د Nature.com د لیدنې لپاره مننه. هغه براوزر نسخه چې تاسو یې کاروئ محدود CSS ملاتړ لري. د غوره تجربې لپاره، موږ سپارښتنه کوو چې تاسو یو تازه شوی براوزر وکاروئ (یا په انټرنیټ اکسپلورر کې د مطابقت حالت غیر فعال کړئ). په عین حال کې، د دوامداره ملاتړ ډاډ ترلاسه کولو لپاره، موږ به سایټ پرته له سټایلونو او جاواسکریپټ څخه وړاندې کړو.
انګسټیفولیوس لوپین (NLL، Lupinus angustifolius L.) یو دانه لرونکی نبات دی چې د خوړو تولید او خاورې ښه کولو لپاره کارول کیږي. د NLL نړیوال پراختیا د فصل په توګه ډیری رنځوریک فنګسي راجلب کړي دي، پشمول د لوپین انتراکنوز، کوم چې د انتراکنوز ویجاړونکي ناروغۍ لامل کیږي. دوه ایلیلونه، Lanr1 او AnMan، چې د مقاومت زیاتوالی ورکوي، د NLL نسلګیرۍ کې کارول شوي، مګر د اصلي مالیکول میکانیزمونه نامعلوم پاتې دي. پدې څیړنه کې، د Lanr1 او AnMan مارکرونه د اروپایی NLL نمونو سکرین کولو لپاره کارول شوي. په کنټرول شوي چاپیریال کې د واکسین ازموینې د دواړو مقاومت کونکو بسپنه ورکوونکو اغیزمنتوب تایید کړ. د جین د څرګندولو توپیر پروفایل د استازي مقاومت لرونکي او حساس لینونو کې ترسره شو. د انتراکنوز مقاومت د جین اونټولوژي اصطلاحاتو "GO:0006952 دفاع غبرګون"، "GO:0055114 ریډوکس پروسې"، او "GO:0015979 فوتوسنتز" د ډیر څرګندیدو سره تړاو درلود. برسېره پردې، د Lanr1(83A:476) کرښې د واکسین کولو وروسته په چټکۍ سره د پام وړ ټرانسکرپټوم بیا پروګرام کول وښودل، پداسې حال کې چې نورو لیکو پدې غبرګون کې شاوخوا 42 ساعته ځنډ وښود. دفاعي غبرګونونه د TIR-NBS، CC-NBS-LRR او NBS-LRR جینونو سره تړاو لري، 10 پروټینونه چې په رنځجنیسس کې ښکیل دي، د لیپید لیږد پروټینونه، انډوګلوکان-1,3-β-ګلوکوسیډیز، ګلیسین بډایه حجروي دیوال پروټینونه، او د اکسیجن د غبرګون لارې څخه جینونه. د 83A:476 لومړني غبرګونونه، په شمول د فوتوسنتز سره تړلي جینونو محتاط فشار، د فنګسي بیولوژي د نباتاتو ودې مرحلې په جریان کې د بریالي محافظت سره سمون درلود، وړاندیز کوي چې یو تاثیر کونکی معافیت رامینځته کوي. د منډیلوپ غبرګون ورو شوی، لکه څنګه چې په ټولیزه توګه افقي ډریګ دی.
د تنګ پاڼو لرونکی لوپین (NLL، Lupinus angustifolius L.) یو لوړ پروټین غله ده چې د لویدیځ مدیترانې سیمې څخه سرچینه اخلي 1,2. دا اوس مهال د څارویو او انسانانو لپاره د خوړو فصل په توګه کرل کیږي. دا د سمبیوټیک نایتروجن فکس کولو باکتریا لخوا د نایتروجن فکس کولو او د خاورې جوړښت عمومي ښه والي له امله د فصل گردش سیسټمونو کې شنه سرې هم ګڼل کیږي. NLL په تیره پیړۍ کې د کورني کولو ګړندۍ پروسې څخه تیر شوی او لاهم د لوړ نسل ورکولو فشار لاندې دی 3,4,5,6,7,8,9,10,11,12. د NLL پراخه کښت سره، د رنځجنیک فنګسونو تسلسل نوي کرنیزې ځایونه رامینځته کړل او د فصل ویجاړونکي نوي ناروغۍ یې رامینځته کړې. د لوپین بزګرانو او نسل ورکوونکو لپاره تر ټولو د پام وړ د انتراکنوز څرګندیدل وو، چې د ناروغۍ فنګس، کولیټوټریکم لوپیني (بونډار) نیرینبرګ، فیلر او هیګډورن13 له امله رامینځته شوی. د لوپین بزګرانو او نسل ورکوونکو لپاره تر ټولو د پام وړ د انتراکنوز څرګندیدل وو، چې د ناروغۍ فنګس، کولیټوټریکم لوپیني (بونډار) نیرینبرګ، فیلر او هیګډورن13 له امله رامینځته شوی. Наиболее примечательным для фермеров и селекционеров люпина было появление антракноза, вызванного патогенным для фермеров نیرنبرګ، فیلر او هګیډورن13. د لوپین بزګرانو او نسل ورکوونکو لپاره تر ټولو د پام وړ د انتراکنوز راڅرګندیدل وو چې د کولیټوټریکم لوپیني (بونډار) نیرنبرګ، فیلر او هیګډورن13 د رنځجنیک فنګس له امله رامینځته شوی و.د Feiler & Hagedorn13 引起的.对于羽扇豆农民和饲养者来说,最引人注目的是炭疽病的出现,它是由病原养者来说(بوندر) 嵵 ویښتان. 1 Наиболее поразительным для фермеров и селекционеров люпина является появление антракноза, вызываемого патоибемого патоиботегенгер (بوندر) نیرنبرګ، فیلر او هاګډورن13. د لوپین بزګرانو او نسل ورکوونکو لپاره تر ټولو په زړه پورې د انتراکنوز راڅرګندیدل دي چې د کولیټوټریکم لوپیني (بونډار) نیرینبرګ، فیلر او هیګډورن13 د رنځجنیک فنګس له امله رامینځته کیږي.د دې ناروغۍ لومړني راپورونه له برازیل او متحده ایالاتو څخه راغلل، چې عادي نښې یې په ترتیب سره په ۱۹۱۲ او ۱۹۲۹ کې څرګندې شوې. په هرصورت، شاوخوا ۳۰ کاله وروسته، دا ناروغي د کولیټوټریکم ګلویسپوریوایډز (پینز) پینز په نوم ونومول شوه. او ساک.، ټیلیومورف ګلومیریلا سینګولاټا (سټون مین) سپاولډ. او ساک.، ټیلیومورف ګلومیریلا سینګولاټا (سټون مین) سپاولډ. & Sacc., телеоморф Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. او ساک.، د ګلومیریلا سینګولاټا (سټون مین) سپاولډ ټیلیومورف. & Sacc. 有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc. 有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld в Целенаправленной морфологии. او ساک.، ګلومیریلا سینګولاټا (سټون مین) سپاولډ په نښه شوي مورفولوژي کې. او ایچ. شرینک،. او ایچ. شرینک،.او ایچ. شرینک. & H.施伦克,. & H.施伦克,.او ایچ. شلینک، .د شلمې پیړۍ په نیمایي کې ترسره شوي د ناروغۍ لومړني فینوټایپینګ په NLL او ژیړ لوپین (L. luteus L.) اکسیجنونو کې یو څه مقاومت وښود، مګر ټول سپین لوپین (L. albus L.) اکسیجنونه چې ازمول شوي وو خورا حساس وو15,16. مطالعاتو ښودلې چې د انتراکنوز پراختیا د اورښت (د هوا رطوبت) او تودوخې (د 12-28 درجو سانتي ګراد په حد کې) سره تړاو لري، چې په لوړه تودوخه کې د مقاومت سرغړونې لامل کیږي17,18. په حقیقت کې، د کونیډیا د ټوکیدنې او ناروغۍ پیل کولو لپاره اړین وخت، د لوړ رطوبت شرایطو لاندې د 12 درجو سانتي ګراد (16 ساعته) په پرتله په 24 درجو سانتي ګراد (4 ساعته) کې څلور ځله لنډ و19. په دې توګه، روانه نړیواله تودوخه د انتراکنوز خپریدو لامل شوې ده. په هرصورت، دا ناروغي په فرانسه (1982) او اوکراین (1983) کې د راتلونکي ګواښ د مخکښ په توګه لیدل شوې وه، مګر په ښکاره ډول د لوپین صنعت لخوا په هغه وخت کې له پامه غورځول شوې وه20,21. څو کاله وروسته، دا ویجاړونکې ناروغي په ټوله نړۍ کې خپره شوه او د لوپین تولیدونکو لوی هیوادونه لکه آسټرالیا، پولنډ او جرمني هم اغیزمن کړل 22,23,24. د 1990 لسیزې په مینځ کې د انتراکنوز د خپریدو وروسته، پراخه سکرینینګ د NLL19 نمونو کې د څو مقاومت لرونکو بسپنه ورکوونکو پیژندلو پایله درلوده. د انتراکنوز په وړاندې د NLL مقاومت د دوو جلا غالب الیلونو لخوا کنټرول کیږي چې په مختلفو جرمپلازم سرچینو کې موندل کیږي: لینر 1 په تنجیل او وونګا کې او انمان په کلتیوار کې. منډالې 25,26. دا الیلونه د مالیکولي مارکرونو بشپړوي چې د نسل ورکولو پروګرامونو کې د مقاومت لرونکي جرمپلازم انتخاب ملاتړ کوي 25,26,27,28,29,30. د مقاومت لرونکي نسل ورکولو کرښه 83A:476 چې د Lanr1 ایلیل لیږدوي د حساس وحشي کرښې P27255 سره تیر شو ترڅو د انتراکنوز مقاومت لپاره د RIL نفوس جلا کول ترلاسه کړي، کوم چې دا ممکنه کړه چې د Lanr1 لوکس کروموزوم NLL-1131، 32، 33 ته وټاکي. د جینومیک چوکاټ سره د انتراکنوز ته د فلانک مقاومت لوسي څخه د لینکج نقشې مارکرونو سمون، NLL د ټولو دریو ایلیلونو موقعیت په ورته کروموزوم (NLL-11) کې څرګند کړ، مګر په مختلفو موقعیتونو کې 29,34,35. په هرصورت، د RILs د لږ شمیر او د مارکرونو او اړوندو ایلیلونو ترمنځ د لوی جینیاتي واټن له امله، د دوی د اصلي جینونو په اړه هیڅ باوري پایلې نشي ترلاسه کیدی. له بلې خوا، په لوپینونو کې د ریورس جینیات کارول د دوی د خورا ټیټ بیا تولید ظرفیت له امله ستونزمن دي، کوم چې جینیاتي لاسوهنه ګرانوي 37.
د کورني جرمپلازم پراختیا چې په همجنسي حالت کې مطلوب الیل لیږدوي، لکه 83A:476 (Lanr1) او منډیلپ (AnMan)، په وحشي نفوس کې د الیلونو د مخالف ترکیبونو شتون په وړاندې د انتراکنوز مقاومت مطالعې ته دروازه پرانیستې ده. د مالیکولر میکانیزمونو امکانات. د ځانګړو جینټایپونو لخوا رامینځته شوي دفاعي غبرګونونه پرتله کړئ. دې مطالعې د C. lupini واکسین کولو ته د NLL لومړني ټرانسکرپټوم غبرګون ارزولی. لومړی، د اروپا NLL جرمپلازم پینل چې 215 لینونه لري د مالیکولر مارکرونو په کارولو سره سکرین شوی و چې د Lanr1 او AnMan ایلیلونو نښه کوي. د انتراکنوز فینوټایپینګ بیا په 50 NLL لینونو کې ترسره شو، چې مخکې د مالیکولر مارکرونو لپاره غوره شوی و، د کنټرول شوي شرایطو لاندې. د دې تجربو پراساس، څلور لینونه چې د انتراکنوز مقاومت او Lanr1/AnMan ایلیلیک ترکیب کې توپیر لري د دوه تکمیلي طریقو په کارولو سره د توپیر دفاعي جین څرګندونې پروفایل کولو لپاره غوره شوي: د لوړ-تروپوټ RNA ترتیب او ریښتیني وخت PCR اندازه کول.
د NLL جرمپلازم (N = 215) سیټ سکرینینګ چې د Lanr1 (Anseq3 او Anseq4) او AnMan (Anseq4) او AnMan (AnManM1) مارکرونو سره وښودله چې یوازې یوه کرښه (95726، د سالامانکا-b ته نږدې) د ټولو مارکرونو لپاره "مقاومت" ایلیل زیاتوي، پداسې حال کې چې "د 'حساس' ایلیلونو شتون" په 158 (~73.5٪) لینونو کې د ټولو مارکرونو تناسب وموندل. دیارلس لینونو د Lanr1 مارکر دوه "مقاومت کونکي" ایلیلونه تولید کړل، او 8 لینونو د Lanr1 مارکر "مقاومت کونکي" ایلیلونه تولید کړل. د AnMan مارکر "مقاومت" ایلیل (ضمیمه جدول S1). دوه لینونه د Anseq3 مارکر لپاره هیټروزایګوس او یو د AnManM1 مارکر لپاره هیټروزایګوس وو. ۴۲ کرښې (۱۹.۵٪) د Anseq3 او Anseq4 الیلونو مخالف پړاوونه درلودل، چې د دې دوو ځایونو ترمنځ د بیا یوځای کیدو لوړه فریکونسي په ګوته کوي. د کنټرول شوي شرایطو لاندې د انتراکنوز فینوټایپونه (ضمیمه جدول S2) د ازمول شوي جینټایپونو په مقاومت کې تغیر څرګند کړ، کوم چې د انتراکنوز شدت کې منعکس شوی و. د اوسط نمرو توپیرونه له ۱.۸ (منځني مقاومت لرونکي) څخه تر ۶.۹ (حساس وړ) پورې او د نبات د وزن توپیرونه له ۰.۶۲ (حساس وړ) څخه تر ۴.۴۵ ګرامه (مقاومت لرونکي) پورې وو. د تجربې په دوو نقلونو کې لیدل شوي ارزښتونو ترمنځ د پام وړ اړیکه وه (د ناروغۍ د شدت نمرو لپاره 0.51، د نبات د وزن لپاره P = 0.00017 او 0.61، P < 0.0001) او همدارنګه د دې دوو پیرامیټرو (− 0.59 او − 0.77، P < 0.0001) ترمنځ. د تجربې په دوو نقلونو کې لیدل شوي ارزښتونو ترمنځ د پام وړ اړیکه وه (د ناروغۍ د شدت نمرو لپاره 0.51، د نبات د وزن لپاره P = 0.00017 او 0.61، P < 0.0001) او همدارنګه د دې دوو پیرامیټرو (− 0.59 او − 0.77، P < 0.0001) ترمنځ. Выявлена ​​достоверная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях эксперимента (0,51 для бажболения, повторностях эксперимента) 0,00017 и 0,61 для массы растения, P < 0,0001), а также между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,77, Р < 0,001). د تجربې په دوو تکرارونو کې لیدل شوي ارزښتونو ترمنځ د پام وړ اړیکه وموندل شوه (د ناروغۍ د شدت نمرو لپاره 0.51، د نبات د وزن لپاره P = 0.00017 او 0.61، P < 0.0001)، او همدارنګه د دې دوو پیرامیټرو ترمنځ (- 0.59 او -0.77، P < 0.0001) 0.0001).在两次重复实验中观察到的值之间存在显着相关性（疾病严重程度评分为0.51 0.00017، 植物重量为0.61،P <0.0001）以及这两个参数之间（- 0.59 和- 0.77،P <0.0001)在 两次重复实验中观察的值之间存在相关性（疾病 严重程度评分丆5‎‏ پاڼې اړوند نور معلومات په فسبوک کې اوګورئ ， p = 0.00017 ， 植物 为 0.61 ， p <0.0001） 以及 两 个 参数 之间 （（（（- 0.59 和–59和تر 0.59 پورې 和- 0.77، P <0.0001). Наблюдалась значительная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях масса растения 0,61، P <0,0001)، и между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,0001) 0,77، P <0,0001. په نقل کې لیدل شوي ارزښتونو (د ناروغۍ شدت نمره 0.51، P = 0.00017 او د نبات وزن 0.61، P < 0.0001) او د دې دوو پیرامیټرو (-0.59 او -0 .0001) 0.77، P <0.0001 ترمنځ د پام وړ اړیکه وه. ).په حساسو نباتاتو کې لیدل شوي معمولي نښې نښانې د "شپون د کمان" جوړښت ته ورته د ډډ کږیدل او تاویدل دي، وروسته د نارنجي / ګلابي سپوروزوایټس سره بیضوي زخمونه راځي (ضمیمه شکل 1). د آسټرالیا اکسیونونه چې Lanr1 (83A:476 او Tanjil) او AnMan (Mandelup) جینونه لیږدوي په منځنۍ کچه مقاومت لري، 0.0331 او 0.0036). ځینې کرښې چې "مقاومت کونکي" Lanr1 او/یا AnMan الیلونه هم لري د ناروغۍ نښې ښیې.
په زړه پورې خبره دا ده چې د NLL څو لینونه چې هیڅ "مقاومت لرونکی" مارکر ایلیل نلري د انتراکنوز مقاومت لوړه کچه (د Lanr1 یا AnMan جینټایپونو په پرتله د پرتلې وړ یا لوړه) ښکاره کړه، لکه بورګین (د دواړو پیرامیټرو لپاره د P ارزښت < 0.0001)، بوجر (د P ارزښت < 0.0001 د سکور لپاره او 0.001 د نبات وزن لپاره) او نفوس B-549/79b (د P ارزښت < 0.0001 د سکور لپاره او غیر مهم). په زړه پورې خبره دا ده چې د NLL څو لینونه چې هیڅ "مقاومت لرونکی" مارکر ایلیل نلري د انتراکنوز مقاومت لوړه کچه (د Lanr1 یا AnMan جینټایپونو په پرتله د پرتلې وړ یا لوړه) ښکاره کړه، لکه بورګین (د دواړو پیرامیټرو لپاره د P ارزښت < 0.0001)، بوجر (د P ارزښت < 0.0001 د سکور لپاره او 0.001 د نبات وزن لپاره) او نفوس B-549/79b (د P ارزښت < 0.0001 د سکور لپاره او غیر مهم). Интересно, что несколько линий NLL، лишенных какого-либо «резистентного» маркерного аллеля, показали высокий уровень увоантного уровеньке. (сопоставимый или более высокий, чем для генотипов Lanr1 или AnMan)، таких как Boregine (значение P <0,0001 для обоиение парамечение) 0,0001 د وزرو او 0,001 لپاره массы растения) и популяции B-549/79b (значение P <0,0001 для оценки и незначимо для массы). په زړه پورې خبره دا ده چې د NLL څو لینونه چې هیڅ 'مقاومت لرونکی' مارکر ایلیل نلري د انتراکنوز په وړاندې د مقاومت لوړه کچه ښودلې (د Lanr1 یا AnMan جینټایپونو سره پرتله کیدونکی یا لوړ)، لکه بورګین (د دواړو پیرامیټرو لپاره د P ارزښت < 0.0001)، بوجر (د P ارزښت < 0.0001 د ارزونې لپاره او 0.001 د نبات وزن لپاره) او نفوس B-549/79b (د P ارزښت < 0.0001 د ارزونې لپاره او د وزن لپاره مهم نه دی).有趣的是，一些缺乏任何“抗性”标记等位基因的NLL 系显示出高水平的炭疽病抗怗基因型相当或更高），例如Borgeine（两个参数的P 值<0.0001）、Bojar）P 值<得分为0.0001，植物重量为0.001）和种群B-549/79b（得分P 值< 0.0001, 重量不漉。 دا په زړه پورې ده چې ځینې NLL سیسټمونه چې هیڅ "انټيجینک" مارکرونه نلري لوړ افقي مقاومت ښیې (د Lanr1 یا AnMan جینونو سره مساوي یا لوړ)، لکه بورګین (دواړه پیرامیټرونه P < 0.0001)، بوجر (P ارزښت < 0.0001، د نبات وزن 0.001) او سټرین B-549/79b (P ارزښت < 0.0001، وزن مهم نه دی). Интересно, что некоторые линии NLL، лишенные каких-либо маркерных аллей «резистентности»، показали высокие уровни устоиности высокие. (сравнимые или выше, чем у генотипов Lanr1 или AnMan), такие как Boregine (значение P для обоих параметров <0,0001)، Bojar (<0,00001) بوجار 0,001) и популяция B-549/79b (оценка P-значение <0,0001, масса незначительна). په زړه پورې خبره دا ده چې د NLL ځینې لینونه چې هیڅ 'مقاومت' مارکر ایلیلونه نلري د انتراکنوز مقاومت لوړه کچه ښودلې (د Lanr1 یا AnMan جینټایپونو سره پرتله کیدونکی یا لوړ)، لکه بورګین (د دواړو پیرامیټرو لپاره د P ارزښت <0.0001)، بوجر (P- ارزښت <0.0001، د نبات وزن 0.001) او نفوس B-549/79b (P- ارزښت <0.0001، وزن مهم نه دی).دا پدیده د مقاومت د یوې نوې جینیاتي سرچینې احتمال وړاندیز کوي، چې د مارکر جینټایپونو او د ناروغۍ فینوټایپونو ترمنځ د اړیکو لیدل شوي نشتوالي تشریح کوي (د P ارزښتونه له ~0.42 څخه تر ~0.98 پورې). په دې توګه، د کولموګوروف-سمیرنوف ازموینې وښودله چې د انتراکنوز مقاومت په اړه معلومات تقریبا په نورمال ډول د نمرو (P- ارزښتونه 0.25 او 0.11) او د نباتاتو ډله (P- ارزښتونه 0.47 او 0.55) لپاره ویشل شوي وو، زه وړاندیز کوم چې زه فرض کوم چې د Lanr1 او AnMan په پرتله ډیر الیلونه ښکیل دي.
د انتراکنوز مقاومت سکرینینګ د پایلو پراساس، د ټرانسکرپټوم تحلیل لپاره 4 کرښې غوره شوې: 83A:476، بورګین، منډیلوپ، او نفوس 22660. دا کرښې د RNA ترتیب له لارې د واکسین کولو تجربو کې د انتراکس مقاومت لپاره بیا ازموینه شوې، په دې شرط چې دوی د تیرو ازموینې په څیر وي. د نمرې ارزښتونه په لاندې ډول وو: بورګین (1.71 ± 1.39)، 83A: 476 (2.09 ± 1.38)، منډیلوپ (3.82 ± 1.42) او نفوس 22660 (6.11 ± 1.29).
د ایلومینا نووا سیک ۶۰۰۰ پروتوکول په اوسط ډول په هر نمونه کې ۴۰.۵ مریډ جوړې ترلاسه کړې (۲۹.۷ څخه تر ۵۴.۴ مریډ پورې) (ضمیمه جدول S3). د حوالې ترتیب کې د سمون نمرې له ۷۵.۵٪ څخه تر ۸۸.۶٪ پورې وې. د بیولوژیکي نقلونو ترمنځ د تجربوي ډولونو ترمنځ د لوستلو شمیرنې معلوماتو اوسط اړیکه له ۰.۸۱۲ څخه تر ۰.۹۹۷ پورې وه (اوسط ۰.۹۵۹). د تحلیل شویو ۳۵،۱۷۰ جینونو څخه، ۲۹۱۷ هیڅ څرګندونه نه ده ښودلې، او نور ۴۷۸۵ جینونه په نه منلو وړ کچه څرګند شوي (د اساس اوسط < ۵). د تحلیل شویو ۳۵،۱۷۰ جینونو څخه، ۲۹۱۷ هیڅ څرګندونه نه ده ښودلې، او نور ۴۷۸۵ جینونه په نه منلو وړ کچه څرګند شوي (د اساس اوسط < ۵). Из 35 170 проанализированных генов 2917 не проявляли экспрессии, а остальные 4785 генов экспрессировались на незвналозированных среднее <5). د تحلیل شویو ۳۵،۱۷۰ جینونو څخه، ۲۹۱۷ هیڅ څرګندونه نه ده ښودلې، او پاتې ۴۷۸۵ جینونه په نه منلو وړ کچه څرګند شوي (د اساس اوسط <۵).在分析的35,170 个基因中，2917 个没有表达，其他4785 个基因的表达可以忽略不计﹏ ۵).۳۵،۱۷۰ IS 35 170 проанализированных генов 2917 не экспрессировались, а остальные 4785 генов имели незначительную экспрессировались значение <5). د تحلیل شویو ۳۵،۱۷۰ جینونو څخه، ۲۹۱۷ یې څرګند نه شول او پاتې ۴۷۸۵ جینونه یې د پام وړ څرګندونه درلوده (اساسي اوسط <۵).په دې توګه، د تجربې په جریان کې د څرګند شوي جینونو شمیر (د اساس اوسط ≥ 5) 27,468 (78.1٪) و (ضمیمه جدول S4).
د لومړي وخت نقطې څخه، ټولو NLL لینونو د ټرانسکرپټوم بیا پروګرام کولو سره د C. lupini (strain Col-08) واکسین کولو ته ځواب ورکړ (جدول 1)، په هرصورت، د لینونو ترمنځ د پام وړ توپیرونه لیدل شوي. په دې توګه، د مقاومت کرښه 83A:476 (د Lanr1 جین لیږدوي) په لومړي وخت نقطه (6 hpi) کې د پام وړ ټرانسکرپټوم بیا پروګرام کول وښودل چې پدې وخت نقطه کې د نورو وخت نقطو په پرتله د جلا شوي پورته او ښکته جینونو شمیر کې 31-69 ځله زیاتوالی و. سربیره پردې، دا چوکۍ لنډمهاله وه، ځکه چې یوازې د څو جینونو څرګندونه په دوهم وخت نقطه (12 hpi) کې د پام وړ بدلون موندلی و. په زړه پورې خبره دا ده چې بورګین، کوم چې د ګرافټ ازموینې کې د مقاومت لوړه کچه هم ښودلې، د تجربې په جریان کې دومره لوی ټرانسکرپشنل بیا پروګرام کولو څخه تیر نه شو. په هرصورت، د توپیر لرونکي څرګند شوي جینونو (DEG) شمیر د بورګین او 83A:476 لپاره په 12 HPI کې ورته و. منډیلپ او نفوس ۲۲۶۶۰ دواړو د وروستي وخت نقطې (۴۸ لیتره/ثانیې) کې د DEG لوړوالی ښودلی، چې د دفاعي غبرګونونو کې نسبي ځنډ په ګوته کوي.
ځکه چې 83A:476 د C. lupini په ځواب کې د نورو ټولو کرښو په پرتله په 6 HPI کې د لوی ټرانسکرپټوم بیا پروګرام کولو څخه تیر شو، پدې وخت کې لیدل شوي DEGs ~91٪ د نسب ځانګړي وو (شکل 1). په هرصورت، د مطالعې کرښو ترمنځ په لومړیو ځوابونو کې یو څه اوورلیپ شتون درلود، ځکه چې په بورګین، منډیلپ، او نفوس 22660 کې په ترتیب سره 68.5٪، 50.9٪، او 52.6٪ DEG، په 83A:476 کې موندل شوي سره په ځینو وختونو کې سره یوځای شوي. په هرصورت، دا DEGs د ټولو DEGs یوازې یوه کوچنۍ برخه (0.97–1.70٪) حساب کوي چې اوس مهال د 83A:476 په کارولو سره کشف شوي. برسېره پردې، د ټولو کرښو څخه 11 DEGs په دې وخت کې همغږي وو (ضمیمه جدولونه S4-S6)، په شمول د نباتاتو د دفاع غبرګونونو عام اجزا: د لیپید لیږد پروټین (TanjilG_32225)، endoglucan-1,3-β-glucoside انزایم (TanjilG_23384)، دوه فشار-انډیکیبل پروټینونه لکه SAM22 (TanjilG_31528 او TanjilG_31531)، اساسي لیټیکس پروټین (TanjilG_32352)، او دوه ګلیسین بډایه ساختماني حجروي دیوال پروټینونه (TanjilG_19701 او TanjilG_19702). د 83A:476 او بورګین ترمنځ په 24 HPI (ټول 16-38٪ DEG) او د منډیلپ او نفوس 22660 ترمنځ په 48 HPI (ټول 14-20٪ DEG) کې د ټرانسکرپټوم غبرګونونو کې نسبتا لوړ اوورلیپ هم شتون درلود.
د وین ډیاګرام چې د تنګ پاڼو لوپین (NLL) لینونو کې د توپیر لرونکي څرګند شوي جینونو (DEG) شمیر ښیې چې د کولیټوټریکم لوپیني سره واکسین شوي (د فشار Col-08 د ویرژینیس، پولنډ، 1999 کې د لوپین ساحو څخه ترلاسه شوی). تحلیل شوي NLL لینونه دا وو: 83A:476 (مقاومت لرونکی، د Lanr1 ایلیل لیږدونکی)، بورګین (مقاومت لرونکی، جینیاتي شالید نامعلوم)، منډیلپ (منځني مقاومت لرونکی، د ان مین ایلیل لیږدونکی) او نفوس 22660 (ډیر حساس). لنډیز hpi د واکسین کولو وروسته ساعتونو لپاره ولاړ دی. د ګراف ساده کولو لپاره صفر ارزښتونه لرې شوي دي.
د ۶ hpi په کچه د ډیر څرګند شوي جینونو سیټ د کانونیکي R جین ډومینونو شتون لپاره تحلیل شو (ضمیمه جدول S7). دې مطالعې یوازې په 83A:476 کې د NBS-LRR ډومینونو سره د کلاسیک ناروغۍ مقاومت جینونو ټرانسکرپټوم انډکشن څرګند کړ. دا سیټ یو TIR-NBS-LRR جین (tanjilg_05042)، پنځه CC-NBS-LRR جینونه (tanjilg_06165، tanjilg_06162، tanjilg_22773، tanjilg_22640، او tanjilg_16162)، او څلور NBS-LR، Tanjilg_16162)، او څلور NBS-LRRE (tanjilg_16162) او همدارنګه څلور NBS-Lrr (tanjilg_16162) او څلور NBS-LRR (TANJILG_16162) شامل وو. دا ټول جینونه کانونیکي ډومینونه لري چې په خوندي ترتیبونو کې تنظیم شوي دي. د NBS-LRR ډومین جینونو سربیره، څو RLL کایناسونه په 6 hpi کې فعال شوي، چې یو یې په بورګین (TanjilG_19877)، دوه یې په منډیلوپ (TanjilG_07141 او TanjilG_19877) او په 22660 نفوس (TanjilG_09014 او TanjilG_10361) کې او دوه یې په 83A 27:476 کې.
هغه جینونه چې د C. lupini (strain Col-08) سره د واکسین کولو په ځواب کې د پام وړ بدلون سره څرګند شوي وو د جین اونټولوژي (GO) غني کولو تحلیل سره مخ شول (ضمیمه جدول S8). تر ټولو ډیر وړاندې شوی بیولوژیکي پروسه اصطلاح "GO:0006952 دفاعي غبرګون" وه چې د 16 څخه په 6 (وخت × کرښه) ترکیبونو کې د لوړ اهمیت سره راڅرګنده شوه (P ارزښت < 0.001) (شکل 2). تر ټولو ډیر وړاندې شوی بیولوژیکي پروسه اصطلاح "GO:0006952 دفاعي غبرګون" وه چې د 16 څخه په 6 (وخت × کرښه) ترکیبونو کې د لوړ اهمیت سره راڅرګنده شوه (P ارزښت < 0.001) (شکل 2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 защитный ответный ответный отвеловявякого», из 16 (время × линия) комбинаций с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). تر ټولو ډیر وړاندې شوی بیولوژیکي پروسه اصطلاح 'GO:0006952 دفاعي غبرګون' وه، کوم چې د لوړ اهمیت (P ارزښت < 0.001) سره د 16 څخه په 6 (وخت × نسب) ترکیبونو کې راڅرګند شو (شکل 2).د个中,具有高显着性（P 值<0.001）（图2）. د بیولوژیکي پروسې تر ټولو استازې اصطلاح "GO:0006952 دفاعي غبرګون" ده، کوم چې د 16 (时间×线) ترکیبونو څخه په 6 کې ښکاري، د لوړ اهمیت سره (P ارزښت < 0.001) (图2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 دفاعي ځواب», который появленным комбинаций (время × линия) с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). د بیولوژیکي پروسې تر ټولو ډیر استازیتوب شوی اصطلاح 'GO:0006952 دفاع غبرګون' وه، کوم چې د 16 ترکیبونو څخه په 6 کې (وخت × کرښه) د لوړ اهمیت سره راڅرګند شو (P ارزښت < 0.001) (شکل 2).دا اصطلاح په 83A کې په دوو وختونو کې زیاته ښودل شوې وه: 476 او بورګین (6 او 24 hpi) او په منډیلپ او نفوس 22660 کې په یو وخت کې (په ترتیب سره 12 او 6 hpi). دا یوه تمه شوې پایله ده، چې د مقاومت لرونکو کرښو د فنګس ضد غبرګون په ګوته کوي. برسېره پردې، 83A:476 د C. lupini سره د "GO:0055114 ریډوکس پروسې" اصطلاح لخوا استازیتوب شوي اکسیډیټیو برسټ پورې اړوند جینونو په چټکۍ سره هڅولو سره ځواب ورکړ، چې یو ځانګړی دفاعي غبرګون په ګوته کوي، پداسې حال کې چې بورګین د 'GO' اصطلاح سره اړوند ځانګړي دفاعي غبرګونونه څرګند کړل. :0006950 د فشار غبرګون". نفوس 22660 د ثانوي میټابولیتونو په ګډون د افقي مقاومت غبرګون فعال کړ، چې د "GO:0016104 د ټریټرپین بایوسینتیسس پروسه" او "GO:0006722 د ټریټرپین میټابولیزم پروسه" (دواړه اصطلاحات د جینونو ورته سیټ پورې اړه لري) ډیر شمیر اصطلاحات په ګوته کوي، د GO اصطلاح غني کولو تحلیل پایلو ته په پام سره، د منډیلوپ غبرګون ثبات د بورګین او نفوس 22660 ترمنځ و. سربیره پردې، د لومړني غبرګون 83A:476 (6 hpi) او ځنډیدلي غبرګون منډیلوپ او نفوس 22660 کې د GO:0015979 'فوټوسینتیسس' اصطلاح او نور اړوند بیولوژیکي پروسې شاملې دي.
د بایو پروسس جین اونټولوژي اصطلاحات چې د انتراکس لوپین (Col-08 strain چې په 1999 کې د پولنډ په ویرژینیس کې د لوپین ساحو څخه ترلاسه شوی) سره د تنګ پاڼو لوپین (NLL) د ټرانسکرپټوم غبرګونونو په جریان کې د توپیر لرونکي څرګند شوي جینونو په تشریح کې غوره شوي دي خورا مبالغه شوي دي. د NLL لینونه تحلیل شوي وو: 83A:476 (مقاومت لرونکی، د همجنسي لانر 1 ایلیل لیږدونکی)، بورګین (مقاومت لرونکی، نامعلوم جینیاتي شالید)، منډیلپ (منځني مقاومت لرونکی، د همجنسي انمان ایلیل لیږدونکی) او نفوس 22660 (حساس).
ځکه چې دا څیړنه د هغو جینونو پیژندلو لپاره وه چې د انتراکنوز مقاومت سره مرسته کوي، هغه جینونه چې د GO "GO: 0006952 دفاعي غبرګونونه" او "GO: 0055114 ریډوکس پروسې" اصطلاحاتو ته ټاکل شوي وو د قطع کولو سره تحلیل شوي ځکه چې د بیس لاین معنی ≥ 30 لږترلږه یو کرښه لري. × د وخت نقطه چې د log2 (fold change) د احصایوي پلوه د پام وړ ارزښتونو سره یوځای کوي. د دې معیارونو پوره کولو جینونو شمیر د GO:0006952 لپاره 65 او د GO:0055114 لپاره 524 و.
۸۳A:۴۷۶ د DEG دوه څوکې ښکاره کړې چې د GO:۰۰۶۹۵۲ اصطلاح سره تشریح شوي، لومړی یې په هر انچ کې ۶ جینونه (۶۴ جینونه، پورته او ښکته تنظیم) او دوهم یې په هر انچ کې ۲۴ جینونه (۱۵ جینونه، یوازې پورته تنظیم). بورګین دا هم وښودله چې GO:۰۰۶۹۵۲ په ورته وخت کې لوړ شوی، مګر د لږ DEG (۱۱ او ۸) او غوره فعالولو سره. منډیلوپ د GO:۰۰۶۹۵۲ دوه څوکې په ۱۲ او ۴۸ HPI کې وښودلې، دواړه ۱۲ جینونه لري (لومړی یې د فعالولو جینونو سره، او دوهم یې یوازې د فشار ورکولو جینونو سره)، پداسې حال کې چې د ۲۲۶۶۰ نفوس په ۶ HPI (۱۳ جینونو) کې د زیاتوالي د څوکې تنظیم ډیر غالب و. دا باید په پام کې ونیول شي چې په دې څوکو کې د GO:0006952 DEG 96.4٪ ورته ډول غبرګون درلود (پورته یا ښکته)، چې د ښکیلو جینونو په شمیر کې توپیر سره سره د دفاعي غبرګونونو کې د پام وړ اوورلیپ ښیې. د GO:0006952 اصطلاح پورې اړوند د ترتیبونو ترټولو لویه ډله د لوږې فشار سره تړلي پیغام پروټین 22 (SAM22-like) کوډ کوي، کوم چې د 10 ټولګي رنځجنیسس سره تړلي پروټین (PR-10) پروټین کلیډ او اصلي پروټین لیټیکس پورې اړه لري. ورته (MLP-like) پروټین) پروټین (انځور 3). دواړه ډلې د بیان طبیعت او د غبرګون لوري کې توپیر درلود. د SAM22-like پروټینونو کوډ کولو جینونه د لومړني وخت ټکو (6 یا 12 hpi) کې ثابت او د پام وړ انډکشن ښودلی او عموما د تجربې په پای کې غیر ځواب ویونکي وو (48 hpi)، پداسې حال کې چې د MLP-like پروټینونه په 6 hpi کې همغږي ښودلې. hpi. د 83A:476 او منډیلپ په 48 hp/in کې، نږدې ټول نور معلوماتي ټکي غیر ځواب ویونکي وو. سربیره پردې، د SAM22 په څیر پروټین جینونو د څرګندولو پروفایلونو کې توپیر د انتراکنوز مقاومت کې د لیدل شوي تغیراتو تعقیب کړ، ځکه چې ډیر مقاومت لرونکي لینونه د ډیر حساس جینونو په پرتله د دې جینونو هڅولو لپاره ډیر وخت ټکي درلودل. یو بل LlR18A/B په څیر PR-10 جین د SAM22 په څیر پروټین جین ته ډیر ورته د څرګندولو نمونه ښودلې.
د بیولوژیکي پروسې اصطلاح "GO:0006952 دفاع غبرګون" اصلي برخې او د Lanr1 او AnMan ایلیلونو د نوماند جینونو د څرګندولو نمونې پیژندل شوي. د Log2 پیمانه د log2 ارزښتونو (د فولډ بدلون) استازیتوب کوي چې د واکسین شوي (Colletotrichum lupini، strain Col-08، د لوپین ساحو څخه ترلاسه شوي، Wizhenica، Poland، 1999) او کنټرول (sham-inoculated) نباتاتو ترمنځ په ورته وخت کې. لاندې تنګ پاڼې لوپین لینونه تحلیل شوي: 83A:476 (مقاومت لرونکی، د همجنسي Lanr1 ایلیل لیږدونکی)، بورګین (مقاومت لرونکی، جینیاتي شالید نامعلوم)، منډیلپ (منځني مقاومت لرونکی، د همجنسي AnMan ایلیل لیږدونکی)، او نفوس 22660 (حساس وړ).
برسېره پردې، د RNA-seq نوماند جینونو Lanr1 (TanjilG_05042) او AnMan (TanjilG_12861) د څرګندولو پروفایلونه ارزول شوي (شکل 3). د TanjilG_05042 جین یوازې په لومړي وخت نقطه (6 hpi) کې په 83A:476 کې د پام وړ غبرګون (فعالیت) ښودلی، پداسې حال کې چې TanjilG_12861 یوازې په دوه وخت نقطو کې په منډیلوپ کې د پام وړ و: 6 hpi (کم تنظیم) او 24 hpi (6 hpi). سره.). تنظیم وړ)).
د GO:0055114 "ریډوکس پروسې" په اصطلاح کې تر ټولو ډیر څرګند شوي جینونه هغه جینونه وو چې د سایټوکروم P450 پروټینونو او پیرو آکسیډیز کوډ کول (انځور 4). د 83A:476 څخه د 6 HPI په جلا شوي نمونو کې، د اعظمي یا لږترلږه log2 (د فولډ بدلون) ارزښتونه (د 86.6٪ جینونو لپاره) عموما د واکسین شوي او کنټرول نباتاتو ترمنځ لیدل شوي، چې د دې جینټایپ لوړ غبرګون د واکسین کولو جنس ته روښانه کوي. 83A:476 ترټولو مهم GO وښود: 0055114 DEG په 6 hpi (503 جینونو) کې، پداسې حال کې چې پاتې کرښې په 48 hpi کې (بوریګین، 31 جینونه؛ منډیلپ، 85 جینونه؛ او نفوس 22660، 78 جینونه)). د GO:0055114 کورنۍ په ډیری جینونو کې، د واکسین کولو لپاره دوه ډوله غبرګونونه (فعالول او مخنیوی) لیدل شوي. په زړه پورې خبره دا ده چې د DEGs تر 97.6٪ پورې چې د GO اصطلاح لپاره پیژندل شوي: 0055114 په منډیلوپ کې په 48 hp کې دا مشاهدې وړاندیز کوي چې د پام وړ کوچني پیمانه سره سره (د بیلګې په توګه، د بدل شوي ریډوکس جینونو شمیر، 85 د 503 په مقابل کې)، د انتراکنوز ته د منډیلوپ د ځنډیدلي ټرانسکرپټوم غبرګونونو نمونه د 83A:476 لومړني غبرګون سره ورته ده. په بورګین او نفوس 22660 کې، دا همغږي په ترتیب سره په 51.6٪ او 75.6٪ کې ټیټه ده.
د بیولوژیکي پروسې "GO:0055114 ریډوکس پروسې" د اصطلاح د اصلي برخو د څرګندولو نمونې څرګندې شوې. د Log2 پیمانه د log2 ارزښتونو (د فولډ بدلون) استازیتوب کوي چې د واکسین شوي (Colletotrichum lupini، strain Col-08، د لوپین ساحو څخه ترلاسه شوي، Wizhenica، Poland، 1999) او کنټرول (sham-inoculated) نباتاتو ترمنځ په ورته وخت کې. لاندې تنګ پاڼې لوپین لینونه تحلیل شوي: 83A:476 (مقاومت لرونکی، د همجنسي لانر 1 ایلیل لیږدونکی)، بورګین (مقاومت لرونکی، جینیاتي شالید نامعلوم)، منډیلپ (منځني مقاومت لرونکی، د همجنسي انمان ایلیل لیږدونکی)، او نفوس 22660 (حساس وړ).
83A:476 د C. lupini (strain Col-08) سره د واکسین کولو لپاره ټرانسکرپټومیک غبرګونونه د GO:0015979 "فوټوسینتیز" اصطلاح او نورو اړوندو بیولوژیکي پروسو (شکل 5) ته منسوب جینونو همغږي خاموش کول هم شامل وو. پدې GO:0015979 DEG سیټ کې 105 جینونه شامل وو چې په 83A:476 کې په 6 hpi کې د پام وړ فشار شوي وو. پدې فرعي سیټ کې، 37 جینونه هم په منډیلپ کې په 48 HPI کې او 35 په ورته وخت کې د 22660 نفوس کې ښکته تنظیم شوي وو، په شمول د 19 DEGs چې د دواړو جینټایپونو لپاره عام دي. د GO: 0015979 اصطلاح پورې اړوند هیڅ DEGs په هیڅ ترکیب کې د پام وړ فعال شوي نه وو (د کرښې x وخت).
د بیولوژیکي پروسې "GO:0015979 فوتوسنتز" اصطلاح د اصلي برخو د څرګندولو نمونې څرګندې شوې. د Log2 پیمانه د log2 ارزښتونو (د فولډ بدلون) استازیتوب کوي چې د واکسین شوي (Colletotrichum lupini، strain Col-08، د لوپین ساحو څخه ترلاسه شوي، Wizhenica، Poland، 1999) او کنټرول (sham-inoculated) نباتاتو ترمنځ په ورته وخت کې. لاندې تنګ پاڼې لوپین لینونه تحلیل شوي: 83A:476 (مقاومت لرونکی، د همجنسي لانر 1 ایلیل لیږدونکی)، بورګین (مقاومت لرونکی، جینیاتي شالید نامعلوم)، منډیلپ (منځني مقاومت لرونکی، د همجنسي انمان ایلیل لیږدونکی)، او نفوس 22660 (حساس).
د توپیري اظهار تحلیل د پایلو پراساس او احتمالاً د رنځجنیک فنګسي په وړاندې د دفاعي غبرګونونو کې دخیل، د اوو جینونو دا سیټ د ریښتیني وخت PCR (ضمیمه جدول S9) لخوا د اظهار پروفایلونو د اندازې لپاره غوره شوی و.
د کنټرول (میک) نباتاتو په پرتله په ټولو مطالعه شویو کرښو او وخت نقطو کې د TanjilG_10657 فرضي پروټین جین د پام وړ هڅول شوی و (ضمیمه جدولونه S10، S11). سربیره پردې، د TanjilG_10657 د اظهار پروفایل د ټولو کرښو لپاره د تجربې په جریان کې د زیاتوالي رجحان ښودلی. نفوس 22660 د TanjilG_10657 ترټولو لوړ حساسیت د 114-fold فعالولو سره او د 24 HPI (شکل 6a) کې د نسبي اظهار ترټولو لوړه کچه (4.4 ± 0.4) سره د واکسین کولو لپاره ښودلی. د PR10 LlR18A پروټین جین TanjilG_27015 هم په ټولو کرښو او وخت نقطو کې فعالول ښودلی، د ډیری معلوماتو نقطو کې احصایوي اهمیت سره (شکل 6b). د TanjilG_10657 په څیر، د TanjilG_27015 د نسبي اظهار لوړه کچه په 22660 واکسین شوي نفوس کې په 24 HPI (19.5 ± 2.4) کې لیدل شوې. د تیزاب انډوچیټیناز جین TanjilG_04706 په ټولو کرښو او ټولو وخت نقطو کې د پام وړ لوړ شوی و پرته له بورګین 6 hpi (انځور 6c). دا په لومړي وخت نقطه (6 HPI) کې په 83A:476 (10.5 ځله) کې په کلکه هڅول شوی و او په نورو کرښو کې په اعتدال ډول زیات شوی و (6.6-7.5 ځله). د تجربې په جریان کې، د TanjilG_04706 څرګندونه په 83A:476 او بورګین کې په ورته کچه پاتې شوه، پداسې حال کې چې په منډیلپ او نفوس 22660 کې دا د پام وړ لوړه شوه، نسبتا لوړ ارزښتونو ته ورسیده (په ترتیب سره 5.9 ± 1.5 او 6.2 ± 1.5). د انډوګلوکان-۱،۳-β-ګلوکوسیډیز په څیر جین TanjilG_23384 په ټولو کرښو کې په لومړیو دوو وخت نقطو (۶ او ۱۲ hpi) کې لوړ فعالوالی ښودلی پرته له ۲۲۶۶۰ نفوس (انځور ۶d). د TanjilG_23384 ترټولو لوړ نسبي څرګندونه کچه په دوهم وخت نقطه (۱۲ hpi) کې په منډیلپ (۲.۷ ± ۰.۳) او ۸۳A:۴۷۶ (۱.۵ ± ۰.۱) کې لیدل شوې. په ۲۴ HPI کې، TanjilG_23384 څرګندونه په ټولو مطالعه شویو کرښو کې نسبتا ټیټه وه (له ۰.۰۴ ± ۰.۰۰۹ څخه تر ۰.۴۴ ± ۰.۱۲ پورې).
د ټاکل شویو جینونو (ag) د څرګندولو پروفایلونه چې د کمیتي PCR لخوا څرګند شوي. شمیرې 6، 12 او 24 د واکسین کولو وروسته ساعتونه استازیتوب کوي. د LanDExH7 او LanTUB6 جینونه د نورمال کولو لپاره کارول شوي او LanTUB6 د لړۍ ترمنځ کیلیبریشن لپاره کارول شوي. د غلطیو بارونه د دریو بیولوژیکي نقلونو پراساس معیاري انحراف استازیتوب کوي، چې هر یو یې د دریو تخنیکي نقلونو اوسط دی. د واکسین شویو (کولیټوټریکم لوپیني، سټرین کول-08، چې په 1999 کې د ویرزینیکا، پولنډ کې د لوپین ساحې څخه ترلاسه شوی) او کنټرول (مک-انوکولیټ شوي) نباتاتو ترمنځ د څرګندیدو کچې کې د توپیرونو احصایوي اهمیت د معلوماتو ټکو څخه پورته نښه شوی (*P ارزښت < 0.05، **P ارزښت ≤ 0.01، ***P ارزښت ≤ 0.001). د واکسین شویو (کولیټوټریکم لوپیني، سټرین کول-08، چې په 1999 کې د ویرزینیکا، پولنډ کې د لوپین ساحې څخه ترلاسه شوی) او کنټرول (مک-انوکولیټ شوي) نباتاتو ترمنځ د څرګندیدو کچې کې د توپیرونو احصایوي اهمیت د معلوماتو ټکو څخه پورته نښه شوی (*P ارزښت < 0.05، **P ارزښت ≤ 0.01، ***P ارزښت ≤ 0.001). Статистическая значимость различий в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамм Col-08, получен 9 получен в 19. в Верженице, Польша) и контрольными (ложно инокулированными) растениями отмечена над точками данных (*значение P < 0,015,015 ***ژباړه P (≤ 0,001). د واکسین شوي (کولیټوټریکم لوپیني، سټرین کول-08، چې په 1999 کې د ویرژینیس، پولنډ کې د لوپین ساحې څخه ترلاسه شوی) او کنټرول (شیم-انوکولیټ شوي) نباتاتو ترمنځ د څرګندیدو په کچه کې د احصایوي پلوه د پام وړ توپیرونه د معلوماتو ټکو څخه پورته یادونه شوې (*P ارزښت < 0.05، **P- ارزښت ≤ 0.01، ***P- ارزښت ≤ 0.001).接种 (کولیټوتریکم لوپیني، کول-08株، 1999年从波兰Wierzenica的羽扇豆田获得和对照（模拟接种）植物之间表达水平差异的统计学显着性标记在数据点） 0.05، **P 值≤ 0.01، ***P 值≤ 0.001).接种 （colletotrichum lupini ，color-08 株，1999水平 差异 的统计学 显着性 标记 数据点 上方*p 值 <0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001). Статистически значимые различия в уровнях экспрессии между инокулированными Верженице, Польша, в 1999 г.) и контрольными (ложно инокулированными) растениями отмечены над точками данных (* , <05,0** P-значение ≤ 0,01, ***P-значение ≤ 0,001). د واکسین شوي (کولیټوټریکم لوپیني، سټرین کول-08، چې په 1999 کې د پولنډ په ویرژینیس کې د لوپین ساحو څخه ترلاسه شوی) او کنټرول (شیم-انوکولیټ شوي) نباتاتو ترمنځ د بیان په کچه کې د احصایوي پلوه د پام وړ توپیرونه د معلوماتو ټکو څخه پورته یادونه شوې (*P ارزښت < 0.05، **P- ارزښت ≤ 0.01، ***P- ارزښت ≤ 0.001).د NLL لینونه تحلیل شوي وو: 83A:476 (مقاومت لرونکی، د همجنسي لانر 1 ایلیل لیږدونکی)، منډیلپ (منځني مقاومت لرونکی، د همجنسي انمان ایلیل لیږدونکی)، بورګین (مقاومت لرونکی، نامعلوم جینیاتي شالید) او نفوس 22660 (حساس).
د Lanr1 په سیمه کې د نوماند جین TanjilG_05042 د RNA-seq مطالعاتو څخه ترلاسه شوي پروفایلونو څخه د څرګندولو یو څرګند توپیر ښودلی (شکل 6e). د دې جین د پام وړ فعالیدل په منډیلوپ او د 22660 نفوس کې لیدل شوي (تر 39.7 او 11.7 ځله پورې، په ترتیب سره)، چې پایله یې د نسبتا لوړ اظهار کچه (تر 1.4 ± 0.14 او 7.2 ± 1.3 پورې، په ترتیب سره) وه. 83A:476 د تنجیلوپ_05042 جین ځینې لوړوالی (تر 3.8 ځله پورې) هم څرګند کړ، په هرصورت، ترلاسه شوي نسبي څرګندولو کچه (0.044 ± 0.002) د منډیلوپ او د 22660 نفوس کې لیدل شوي په پرتله 30 ځله ټیټه وه. د qPCR لخوا تحلیل شوي د جعلي واکسین شوي (کنټرول) ډولونو کې د جینټایپونو ترمنځ د څرګندولو کچې کې د پام وړ توپیرونه ښودلي، چې د 22660 او 83A:476 نفوسو ترمنځ 58 ځله توپیر ته رسیدلی، او همدارنګه د 22660 او 22660 نفوسو ترمنځ. د بورګین او منډالوپ ترمنځ دوه ځله توپیر ترلاسه شو.
د انمان په سیمه کې د نوماند جین، TanjilG_12861، د واکسین کولو په ځواب کې په 83A:476 کې فعال شو او منډیلوپ، په 22660 نفوس کې بې طرفه و، او په بورګین کې کم شوی و (انځور 6f). د TanjilG_12861 جین نسبي څرګندونه په واکسین شوي 83A کې ترټولو لوړه وه: 476 (0.14±0.01). د 17.4 kDa ټولګي I تودوخې شاک پروټین جین TanjilG_05080 HSP17.4 په ټولو مطالعه شوي ډولونو او وخت ټکو کې د نسبي څرګندولو ټیټه کچه ښودلې (انځور 6g). ترټولو لوړ ارزښت په 22660 نفوس کې په 24 HPI کې لیدل شوی (0.14 ± 0.02، د واکسین کولو په ځواب کې اته ځله زیاتوالی).
د جین د څرګندولو پروفایلونو پرتله کول (شکل 7) د TanjilG_10657 او څلورو نورو جینونو ترمنځ لوړ اړیکه څرګنده کړه: TanjilG_27015 (r = 0.89)، TanjilG_05080 (r = 0.85)، TanjilG_05042 (r = 0.80)، او TanjilG_04706 (r = 0.79). دا ډول پایلې ممکن د دفاعي غبرګونونو په جریان کې د دې جینونو ګډ تنظیم په ګوته کړي. TanjilG_12861 او TanjilG_23384 جینونو د نورو جینونو په پرتله د ټیټ پییرسن ارتباط کوفیشینټ ارزښتونو (په ترتیب سره له 0.08 څخه تر 0.43 او -0.19 څخه تر 0.28 پورې) سره مختلف د بیان پروفایلونه وښودل.
د جین د څرګندولو پروفایلونو ترمنځ اړیکې د کمیتي PCR په کارولو سره کشف شوې. لاندې تنګ پاڼې لوپین لینونه تحلیل شوي: 83A:476 (مقاومت لرونکی، د همجنسي لانر 1 ایلیل لیږدونکی)، منډیلپ (منځني مقاومت لرونکی، د همجنسي انمان ایلیل لیږدونکی)، بورګین (مقاومت لرونکی، جینیاتي شالید نامعلوم)، او نفوس 22660 (حساس). درې وخت ټکي محاسبه شوي (6، 12 او 24 ساعته وروسته د واکسین کولو)، پشمول د واکسین کولو (کولیټوټریکم لوپیني، سټرین کول-08، چې په 1999 کې د پولینډ په ویرژینیس کې د لوپین ساحو څخه ترلاسه شوی) او کنټرول (شیم-انوکولیټ شوی) نباتات. پیمانه د پیرسن د ارتباط کوفیفینټ ارزښت ښیې.
د هر انچ په 6 هارس پاور کې ترلاسه شوي معلوماتو پراساس، WGCNA په 9981 DEG باندې ترسره شو چې د واکسین شوي او کنټرول بوټو پرتله کولو له لارې پیژندل شوی ترڅو په لومړني دفاعي غبرګونونو تمرکز وکړي (ضمیمه جدول S12). دوه ویشت جین ماډلونه (کلسترونه) د جینټایپونو او تجربوي ډولونو ترمنځ د اړونده (مثبت یا منفي) څرګندونې پروفایلونو سره وموندل شول. په اوسط ډول، د جین د څرګندولو کچه په ترتیب سره 83A:476 > منډیلپ > بورګین > نفوس 22660 کې ښکته کېده (په هرصورت، دا رجحان په دواړو ډولونو کې د کنټرول نباتاتو کې پیاوړی و). په اوسط ډول، د جین د څرګندولو کچه په ترتیب سره 83A:476 > منډیلپ > بورګین > نفوس 22660 کې ښکته کېده (په هرصورت، دا رجحان په دواړو ډولونو کې د کنټرول نباتاتو کې پیاوړی و). В среднем уровни экспрессии генов снижались в порядке 83A:476 > Mandelup > Boregine > نفوس 22660 у контрольных растений). په اوسط ډول، د جین د څرګندولو کچه په ترتیب 83A:476 > منډیلپ > بورګین > نفوس 22660 کې کمه شوې (په هرصورت، دا رجحان په دواړو ډولونو کې د کنټرول نباتاتو کې پیاوړی و).平均而言，基因表达水平按83A:476 > Mandelup > Boregine > نفوس 22660的顺序下降（然而,在两种变体中,这种趋势在对照植物中更强）.平均而言，基因水平按 83a: 476> mandelup> boregine> نفوس 22660 的 顺序 下降 在 ， 在种 草翭中 更) ….. В среднем уровни экспрессии генов снижались в ряду 83A:476 > Mandelup > Boregine > نفوس 22660 контрольных растений). په اوسط ډول، د جین د څرګندولو کچه په لړۍ 83A:476 > منډیلپ > بورګین > نفوس 22660 کې کمه شوې (په هرصورت، په دواړو ډولونو کې، دا رجحان په کنټرول بوټو کې پیاوړی و).واکسیناسیون د جین څرګندونه لوړه کړه، په ځانګړې توګه په ماډلونو ۱۸، ۱۹، ۱۴، ۶ او ۱ کې (د اغیزې په نزولي ترتیب کې)، منفي تنظیم (د مثال په توګه ماډلونه ۹ او ۲۰) یا د غیر جانبدار اغیزو سره (د مثال په توګه ماډلونه ۱۱، ۲۲، ۸ او ۱۳). د GO اصطلاح غني کولو تحلیل (ضمیمه جدول S13) د اعظمي فعالولو سره د واکسین شوي ماډل (۱۸) لپاره "GO: 0006952 محافظتي غبرګونونه" څرګند کړل، په شمول د qPCR (TanjilG_04706، TanjilG_23384، TanjilG_10657 او TanjilG_27015) لخوا تحلیل شوي جینونه، او همدارنګه ډیری د انوکولیوټ خورا فشار شوي فوتوسنتیز ماډلونه (9). د ماډل ۱۸ متمرکز کوونکی (شکل ۸) د TanjilG_26536 جین په توګه پیژندل شوی چې د PR-10 په څیر LlR18B پروټین کوډ کوي، او د ماډل ۹ متمرکز کوونکی د TanjilG_28955 جین په توګه پیژندل شوی چې د فوتو سیسټم II PsbQ پروټین کوډ کوي. د انتراکنوز مقاومت جین Lanr1، TanjilG_05042، د ماډل ۲۲ (شکل ۹) کې وموندل شو او د "GO:0044260 سیلولر میکرو مالیکولر میټابولیک پروسو" او "GO:0006355 ټرانسکرپشنل ریګولیشن، DNA ټیمپلیټینګ" اصطلاحاتو سره تړاو لري چې TanjilG_01212 مرکز لیږدوي. جین د تودوخې فشار ټرانسکرپشن فکتور A-4a (HSFA4a) کوډ کوي.
د "GO: 0006952 دفاعي غبرګونونو" په نوم د بیولوژیکي پروسې اصطلاحاتو سره د ماډلونو د جین شریک اظهار وزن لرونکی شبکې تحلیل. د qPCR لخوا تحلیل شوي څلور جینونه روښانه کولو لپاره لیګیشن ساده شوی و (TanjilG_04706، TanjilG_23384، TanjilG_10657 او TanjilG_27015).
د "GO: 0006355: د نقل کولو تنظیم، د DNA ټیمپلیټینګ" په نوم د یو ماډل د جین شریک اظهار وزن لرونکی شبکې تحلیل او د امیدوار انتراکنوز مقاومت جین Lanr1 TanjilG_05042 لیږد. د TanjilG_05042 جین او مرکزي TanjilG_01212 جین جلا کولو لپاره لیګیشن ساده شوی و.
په آسټرالیا کې راټول شوي د انتراکنوز مقاومت سکرینینګ وښودله چې ډیری لومړني خوشې شوي کښتونه حساس وو؛ کالیا، کورومپ او منډیلپ د منځنۍ کچې مقاومت لرونکي په توګه تشریح شوي، پداسې حال کې چې وونګا، تنجیل او 83A:476 د لوړ مقاومت لرونکي په توګه تشریح شوي 26,27,31. ورته مقاومت الیل درلود، چې نومول شوی Lanr1، او کورومپ او منډیلپ یو مختلف الیل درلود، نومول شوی AnMan10، 26, 39، پداسې حال کې چې کالیا په یو مختلف الیل تیر کړ. ، Lanr2. په جرمني کې د انتراکنوز مقاومت لپاره سکرینینګ د مقاومت لرونکي کرښې Bo7212 پیژندلو پایله درلوده چې د Lanr1 پرته بل نوماند الیل سره، نومول شوی LanrBo36.
زموږ مطالعې په ازمول شوي جرمپلازم کې د Lanr1 ایلیل خورا ټیټ فریکونسي (شاوخوا 6٪) څرګنده کړه. دا مشاهده د Anseq3 او Anseq4 مارکرونو په کارولو سره د ختیځې اروپا د جرمپلازم سکرینینګ پایلو سره مطابقت لري، کوم چې ښودلې چې Lanr1 ایلیل یوازې په دوه بیلاروس لینونو کې شتون لري. دا وړاندیز کوي چې Lanr1 ایلیل لاهم د سیمه ایزو نسل پالنې برنامو لخوا په پراخه کچه نه کارول کیږي، برعکس په آسټرالیا کې، چیرې چې دا د مارکر په مرسته نسل پالنې لپاره یو له مهمو ایلیلونو څخه دی. دا ممکن د آسټرالیا راپور په پرتله د اروپایی ساحوي شرایطو کې د Lanr1 ایلیل لخوا چمتو شوي د مقاومت ټیټې کچې له امله وي. سربیره پردې، په آسټرالیا کې د لوړ باران سیمو کې د انتراکنوز مطالعاتو ښودلې چې د Lanr1 ایلیل لخوا منځګړیتوب شوي مقاومت غبرګونونه ممکن د هوا شرایطو کې اغیزمن نه وي چې د رنځجن وده او ګړندي پرمختګ سره مرسته کوي 19,42. په حقیقت کې، په اوسني څیړنه کې، د انتراکنوز ځینې نښې نښانې په جینټایپونو کې هم لیدل شوي چې Lanr1 ایلیل لیږدوي، وړاندیز کوي چې مقاومت ممکن د C. lupini پراختیا لپاره د غوره شرایطو لاندې ورک شي. برسېره پردې، د Anseq3 او Anseq4 مارکرونو د شتون په اړه غلط مثبت تعبیرونه، کوم چې د Lanr1 ځای څخه نږدې 1 سانتي متره دي، ممکن 28,30,43 وي.
زموږ مطالعې ښودلې چې 83A:476، چې د Lanr1 ایلیل لیږدوي، د لومړي تحلیل شوي وخت نقطې (6 hpi) کې د لوی پیمانه ټرانسکرپټوم بیا پروګرام کولو سره د C. lupini واکسین ته ځواب ورکړ، پداسې حال کې چې په منډیلپ کې، چې د انمان ایلیل لیږدوي، ټرانسکرپټومیک غبرګونونه ډیر وروسته لیدل شوي. (له 24 څخه تر 48 hp پورې). د دفاعي غبرګونونو کې دا لنډمهاله بدلونونه د ناروغۍ نښو کې توپیرونو سره تړاو لري، چې د مقاومت لپاره د بریالي غبرګون لپاره د لومړني رنځجن پیژندنې اهمیت روښانه کوي. د نبات نسج اخته کولو لپاره، د انتراکس سپورونه باید د کوربه سطحې په اړه د ډیری پراختیا مرحلو څخه تیر شي، پشمول د ټوکیدنې، حجرو ویش، او د اپریسوریم جوړول. ضمیمه یو انتاني جوړښت دی چې د کوربه سطحې سره نښلوي او د کوربه نسجونو ته د ننوتلو اسانتیا برابروي. په دې توګه، د نخود استخراج کې د C. gloeosporioides سپورونه د 75-90 دقیقو انکیوبیشن وروسته د نیوکلیوس لومړۍ ویش، د 90-120 دقیقو وروسته د جراثیم ټیوب جوړول، او د 4 ساعتونو 45 وروسته فشار ښودلی. د آمو سي ګلویسپوریوایډز د ۳ ساعتونو انکیوبیشن وروسته له ۴۰٪ څخه ډیر کونیډیل ټوکیدنه او د ۴ ساعتونو وروسته د اپریسرونو شاوخوا ۲۰٪ جوړښت وښود. د سي ګلویسپوریوایډز د ویروس سره تړلي CAP20 جین د ایوکاډو سطحې موم کې د ۳.۵ ساعتونو انکیوبیشن وروسته د ایپیفایټ جوړونکي کونیډیا کې د ټرانسکرپشن فعالیت وښود چې د CAP20 پروټین لوړ غلظت یې د ۴ ساعتونو او ۴۶ دقیقو وروسته و. په ورته ډول، په سي ټرایفولی کې د میلانین بایوسینتیسس جینونو فعالیت د ۲ ساعتونو انکیوبیشن په جریان کې رامینځته شو چې وروسته د ۱ ساعت وروسته د اپریسوریم جوړیدل. د پاڼو نسجونو مطالعاتو ښودلې چې د سي اکوټاتم سره واکسین شوي سټرابیري په ۸ hpi کې لومړی فشار لري، پداسې حال کې چې د سي کوکوډز سره واکسین شوي روميان په ۴ hpi کې لومړی فشار لري، ۴۸،۴۹. په لویه کچه د کولیټوټریچم spp د وخت پیمانه سره مطابقت لري. د ساري پروسې. د 83A:476 په وړاندې چټک دفاعي غبرګونونه په دې کرښه کې د نبات مقاومت او د اغیزمن کونکي لخوا رامینځته شوي معافیت (ETI) جینونو ښکیلتیا وړاندیز کوي، پداسې حال کې چې د منډیلپ ځنډیدلي غبرګونونه د مایکرو سره تړلي مالیکولر نمونې لخوا رامینځته شوي معافیت (MTI) فرضیه 50 ملاتړ کوي. د 83A:476 او منډیلپ لومړني غبرګونونه. په ځنډیدلي غبرګون کې د پورته یا ښکته تنظیم شوي جینونو ترمنځ جزوي اوورلیپ هم د دې مفهوم ملاتړ کوي، ځکه چې ETI ډیری وختونه د ګړندۍ او پرمختللي MTI غبرګون په توګه ګڼل کیږي چې د انتان په ځای کې د پروګرام شوي حجرو مړینې پایله لري، چې د انافیلیکټیک شاک په نوم پیژندل کیږي 51,52.
ډیری جینونه چې د جین اونټولوژي GO:0006952 "دفاعي غبرګون" اصطلاح ته منسوب شوي د فشار هڅول شوي روژه پیغام 22 پروټین (SAM22 ته ورته) او د اوو لوی لیټیکس پروټین خوښونکو (MLPs) 11 هومولوګونه دي. - ورته پروټینونه 31، 34، 43 او 423 د ترتیب ورته والی ښودلی. د SAM22 په څیر جینونو د پام وړ فعالیدل ښودلي چې اوږد دوام لري، د انتراکنوز مقاومت زیاتوالی ښیې (83A:476 او بورګین). په هرصورت، د MLP په څیر جینونه یوازې په هغو لیکو کې کم شوي چې د کاندید مقاومت ایلیل لیږدوي (83A:476/Lanr1 په 6 hpi او Mandelup/AnMan په 24 hpi). دا باید په یاد ولرئ چې ټول پیژندل شوي SAM22 په څیر هومولوګونه د جین کلستر څخه سرچینه اخلي چې شاوخوا 105 kb پراخیږي، پداسې حال کې چې د MLP په څیر جینونه د جینوم له جلا سیمو څخه سرچینه اخلي. د دې ډول SAM22 په څیر جینونو همغږي فعالول زموږ په پخوانۍ څیړنه کې د ډایپورتیټوکسیکا واکسین کولو په وړاندې د NLL مقاومت په اړه هم وموندل شول، چې وړاندیز کوي چې دوی د دفاعي غبرګون په افقي برخو کې ښکیل دي. دا پایله د SAM22 په څیر جینونو د مثبت غبرګون راپورونو لخوا هم ملاتړ کیږي چې د سیلیسیلیک اسید، فنګسي هڅوونکو، یا هایدروجن پیرو اکسایډ سره ټپي کیدو یا درملنې ته.
د MLP په څیر جینونه د مختلفو غیر حیاتي او بایوټیک فشارونو ته ځواب ویلو لپاره ښودل شوي، په شمول د باکتریا، ویروس او رنځجنیک فنګسي انتاناتو په ډیری نباتاتو کې 55. د نباتاتو او رنځجنیکونو ترمنځ د ځینو تعاملاتو لپاره د غبرګون لارښوونې د قوي زیاتوالي څخه نیولې (د بیلګې په توګه، د ورټیسیلیم ډاهلیا سره د پنبې د انتان په جریان کې) تر پام وړ کمیدو پورې (د بیلګې په توګه، د مڼې ونې د الټرنیریا سپپي سره د انتان وروسته) 56,57. د MLP په څیر 423 جین د پام وړ کموالی د ایوکاډو دفاع په جریان کې د F. niger انتان په وړاندې او د مڼې ونې د انتان په جریان کې لیدل شوی Botryosphaeria berengeriana f. cn. piricola او Alternaria alternata د مڼې رنځونه دي 58,59. سربیره پردې، د مڼې کالي چې د MLP په څیر 423 جین ډیر څرګندوي د مقاومت سره تړلي جینونو ټیټ څرګندونه درلوده او د فنګسي انتان لپاره ډیر حساس وو 59. د Fusarium oxysporum f وروسته، د MLP په څیر 423 جین په مقاومت لرونکي عام لوبیا جرمپلازم کې هم فشار راوړل شو. cn. د لوبیا انتان ۶۰.
زموږ د RNA-seq مطالعې کې د PR-10 کورنۍ نور غړي پیژندل شوي چې د لوړ تنظیم په ځواب کې LlR18A او LlR18B جینونه وو، او همدارنګه د لیپید لیږد پروټین DIR1 لپاره اپریګولډ (1 جین) یا ښکته تنظیم شوی (3 جینونه) جین وو. . برسېره پردې، WGCNA په دې ماډل کې د مرکز په توګه LlR18B جین روښانه کوي، کوم چې د واکسین کولو لپاره خورا حساس دی او ډیری محافظتي غبرګون جینونه لري. LlR18A او LlR18B جینونه د رنځجنیک باکتریا په ځواب کې په ژیړ لوپین پاڼو کې، او همدارنګه د D. توکسیکا واکسین کولو وروسته د NLL ډډونو کې هڅول شوي، پداسې حال کې چې د دې جینونو د وریجو هومولوګ، RSOsPR10، په چټکۍ سره د فنګسي انتان لخوا هڅول شوی و چې احتمالا د جیسمونیک اسید سیګنلینګ لارې 53,61, 62 کې ښکیل دي. DIR1 جین غیر مشخص لیپید ټرانسپورټ پروټینونه کوډ کوي چې د سیسټمیک ترلاسه شوي مقاومت (SAR) پیل لپاره اړین دي. د محافظتي عکس العملونو د پراختیا سره، د DIR1 پروټین د انفیکشن له مرکز څخه د فلویم له لارې لیږدول کیږي ترڅو په لرې پرتو ارګانونو کې SAR هڅوي. په زړه پورې خبره دا ده چې د TanjilG_02313 DIR1 جین د لومړي ځل لپاره په 84A:476 او نفوس 22660 کې د پام وړ هڅول شوی و، مګر د انتراکنوز مقاومت یوازې په 84A:476 کرښه کې په بریالیتوب سره وده وکړه. دا ممکن په NLL کې د DIR1 جین ځینې فرعي فعالیت په ګوته کړي، ځکه چې پاتې درې هومولوګونه یوازې په 83A:476 کرښه کې د 6 hpi په وخت کې د واکسین کولو ځواب ورکړ، او دا غبرګون ښکته لوري ته واستول شو.
زموږ په څیړنه کې، د "GO:0055114 ریډوکس پروسې" په نوم د بیولوژیکي پروسې سره اړوند ترټولو عام اجزا د سایټوکروم P450 پروټین، پیروکسیډیز، لینولیک اسید 9S-/13S-لیپوکسیډیز، او 1-امینوسایکلوپروپین-1-کاربوکسیلیک اسید اکسیډیز وو. سربیره پردې، زموږ WGCNA د HSFA4a هومولوګ د مرکز لیږدونکي ماډلونو په توګه تعریفوي لکه د Lanr1 مقاومت جین نوماند TanjilG_05042. HSFA4a په نباتاتو کې د اټومي لیږد د ریډوکس پورې تړلي تنظیم یوه برخه ده.
د سایټوکروم P450 پروټینونه اکسیډوریوډکټیسونه دي چې په لومړني او ثانوي میټابولیزم کې د NADPH او/یا O2 پورې تړلي هایدروکسیلیشن تعاملات کتلای شي، پشمول د زینو بایوټیکونو میټابولیزم، او همدارنګه د هورمونونو، غوړ اسیدونو، سټیرولونو، د حجرو دیوال اجزاو، بایوپولیمرونو، او د محافظتي مرکباتو بایوسینتیسس 69. زموږ په یوه څیړنه کې، د نبات سایټوکروم P450 فعالیت کې تغیر د ډیرو بدلیدونکو هومولوګونو (37) او د ځانګړو جینونو ترمنځ د غبرګون نمونو کې توپیرونو له امله -10.6 log2 (فولډ بدلون) څخه 5.7 ته راټیټ شو، چې د پورته بیاکتنې منعکس کوي. . په دومره لوی پروټین سوپر فیملي کې د NLL جینونو د بیولوژیکي فعالیت روښانه کولو لپاره یوازې د RNA-seq ډیټا کارول به خورا اټکلي وي. په هرصورت، دا د یادونې وړ ده چې ځینې سایټوکروم P450 جینونه د رنځجنیک فنګسي یا باکتریا په وړاندې د مقاومت زیاتوالي سره تړاو لري، پشمول د الرجیک عکس العملونو کې ونډه 69,70,71.
د دریم ټولګي پیرو اکسایډیزونه څو اړخیز نباتاتي انزایمونه دي چې د نباتاتو د ودې او پراختیا په جریان کې د میټابولیک پروسو پراخه لړۍ کې دخیل دي، او همدارنګه د چاپیریال فشارونو لکه مالګینتوب، وچکالۍ، د رڼا لوړ شدت، او د رنځجن برید په ځواب کې 72. پیرو اکسایډیزونه د انتراسیس سره د نباتاتو د څو ډولونو په تعامل کې دخیل دي، پشمول د سټایلوسانتس هومیلیس او سي ګلویسپوریوایډز، لینز کلیناریس او سي ټرنکټم، فیزولس ولګاریس او سي لینډیموتیانم، کوکومیس سیټیوس او سي لاجیناریم 73،74،75،76. غبرګون خورا ګړندی دی، ځینې وختونه حتی په 4 HPI کې، مخکې لدې چې فنګس د نبات نسج ته ننوځي 73. پیرو اکسایډیز جین د D. توکسیکا NLL واکسین ته هم ځواب ورکړ. د اکسیډیټیو برسټ تنظیم کولو یا د اکسیډیټیو فشار له منځه وړلو لپاره د دوی د عادي دندو سربیره، پیرو اکسایډیز کولی شي د ځانګړو مرکباتو د لیګنیفیکیشن، فرعي یونټ یا کراس لینک کولو پرمهال د حجرو دیوال تقویت پراساس فزیکي خنډونه رامینځته کولو سره د رنځجن وده کې مداخله وکړي. دا فعالیت په سیلیکو کې د TanjilG_03329 جین ته منسوب کیدی شي چې د لیګنین جوړونکي انیون پیرو آکسیډیز کوډ کوي چې زموږ په څیړنه کې د 83A:476 مقاومت لرونکي کرښې کې په 6 HPI کې د پام وړ لوړ شوی و، مګر په نورو ډولونو او وخت ټکو کې نه چې ځواب یې نه دی ورکړی.
د لینولیک اسید 9S-/13S-lipoxygenase د لیپید بایوسینتیسس 78 د اکسیډیټیو لارې لومړی ګام دی. د دې لارې محصولات د نباتاتو په دفاع کې ډیری دندې لري، پشمول د کالوز او پیکټین زیرمو د جوړولو له لارې د حجرو دیوال پیاوړتیا، او د غبرګون لرونکي اکسیجن ډولونو تولید له لارې د اکسیډیټیو فشار تنظیم کول 79,80,81,82,83. په اوسني څیړنه کې، د لینولیک اسید 9S-/13S-lipoxygenase څرګندونه په ټولو ډولونو کې بدله شوې وه، مګر په حساس نفوس 22660 کې، په مختلفو وختونو کې لوړوالی غالب شو، پداسې حال کې چې په هغو ډولونو کې چې مقاومت لرونکي Lanr1 او AnMan ایلیل لیږدوي، دا د دې جینټایپونو ترمنځ د محافظتي انتراکس تعاملاتو کې د آکسی لیپین طبقې تنوع ټینګار کوي.
د 1-امینوسایکلوپروپین-1-کاربوکسیلیټ اکسیډیز (ACO) هومولوګ د پام وړ لوړ شوی (9 جینونه) یا ښکته شوی (2 جینونه) کله چې د لوپین سره واکسین شوی و. د دوو استثناوو سره، دا ټول غبرګونونه په 6 hp کې په 83A:476 کې رامینځته شوي. د ACO پروټینونو لخوا منځګړیتوب شوی انزایمیک تعامل د ایتیلین تولید کې د کچې محدودولو مرحله ده او له همدې امله خورا تنظیم شوی 84. ایتیلین یو نباتي هورمون دی چې د نباتاتو پراختیا تنظیمولو او د ابیوټیک او بایوټیک فشار شرایطو ته د ځواب ویلو کې مختلف رول لوبوي. د ACO لیږد شاملول او د ایتیلین سیګنال کولو لارې فعالول د غبرګون لرونکي اکسیجن ډولونو او فایټو الیکسینونو تولید تنظیمولو سره د هیمیبیوټروفیک فنګس اوریزا اوریزا ته د وریجو مقاومت زیاتولو کې دخیل دي. د پاڼې د انتان یوه ډیره ورته پروسه چې د M. oryzae او C. lupini88,89 ترمنځ موندل شوې، د 83A:476 کرښې کې د ACO هومولوګونو د پام وړ لوړوالي په پس منظر کې چې پدې څیړنه کې راپور شوي، د NLL انتراکنوز ایتیلین ته د مقاومت ورکولو امکان بدلوي چې د مالیکولي لارو کې مرکزي ګام دی.
په دې څیړنه کې، د فوتوسنتز سره تړلو ډیری جینونو لویه پیمانه فشار په 83A:476 کې په 6 hpi او په منډیلوپ او 22660 نفوس کې په 48 hpi کې لیدل شوی. د دې بدلونونو کچه او پرمختګ د کچې سره متناسب دی. پدې تجربه کې د انتراکنوز مقاومت لیدل شوی. پدې وروستیو کې، د فوتوسنتز پورې اړوند ټرانسکرپټونو قوي او لومړني فشار د نباتاتو-پیتوجن تعاملاتو په څو ماډلونو کې راپور شوی، پشمول د پیتوجن باکتریا او فنګسي. عجله (په ځینو تعاملاتو کې د 2 HPI څخه) او د انتان په ځواب کې د فوتوسنتز سره تړلو جینونو نړیوال فشار کولی شي د غبرګون لرونکي اکسیجن ډولونو د ځای پرځای کولو او د سالیسیلیک اسید لارې سره د دوی تعامل پراساس د الرجیک عکس العملونو منځګړیتوب لپاره د نباتاتو معافیت رامینځته کړي 90,94.
په پایله کې، د خورا مقاومت لرونکي نسب (83A:476) لپاره وړاندیز شوي دفاعي غبرګون میکانیزمونه د R جین (احتمالاً TIR-NBS-LRR TanjilG_05042) او د الرجیک غبرګون منځګړیتوب سیلیسیلیک اسید او ایتیلین سیګنالینګ لخوا د چټک رنځجن پیژندنه شامله ده، چې وروسته د اوږد واټن SAR رامینځته کیږي. عمل د DIR-1 پروټین لخوا ملاتړ کیږي. دا باید په یاد ولرئ چې د C. lupini انتان لپاره د بایوټروفیک موده ډیره لنډه ده (نږدې 2 ورځې)، وروسته د نیکروټیک وده 95. د دې مرحلو ترمنځ لیږد ممکن د نیکروسس او د ایتیلین-انډیکیبل پروټینونو څرګندولو سره تړاو ولري چې په کوربه نباتاتو کې د حساسیت غبرګونونو لپاره د محرک په توګه عمل کوي. له همدې امله، د بایوټروفیک مرحله کې د C. lupini د بریالي نیولو لپاره د وخت کړکۍ خورا تنګ ده. د 83A:476 کې په 6 hpi کې لیدل شوي ریډوکس او فوتوسنتز سره تړلي جینونو بیا پروګرام کول د فنګسي هایفا پرمختګ سره مطابقت لري او د بایوټروفیک مرحله کې د بریالي محافظتي غبرګون پراختیا ته اشاره کوي. د منډیلپ او د ۲۲۶۶۰ نفوس ټرانسکرپټومیک غبرګونونه ممکن د فنګس د نیولو لپاره ډیر ځنډیدلي وي مخکې لدې چې نیکروټیک ودې ته لاړ شي، په هرصورت، منډیلپ ممکن د ۲۲۶۶۰ نفوس په پرتله ډیر اغیزمن وي ځکه چې د PR-10 پروټین نسبتا چټک تنظیم افقي مقاومت ته وده ورکوي.
ETI، چې د کانونیکي R جین لخوا پرمخ وړل کیږي، د انتراکنوز په وړاندې د لوبیا مقاومت لپاره یو عام میکانیزم ښکاري. په دې توګه، د لوبیا ماډل میډیکاګو ټرنکاټولا کې، د انتراکنوز مقاومت د RCT1 جین لخوا ورکول کیږي، چې د TIR-NBS-LRR97 نبات R جین ټولګي غړی دی. دا جین په الفالفا کې د پراخ سپیکٹرم انتراکنوز مقاومت هم ورکوي کله چې حساس نباتاتو ته لیږدول کیږي. په عام لوبیا (P. vulgaris) کې، تر دې دمه له دوه درجن څخه ډیر د انتراکنوز مقاومت جینونه پیژندل شوي دي. د دې جینونو څخه ځینې په هغو سیمو کې موندل کیږي چې هیڅ کانونیکي R جین نلري، په هرصورت ډیری نور د کروموزومونو په څنډو کې موقعیت لري چې د NBS-LRR جین کلستر لیږدوي، په شمول د TIR-NBS-LRRs99. د جینوم پراخه SSR مطالعې هم د NBS-LRR جین د عام لوبیا کې د انتراکنوز مقاومت سره اړیکه تایید کړه. کانونیکي R جین هم په جینومیک سیمه کې وموندل شو چې په سپینه لوپین 101 کې د انتراکنوز لوی مقاومت ځای لري.
زموږ کار ښيي چې د نبات د انتان په لومړني پړاو کې فعال شوی سمدستي مقاومتي غبرګون (په غوره توګه د 12 hpi څخه وروسته نه وي)، په مؤثره توګه د تنګ پاڼو لوپین د انتراکنوز څخه ساتي چې د رنځجنیک فنګس کولیلوټریچم لوپیني له امله رامینځته کیږي. د لوړ تروپټ ترتیب په کارولو سره، موږ د NLL نباتاتو کې د انتراکنوز مقاومت جینونو توپیري څرګندونې پروفایلونه وښودل چې د Lanr1 او AnMan مقاومت جینونو لخوا منځګړیتوب شوی. بریالي دفاع کې د پروټینونو لپاره په احتیاط سره ډیزاین کول شامل دي چې د ریډوکس، فوتوسنتز، او رنځجنیسس کې ښکیل دي د یو رنځجن سره د نبات د لومړي تماس په ساعتونو کې. ورته محافظتي غبرګونونه، مګر په وخت کې ځنډول شوي، د ناروغیو څخه د نباتاتو په ساتنه کې خورا لږ اغیزمن دي. د Lanr1 جین لخوا منځګړیتوب شوی د انتراکس مقاومت د R جین (د اغیزمن کونکي لخوا رامینځته شوی معافیت) د عادي چټک غبرګون سره ورته دی، پداسې حال کې چې د AnMan جین ډیری احتمال افقی غبرګون چمتو کوي (د مایکروب سره تړلي مالیکولر نمونې لخوا رامینځته شوی معافیت)، د پایښت منځنۍ کچه چمتو کوي.
د انتراکنوز مارکرونو لپاره د سکرین کولو لپاره کارول شوي ۲۱۵ NLL لینونه ۷۴ ډولونه، ۶۰ لینونه د کراس کولو یا نسل ورکولو له لارې ترلاسه شوي، ۵ میوټینټونه، او ۷۶ وحشي یا اصلي جرمپلازمونه شامل وو. دا لینونه د ۱۷ هیوادونو څخه راغلي، په عمده توګه د پولنډ (۵۸)، هسپانیه (۴۷)، جرمني (۲۷)، آسټرالیا (۲۶)، روسیه (۱۹)، بیلاروس (۷)، ایټالیا (۵) او نورو لینونو څخه. د ۱۰ هیوادونو څخه. په سیټ کې د حوالې مقاومت لرونکي لینونه هم شامل دي: ۸۳A:۴۷۶، تنجیل، وونګا چې د لانر ۱ ایلیل لیږدوي، او منډیلپ چې د انمان ایلیل لیږدوي. دا لینونه د اروپایی لوپین جینیټیک سرچینو ډیټابیس څخه ترلاسه شوي چې د پوزناان نباتاتو نسل ورکولو لمیټډ، ویاټرو، پولنډ لخوا ساتل کیږي (ضمیمه جدول S1).
نباتات د کنټرول شوي شرایطو لاندې کرل شوي وو (د فوتوپیریډ ۱۶ ساعته، د ورځې په اوږدو کې د تودوخې ۲۵ درجې سانتي ګراد او د شپې ۱۸ درجې سانتي ګراد). دوه بیولوژیکي نقلونه تحلیل شوي وو. د پروتوکول سره سم د DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen، Hilden، جرمني) په کارولو سره DNA د دریو اونیو زړو پاڼو څخه جلا شو. د جلا شوي DNA کیفیت او غلظت د سپیکٹروفوټومیټریک میتودونو (NanoDrop 2000؛ Thermo Fisher Scientific، Waltham، MA، USA) لخوا ارزول شوی و. د AnManM1 مارکر چې د انتراکنوز مقاومت جین AnMan (د cv. Mandelup څخه اخیستل شوی) او د Anseq3 او Anseq4 مارکرونه چې د Lanr1 جین سره نږدې دي (د cv. Tanjil څخه اخیستل شوی) د ۱۱،۲۶،۲۸ تحلیل شوي وو. د مقاومت لرونکي ایلیل لپاره هوموزایګوټس د "۱" په توګه، حساس - د "۰" په توګه، او هیټروزایګوټس - د ۰.۵ په توګه نمرې ورکړل شوې.
د AnManM1، AnSeq3 او AnSeq4 د نښه کونکو د سکرینینګ پایلو او د وروستي تعقیبي تجربو لپاره د تخمونو شتون پراساس، د انتراکنوز مقاومت فینوټایپینګ لپاره 50 NLL لینونه غوره شوي. تحلیل په کمپیوټر کنټرول شوي شنه خونه کې د 14 ساعتونو فوتوپیریډ سره په دوه ګوني ډول ترسره شو چې د ورځې په جریان کې د 22 درجو سانتي ګراد او د شپې په جریان کې د 19 درجو سانتي ګراد تودوخې حد سره. تخمونه د کرلو دمخه سکریچ کیږي (د جنین په مخالف اړخ کې د تخم پوښ د تیز تیغ سره پرې کول) ترڅو د تخم پوښ ډیر سخت وي او د یونیفورم ټوکیدنې ډاډ ترلاسه شي. نباتات په لوښو کې (11 × 11 × 21 سانتي متره) د جراثیمي خاورې سره کرل شوي (TS-1 REC 085 میډیم بیسیک، کلاسمن-ډیلمان پولسکا، وارسا، پولنډ). واکسین کول د Colletotrichum lupini Col-08 ډول سره ترسره شول، چې په 1999 کې د تنګ پاڼو لرونکو لوپین بوټو له ډډونو څخه کرل شوي وو چې د لوی پولنډ په ویرژینیتسا (52° 27′ 42″ N 17° 04′ 05″ E) کې په یوه ځمکه کې کرل شوي وو. یوه ساحه ترلاسه کړئ. جلا شوي بوټي د SNA په منځني تودوخه کې د 20 درجو سانتي ګراد په تور رڼا کې د 21 ورځو لپاره کرل شوي ترڅو د تخمونو د جذبولو لامل شي. د کښت کولو څخه څلور اونۍ وروسته، کله چې نباتات د 4-6 پاڼو مرحلې ته ورسیدل، واکسین کول د کونیډیا د تعلیق سره د 0.5 x 106 کونیډیا په هر ملی لیتر غلظت سره سپری کولو سره ترسره شول. د واکسین کولو وروسته، نباتات د 24 ساعتونو لپاره په تیاره کې د 98٪ رطوبت او د 25 درجو سانتي ګراد په تودوخې کې د کونیډیا د ټوکیدنې او د انتان پروسې اسانه کولو لپاره ساتل شوي وو. بیا نباتات د 14 ساعتونو فوتوپیریډ لاندې د 22 درجو سانتي ګراد په ورځ / 19 درجو سانتي ګراد شپه او 70٪ رطوبت کې کرل شوي. د ناروغۍ نمره د واکسین کولو څخه 22 ورځې وروسته جوړه شوه او د 0 (معافیت) څخه تر 9 (ډیر حساس) پورې وه چې په ډډونو او پاڼو کې د نیکروټیک زخمونو شتون یا نشتوالي پورې اړه لري. سربیره پردې، د نمره کولو وروسته، د نباتاتو وزن اندازه شو. د مارکر جینټایپونو او د ناروغۍ فینوټایپونو ترمنځ اړیکې د دوه اړخیزې اړیکې (د انتراکنوز مقاومت فینوټایپ تحلیل لپاره د لینونو په سیټ کې د هیټروزایګس مارکرونو نشتوالی) په توګه محاسبه شوې.