମୁଦ୍ରିକ ପ୍ରଜାତିର ବ୍ୟବହାର ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଛି [74, 75] |ଅବଶ୍ୟ, ଡ୍ରାଇସେନାଙ୍କ ଅଧ୍ୟୟନରେ ଟିସୁ ବାୟୋପସି ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା ଯେଉଁଥିରୁ DNA ବାହାର କରାଯାଇଥିଲା |LB ରୁ ccfDNA ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ଟିସୁ ବାୟୋପସି, ବିଶେଷ ଏବଂ ବେଳେବେଳେ ମହଙ୍ଗା ଯନ୍ତ୍ରପାତି ଏବଂ eDNA କିମ୍ବା ଟିସୁ ବାୟୋପସି ସହିତ ଜଡିତ ଲଜିଷ୍ଟିକ୍ସ ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ ନାହିଁ |ବାସ୍ତବରେ, ଆମେ ନିକଟରେ ରିପୋର୍ଟ କରିଥିଲୁ ଯେ LB ରୁ ccfDNA କୁ ଶୀତଳ ଶୃଙ୍ଖଳା ବଜାୟ ନକରି FTA ସମର୍ଥନ ସହିତ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯାଇପାରିବ ଏବଂ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇପାରିବ, ଯାହା ଦୁର୍ଗମ ଅଞ୍ଚଳରେ ଗବେଷଣା ପାଇଁ ଏକ ପ୍ରମୁଖ ଆହ୍ .ାନ |ତରଳ ବାୟୋପସିରୁ ccfDNA ର ନିଷ୍କାସନ ମଧ୍ୟ ସରଳ ଏବଂ ବନ୍ଧୁକ କ୍ରମ ଏବଂ PCR ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ଉଚ୍ଚମାନର DNA ପ୍ରଦାନ କରିଥାଏ |EDNA ବିଶ୍ଳେଷଣ ସହିତ ଜଡିତ କିଛି ବ technical ଷୟିକ ସୀମାବଦ୍ଧତାକୁ ଦୃଷ୍ଟିରେ ରଖି ଏହା ଏକ ବଡ଼ ସୁବିଧା |ନମୁନା ପଦ୍ଧତିର ସରଳତା ଏବଂ କମ୍ ମୂଲ୍ୟ ମଧ୍ୟ ଦୀର୍ଘକାଳୀନ ମନିଟରିଂ ପ୍ରୋଗ୍ରାମ ପାଇଁ ବିଶେଷ ଉପଯୁକ୍ତ |ସେମାନଙ୍କର ଉଚ୍ଚ ଫିଲ୍ଟରିଂ କ୍ଷମତା ସହିତ, ବିଭାଲ୍ସର ଅନ୍ୟ ଏକ ଜଣାଶୁଣା ବ feature ଶିଷ୍ଟ୍ୟ ହେଉଛି ସେମାନଙ୍କ ଶ୍ us ାସର ରାସାୟନିକ ମ୍ୟୁକୋପଲିସାକାରାଇଡ୍ ରଚନା, ଯାହା ଜୀବାଣୁ ଅବଶୋଷଣକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରେ [78, 79] |ଜ bi ବ ବିବିଧତା ଏବଂ ପ୍ରଦତ୍ତ ଜଳଜୀବ ଇକୋସିଷ୍ଟମରେ ଜଳବାୟୁ ପରିବର୍ତ୍ତନର ପ୍ରଭାବକୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ କରିବା ପାଇଁ ଏହା ବିଭାଲ୍ଗୁଡ଼ିକୁ ଏକ ଆଦର୍ଶ ପ୍ରାକୃତିକ ଫିଲ୍ଟର୍ କରିଥାଏ |ଯଦିଓ ହୋଷ୍ଟ-ପ୍ରାପ୍ତ ଡିଏନ୍ଏ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଉପସ୍ଥିତି eDNA ତୁଳନାରେ ପଦ୍ଧତିର ଏକ ସୀମିତତା ଭାବରେ ଦେଖାଯାଇପାରେ, ସ୍ୱାସ୍ଥ୍ୟ ଅଧ୍ୟୟନ ପାଇଁ ଉପଲବ୍ଧ ବିପୁଳ ପରିମାଣର ସୂଚନା ପାଇଁ eDNA ତୁଳନାରେ ଏହିପରି ଦେଶୀ ccfDNA ସହିତ ଜଡିତ ମୂଲ୍ୟ ଏକାସାଙ୍ଗରେ ବୁ able ାପଡେ |ଅଫସେଟ ହୋଷ୍ଟଏଥିରେ ହୋଷ୍ଟ ହୋଷ୍ଟର ଜିନୋମରେ ସଂଯୁକ୍ତ ଭାଇରାଲ୍ କ୍ରମର ଉପସ୍ଥିତି ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ |ବିଭାଲ୍ସରେ ଭୂସମାନ୍ତର ଭାବରେ ସଂକ୍ରମିତ ଲ୍ୟୁକେମିକ୍ ରେଟ୍ରୋଭାଇରସ୍ ର ଉପସ୍ଥିତିକୁ ଦୃଷ୍ଟିରେ ରଖି ଏହା ମୂଷାମାନଙ୍କ ପାଇଁ ବିଶେଷ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ | [80, 81]EDNA ଉପରେ LB ର ଅନ୍ୟ ଏକ ସୁବିଧା ହେଉଛି ଏହା ହେମୋଲାଇମ୍ଫରେ ରକ୍ତ କଣିକା ରକ୍ତ ସଞ୍ଚାରର ଫାଗୋସିଟିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ବ୍ୟବହାର କରିଥାଏ, ଯାହା ମାଇକ୍ରୋ ଅର୍ଗାନ୍ସ (ଏବଂ ସେମାନଙ୍କର ଜିନୋମ) କୁ ଜଡିତ କରିଥାଏ |ବିଭାଲୋଭରେ ରକ୍ତ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ମୁଖ୍ୟ କାର୍ଯ୍ୟ ହେଉଛି ଫାଗୋସିଟୋସିସ୍ |ଶେଷରେ, ଏହି ପଦ୍ଧତି ମସେଲର ଉଚ୍ଚ ଫିଲ୍ଟର କ୍ଷମତା (ସମୁଦ୍ର ଜଳର ହାରାହାରି 1.5 l / h) ଏବଂ ଦୁଇ ଦିନିଆ ସଞ୍ଚାରର ଲାଭ ଉଠାଏ, ଯାହା ସମୁଦ୍ର ଜଳର ବିଭିନ୍ନ ସ୍ତରର ମିଶ୍ରଣକୁ ବ increase ାଇଥାଏ, ଯାହା ହେଟେରୋଲୋଜିସ୍ eDNA ଧରିବାକୁ ଅନୁମତି ଦେଇଥାଏ |[83, 84]ଏହିପରି, ମସେଲର ପୁଷ୍ଟିକର, ଅର୍ଥନ, ତିକ ଏବଂ ପରିବେଶ ପ୍ରଭାବକୁ ଦୃଷ୍ଟିରେ ରଖି ମସେଲ ccfDNA ବିଶ୍ଳେଷଣ ଏକ ଆକର୍ଷଣୀୟ ଉପାୟ |ମଣିଷମାନଙ୍କଠାରୁ ସଂଗୃହିତ LB ର ବିଶ୍ଳେଷଣ ପରି, ଏହି ପଦ୍ଧତି ଏକ୍ସୋଜେନସ୍ ପଦାର୍ଥର ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ହୋଷ୍ଟ DNA ରେ ଜେନେଟିକ୍ ଏବଂ ଏପିଜେନେଟିକ୍ ପରିବର୍ତ୍ତନ ମାପିବାର ସମ୍ଭାବନା ମଧ୍ୟ ଖୋଲିଥାଏ |ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ନାନୋପୋର କ୍ରମ ବ୍ୟବହାର କରି ଦେଶୀ ccfDNA ରେ ଜେନୋମ-ୱାଇଡ୍ ମିଥାଇଲେସନ୍ ଆନାଲିସିସ୍ କରିବାକୁ ତୃତୀୟ ପି generation ଼ିର ସିକ୍ୱେନ୍ସିଂ ଟେକ୍ନୋଲୋଜି କଳ୍ପନା କରାଯାଇପାରେ |ଏହି ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ ସହଜ କରାଯିବା ଉଚିତ ଯେ ମସେଲ ccfDNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଦ length ର୍ଘ୍ୟ ଦୀର୍ଘ ପ read ଼ାଯାଇଥିବା ସିକ୍ୱେନ୍ସିଂ ପ୍ଲାଟଫର୍ମ ସହିତ ଆଦର୍ଶ ଭାବରେ ସୁସଙ୍ଗତ ଅଟେ ଯାହା ରାସାୟନିକ ରୂପାନ୍ତରର ଆବଶ୍ୟକତା ବିନା ଜେନୋମ-ୱାଇଡ୍ DNA ମିଥାଇଲେସନ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣକୁ ଅନୁମତି ଦେଇଥାଏ |ତେଣୁ, ଜଳବାୟୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କିମ୍ବା ପ୍ରଦୂଷକ ସଂସ୍ପର୍ଶରେ ଆସିବା ପରେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରୁଥିବା ଅନ୍ତର୍ନିହିତ ଯନ୍ତ୍ରକ into ଶଳ ବିଷୟରେ ଏହା ମୂଲ୍ୟବାନ ଜ୍ଞାନ ପ୍ରଦାନ କରିପାରିବ |ତଥାପି, LB ର ବ୍ୟବହାର ସୀମିତତା ବିନା ନୁହେଁ |କହିବା ବାହୁଲ୍ୟ, ଏହା ଇକୋସିଷ୍ଟମରେ ସୂଚକ ପ୍ରଜାତିର ଉପସ୍ଥିତି ଆବଶ୍ୟକ କରେ |ଉପରୋକ୍ତ ପରି, ପ୍ରଦତ୍ତ ଇକୋସିଷ୍ଟମର ଜ odi ବ ବିବିଧତାକୁ ଆକଳନ କରିବା ପାଇଁ LB ବ୍ୟବହାର କରିବା ମଧ୍ୟ ଏକ କଠୋର ବାୟୋ ଇନଫର୍ମାଟିକ୍ସ ପାଇପଲାଇନ ଆବଶ୍ୟକ କରେ ଯାହା ଉତ୍ସରୁ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଉପସ୍ଥିତିକୁ ଧ୍ୟାନରେ ରଖିଥାଏ |ଅନ୍ୟ ଏକ ପ୍ରମୁଖ ସମସ୍ୟା ହେଉଛି ସାମୁଦ୍ରିକ ପ୍ରଜାତି ପାଇଁ ରେଫରେନ୍ସ ଜେନୋମର ଉପଲବ୍ଧତା |ଆଶା କରାଯାଏ ଯେ ସାମୁଦ୍ରିକ ସ୍ତନ୍ୟପାୟୀ ଜେନୋମସ୍ ପ୍ରୋଜେକ୍ଟ ଏବଂ ନିକଟରେ ପ୍ରତିଷ୍ଠିତ Fish10k ପ୍ରକଳ୍ପ [88] ଭବିଷ୍ୟତରେ ଏହିପରି ବିଶ୍ଳେଷଣକୁ ସହଜ କରିବ |ସାମୁଦ୍ରିକ ଫିଲ୍ଟର-ଫିଡିଂ ଜୀବମାନଙ୍କ ପାଇଁ LB ଧାରଣାର ପ୍ରୟୋଗ ମଧ୍ୟ ସିକ୍ୱେନ୍ସିଂ ଟେକ୍ନୋଲୋଜିର ଅତ୍ୟାଧୁନିକ ଅଗ୍ରଗତି ସହିତ ସୁସଙ୍ଗତ ଅଟେ, ଯାହା ପରିବେଶ ଚାପର ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ସାମୁଦ୍ରିକ ବାସସ୍ଥାନର ସ୍ୱାସ୍ଥ୍ୟ ବିଷୟରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ସୂଚନା ପ୍ରଦାନ କରିବା ପାଇଁ ମଲ୍ଟି-ଓମ୍ ବାୟୋମାର୍କର ବିକାଶ ପାଇଁ ଏହା ଉପଯୁକ୍ତ ଅଟେ |
ଜିନୋମ ସିକ୍ୱେନ୍ସିଂ ଡାଟା NCBI କ୍ରମ ପଠନ ଅଭିଲେଖାଗାରରେ ଜମା କରାଯାଇଛି https://www.ncbi.nlm.nih.gov/sra/SRR8924808 ବାୟୋପ୍ରୋଜେକ୍ଟସ୍ SRR8924808 ଅଧୀନରେ |
ବ୍ରିଆର୍ଲି ଏସ୍, କିଙ୍ଗସଫୋର୍ଡ ଏମଜେ ସାମୁଦ୍ରିକ ଜୀବନ ଏବଂ ଇକୋସିଷ୍ଟମ ଉପରେ ଜଳବାୟୁ ପରିବର୍ତ୍ତନର ପ୍ରଭାବ |କୋଲ୍ ବାୟୋଲୋଜି |2009;19: P602 - P614
ଜିସି ଇ, ମାନିଆ ଇ, ମଜାରିସ୍ ଏଡି, ଫ୍ରାସ୍କେଟ୍ଟି ଏସ୍, ଆଲମ୍ପାନିଡୋ ଭି, ବେଭିଲାକ୍ S ା ଏସ୍, ଇତ୍ୟାଦି |ଜଳବାୟୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଏବଂ ସାମୁଦ୍ରିକ ପରିବେଶ ଉପରେ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ସ୍ଥାନୀୟ ଚାପର ମିଳିତ ପ୍ରଭାବକୁ ବିଚାର କରନ୍ତୁ |ସାଧାରଣ ବ scientific ଜ୍ଞାନିକ ପରିବେଶ |2021; 755: 142564
କାରେଲା ଏଫ୍, ଆଣ୍ଟୁଏଫର୍ମୋ ଇ, ଫରିନା ଏସ୍, ସାଲାଟି ଏଫ୍, ମାଣ୍ଡାସ୍ ଡି, ପ୍ରାଦୋ ପି, ଇତ୍ୟାଦି |)ମାର୍ଚ୍ଚ ପ୍ରଥମ ବିଜ୍ଞାନ |2020; 7: 48
ସେରୋଣ୍ଟ ଏଲ୍, ନିକାଷ୍ଟ୍ରୋ CR, ଜାର୍ଡି ଜିଆଇ, ଗୋବର୍ଭିଲ୍ ଇ।ବ Scientific ଜ୍ଞାନିକ ରିପୋର୍ଟ 2019;9: 17498
ଫେ SB, Siepielski AM, Nussle S, Cervantes-Yoshida K, Hwan JL, Huber ER, et al।ପଶୁ ମୃତ୍ୟୁର ଆବୃତ୍ତି, କାରଣ ଏବଂ ପରିମାଣରେ ସାମ୍ପ୍ରତିକ ପରିବର୍ତ୍ତନ |ପ୍ରୋକ୍ ନାଟଲ୍ ଆକାଡ୍ ସାଇସ୍ ଯୁକ୍ତରାଷ୍ଟ୍ର |2015; 112: 1083-8
ସ୍କାରପା ଏଫ୍, ସାନ୍ନା ଡି, ଆଜେନା I, ମୁଗେଟ୍ଟି ଡି, ସେରୁଟି ଏଫ୍, ହୋସେନି ଏସ୍, ଇତ୍ୟାଦି |ଏକାଧିକ ଅଣ-ପ୍ରଜାତି-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପାଥୋଜେନ ହୁଏତ ପିନ୍ନା ନୋବିଲିସ୍ ର ବହୁ ମୃତ୍ୟୁ ଘଟାଇଥାଇପାରେ |ଜୀବନ2020; 10: 238
ବ୍ରାଡଲେ ଏମ୍, କାଉଟ୍ସ ଏସ୍, ଜେନକିନସ୍ ଇ, ଓ’ହାରା ଟିଏମ୍ |ଆର୍କଟିକ୍ ଜୁନୋଟିକ୍ ରୋଗ ଉପରେ ଜଳବାୟୁ ପରିବର୍ତ୍ତନର ସମ୍ଭାବ୍ୟ ପ୍ରଭାବ |ଇଣ୍ଟ ଜେ ସର୍କମ୍ପୋଲାର୍ ସ୍ୱାସ୍ଥ୍ୟ |2005;64: 468-77
ବିୟର ଜେ।, ଗ୍ରୀନ୍ ଏନଡବ୍ଲୁ, ବ୍ରୁକସ୍ ଏସ୍, ଆଲାନ୍ ଆଇଜେ, ରୁସ୍ ଏ, ଗୋମେଜ୍ ଟି।ଉପକୂଳ ପ୍ରଦୂଷଣ ନିରୀକ୍ଷଣରେ ସିଗନାଲ ଜୀବ ଭାବରେ ନୀଳ ମସେଲ (Mytilus edulis spp।): ଏକ ସମୀକ୍ଷା |ମାର୍ ପରିବେଶ Res 2017;130: 338-65
କର୍କଟ ଚିକିତ୍ସାରେ ସିରାଭେଗନା ଜି, ମାର୍ସୋନି ଏସ୍, ସାଇନା ଏସ୍, ବାର୍ଡେଲି ଏ। ତରଳ ବାୟୋପସିର ଏକୀକରଣ |ନାଟ୍ ରେଭ୍ କ୍ଲିନ୍ ଅଙ୍କୋଲ୍ |2017;14: 531–48
ୱାନ୍ ଜେସିଏମ୍, ମାସି ସି, ଗାର୍ସିଆ-କରବାଚୋ ଜେ, ମ ul ଲିଅର୍ ଏଫ୍, ବ୍ରେଣ୍ଟନ୍ ଜେଡି, କାଲଡାସ୍ ସି, ଇତ୍ୟାଦି |ତରଳ ବାୟୋପସି ପରିପକ୍ .ତା: ଟ୍ୟୁମର DNA କୁ ବଞ୍ଚିବାକୁ ଅନୁମତି ଦିଏ |ନାଟ୍ ରେଭ୍ କର୍କଟ |2017; 17: 223–38
ମାନବ ପ୍ଲାଜାରେ ମାଣ୍ଡେଲ ପି, ମେଟାଇସ୍ ପି ​​ନ୍ୟୁକ୍ଲିକ୍ ଏସିଡ୍ |ସୋକ୍ ବାୟୋଲ୍ ସହାୟକ କମ୍ପାନୀଗୁଡିକର ମିଟିଂ ମିନିଟ୍ |1948;142: 241-3
ବ୍ରୋଙ୍କୋର୍ଷ୍ଟ ଏଜି, ଅଙ୍ଗରର୍ ଡବ୍ଲୁ, ହୋଲଡେନାଇଡର୍ ଏସ୍ କର୍କଟ ଚିକିତ୍ସା ପାଇଁ ଏକ ମଲିକୁଲାର ମାର୍କର ଭାବରେ କୋଷମୁକ୍ତ DNA ପାଇଁ ଏକ ନୂତନ ଭୂମିକା |ବାୟୋମୋଲାର ବିଶ୍ଳେଷଣର ପରିମାଣ |2019; 17: 100087
ଇଗନାଟିଡିସ୍ ଏମ୍, ସ୍ଲାଇଜ୍ ଜିଡବ୍ଲୁ, ଜେଫ୍ରି ଏସ୍ ଲିକ୍ୱିଡ୍ ବାୟୋପସି କ୍ଲିନିକରେ ପ୍ରବେଶ କରେ - କାର୍ଯ୍ୟକାରିତା ସମସ୍ୟା ଏବଂ ଭବିଷ୍ୟତର ଆହ୍ .ାନ |ନାଟ୍ ରେଭ୍ କ୍ଲିନ୍ ଅଙ୍କୋଲ୍ |2021;18: 297-312
ଲୋ YM, Corbetta N., Chamberlain PF, Rai W., Sargent IL, Redman CW ଏବଂ ଅନ୍ୟମାନେ |ମାତୃ ପ୍ଲାଜମା ଏବଂ ସେରମ୍ରେ ଗର୍ଭସ୍ଥ DNA ଉପସ୍ଥିତ |ଲାନସେଟ୍ |1997;350: 485-7
ଗର୍ଭାବସ୍ଥାରେ ମହିଳାଙ୍କ ରକ୍ତରେ ଏକ୍ସଟ୍ରାସେଲୁଲାର୍ RNA ବ୍ୟବହାର କରି ଗର୍ଭଧାରଣର ଗତି ଏବଂ ଏହାର ଜଟିଳତା ବିଷୟରେ ମୁଫାରେ MN, Wong RJ, Sha GM, ଷ୍ଟିଭେନ୍ସନ୍ ଡି.କେ.ଡୋପେଡିଆଟ୍ରିକ୍ସ2020; 8: 605219
Ollerich M, Sherwood K, Keown P, Schütz E, Beck J, Stegbauer J, et al।ତରଳ ବାୟୋପସି: କିଡନୀ ଗ୍ରାଫ୍ଟରେ ଆଲୋଜେନିକ୍ କ୍ଷତ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ଦାତା କୋଷମୁକ୍ତ DNA ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |ନାଟ୍ ରେଭ୍ ନେଫ୍ରୋଲ୍ |2021;17: 591–603
ଜୁଆନ୍ ଏଫସି, ପ୍ରସବକାଳୀନ ନିରାକରଣରେ ଲୋ YM ଇନୋଭେସନ୍ସ: ମାତୃ ପ୍ଲାଜମା ଜିନୋମ କ୍ରମ |ଆନ୍ନା ଏମ୍।2016; 67: 419-32
ଗୁ ଡବ୍ଲୁ, ଡେଙ୍ଗ୍ ଏକ୍ସ, ଲି ଏମ୍, ସୁକୁ ୟଡି, ଆରେଭାଲୋ ଏସ୍, ଷ୍ଟ୍ରାଇକ୍ ଡି, ଇତ୍ୟାଦି |ସଂକ୍ରମିତ ଶାରୀରିକ ତରଳ ପଦାର୍ଥର ପରବର୍ତ୍ତୀ ପି generation ଼ିର ମେଟେଜେନୋମିକ୍ କ୍ରମ ସହିତ ଦ୍ରୁତ ପାଥୋଜେନ ଚିହ୍ନଟ |ନାଟ୍ ମେଡିସିନ୍ |2021; 27: 115-24