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Nomes Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7 Livia Manzella1,21 Departamento de Medicina Clínica e Experimental, Universidade de Catania, Catania, 95123, Itália ;2 Centro de Oncologia Experimental e Hematologia, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catânia , 95123, Itália;3 Oncologia Médica, AOU Policlínico “G.Rodolico – San Marco”, Catânia, 95123, Itália;4 Genética Médica, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Itália;5 Medicine Genetics, ASP, Siracusa, 96100, Itália;6 Departamento de Ciências Biomédicas e Biotecnológicas, Universidade de Catania, Genética Médica, Catania, Itália, 95123;7Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, Itália Comunicações: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, email [email protected];[email protected] Finalidade: Mutações germinativas em BRCA1 e BRCA2 e câncer de mama (CB), ovário (OC) estabelecido e outros associados a um risco vitalício de câncer. O teste do gene BRCA é fundamental para avaliar o risco individual, bem como para encontrar métodos de prevenção em portadores saudáveis ​​e adaptar tratamentos em pacientes com câncer. icily estão ausentes.O objetivo do nosso estudo foi investigar a incidência e distribuição de alterações patogênicas da linhagem germinativa BRCA em uma coorte de pacientes com BC do leste da Sicília e avaliar sua associação com características específicas de BC usando sequenciamento de próxima geração. prevalente em pacientes com BC triplo-negativo, enquanto as mutações BRCA2 são mais comuns em pacientes com BC luminal. Em comparação com não portadores, os indivíduos com variantes de BRCA1 apresentaram grau tumoral e índice proliferativo significativamente mais altos.
O câncer de mama (CB) é a neoplasia maligna mais comum em todo o mundo e o câncer mais mortal em mulheres.1 As características biológicas que determinam o prognóstico e o comportamento clínico do CM foram extensivamente estudadas e parcialmente elucidadas ao longo do tempo.Na verdade, vários marcadores substitutos são usados ​​atualmente para classificar o CM em diferentes subtipos moleculares. categorias: 1) Tumores luminais, com expressão de ER e/ou PgR, representaram 75% dos BCs. Esses tumores foram ainda divididos em Luminal A, quando Ki-67 estava abaixo de 20% e HER2 negativo, e Luminal B, quando Ki-67 era igual ou acima de 20% e na presença de amplificação de HER2, independentemente do índice de proliferação;2) tumores HER2+ que são ER e PgR negativos, mas mostram amplificação de HER2. Esse grupo representa 10% de todos os tumores de mama;3) Câncer de mama triplo negativo (TNBC), que não apresenta expressão de ER e PgR e amplificação de HER2, representa cerca de 15% dos cânceres de mama.2-4
Entre esses subtipos de BC, o grau do tumor e o índice de proliferação representam biomarcadores transversais que estão direta e independentemente associados à agressividade e prognóstico do tumor.5,6
Além das características biológicas mencionadas, o papel das alterações genéticas hereditárias que levam ao desenvolvimento do CM tornou-se cada vez mais importante nos últimos anos.7 Cerca de 1 em cada 10 tumores de mama são herdados devido a alterações germinativas em genes específicos.8 Dois grandes estudos epidemiológicos envolvendo mais de 180.000 mulheres identificaram recentemente um grupo de oito genes (isto é, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C e RAD51D) responsáveis ​​principalmente por BC hereditária.Entre esses genes, BRCA1 e BRCA2 (doravante denominados BRCA1/2) mostraram a correlação mais forte com o desenvolvimento de tumores de mama.9-12 Na verdade, as mutações germinativas BRCA1/2 aumentam significativamente o risco vitalício de BC, bem como outras malignidades, incluindo ovário, próstata, pâncreas, colorretal e melanoma. Dos 13 aos 80 anos, a incidência cumulativa de BC é de 72% em mulheres com uma variante patogênica BRCA1 (PV) e 69% em mulheres com BRCA2 PV.14
Notavelmente, uma publicação recente sugere que o risco de BC depende do tipo de PV. De fato, em comparação com variantes truncadas patogênicas, variantes sem sentido evidentes, especialmente no gene BRCA1, estão associadas a um risco reduzido de BC, especialmente em mulheres mais velhas.15
A presença de PV BRCA1 ou BRCA2 foi associada a diferentes características biológicas e clinicopatológicas.16,17 BCs associados a BRCA1 tendem a ser clinicamente agressivos, pouco diferenciados e altamente proliferativos. 8 Notavelmente, mutações em BRCA1 e BRCA2 aumentam a sensibilidade a tratamentos específicos, incluindo sais de platina e medicamentos direcionados, como inibidores de poli(ADP-ribose) polimerase (PARPi).19,20
Nos últimos anos, a implementação do sequenciamento de próxima geração (NGS) na prática clínica permitiu que um número crescente de pacientes com BC fosse submetido a testes moleculares para síndromes de suscetibilidade ao câncer, incluindo BRCA1/2.21 Ao mesmo tempo, definições baseadas em critérios precisos sobre história familiar, características demográficas e clinicopatológicas para melhor identificar indivíduos dignos de testes de BRCA1/2.22,23 Nesse contexto, as evidências estão se acumulando na triagem de BRCA1/2 em populações específicas, destacando diferenças entre regiões geográficas.2 4–27 Embora existam relatórios sobre a coorte de BC no oeste da Sicília, há menos dados disponíveis sobre a triagem de BRCA1/2 na população do leste da Sicília.28,29
Descrevemos aqui os resultados da triagem germinativa BRCA1/2 em pacientes com BC do leste da Sicília, correlacionando ainda mais a presença de mutações BRCA1 ou BRCA2 com as principais características clínico-patológicas desses tumores.
Um estudo retrospectivo foi realizado no “Center for Experimental Oncology and Hematology” no Policlinico Hospital.Rodolico – San Marco em Catânia. De janeiro de 2017 a março de 2021, um total de 455 pacientes com câncer de mama e ovário, melanoma, pâncreas ou próstata foram encaminhados ao nosso laboratório de diagnóstico molecular para testes genéticos de BRCA/2. Este estudo foi conduzido de acordo com a Declaração de Helsinque, e todos os participantes forneceram consentimento informado por escrito antes da análise molecular.
As características histológicas e biológicas (ER, PgR, status HER2, Ki-67 e grau) de BC foram avaliadas em biópsia central ou amostras cirúrgicas, considerando apenas componentes tumorais agressivos. Com base nessas características, os BCs foram classificados da seguinte forma: luminal A (ER+ e/ou PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminal B (ER+ e/ou PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminal B-HER2+ (ER e/ou PgR+, HER2+), HER2+ (ER e PgR-, HER2+) ou triplo negativo (ER e PgR-, HER2-).
Antes de avaliar o estado das mutações BRCA1 e BRCA2, uma equipe multidisciplinar incluindo um oncologista, um geneticista e um psicólogo realizou uma consulta de genética tumoral para cada paciente para determinar a presença de BRCA1 e/ou BRCA1.ou indivíduos com alto risco de PV no gene BRCA2. A seleção de pacientes foi realizada de acordo com as diretrizes da Sociedade Italiana de Oncologia Médica (AIOM) e as recomendações locais da Sicília.30,31 Esses critérios incluem: (i) história familiar de variantes patogênicas conhecidas em genes de suscetibilidade (por exemplo, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN);(ii) homens com CM;(iii) aqueles com BC e OC;(iv) mulheres com CM <36 anos, TNBC <60 anos ou BC bilateral <50 anos;(v) história médica pessoal de CB < 50 anos e pelo menos um parente de primeiro grau: (a) CB < 50 anos;(b) CO não mucinosa e não limítrofe de qualquer idade;(c) BC bilateral;(d) BC masculino;(e) câncer pancreático;(f) cancro da próstata;(vi) dois ou mais antecedentes pessoais de CM > 50 anos e antecedentes familiares de CM, CO ou câncer de pâncreas para parentes que são parentes de primeiro grau entre si (incluindo parentes com quem é parente de primeiro grau);(vii) História pessoal de FO e pelo menos um parente de primeiro grau: (a) BC <50 anos;(b) NOC;(c) BC bilateral;(d) BC masculino;(vii) fêmea com OC serosa de alto grau.
Uma amostra de sangue periférico de 20 mL foi obtida de cada paciente e coletada em tubos EDTA (BD Biosciences). O DNA genômico foi isolado de amostras de sangue total de 0,7 mL usando o kit de isolamento QIAsymphony DSP DNA Midi kit (QIAGEN, Hilden, Itália) de acordo com as instruções do fabricante e passado por um fluorômetro Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EUA).O enriquecimento do alvo e a preparação da biblioteca são realizados pelo Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, pronto para ser carregado no Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit para preparação automatizada da biblioteca de acordo com as instruções do fabricante. O kit consiste em dois pools de primers de PCR multiplex que podem ser usados ​​para estudar todos os genes BRCA1 (NM_007300.3) e BRCA2 (NM_000059.3). Resumidamente, 15 µL de cada DNA de amostra diluído (10 ng) foi adicionado a placas com código de barras para preparação da biblioteca e todos os reagentes e consumíveis foram carregados no instrumento Ion Chef™. A preparação automatizada da biblioteca e o agrupamento da biblioteca de amostras com código de barras foram então realizados no instrumento Ion Chef™. d) e carregados no instrumento Ion Chef™. O sequenciamento foi realizado usando um instrumento Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) usando um chip Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). A análise de dados foi realizada por Amplicon Suite (SmartSeq srl) e Ion Reporter Software.
Todas as nomenclaturas variantes seguiram as diretrizes atuais do Human Genome Variation Consortium, disponível online (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Var, IARC_LOVD e UMD. A classificação inclui cinco categorias de risco distintas: benigno (categoria I), provavelmente benigno (categoria II), variante de significado incerto (VUS, categoria III), provavelmente patogênico (categoria IV) e patogênico (categoria V). VarSome também analisou o efeito de mutações na estrutura e função da proteína, uma ferramenta informativa com acesso a 30 bancos de dados.32
Para atribuir significado clínico potencial a cada VUS, foram usados ​​os seguintes algoritmos computacionais de predição de proteínas: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) e Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Variantes classificadas como classe 1 e 2 foram considerados do tipo selvagem.
O sequenciamento de Sanger confirmou a presença de cada variante patogênica. Resumidamente, um par de primers específicos foi projetado para cada variante detectada usando as sequências de referência do gene BRCA1 e BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 e NG_012772.3, NM_000059.3, respectivamente). Portanto, a PCR direcionada foi realizada seguida pelo sequenciamento de Sanger.
Os pacientes com resultado negativo para o gene BRCA1/2 foram testados por amplificação de sonda dependente de ligação múltipla (MLPA) de acordo com as instruções do fabricante para avaliar a presença de grandes rearranjos genômicos (LGR). Resumidamente, as amostras de DNA são desnaturadas e até 60 sondas específicas dos genes BRCA1 e BRCA2 são usadas, cada uma detectando uma sequência de DNA específica de aproximadamente 60 nucleotídeos de comprimento. eletroforese capilar e pelo software Cofalyser.Net em conjunto com as tabelas Cofalyser específicas de lote apropriadas (www.mrcholland.com).
Variáveis ​​clínico-patológicas selecionadas (grau histológico e índice de proliferação Ki-67%) foram associadas à presença de PV BRCA1/2, calculadas com o software Prism v. 8.4 usando o teste exato de Fisher assumindo p-valor <0,05 como significativo.
Entre janeiro de 2017 e março de 2021, 455 pacientes foram rastreados para mutações germinativas BRCA1/2. O teste de mutação foi realizado no Centro de Oncologia Experimental e Hematologia do Hospital Policlínico. De acordo com a diretriz siciliana (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. of Catania – San Marco” no total, 389 pacientes Houve câncer de mama, 37 câncer de ovário, 16 câncer pancreático, 8 câncer de próstata e 5 melanoma.A distribuição dos pacientes de acordo com o tipo de câncer e resultados da análise é mostrada na Figura 1.
A Figura 1 mostra um fluxograma mostrando uma visão geral do estudo. Pacientes com tumores de mama, melanoma, pâncreas, próstata ou ovário foram testados para mutações nos genes BRCA1 e BRCA2.
Abreviações: PVs, variante patogênica;VUS, variante de significado incerto;WT, sequência BRCA1/2 de tipo selvagem.
Focamos seletivamente nossos estudos em coortes de câncer de mama. As pacientes tinham idade média de 49 anos (intervalo 23-89) e eram predominantemente do sexo feminino (n=376, ou 97%).
Desses indivíduos, 64 (17%) tinham mutações BRCA1/2 e eram todos do sexo feminino. Trinta e cinco (9%) tinham PV e 29 (7,5%) tinham VUS. Dezessete (48,6%) das 35 variantes patogênicas ocorreram em BRCA1 e 18 (51,4%) em BRCA2, enquanto 5 VUS ocorreram em BRCA1 (17,2%) e 24 (82,8%) em BRCA2 (Figuras 1 e 2). LGR não estava presente na análise MLPA.
Figura 2. Análise das mutações BRCA1 e BRCA2 em 389 pacientes com câncer de mama. (A) Distribuição de variantes patogênicas (PV) (vermelho), variantes de significado incerto (VUS) (laranja) e WT (azul) em 389 pacientes com câncer de mama;(B) 389 pacientes com câncer de mama Trinta e cinco (9%) apresentavam variantes patogênicas (PVs) BRCA1/2. Dentre elas, 17 (48,6%) eram portadoras de BRCA1 PV (vermelho escuro) e 18 (51,4%) eram portadoras de BRCA2 (vermelho claro);(C) 29 (7,5%) de 389 indivíduos eram portadores de VUS, 5 (17,2%) genes BRCA1 (laranja escuro) e 24 (82,8%) genes BRCA2 (laranja claro).
Abreviações: PVs, variante patogênica;VUS, variante de significado incerto;WT, sequência BRCA1/2 de tipo selvagem.
Em seguida, investigamos a prevalência de subtipos moleculares de BC em pacientes com BRCA1/2 PV. A distribuição incluiu 2 (5,7%) luminal A, 15 (42,9%) luminal B, 3 (8,6%) luminal B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ e 13 (37,1%) pacientes TNBC. Entre os pacientes positivos para BRCA1, 5 (29,4%) tinham luminal B BC, 2 (11,8%) tinham doença HER2+ e 10 (58,8%) tinham TNBC. Tumores sem mutações BRCA1 eram luminal A ou luminal B-HER2+ (Figura 3). Tumores HER2+ estavam presentes neste grupo. Assim, as mutações BRCA1 são prevalentes em pacientes TNBC, enquanto as alterações BRCA2 são predominantes em indivíduos com lúmen B.
Figura 3 Prevalência de subtipos de câncer de mama em pacientes com variantes patogênicas em BRCA1 e BRCA2. Histogramas mostrando a distribuição de PVs BRCA1- (vermelho escuro) e BRCA2- (vermelho claro) entre subtipos moleculares de pacientes com câncer de mama. Os números relatados dentro de cada caixa representam a porcentagem de pacientes com PV BRCA1 e BRCA2 para cada subtipo de câncer de mama.
Abreviações: PVs, variante patogênica;HER2+, receptor 2 do fator de crescimento epidérmico humano positivo;TNBC, câncer de mama triplo negativo.
Posteriormente, avaliamos o tipo e a localização do gene de BRCA1 e BRCA2 PVs.No BRCA1 PV, observamos 7 variantes de nucleotídeo único (SNVs), 6 deleções, 3 duplicações e 1 inserção. Apenas uma mutação (c.5522delG) representa uma nova descoberta. TAAT) no éxon 15 de BRCA1, resultando na substituição do aminoácido leucina por tirosina no códon 1679, e devido a uma mudança de estrutura de tradução com um códon de parada alternativo previsto, leva ao truncamento prematuro da proteína.
Em relação ao BRCA2 PV, observamos 6 deleções, 6 SNVs e 2 duplicações. Nenhuma das alterações encontradas é nova. Três mutações recorrentes em nossa população, c.428dup e c.8487+1G>A observadas em 3 indivíduos, seguidas por c.5851_5854delAGTT recuperadas em dois casos. A alteração c.428dup envolve uma repetição de C no exon 5 de BRCA2, previsto para codificar proteína truncada e não funcional. A mutação c.8487+1G>A ocorre na região intrônica do íntron 19 de BRCA2 (± 1,2) e afeta a sequência de consenso de splicing, resultando em splicing alterado resultando em proteína anormal ou ausente. 0 do gene BRCA2 e resulta em um frameshift traducional com um códon de parada alternativo previsto (p.S1951WfsTer). Notavelmente, como relatado anteriormente, ambas as alterações c.631G>A e c.7008-2A>T foram detectadas no mesmo paciente.34 A primeira mutação envolve a substituição de adenosina (A) no exon 7 de BRCA2 por um nucleotídeo contendo guanina (G), resultando em uma mudança de valina para isoleucina no códon 211, isoleucina O aminoácido é um aminoácido com propriedades altamente semelhantes. Essa alteração afeta o splicing normal do mRNA. A segunda variante está localizada em uma região intrônica e resulta em uma substituição dupla A para timina (T) antes do exon 13 do gene que codifica BRCA2. A alteração c.7008-2A>T pode gerar vários transcritos de comprimentos diferentes. intronic.
Em seguida, mapeamos mutações deletérias de BRCA1/2 em domínios funcionais e regiões de ligação a proteínas (Fig. 4). No gene BRCA1, 50% dos PVs estavam localizados na região de agrupamento de câncer de mama (BCCR), enquanto 22% das mutações estavam localizadas na região de agrupamento de câncer de ovário (OCCR) (Fig. 4A). o OCCR (Fig. 4B). Em seguida, avaliamos a localização de PV dentro dos domínios da proteína BRCA1 e BRCA2. Para a proteína BRCA1, encontramos três PVs nos domínios loop e coiled coil e duas mutações no domínio BRCT (Fig. 4A). ) e domínios de torre (T) (Figura 4B).
Figura 4 Representação esquemática das proteínas BRCA1 e BRCA2 e localização de variantes patogênicas. Esta figura mostra a distribuição das variantes patogênicas BRCA1 (A) e BRCA2 (B) em pacientes com câncer de mama. As mutações exônicas são mostradas em azul, enquanto as variantes intrônicas são mostradas em laranja. A altura da barra representa o número de casos. As proteínas BRCA1 e BRCA2 e seus domínios funcionais são relatados. um domínio espiralado, um domínio de agrupamento SQ/TQ (SCD) e um domínio BRCA1 C-terminal (BRCT).(B) A proteína BRCA2 contém oito repetições de BRC, um domínio de ligação de DNA com um domínio helicoidal (helicoidal), três dobras de ligação de oligonucleotídeo/oligossacarídeo (OB), um domínio de torre (T) e um NLS no lado C. OCCR) são mostrados na parte inferior.*Representa mutações que determinam códons de parada.
Em seguida, investigamos as características clinicopatológicas do BC que podem se correlacionar com a presença de PV BRCA1/2. Registros clínicos completos estavam disponíveis para 181 pacientes BRCA1/2 negativos (não portadores) e todos os portadores (n = 35). Houve uma correlação entre a taxa de proliferação tumoral e o grau.
Calculamos a distribuição de Ki-67 com base na mediana de nossa coorte (25%, variação <10-90%). Os indivíduos com Ki-67 <25% foram definidos como “Ki-67 ″ baixo, enquanto indivíduos com valores ≥ 25% foram considerados“ Ki-67 'não-significados (p <0,01) foram considerados entre as diferentes Ki-67 (p <0,01).
Figura 5 Correlação de Ki-67 com distribuição de graus em mulheres com câncer de mama com e sem VPs BRCA1 e BRCA2.(A) Boxplot mostrando valores medianos de Ki-67 em 181 pacientes não-portadoras de BC versus pacientes BRCA1 (18) ou BRCA2 (17) PV. 1 e status de mutação BRCA2 (sujeitos WT, portadores de PVs BRCA1 e BRCA2).
Da mesma forma, examinamos se o grau do tumor se correlacionava com a presença de BRCA1/2 PV. Como G1 BC estava ausente em nossa população, dividimos os pacientes em dois grupos (G2 ou G3). Consistente com os resultados do Ki-67, a análise revelou uma correlação estatisticamente significativa entre o grau do tumor e a mutação BRCA1, com uma proporção maior de tumores G3 em portadores de BRCA1 em comparação com não portadores (p<0,005) (Figura 5B).
Avanços na tecnologia de sequenciamento de DNA permitiram avanços sem precedentes nos testes genéticos de BRCA1/2, com implicações cruciais para pacientes com histórico familiar de câncer. Até o momento, aproximadamente 20.000 variantes de BRCA1/2 foram identificadas e classificadas de acordo com a Sociedade Americana de Genética Médica 35 e o sistema ENIGMA. 8% a 37%, mostrando ampla variabilidade dentro do país.38,39 Com uma população de quase 5 milhões, a Sicília é a quinta maior região da Itália em termos de número de habitantes. Embora existam dados sobre a distribuição de BRCA1/2 no oeste da Sicília, não há evidências extensas na parte oriental da ilha.
Nosso estudo é um dos primeiros relatos sobre a incidência de PV BRCA1/2 em pacientes com BC no leste da Sicília.28 Focamos nossa análise no BC, pois esta é de longe a doença mais comum em nossa coorte.
Ao testar 389 pacientes com BC, 9% carregavam VPs BRCA1/2, distribuídos uniformemente entre BRCA1 e BRCA2. Esses resultados são consistentes com os relatados anteriormente na população italiana.28 Curiosamente, 3% (13/389) de nossa coorte eram do sexo masculino. PV, portanto, eles eram candidatos a análises moleculares adicionais para descartar a presença de mutações menos comuns, como PALB2, RAD51C e D, entre outras. Variantes de significado incerto foram recuperadas em 7% dos indivíduos nos quais BRCA2 VUS era evidente.
Quando analisamos a distribuição dos subtipos moleculares de BC em mulheres mutantes BRCA1/2, confirmamos associações conhecidas entre TNBC e BRCA1 PV (58,8%) e entre luminal B BC e BRCA2 PV (55,6%).
Em seguida, focamos no tipo e localização do BRCA1/2 PV. Em nossa coorte, o BRCA1 PV mais comum foi c.5035_5039delCTAAT. Embora Incorvaia et al.não descreveram esta variante em sua coorte siciliana, outros autores a relataram como um PV BRCA1 germinativo.34 Vários PVs BRCA1 foram encontrados em nossa coorte – por exemplo, c.181T>G, c.514del, c.3253dupA e c.5266dupC – que foram observados na Sicília.28 Destes, duas mutações fundadoras de BRCA1 (c.181T>G e c.5266d upC) são comumente encontrados em judeus Ashkenazi da Europa Oriental e Central (Polônia, Tcheca), Esloveno, Austríaco, Húngaro, Bielorrusso e Alemão), 44,45 e, nos Estados Unidos e Argentina, foi recentemente definido como uma "variante recorrente da linhagem germinativa" em pacientes italianos com BC e OC.encontrou a variante c.3253dupA em algumas famílias em Catania.28 Os PVs BRCA2 mais representativos são c.428dup, c.5851_5854delAGTT e a variante intrônica c.8487+1G>A, que foram relatados com mais detalhes 28 em um paciente em Palermo com c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV foi observado em domicílios no noroeste da Sicília, principalmente nas regiões de Trapani e Palermo, enquanto o PV c.5851_5854delAGTT foi observado em domicílios no noroeste da Sicília. A variante 8487+1G>A foi mais comum em indivíduos de Messina, Palermo e Caltanissetta.28 Rebbeck et al.descreveram anteriormente a alteração c.5851_5854delAGTT na Colômbia.37 Outro BRCA2 PV, c.631+1G>A, foi encontrado em pacientes BC e OC da Sicília (Agrigento, Siracusa e Ragusa).28 Notavelmente, observamos a coexistência de duas variantes de BRCA2 (BRCA2 c.631G>A e c.7008-2A>T) no mesmo paciente, que assumimos serem segregadas no modo cis, conforme relatado anteriormente.34,46 Essas mutações BRCA2 uble são de fato frequentemente observadas na região italiana e foram encontradas para introduzir códons de parada prematuros, afetando o splicing do RNA mensageiro e fazendo com que a proteína BRCA2 falhe.47,48
Também mapeamos PVs BRCA1 e BRCA2 em regiões OCCR e BCCR putativas de domínios e genes de proteínas. Essas regiões foram descritas por Rebbeck et al.como áreas de risco para o desenvolvimento de câncer de ovário e de mama, respectivamente.49 No entanto, as evidências sobre a associação entre a localização das variantes germinativas e o risco de câncer de mama ou ovário permanecem controversas.28,50-52 Em nossa população, os PVs BRCA1 estavam predominantemente localizados na região BCCR, enquanto os PVs BRCA2 estavam predominantemente localizados na região OCCR. Do ponto de vista do domínio da proteína, os PVs do BRCA1 estão distribuídos ao longo de toda a proteína, e as alterações do BRCA2 são encontradas preferencialmente no domínio de repetição do BRC.
Por fim, correlacionamos as características clínico-patológicas do BC com o PV BRCA1/2. Devido ao número limitado de pacientes incluídos, encontramos apenas uma correlação significativa entre o Ki-67 e o grau do tumor. Embora a avaliação e a interpretação do Ki-67 permaneçam um tanto controversas, é certo que altas taxas proliferativas estão associadas ao aumento do risco de recorrência da doença e diminuição da sobrevida. Até o momento, o ponto de corte para distinguir entre Ki-67 “alto” e “baixo” é de 20%. população de pacientes, que tem um valor mediano de Ki-67 de 25%. Essa tendência nas altas taxas de Ki-67 pode ser explicada pela prevalência em nossas coortes luminais B e TNBC, das quais poucos tumores luminais A estavam presentes. No entanto, algumas evidências parecem sugerir que um corte mais alto de Ki-67 (25-30%) pode estratificar melhor os pacientes de acordo com seu prognóstico.53,54 A partir dos resultados de nossa análise, uma correlação significativa não é surpreendente. Ocorre entre altos Ki-67 e graus e a presença de BRCA1 PV. De fato, os tumores relacionados a BRCA1 são típicos de TNBC e exibem características mais agressivas.16,17
Em conclusão, este estudo fornece um relatório sobre o status mutacional de BRCA1/2 em uma coorte de BC do leste da Sicília.No geral, nossos achados são consistentes com evidências preexistentes, tanto em termos de prevalência de mutação quanto de características clinicopatológicas em BC. gerenciamento adequado do número crescente de indivíduos com risco aumentado de câncer devido a mutações genéticas.
Confirmamos que os pacientes assinaram o consentimento informado para liberar suas amostras de tumor anonimamente para fins de pesquisa. Todos os pacientes assinaram o consentimento informado por escrito de acordo com a Declaração de Helsinque. De acordo com a política da AOU Policlinico "G.Rodolico - S.Marco", este estudo foi isento de revisão ética porque a análise de BRCA1/2 foi realizada de acordo com a prática clínica e todos os pacientes deram consentimento informado por escrito. Os pacientes também concordam com o uso de seus dados para fins de pesquisa.
Agradecemos ao Prof. Paolo Vigneri por sua assistência no cuidado de pacientes com câncer de mama, conforme solicitado pelo Comitê de Ética.
Federica Martorana relata honorários do Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Os outros autores declaram não haver conflitos de interesse neste trabalho.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN estima a incidência e mortalidade de 36 cânceres em 185 países ao redor do mundo.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660