Nature.com 'ਤੇ ਜਾਣ ਲਈ ਤੁਹਾਡਾ ਧੰਨਵਾਦ।ਤੁਹਾਡੇ ਦੁਆਰਾ ਵਰਤੇ ਜਾ ਰਹੇ ਬ੍ਰਾਊਜ਼ਰ ਸੰਸਕਰਣ ਸੀਮਿਤ CSS ਸਮਰਥਨ ਹੈ।ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਅਨੁਭਵ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਸਿਫ਼ਾਰਿਸ਼ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਤੁਸੀਂ ਇੱਕ ਅੱਪਡੇਟ ਕੀਤੇ ਬ੍ਰਾਊਜ਼ਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ (ਜਾਂ ਇੰਟਰਨੈੱਟ ਐਕਸਪਲੋਰਰ ਵਿੱਚ ਅਨੁਕੂਲਤਾ ਮੋਡ ਨੂੰ ਅਯੋਗ ਕਰੋ)।ਇਸ ਦੌਰਾਨ, ਨਿਰੰਤਰ ਸਮਰਥਨ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਸਟਾਈਲ ਅਤੇ ਜਾਵਾ ਸਕ੍ਰਿਪਟ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਾਈਟ ਨੂੰ ਰੈਂਡਰ ਕਰਾਂਗੇ।
ਤਰਲ ਬਾਇਓਪਸੀ (LB) ਇੱਕ ਸੰਕਲਪ ਹੈ ਜੋ ਬਾਇਓਮੈਡੀਕਲ ਖੇਤਰ ਵਿੱਚ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਪ੍ਰਸਿੱਧੀ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰ ਰਿਹਾ ਹੈ।ਸੰਕਲਪ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੰਚਾਰਿਤ ਐਕਸਟਰਸੈਲੂਲਰ ਡੀਐਨਏ (ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ) ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਖੋਜ 'ਤੇ ਅਧਾਰਤ ਹੈ, ਜੋ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਦੀ ਮੌਤ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਛੋਟੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਜਾਰੀ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।ਇਹਨਾਂ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦਾ ਇੱਕ ਛੋਟਾ ਜਿਹਾ ਅਨੁਪਾਤ ਵਿਦੇਸ਼ੀ (ਵਿਦੇਸ਼ੀ) ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਜਾਂ ਜੀਵਾਂ ਤੋਂ ਪੈਦਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਮੌਜੂਦਾ ਕੰਮ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਇਸ ਧਾਰਨਾ ਨੂੰ ਮੱਸਲਾਂ 'ਤੇ ਲਾਗੂ ਕੀਤਾ ਹੈ, ਇੱਕ ਸੈਂਟੀਨੇਲ ਸਪੀਸੀਜ਼ ਜੋ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਉੱਚ ਸਮੁੰਦਰੀ ਪਾਣੀ ਦੀ ਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਸਮਰੱਥਾ ਲਈ ਜਾਣੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਅਸੀਂ ਸਮੁੰਦਰੀ ਤੱਟਵਰਤੀ ਵਾਤਾਵਰਣ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਦੀ ਜੈਵ ਵਿਭਿੰਨਤਾ ਬਾਰੇ ਜਾਣਕਾਰੀ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਨ ਲਈ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸਰੋਤਾਂ ਤੋਂ ਵਾਤਾਵਰਣ ਦੇ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਹਾਸਲ ਕਰਨ ਲਈ ਕੁਦਰਤੀ ਫਿਲਟਰਾਂ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰਨ ਲਈ ਮੱਸਲਾਂ ਦੀ ਯੋਗਤਾ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹਾਂ।ਸਾਡੇ ਨਤੀਜੇ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਮੱਸਲ ਹੀਮੋਲਿੰਫ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜੋ 1 ਤੋਂ 5 kb ਤੱਕ ਆਕਾਰ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਵੱਖਰੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਸ਼ਾਟਗਨ ਕ੍ਰਮ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਵੱਡੀ ਗਿਣਤੀ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਵਿਦੇਸ਼ੀ ਮਾਈਕ੍ਰੋਬਾਇਲ ਮੂਲ ਦੇ ਹਨ।ਉਹਨਾਂ ਵਿੱਚੋਂ, ਸਾਨੂੰ ਬੈਕਟੀਰੀਆ, ਪੁਰਾਤੱਤਵ, ਅਤੇ ਵਾਇਰਸਾਂ ਤੋਂ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਮਿਲੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਵਾਇਰਸ ਵੀ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ ਜੋ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਤੱਟਵਰਤੀ ਸਮੁੰਦਰੀ ਵਾਤਾਵਰਣ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਵਿੱਚ ਪਾਏ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਕਈ ਮੇਜ਼ਬਾਨਾਂ ਨੂੰ ਸੰਕਰਮਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਜਾਣੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।ਸਿੱਟੇ ਵਜੋਂ, ਸਾਡਾ ਅਧਿਐਨ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਮੱਸਲਾਂ 'ਤੇ ਲਾਗੂ LB ਦੀ ਧਾਰਨਾ ਸਮੁੰਦਰੀ ਤੱਟਵਰਤੀ ਵਾਤਾਵਰਣ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਵਿੱਚ ਮਾਈਕਰੋਬਾਇਲ ਵਿਭਿੰਨਤਾ ਬਾਰੇ ਗਿਆਨ ਦੇ ਇੱਕ ਅਮੀਰ ਪਰ ਅਜੇ ਤੱਕ ਅਣਪਛਾਤੇ ਸਰੋਤ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਹੈ।
ਜਲਵਾਯੂ ਪਰਿਵਰਤਨ (ਸੀਸੀ) ਦਾ ਸਮੁੰਦਰੀ ਵਾਤਾਵਰਣ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਜੈਵ ਵਿਭਿੰਨਤਾ 'ਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਖੋਜ ਦਾ ਇੱਕ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਵਧ ਰਿਹਾ ਖੇਤਰ ਹੈ।ਗਲੋਬਲ ਵਾਰਮਿੰਗ ਨਾ ਸਿਰਫ਼ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਸਰੀਰਕ ਤਣਾਅ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦੀ ਹੈ, ਸਗੋਂ ਸਮੁੰਦਰੀ ਜੀਵਾਂ ਦੀ ਥਰਮਲ ਸਥਿਰਤਾ ਦੀਆਂ ਵਿਕਾਸਵਾਦੀ ਸੀਮਾਵਾਂ ਨੂੰ ਵੀ ਧੱਕਦੀ ਹੈ, ਕਈ ਕਿਸਮਾਂ ਦੇ ਨਿਵਾਸ ਸਥਾਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਵਧੇਰੇ ਅਨੁਕੂਲ ਸਥਿਤੀਆਂ [1, 2] ਦੀ ਖੋਜ ਕਰਨ ਲਈ ਪ੍ਰੇਰਦੀ ਹੈ।ਮੈਟਾਜ਼ੋਆਨ ਦੀ ਜੈਵ ਵਿਭਿੰਨਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਨ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਸੀਸੀ ਮੇਜ਼ਬਾਨ-ਮਾਈਕ੍ਰੋਬਾਇਲ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੇ ਨਾਜ਼ੁਕ ਸੰਤੁਲਨ ਨੂੰ ਵਿਗਾੜਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਮਾਈਕਰੋਬਾਇਲ ਡਿਸਬੈਕਟੀਰੀਓਸਿਸ ਸਮੁੰਦਰੀ ਵਾਤਾਵਰਣ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਲਈ ਇੱਕ ਗੰਭੀਰ ਖ਼ਤਰਾ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਇਹ ਸਮੁੰਦਰੀ ਜੀਵਾਂ ਨੂੰ ਛੂਤ ਵਾਲੇ ਜਰਾਸੀਮ [3, 4] ਲਈ ਵਧੇਰੇ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਮੰਨਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਕਿ SS ਪੁੰਜ ਮੌਤਾਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਗਲੋਬਲ ਸਮੁੰਦਰੀ ਵਾਤਾਵਰਣ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ [5, 6] ਦੇ ਪ੍ਰਬੰਧਨ ਲਈ ਇੱਕ ਗੰਭੀਰ ਸਮੱਸਿਆ ਹੈ।ਇਹ ਬਹੁਤ ਸਾਰੀਆਂ ਸਮੁੰਦਰੀ ਜਾਤੀਆਂ ਦੇ ਆਰਥਿਕ, ਵਾਤਾਵਰਣ ਅਤੇ ਪੌਸ਼ਟਿਕ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਦੇ ਮੱਦੇਨਜ਼ਰ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਮੁੱਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਧਰੁਵੀ ਖੇਤਰਾਂ ਵਿੱਚ ਰਹਿਣ ਵਾਲੇ ਬਾਇਵਾਲਵ ਲਈ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੱਚ ਹੈ, ਜਿੱਥੇ ਸੀਕੇ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਵਧੇਰੇ ਤੁਰੰਤ ਅਤੇ ਗੰਭੀਰ ਹੁੰਦੇ ਹਨ [6, 7]।ਵਾਸਤਵ ਵਿੱਚ, ਬਾਇਵਾਲਵ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਮਾਈਟਿਲਸ ਐਸਪੀਪੀ.ਸਮੁੰਦਰੀ ਵਾਤਾਵਰਣ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ 'ਤੇ CC ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਦੀ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕਰਨ ਲਈ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।ਹੈਰਾਨੀ ਦੀ ਗੱਲ ਨਹੀਂ ਹੈ ਕਿ, ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਸਿਹਤ ਦੀ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਮੁਕਾਬਲਤਨ ਵੱਡੀ ਗਿਣਤੀ ਵਿੱਚ ਬਾਇਓਮਾਰਕਰ ਵਿਕਸਿਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ, ਅਕਸਰ ਦੋ-ਪੱਧਰੀ ਪਹੁੰਚ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਐਂਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਗਤੀਵਿਧੀ ਜਾਂ ਸੈਲੂਲਰ ਫੰਕਸ਼ਨਾਂ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਸੈੱਲ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ ਅਤੇ ਫਾਗੋਸਾਈਟਿਕ ਗਤੀਵਿਧੀ [8] ਦੇ ਅਧਾਰ ਤੇ ਕਾਰਜਸ਼ੀਲ ਬਾਇਓਮਾਰਕਰ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਇਹਨਾਂ ਤਰੀਕਿਆਂ ਵਿੱਚ ਖਾਸ ਦਬਾਅ ਸੂਚਕਾਂ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦਾ ਮਾਪ ਵੀ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਜੋ ਸਮੁੰਦਰ ਦੇ ਪਾਣੀ ਦੀ ਵੱਡੀ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਸਮਾਈ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਨਰਮ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ ਇਕੱਠੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਬਾਇਵਾਲਵਜ਼ ਦੀ ਉੱਚ ਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਸਮਰੱਥਾ ਅਤੇ ਅਰਧ-ਖੁੱਲ੍ਹੇ ਸੰਚਾਰ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਤਰਲ ਬਾਇਓਪਸੀ (LB) ਦੀ ਧਾਰਨਾ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਨਵੇਂ ਹੀਮੋਲਿਮਫ ਬਾਇਓਮਾਰਕਰਾਂ ਨੂੰ ਵਿਕਸਤ ਕਰਨ ਦਾ ਇੱਕ ਮੌਕਾ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਮਰੀਜ਼ ਪ੍ਰਬੰਧਨ ਲਈ ਇੱਕ ਸਧਾਰਨ ਅਤੇ ਘੱਟ ਤੋਂ ਘੱਟ ਹਮਲਾਵਰ ਪਹੁੰਚ ਹੈ।ਖੂਨ ਦੇ ਨਮੂਨੇ [9, 10].ਹਾਲਾਂਕਿ ਮਨੁੱਖੀ LB ਵਿੱਚ ਕਈ ਪ੍ਰਕਾਰ ਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰਿਤ ਅਣੂ ਲੱਭੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਇਹ ਸੰਕਲਪ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪਲਾਜ਼ਮਾ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਸਾਰਿਤ ਐਕਸਟਰਸੈਲੂਲਰ ਡੀਐਨਏ (ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ) ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਡੀਐਨਏ ਸੀਕੁਏਂਸਿੰਗ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ 'ਤੇ ਅਧਾਰਤ ਹੈ।ਵਾਸਤਵ ਵਿੱਚ, ਮਨੁੱਖੀ ਪਲਾਜ਼ਮਾ ਵਿੱਚ ਸੰਚਾਰਿਤ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ 20ਵੀਂ ਸਦੀ ਦੇ ਮੱਧ ਤੋਂ ਜਾਣੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ [11], ਪਰ ਇਹ ਸਿਰਫ ਹਾਲ ਹੀ ਦੇ ਸਾਲਾਂ ਵਿੱਚ ਹੈ ਕਿ ਉੱਚ-ਥਰੂਪੁਟ ਸੀਕੁਏਂਸਿੰਗ ਵਿਧੀਆਂ ਦੇ ਆਗਮਨ ਨੇ ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਦੇ ਅਧਾਰ ਤੇ ਕਲੀਨਿਕਲ ਨਿਦਾਨ ਦੀ ਅਗਵਾਈ ਕੀਤੀ ਹੈ।ਇਹਨਾਂ ਸਰਕੂਲੇਟ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਸੈੱਲ ਦੀ ਮੌਤ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ (ਨਿਊਕਲੀਅਰ ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ) ਦੇ ਪੈਸਿਵ ਰੀਲੀਜ਼ ਦੇ ਕਾਰਨ ਹੈ। ਸਿਹਤਮੰਦ ਵਿਅਕਤੀਆਂ ਵਿੱਚ, ccfDNA ਦੀ ਤਵੱਜੋ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਘੱਟ ਹੁੰਦੀ ਹੈ (<10 ng/mL) ਪਰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਰੋਗਾਂ ਤੋਂ ਪੀੜਤ ਜਾਂ ਤਣਾਅ ਦੇ ਅਧੀਨ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਵਿੱਚ 5-10 ਗੁਣਾ ਵਧਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਟਿਸ਼ੂ ਨੂੰ ਨੁਕਸਾਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਸਿਹਤਮੰਦ ਵਿਅਕਤੀਆਂ ਵਿੱਚ, ccfDNA ਦੀ ਤਵੱਜੋ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਘੱਟ ਹੁੰਦੀ ਹੈ (<10 ng/mL) ਪਰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਰੋਗਾਂ ਤੋਂ ਪੀੜਤ ਜਾਂ ਤਣਾਅ ਦੇ ਅਧੀਨ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਵਿੱਚ 5-10 ਗੁਣਾ ਵਧਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਟਿਸ਼ੂ ਨੂੰ ਨੁਕਸਾਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। У здоровых людей концентрация вккДНК в норме низкая (<10 нг/мл), но может повышаться в 5–10 раз у больныйполойтовчнох ергающихся стрессу, приводящему к повреждению тканей. ਸਿਹਤਮੰਦ ਲੋਕਾਂ ਵਿੱਚ, cccDNA ਦੀ ਤਵੱਜੋ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਘੱਟ ਹੁੰਦੀ ਹੈ (<10 ng/mL), ਪਰ ਇਹ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਰੋਗਾਂ ਜਾਂ ਤਣਾਅ ਵਾਲੇ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਵਿੱਚ 5-10 ਗੁਣਾ ਵੱਧ ਸਕਦੀ ਹੈ ਜੋ ਟਿਸ਼ੂ ਨੂੰ ਨੁਕਸਾਨ ਪਹੁੰਚਾਉਂਦੀ ਹੈ।在健康个体中，ccfDNA 的浓度通常较低（<10 ng/mL），但在患有各种病理或承受压力渂，但在患有各种病理或承受压力渂从而导致组织损伤.在 健康 个体 中 ， ccfdna 的 浓度 较 低 （（<10 ng/ml） 但 在 各 种 病理 或 承受若理 或 承受 叀受5-10 倍, 从而 组织.。 损伤 损伤 损伤 损伤 损伤 损伤 损伤 损伤Концентрации ccfDNA обычно низкие (<10 нг/мл) у здоровых людей, но могут быть увеличены в 5-10 раз у павцимачимостоминтезимотого. или стрессом, что приводит к повреждению тканей. ਸਿਹਤਮੰਦ ਵਿਅਕਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ccfDNA ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਘੱਟ (<10 ng/ml) ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਪਰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਰੋਗਾਂ ਜਾਂ ਤਣਾਅ ਵਾਲੇ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਵਿੱਚ 5-10 ਗੁਣਾ ਵਧ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਟਿਸ਼ੂ ਨੂੰ ਨੁਕਸਾਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ccfDNA ਟੁਕੜਿਆਂ ਦਾ ਆਕਾਰ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 150 ਤੋਂ 200 bp ਤੱਕ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।[12]।ਸਵੈ-ਉਤਪੰਨ ccfDNA ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ, ਭਾਵ, ਸਾਧਾਰਨ ਜਾਂ ਪਰਿਵਰਤਿਤ ਹੋਸਟ ਸੈੱਲਾਂ ਤੋਂ ccfDNA, ਪ੍ਰਮਾਣੂ ਅਤੇ/ਜਾਂ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਜੀਨੋਮ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਜੈਨੇਟਿਕ ਅਤੇ ਐਪੀਜੀਨੇਟਿਕ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਡਾਕਟਰੀ ਕਰਮਚਾਰੀਆਂ ਨੂੰ ਖਾਸ ਅਣੂ-ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਥੈਰੇਪੀਆਂ [13] ਦੀ ਚੋਣ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਮਿਲਦੀ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ccfDNA ਵਿਦੇਸ਼ੀ ਸਰੋਤਾਂ ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਗਰਭ ਅਵਸਥਾ ਦੌਰਾਨ ਭਰੂਣ ਦੇ ਸੈੱਲਾਂ ਤੋਂ ਜਾਂ ਟ੍ਰਾਂਸਪਲਾਂਟ ਕੀਤੇ ਅੰਗਾਂ [14,15,16,17] ਤੋਂ ccfDNA।ccfDNA ਇੱਕ ਛੂਤ ਵਾਲੇ ਏਜੰਟ (ਵਿਦੇਸ਼ੀ) ਦੇ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਜਾਣਕਾਰੀ ਦਾ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਸਰੋਤ ਵੀ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਸੰਕਰਮਿਤ ਟਿਸ਼ੂ [18] ਦੀ ਹਮਲਾਵਰ ਬਾਇਓਪਸੀ ਤੋਂ ਪਰਹੇਜ਼ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਖੂਨ ਦੀਆਂ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀਆਂ ਦੁਆਰਾ ਨਹੀਂ ਪਛਾਣੇ ਗਏ ਵਿਆਪਕ ਲਾਗਾਂ ਦੀ ਗੈਰ-ਹਮਲਾਵਰ ਖੋਜ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ।ਹਾਲੀਆ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਸੱਚਮੁੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਮਨੁੱਖੀ ਖੂਨ ਵਿੱਚ ਜਾਣਕਾਰੀ ਦਾ ਇੱਕ ਅਮੀਰ ਸਰੋਤ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਜਿਸਦੀ ਵਰਤੋਂ ਵਾਇਰਲ ਅਤੇ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੇ ਰੋਗਾਣੂਆਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹ ਕਿ ਮਨੁੱਖੀ ਪਲਾਜ਼ਮਾ ਵਿੱਚ ਪਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਦਾ ਲਗਭਗ 1% ਵਿਦੇਸ਼ੀ ਮੂਲ ਦਾ ਹੈ [19]।ਇਹ ਅਧਿਐਨ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ccfDNA ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕਿਸੇ ਜੀਵ ਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰਿਤ ਮਾਈਕ੍ਰੋਬਾਇਓਮ ਦੀ ਜੈਵ ਵਿਭਿੰਨਤਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਹਾਲ ਹੀ ਵਿੱਚ, ਇਸ ਸੰਕਲਪ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਸਿਰਫ਼ ਮਨੁੱਖਾਂ ਵਿੱਚ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਅਤੇ, ਕੁਝ ਹੱਦ ਤੱਕ, ਹੋਰ ਰੀੜ੍ਹ ਦੀ ਹੱਡੀ [20, 21] ਵਿੱਚ.
ਮੌਜੂਦਾ ਪੇਪਰ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਔਲਾਕੋਮਿਆ ਅਟਰਾ ਦੇ ccfDNA ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕਰਨ ਲਈ LB ਸੰਭਾਵੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹਾਂ, ਇੱਕ ਦੱਖਣੀ ਪ੍ਰਜਾਤੀ ਜੋ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸਬ-ਅੰਟਾਰਕਟਿਕ ਕੇਰਗੁਲੇਨ ਟਾਪੂਆਂ ਵਿੱਚ ਪਾਈ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਇੱਕ ਵੱਡੇ ਪਠਾਰ ਦੇ ਉੱਪਰ ਟਾਪੂਆਂ ਦਾ ਇੱਕ ਸਮੂਹ ਜੋ 35 ਮਿਲੀਅਨ ਸਾਲ ਪਹਿਲਾਂ ਬਣਿਆ ਸੀ।ਜਵਾਲਾਮੁਖੀ ਫਟਣ.ਇੱਕ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ ਸਮੁੰਦਰੀ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਜਲਦੀ ਹੀ ਮੱਸਲ ਦੁਆਰਾ ਲਏ ਜਾਂਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਹੀਮੋਲਿੰਫ ਡੱਬੇ ਵਿੱਚ ਦਾਖਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਸ਼ਾਟਗਨ ਕ੍ਰਮ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਮੱਸਲ ਹੀਮੋਲਿੰਫ ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਵਿੱਚ ਇਸਦੇ ਆਪਣੇ ਅਤੇ ਗੈਰ-ਸਵੈ ਮੂਲ ਦੇ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਸਹਿਜੀਵ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਅਤੇ ਠੰਡੇ ਜਵਾਲਾਮੁਖੀ ਸਮੁੰਦਰੀ ਤੱਟਵਰਤੀ ਵਾਤਾਵਰਣ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਦੇ ਬਾਇਓਮ ਤੋਂ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।Hemolymph ccfDNA ਵਿੱਚ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਹੋਸਟ ਰੇਂਜਾਂ ਵਾਲੇ ਵਾਇਰਸਾਂ ਤੋਂ ਲਏ ਗਏ ਵਾਇਰਲ ਕ੍ਰਮ ਵੀ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਸਾਨੂੰ ਬਹੁ-ਸੈਲੂਲਰ ਜਾਨਵਰਾਂ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਬੋਨੀ ਮੱਛੀ, ਸਮੁੰਦਰੀ ਐਨੀਮੋਨ, ਐਲਗੀ ਅਤੇ ਕੀੜੇ ਤੋਂ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਵੀ ਮਿਲੇ ਹਨ।ਸਿੱਟੇ ਵਜੋਂ, ਸਾਡਾ ਅਧਿਐਨ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ LB ਸੰਕਲਪ ਨੂੰ ਸਮੁੰਦਰੀ ਪਰਿਆਵਰਣ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਅਮੀਰ ਜੀਨੋਮਿਕ ਭੰਡਾਰ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਸਮੁੰਦਰੀ ਇਨਵਰਟੇਬਰੇਟਾਂ 'ਤੇ ਸਫਲਤਾਪੂਰਵਕ ਲਾਗੂ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਬਾਲਗ (55-70 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਲੰਬੇ) ਮਾਈਟਿਲਸ ਪਲੇਟੈਂਸਿਸ (ਐਮ. ਪਲੇਟੈਂਸਿਸ) ਅਤੇ ਔਲਾਕੋਮਿਆ ਅਟਰਾ (ਏ. ਅਟਰਾ) ਨੂੰ ਪੋਰਟ-ਔ-ਫਰਾਂਸ (049°21.235 S, 070°13.490 E.) ਦੇ ਅੰਤਰਵਰਤੀ ਚਟਾਨੀ ਕਿਨਾਰਿਆਂ ਤੋਂ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਦਸੰਬਰ 2018 ਵਿੱਚ ਕੇਰਗੁਲੇਨ ਆਈਲੈਂਡਜ਼। ਹੋਰ ਬਾਲਗ ਨੀਲੇ ਮੱਸਲ (ਮਾਈਟਿਲਸ spp.) ਇੱਕ ਵਪਾਰਕ ਸਪਲਾਇਰ (PEI ਮਸਲ ਕਿੰਗ ਇੰਕ., ਪ੍ਰਿੰਸ ਐਡਵਰਡ ਆਈਲੈਂਡ, ਕੈਨੇਡਾ) ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ ਅਤੇ ਇੱਕ ਤਾਪਮਾਨ ਨਿਯੰਤਰਿਤ (4°C) ਹਵਾਦਾਰ ਟੈਂਕ ਵਿੱਚ ਰੱਖੇ ਗਏ ਸਨ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 10-20 L ਦਾ 32‰ ਨਕਲੀ ਬ੍ਰਾਈਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।(ਨਕਲੀ ਸਮੁੰਦਰੀ ਲੂਣ ਰੀਫ ਕ੍ਰਿਸਟਲ, ਇੰਸਟੈਂਟ ਓਸ਼ਨ, ਵਰਜੀਨੀਆ, ਅਮਰੀਕਾ)।ਹਰੇਕ ਪ੍ਰਯੋਗ ਲਈ, ਵਿਅਕਤੀਗਤ ਸ਼ੈੱਲਾਂ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਅਤੇ ਭਾਰ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਇਸ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ ਲਈ ਇੱਕ ਮੁਫਤ ਓਪਨ ਐਕਸੈਸ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਔਨਲਾਈਨ ਉਪਲਬਧ ਹੈ (https://doi.org/10.17504/protocols.io.81wgb6z9olpk/v1)।ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, ਐਲਬੀ ਹੀਮੋਲਿੰਫ ਨੂੰ ਅਗਵਾ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਮਾਸਪੇਸ਼ੀਆਂ ਤੋਂ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਵੇਂ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ [22].ਹੀਮੋਲਿੰਫ ਨੂੰ 3 ਮਿੰਟ ਲਈ 1200×g 'ਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਸਪੱਸ਼ਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਨੂੰ ਵਰਤੋਂ ਤੱਕ ਫ੍ਰੀਜ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ (-20° C)।ਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਅਲੱਗ ਕਰਨ ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧ ਕਰਨ ਲਈ, ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੀਆਂ ਹਦਾਇਤਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਨਮੂਨੇ (1.5-2.0 ਮਿ.ਲੀ.) ਨੂੰ ਨਿਊਕਲੀਓਸਨੈਪ ਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਕਿੱਟ (ਮਚੇਰੀ-ਨਾਗੇਲ, ਬੈਥਲੇਹੇਨ, ਪੀਏ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪਿਘਲਾਇਆ ਗਿਆ ਅਤੇ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਕੀਤੀ ਗਈ।ccfDNA ਨੂੰ ਅਗਲੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਤੱਕ -80°C 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਕੁਝ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ, ccfDNA ਨੂੰ QIAamp DNA ਇਨਵੈਸਟੀਗੇਟਰ ਕਿੱਟ (QIAGEN, ਟੋਰਾਂਟੋ, ਓਨਟਾਰੀਓ, ਕੈਨੇਡਾ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਅਲੱਗ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਇੱਕ ਮਿਆਰੀ PicoGreen ਪਰਖ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਸ਼ੁੱਧ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਅਲੱਗ-ਥਲੱਗ ccfDNA ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਦੀ ਵੰਡ ਨੂੰ ਇੱਕ ਉੱਚ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ DNA ਕਿੱਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਇੱਕ Agilent 2100 bioanalyzer (Agilent Technologies Inc., Santa Clara, CA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਕੇਸ਼ੀਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰਸਿਸ ਦੁਆਰਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਪਰਖ ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੀਆਂ ਹਦਾਇਤਾਂ ਅਨੁਸਾਰ ccfDNA ਨਮੂਨੇ ਦੇ 1 µl ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।
ਹੀਮੋਲਿੰਫ ccfDNA ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਕ੍ਰਮਬੱਧਤਾ ਲਈ, Génome Québec (Montreal, Quebec, Canada) ਨੇ Illumina MiSeq PE75 ਕਿੱਟ ਦੀ Illumina DNA ਮਿਕਸ ਕਿੱਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਸ਼ਾਟਗਨ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀਆਂ ਤਿਆਰ ਕੀਤੀਆਂ।ਇੱਕ ਮਿਆਰੀ ਅਡਾਪਟਰ (BioO) ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਕੱਚਾ ਡਾਟਾ ਫਾਈਲਾਂ NCBI ਕ੍ਰਮ ਰੀਡ ਆਰਕਾਈਵ (SRR8924808 ਅਤੇ SRR8924809) ਤੋਂ ਉਪਲਬਧ ਹਨ।FastQC [23] ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਬੁਨਿਆਦੀ ਪੜ੍ਹਨ ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਟ੍ਰਾਈਮੋਮੈਟਿਕ [24] ਨੂੰ ਕਲਿੱਪਿੰਗ ਅਡਾਪਟਰਾਂ ਅਤੇ ਗਰੀਬ ਕੁਆਲਿਟੀ ਰੀਡਜ਼ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਹੈ।ਪੇਅਰ ਕੀਤੇ ਸਿਰਿਆਂ ਦੇ ਨਾਲ ਸ਼ਾਟਗਨ ਰੀਡਜ਼ ਨੂੰ ਬੇਮੇਲ [25] ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ 20 bp ਦੇ ਓਵਰਲੈਪ ਨਾਲ ਲੰਬੇ ਸਿੰਗਲ ਰੀਡਜ਼ ਵਿੱਚ ਮਿਲਾ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਵਿਲੀਨ ਕੀਤੇ ਰੀਡਜ਼ ਨੂੰ ਇੱਕ ਬਾਇਵਾਲਵ NCBI ਟੈਕਸੋਨੋਮੀ ਡੇਟਾਬੇਸ (e ਮੁੱਲ < 1e−3 ਅਤੇ 90% ਸਮਰੂਪ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ BLASTN ਨਾਲ ਐਨੋਟੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ DUST [26] ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਘੱਟ-ਜਟਿਲਤਾ ਕ੍ਰਮਾਂ ਦੀ ਮਾਸਕਿੰਗ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਵਿਲੀਨ ਕੀਤੇ ਰੀਡਜ਼ ਨੂੰ ਇੱਕ ਬਾਇਵਾਲਵ NCBI ਟੈਕਸੋਨੋਮੀ ਡੇਟਾਬੇਸ (e ਮੁੱਲ < 1e−3 ਅਤੇ 90% ਸਮਰੂਪ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ BLASTN ਨਾਲ ਐਨੋਟੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ DUST [26] ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਘੱਟ-ਜਟਿਲਤਾ ਕ੍ਰਮਾਂ ਦੀ ਮਾਸਕਿੰਗ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। Объединенные чтения были аннотированы с помощью BLASTN с использованием базы данных таксономии двустворчатвых двустворчатих и 90% гомологии), а маскирование последовательностей низкой сложности было выполнено с использованием DUST [26]. ਪੂਲਡ ਰੀਡਜ਼ ਨੂੰ NCBI ਬਾਇਵਾਲਵ ਵਰਗੀਕਰਨ ਡੇਟਾਬੇਸ (e ਮੁੱਲ <1e-3 ਅਤੇ 90% ਸਮਰੂਪ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ BLASTN ਨਾਲ ਐਨੋਟੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਘੱਟ ਜਟਿਲਤਾ ਕ੍ਰਮ ਮਾਸਕਿੰਗ DUST [26] ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।使用双壳类NCBI 分类数据库（e 值< 1e-3 和90% 同源性）用BLASTN 注释合并的读俶释合并的读买]复杂度序列的掩蔽.使用 双 壳类 ncbi 分类 （（（<1e-3 和 90% 同源） 用 用 注释 合并 读湰 读湰 茡并 [读湰] 合并读湰 茡类复杂度 序列 的 . . . . .掩蔽Объединенные чтения были аннотированы с помощью BLASTN с использованием таксономической базы данных двустворчавчати данных -3 и 90% гомологии), а маскирование последовательностей низкой сложности было выполнено с использованием DUST [26]. ਪੂਲਡ ਰੀਡਜ਼ ਨੂੰ NCBI ਬਾਇਵਾਲਵ ਟੈਕਸੋਨੋਮਿਕ ਡੇਟਾਬੇਸ (e ਮੁੱਲ <1e-3 ਅਤੇ 90% ਸਮਰੂਪ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ BLASTN ਨਾਲ ਐਨੋਟੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਘੱਟ ਜਟਿਲਤਾ ਕ੍ਰਮ ਮਾਸਕਿੰਗ DUST [26] ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਰੀਡਜ਼ ਨੂੰ ਦੋ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਗਿਆ ਸੀ: ਬਾਇਵਾਲਵ ਕ੍ਰਮ (ਇੱਥੇ ਸਵੈ-ਪੜ੍ਹਨ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ) ਅਤੇ ਗੈਰ-ਸਬੰਧਤ (ਗੈਰ-ਸਵੈ-ਪੜ੍ਹਨ) ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ।ਦੋ ਸਮੂਹਾਂ ਨੂੰ ਵੱਖਰੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮੇਗਾਹਿਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੰਟਿਗਸ [27] ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।ਇਸ ਦੌਰਾਨ, ਏਲੀਅਨ ਮਾਈਕ੍ਰੋਬਾਇਓਮ ਰੀਡਜ਼ ਦੀ ਟੈਕਸੋਨੋਮਿਕ ਵੰਡ ਨੂੰ ਕ੍ਰੇਕੇਨ2 [28] ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਵਰਗੀਕ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਗਲੈਕਸੀ [29, 30] ਉੱਤੇ ਕ੍ਰੋਨਾ ਪਾਈ ਚਾਰਟ ਦੁਆਰਾ ਗ੍ਰਾਫਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਸਤੁਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਸਾਡੇ ਮੁੱਢਲੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਤੋਂ ਸਰਵੋਤਮ kmers ਨੂੰ kmers-59 ਹੋਣ ਦਾ ਪੱਕਾ ਇਰਾਦਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਇੱਕ ਅੰਤਮ ਐਨੋਟੇਸ਼ਨ ਲਈ BLASTN (bivalve NCBI ਡੇਟਾਬੇਸ, e ਮੁੱਲ < 1e−10 ਅਤੇ 60% ਸਮਰੂਪ) ਨਾਲ ਅਲਾਈਨਮੈਂਟ ਦੁਆਰਾ ਸਵੈ-ਸੰਬੰਧੀ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਇੱਕ ਅੰਤਮ ਐਨੋਟੇਸ਼ਨ ਲਈ BLASTN (bivalve NCBI ਡੇਟਾਬੇਸ, e ਮੁੱਲ < 1e−10 ਅਤੇ 60% ਸਮਰੂਪ) ਨਾਲ ਅਲਾਈਨਮੈਂਟ ਦੁਆਰਾ ਸਵੈ-ਸੰਬੰਧੀ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। Затем собственные контиги были идентифицированы путем сопоставления с BLASTN омология 60%) для окончательной аннотации. ਅੰਤਮ ਐਨੋਟੇਸ਼ਨ ਲਈ BLASTN (NCBI ਬਾਇਵਾਲਵ ਡੇਟਾਬੇਸ, e ਮੁੱਲ <1e-10 ਅਤੇ 60% ਸਮਰੂਪਤਾ) ਨਾਲ ਮੇਲ ਕਰਕੇ ਸਵੈ-ਕੰਟਿਗਸ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।然后通过与BLASTN（双壳贝类NCBI 数据库，e 值< 1e-10 和60% 同源性）毹龐来识囏茻囏囏圡齐来识分荮通终注释.然后通过与BLASTN（双壳贝类NCBI 数据库，e 值<1e-10 和60% Затем были идентифицированы собственные контиги для окончательной аннотации путем сопоставления с BLASTN моллюсков, значение e <1e-10 и гомология 60%). BLASTN (NCBI ਬਾਇਵਾਲਵ ਡੇਟਾਬੇਸ, ਈ ਮੁੱਲ <1e-10 ਅਤੇ 60% ਸਮਰੂਪ) ਦੇ ਨਾਲ ਮੇਲ ਕਰਕੇ ਅੰਤਮ ਐਨੋਟੇਸ਼ਨ ਲਈ ਸਵੈ-ਕੰਟਿਗਸ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਸਮਾਨਾਂਤਰ ਵਿੱਚ, ਗੈਰ-ਸਵੈ-ਸਹਿਤ ਸਮੂਹ ਕੰਟਿਗਸ ਨੂੰ BLASTN (nt NCBI ਡੇਟਾਬੇਸ, e ਮੁੱਲ < 1e−10 ਅਤੇ 60% ਸਮਰੂਪ) ਨਾਲ ਐਨੋਟੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸਮਾਨਾਂਤਰ ਵਿੱਚ, ਗੈਰ-ਸਵੈ-ਸਹਿਤ ਸਮੂਹ ਕੰਟਿਗਸ ਨੂੰ BLASTN (nt NCBI ਡੇਟਾਬੇਸ, e ਮੁੱਲ < 1e−10 ਅਤੇ 60% ਸਮਰੂਪ) ਨਾਲ ਐਨੋਟੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। Параллельно чужеродные групповые контиги были аннотированы с помощью BLASTN (база данных nt NCBI, значение e <1e-10%06могоим). ਸਮਾਨਾਂਤਰ ਵਿੱਚ, ਵਿਦੇਸ਼ੀ ਸਮੂਹ ਕੰਟਿਗਸ ਨੂੰ BLASTN (NT NCBI ਡੇਟਾਬੇਸ, e ਮੁੱਲ <1e-10 ਅਤੇ 60% ਸਮਰੂਪਤਾ) ਨਾਲ ਐਨੋਟੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।平行地，用BLASTN（nt NCBI 数据库，e 值< 1e-10 和60% 同源性）注释非自身组重叠群.平行地，用BLASTN（nt NCBI 数据库，e 值< 1e-10 和60% 同源性）注释非自身组重叠群. Параллельно контиги, не относящиеся к собственной группе, были аннотированы с помощью BLASTN (база данных nt <e.g.1.0. 60%)। ਸਮਾਨਾਂਤਰ ਵਿੱਚ, ਗੈਰ-ਸਵੈ ਗਰੁੱਪ ਕੰਟਿਗਸ ਨੂੰ BLASTN (nt NCBI ਡੇਟਾਬੇਸ, e ਮੁੱਲ <1e-10 ਅਤੇ 60% ਸਮਰੂਪਤਾ) ਨਾਲ ਐਨੋਟੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। BLASTX ਨੂੰ nr ਅਤੇ RefSeq ਪ੍ਰੋਟੀਨ NCBI ਡੇਟਾਬੇਸ (e ਮੁੱਲ < 1e−10 ਅਤੇ 60% ਸਮਰੂਪ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਗੈਰ-ਸਵੈ ਕੰਟੀਗਸ 'ਤੇ ਵੀ ਸੰਚਾਲਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। BLASTX ਨੂੰ nr ਅਤੇ RefSeq ਪ੍ਰੋਟੀਨ NCBI ਡੇਟਾਬੇਸ (e ਮੁੱਲ < 1e−10 ਅਤੇ 60% ਸਮਰੂਪ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਗੈਰ-ਸਵੈ ਕੰਟੀਗਸ 'ਤੇ ਵੀ ਸੰਚਾਲਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। BLASTX также был проведен на несамостоятельных контигах с использованием баз данных белка nr и RefSeq NCBI (<%1-e06магион). BLASTX ਨੂੰ nr ਅਤੇ RefSeq NCBI ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਡੇਟਾਬੇਸ (e ਮੁੱਲ <1e-10 ਅਤੇ 60% ਸਮਰੂਪ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਗੈਰ-ਸਵੈ-ਸੰਬੰਧੀਆਂ 'ਤੇ ਵੀ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।还使用nr 和RefSeq 蛋白NCBI 数据库对非自身重叠群进行了BLASTX（e 值< 1e-10 和60%.还使用nr 和RefSeq 蛋白NCBI 数据库对非自身重叠群进行了BLASTX（e 值< 1e-10 和60%. BLASTX также выполняли на несамостоятельных контигах с использованием баз данных белка nr и RefSeq NCBI (значение e<0лог1 e<0лог1) BLASTX ਨੂੰ nr ਅਤੇ RefSeq NCBI ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਡੇਟਾਬੇਸ (e ਵੈਲਯੂ <1e-10 ਅਤੇ 60% ਸਮਰੂਪ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਗੈਰ-ਸਵੈ ਕੰਟਿਗਸ 'ਤੇ ਵੀ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਗੈਰ-ਸਵੈ-ਕੰਟਿਗਜ਼ ਦੇ BLASTN ਅਤੇ BLASTX ਪੂਲ ਅੰਤਮ ਕੰਟਿਗਸ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ (ਪੂਰਕ ਫਾਈਲ ਦੇਖੋ)।
PCR ਲਈ ਵਰਤੇ ਗਏ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਸਾਰਣੀ S1 ਵਿੱਚ ਸੂਚੀਬੱਧ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ।ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ (ਬਾਇਓ ਬੇਸਿਕ ਕੈਨੇਡਾ, ਮਾਰਖਮ, ਓਨ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਟੀਚੇ ਵਾਲੇ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਨਿਮਨਲਿਖਤ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ: 3 ਮਿੰਟ ਲਈ 95 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ, 1 ਮਿੰਟ ਲਈ 95 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ, 1 ਮਿੰਟ ਲਈ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਸੈੱਟ ਕਰੋ, 1 ਮਿੰਟ ਲਈ 72 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਲੰਬਾਈ, 35 ਚੱਕਰ, ਅਤੇ ਅੰਤ ਵਿੱਚ 10 ਮਿੰਟ ਦੇ ਅੰਦਰ 72 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ।.ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦਾਂ ਨੂੰ ਐਗਰੋਜ਼ ਜੈੱਲ (1.5%) ਵਿੱਚ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰਸਿਸ ਦੁਆਰਾ ਵੱਖ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ SYBRTM ਸੇਫ ਡੀਐਨਏ ਜੈੱਲ ਸਟੈਨ (ਇਨਵਿਟ੍ਰੋਜਨ, ਬਰਲਿੰਗਟਨ, ਓਨ, ਕੈਨੇਡਾ) 95 V 'ਤੇ ਸੀ।
ਮੱਸਲਜ਼ (ਮਾਈਟਿਲਸ ਐਸਪੀਪੀ.) ਨੂੰ 4 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 500 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਆਕਸੀਜਨ ਵਾਲੇ ਸਮੁੰਦਰੀ ਪਾਣੀ (32 PSU) ਵਿੱਚ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।190 μg/μl ਦੀ ਅੰਤਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਡੀਐਨਏ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਮਨੁੱਖੀ ਗੈਲੇਕਟਿਨ-7 ਸੀਡੀਐਨਏ ਕ੍ਰਮ (NCBI ਐਕਸੈਸ਼ਨ ਨੰਬਰ L07769) ਨੂੰ ਏਨਕੋਡਿੰਗ ਕਰਨ ਵਾਲਾ ਇੱਕ ਸੰਮਿਲਨ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਡੀਐਨਏ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਇੱਕੋ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਹੋਈਆਂ ਮੱਸਲਾਂ ਦਾ ਨਿਯੰਤਰਣ ਸੀ।ਤੀਜੇ ਨਿਯੰਤਰਣ ਟੈਂਕ ਵਿੱਚ ਮੱਸਲਾਂ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਡੀ.ਐਨ.ਏ.ਸਮੁੰਦਰੀ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਦੀ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕਰਨ ਲਈ, ਸਮੁੰਦਰੀ ਪਾਣੀ ਦੇ ਨਮੂਨੇ (20 μl; ਤਿੰਨ ਦੁਹਰਾਓ) ਦਰਸਾਏ ਸਮੇਂ 'ਤੇ ਹਰੇਕ ਟੈਂਕ ਤੋਂ ਲਏ ਗਏ ਸਨ।ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਡੀਐਨਏ ਟਰੇਸੇਬਿਲਟੀ ਲਈ, LB ਮੱਸਲਾਂ ਦੀ ਕਟਾਈ ਦਰਸਾਏ ਸਮੇਂ 'ਤੇ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਅਤੇ qPCR ਅਤੇ ddPCR ਦੁਆਰਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਸਮੁੰਦਰੀ ਪਾਣੀ ਦੀ ਉੱਚ ਨਮਕ ਸਮੱਗਰੀ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਸਾਰੇ ਪੀਸੀਆਰ ਅਸੈਸਾਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਪੀਸੀਆਰ ਗੁਣਵੱਤਾ ਵਾਲੇ ਪਾਣੀ (1:10) ਵਿੱਚ ਐਲੀਕੋਟਸ ਪੇਤਲੀ ਪੈ ਗਏ ਸਨ।
ਡਿਜੀਟਲ ਬੂੰਦ ਪੀਸੀਆਰ (ddPCR) BioRad QX200 ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ (ਮਿਸੀਸਾਗਾ, ਓਨਟਾਰੀਓ, ਕੈਨੇਡਾ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਸਰਵੋਤਮ ਤਾਪਮਾਨ (ਟੇਬਲ S1) ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਤਾਪਮਾਨ ਪ੍ਰੋਫਾਈਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ।QX200 ਡਰਾਪ ਜਨਰੇਟਰ (BioRad) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਤੁਪਕੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।ddPCR ਨੂੰ ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ: 5 ਮਿੰਟ ਲਈ 95°C, 30 ਸੈਕਿੰਡ ਲਈ 95°C ਦੇ 50 ਚੱਕਰ ਅਤੇ 30 ਸਕਿੰਟਾਂ ਲਈ 1 ਮਿੰਟ ਅਤੇ 72°C ਲਈ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ, 5 ਮਿੰਟ ਲਈ 4°C ਅਤੇ 5 ਮਿੰਟ ਦੇ ਅੰਦਰ 90°C।ਬੂੰਦਾਂ ਦੀ ਸੰਖਿਆ ਅਤੇ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ (ਕਾਪੀਆਂ/µl ਦੀ ਗਿਣਤੀ) ਨੂੰ ਇੱਕ QX200 ਡ੍ਰੌਪ ਰੀਡਰ (BioRad) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।10,000 ਤੋਂ ਘੱਟ ਬੂੰਦਾਂ ਵਾਲੇ ਨਮੂਨੇ ਰੱਦ ਕਰ ਦਿੱਤੇ ਗਏ ਸਨ।ਹਰ ਵਾਰ ddPCR ਚਲਾਏ ਜਾਣ 'ਤੇ ਪੈਟਰਨ ਕੰਟਰੋਲ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
qPCR ਰੋਟਰ-ਜੀਨ® 3000 (ਕਾਰਬੇਟ ਰਿਸਰਚ, ਸਿਡਨੀ, ਆਸਟ੍ਰੇਲੀਆ) ਅਤੇ LGALS7 ਖਾਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।QuantiFast SYBR ਗ੍ਰੀਨ ਪੀਸੀਆਰ ਕਿੱਟ (QIAGEN) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਸਾਰੇ ਮਾਤਰਾਤਮਕ PCRs 20 μl ਵਿੱਚ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।qPCR ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ 95°C 'ਤੇ 15 ਮਿੰਟ ਦੇ ਇਨਕਿਊਬੇਸ਼ਨ ਨਾਲ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਜਿਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ 40 ਚੱਕਰ 95°C 'ਤੇ 10 ਸਕਿੰਟਾਂ ਲਈ ਅਤੇ 60°C 'ਤੇ 60 ਸਕਿੰਟਾਂ ਲਈ ਇੱਕ ਡਾਟਾ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਪਿਘਲਣ ਵਾਲੇ ਵਕਰ 5 s ਲਈ 95°C, 60 s ਲਈ 65°C, ਅਤੇ qPCR ਦੇ ਅੰਤ 'ਤੇ 97°C 'ਤੇ ਲਗਾਤਾਰ ਮਾਪਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।ਨਿਯੰਤਰਣ ਦੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਛੱਡ ਕੇ, ਹਰੇਕ qPCR ਨੂੰ ਤਿੰਨ ਗੁਣਾਂ ਵਿੱਚ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਕਿਉਂਕਿ ਮੱਸਲ ਆਪਣੀ ਉੱਚ ਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਦਰ ਲਈ ਜਾਣੀਆਂ ਜਾਂਦੀਆਂ ਹਨ, ਅਸੀਂ ਪਹਿਲਾਂ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਕਿ ਕੀ ਉਹ ਸਮੁੰਦਰੀ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਫਿਲਟਰ ਅਤੇ ਬਰਕਰਾਰ ਰੱਖ ਸਕਦੇ ਹਨ ਜਾਂ ਨਹੀਂ।ਅਸੀਂ ਇਸ ਵਿੱਚ ਵੀ ਦਿਲਚਸਪੀ ਰੱਖਦੇ ਸੀ ਕਿ ਕੀ ਇਹ ਟੁਕੜੇ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਅਰਧ-ਖੁੱਲ੍ਹੇ ਲਿੰਫੈਟਿਕ ਸਿਸਟਮ ਵਿੱਚ ਇਕੱਠੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਅਸੀਂ ਨੀਲੇ ਮੱਸਲ ਟੈਂਕਾਂ ਵਿੱਚ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਕਿਸਮਤ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾ ਕੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇਸ ਮੁੱਦੇ ਨੂੰ ਹੱਲ ਕੀਤਾ।ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਟਰੈਕ ਕਰਨ ਦੀ ਸਹੂਲਤ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਮਨੁੱਖੀ ਗੈਲੇਕਟਿਨ-7 ਜੀਨ ਵਾਲੇ ਵਿਦੇਸ਼ੀ (ਸਵੈ ਨਹੀਂ) ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ।ddPCR ਸਮੁੰਦਰੀ ਪਾਣੀ ਅਤੇ ਮੱਸਲਾਂ ਵਿੱਚ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਸਾਡੇ ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਜੇ ਸਮੁੰਦਰੀ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਸਮੇਂ ਦੇ ਨਾਲ (7 ਦਿਨਾਂ ਤੱਕ) ਮੱਸਲਾਂ ਦੀ ਅਣਹੋਂਦ ਵਿੱਚ ਮੁਕਾਬਲਤਨ ਸਥਿਰ ਰਹੀ, ਤਾਂ ਮੱਸਲਾਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ ਇਹ ਪੱਧਰ 8 ਘੰਟਿਆਂ ਦੇ ਅੰਦਰ ਲਗਭਗ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਅਲੋਪ ਹੋ ਗਿਆ (ਚਿੱਤਰ 1a,b)।ਐਕਸੋਜੇਨਸ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜੇ 15 ਮਿੰਟ ਦੇ ਅੰਦਰ ਇੰਟਰਾਵਲਵੂਲਰ ਤਰਲ ਅਤੇ ਹੀਮੋਲਿੰਫ (ਚਿੱਤਰ 1c) ਵਿੱਚ ਆਸਾਨੀ ਨਾਲ ਖੋਜੇ ਗਏ ਸਨ।ਇਹ ਟੁਕੜੇ ਐਕਸਪੋਜਰ ਤੋਂ 4 ਘੰਟਿਆਂ ਬਾਅਦ ਵੀ ਖੋਜੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ।ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਸਬੰਧ ਵਿੱਚ ਇਹ ਫਿਲਟਰਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਅਤੇ ਐਲਗੀ [31] ਦੀ ਫਿਲਟਰਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨਾਲ ਤੁਲਨਾਯੋਗ ਹੈ।ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਮੱਸਲ ਆਪਣੇ ਤਰਲ ਕੰਪਾਰਟਮੈਂਟਾਂ ਵਿੱਚ ਵਿਦੇਸ਼ੀ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਫਿਲਟਰ ਅਤੇ ਇਕੱਠਾ ਕਰ ਸਕਦੀਆਂ ਹਨ।
ਸਮੁੰਦਰੀ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸਾਪੇਖਿਕ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ (A) ਜਾਂ ਮੱਸਲਾਂ ਦੀ ਗੈਰਹਾਜ਼ਰੀ (B) ਵਿੱਚ, ddPCR ਦੁਆਰਾ ਮਾਪਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।A ਵਿੱਚ, 75ਵੇਂ ਅਤੇ 25ਵੇਂ ਪਰਸੈਂਟਾਈਲ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਣ ਵਾਲੇ ਬਕਸਿਆਂ ਦੀਆਂ ਕਿਨਾਰਿਆਂ ਦੇ ਨਾਲ, ਨਤੀਜਿਆਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਵਜੋਂ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ।ਫਿੱਟ ਕੀਤਾ ਲਘੂਗਣਕ ਕਰਵ ਲਾਲ ਰੰਗ ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਅਤੇ ਸਲੇਟੀ ਵਿੱਚ ਛਾਇਆ ਖੇਤਰ 95% ਭਰੋਸੇ ਅੰਤਰਾਲ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।B ਵਿੱਚ, ਲਾਲ ਰੇਖਾ ਮੱਧਮਾਨ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਨੀਲੀ ਲਾਈਨ ਇੱਕਾਗਰਤਾ ਲਈ 95% ਵਿਸ਼ਵਾਸ ਅੰਤਰਾਲ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਹੈ।C ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸਮਿਆਂ 'ਤੇ ਮੱਸਲਾਂ ਦੇ ਹੇਮੋਲਿੰਫ ਅਤੇ ਵਾਲਵੂਲਰ ਤਰਲ ਵਿੱਚ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਡੀਐਨਏ ਦਾ ਇਕੱਠਾ ਹੋਣਾ।ਨਤੀਜੇ ਖੋਜੀਆਂ ਗਈਆਂ ਪੂਰੀਆਂ ਕਾਪੀਆਂ/mL (±SE) ਵਜੋਂ ਪੇਸ਼ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।
ਅੱਗੇ, ਅਸੀਂ ਕੇਰਗੁਲੇਨ ਟਾਪੂਆਂ 'ਤੇ ਮੱਸਲ ਦੇ ਬਿਸਤਰਿਆਂ ਤੋਂ ਇਕੱਠੀਆਂ ਕੀਤੀਆਂ ਮੱਸਲਾਂ ਵਿੱਚ ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਦੀ ਉਤਪਤੀ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ, ਸੀਮਤ ਮਾਨਵ-ਜਨਕ ਪ੍ਰਭਾਵ ਵਾਲੇ ਟਾਪੂਆਂ ਦਾ ਇੱਕ ਦੂਰ-ਦੁਰਾਡੇ ਸਮੂਹ।ਇਸ ਮੰਤਵ ਲਈ, ਮੱਸਲ ਹੀਮੋਲਿਫਸ ਤੋਂ ਸੀਸੀਸੀਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਨੁੱਖੀ ਸੀਸੀਸੀਡੀਐਨਏ [32, 33] ਨੂੰ ਸ਼ੁੱਧ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤੇ ਜਾਂਦੇ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੁਆਰਾ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ ਮੱਸਲਾਂ ਵਿੱਚ ਔਸਤ ਹੀਮੋਲਿੰਫ ccfDNA ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਘੱਟ ਮਾਈਕ੍ਰੋਗ੍ਰਾਮ ਪ੍ਰਤੀ ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਹੀਮੋਲਿੰਫ ਰੇਂਜ ਵਿੱਚ ਹੈ (ਵੇਖੋ ਟੇਬਲ S2, ਪੂਰਕ ਜਾਣਕਾਰੀ)।ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੀ ਇਹ ਸ਼੍ਰੇਣੀ ਸਿਹਤਮੰਦ ਲੋਕਾਂ (ਘੱਟ ਨੈਨੋਗ੍ਰਾਮ ਪ੍ਰਤੀ ਮਿਲੀਲੀਟਰ) ਨਾਲੋਂ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਮਾਮਲਿਆਂ ਵਿੱਚ, ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਵਿੱਚ, ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਦਾ ਪੱਧਰ ਕਈ ਮਾਈਕ੍ਰੋਗ੍ਰਾਮ ਪ੍ਰਤੀ ਮਿਲੀਲੀਟਰ [34, 35] ਤੱਕ ਪਹੁੰਚ ਸਕਦਾ ਹੈ।hemolymph ccfDNA ਦੇ ਆਕਾਰ ਦੀ ਵੰਡ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਇਹ ਟੁਕੜੇ 1000 bp ਤੋਂ 1000 bp ਤੱਕ ਦੇ ਆਕਾਰ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਵੱਖਰੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।5000 ਬੀਪੀ ਤੱਕ (ਚਿੱਤਰ 2)।ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਸਿਲਿਕਾ-ਅਧਾਰਤ QIAamp ਇਨਵੈਸਟੀਗੇਟਰ ਕਿੱਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ, ਇੱਕ ਵਿਧੀ ਜੋ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਫੋਰੈਂਸਿਕ ਵਿਗਿਆਨ ਵਿੱਚ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਜੋ ਕਿ ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ [36] ਸਮੇਤ ਘੱਟ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਵਾਲੇ ਡੀਐਨਏ ਨਮੂਨਿਆਂ ਤੋਂ ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਅਲੱਗ ਕਰਨ ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
ਮੱਸਲ ਹੀਮੋਲਿੰਫ ਦਾ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ccfDNA ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰਗਰਾਮ।ਨਿਊਕਲੀਓਸਨੈਪ ਪਲਾਜ਼ਮਾ ਕਿੱਟ (ਟਾਪ) ਅਤੇ QIAamp ਡੀਐਨਏ ਇਨਵੈਸਟੀਗੇਟਰ ਕਿੱਟ ਨਾਲ ਕੱਢਿਆ ਗਿਆ।ਬੀ ਵਾਇਲਨ ਪਲਾਟ ਮੱਸਲਾਂ ਵਿੱਚ ਹੀਮੋਲਿੰਫ ccfDNA ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ (±SE) ਦੀ ਵੰਡ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਕਾਲੀਆਂ ਅਤੇ ਲਾਲ ਰੇਖਾਵਾਂ ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਮੱਧ ਅਤੇ ਪਹਿਲੇ ਅਤੇ ਤੀਜੇ ਚੌਥਾਈ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀਆਂ ਹਨ।
ਮਨੁੱਖਾਂ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮੇਟਸ ਵਿੱਚ ਲਗਭਗ 1% ccfDNA ਦਾ ਇੱਕ ਵਿਦੇਸ਼ੀ ਸਰੋਤ ਹੈ [21, 37]।ਬਾਇਵਾਲਵਜ਼ ਦੀ ਅਰਧ-ਖੁੱਲੀ ਸੰਚਾਰ ਪ੍ਰਣਾਲੀ, ਮਾਈਕ੍ਰੋਬਾਇਲ-ਅਮੀਰ ਸਮੁੰਦਰੀ ਪਾਣੀ, ਅਤੇ ਮੱਸਲ ccfDNA ਦੇ ਆਕਾਰ ਦੀ ਵੰਡ ਦੇ ਮੱਦੇਨਜ਼ਰ, ਅਸੀਂ ਇਹ ਅਨੁਮਾਨ ਲਗਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਮੱਸਲ ਹੀਮੋਲਿੰਫ ccfDNA ਵਿੱਚ ਮਾਈਕ੍ਰੋਬਾਇਲ ਡੀਐਨਏ ਦਾ ਇੱਕ ਅਮੀਰ ਅਤੇ ਵਿਭਿੰਨ ਪੂਲ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਪਰਿਕਲਪਨਾ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਕੇਰਗੁਲੇਨ ਟਾਪੂਆਂ ਤੋਂ ਇਕੱਤਰ ਕੀਤੇ ਔਲਾਕੋਮਿਆ ਅਟਰਾ ਨਮੂਨਿਆਂ ਤੋਂ ਹੀਮੋਲਿਮਫ ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਕ੍ਰਮਬੱਧ ਕੀਤਾ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ 10 ਮਿਲੀਅਨ ਤੋਂ ਵੱਧ ਰੀਡ ਮਿਲੇ, ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ 97.6% ਨੇ ਗੁਣਵੱਤਾ ਨਿਯੰਤਰਣ ਪਾਸ ਕੀਤਾ।ਰੀਡਿੰਗਾਂ ਨੂੰ ਫਿਰ BLASTN ਅਤੇ NCBI ਬਾਇਵਾਲਵ ਡੇਟਾਬੇਸ (Fig. S1, ਪੂਰਕ ਜਾਣਕਾਰੀ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਸਵੈ ਅਤੇ ਗੈਰ-ਸਵੈ ਸਰੋਤਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਸ਼੍ਰੇਣੀਬੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਮਨੁੱਖਾਂ ਵਿੱਚ, ਪਰਮਾਣੂ ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਡੀਐਨਏ ਦੋਵੇਂ ਖੂਨ ਦੇ ਪ੍ਰਵਾਹ ਵਿੱਚ ਛੱਡੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ [38]।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਮੌਜੂਦਾ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਮੱਸਲਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਮਾਣੂ ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਦਾ ਵਿਸਥਾਰ ਵਿੱਚ ਵਰਣਨ ਕਰਨਾ ਸੰਭਵ ਨਹੀਂ ਸੀ, ਕਿਉਂਕਿ ਏ. ਅਟਰਾ ਜੀਨੋਮ ਨੂੰ ਕ੍ਰਮਬੱਧ ਜਾਂ ਵਰਣਨ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਅਸੀਂ ਬਾਇਵਲਵ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ (ਚਿੱਤਰ S2, ਪੂਰਕ ਜਾਣਕਾਰੀ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਆਪਣੇ ਮੂਲ ਦੇ ਕਈ ccfDNA ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਦੇ ਯੋਗ ਸੀ।ਅਸੀਂ ਉਹਨਾਂ ਏ. ਅਟਰਾ ਜੀਨਾਂ ਦੇ ਨਿਰਦੇਸ਼ਿਤ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਸਾਡੇ ਆਪਣੇ ਮੂਲ ਦੇ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕੀਤੀ (ਚਿੱਤਰ 3)।ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਇਹ ਦਿੱਤੇ ਗਏ ਕਿ ਏ. ਅਟਰਾ ਦਾ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਜੀਨੋਮ ਜਨਤਕ ਡੇਟਾਬੇਸ ਵਿੱਚ ਉਪਲਬਧ ਹੈ, ਕੋਈ ਵੀ ਏ. ਅਟਰਾ ਦੇ ਹੀਮੋਲਿੰਫ ਵਿੱਚ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਲਈ ਸਬੂਤ ਲੱਭ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ (ਚਿੱਤਰ 3) ਦੁਆਰਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।
ਏ. ਅਟਰਾ (ਲਾਲ ਬਿੰਦੀਆਂ - ਸਟਾਕ ਨੰਬਰ: SRX5705969) ਅਤੇ M. ਪਲੇਟੈਂਸਿਸ (ਨੀਲੇ ਬਿੰਦੀਆਂ - ਸਟਾਕ ਨੰਬਰ: SRX5705968) ਦੇ ਹੀਮੋਲਿੰਫ ਵਿੱਚ ਪੀਸੀਆਰ ਦੁਆਰਾ ਵਿਸਤ੍ਰਿਤ ਕਈ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਜੀਨ ਮੌਜੂਦ ਸਨ।ਬ੍ਰੈਟਨ ਐਟ ਅਲ., 2011 B ਤੋਂ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਚਿੱਤਰ ਏ. ਅਟਰਾ ਤੋਂ ਐਫਟੀਏ ਪੇਪਰ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈਮੋਲਿੰਫ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਦਾ ਪ੍ਰਸਾਰ।ਪੀਸੀਆਰ ਮਿਸ਼ਰਣ ਵਾਲੀ ਪੀਸੀਆਰ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਸਿੱਧਾ ਜੋੜਨ ਲਈ 3 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਪੰਚ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ।
ਸਮੁੰਦਰੀ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਭਰਪੂਰ ਮਾਈਕਰੋਬਾਇਲ ਸਮੱਗਰੀ ਨੂੰ ਦੇਖਦੇ ਹੋਏ, ਅਸੀਂ ਸ਼ੁਰੂ ਵਿੱਚ ਹੀਮੋਲਿੰਫ ਵਿੱਚ ਮਾਈਕਰੋਬਾਇਲ ਡੀਐਨਏ ਕ੍ਰਮਾਂ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ 'ਤੇ ਧਿਆਨ ਕੇਂਦਰਿਤ ਕੀਤਾ।ਅਜਿਹਾ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਦੋ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਰਣਨੀਤੀਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹਾਂ।ਪਹਿਲੀ ਰਣਨੀਤੀ ਵਿੱਚ ਕ੍ਰੇਕੇਨ 2 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ, ਇੱਕ ਐਲਗੋਰਿਦਮ-ਅਧਾਰਿਤ ਕ੍ਰਮ ਵਰਗੀਕਰਣ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ ਜੋ ਕਿ BLAST ਅਤੇ ਹੋਰ ਸਾਧਨਾਂ [28] ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਇੱਕ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਨਾਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਬਾਇਲ ਕ੍ਰਮ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।6719 ਤੋਂ ਵੱਧ ਰੀਡਜ਼ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਮੂਲ ਦੇ ਹੋਣ ਲਈ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ, ਜਦੋਂ ਕਿ 124 ਅਤੇ 64 ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਆਰਕੀਆ ਅਤੇ ਵਾਇਰਸ ਤੋਂ ਸਨ (ਚਿੱਤਰ 4)।ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਭਰਪੂਰ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੇ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਫਰਮੀਕਿਊਟਸ (46%), ਪ੍ਰੋਟੀਓਬੈਕਟੀਰੀਆ (27%), ਅਤੇ ਬੈਕਟੀਰੋਇਡੇਟਸ (17%) (ਚਿੱਤਰ 4a) ਸਨ।ਇਹ ਵੰਡ ਸਮੁੰਦਰੀ ਨੀਲੇ ਮੱਸਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਬਾਇਓਮ [39, 40] ਦੇ ਪਿਛਲੇ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨਾਲ ਇਕਸਾਰ ਹੈ।ਗਾਮਾਪ੍ਰੋਟੀਓਬੈਕਟੀਰੀਆ ਪ੍ਰੋਟੀਓਬੈਕਟੀਰੀਆ (44%) ਦੀ ਮੁੱਖ ਸ਼੍ਰੇਣੀ ਸੀ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਵਾਈਬ੍ਰੋਨਲਜ਼ (ਚਿੱਤਰ 4b) ਸ਼ਾਮਲ ਸਨ।ddPCR ਵਿਧੀ ਨੇ A. atra hemolymph (Fig. 4c) [41] ਦੇ ccfDNA ਵਿੱਚ Vibrio DNA ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕੀਤੀ।ccfDNA ਦੇ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੀ ਉਤਪਤੀ ਬਾਰੇ ਹੋਰ ਜਾਣਕਾਰੀ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ, ਇੱਕ ਵਾਧੂ ਪਹੁੰਚ ਅਪਣਾਈ ਗਈ ਸੀ (Fig. S2, ਪੂਰਕ ਜਾਣਕਾਰੀ)। ਇਸ ਕੇਸ ਵਿੱਚ, ਰੀਡਜ਼ ਕਿ ਓਵਰਲੈਪਡ ਨੂੰ ਪੇਅਰਡ-ਐਂਡ ਰੀਡਜ਼ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ BLASTN ਅਤੇ 1e−3 ਦਾ ਇੱਕ e ਮੁੱਲ ਅਤੇ > 90% ਸਮਰੂਪਤਾ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਕੱਟਆਫ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਸਵੈ (ਬਾਇਵਾਲਵ) ਜਾਂ ਗੈਰ-ਸਵੈ ਮੂਲ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਸ਼੍ਰੇਣੀਬੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਸ ਕੇਸ ਵਿੱਚ, ਰੀਡਜ਼ ਕਿ ਓਵਰਲੈਪਡ ਨੂੰ ਪੇਅਰਡ-ਐਂਡ ਰੀਡਜ਼ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ BLASTN ਅਤੇ 1e−3 ਦਾ ਇੱਕ e ਮੁੱਲ ਅਤੇ > 90% ਸਮਰੂਪਤਾ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਕੱਟਆਫ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਸਵੈ (ਬਾਇਵਾਲਵ) ਜਾਂ ਗੈਰ-ਸਵੈ ਮੂਲ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਸ਼੍ਰੇਣੀਬੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। В этом случае перекрывающиеся чтения были собраны как чтения с парными концами и были классифицированы как собраны как собраны ски) или чужие по происхождению с использованием BLASTN и значения e 1e-3 и отсечения с гомологией> 90%. ਇਸ ਕੇਸ ਵਿੱਚ, ਓਵਰਲੈਪਿੰਗ ਰੀਡਾਂ ਨੂੰ ਪੇਅਰਡ-ਐਂਡ ਰੀਡਜ਼ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ BLASTN ਅਤੇ 1e-3 ਦੇ e ਮੁੱਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਮੂਲ (ਬਾਈਵਾਲਵ) ਜਾਂ ਗੈਰ-ਮੂਲ ਵਜੋਂ ਸ਼੍ਰੇਣੀਬੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ > 90% ਸਮਰੂਪਤਾ ਦੇ ਨਾਲ ਕੱਟਆਫ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।在这种情况下，重叠的读数组装为配对末端读数，并使用BLASTN 和1e-3 的e 值和>90% 吪吀为自身（双壳类）或非自身来源.在 这种情况下，重叠读数组装为配末端读数，使用的使用的9e%0和匐和1和1使用 ਬਲਾਸਟਨ 和1>源性 的 分类 自身 （双 壳类） 非 自身。 .. . . . В этом случае перекрывающиеся чтения были собраны как чтения с парными концами и классифицированы как собственочеловыстеми. или несобственные по происхождению с использованием значений e BLASTN и 1e-3 и порога гомологии> 90%. ਇਸ ਕੇਸ ਵਿੱਚ, ਓਵਰਲੈਪਿੰਗ ਰੀਡਜ਼ ਨੂੰ ਪੇਅਰਡ-ਐਂਡ ਰੀਡਜ਼ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ e BLASTN ਅਤੇ 1e-3 ਮੁੱਲਾਂ ਅਤੇ ਇੱਕ ਸਮਰੂਪਤਾ ਥ੍ਰੈਸ਼ਹੋਲਡ> 90% ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਆਪਣੇ (ਬਾਈਵਾਲਵ) ਜਾਂ ਗੈਰ-ਮੌਲਿਕ ਵਜੋਂ ਸ਼੍ਰੇਣੀਬੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਕਿਉਂਕਿ ਏ. ਅਟਰਾ ਜੀਨੋਮ ਨੂੰ ਅਜੇ ਤੱਕ ਕ੍ਰਮਬੱਧ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ, ਅਸੀਂ ਮੇਗਾਹਿਟ ਨੈਕਸਟ ਜਨਰੇਸ਼ਨ ਸੀਕੁਏਂਸਿੰਗ (ਐਨਜੀਐਸ) ਅਸੈਂਬਲਰ ਦੀ ਡੀ ਨੋਵੋ ਅਸੈਂਬਲੀ ਰਣਨੀਤੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਹੈ।ਕੁੱਲ 147,188 ਕੰਟਿਗਸ ਦੀ ਪਛਾਣ ਮੂਲ ਦੇ ਨਿਰਭਰ (ਬਾਇਵਾਲਵ) ਵਜੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ।ਇਹਨਾਂ ਕੰਟਿਗਸ ਨੂੰ ਫਿਰ BLASTN ਅਤੇ BLASTX ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ 1e-10 ਦੇ ਈ-ਮੁੱਲਾਂ ਨਾਲ ਵਿਸਫੋਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਇਸ ਰਣਨੀਤੀ ਨੇ ਸਾਨੂੰ A. atra ccfDNA ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ 482 ਗੈਰ-ਬਾਈਵਾਲਵ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਦੀ ਇਜਾਜ਼ਤ ਦਿੱਤੀ।ਇਹਨਾਂ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਵਿੱਚੋਂ ਅੱਧੇ ਤੋਂ ਵੱਧ (57%) ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ, ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸਲਫੋਟ੍ਰੋਫਿਕ ਸਿਮਬੀਅਨਟਸ ਸਮੇਤ, ਅਤੇ ਗਿੱਲ ਸਿੰਬੀਅਨਟਸ ਸੋਲੇਮੀਆ ਵੇਲਮ (ਚਿੱਤਰ 5) ਤੋਂ।
ਕਿਸਮ ਦੇ ਪੱਧਰ 'ਤੇ ਸਾਪੇਖਿਕ ਭਰਪੂਰਤਾ।B ਦੋ ਮੁੱਖ ਫਾਈਲਾ (ਫਿਰਮੀਕਿਊਟਸ ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਓਬੈਕਟੀਰੀਆ) ਦੀ ਮਾਈਕਰੋਬਾਇਲ ਵਿਭਿੰਨਤਾ।ddPCR C Vibrio spp ਦਾ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਪ੍ਰਸਾਰਣ।A. 16S rRNA ਜੀਨ (ਨੀਲੇ) ਦੇ ਤਿੰਨ ਅਟਰਾ ਹੀਮੋਲਿੰਫਸ ਵਿੱਚ ਟੁਕੜੇ।
ਕੁੱਲ 482 ਇਕੱਠੀਆਂ ਕੀਤੀਆਂ ਕੰਟਿਗਜ਼ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਮੈਟਾਜੇਨੋਮਿਕ ਕੰਟਿਗ ਐਨੋਟੇਸ਼ਨਾਂ (ਪ੍ਰੋਕਾਰੀਓਟਸ ਅਤੇ ਯੂਕੇਰੀਓਟਸ) ਦੇ ਟੈਕਸੋਨੋਮਿਕ ਡਿਸਟ੍ਰੀਬਿਊਸ਼ਨ ਦਾ ਜਨਰਲ ਪ੍ਰੋਫਾਈਲ।B BLASTN ਅਤੇ BLASTX ਦੁਆਰਾ ਪਛਾਣੇ ਗਏ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੇ DNA ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਵਿਸਤ੍ਰਿਤ ਵੰਡ।
Kraken2 ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੇ ਇਹ ਵੀ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਮੱਸਲ ccfDNA ਵਿੱਚ ਪੁਰਾਤੱਤਵ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਯੂਰੀਆਰਚਾਇਓਟਾ (65%), ਕ੍ਰੇਨਾਰਚਿਓਟਾ (24%), ਅਤੇ ਥੌਰਮਾਰਚਿਓਟਾ (11%) (ਚਿੱਤਰ 6a) ਦੇ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜੇ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।ਯੂਰੀਆਰਚਾਇਓਟਾ ਅਤੇ ਕ੍ਰੇਨਾਰਚਿਓਟਾ ਤੋਂ ਲਏ ਗਏ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ, ਜੋ ਪਹਿਲਾਂ ਕੈਲੀਫੋਰਨੀਆ ਦੀਆਂ ਮੱਸਲਾਂ ਦੇ ਮਾਈਕਰੋਬਾਇਲ ਕਮਿਊਨਿਟੀ ਵਿੱਚ ਪਾਈ ਗਈ ਸੀ, ਨੂੰ ਹੈਰਾਨੀ ਨਹੀਂ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ [42]।ਹਾਲਾਂਕਿ Euryarchaeota ਅਕਸਰ ਅਤਿਅੰਤ ਸਥਿਤੀਆਂ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਹੁਣ ਇਹ ਮਾਨਤਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਹੈ ਕਿ Euryarchaeota ਅਤੇ Crenarcheota ਦੋਵੇਂ ਸਮੁੰਦਰੀ ਕ੍ਰਾਇਓਜੈਨਿਕ ਵਾਤਾਵਰਣ [43, 44] ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਆਮ ਪ੍ਰੋਕੈਰੀਓਟਸ ਵਿੱਚੋਂ ਹਨ।ਕੇਰਗੁਲੇਨ ਪਠਾਰ [45] 'ਤੇ ਹੇਠਲੇ ਲੀਕ ਤੋਂ ਵਿਆਪਕ ਮੀਥੇਨ ਲੀਕ ਹੋਣ ਦੀਆਂ ਤਾਜ਼ਾ ਰਿਪੋਰਟਾਂ ਅਤੇ ਕੇਰਗੁਲੇਨ ਟਾਪੂ [46] ਦੇ ਤੱਟ 'ਤੇ ਸੰਭਾਵਿਤ ਮਾਈਕ੍ਰੋਬਾਇਲ ਮੀਥੇਨ ਉਤਪਾਦਨ ਦੇ ਮੱਦੇਨਜ਼ਰ, ਮੱਸਲਾਂ ਵਿੱਚ ਮੀਥੇਨੋਜਨਿਕ ਸੂਖਮ ਜੀਵਾਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਹੈਰਾਨੀਜਨਕ ਨਹੀਂ ਹੈ।
ਸਾਡਾ ਧਿਆਨ ਫਿਰ ਡੀਐਨਏ ਵਾਇਰਸਾਂ ਤੋਂ ਰੀਡਿੰਗ ਵੱਲ ਚਲਾ ਗਿਆ।ਸਾਡੀ ਸਭ ਤੋਂ ਚੰਗੀ ਜਾਣਕਾਰੀ ਲਈ, ਇਹ ਮੱਸਲਾਂ ਦੀ ਵਾਇਰਸ ਸਮੱਗਰੀ ਦਾ ਪਹਿਲਾ ਟਾਰਗੇਟ ਅਧਿਐਨ ਹੈ।ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਉਮੀਦ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਸਾਨੂੰ ਬੈਕਟੀਰੀਓਫੇਜ (ਕੌਡੋਵਾਇਰਲਜ਼) (ਚਿੱਤਰ 6b) ਦੇ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜੇ ਮਿਲੇ ਹਨ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਸਭ ਤੋਂ ਆਮ ਵਾਇਰਲ ਡੀਐਨਏ ਨਿਊਕਲੀਓਸਾਈਟੋਵਾਇਰਸ ਦੇ ਇੱਕ ਫਾਈਲਮ ਤੋਂ ਆਉਂਦਾ ਹੈ, ਜਿਸਨੂੰ ਨਿਊਕਲੀ ਸਾਈਟੋਪਲਾਸਮਿਕ ਲਾਰਜ ਡੀਐਨਏ ਵਾਇਰਸ (NCLDV) ਵੀ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਕਿਸੇ ਵੀ ਵਾਇਰਸ ਦਾ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਡਾ ਜੀਨੋਮ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਫਾਈਲਮ ਦੇ ਅੰਦਰ, ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਡੀਐਨਏ ਕ੍ਰਮ ਮਿਮੀਮੀਡੋਵਾਇਰੀਡੇ (58%) ਅਤੇ ਪੋਕਸਵੀਰਿਡੇ (21%) ਪਰਿਵਾਰਾਂ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਹਨ, ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਦੇ ਕੁਦਰਤੀ ਮੇਜ਼ਬਾਨਾਂ ਵਿੱਚ ਵਰਟੀਬ੍ਰੇਟ ਅਤੇ ਆਰਥਰੋਪੋਡ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਇਹਨਾਂ ਡੀਐਨਏ ਕ੍ਰਮਾਂ ਦਾ ਇੱਕ ਛੋਟਾ ਜਿਹਾ ਅਨੁਪਾਤ ਜਾਣੇ-ਪਛਾਣੇ ਵਾਇਰੋਲੋਜੀਕਲ ਐਲਗੀ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਹੈ।ਸਮੁੰਦਰੀ ਯੂਕੇਰੀਓਟਿਕ ਐਲਗੀ ਨੂੰ ਸੰਕਰਮਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਕ੍ਰਮ ਪਾਂਡੋਰਾ ਵਾਇਰਸ ਤੋਂ ਵੀ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ, ਕਿਸੇ ਵੀ ਜਾਣੇ ਜਾਂਦੇ ਵਾਇਰਲ ਜਨਰੇ ਦੇ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਡੇ ਜੀਨੋਮ ਆਕਾਰ ਵਾਲਾ ਵਿਸ਼ਾਲ ਵਾਇਰਸ।ਦਿਲਚਸਪ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ, ਵਾਇਰਸ ਨਾਲ ਸੰਕਰਮਿਤ ਹੋਣ ਲਈ ਜਾਣੇ ਜਾਂਦੇ ਮੇਜ਼ਬਾਨਾਂ ਦੀ ਸੀਮਾ, ਜਿਵੇਂ ਹੀਮੋਲਿਮਫ ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਕ੍ਰਮ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਮੁਕਾਬਲਤਨ ਵੱਡੀ ਸੀ (ਚਿੱਤਰ S3, ਪੂਰਕ ਜਾਣਕਾਰੀ)।ਇਸ ਵਿੱਚ ਉਹ ਵਾਇਰਸ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਕੀੜੇ-ਮਕੌੜਿਆਂ ਨੂੰ ਸੰਕਰਮਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਬੈਕੁਲੋਵਿਰਿਡੇ ਅਤੇ ਇਰੀਡੋਵਿਰਿਡੇ, ਨਾਲ ਹੀ ਉਹ ਵਾਇਰਸ ਜੋ ਅਮੀਬਾ, ਐਲਗੀ ਅਤੇ ਰੀੜ੍ਹ ਦੀ ਹੱਡੀ ਨੂੰ ਸੰਕਰਮਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਸਾਨੂੰ ਪਿਥੋਵਾਇਰਸ ਸਾਈਬਰਿਕਮ ਜੀਨੋਮ ਨਾਲ ਮੇਲ ਖਾਂਦੇ ਕ੍ਰਮ ਵੀ ਮਿਲੇ ਹਨ।ਪਿਟੋਵਾਇਰਸ ("ਜ਼ੋਂਬੀ ਵਾਇਰਸ" ਵਜੋਂ ਵੀ ਜਾਣੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ) ਨੂੰ ਪਹਿਲਾਂ ਸਾਇਬੇਰੀਆ [47] ਵਿੱਚ 30,000 ਸਾਲ ਪੁਰਾਣੇ ਪਰਮਾਫ੍ਰੌਸਟ ਤੋਂ ਅਲੱਗ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਸਾਡੇ ਨਤੀਜੇ ਪਿਛਲੀਆਂ ਰਿਪੋਰਟਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਇਕਸਾਰ ਹਨ ਜੋ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਇਹਨਾਂ ਵਾਇਰਸਾਂ ਦੀਆਂ ਸਾਰੀਆਂ ਆਧੁਨਿਕ ਕਿਸਮਾਂ ਅਲੋਪ ਨਹੀਂ ਹਨ [48] ਅਤੇ ਇਹ ਵਾਇਰਸ ਦੂਰ-ਦੁਰਾਡੇ ਸਬ-ਬਰਕਟਿਕ ਸਮੁੰਦਰੀ ਵਾਤਾਵਰਣ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ।
ਅੰਤ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਇਹ ਦੇਖਣ ਲਈ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਕਿ ਕੀ ਅਸੀਂ ਹੋਰ ਬਹੁ-ਸੈਲੂਲਰ ਜਾਨਵਰਾਂ ਤੋਂ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਲੱਭ ਸਕਦੇ ਹਾਂ।BLASTN ਅਤੇ BLASTX ਦੁਆਰਾ nt, nr ਅਤੇ RefSeq ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀਆਂ (ਜੀਨੋਮਿਕ ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ) ਦੇ ਨਾਲ ਕੁੱਲ 482 ਵਿਦੇਸ਼ੀ ਕੰਟਿਗਸ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਸਾਡੇ ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਬਹੁ-ਸੈਲੂਲਰ ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ccfDNA ਦੇ ਵਿਦੇਸ਼ੀ ਟੁਕੜਿਆਂ ਵਿੱਚ ਹੱਡੀਆਂ ਦਾ ਡੀਐਨਏ ਪ੍ਰਮੁੱਖ ਹੈ (ਚਿੱਤਰ 5).ਕੀੜੇ-ਮਕੌੜਿਆਂ ਅਤੇ ਹੋਰ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ ਤੋਂ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਵੀ ਮਿਲੇ ਹਨ।ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਇੱਕ ਮੁਕਾਬਲਤਨ ਵੱਡੇ ਹਿੱਸੇ ਦੀ ਪਛਾਣ ਨਹੀਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ, ਸੰਭਵ ਤੌਰ 'ਤੇ ਭੂਮੀ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ [49] ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੇਟਾਬੇਸ ਵਿੱਚ ਵੱਡੀ ਗਿਣਤੀ ਵਿੱਚ ਸਮੁੰਦਰੀ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ ਦੀ ਘੱਟ ਪੇਸ਼ਕਾਰੀ ਦੇ ਕਾਰਨ।
ਵਰਤਮਾਨ ਪੇਪਰ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਐਲਬੀ ਸੰਕਲਪ ਨੂੰ ਮੱਸਲਾਂ 'ਤੇ ਲਾਗੂ ਕਰਦੇ ਹਾਂ, ਇਹ ਦਲੀਲ ਦਿੰਦੇ ਹੋਏ ਕਿ ਹੈਮੋਲਿਮਫ ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਸ਼ਾਟ ਕ੍ਰਮ ਸਮੁੰਦਰੀ ਤੱਟਵਰਤੀ ਵਾਤਾਵਰਣ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਦੀ ਰਚਨਾ ਦੀ ਸਮਝ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਅਸੀਂ ਦੇਖਿਆ ਹੈ ਕਿ 1) ਮੱਸਲ ਹੀਮੋਲਿੰਫ ਵਿੱਚ ਮੁਕਾਬਲਤਨ ਵੱਡੇ (~1-5 kb) ਘੁੰਮਣ ਵਾਲੇ DNA ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਮੁਕਾਬਲਤਨ ਉੱਚ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ (ਮਾਈਕ੍ਰੋਗ੍ਰਾਮ ਪੱਧਰ) ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ;2) ਇਹ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਸੁਤੰਤਰ ਅਤੇ ਗੈਰ-ਸੁਤੰਤਰ ਦੋਵੇਂ ਹਨ 3) ਇਹਨਾਂ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਵਿਦੇਸ਼ੀ ਸਰੋਤਾਂ ਵਿੱਚੋਂ, ਸਾਨੂੰ ਬੈਕਟੀਰੀਆ, ਪੁਰਾਤੱਤਵ ਅਤੇ ਵਾਇਰਲ ਡੀਐਨਏ, ਅਤੇ ਨਾਲ ਹੀ ਹੋਰ ਬਹੁ-ਸੈਲੂਲਰ ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ਡੀਐਨਏ ਮਿਲੇ ਹਨ;4) ਹੀਮੋਲਿੰਫ ਵਿੱਚ ਇਹਨਾਂ ਵਿਦੇਸ਼ੀ ccfDNA ਟੁਕੜਿਆਂ ਦਾ ਇਕੱਠਾ ਹੋਣਾ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਮੱਸਲਾਂ ਦੀ ਅੰਦਰੂਨੀ ਫਿਲਟਰਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਵਿੱਚ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਸਿੱਟੇ ਵਜੋਂ, ਸਾਡਾ ਅਧਿਐਨ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ LB ਦੀ ਧਾਰਨਾ, ਜੋ ਕਿ ਹੁਣ ਤੱਕ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਬਾਇਓਮੈਡੀਸਨ ਦੇ ਖੇਤਰ ਵਿੱਚ ਲਾਗੂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ, ਗਿਆਨ ਦੇ ਇੱਕ ਅਮੀਰ ਪਰ ਅਣਪਛਾਤੇ ਸਰੋਤ ਨੂੰ ਏਨਕੋਡ ਕਰਦੀ ਹੈ ਜਿਸਦੀ ਵਰਤੋਂ ਸੈਂਟੀਨਲ ਸਪੀਸੀਜ਼ ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਵਾਤਾਵਰਣ ਵਿਚਕਾਰ ਆਪਸੀ ਤਾਲਮੇਲ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਸਮਝਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।
ਪ੍ਰਾਈਮੇਟਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਚੂਹੇ, ਕੁੱਤੇ, ਬਿੱਲੀਆਂ ਅਤੇ ਘੋੜਿਆਂ [50, 51, 52] ਸਮੇਤ ਥਣਧਾਰੀ ਜੀਵਾਂ ਵਿੱਚ ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਅਲੱਗ-ਥਲੱਗ ਹੋਣ ਦੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਸਾਡੇ ਗਿਆਨ ਅਨੁਸਾਰ, ਸਾਡਾ ਅਧਿਐਨ ਓਪਨ ਸਰਕੂਲੇਸ਼ਨ ਸਿਸਟਮ ਦੇ ਨਾਲ ਸਮੁੰਦਰੀ ਸਪੀਸੀਜ਼ ਵਿੱਚ ccfDNA ਦੀ ਖੋਜ ਅਤੇ ਕ੍ਰਮ ਦੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕਰਨ ਵਾਲਾ ਪਹਿਲਾ ਅਧਿਐਨ ਹੈ।ਇਹ ਸਰੀਰਿਕ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਅਤੇ ਮੱਸਲਾਂ ਦੀ ਫਿਲਟਰ ਕਰਨ ਦੀ ਯੋਗਤਾ, ਘੱਟੋ-ਘੱਟ ਅੰਸ਼ਕ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਦੂਜੀਆਂ ਜਾਤੀਆਂ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰਣ ਦੇ ਵੱਖੋ-ਵੱਖਰੇ ਆਕਾਰ ਦੀਆਂ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਦੀ ਵਿਆਖਿਆ ਕਰ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਮਨੁੱਖਾਂ ਵਿੱਚ, ਖੂਨ ਵਿੱਚ ਘੁੰਮਣ ਵਾਲੇ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜੇ 150 ਤੋਂ 200 ਬੀਪੀ ਦੇ ਆਕਾਰ ਦੇ ਛੋਟੇ ਟੁਕੜੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।167 bp [34, 53] ਦੀ ਅਧਿਕਤਮ ਸਿਖਰ ਦੇ ਨਾਲ.ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦਾ ਇੱਕ ਛੋਟਾ ਪਰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹਿੱਸਾ 300 ਅਤੇ 500 bp ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਲਗਭਗ 5% 900 bp ਤੋਂ ਲੰਬੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।[54]।ਇਸ ਆਕਾਰ ਦੀ ਵੰਡ ਦਾ ਕਾਰਨ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਪਲਾਜ਼ਮਾ ਵਿੱਚ ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਦਾ ਮੁੱਖ ਸਰੋਤ ਸੈੱਲ ਦੀ ਮੌਤ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜਾਂ ਤਾਂ ਸੈੱਲ ਦੀ ਮੌਤ ਦੇ ਕਾਰਨ ਜਾਂ ਸਿਹਤਮੰਦ ਵਿਅਕਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਸੰਚਾਰਿਤ ਹੇਮਾਟੋਪੋਇਟਿਕ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਨੈਕਰੋਸਿਸ ਕਾਰਨ ਜਾਂ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਵਿੱਚ ਟਿਊਮਰ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਅਪੋਪਟੋਸਿਸ ਦੇ ਕਾਰਨ (ਜਿਸ ਨੂੰ ਸਰਕੂਲੇਟਿੰਗ ਟਿਊਮਰ ਡੀਐਨਏ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ)।, ctDNA).hemolymph ccfDNA ਦਾ ਆਕਾਰ ਵੰਡ ਜੋ ਅਸੀਂ ਮੱਸਲਾਂ ਵਿੱਚ ਪਾਇਆ ਹੈ, ਉਹ 1000 ਤੋਂ 5000 bp ਤੱਕ ਸੀ, ਜੋ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਮੱਸਲ ccfDNA ਦਾ ਇੱਕ ਵੱਖਰਾ ਮੂਲ ਹੈ।ਇਹ ਇੱਕ ਤਰਕਪੂਰਣ ਧਾਰਨਾ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਮੱਸਲਾਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਅਰਧ-ਖੁੱਲੀ ਨਾੜੀ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਉਹ ਮਾਈਕ੍ਰੋਬਾਇਲ ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਉੱਚ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਵਾਲੇ ਸਮੁੰਦਰੀ ਜਲ-ਵਾਤਾਵਰਣ ਵਿੱਚ ਰਹਿੰਦੇ ਹਨ।ਵਾਸਤਵ ਵਿੱਚ, ਬਾਹਰੀ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਸਾਡੇ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਦੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਮੱਸਲ ਸਮੁੰਦਰੀ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਇਕੱਠਾ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਘੱਟੋ ਘੱਟ ਕੁਝ ਘੰਟਿਆਂ ਬਾਅਦ ਉਹ ਸੈਲੂਲਰ ਅਪਟੇਕ ਅਤੇ/ਜਾਂ ਜਾਰੀ ਕੀਤੇ ਅਤੇ/ਜਾਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੰਸਥਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਸਟੋਰ ਕੀਤੇ ਜਾਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਵਿਗੜ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਦੁਰਲੱਭਤਾ (ਦੋਨੋ ਪ੍ਰੋਕੈਰੀਓਟਿਕ ਅਤੇ ਯੂਕੇਰੀਓਟਿਕ) ਦੇ ਮੱਦੇਨਜ਼ਰ, ਇੰਟਰਾਵਲਵੂਲਰ ਕੰਪਾਰਟਮੈਂਟਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਸਵੈ-ਸਰੋਤਾਂ ਦੇ ਨਾਲ-ਨਾਲ ਵਿਦੇਸ਼ੀ ਸਰੋਤਾਂ ਤੋਂ ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਘਟਾ ਦੇਵੇਗੀ।ਬਾਇਵਾਲਵ ਜਨਮਤ ਇਮਿਊਨਿਟੀ ਦੇ ਮਹੱਤਵ ਅਤੇ ਪ੍ਰਸਾਰਣ ਫੈਗੋਸਾਈਟਸ ਦੀ ਵੱਡੀ ਗਿਣਤੀ ਨੂੰ ਧਿਆਨ ਵਿੱਚ ਰੱਖਦੇ ਹੋਏ, ਅਸੀਂ ਅੱਗੇ ਇਹ ਅਨੁਮਾਨ ਲਗਾਇਆ ਕਿ ਵਿਦੇਸ਼ੀ ccfDNA ਵੀ ਸੂਖਮ ਜੀਵਾਣੂਆਂ ਅਤੇ/ਜਾਂ ਸੈਲੂਲਰ ਮਲਬੇ ਨੂੰ ਗ੍ਰਹਿਣ ਕਰਨ 'ਤੇ ਵਿਦੇਸ਼ੀ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਇਕੱਠਾ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਫੈਗੋਸਾਈਟਸ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਸਾਰਿਤ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਗਏ, ਸਾਡੇ ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਬਾਇਵਾਲਵ ਹੀਮੋਲਿੰਫ ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਅਣੂ ਜਾਣਕਾਰੀ ਦਾ ਇੱਕ ਵਿਲੱਖਣ ਭੰਡਾਰ ਹੈ ਅਤੇ ਇੱਕ ਸੈਂਟੀਨੇਲ ਸਪੀਸੀਜ਼ ਵਜੋਂ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਸਥਿਤੀ ਨੂੰ ਮਜ਼ਬੂਤ ​​​​ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਸਾਡਾ ਡੇਟਾ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਹੀਮੋਲਿੰਫ ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦਾ ਕ੍ਰਮ ਅਤੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਬੈਕਟੀਰੀਅਲ ਫਲੋਰਾ ਅਤੇ ਆਲੇ ਦੁਆਲੇ ਦੇ ਸਮੁੰਦਰੀ ਵਾਤਾਵਰਣ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਬਾਰੇ ਮੁੱਖ ਜਾਣਕਾਰੀ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਸ਼ਾਟ ਸੀਕੁਏਂਸਿੰਗ ਤਕਨੀਕਾਂ ਨੇ ਕਾਮੈਂਸਲ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਏ. ਅਟਰਾ ਗਿੱਲ ਦੇ ਕ੍ਰਮਾਂ ਦਾ ਖੁਲਾਸਾ ਕੀਤਾ ਹੈ ਜੋ ਕਿ ਜੇ ਰਵਾਇਤੀ 16S rRNA ਪਛਾਣ ਵਿਧੀਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ, ਤਾਂ ਇੱਕ ਹਵਾਲਾ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਪੱਖਪਾਤ ਦੇ ਕਾਰਨ ਖੁੰਝ ਜਾਂਦੀ।ਵਾਸਤਵ ਵਿੱਚ, Kerguelen ਵਿਖੇ ਇੱਕੋ ਮੱਸਲ ਪਰਤ ਵਿੱਚ M. platensis ਤੋਂ ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਗਏ LB ਡੇਟਾ ਦੀ ਸਾਡੀ ਵਰਤੋਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਗਿੱਲ-ਸਬੰਧਿਤ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਕ ਦੀ ਰਚਨਾ ਦੋਨਾਂ ਮੱਸਲ ਸਪੀਸੀਜ਼ (Fig. S4, ਪੂਰਕ ਜਾਣਕਾਰੀ) ਲਈ ਇੱਕੋ ਜਿਹੀ ਸੀ।ਦੋ ਜੈਨੇਟਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਮੱਸਲਾਂ ਦੀ ਇਹ ਸਮਾਨਤਾ ਕੇਰਗੁਲੇਨ [55, 56, 57, 58] ਦੇ ਠੰਡੇ, ਗੰਧਕ ਅਤੇ ਜਵਾਲਾਮੁਖੀ ਡਿਪਾਜ਼ਿਟ ਵਿੱਚ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੇ ਭਾਈਚਾਰਿਆਂ ਦੀ ਰਚਨਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਬਾਇਓਟਰਬੇਟਡ ਤੱਟਵਰਤੀ ਖੇਤਰਾਂ [59], ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪੋਰਟ-ਓ-ਫਰਾਂਸ ਦੇ ਤੱਟ ਤੋਂ ਮੱਸਲਾਂ ਦੀ ਕਟਾਈ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ ਗੰਧਕ-ਘਟਾਉਣ ਵਾਲੇ ਸੂਖਮ ਜੀਵਾਂ ਦੇ ਉੱਚ ਪੱਧਰਾਂ ਦਾ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਵਰਣਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।ਇਕ ਹੋਰ ਸੰਭਾਵਨਾ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਕਾਮੇਨਸਲ ਮੱਸਲ ਫਲੋਰਾ ਹਰੀਜੱਟਲ ਪ੍ਰਸਾਰਣ [60, 61] ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਸਮੁੰਦਰੀ ਵਾਤਾਵਰਣ, ਸਮੁੰਦਰੀ ਤਲਾ ਦੀ ਸਤ੍ਹਾ, ਅਤੇ ਮੱਸਲਾਂ ਵਿੱਚ ਸਹਿਜੀਵ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੀ ਰਚਨਾ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਸਬੰਧ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਹੋਰ ਖੋਜ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ।ਇਹ ਅਧਿਐਨ ਇਸ ਸਮੇਂ ਜਾਰੀ ਹਨ।
ਹੀਮੋਲਿੰਫ ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਅਤੇ ਇਕਾਗਰਤਾ, ਇਸਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਦੀ ਸੌਖ, ਅਤੇ ਤੇਜ਼ ਸ਼ਾਟਗਨ ਕ੍ਰਮ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦੇਣ ਲਈ ਉੱਚ ਗੁਣਵੱਤਾ ਸਮੁੰਦਰੀ ਤੱਟਵਰਤੀ ਵਾਤਾਵਰਣ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਵਿੱਚ ਜੈਵ ਵਿਭਿੰਨਤਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ ਮੱਸਲ ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੇ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਫਾਇਦੇ ਹਨ।ਇਹ ਪਹੁੰਚ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇੱਕ ਦਿੱਤੇ ਈਕੋਸਿਸਟਮ [62, 63] ਵਿੱਚ ਵਾਇਰਲ ਭਾਈਚਾਰਿਆਂ (ਵਾਇਰੋਮਜ਼) ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਲਈ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਹੈ।ਬੈਕਟੀਰੀਆ, ਆਰਕੀਆ, ਅਤੇ ਯੂਕੇਰੀਓਟਸ ਦੇ ਉਲਟ, ਵਾਇਰਲ ਜੀਨੋਮ ਵਿੱਚ ਫਾਈਲੋਜੈਨੇਟਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਜੀਨ ਸ਼ਾਮਲ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜਿਵੇਂ ਕਿ 16S ਕ੍ਰਮ।ਸਾਡੇ ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਸੂਚਕ ਸਪੀਸੀਜ਼ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਮੱਸਲ ਤੋਂ ਤਰਲ ਬਾਇਓਪਸੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਮੁਕਾਬਲਤਨ ਵੱਡੀ ਗਿਣਤੀ ਵਿੱਚ ccfDNA ਵਾਇਰਸ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ ਜੋ ਮੇਜ਼ਬਾਨਾਂ ਨੂੰ ਸੰਕਰਮਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਜਾਣੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ ਜੋ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਤੱਟਵਰਤੀ ਸਮੁੰਦਰੀ ਵਾਤਾਵਰਣ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਵਿੱਚ ਰਹਿੰਦੇ ਹਨ।ਇਸ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਟੋਜ਼ੋਆ, ਆਰਥਰੋਪੋਡਸ, ਕੀੜੇ-ਮਕੌੜੇ, ਪੌਦਿਆਂ ਅਤੇ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੇ ਵਾਇਰਸ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਬੈਕਟੀਰੀਓਫੇਜ) ਨੂੰ ਸੰਕਰਮਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਜਾਣੇ ਜਾਂਦੇ ਵਾਇਰਸ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ ਦੀ ਵੰਡ ਪਾਈ ਗਈ ਜਦੋਂ ਅਸੀਂ ਕੇਰਗੁਲੇਨ (ਟੇਬਲ S2, ਪੂਰਕ ਜਾਣਕਾਰੀ) ਵਿਖੇ ਉਸੇ ਮੱਸਲ ਪਰਤ ਵਿੱਚ ਇਕੱਤਰ ਕੀਤੇ ਨੀਲੇ ਮੱਸਲਜ਼ (ਐਮ. ਪਲੈਟੈਂਸਿਸ) ਦੇ ਹੀਮੋਲਿਮਫ ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਵਾਇਰੋਮ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ।ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸ਼ਾਟਗਨ ਸੀਕੈਂਸਿੰਗ ਅਸਲ ਵਿੱਚ ਮਨੁੱਖਾਂ ਜਾਂ ਹੋਰ ਸਪੀਸੀਜ਼ [21, 37, 64] ਦੇ ਵਾਇਰੋਮ ਦੇ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਗਤੀ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਵਾਲੀ ਇੱਕ ਨਵੀਂ ਪਹੁੰਚ ਹੈ।ਇਹ ਪਹੁੰਚ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਵਾਇਰਸਾਂ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕਰਨ ਲਈ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਤੌਰ 'ਤੇ ਲਾਭਦਾਇਕ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਬਾਲਟਿਮੋਰ [65] ਵਿੱਚ ਵਾਇਰਸਾਂ ਦੀ ਸਭ ਤੋਂ ਵਿਭਿੰਨ ਅਤੇ ਵਿਆਪਕ ਸ਼੍ਰੇਣੀ ਦੀ ਨੁਮਾਇੰਦਗੀ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਸਾਰੇ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਵਾਇਰਸਾਂ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਇੱਕ ਜੀਨ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਨਹੀਂ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ ਇਹਨਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਵਾਇਰਸ ਗੈਰ-ਵਰਗਿਤ ਰਹਿੰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਇਹਨਾਂ ਵਿੱਚ ਵਾਇਰਲ ਸੰਸਾਰ [66] ਦੇ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਅਣਜਾਣ ਹਿੱਸੇ ਦੇ ਵਾਇਰਸ ਸ਼ਾਮਲ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ ਏ. ਅਟਰਾ ਅਤੇ ਐੱਮ. ਪਲੈਟੈਂਸਿਸ ਦੇ ਵਾਇਰੋਮ ਅਤੇ ਹੋਸਟ ਰੇਂਜ ਦੋ ਸਪੀਸੀਜ਼ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਆਉਂਦੇ ਹਨ।ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ (ਵੇਖੋ ਚਿੱਤਰ S3, ਵਾਧੂ ਜਾਣਕਾਰੀ)।ਇਹ ਸਮਾਨਤਾ ਹੈਰਾਨੀਜਨਕ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਇਹ ਵਾਤਾਵਰਣ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਗ੍ਰਹਿਣ ਵਿੱਚ ਚੋਣਤਮਕਤਾ ਦੀ ਕਮੀ ਨੂੰ ਦਰਸਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਸ਼ੁੱਧ ਆਰਐਨਏ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਭਵਿੱਖ ਦੇ ਅਧਿਐਨਾਂ ਦੀ ਵਰਤਮਾਨ ਵਿੱਚ ਆਰਐਨਏ ਵਾਇਰੋਮ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਣ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ।
ਸਾਡੇ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਕੋਵਾਰਸਕੀ ਅਤੇ ਸਹਿਕਰਮੀਆਂ [37] ਦੇ ਕੰਮ ਤੋਂ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਇੱਕ ਬਹੁਤ ਹੀ ਸਖ਼ਤ ਪਾਈਪਲਾਈਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ, ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਨੇ ਮੂਲ ccfDNA ਦੀ ਅਸੈਂਬਲੀ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਅਤੇ ਬਾਅਦ ਵਿੱਚ ਪੂਲ ਕੀਤੇ ਰੀਡਜ਼ ਅਤੇ ਕੰਟਿਗਸ ਦੇ ਦੋ-ਪੜਾਅ ਨੂੰ ਮਿਟਾਉਣ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ, ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਅਣਮੈਪ ਕੀਤੇ ਰੀਡਜ਼ ਦਾ ਉੱਚ ਅਨੁਪਾਤ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਇਸ ਗੱਲ ਤੋਂ ਇਨਕਾਰ ਨਹੀਂ ਕਰ ਸਕਦੇ ਕਿ ਇਹਨਾਂ ਅਣ-ਮੈਪ ਕੀਤੇ ਰੀਡਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਕੁਝ ਦਾ ਅਜੇ ਵੀ ਆਪਣਾ ਮੂਲ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਕਿਉਂਕਿ ਸਾਡੇ ਕੋਲ ਇਸ ਮੱਸਲ ਸਪੀਸੀਜ਼ ਲਈ ਕੋਈ ਹਵਾਲਾ ਜੀਨੋਮ ਨਹੀਂ ਹੈ।ਅਸੀਂ ਇਸ ਪਾਈਪਲਾਈਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਵੀ ਕੀਤੀ ਕਿਉਂਕਿ ਅਸੀਂ ਸਵੈ ਅਤੇ ਗੈਰ-ਸਵੈ-ਪੜ੍ਹਨ ਅਤੇ Illumina MiSeq PE75 ਦੁਆਰਾ ਤਿਆਰ ਕੀਤੀ ਗਈ ਪੜ੍ਹਨ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਚੀਮੇਰਾ ਬਾਰੇ ਚਿੰਤਤ ਸੀ।ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਅਣਚਾਹੇ ਰੀਡਿੰਗਾਂ ਦਾ ਇੱਕ ਹੋਰ ਕਾਰਨ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਸਮੁੰਦਰੀ ਜੀਵਾਣੂਆਂ, ਖਾਸ ਕਰਕੇ ਕੇਰਗੁਲੇਨ ਵਰਗੇ ਦੂਰ-ਦੁਰਾਡੇ ਖੇਤਰਾਂ ਵਿੱਚ, ਐਨੋਟੇਟ ਨਹੀਂ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ।ਅਸੀਂ ਮਨੁੱਖੀ ccfDNA ਦੇ ਸਮਾਨ ccfDNA ਟੁਕੜੇ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਨੂੰ ਮੰਨਦੇ ਹੋਏ, Illumina MiSeq PE75 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ।ਭਵਿੱਖ ਦੇ ਅਧਿਐਨਾਂ ਲਈ, ਸਾਡੇ ਨਤੀਜੇ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹੋਏ ਕਿ hemolymph ccfDNA ਮਨੁੱਖਾਂ ਅਤੇ/ਜਾਂ ਥਣਧਾਰੀ ਜੀਵਾਂ ਨਾਲੋਂ ਜ਼ਿਆਦਾ ਪੜ੍ਹਦਾ ਹੈ, ਅਸੀਂ ਲੰਬੇ ccfDNA ਟੁਕੜਿਆਂ ਲਈ ਵਧੇਰੇ ਅਨੁਕੂਲ ਕ੍ਰਮਬੱਧ ਪਲੇਟਫਾਰਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕਰਦੇ ਹਾਂ।ਇਹ ਅਭਿਆਸ ਡੂੰਘੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਹੋਰ ਸੰਕੇਤਾਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨਾ ਬਹੁਤ ਸੌਖਾ ਬਣਾ ਦੇਵੇਗਾ।ਵਰਤਮਾਨ ਵਿੱਚ ਅਣਉਪਲਬਧ ਸੰਪੂਰਨ A. ਅਟਰਾ ਪਰਮਾਣੂ ਜੀਨੋਮ ਕ੍ਰਮ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਨਾਲ ਸਵੈ ਅਤੇ ਗੈਰ-ਸਵੈ ਸਰੋਤਾਂ ਤੋਂ ccfDNA ਦੇ ਵਿਤਕਰੇ ਨੂੰ ਵੀ ਬਹੁਤ ਆਸਾਨ ਬਣਾਇਆ ਜਾਵੇਗਾ।ਇਹ ਦੇਖਦੇ ਹੋਏ ਕਿ ਸਾਡੀ ਖੋਜ ਨੇ ਮੱਸਲਾਂ ਲਈ ਤਰਲ ਬਾਇਓਪਸੀ ਦੀ ਧਾਰਨਾ ਨੂੰ ਲਾਗੂ ਕਰਨ ਦੀ ਸੰਭਾਵਨਾ 'ਤੇ ਕੇਂਦ੍ਰਤ ਕੀਤਾ ਹੈ, ਅਸੀਂ ਉਮੀਦ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਇਹ ਸੰਕਲਪ ਭਵਿੱਖ ਦੀ ਖੋਜ ਵਿੱਚ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਨਵੇਂ ਟੂਲ ਅਤੇ ਪਾਈਪਲਾਈਨਾਂ ਇਸ ਵਿਧੀ ਦੀ ਸੰਭਾਵਨਾ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਮੱਸਲਾਂ ਦੀ ਮਾਈਕਰੋਬਾਇਲ ਵਿਭਿੰਨਤਾ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕਰਨ ਲਈ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤੀਆਂ ਜਾਣਗੀਆਂ।ਸਮੁੰਦਰੀ ਵਾਤਾਵਰਣ.
ਇੱਕ ਗੈਰ-ਹਮਲਾਵਰ ਕਲੀਨਿਕਲ ਬਾਇਓਮਾਰਕਰ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ, ccfDNA ਦੇ ਉੱਚੇ ਮਨੁੱਖੀ ਪਲਾਜ਼ਮਾ ਪੱਧਰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਬਿਮਾਰੀਆਂ, ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਨੁਕਸਾਨ, ਅਤੇ ਤਣਾਅ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ [67,68,69] ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਹੋਏ ਹਨ।ਇਹ ਵਾਧਾ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਨੁਕਸਾਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਇਸਦੇ ਆਪਣੇ ਮੂਲ ਦੇ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਰਿਹਾਈ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ।ਅਸੀਂ ਇਸ ਮੁੱਦੇ ਨੂੰ ਤੀਬਰ ਗਰਮੀ ਦੇ ਤਣਾਅ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਸੰਬੋਧਿਤ ਕੀਤਾ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਮੱਸਲਾਂ ਨੂੰ 30 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ ਵਿੱਚ ਸੰਖੇਪ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਸਾਹਮਣਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਅਸੀਂ ਇਹ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਤਿੰਨ ਸੁਤੰਤਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ ਤਿੰਨ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਕਿਸਮਾਂ ਦੀਆਂ ਮੱਸਲਾਂ 'ਤੇ ਕੀਤਾ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਸਾਨੂੰ ਤੀਬਰ ਗਰਮੀ ਦੇ ਤਣਾਅ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ccfDNA ਪੱਧਰਾਂ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਬਦਲਾਅ ਨਹੀਂ ਮਿਲਿਆ (ਵੇਖੋ ਚਿੱਤਰ S5, ਵਾਧੂ ਜਾਣਕਾਰੀ)।ਇਹ ਖੋਜ, ਘੱਟੋ-ਘੱਟ ਅੰਸ਼ਕ ਰੂਪ ਵਿੱਚ, ਇਸ ਤੱਥ ਦੀ ਵਿਆਖਿਆ ਕਰ ਸਕਦੀ ਹੈ ਕਿ ਮੱਸਲਾਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਅਰਧ-ਖੁੱਲੀ ਸੰਚਾਰ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਉੱਚ ਫਿਲਟਰਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੇ ਕਾਰਨ ਵੱਡੀ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਵਿਦੇਸ਼ੀ ਡੀਐਨਏ ਇਕੱਠਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਦੂਜੇ ਪਾਸੇ, ਮੱਸਲ, ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਇਨਵਰਟੇਬਰੇਟਸ ਵਾਂਗ, ਤਣਾਅ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਨੁਕਸਾਨ ਲਈ ਵਧੇਰੇ ਰੋਧਕ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਹੀਮੋਲਿੰਫ [70, 71] ਵਿੱਚ ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਦੀ ਰਿਹਾਈ ਨੂੰ ਸੀਮਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਅੱਜ ਤੱਕ, ਜਲਵਾਸੀ ਵਾਤਾਵਰਣ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਵਿੱਚ ਜੈਵ ਵਿਭਿੰਨਤਾ ਦੇ ਡੀਐਨਏ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੇ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਾਤਾਵਰਨ ਡੀਐਨਏ (ਈਡੀਐਨਏ) ਮੈਟਾਬਾਰਕੋਡਿੰਗ 'ਤੇ ਕੇਂਦ੍ਰਤ ਕੀਤਾ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਹ ਵਿਧੀ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਜੈਵ ਵਿਭਿੰਨਤਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵਿੱਚ ਸੀਮਤ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਜਦੋਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਵਰਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।ਸ਼ਾਟਗਨ ਕ੍ਰਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਪੀਸੀਆਰ ਦੀਆਂ ਸੀਮਾਵਾਂ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਸੈੱਟਾਂ ਦੀ ਪੱਖਪਾਤੀ ਚੋਣ ਨੂੰ ਰੋਕਦੀ ਹੈ।ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਇੱਕ ਅਰਥ ਵਿੱਚ, ਸਾਡੀ ਵਿਧੀ ਹਾਲ ਹੀ ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਗਏ ਉੱਚ-ਥਰੂਪੁਟ ਈਡੀਐਨਏ ਸ਼ਾਟਗਨ ਕ੍ਰਮ ਵਿਧੀ ਦੇ ਨੇੜੇ ਹੈ, ਜੋ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਖੰਡਿਤ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਕ੍ਰਮਬੱਧ ਕਰਨ ਅਤੇ ਲਗਭਗ ਸਾਰੇ ਜੀਵਾਂ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕਰਨ ਦੇ ਯੋਗ ਹੈ [72, 73]।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇੱਥੇ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਬੁਨਿਆਦੀ ਮੁੱਦੇ ਹਨ ਜੋ LB ਨੂੰ ਮਿਆਰੀ eDNA ਵਿਧੀਆਂ ਤੋਂ ਵੱਖ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਬੇਸ਼ੱਕ, eDNA ਅਤੇ LB ਵਿਚਕਾਰ ਮੁੱਖ ਅੰਤਰ ਕੁਦਰਤੀ ਫਿਲਟਰ ਹੋਸਟਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਹੈ।ਈਡੀਐਨਏ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਕੁਦਰਤੀ ਫਿਲਟਰ ਵਜੋਂ ਸਮੁੰਦਰੀ ਸਪੀਸੀਜ਼ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਸਪੰਜ ਅਤੇ ਬਾਇਵਾਲਵਜ਼ (ਡਰੈਸੀਨਾ ਐਸਪੀਪੀ.) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਦੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ [74, 75]।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਡਰੀਸੇਨਾ ਦੇ ਅਧਿਐਨ ਨੇ ਟਿਸ਼ੂ ਬਾਇਓਪਸੀਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਿਸ ਤੋਂ ਡੀਐਨਏ ਕੱਢਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।LB ਤੋਂ ccfDNA ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਈਡੀਐਨਏ ਜਾਂ ਟਿਸ਼ੂ ਬਾਇਓਪਸੀ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਟਿਸ਼ੂ ਬਾਇਓਪਸੀ, ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਅਤੇ ਕਈ ਵਾਰ ਮਹਿੰਗੇ ਸਾਜ਼ੋ-ਸਾਮਾਨ ਅਤੇ ਲੌਜਿਸਟਿਕਸ ਦੀ ਲੋੜ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਵਾਸਤਵ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਹਾਲ ਹੀ ਵਿੱਚ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਹੈ ਕਿ LB ਤੋਂ ccfDNA ਨੂੰ ਕੋਲਡ ਚੇਨ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣ ਦੇ ਬਿਨਾਂ FTA ਸਹਾਇਤਾ ਨਾਲ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਰਿਮੋਟ ਖੇਤਰਾਂ ਵਿੱਚ ਖੋਜ ਲਈ ਇੱਕ ਵੱਡੀ ਚੁਣੌਤੀ ਹੈ [76]।ਤਰਲ ਬਾਇਓਪਸੀਜ਼ ਤੋਂ ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਕੱਢਣਾ ਵੀ ਸਧਾਰਨ ਹੈ ਅਤੇ ਸ਼ਾਟਗਨ ਕ੍ਰਮ ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਉੱਚ ਗੁਣਵੱਤਾ ਵਾਲੇ ਡੀਐਨਏ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਈਡੀਐਨਏ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ [77] ਨਾਲ ਜੁੜੀਆਂ ਕੁਝ ਤਕਨੀਕੀ ਕਮੀਆਂ ਦੇ ਕਾਰਨ ਇਹ ਇੱਕ ਬਹੁਤ ਵੱਡਾ ਫਾਇਦਾ ਹੈ।ਸੈਂਪਲਿੰਗ ਵਿਧੀ ਦੀ ਸਾਦਗੀ ਅਤੇ ਘੱਟ ਲਾਗਤ ਵੀ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਦੇ ਨਿਗਰਾਨੀ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮਾਂ ਲਈ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਤੌਰ 'ਤੇ ਢੁਕਵੀਂ ਹੈ।ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਉੱਚ ਫਿਲਟਰਿੰਗ ਸਮਰੱਥਾ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਬਾਇਵਾਲਵਜ਼ ਦੀ ਇੱਕ ਹੋਰ ਜਾਣੀ-ਪਛਾਣੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਬਲਗ਼ਮ ਦੀ ਰਸਾਇਣਕ ਮਿਉਕੋਪੋਲੀਸੈਕਰਾਈਡ ਰਚਨਾ ਹੈ, ਜੋ ਵਾਇਰਸਾਂ [78, 79] ਦੇ ਸਮਾਈ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ।ਇਹ ਬਾਇਵਾਲਵਸ ਨੂੰ ਜੈਵਿਕ ਵਿਭਿੰਨਤਾ ਅਤੇ ਇੱਕ ਦਿੱਤੇ ਜਲਵਾਸੀ ਈਕੋਸਿਸਟਮ ਵਿੱਚ ਜਲਵਾਯੂ ਤਬਦੀਲੀ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਣ ਲਈ ਇੱਕ ਆਦਰਸ਼ ਕੁਦਰਤੀ ਫਿਲਟਰ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ ਮੇਜ਼ਬਾਨ-ਪ੍ਰਾਪਤ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਨੂੰ ਈਡੀਐਨਏ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ ਵਿਧੀ ਦੀ ਇੱਕ ਸੀਮਾ ਵਜੋਂ ਦੇਖਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਈਡੀਐਨਏ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ ਅਜਿਹੇ ਇੱਕ ਮੂਲ ccfDNA ਹੋਣ ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਿਤ ਲਾਗਤ ਸਿਹਤ ਅਧਿਐਨਾਂ ਲਈ ਉਪਲਬਧ ਵੱਡੀ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਜਾਣਕਾਰੀ ਲਈ ਇੱਕੋ ਸਮੇਂ ਸਮਝਣ ਯੋਗ ਹੈ।ਆਫਸੈੱਟ ਹੋਸਟ.ਇਸ ਵਿੱਚ ਹੋਸਟ ਹੋਸਟ ਦੇ ਜੀਨੋਮ ਵਿੱਚ ਏਕੀਕ੍ਰਿਤ ਵਾਇਰਲ ਕ੍ਰਮ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ।ਇਹ ਮੱਸਲਾਂ ਲਈ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ, ਬਾਇਵਾਲਵ [80, 81] ਵਿੱਚ ਖਿਤਿਜੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਸਾਰਿਤ ਲਿਊਕੇਮਿਕ ਰੀਟਰੋਵਾਇਰਸ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਦੇ ਮੱਦੇਨਜ਼ਰ.ਈਡੀਐਨਏ ਉੱਤੇ ਐਲਬੀ ਦਾ ਇੱਕ ਹੋਰ ਫਾਇਦਾ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਇਹ ਹੇਮੋਲਿੰਫ ਵਿੱਚ ਖੂਨ ਦੇ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਸੰਚਾਰਿਤ ਕਰਨ ਦੀ ਫਾਗੋਸਾਈਟਿਕ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦਾ ਸ਼ੋਸ਼ਣ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਸੂਖਮ ਜੀਵਾਂ (ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਜੀਨੋਮ) ਨੂੰ ਘੇਰ ਲੈਂਦਾ ਹੈ।ਫਾਗੋਸਾਈਟੋਸਿਸ ਬਾਇਵਾਲਵ [82] ਵਿੱਚ ਖੂਨ ਦੇ ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਮੁੱਖ ਕੰਮ ਹੈ।ਅੰਤ ਵਿੱਚ, ਵਿਧੀ ਮੱਸਲਾਂ ਦੀ ਉੱਚ ਫਿਲਟਰਿੰਗ ਸਮਰੱਥਾ (ਸਮੁੰਦਰੀ ਪਾਣੀ ਦੀ ਔਸਤ 1.5 l/h) ਅਤੇ ਦੋ-ਦਿਨ ਸਰਕੂਲੇਸ਼ਨ ਦਾ ਫਾਇਦਾ ਉਠਾਉਂਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਸਮੁੰਦਰੀ ਪਾਣੀ ਦੀਆਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪਰਤਾਂ ਦੇ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਹੇਟਰੋਲੋਗਸ ਈਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਫੜਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।[83, 84]।ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਮੱਸਲ ccfDNA ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਮੱਸਲ ਦੇ ਪੌਸ਼ਟਿਕ, ਆਰਥਿਕ, ਅਤੇ ਵਾਤਾਵਰਣਕ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਦੇ ਮੱਦੇਨਜ਼ਰ ਇੱਕ ਦਿਲਚਸਪ ਤਰੀਕਾ ਹੈ।ਮਨੁੱਖਾਂ ਤੋਂ ਇਕੱਤਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਐਲਬੀ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੇ ਸਮਾਨ, ਇਹ ਵਿਧੀ ਬਾਹਰੀ ਪਦਾਰਥਾਂ ਦੇ ਜਵਾਬ ਵਿੱਚ ਹੋਸਟ ਡੀਐਨਏ ਵਿੱਚ ਜੈਨੇਟਿਕ ਅਤੇ ਐਪੀਜੀਨੇਟਿਕ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਨੂੰ ਮਾਪਣ ਦੀ ਸੰਭਾਵਨਾ ਨੂੰ ਵੀ ਖੋਲ੍ਹਦੀ ਹੈ।ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਨੈਨੋਪੋਰ ਸੀਕੁਏਂਸਿੰਗ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਨੇਟਿਵ ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਵਿੱਚ ਜੀਨੋਮ-ਵਿਆਪਕ ਮੈਥਾਈਲੇਸ਼ਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕਰਨ ਲਈ ਤੀਜੀ-ਪੀੜ੍ਹੀ ਦੀ ਕ੍ਰਮਬੱਧ ਤਕਨੀਕਾਂ ਦੀ ਕਲਪਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਇਹ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਇਸ ਤੱਥ ਦੁਆਰਾ ਸੁਤਨੀ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ ਕਿ ਮੱਸਲ ਸੀਸੀਐਫਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਲਾਇਸੈਂਸਿੰਗ .85,86] ਇਹ ਇਕ ਉੱਚਿਤ ਸੰਭਾਵਨਾ ਨੂੰ ਇਕੱਤਰ ਕਰਨ ਵਾਲੀ ਸੰਭਾਵਨਾ ਹੈ ਜੋ ਕਿ ਵਨੋਮ-ਵਾਈਡ ਡੀਐਨਏ ਮਿਥਟੀਲੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਵਾਤਾਵਰਣ ਦੇ ਤਣਾਅ ਦਾ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਹੈ ਅਤੇ ਬਹੁਤ ਸਾਰੀਆਂ ਪੀੜ੍ਹੀਆਂ ਨੂੰ ਜਾਰੀ ਰੱਖਦੀ ਹੈ.ਇਸਲਈ, ਇਹ ਜਲਵਾਯੂ ਪਰਿਵਰਤਨ ਜਾਂ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਕਾਂ [87] ਦੇ ਸੰਪਰਕ ਵਿੱਚ ਆਉਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਅੰਤਰੀਵ ਵਿਧੀਆਂ ਵਿੱਚ ਕੀਮਤੀ ਸਮਝ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, LB ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਸੀਮਾਵਾਂ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਨਹੀਂ ਹੈ.ਇਹ ਕਹਿਣ ਦੀ ਜ਼ਰੂਰਤ ਨਹੀਂ, ਇਸ ਲਈ ਈਕੋਸਿਸਟਮ ਵਿੱਚ ਸੂਚਕ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ।ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਉੱਪਰ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਇੱਕ ਦਿੱਤੇ ਈਕੋਸਿਸਟਮ ਦੀ ਜੈਵ ਵਿਭਿੰਨਤਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ LB ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਸਖ਼ਤ ਬਾਇਓਇਨਫੋਰਮੈਟਿਕਸ ਪਾਈਪਲਾਈਨ ਦੀ ਵੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਜੋ ਸਰੋਤ ਤੋਂ DNA ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਨੂੰ ਧਿਆਨ ਵਿੱਚ ਰੱਖਦੀ ਹੈ।ਇੱਕ ਹੋਰ ਵੱਡੀ ਸਮੱਸਿਆ ਸਮੁੰਦਰੀ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ ਲਈ ਹਵਾਲਾ ਜੀਨੋਮ ਦੀ ਉਪਲਬਧਤਾ ਹੈ।ਇਹ ਉਮੀਦ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਕਿ ਸਮੁੰਦਰੀ ਥਣਧਾਰੀ ਜੀਨੋਮਜ਼ ਪ੍ਰੋਜੈਕਟ ਅਤੇ ਹਾਲ ਹੀ ਵਿੱਚ ਸਥਾਪਿਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਫਿਸ਼10k ਪ੍ਰੋਜੈਕਟ [88] ਵਰਗੀਆਂ ਪਹਿਲਕਦਮੀਆਂ ਭਵਿੱਖ ਵਿੱਚ ਅਜਿਹੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੀ ਸਹੂਲਤ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਨਗੀਆਂ।ਸਮੁੰਦਰੀ ਫਿਲਟਰ-ਫੀਡਿੰਗ ਜੀਵਾਣੂਆਂ ਲਈ ਐਲਬੀ ਸੰਕਲਪ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕ੍ਰਮਬੱਧ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਵਿੱਚ ਨਵੀਨਤਮ ਤਰੱਕੀ ਦੇ ਨਾਲ ਵੀ ਅਨੁਕੂਲ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਇਹ ਵਾਤਾਵਰਣ ਦੇ ਤਣਾਅ ਦੇ ਜਵਾਬ ਵਿੱਚ ਸਮੁੰਦਰੀ ਨਿਵਾਸ ਸਥਾਨਾਂ ਦੀ ਸਿਹਤ ਬਾਰੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਜਾਣਕਾਰੀ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਨ ਲਈ ਮਲਟੀ-ਓਮ ਬਾਇਓਮਾਰਕਰਾਂ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਲਈ ਅਨੁਕੂਲ ਹੈ।
ਜੀਨੋਮ ਸੀਕੁਏਂਸਿੰਗ ਡੇਟਾ ਨੂੰ ਬਾਇਓਪ੍ਰੋਜੈਕਟਸ SRR8924808 ਦੇ ਤਹਿਤ NCBI ਕ੍ਰਮ ਰੀਡ ਆਰਕਾਈਵ https://www.ncbi.nlm.nih.gov/sra/SRR8924808 ਵਿੱਚ ਜਮ੍ਹਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।
ਬ੍ਰੀਅਰਲੇ ਏਐਸ, ਕਿੰਗਸਫੋਰਡ ਐਮਜੇ ਸਮੁੰਦਰੀ ਜੀਵਨ ਅਤੇ ਵਾਤਾਵਰਣ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ 'ਤੇ ਜਲਵਾਯੂ ਤਬਦੀਲੀ ਦਾ ਪ੍ਰਭਾਵ।ਕੋਲ ਬਾਇਓਲੋਜੀ.2009;19: P602–P614।
Gissi E, Manea E, Mazaris AD, Fraschetti S, Almpanidou V, Bevilacqua S, et al.ਜਲਵਾਯੂ ਤਬਦੀਲੀ ਅਤੇ ਸਮੁੰਦਰੀ ਵਾਤਾਵਰਣ 'ਤੇ ਹੋਰ ਸਥਾਨਕ ਤਣਾਅ ਦੇ ਸੰਯੁਕਤ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ 'ਤੇ ਵਿਚਾਰ ਕਰੋ।ਆਮ ਵਿਗਿਆਨਕ ਵਾਤਾਵਰਣ.2021;755:142564।
Carella F, Antuofermo E, Farina S, Salati F, Mandas D, Prado P, et al.).ਪਹਿਲੀ ਮਾਰਚ ਦਾ ਵਿਗਿਆਨ.2020; 7:48।
Seront L, Nicastro CR, Zardi GI, Goberville E. ਦੁਹਰਾਉਣ ਵਾਲੀ ਗਰਮੀ ਦੇ ਤਣਾਅ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਘੱਟ ਗਰਮੀ ਸਹਿਣਸ਼ੀਲਤਾ ਨੀਲੀ ਮੱਸਲਾਂ ਦੀ ਉੱਚ ਗਰਮੀਆਂ ਦੀ ਮੌਤ ਦਰ ਦੀ ਵਿਆਖਿਆ ਕਰਦੀ ਹੈ।ਵਿਗਿਆਨਕ ਰਿਪੋਰਟ 2019;9:17498
Fey SB, Siepielski AM, Nussle S, Cervantes-Yoshida K, Hwan JL, Huber ER, et al.ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੀ ਮੌਤ ਦੀ ਬਾਰੰਬਾਰਤਾ, ਕਾਰਨਾਂ ਅਤੇ ਹੱਦ ਵਿੱਚ ਹਾਲੀਆ ਤਬਦੀਲੀਆਂ।Proc Natl Acad Sci USA.2015;112:1083-8.
ਸਕਾਰਪਾ ਐਫ, ਸਨਾ ਡੀ, ਅਜ਼ੇਨਾ I, ਮੁਗੇਟੀ ਡੀ, ਸੇਰੂਤੀ ਐਫ, ਹੋਸੀਨੀ ਐਸ, ਏਟ ਅਲ।ਕਈ ਗੈਰ-ਪ੍ਰਜਾਤੀ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਜਰਾਸੀਮ ਪਿਨਾ ਨੋਬਿਲਿਸ ਦੀ ਵਿਆਪਕ ਮੌਤ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦੇ ਹਨ।ਜੀਵਨ.2020; 10:238।
ਬ੍ਰੈਡਲੀ ਐਮ, ਕੌਟਸ ਐਸਜੇ, ਜੇਨਕਿੰਸ ਈ, ਓ'ਹਾਰਾ ਟੀ.ਐਮ.ਆਰਕਟਿਕ ਜ਼ੂਨੋਟਿਕ ਬਿਮਾਰੀਆਂ 'ਤੇ ਜਲਵਾਯੂ ਤਬਦੀਲੀ ਦਾ ਸੰਭਾਵੀ ਪ੍ਰਭਾਵ।ਇੰਟ ਜੇ ਸਰਕੰਪੋਲਰ ਹੈਲਥ।2005;64:468–77.
ਬੇਅਰ ਜੇ., ਗ੍ਰੀਨ ਐਨਡਬਲਯੂ, ਬਰੂਕਸ ਐਸ., ਐਲਨ ਆਈ.ਜੇ., ਰੁਸ ਏ., ਗੋਮੇਜ਼ ਟੀ. ਐਟ ਅਲ.ਤੱਟੀ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ ਨਿਗਰਾਨੀ ਵਿੱਚ ਸਿਗਨਲ ਜੀਵ ਦੇ ਤੌਰ ਤੇ ਨੀਲੀ ਮੱਸਲ (ਮਾਈਟਿਲਸ ਐਡੁਲਿਸ ਐਸਪੀਪੀ.): ਇੱਕ ਸਮੀਖਿਆ।ਮਾਰ ਐਨਵਾਇਰਨ Res 2017;130:338-65.
ਸਿਰਵੇਗਨਾ ਜੀ, ਮਾਰਸੋਨੀ ਐਸ, ਸਿਏਨਾ ਐਸ, ਬਾਰਡੇਲੀ ਏ। ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਇਲਾਜ ਵਿੱਚ ਤਰਲ ਬਾਇਓਪਸੀ ਦਾ ਏਕੀਕਰਣ।ਨੈਟ ਰੇਵ ਕਲੀਨ ਓਨਕੋਲ।2017;14:531–48.
ਵਾਨ ਜੇਸੀਐਮ, ਮੈਸੀ ਸੀ, ਗਾਰਸੀਆ-ਕੋਰਬਾਚੋ ਜੇ, ਮੌਲੀਏਰ ਐਫ, ਬਰੈਂਟਨ ਜੇਡੀ, ਕੈਲਡਾਸ ਸੀ, ਏਟ ਅਲ।ਤਰਲ ਬਾਇਓਪਸੀ ਪਰਿਪੱਕਤਾ: ਟਿਊਮਰ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਪ੍ਰਸਾਰਿਤ ਕਰਨ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ।ਨੈਟ ਰੇਵ ਕੈਂਸਰ.2017;17:223–38।
ਮੈਂਡੇਲ ਪੀ., ਮੈਟਿਸ ਪੀ. ਮਨੁੱਖੀ ਪਲਾਜ਼ਮਾ ਵਿੱਚ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ.Soc Biol ਸਹਾਇਕ ਕੰਪਨੀਆਂ ਦੀ ਮੀਟਿੰਗ ਦੇ ਮਿੰਟ।1948;142:241-3.
ਬ੍ਰੋਂਕੋਰਸਟ ਏ.ਜੇ., ਅਨਗੇਰਰ ਡਬਲਯੂ, ਹੋਲਡੇਨਰੀਡਰ ਐਸ. ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਇਲਾਜ ਲਈ ਇੱਕ ਅਣੂ ਮਾਰਕਰ ਵਜੋਂ ਸੈੱਲ-ਮੁਕਤ ਡੀਐਨਏ ਲਈ ਇੱਕ ਨਵੀਂ ਭੂਮਿਕਾ।ਬਾਇਓਮੋਲਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੀ ਮਾਤਰਾ।2019; 17: 100087।
Ignatiadis M., Sledge GW, Jeffrey SS Liquid ਬਾਇਓਪਸੀ ਕਲੀਨਿਕ ਵਿੱਚ ਦਾਖਲ ਹੁੰਦੀ ਹੈ - ਲਾਗੂ ਕਰਨ ਦੇ ਮੁੱਦੇ ਅਤੇ ਭਵਿੱਖ ਦੀਆਂ ਚੁਣੌਤੀਆਂ।ਨੈਟ ਰੇਵ ਕਲਿਨ ਓਨਕੋਲ.2021;18:297–312.
Lo YM, Corbetta N., Chamberlain PF, Rai W., Sargent IL, Redman CW ਅਤੇ ਹੋਰ।ਗਰੱਭਸਥ ਸ਼ੀਸ਼ੂ ਦਾ ਡੀਐਨਏ ਮਾਵਾਂ ਦੇ ਪਲਾਜ਼ਮਾ ਅਤੇ ਸੀਰਮ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਲੈਂਸੇਟ.1997;350:485-7.
Mufarray MN, Wong RJ, Shaw GM, Stevenson DK, Quake SR ਗਰਭ ਅਵਸਥਾ ਦੇ ਕੋਰਸ ਅਤੇ ਗਰਭ ਅਵਸਥਾ ਦੌਰਾਨ ਔਰਤਾਂ ਦੇ ਖੂਨ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਸਾਰਿਤ ਐਕਸਟਰਸੈਲੂਲਰ ਆਰਐਨਏ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਇਸ ਦੀਆਂ ਪੇਚੀਦਗੀਆਂ ਦਾ ਅਧਿਐਨ।ਡੋਪਡੀਆਟ੍ਰਿਕਸ.2020; 8:605219।
ਓਲਰਿਚ ਐੱਮ, ਸ਼ੇਰਵੁੱਡ ਕੇ, ਕੇਓਨ ਪੀ, ਸ਼ੂਟਜ਼ ਈ, ਬੇਕ ਜੇ, ਸਟੇਗਬੌਅਰ ਜੇ, ਏਟ ਅਲ।ਤਰਲ ਬਾਇਓਪਸੀ: ਦਾਨੀ ਸੈੱਲ-ਮੁਕਤ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਿਡਨੀ ਗ੍ਰਾਫਟ ਵਿੱਚ ਐਲੋਜੇਨਿਕ ਜਖਮਾਂ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਨੈਟ ਰੇਵ ਨੇਫਰੋਲ.2021;17:591–603।
ਜੁਆਨ ਐਫਸੀ, ਲੋ ਵਾਈਐਮ ਇਨੋਵੇਸ਼ਨਜ਼ ਇਨ ਪ੍ਰੈਨੇਟਲ ਡਾਇਗਨੌਸਟਿਕਸ: ਮੈਟਰਨਲ ਪਲਾਜ਼ਮਾ ਜੀਨੋਮ ਸੀਕਵੈਂਸਿੰਗ।ਅੰਨਾ ਐਮ.ਡੀ.2016;67:419-32।
Gu W, Deng X, Lee M, Sucu YD, Arevalo S, Stryke D, et al.ਸੰਕਰਮਿਤ ਸਰੀਰਿਕ ਤਰਲ ਪਦਾਰਥਾਂ ਦੀ ਅਗਲੀ ਪੀੜ੍ਹੀ ਦੇ ਮੈਟਾਜੇਨੋਮਿਕ ਕ੍ਰਮ ਦੇ ਨਾਲ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਜਰਾਸੀਮ ਖੋਜ।ਨੈਟ ਮੈਡੀਸਨ.2021;27:115-24.