د LC د ستونزو د حل کولو ځینې موضوعګانې هیڅکله تاریخي ندي، لکه څنګه چې د LC په تمرین کې ستونزې شتون لري، حتی لکه څنګه چې د وسایلو ټیکنالوژي د وخت په تیریدو سره وده کوي. ډیری لارې شتون لري چې د LC سیسټم کې ستونزې رامینځته کیدی شي او په خراب شکل کې پای ته ورسیږي. کله چې د لوړ شکل پورې اړوند مسلې رامینځته کیږي، د دې پایلو لپاره د احتمالي لاملونو لنډ لیست زموږ د ستونزې حل کولو تجربه ساده کولو کې مرسته کوي.
د دې "LC ستونزې هوارولو" کالم لیکل او هره میاشت د موضوعاتو په اړه فکر کول خوښ دي ځکه چې ځینې موضوعات هیڅکله له سټایل څخه بهر نه ځي. په داسې حال کې چې د کروماتګرافي څیړنې په برخه کې ځینې موضوعات یا نظرونه له مینځه وړل کیږي ځکه چې دوی د نوي او غوره نظرونو لخوا ځای په ځای شوي ، د ستونزو د حل په برخه کې ، ځکه چې د لومړي ځل راهیسې د دې ستونزې حل کولو مقاله کې ځینې موضوعګانې شتون لري. په 1983 (1) کې. په تیرو څو کلونو کې، ما د معاصر رجحاناتو په اړه د LC ستونزې حل کولو برخې تمرکز کړی چې د مایع کروماتګرافي (LC) اغیزه کوي (د بیلګې په توګه، په ساتلو باندې د فشار د اغیزې په اړه زموږ د پوهاوي نسبي پرتله [2] نوي پرمختګونه) زموږ د LC میاشتو په اړه زموږ تفسیر، د LC په میاشت کې د ستونزو پایلې او په عصري طریقو کې څنګه. زما لړۍ (3) ته دوام ورکول، کوم چې د 2021 په دسمبر کې پیل شوي، کوم چې د LC ستونزې حل کولو په ځینو "ژوند او مرګ" موضوعاتو تمرکز کوي - هغه عناصر چې د هر ډول ستونزو حل کونکي لپاره خورا مهم دي، اړین دي چې د هغه سیسټم عمر چې موږ یې کاروو، د دې لړۍ اصلي موضوع د LCGC د مشهور "LC Troubleshoting" د دریمې برخې "LC Troubleshooting" دریمې برخې سره خورا اړونده ده. ، ما غوره کړه چې د لوړ شکل یا د چوټي ځانګړتیاو پورې اړوند مسلو باندې تمرکز وکړم. په حیرانتیا سره ، دیوال چارټ د ټیټ شکل د ضعیف شکل 44 مختلف احتمالي لاملونه لیست کوي! موږ نشو کولی دا ټولې مسلې په یوه مقاله کې په تفصیل سره په پام کې ونیسو، نو د موضوع په دې لومړي قسط کې به زه په ځینو هغو ټکو تمرکز وکړم چې زه ډیری وختونه ګورم. زه امید لرم چې د دې موضوع په اړه به ځینې ځوان او زاړه کاروونکي د LC په برخه کې ګټورې مرستې ومومي.
زه پخپله د "هر څه ممکنه ده" سره د ستونزو د حل کولو پوښتنو ته په زیاتیدونکې توګه ځواب ورکوم. دا ځواب ممکن د لیدونو په پام کې نیولو سره اسانه ښکاري چې تشریح کول یې ستونزمن دي، مګر زه دا ډیری وختونه مناسب ګڼم. د خراب لوړ شکل ډیری احتمالي لاملونو سره، دا مهمه ده چې د ستونزې په اړه فکر کولو په وخت کې خلاص ذهن وساتئ، او د احتمالي لاملونو د لومړیتوب ورکولو توان لري، زموږ د ستونزو د حل کولو لپاره خورا مهم ټکي تمرکز کوي. sible
د هر ډول ستونزو د حل کولو تمرین کې یو مهم ګام - مګر یو چې زه فکر کوم چې لږ ارزول شوی - دا پیژندل دي چې یوه ستونزه شتون لري چې حل کولو ته اړتیا لري. د دې پیژندل چې ستونزه شتون لري اکثرا پدې معنی پیژندل کیږي چې د وسیلې سره څه پیښیږي زموږ د تمو څخه توپیر لري ، کوم چې د تیوري ، تجربوي پوهې او تجربې لخوا رامینځته شوي (5). oth, fluffy, leading edge, tailing, etc.) بلکې په عرض کې هم دي. د ریښتیني چوټي شکل لپاره زموږ توقعات ساده دي. تیوری (6) د درسي کتاب تمه په ښه توګه ملاتړ کوي چې په ډیری مواردو کې د کروماتګرافیک چوکۍ باید سمې وي او د ګوسیانو د شکل سره مطابقت ولري، لکه څنګه چې موږ د پیچلو مسلو څخه د پیچلو توزیع او تمه ښودل شوي. موږ به دا موضوع په راتلونکې مقاله کې وڅیړو. په 1 شکل کې نور لوړ شکلونه ځینې نور امکانات ښیې چې لیدل کیدی شي - په بل عبارت، ځینې لارې چې شیان غلط کیدی شي. د دې قسط په پاتې برخه کې، موږ به د ځینو ځانګړو مثالونو په اړه بحث وکړو چې کیدای شي د دې شکل ډولونو المل شي.
ځینې ​​​​وختونه په کروماټوګرام کې څوکۍ په بشپړ ډول نه لیدل کیږي چیرې چې تمه کیږي چې دوی روښانه شي. پورتني دیوال چارټ په ګوته کوي چې د چوټي نشتوالی (فرض کړئ چې نمونه په حقیقت کې د هدف تحلیل کونکي په غلظت کې لري چې باید د کشف کونکي ځواب کافي وي ترڅو دا د شور څخه پورته وګوري) معمولا د ځینې وسیلې مسلې سره تړاو لري یا په ګرځنده حالت کې غلط مشاهده کیږي (په ټولو شرایطو کې غلط لیدل کیږي).په دې کټګورۍ کې د احتمالي ستونزو او حلونو لنډ لیست په جدول I کې موندل کیدی شي.
لکه څنګه چې پورته یادونه وشوه، دا پوښتنه چې د پام وړ کولو او د هغې د حل کولو هڅه کولو دمخه باید د چوټي پراخوالی څومره زغمل شي یوه پیچلې موضوع ده چې زه به یې په راتلونکې مقاله کې بحث وکړم. زما تجربه دا ده چې د پام وړ چوټي پراخوالی ډیری وختونه د چوټي په شکل کې د پام وړ بدلون سره مل وي، او د چوټي ټینګ د مخکې چوټي یا ویشلو په پرتله ډیر عام دی. په هرصورت، د ټیټ بروډونو له امله یو څه توپیر کیدی نشي. لاملونه:
د دې هرې مسلې په اړه د ستونزو د حل کولو LC په تیرو مسلو کې په تفصیل سره بحث شوی او لوستونکي پدې موضوعاتو کې علاقه لري کولی شي د دې مسلو اصلي لاملونو او احتمالي حلونو په اړه معلوماتو لپاره دې تیرو مقالو ته مراجعه وکړي.نور جزیات.
د پوستکي پړسوب، د چوکۍ مخ او ویشل ټول د کیمیاوي یا فزیکي پیښو له امله رامینځته کیدی شي، او د دې ستونزو د احتمالي حلونو لیست په پراخه کچه توپیر لري، پدې پورې اړه لري چې آیا موږ د کیمیاوي یا فزیکي ستونزې سره معامله کوو. ډیری وختونه، په کروماتوګرام کې د مختلفو چوټو پرتله کولو سره، تاسو کولی شئ مهمې نښې ومومئ چې د احتمالي شکل په شکل کې د ټولو احتمالي لاملونو المل دی. نه فزیکي. که یوازې یو یا څو څوکۍ اغیزمنې وي، مګر پاتې نور ښه ښکاري، لامل یې ډیر احتمال کیمیاوي دی.
د پیک ټیلینګ کیمیاوي لاملونه خورا پیچلي دي چې دلته یې په لنډه توګه بحث وکړو. علاقه لرونکي لوستونکي د لا ژور بحث لپاره د "LC ستونزې حل کولو" وروستۍ مسلې ته راجع کیږي (10). په هرصورت، د هڅه کولو لپاره یو اسانه کار دا دی چې د انجیک شوي تحلیل ډله کمه کړئ او وګورئ چې د چوټي شکل ښه کیږي. که داسې وي، نو دا باید د "مسئلې" په برخه کې د "اوورلوډ" طریقه ښه وي. د وړو شنونکو ماسونو ایستل، یا د کروماتګرافیک شرایط باید بدل شي ترڅو د ښه چوټي شکلونه حتی د لویو ډله ایزو انجیکشن سره هم ترلاسه شي.
د پیک ټیلینګ لپاره ډیری احتمالي فزیکي لاملونه هم شتون لري. هغه لوستونکي چې د امکاناتو په اړه مفصل بحث ته لیوالتیا لري د "LC ستونزې حل" (11) بلې وروستۍ مسلې ته راجع کیږي. د چوټي tailing یو له خورا عام فزیکي لاملونو څخه د انجیکټر او کشف کونکي ترمینځ په یوه نقطه کې ضعیف اړیکه ده (12). د نوي انجیکشن والو سره یو سیسټم چې موږ مخکې نه و کارولی، او د یو کوچني حجم انجیکشن لوپ د فیرول سره نصب کړ چې د سټینلیس سټیل کیپلیري کې جوړ شوی و. د ځینو لومړنیو ستونزو حل کولو تجربو وروسته، موږ پوهیږو چې د انجیکشن والو سټیټر کې د پورټ ژورتیا ډیره ژوره وه چې موږ یې په اسانۍ سره د لوی حجم په پایله کې د ډیډ پورټ کولو په پایله کې دا ستونزه حل کړه. د بل ټیوب سره د انجیکشن لوپ ، موږ کولی شو فیرول مناسب موقعیت ته تنظیم کړو ترڅو د بندر په ښکته کې د مړ حجم له مینځه ویسي.
په شکل 1e کې ښودل شوي لوړ پوړونه هم د فزیکي یا کیمیاوي ستونزو له امله رامینځته کیدی شي. د مخکښې څنډې یو عام فزیکی لامل دا دی چې د کالم د ذراتو بستر په ښه توګه بسته شوی نه وي، یا دا چې ذرات د وخت په تیریدو سره تنظیم شوي وي. لکه څنګه چې د دې فزیکي پیښې له امله رامینځته شوي د پوستکي پایښت سره، د دې د حل کولو لپاره غوره لاره د کیمیاوي شکل بدلول او د پوستکي کیمیاوي شکل ساتل دي. اصليت اکثرا د هغه څه څخه رامینځته کیږي چې موږ یې "غیر خطي" ساتلو شرایطو ته وایو. د مثالي (لینیر) شرایطو لاندې ، د سټیشنري مرحلې لخوا ساتل شوي تحلیل مقدار (له همدې امله ، د ساتلو فکتور) په کالم کې د تحلیلي غلظت سره په خطي ډول تړاو لري. د کروماتګرافي پلوه ، دا پدې معنی ده چې په پراخه کچه د analyte analyte په اندازه نه کیږي. دا اړیکه هغه وخت ماتیږي کله چې د ساتلو چلند غیر خطي وي، او څوکۍ نه یوازې لوړې کیږي بلکې پراخې کیږي ځکه چې ډیر ډله یې انجیکشن کیږي. سربیره پردې، غیر خطي شکلونه د کروماتګرافیک چوټي شکل ټاکي، چې په پایله کې مخکښ یا شاته څنډونه رامینځته کوي. analyte mass. که چیرې د لوړ شکل شکل ښه شي، میتود باید تعدیل شي ترڅو د انجیکشن کیفیت څخه ډیر نشي چې د مخکښ څنډه لامل کیږي، یا د کروماتګرافیک شرایط باید د دې چلند کمولو لپاره بدل شي.
ځینې ​​​​وختونه موږ ګورو چې هغه څه چې د "تقسیم" چوکۍ ښکاري، لکه څنګه چې په 1f شکل کې ښودل شوي. د دې ستونزې د حل کولو لپاره لومړی ګام دا دی چې معلومه کړي چې د چوټۍ شکل د جزوی یوځای کولو له امله دی (د بیلګې په توګه، د دوه جلا خو نږدې جلا کولو مرکبونو شتون). د "سپليټ" چوټۍ په فزیکي پورې اړه نلري فعالیت پخپله د کالم سره هیڅ تړاو نلري. ډیری وختونه، د دې پریکړې تر ټولو مهمه نښه دا ده چې آیا د کروماټوګرام ټولې چوټې د ویشلو شکلونه نندارې ته وړاندې کوي، یا یوازې یو یا دوه. که دا یوازې یو یا دوه وي، دا ممکن د یوځای کولو مسله وي.که ټول چوټونه ویشل شوي وي، دا شاید فزیکي مسله وي، ډیری احتمال د کالم سره تړاو لري.
پخپله د کالم د فزیکي ملکیتونو پورې اړوند سپلیټ چوټونه معمولا د جزوي ډول بند شوي داخل یا خارجي فریټس یا په کالم کې د ذراتو د بیا تنظیم کولو له امله وي، چې ګرځنده پړاو ته اجازه ورکوي چې د کالم چینل جوړونې په ځینو برخو کې د ګرځنده مرحلې په پرتله ګړندي جریان وکړي. په نورو سیمو کې (11).په هرصورت، زما په تجربه کې، دا معمولا د اوږدې مودې حل پر ځای لنډمهاله وي. دا ډیری وختونه د عصري کالمونو سره وژونکي وي که چیرې ذرات په کالم کې بیا یوځای شي. په دې وخت کې، دا غوره ده چې کالم بدل کړئ او دوام ورکړئ.
په شکل 1g کې لوړوالی، زما په خپل لابراتوار کې هم د وروستي مثال څخه، معمولا په ګوته کوي چې سیګنال دومره لوړ دی چې دا د غبرګون رینج لوړ پای ته رسیدلی دی. د نظری جذب کشف کونکو لپاره (په دې حالت کې UV-vis)، کله چې د تحلیل غلظت خورا لوړ وي، تحلیل کونکي ډیری جذبوي، د رڼا حجرو ته د بریښنا جریان ډیر لږ تیریږي، کشف کونکي ډیر لږ د رڼا جریان کشف کوي. د فوتوډیټیکټر سیګنال په پراخه کچه د شور له مختلف سرچینو څخه اغیزمن کیږي ، لکه بې لارې ر lightا او "تور جریان" ، چې سیګنال په ظاهري بڼه خورا "فجی" کوي او د تحلیلي غلظت څخه خپلواک دی.کله چې دا پیښ شي، ستونزه اکثرا د تحلیل د انجیکشن حجم کمولو سره په اسانۍ سره حل کیدی شي - د انجیکشن حجم کمول، د نمونې کمول، یا دواړه.
د کروماتګرافي په ښوونځي کې، موږ په نمونه کې د تحلیلي غلظت د شاخص په توګه د کشف کونکي سیګنال (یعنې په کروماتګرام کې y-axis) کاروو. نو دا عجیب ښکاري چې کروماتګرام وګورئ چې سیګنال له صفر څخه ښکته وي، ځکه چې ساده تفسیر دا دی چې دا یو داسې اشاره کوي کله چې زما د منفي تحلیلي تمرکز تجربه اکثرا ممکنه وي چې د فزیکي تحلیل په کارولو سره منفي تجربه نه وي. د نظری جذب کشف کونکي (د مثال په توګه UV-vis).
په دې حالت کې، د منفي لوړوالی په ساده ډول دا معنی لري چې د کالم څخه خارج شوي مالیکولونه د ګرځنده مرحلې په پرتله لږ رڼا جذبوي سمدلاسه مخکې او وروسته وروسته. دا واقع کیدی شي، د بیلګې په توګه، کله چې د نسبتا ټیټ کشف طول موج (<230 nm) او د ګرځنده فیز اضافه کولو کارول چې په دې موجونو کې ډیری رڼا جذبوي د دې ډول مرکبونو په پرتله د ګرځنده اضافې په څیر د مرکباتو په پرتله د موبايل اضافه کولو په څیر حل کیدی شي. acetate یا formate. یو څوک کولی شي په حقیقت کې د کیلیبریشن منحني چمتو کولو او دقیق مقداري معلوماتو ترلاسه کولو لپاره منفي څوکې وکاروي، نو د دوی د مخنیوي لپاره هیڅ بنسټیز دلیل شتون نلري (دا طریقه کله ناکله د "غیر مستقیم UV کشف" په نوم یادیږي) (13) په هرصورت، که موږ واقعا د منفي چوټو څخه مخنیوی وکړو، نو په دې صورت کې د موج کشف کولو لپاره غوره حل کارول کیږي. analyte د ګرځنده مرحلې څخه ډیر جذبوي، یا د ګرځنده مرحلې ترکیب بدلوي ترڅو دوی د تحلیل کونکو په پرتله لږ رڼا جذب کړي.
د انعکاس شاخص (RI) کشف کولو په کارولو سره منفي چوټي هم څرګند کیدی شي کله چې په نمونه کې د تحلیل کونکي پرته د اجزاو انعکاس شاخص لکه د محلول میټریکس د ګرځنده مرحلې له انعکاس شاخص څخه توپیر لري. دا د UV-vis کشف سره هم پیښیږي ، مګر دا تاثیر د RI په پرتله ډیر کم کیږي. د موبایل مرحلې ته د نمونې میټرکس حرکت.
په دریمه برخه کې د LC ستونزې حل کولو اساسي موضوع کې، ما په هغو شرایطو بحث وکړ چې په هغه کې د لیدل شوي چوک شکل د متوقع یا نورمال چوټي شکل څخه توپیر لري. د دې ډول ستونزو اغیزمنه حل کول د متوقع چوټي شکلونو په پوهه سره پیل کیږي (د تیوري یا د موجوده میتودونو سره د پخوانۍ تجربې پراساس)، نو له دې تمې څخه انحراف څرګند دی. قسط، زه د ځینو دلایلو په اړه په تفصیل سره خبرې کوم چې زه ډیری وختونه ګورم. د دې توضیحاتو پوهیدل د ستونزو حل پیل کولو لپاره یو ښه ځای چمتو کوي، مګر ټول امکانات نه نیسي. هغه لوستونکي چې د لاملونو او حلونو په ژور لیست کې لیوالتیا لري کولی شي د LCGC "LC ستونزې حل کولو لارښود" دیوال چارټ ته مراجعه وکړي.
(4) LCGC "LC د ستونزو د حل لارښود" دیوال چارټ.https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) الف فیلینجر، په کروماتګرافي کې د معلوماتو تحلیل او سیګنال پروسس کول (ایلسیویر، نیویارک، نیویارک، 1998)، مخونه 43-96.
(8) وهاب MF، Dasgupta PK، Kadjo AF او Armstrong DW، Anal.Chim.Journal.Rev.907، 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.