د Nature.com د لیدلو لپاره مننه. د براوزر نسخه چې تاسو یې کاروئ د CSS لپاره محدود ملاتړ لري. د غوره تجربې لپاره، موږ وړاندیز کوو چې تاسو یو تازه شوی براوزر وکاروئ (یا په انټرنیټ اکسپلورر کې د مطابقت حالت بند کړئ).
پورس سیلیکا ذرات د میکروپورس ذرات ترلاسه کولو لپاره د ځینې تعدیلاتو سره د سول جیل میتود لخوا چمتو شوي. دا ذرات د N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) او سټیرین سره د N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) او سټیرین سره د پولیډیډیمیل فینیلبرو سټیشن فیز N-Prevancel فینیلبرو سټیشن چمتو کولو لپاره د بیرته راګرځیدونکي اضافي ټوټې کولو زنځیر لیږد (RAFT) لخوا اخیستل شوي. د سټینلیس سټیل کالمونه (100 × 1.8 mm id) د سلیري بسته بندۍ په واسطه بسته شوي. د پیپټایډ مخلوط ارزول شوي PMP کالم جلا کول چې پنځه پیپټایډونه لري (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Legly-Tyr, ,, ic فعالیت) او د انسان سیروم البومین (HAS) د ټریپسین هضم. د غوره تخفیف شرایطو لاندې، د پیپټایډ مخلوط تیوریکي پلیټ شمیره د 280,000 پلیټونو/m² په اندازه لوړه ده. د پرمختللې کالم د جلا کولو فعالیت پرتله کول د تجارتي Ascentis Express RP-Amide کالم سره پرتله کول چې د سوداګریز کالم په پرتله د پیپټایډ کالم غوره فعالیت لیدل شوی و. د جلا کولو موثریت او حل شرایط.
په دې وروستیو کلونو کې، د بایوفارماسیوټیکل صنعت د بازار ونډه کې د پام وړ زیاتوالي سره په نړیوال بازار کې پراخ شوی دی. د بایوفارماسوټیکل صنعت 1,2,3 چاودیدونکي ودې سره، د پیپټایډونو او پروټینونو تحلیل خورا مطلوب دی. د هدف پیپټایډ سربیره، ډیری ناپاکۍ رامینځته کیږي، د پیپټایډس د بیا رغونې لپاره د پیپټایډس د تولید لپاره. د مطلوب پاکوالي په اړه. د بدن په مایعاتو، نسجونو او حجرو کې د پروټینونو تحلیل او مشخص کول خورا ستونزمن کار دی ځکه چې په یوه نمونه کې د لوی شمیر احتمالي کشف وړ ډولونه شتون لري. سره له دې چې ډله ایز سپیکرومیټري د پیپټایډ او پروټین ترتیب کولو لپاره یوه مؤثره وسیله ده، که دا ډول نمونې په یوه ډله ایزه توګه تطبیق شي، نو دا به د مسمومیت په واسطه پلي نشي. د MS تحلیل څخه دمخه د مایع کروماتګرافي (LC) جلا کول، کوم چې به په ټاکل شوي وخت کې د ماس سپیکٹرومیټر ته د شنونکو شمیر کم کړي 4,5,6. سربیره پردې، د مایع مرحلې جلا کولو په جریان کې، تحلیل کونکي په تنګ سیمو کې متمرکز کیدی شي، په دې توګه د دې تحلیلونو تمرکز او د LCMS کشف کولو کې د پام وړ پرمختګ شوی. په تیرو لسیزو کې او د پروټومیک تحلیل 7,8,9,10 کې یو مشهور تخنیک ګرځیدلی.
Reversed-phase liquid chromatography (RP-LC) په پراخه کچه د پیپټایډ مرکبونو پاکولو او جلا کولو لپاره د اکټاډیسیل ترمیم شوي سیلیکا (ODS) په کارولو سره د سټیشنري مرحلې په توګه کارول کیږي 11,12,13. په هرصورت، د RP سټیشنري مرحلې د قناعت وړ جلا کول ندي چمتو کوي د پیپټایډ جوړښت او د پیپټایډ 5 پروټین پیچلتیا او جوړښت ته. مخکې، ځانګړي ډیزاین شوي سټیشنري مرحلې ته اړتیا ده چې پیپټایډونه او پروټینونه د قطبي او غیر قطبي مایعاتو سره تحلیل کړي ترڅو د دې تحلیلونو سره تعامل او وساتي 16. مخلوط حالت کروماتګرافي ، کوم چې څو ماډل تعاملات چمتو کوي ، د پیپټایډونو جلا کولو لپاره د RP-LC بدیل کیدی شي ، پروټینونه او نور پیچلي سټیشنونه چمتو شوي مخلوط سټیشنونه. د دې پړاوونو سره بسته شوي د پیپټایډ او پروټین جلا کولو لپاره کارول شوي 17,18,19,20,21. د مخلوط حالت سټیشنري پړاوونه (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polar intercalation/RPLC) د قطبي او غیر قطبي ډلو شتون له امله د پیپټایډ او پروټین جلا کولو لپاره مناسب دي. د قطبي او غیر قطبي شنونکو لپاره د ښه جلا کولو ځواک او ځانګړی انتخاب ښیي، ځکه چې جلا کول د شنونکي او سټیشنري مرحلې ترمنځ تعامل پورې اړه لري.څو موډل تعاملات 29، 30، 31، 32. په وروستیو کې، جانګ او نور.30 د ډوډیسیل پای ته رسیدو پولیمین سټیشنري مرحله چمتو کړه او په بریالیتوب سره هایدروکاربونونه، انټيډیپریسنټس، فلاوونایډز، نیوکلیوسایډز، ایسټروجن، او یو شمیر نور تحلیلونه جلا کړل. پولر انټرکلیټر دواړه قطبي او غیر قطبي ګروپونه لري، نو دا د پیپټایډونو او پروټینونو د جلا کولو لپاره کارول کیدی شي چې د هایدروکاربونونو او هایډروپلینټوپټوپټوپایډونو سره جلا کړي. د مثال په توګه، امایډ-ایمبیډډ C18 کالمونه) په سوداګریزه توګه د Ascentis Express RP-Amide کالمونو لاندې په سوداګریزه توګه شتون لري، مګر دا کالمونه یوازې د امین 33 تحلیل لپاره کارول کیږي.
په اوسنۍ څیړنه کې، د پولر-ایمبیډډ سټیشنري مرحله (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) د HSA د پیپټایډونو او ټریپسین هضمونو د جلا کولو لپاره چمتو او ارزول شوې وه. سټیشنري مرحله د لاندې ستراتیژۍ په کارولو سره چمتو شوې وه. پورس سیلیکا ذرات د هغه طرزالعمل سره سم چمتو شوي چې زموږ په مخکینۍ خپرونه کې د ورکړل شوي طرزالعمل سره سم چمتو شوي ترڅو د پولیکولیټین ځینې پروکولیټین چمتو کړي. (PEG)، TMOS، د اوبو اسیتیک اسید د سیلیکا ذرات د لوی سوري اندازې سره د سیلیکا ذرات چمتو کولو لپاره تنظیم شوي. دوهم، یو نوی لیګنډ، فینیلمالیمایډ - میتیل وینیل اسوسیانیټ، ترکیب شوی او د سیلیکا ذراتو د اخستلو لپاره کارول شوی ترڅو د قطبي سرایت شوي سټیشنري پړاو چمتو کړي. په پایله کې سټیشنري پړاو د سټیل 10 1mm په کارولو سره د سټیل 10 1 mm په کارولو سره پیکل شوی. د بسته بندۍ مطلوب سکیم. د کالم بسته بندي د میخانیکي کمپن سره مرسته کیږي ترڅو ډاډ ترلاسه شي چې په کالم کې یو همجنس بستر رامینځته شوی. د پیپټایډ مرکبونو بسته شوي کالم جلا کول ارزونه وکړئ چې پنځه پیپټایډونه لري؛(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) او د انسان سیروم البومین (HAS) د ټریپسین هضم. د پیپټایډ مخلوط او د HSA د ټریپسین هضم د ښه حل سره جلا کولو لپاره لیدل شوي چې د PRPsسینټ فعالیت سره د MPS مطابقت سره پرتله کول د مطابقت څرګندونه وه. - امایډ کالم. دواړه پیپټایډونه او پروټینونه د PMP کالم کې ښه حل شوي او اغیزمن لیدل شوي، کوم چې د Ascentis Express RP-Amide کالم څخه ډیر اغیزمن و.
PEG (Polyethylene Glycol)، Urea، Acetic Acid، Trimethoxy Orthosilicate (TMOS)، Trimethyl Chlorosilane (TMCS)، Trypsin، Human Serum Albumin (HSA)، امونیم کلورایډ، یوریا، Hexane Methyldisilazane (HMDS)، Methacryloyl کلورایډ (Bencryloyl Chloride)، سټرایډ-پیرو اکسایډ (Bencryloyl) (BPO)، HPLC Grade Acetonitrile (ACN)، میتانول، 2-Propanol، او Acetone د Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) څخه اخیستل شوي.
د یوریا (8 ګرامه)، پولیتیلین ګلایکول (8 ګرامه)، او 8 ملی لیتر 0.01 این ایسټیک اسید مخلوط د 10 دقیقو لپاره مخلوط شوی، او بیا 24 ملی لیتر TMOS د یخ په شرایطو کې اضافه شوی. د عکس العمل مخلوط په 40 درجو کې د 6 ساعتونو لپاره تودوخه شوی او بیا د 120 ° C په اوبو کې د 120 ° C په اتوماتیک ډول تودوخه شوی. پاتې شوي مواد د 12 ساعتونو لپاره په 70 درجې سانتي ګراد کې وچ شوي وو. وچه نرمه ټوټه په تنور کې په نرمه ځمکه کې او د 12 ساعتونو لپاره په 550 درجې سانتي ګراد کې کیلسین شوې وه. درې ټوټې چمتو شوي او مشخص شوي ترڅو د ذرې اندازه، د سوري اندازې او سطحې ساحه کې د تولید وړتیا معاینه کړي.
د سیلیکا ذرات د مخکینۍ ترکیب شوي لیګانډ فینیلمالیمایډ - میتیل وینیلیسوسیانیټ (PCMP) سره د سټیرین سره د ریډیل پولیمرائزیشن په تعقیب ، د قطبي ګروپ لرونکی مرکب چمتو شوی.د مجموعو او پولی اسټیرین زنځیرونو لپاره سټیشنري مرحله. د چمتو کولو پروسه لاندې تشریح شوې.
N-phenylmaleimide (200 mg) او methyl vinyl isocyanate (100 mg) په وچ تولیون کې منحل شوي، او 0.1 mL 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) د عکس العمل په فلاسک کې اضافه شوي ترڅو د فینیلمالیمایډ - میتیل ویینیل اسوسیانیټ (میتایل پی وینیل میتیل پیوینیټ میتیل پیوین 6) په تودوخه کې چمتو شي. 0 ° C د 3 ساعتونو لپاره، فلټر شوي او په تنور کې د 40 درجې د 3 ساعتونو لپاره وچ شوي.
وچې سیلیکا ذرات (2 ګرامه) په وچه تولیون (100 ملی لیتر) کې توزیع شوي، د 10 دقیقو لپاره په 500 ملی لیتر ګردي لاندې فلاسک کې اچول شوي او سونیک شوي. PMCP (10 ملی ګرامه) په تولیوین کې منحل شوي او د ډراپینګ فنل له لارې د عکس العمل فلاسک ته ډراپ وایډ اضافه شوي. مخلوط د 10 ° C په 100 ° C کې د 1000 ساعتونو لپاره فلکس شوی و. acetone او د ۳ ساعتونو لپاره په ۶۰ درجو سانتي ګراد کې وچه شوه، بیا د PMCP بانډ شوي سیلیکا ذرات (100 ګرامه) په تولیون (200 ml) کې منحل شول او 4-hydroxy-TEMPO (2 mL) د 100 µL dibutyltin dilaurate په شتون کې اضافه شول، د 50 °C د کټیټریډ فلټر په توګه د 8 ساعتو لپاره د میتر فلټر شوي. په 50 درجو کې د 3 ساعتونو لپاره وچ کړئ.
سټیرین (1 ملی لیتر)، بینزویل پیرو اکسایډ BPO (0.5 ملی لیتر)، او د TEMPO-PMCP سره وصل شوي سیلیکا ذرات (1.5 g) په تولیون کې توزیع شوي او د نایتروجن سره پاک شوي. د سټیرین پولیمرائزیشن د 12 ساعتونو لپاره په 100 ° C کې ترسره شوی و. په پایله کې د 12 ساعتونو لپاره د 600 ° C سره عکس العمل تولید شوی و او په ټوله شپه کې د 600 ° C سره عکس العمل و. په 1 شکل کې ښودل شوی.
نمونې د 1 ساعت لپاره په 393 K کې د 10-3 Torr څخه کم پاتې فشار ترلاسه کولو لپاره وغورځول شوې. د P/P0 = 0.99 په نسبي فشار کې د جذب شوي N2 مقدار د ټول سوراخ حجم ټاکلو لپاره کارول شوی و. د خلاص او لیګینډ سره تړل شوي سیلیکا ذراتو مورفولوژي د مایکروچینوکي سره معاینه شوې. جاپان) وچې نمونې (نناري سیلیکا او لیګنډ بانډ شوي سیلیکا ذرات) په المونیم کالم کې د چپکونکي کاربن ټیپ په کارولو سره ځای په ځای شوي. د Q150T سپټر کوټر په کارولو سره په نمونو باندې سرو زرو پلیټ شوی ، او په نمونو کې د 5 nm Au پرت زیرمه شوی. دا د پروسې کمولو وړتیا ښه کوي او د یخولو وړتیا ښه کوي. ron (Waltham, MA, USA) Flash EA1112 عنصري شنونکی د عنصري تحلیل لپاره کارول شوی و. A Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 د ذرې د اندازې د توزیع د ترلاسه کولو لپاره کارول شوی و. په هر یو کې د سیلیکا او 5 ټوټې ټوټې ټوټې ټوټې ټوټې شوي سیلیکا ذرات او 5 mLg. isopropanol، د 10 دقیقو لپاره سونیک شوی، د 5 دقیقو لپاره وورټکس شوی، او د Mastersizer په نظری بنچ کې کیښودل شوی. Thermogravimetric تحلیل د 30 څخه تر 800 ° C د تودوخې درجې کې د 5 ° C په یوه دقیقه کې ترسره شوی.
د شیشې په قطار کې د سټینلیس سټیل تنګو کالمونو ابعاد (100 × 1.8 mm id) د سلیري بسته کولو میتود په کارولو سره بسته شوي ، د ورته طرزالعمل پلي کول چې په ریف کې کارول شوي.31. د سټینلیس سټیل کالم (د شیشې لین شوی، 100 × 1.8 mm id) د آوټ لیټ فټینګ سره چې 1 µm فریټ لري د سلیري پیکر (Alltech Deerfield, IL, USA) سره وصل شوی. د سټیشنري پړاو سلری چمتو کړئ او د سټیشن 150 ملی لیتر په فاز کې د 150 ملی لیتره کولومتر ذخیره کولو لپاره واستوئ. میتانول د سلری محلول او همدارنګه د پروپیلینګ محلول په توګه کارول کیده. کالم په ترتیب سره ډک کړئ د 10 دقیقو لپاره 100 MP ، 80 MP د 15 دقیقو لپاره او 60 MP د 30 دقیقو لپاره فشار ورکړئ. د بسته کولو په جریان کې ، میخانیکي کمپن د دوه GC فیلډ ، یو ایس فیلډ کالم ، ډیکر فیلډ کالم ، یو ایس فیلډ شیلډ کولو ډاډ ترلاسه کولو سره پلي شو. کالم. د سلری پیکر وتړئ او فشار ورو ورو خوشې کړئ ترڅو په کالم کې د کوم زیان مخه ونیول شي. کالم د سلیري بسته کولو واحد څخه منحل کړئ او بل فټینګ د داخلیدو او LC سیسټم سره وصل کړئ ترڅو د هغې فعالیت وګوري.
د LC پمپ (10AD Shimadzu, Japan)، انجیکټر (Valco (USA) C14 W.05) د 50nL انجیکشن لوپ سره، جھلی ډیګاسر (Shimadzu DGU-14A)، د UV-VIS کیپلیري کړکۍ جوړه شوې وه د ځانګړي µLC وسیله کشف کونکی (UV-2075 او مایکروکلینر سره وصل کولو شیشې 2075 شارټ کولومین) د اضافي کالم بډ پراخولو اغیز کم کړئ. له بسته کولو وروسته، کیپلیرونه (50 μm id 365 او د کمولو اتحادیې کیپلیرونه (50 μm) د کمولو اتحادیې په 1/16″ ځای کې نصب شوي. د ډیټا راټولول او کروماتګرافیک پروسس د Multichro 200m 200m 200 200 200 200 2000 منټوګرافي سافټویر په کارولو سره ترسره شوي. د کروماتګرافیک معلومات د اوریګین پرو 8 (نارټامپټون، MA) لخوا تحلیل شوي.
د انسان سیرم څخه البومین، لیوفیلیز پوډر، ≥ 96٪ (اګروز جیل الیکٹروفورسیس) 3 ملی ګرامه د ټریپسین (1.5 ملی ګرامه)، 4.0 ملی یوریا (1 ملی لیتر)، او 0.2 ملی امونیم بای کاربونیټ (1 ملی لیتر) سره مخلوط شوی. محلول د 10 دقیقو لپاره مینځل شوی، بیا د 10 دقیقو لپاره د 3 متر سانتي ګراد په 1 لیتره کې د 3 مترو په تودوخه کې ساتل کیږي. د 0.1% TFA. محلول فلټر کړئ او د 4 درجو لاندې ذخیره کړئ.
د پیپټایډ مخلوط او د HSA ټریپسین هضم جلا کول په PMP کالمونو کې په جلا توګه ارزول شوي. د PMP کالم لخوا د HSA د پیپټایډ مخلوط او د ټریپسین هضم جلا کول چیک کړئ او پایلې یې د Ascentis Express RP-Amide کالم سره پرتله کړئ. د تیوریکي پلیټ شمیره په لاندې ډول ده:
د سیلیکا ذراتو SEM انځورونه او د لیګنډ بانډ شوي سیلیکا ذرات په انځور کې ښودل شوي.2. د سیلیکا ذراتو SEM انځورونه (A,B) ښیي چې زموږ د پخوانیو مطالعاتو برعکس، دا ذرات کروی دي په کوم کې چې ذرات اوږد شوي یا غیر منظم توازن لري. د ligand-bonded سیلیکا ذراتو (C, D) سطح د سلیکا په پرتله نرمه ده، د سلیکا په سطحه د پولیستیکي برخې له امله کیدای شي د سلیکا په سطحه برخه وي. ica ذرات.
د سیلیکا ذراتو (A, B) او ligand-bonded سیلیکا ذراتو (C, D) الکترون مایکروسکوپ عکسونه سکین کول.
د سیلیکا ذراتو د ذرې اندازه ویش او د لیګینډ بانډ شوي سیلیکا ذرات په 3 (A) شکل کې ښودل شوي. د حجم پر بنسټ د ذراتو د اندازې ویش منحني ښیي چې د سیلیکا ذراتو اندازه د کیمیاوي تعدیل څخه وروسته لوړه شوې (3A). د PMP اندازه، d(0.5) 3.36 μm ده، زموږ د پخوانۍ مطالعې په پرتله چې د 3.05 μm د اعلان (0.5) ارزښت سره د 3.05 μm (پولیسټرین پورې تړلی سیلیکا ذرات) 34. دا بسته زموږ د پخوانۍ مطالعې په پرتله د ذرو اندازه کمه توزیع درلوده د مختلف تناسب له امله د PEG او د مایکورټیک اسید اندازه د PEG او miuretic اسید عکس العمل برخه. د MP مرحله د پولی سټیرین سره تړلی سیلیکا ذرات مرحلې څخه یو څه لوی دی چې موږ دمخه مطالعه کړې وه. دا پدې مانا ده چې د سټیرین سره د سیلیکا ذراتو سطحي فعالیت یوازې د سیلیکا په سطحه د پولی سټیرین پرت (0.97 µm) زیرمه کوي ، پداسې حال کې چې د PMP مرحله کې د پرت ضخامت 1.38 µm و.
د ذراتو د اندازې توزیع (A) او د سیلیکا ذراتو او د لیګنډ پورې تړلي سیلیکا ذرات د سوراخ اندازه ویش (B).
د اوسنۍ مطالعې د سیلیکا ذراتو د سوري اندازه، د سور حجم او د سطحې ساحه په جدول 1 (B) کې ورکړل شوې. د بېئر سیلیکا ذرات او د لیګنډ بانډ شوي سیلیکا ذراتو PSD پروفایلونه په 3 (B) شکل کې ښودل شوي. پایلې زموږ د پخوانۍ مطالعې سره مقایسه دي. د سیلیکا او لیګینډ د سوري اندازې په ګوته کوي چې د سیلیکا سره تړلي دي، چې د pore 100 برخه ده. د بیا اندازه د کیمیاوي تعدیل وروسته د 69 لخوا کمیږي، لکه څنګه چې په 1 (B) جدول کې ښودل شوي، او د منحني بدلون په شکل 3 (B) کې ښودل شوي. په ورته ډول، د سیلیکا ذراتو د سور حجم د کیمیاوي تعدیل څخه وروسته له 0.67 څخه 0.58 cm3/g ته راټیټ شو. د سیلیکا ځانګړې سطحه ساحه چې اوس مهال زموږ د مطالعې وړ برخه د 6/1 g/1 د مطالعې وړ ده. 24 m2/g. لکه څنګه چې په جدول 1(B) کې ښودل شوي، د سیلیکا ذراتو د سطحې مساحت (m2/g) هم د کیمیاوي بدلون وروسته له 116 m2/g څخه 105 m2/g ته راټیټ شوی.
د سټیشنري مرحلې د لومړني تحلیل پایلې په جدول 2 کې ښودل شوي. د اوسني سټیشنري مرحلې د کاربن بار کول 6.35٪ دي، کوم چې زموږ د تیرې مطالعې د کاربن بار کولو څخه ټیټ دی (د پولیسټرین بانډډ سیلیکا ذرات، په ترتیب سره 7.93٪35 او 10.21٪) ځکه چې په اوسني سټیشن کې د کاربن بار کولو 42، SP د اوسني سټیشن چمتو کولو کې ټیټ دی. د سټیرین سربیره، ځینې قطبي لیګنډونه لکه phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) او 4-hydroxy-TEMPO کارول شوي. د اوسني سټیشنري پړاو د نایټروجن وزن سلنه 2.21٪ ده، په پرتله د 0.1735 او 0.85٪ په پرتله، دا پدې معنی ده چې په پخوانیو مطالعاتو کې د نایټروجن وزن په ترتیب سره د نایټروجن فیصده لوړه ده. په ورته ډول، د محصولاتو د کاربن بارول په ترتیب سره (4) او (5) په ترتیب سره 2.7٪ او 2.9٪ و، پداسې حال کې چې د وروستي محصول (6) د کاربن بار کول 6.35٪ و، لکه څنګه چې په 2 جدول کې ښودل شوي. د وزن ضایع د PMP سټیشنري مرحلې سره معاینه شوی، او د TGA 4 د وزن کموالی د TGA 4٪ curve curve % ښودل شوی. ، کوم چې د کاربن بار کولو (6.35٪) سره ښه موافقت لري ځکه چې لیګنډونه نه یوازې C بلکه N, O, او H هم لري.
phenylmaleimide-methylvinylisocyanate ligand د سیلیکا ذراتو د سطحې ترمیم لپاره غوره شوی ځکه چې دا د قطبي phenylmaleimide ګروپونه او vinylisocyanate ګروپونه لري. Vinyl isocyanate ګروپونه کولی شي نور د سټیرین سره د ژوندی رادیکال پولیمیریزیشن په واسطه غبرګون وکړي.دوهم دلیل دا دی چې د یوې ډلې داخلول چې د متقابل تعامل او الیکټروټینایټ سټیشن ترمنځ قوي تعامل شتون نلري. ary پړاو، ځکه چې د phenylmaleimide moiety په نورمال pH کې هیڅ مجازی چارج نلري. د سټیشنري مرحلې قطبیت د سټیرین د مطلوب مقدار او د آزاد رادیکال پولیمرائزیشن د عکس العمل وخت لخوا کنټرول کیدی شي. د عکس العمل وروستی مرحله (فری - رادیکال پولیمرائزیشن) خورا مهم دی او کولی شي د سټیشنري سټیشن سټیشن د سټیشنري سټیشن مرحلې چک کولو لپاره د پولاریت بدل کړي. دا لیدل شوي چې د سټیرین مقدار او د عکس العمل وخت زیاتوالی د سټیشنري مرحلې د کاربن باریدو ته وده ورکوي او برعکس. د سټیرین مختلف غلظت سره چمتو شوي SPs مختلف کاربن بارونه لري. یوځل بیا دا سټیشنري مرحلې د سټینلیس سټیل کالمونو کې بار کړئ او د دوی کروماتګرافیک فعالیت چیک کړئ (انتخاب، د دې ریزولوشن لپاره انتخاب شوي ارزښت، او نور د ازمایښت کولو لپاره د انتخاب، ریزولوشن چمتو کولو لپاره انتخاب، او نور). د PMP سټیشنري مرحله د کنټرول قطبیت او ښه تحلیلي ساتلو ډاډ ترلاسه کولو لپاره.
پنځه پیپټایډ مرکبات (Gly-Tyr، Gly-Leu-Tyr، Gly-Gly-Tyr-Arg، Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg، leucine enkephalin) هم د ګرځنده مرحلې په کارولو سره د PMP کالم په کارولو سره ارزول شوي؛60/40 (v / v) اشوټيل / اوبه (0.1٪ TFA) د درې pmb کالمونو لپاره N ارزښتونه (200،000 ملي میتر ID) د درې pmb کالم (200،000 ملي میتر ID) دی د جریان کچه (700 μl / دقیقې)، د یوې دقیقې په جریان کې پنځه د PMP سټیشنونه (100 × 1.8 ملي میتر) سره مساوي دي. شرایط او د تیوریکي پلیټونو شمیره n او د ساتنې وخت په هر کالم کې د ورته ازموینې مرکب جلا کولو لپاره ښودل شوي، لکه څنګه چې په جدول 3 کې ښودل شوي.
په PMP کالم (B) او Ascentis Express RP-Amide کالم (A) کې د پیپټایډ مخلوط جلا کول؛ګرځنده مرحله 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%)، د PMP کالم ابعاد (100 × 1.8 mm id)؛د مرکبونو تحلیلي ترتیب: 1 (Gly-Tyr)، 2 (Gly-Leu-Tyr)، 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg)، 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) او 5 (leucine) اسید enkephalin)).
د PMP کالم (100 × 1.8 ملي میتر ID) په لوړه پروسه کې جلا شوی. د HSA هضم د 17 پیپټایډونو لپاره ورته په 17 نښو کې ترتیب شوی.
د HSA یو ټریپټیک هضم (100 × 1.8 mm id) د PMP کالم کې جلا شوی و؛د جریان کچه (100 µL/min)، ګرځنده مرحله 60/40 acetonitrile/اوبه د 0.1% TFA سره.
چیرې چې L د کالم اوږدوالی دی، η د ګرځنده مرحلې ویسکوسیت دی، ΔP د کالم شاته فشار دی، او u د ګرځنده مرحلې خطي سرعت دی. د PMP کالم پاریدو وړتیا 2.5 × 10-14 m2 وه، د جریان کچه 25 μL/min وه، او د 60/40 AC/40MP د columm/40M ACVLum وړتیا کارول شوې وه. 0 × 1.8 mm id) زموږ د تیرې مطالعې سره ورته وه Ref.34. د کالم پاریدو وړتیا په سطحي ډول خړوب شوي ذراتو څخه ډکه ده: 1.7 × 10-15 د 1.3 μm ذراتو لپاره، 3.1 × 10-15 د 1.7 μm ذراتو لپاره او 1.251 × 251 × 251. .6 μm ذرات د 5 μm ذراتو لپاره 43. نو له همدې امله، د PMP مرحله د 5 μm اصلي شیل ذراتو ته ورته ده.
چیرې چې Wx د کلوروفارم سره د بسته شوي کالم وزن دی، Wy د میتانول سره د کالم وزن دی، او ρ د محلول کثافت دی. د میتانول (ρ = 0.7866) او کلوروفارم (ρ = 1.484) کثافت دی. د SIIC18-10mm PARTC 1.00mm PARTS. ) 34 او د C18-Urea کالم 31 چې موږ مخکې مطالعه کړې په ترتیب سره 0.63 او 0.55 دي. دا پدې مانا ده چې د یوریا لیګنډ شتون د سټیشنري مرحلې پارامتیا کموي. له بلې خوا، د PMP کالم ټول porosity (100 × 1.8 mm) د columm 6MP د columability په پرتله ټیټ دی. د C18 بانډډ سیلیکا ذرات سره ډک شوي ځکه چې د C18 ډول سټیشنري مرحلو کې C18 لیګانډونه د سیلیکا ذراتو سره د خطي زنځیرونو په توګه وصل شوي ، پداسې حال کې چې د پولی سټیرین ډول سټیشنري مرحلو کې ، د هغې شاوخوا یو نسبتا موټی پولیمر طبقه رامینځته کیږي.
شکل 7A,B د PMP کالم (100 × 1.8 mm id) او د Ascentis Express RP-Amide کالم (100 × 1.8 mm id) د ورته تخفیف شرایطو په کارولو سره ښیي (یعنې 60/40 ACN/H2O او 0.1% TFA).) د وین ډیمټر پلاټ.ټاکل شوي پیپټایډ مرکبات (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) په 20 µL/ کې د دواړو کالمونو لپاره د لږ تر لږه جریان کچه 800 µminL/min د 800 µtm/min د جریان اندازه ده. L/min) د PMP کالم او د Ascentis Express RP-Amide کالم لپاره په ترتیب سره 2.6 µm او 3.9 µm وو. د HETP ارزښتونه په ګوته کوي چې د PMP کالم (100 × 1.8 mm id) د جلا کولو موثریت د RPlum 1 1 mm-1 په سوداګریزه توګه شتون لري د RPlum 1 1 mm 1 سینټر په پرتله خورا ښه دی. په شکل 7(A) کې د وین ډیمټر پلاټ ښیي چې د جریان په ډیریدو سره د N ارزښت کمیدل زموږ د تیرې مطالعې په پرتله مهم ندي. د PMP کالم (100 × 1.8 mm id) لوړ جلا کولو موثریت د Ascentis Express RP-Amide کالم په پرتله د ګړندي کولو پراساس دی ، د برخې کار کولو پیچلي کولم 3 شکل کې کارول کیږي.
(A) د وین ډیمټر پلاټ (HETP په مقابل کې د ګرځنده مرحله خطي سرعت) د PMP کالم (100 × 1.8 mm id) په کارولو سره په 60/40 ACN/H2O کې د 0.1% TFA سره ترلاسه شوی. (B) وین ډیمټر پلاټ (HETP د ګرځنده مرحلې خطي سرعت په کارولو سره د RP0m 100 x RPlum لینیر سرعت ایکسپریس کومینټ په 60/40 ACN/H2O کې ترلاسه شوی. .8 mm id) په 60/40 ACN/H2O کې د 0.1% TFA سره.
د پولر-ایمبیډډ پولی سټیرین سټیشنري مرحله د مصنوعي پیپټایډ مخلوطونو جلا کولو او د انساني سیرم البومین (HAS) د ټریپسین هضم لپاره د لوړ فعالیت مایع کروماتګرافي لپاره چمتو او ارزول شوې. د پیپټایډ مرکبونو لپاره د PMP کالمونو کروماتګرافیک فعالیت د PMP ډوله جلا کولو او د جلا کولو د مختلف ډولونو د حل کولو لاملونو کې غوره دی. s، لکه د سیلیکا ذراتو د ذرې اندازه او د سوراخ اندازه، د سټیشنري مرحلې کنټرول ترکیب، او د پیچلي کالم بسته بندي. د لوړ جلا کولو موثریت سربیره، د لوړ جریان نرخونو کې ټیټ کالم شاته فشار د دې سټیشنري مرحلې بله ګټه ده. د PMP کالمونه د ښه تولید وړتیا څرګندوي او د مختلف پروټینونو د تولید لپاره کارول کیدی شي. دا کالم د طبیعی محصولاتو جلا کولو لپاره، د درملو بوټو څخه بایو فعال مرکبات او په مایع کروماتګرافي کې د فنګسي استخراج لپاره کارول کیږي. په راتلونکي کې، د PMP کالمونه به د پروټینونو او مونوکلونل انټي باډیز جلا کولو لپاره هم ارزول کیږي.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J. Thøgersen, H. & Petersson, P. د پیپټایډ جلا کولو سیسټمونو په اړه څیړنه د بیرته راګرځیدونکي پړاو کروماتګرافي برخه: د کالم ځانګړتیا پروتوکول پراختیا.کروماتګرافي.1603، 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al. د ساري ناروغیو د درملنې لپاره ډیزاین شوي فعال پیپټایډونه ښه شوي. بایو ټیکنالوژي. پرمختللی.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. مصنوعي معالجوي پیپټایډونه: ساینس او ​​​​د بازار د درملو کشف.
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.کروماتګرافي.A 1261، 78-90 (2012).
Liu, W. et al. Advanced Liquid chromatography- mass spectrometry د پراخ هدف لرونکي میټابولومکس او proteomics.anus.Chim.Acta 1069، 89-97 (2019) یوځای کولو توان ورکوي.
Chesnut, SM & Salisbury, JJ د مخدره توکو په پراختیا کې د UHPLC رول.سپتمبر Sci.30 (8)، 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM د چټک جلا کولو لپاره د الټرا لوړ فشار مایع کروماتګرافي بنسټیز او عملي اړخونه.سپتمبر Sci.30(8)، 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. د مخدره توکو په پراختیا کې د الټرا - لوړ فعالیت مایع کروماتګرافي غوښتنلیک.کروماتګرافي.1119(1-2)، 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. Monolithic macroporous hydrogels د تیلو په اوبو کې د لوړ داخلي مرحلو ایمولشنونو څخه چمتو شوي ترڅو د انټرو ویروسونو مؤثره تصفیه وکړي. کیمیاوي. برتانیا.401، 126051 (2020).
شی، وائی، ژیانګ، آر، هوروات، سی او ولکینز، JA په پروټیومکس کې د مایع کروماتګرافی رول.کروماتګرافي.A 1053 (1-2)، 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L.& Guillarme, D. د معالجې پیپټایډونو او پروټینونو جلا کولو کې د بیرته راګرځیدونکي مرحلې مایع کروماتګرافي کې رامینځته شوي رجحانات: تیوري او غوښتنلیکونه.درملتون.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC د پیپټایډونو دوه اړخیز جلا کول د RP-RP-HPLC سیسټم په کارولو سره د لومړي او دوهم جلا کولو ابعادو کې د مختلف pH ارزښتونو په کارولو سره.سپتمبر 28 (14)، 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al. د لوړ موثره کروماتګرافیک کالمونو د ډله ایز لیږد ځانګړتیاوې او متحرک فعالیت د C18 فرعي 2 μm سره په بشپړ ډول او په سطحي ډول سوري ذرات وڅیړل شول.سپتمبر Sci.43 (9-10)، 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al. وروستي رجحانات او تحلیلي ننګونې په جلا کولو، پیژندنه او د نبات د بایو اکټیو پیپټایډز.anus.biological anus.Chemical.410(15)، 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s01826100186001861.
Mueller, JB et al. د ژوند د سلطنت پروتومیک منظره. طبیعت 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al. د چمتووالي مایع کروماتګرافي پواسطه د معالجې پیپټایډونو لاندې پروسس کول. مالیکول (بیسل، سویس) 26(15)، 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. مخلوط حالت کروماتګرافي او د بایوپولیمر لپاره د هغې غوښتنلیک.کروماتګرافي.A 1218(49)، 8813–8825(2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y. & Sun, Y. Ligands د مخلوط حالت پروټین کروماتګرافي لپاره: اصول، ځانګړتیا، او ډیزاین.بایو ټیکنالوژي.144(1)، 3-11(2009).