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Plasma rico em plaquetas/prp, regeneração tecidual, ativação plaquetária, terapia proliferativa de glicose, plaquetas, terapia proliferativa
Cite este artigo como: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (17 de maio de 2022) O efeito da glicose na contagem e no volume plaquetários: implicações para a medicina regenerativa. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
Plasma rico em plaquetas (PRP) e soluções hipertônicas de glicose são comumente usados ​​para injeção em medicina regenerativa, às vezes em conjunto. O efeito da glicose hipertônica na lise e ativação plaquetárias não foi relatado anteriormente. Testamos o efeito de concentrações elevadas de glicose na contagem de plaquetas e eritrócitos, bem como no volume celular em PRP e sangue total (STM). Uma rápida redução parcial na contagem de plaquetas ocorreu com todas as misturas de glicose misturadas com PRP ou sangue total, consistente com lise parcial. Após o primeiro minuto, a contagem de plaquetas permaneceu estável, sugerindo uma rápida acomodação das plaquetas residuais à hipertonicidade extrema (>2000 mOsm). Após o primeiro minuto, a contagem de plaquetas permaneceu estável, sugerindo uma rápida acomodação das plaquetas residuais à hipertonicidade extrema (>2000 mOsm). Depois de cada minuto, o trombo está estável, o que é usado na sua conta остаточных тромбоцитов до экстремального (>2000 mОсм) hipértono. Após o primeiro minuto, a contagem de plaquetas permaneceu estável, indicando uma rápida acomodação das plaquetas residuais à hipertonicidade extrema (>2000 mOsm).第一分钟后,血小板计数保持稳定,表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm）高渗状态。2000 mOsm）高渗状态。 Após cada minuto de coleta de energia, você precisará de uma conexão estável, que será usada no seu adaptador остаточных тромбоцитов к экстремальному (>2000 mОсм) гиперосмолярному состоянию. Após o primeiro minuto, a contagem de plaquetas permaneceu estável, indicando uma rápida adaptação das plaquetas residuais ao estado hiperosmolar extremo (>2000 mOsm).Concentrações de glicose de 25% ou mais resultaram em um aumento significativo no volume plaquetário médio (VPM), indicando um estágio inicial de ativação plaquetária. Estudos adicionais são necessários para determinar se ocorre lise ou ativação plaquetária e se a injeção de glicose hipertônica, isoladamente ou em combinação com PRP, pode proporcionar benefício clínico adicional.
Na década de 1950, o cirurgião americano George Hackett descobriu que podia aliviar permanentemente dores nas articulações e nas costas em muitos pacientes injetando uma solução proliferativa nos tendões e ligamentos. Seus experimentos em coelhos mostraram que o tratamento, que ele chamou de terapia proliferativa, fazia com que os tendões se expandissem e se fortalecessem. Estudos histológicos confirmaram que novo colágeno é produzido durante esse processo [1].
Durante as primeiras décadas, muitas soluções de distribuição diferentes foram testadas. Na década de 1990, a maioria dos profissionais considerava altas concentrações de glicose o método mais seguro e eficaz. No entanto, o mecanismo de ação permanece obscuro.
Poucos estudos clínicos foram conduzidos no século XX após o trabalho de Hackett. No entanto, na década de 2000, houve um interesse renovado e vários ensaios clínicos bem-sucedidos de terapia proliferativa foram concluídos para o tratamento de dor lombar [2], osteoartrite do joelho [3] e epicondilite lateral [4].
A regeneração tecidual requer a participação de células-tronco. Portanto, altas concentrações de glicose devem, de alguma forma, induzir a migração, a replicação e a diferenciação das células-tronco. Nossa hipótese é que as plaquetas podem atuar como mensageiras e que altas concentrações de glicose podem fazer com que as plaquetas liberem citocinas e fatores de crescimento, promovendo assim processos regenerativos, especialmente a migração de células-tronco para áreas com altas concentrações de glicose.
A ativação plaquetária sempre precede um aumento no cálcio intracelular [5]. Liu et al., em 2008, demonstraram que altos níveis de glicose aumentam a atividade dos canais do receptor de potencial transitório canônico tipo 6 (TRPC6) na membrana plasmática, o que leva a um influxo de íons de cálcio para as plaquetas [6]. Outro estudo demonstrou que a exposição da zona marginal dos microtúbulos aos íons de cálcio causa relaxamento, expansão e deformação da zona marginal, o que, por sua vez, causa uma mudança na forma de disco para esférica, resultando no volume plaquetário médio (VPM) [7].
Nossa hipótese neste estudo é que a exposição das plaquetas a altas concentrações de glicose afeta a zona marginal dos microtúbulos e o ambiente intracelular, levando a um aumento do VPM.
Todos os participantes assinaram um termo de consentimento livre e esclarecido após a explicação dos detalhes do estudo e antes do recebimento das amostras. Neste estudo, apenas amostras de PRP com hematócrito superior a 2% foram utilizadas para que a contagem de eritrócitos (hemácias) e o volume corpuscular médio de hemácias (VCM) pudessem ser incluídos para comparação.
O estudo foi conduzido em quatro fases: a primeira fase foi PRP e as demais fases foram sangue total (Tabela 1). Conforme descrito anteriormente [8], todas as forças centrífugas relativas (FCR, força-g) foram calculadas a partir do ponto médio (Rmid, em cm) da coluna de sangue na seringa centrífuga. Optamos por utilizar o VPM como marcador de sensibilização plaquetária e a contagem plaquetária como indicador de potencial lise plaquetária, sendo que ambos podem ser facilmente medidos em analisadores hematológicos convencionais.
Na primeira fase, 47 voluntários doaram amostras de sangue — um tubo de ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) e uma amostra de sangue total de PRP (anticoagulada com citrato de sódio (NaCl, 3%)) (Tabela 1). Coloque o agitador no tubo imediatamente. O hemograma completo (CBC) foi realizado em amostras de EDTA em triplicata, e as amostras de NaCl foram analisadas em triplicata para análise de CBC, e então o PRP foi preparado por vários métodos descritos acima [8]. Todas as amostras de PRP foram preparadas por centrifugação a 900–1000 g. Misture cada amostra de PRP em um misturador vórtice por 5–10 segundos e, em seguida, divida cinco alíquotas de 0,5 ml em tubos.
Para avaliar o efeito da exposição plaquetária em concentrações elevadas de glicose, quantidades iguais (0,5 ml) de 0%, 5%, 12,5%, 25% e 50% de glicose em água foram misturadas com amostras de plaquetas para obter concentrações de 0%, 2,5%, 6,25%, 12,5% e 25% da mistura de glicose e misturar os tubos em um agitador de tubos de ensaio por 15 minutos. O CAT de cada mistura foi analisado em triplicado após 15 minutos. A contagem de plaquetas (PLT), contagem de hemácias, VCM e VPM foram calculados para cada tubo, e a contagem média de plaquetas, contagem de hemácias, VCM e VPM foram calculados para todas as amostras de PRP.
Após a conclusão da primeira fase da coleta de dados, notamos um aumento significativo no volume plaquetário em plaquetas de PRP após a adição de D50W. As plaquetas de PRP não representam necessariamente todas as plaquetas no sangue, e o meio de cultura para PRP difere do meio de cultura para WB. Portanto, decidimos realizar um ensaio de segunda fase para avaliar o efeito da adição de D50W ao sangue total.
Para a segunda rodada, escolhemos um tamanho de amostra de 30 com base nos resultados da primeira série, conforme descrito na seção Análise. Nesta série, 20 voluntários doaram amostras de sangue (Tabela 1). Sangue total (1,8 ml) foi coletado em uma seringa de 3 ml e anticoagulado com 0,2 ml de NaCl a 40%. A seringa de sangue total foi misturada por cinco segundos com um misturador vórtice e o hemograma completo foi analisado em triplicado. Após a análise, o sangue anticoagulado foi adicionado a 2 ml de glicose a 50% em uma seringa de 5 ml (a concentração final de glicose foi de aproximadamente 25% (D25) e colocado em um tubo de agitação por 30 minutos. Após 30 minutos, D25/CBC em seringas WB foram analisados ​​em triplicado. A contagem de plaquetas, contagem de hemácias, VCM e VPM por seringa foram calculados em média, e o PLT médio, a contagem de hemácias, o VCM e o VPM foram calculados para cada amostra antes e depois da adição de glicose.
Como as plaquetas no sangue total são comumente expostas à glicose hipertônica durante a terapia proliferativa de glicose devido à injeção minimamente invasiva, e não é comum combinar PRP com glicose hipertônica imediatamente antes da injeção, decidimos estudar a glicose hipertônica em combinação com WB na Seção 1. Etapas três e quatro. Em cada etapa, 20 voluntários doaram 7-8 ml de ACD-A (ácido contendo citrato trissódico (22,0 g/l), ácido cítrico (8,0 g/l) e glicose (24,5 g/l), solução de citrato de dextrose) para anticoagulantes sanguíneos (Tabela 1). Apenas misturas de glicose maiores que 12,5% foram usadas para determinar a porcentagem limite associada a um aumento no VPM. Na terceira etapa, 1 ml de sangue é colocado em um tubo de ensaio. Em seguida, misture o sangue em um agitador vórtice por 10 segundos, adicionando 1 ml de glicose a 30%, 40% ou 50% ao tubo para obter uma concentração final de glicose de 15%, 20% e 25%, respectivamente. As amostras de sangue com glicose foram analisadas para hemograma completo imediatamente após a mistura e repetidas a cada dois minutos por 30 minutos.
Durante a mistura inicial, a adição de glicose hipertônica 1:1 e WB ou PRP expõe as plaquetas a concentrações acima de 25% por vários segundos. Na quarta etapa, para avaliar o efeito da glicose hipertônica com concentrações de pico iniciais mínimas e testar o limite superior do efeito da glicose, adicionamos apenas uma pequena quantidade de sangue ao D25W ou D50W. Colocamos 1 ml de D25W ou D50W em um tubo e adicionamos 0,2 ml de WB enquanto agitamos a amostra por 10 segundos. Nesses casos, o sangue foi exposto à glicose em uma concentração aproximadamente 20% acima da concentração final, em vez de 50% acima da concentração final como na Fase 3, resultando em concentrações finais de glicose de 20,8% e 41,6%. As amostras misturadas foram analisadas no mesmo intervalo de tempo da etapa 3.
Na primeira etapa de cada série de diluição de glicose, 30 amostras foram coletadas, pois este era o tamanho de amostra apropriado para o estudo piloto [9]. No final de cada fase (incluindo a primeira fase), avalie a adequação do tamanho da amostra usando a fórmula usada para determinar o tamanho da amostra necessário para estimar a média da variável de resultado contínua em uma população. Fórmula n = Z2 x DP2 /E2. Nessa equação, Z é o escore Z, DP é o desvio padrão e E é o erro desejado [10]. Nosso alfa é 0,05, o que corresponde a um valor Z de 1,96, e esperamos um erro de 5 (em porcentagem). Portanto, resolvemos para n = (1,962 x DP2)/52. Os resultados mostraram que o tamanho da amostra necessário para cada estágio foi menor do que o número real coletado.
Durante os períodos 1, 3 e 4, usando mais de uma concentração de glicose, o efeito de diferentes concentrações de glicose foi analisado comparando-se a alteração fracionária entre o tempo 0 e cada tempo subsequente (fase 1 em 15 minutos, período 3 em 15 minutos). e quatro em 15 segundos, depois a cada dois minutos.) As taxas de alteração para cada período de tempo foram comparadas usando o teste U de Mann-Whitney porque os dados não seguiram uma distribuição normal, conforme determinado pelo teste de normalidade de Shapiro-Wilk. Como uma análise 1 para 1 de vários grupos (cinco) foi realizada na primeira, terceira e quarta etapas (cinco no total), uma correção de Bonferroni foi realizada para ajustar o valor alfa desejado para ≤ 0,01, mas não ≤ 0,05.
Redução da contagem de plaquetas com todas as concentrações de dextrose hipertônica e aumento do VPM nas plaquetas de PRP em concentração de dextrose >12,5%: as contagens de plaquetas de PRP aumentaram de uma a cinco vezes a concentração em comparação ao sangue total basal, variando de acordo com o método (não ilustrado). Redução da contagem de plaquetas com todas as concentrações de dextrose hipertônica e aumento do VPM nas plaquetas de PRP em concentração de dextrose >12,5%: as contagens de plaquetas de PRP aumentaram de uma a cinco vezes a concentração em comparação ao sangue total basal, variando pelo método (não ilustrado). Definindo uma coleção de trombos através de seu contrato de conexão de áudio e vídeo MPV тромбоцитах PRP por концентрации декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось в 1-5 раз по сравнению с исходной цельной кровью, в зависимости от método (não показано). Contagem de plaquetas diminuída em todas as concentrações hipertônicas de dextrose e aumento do VPM em plaquetas de PRP em concentração de dextrose >12,5%: a contagem de plaquetas de PRP aumentou de 1 a 5 vezes em comparação ao sangue total basal, dependendo do método (não mostrado). ).在>12,5%增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法而异（未描述）。 Em concentração de glicose >12,5%, a alta concentração de glicose reduz a contagem sanguínea, o MPV sanguíneo do PRP aumenta: comparado ao 与基线全血, a contagem sanguínea do PRP aumenta de 1 a 5 vezes a concentração (não descrito). Para glicosídeos concentrados >12,5% em comparação com glicosídeos hipertensivos concentrados Trombas, um MPV colocado em trombas PRP: Coleção de trombos PRP disponível de 1 a 5 dias de conexão para a implementação de testes концентрациями цельной крови, em зависимости от метода (não especificado). Em concentrações de glicose >12,5%, todas as concentrações hipertensivas de glicose diminuíram as contagens de plaquetas e aumentaram o VPM nas plaquetas do PRP: as contagens de plaquetas do PRP aumentaram de 1 a 5 vezes em comparação às concentrações sanguíneas totais basais, dependendo do método (conforme descrito).A Figura 1 mostra que o número de plaquetas diminuiu em quase 75% após a diluição em água e em 20-30% após 15 minutos de diluição com diferentes concentrações de glicose em comparação ao PRP basal e uma diluição de 1:1 ajustada para volume (1- k1 com correção de volume). k -1 reprodução).1 reprodução).
O número de células em cada diluição é expresso como uma fração do número original antes da diluição.
O VPM diminuiu minimamente durante a produção de PRP, sem alterações adicionais nas concentrações de diluição para 12,5% em água ou glicose (incluindo misturas de PRP com glicose a 25%) e aumentou em mais de 20% após a diluição em solução de glicose a 50% (Fig. .2). Em contraste, os eritrócitos não apresentaram alterações significativas no volume em nenhuma diluição diferente de H2O.
O volume médio de células em cada diluição é expresso como uma porcentagem do volume original antes da diluição.
Uma redução semelhante, porém menos pronunciada, na contagem de plaquetas e um aumento no RCV foram observados em pacientes com câncer de mama expostos a 50% de glicose (para formular com 25% de glicose). A Tabela 2 compara o número e o volume de células no sangue total diluído em dextrose a 50% com os dados da fase 1 do PRP diluído em dextrose a 50%. Alterações na contagem de hemácias e no VCM de hemácias não foram óbvias e não foram o foco de nossa atenção.
DP = desvio padrão, MD = diferença média entre os grupos, EP = desvio padrão da diferença média, RBC = eritrócitos, PLT = plaquetas, PRP = plasma rico em plaquetas, WB = sangue total
Após a adição de D50W ao WB, a perda de plaquetas ajustada pela diluição percentual foi de 7,7% (310 ± 73 vs. 286 ± 96), em comparação com 17,8% para a diluição de PRP em D50W (664 ± 348 vs. 544 ± 277). O MPV do WB aumentou 16,8% (de 10,1 ± 0,5 para 11,8 ± 0,6), enquanto o MPV do PRP aumentou 26% (9,2 ± 0,8 vs. 11,6 ± 0,7). Embora as diferenças médias na redução da contagem de plaquetas e no aumento do VPM tenham sido significativamente maiores com o PRP, as alterações na redução da contagem de plaquetas dentro do WB foram quase significativas (310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) e o aumento no VPM foi significativo (10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Embora as diferenças médias na redução da contagem de plaquetas e no aumento do VPM tenham sido significativamente maiores com o PRP, as alterações na redução da contagem de plaquetas dentro do WB foram quase significativas (310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) e o aumento no VPM foi significativo (10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Embora as diferenças médias na redução da contagem de plaquetas e no aumento do CVR tenham sido significativamente maiores com PRP, as alterações no declínio da contagem de plaquetas dentro do WB foram quase significativas (310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).O MPV aumentado é maior que o normal (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). o aumento do VPM foi significativo (de 10,1 ± 0,5 para 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7%)；p = 0,06）和MPV的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001）。尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 , 但 但 内血小板 计数减少 的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%) ； p = 0,06）和MPV 的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001）。A alteração na redução da contagem de plaquetas dentro do WB foi quase significativa (de 310 ± 73 para 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), embora o PRP tenha apresentado diferenças médias significativamente maiores no declínio da contagem de plaquetas e no aumento do VPM, e o aumento do VPM foi significativo.(de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (de 10,1 ± 0,5 para 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Uma concentração final de 20% de glicose foi necessária para observar uma mudança significativa no VPM, mas a mudança no VPM foi mais pronunciada na concentração final de 25%. A perda de plaquetas se estabilizou após o declínio inicial. Observamos uma queda acentuada inicial no RCV, no entanto, o RCV foi rapidamente restaurado na concentração final de glicose de 25%, que foi significativamente maior do que os níveis de RCV observados nas concentrações finais de glicose de 20% e 15% (Fig. 3 e à esquerda da Tabela 3; caixas sombreadas). indicam valores de p ≤ alfa com uma correção de Bonferroni de 0,01). Houve também uma queda acentuada inicial no número de PLT, observada na fase inicial de 0-15 s, e então permaneceu estável (de 15 s a 30 min; à esquerda da Tabela 4).
A adição de diferentes concentrações de glicose ao sangue total resultou em uma rápida diminuição inicial do VPM, seguida por uma recuperação dependente da concentração de mais de 20%. A legenda mostra a concentração de glicose após a diluição. D15, D20 e D25 foram realizados em diluição de 1:1. D21 e D41 foram realizados em diluição de 1:5.
A Tabela 4 mostra a alteração na contagem de plaquetas quando diluída em glicose hipertônica. Observamos uma relação dose-dependente entre a queda imediata nos números de PLT na diluição 1:1 e na diluição 1:5. Comparando as diluições 1:1 como um único grupo com as diluições 1:5, o grupo 1:1 apresentou uma diminuição imediata na contagem de plaquetas menor que o grupo 1:5: 66 ± 48.000 (23%) versus 99 ± 69.000 (37%). (p = 0,014) no grupo 1:5. Após uma queda inicial no primeiro ponto de medição, a contagem de plaquetas como porcentagem de glicose estabilizou (Fig. 4).
Quando o sangue total é adicionado à glicose na proporção de 1:1, a contagem de plaquetas é reduzida em cerca de 25%. No entanto, quando o sangue total é adicionado na proporção de 1:5, a redução é muito maior – cerca de 50%.
A glicose a 41% aumentou o VPM mais rápida e dramaticamente do que a glicose a 25% ou 21%. Os resultados do VPM são mostrados na Figura 3. Em todas as outras diluições, não foi observada redução inicial imediata no VPM após a adição de glicose a 50%. Ao utilizar glicose a 25% (concentração de glicose de 20,8% na diluição final), a alteração no VPM foi comparável à alteração na glicose a 20% na diluição de 1:1 (Fig. 3). Embora as alterações no VPM tenham sido inicialmente maiores na concentração mista de 41% do que na de 25%, a diferença no VPM entre 41% e 25% após 16 minutos não foi mais significativa (Tabela 3, à direita). Também é interessante notar que a glicose a 25% aumentou o VPM de forma mais eficaz do que a de 20,8%.
Este estudo in vitro confirmou parcialmente nossa hipótese. Mostrou potencial lise plaquetária parcial pela mistura de dextrose, uma rápida acomodação das plaquetas à hipertonicidade extrema e um aumento significativo no VPM em resposta a concentrações > 25% de dextrose hipertônica. Mostrou potencial lise plaquetária parcial pela mistura de dextrose, uma rápida acomodação das plaquetas à hipertonicidade extrema e um aumento significativo no VPM em resposta a concentrações > 25% de dextrose hipertônica. Em cada caso, você pode encontrar uma solução de problemas para obter os primeiros downloads, por favor, adicione-os тромбоцитов до экстремального A hipertonia e o uso de MPV têm uma taxa de conversão de hipertonia > 25%. Mostrou potencial lise plaquetária parcial com dextrose, rápida acomodação plaquetária à hipertonicidade extrema e um aumento significativo no VPM em resposta a níveis hipertônicos de dextrose >25%.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> 25% 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 极端 高渗 , 以及响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Em caso de problemas potenciais, você pode usar tubos de vidro com glicosímetro, adaptando-os тромбоцитов к экстремальному Hipertonus e aumento de volume do MPV são obtidos com concentração de hiperglicemia > 25%. Apresenta potencial lise plaquetária parcial por misturas de glicose, rápida adaptação plaquetária à hipertonicidade extrema e aumento significativo do VPM em resposta à glicose hipertônica >25%.O aumento inicial foi máximo na exposição à glicose de 41,6%, mas o aumento no VPM se aproximou da exposição à glicose de 25% aproximadamente 20 minutos após a exposição.
A concentração de plaquetas é afetada pela glicose. Observamos que a quantidade de PLT diminuiu em todas as diluições de glicose. Uma queda acentuada no número de plaquetas em diluições de H2O (0%) da série PRP pode estar associada à lise osmótica. Alternativamente, isso pode ser um artefato causado pela agregação plaquetária, mas isso contrasta com a ausência de alteração do VPM nessa diluição. Esse achado significa que algumas plaquetas são muito sensíveis à hiposmolaridade.
Em todas as diluições 1:1 de glicose, a quantidade de PLT diminuiu em 20-30%, mesmo no D5W (hipotônico a 252 mOsm), o que pode indicar um efeito não osmótico específico da glicose, uma vez que tanto PLT quanto MPV permaneceram inalterados com um aumento de três vezes na concentração de glicose do D5W ao D25W. De fato, as concentrações de PLT tenderam a aumentar ligeiramente com o aumento da osmolaridade.
A diminuição da PLT entre as diluições 1:1 e 1:5 significa que o efeito de dissolução depende da concentração inicial e final de glicose. Se dependesse apenas da concentração inicial, seria de se esperar uma diferença na redução da PLT entre as concentrações 1:1. Mas não é o que acontece. Se o efeito de lise depende apenas da concentração final de glicose, não esperamos muita diferença entre uma diluição 1:1 de 20% e uma diluição 1:5 de 20,8%. E, no entanto, conseguimos.
Se ocorrer perda de plaquetas devido à lise plaquetária, um lisado parcial é formado, após o qual citocinas e fatores de crescimento são liberados no ambiente extracelular. Diversos estudos demonstraram que o lisado plaquetário é quase tão eficaz quanto o PRP como solução de proliferação [11]. O próprio PRP demonstrou ser uma solução eficaz para o tratamento da proliferação [12-14].
As plaquetas inativas circulam na forma de um disco reforçado com diversas estruturas internas. Durante a ativação, assumem uma forma mais esférica ou de ameba, resultando em aumento de volume. O aumento de volume requer um aumento na área de superfície, que é resultado da extrusão do sistema de túbulos abertos (SCO) e da adição de grânulos exocíticos à membrana. Resta determinar se o aumento do VPM induzido pela glicose hipertônica envolve um ou ambos os mecanismos, mas, se for o último, um aumento no VPM indicaria degranulação.
Este estudo mostrou que a exposição a altas concentrações de glicose no PRP ou nas plaquetas do sangue total resultou em um aumento no VPM em 15 minutos, com uma concentração de glicose de 25% e 41,6%, respectivamente.
O aumento do VPM plaquetário pode ser devido à dilatação dos emaranhados de microtúbulos circundantes em resposta ao influxo de cálcio. Liu et al. Foi demonstrado que a glicose media o influxo de cálcio através do canal TRPC6 plaquetário [6]. Nossa hipótese é que a glicose induz o relaxamento dos emaranhados de microtúbulos, levando a um aumento do VPM e à sensibilização e/ou ativação plaquetária. No entanto, a julgar por nossos resultados, isso é apenas parte da história. Em nossos testes, nenhuma concentração abaixo de D25W resultou em aumento do VPM. Dado que não testamos a exposição a concentrações de glicose entre 12,5% e 25%, nossos resultados da Fase 1 sugerem que pode haver um limite nessa faixa de concentrações de glicose que leva a um aumento do VPM. Testes adicionais nos estágios 3 e 4 mostraram que 20-25% de glicose parece ser o limite para isso, mas ainda não está claro o porquê.
Observamos também uma redução de ~9% no VPM após a centrifugação. Não está claro se essa redução no VPM se deve a plaquetas maiores e mais densas retidas na camada de hemácias da centrífuga. Essa observação pode ser importante para os médicos, pois pode implicar que as plaquetas PRP sejam um subconjunto menor e menos denso das plaquetas WB.
Em um estudo anterior, demonstramos que a preparação de PRP por métodos manuais é de baixo custo [8]. Se a glicose sensibilizar as plaquetas teciduais ou o PRP, tornando-os mais suscetíveis à ativação, ou se o PRP for produzido com propriedades de lisado parcial, isso pode aumentar a regeneração e reduzir a necessidade de terapia. Portanto, a combinação de PRP e glicose altamente concentrada pode ser mais econômica do que o uso isolado de PRP ou glicose.
Nosso estudo apresenta diversas deficiências. Primeiro, utilizamos PRP obtido por diversos métodos diferentes. Isso pode levar a resultados conflitantes. Segundo, não conseguimos realizar uma análise bioquímica de nenhuma de nossas amostras para determinar com mais precisão se ocorreu ativação plaquetária. Gostaríamos de medir a P-selectina, o fator plaquetário 4, os agregados plaquetários monocíticos ou outros marcadores de ativação plaquetária para melhor compreender o grau ou a presença de desgranulação dos grânulos alfa, mas isso está além do escopo deste estudo. Terceiro, não conseguimos confirmar, por microscopia eletrônica ou outros métodos, que o aumento do VPM em plaquetas expostas à glicose se deveu ao efeito nos emaranhados de microtúbulos.
Misturas de WB ou PRP com 25% de glicose aumentaram o VPM, sinalizando o início da ativação plaquetária, embora este estudo não tenha demonstrado progressão da agregação ou desgranulação. A mistura hipertônica de glicose resultou em perda plaquetária, possivelmente representando um efeito lítico. A ativação parcial ou lise plaquetária pode causar regeneração tecidual após a injeção plaquetária. Não está claro quais consequências clínicas essas alterações podem levar. Estudos posteriores demonstraram medições mais precisas de ativação ou lise e avaliaram os diferentes efeitos clínicos de misturas hipertônicas de glicose com WB ou PRP.
A terapia proliferativa de glicose é uma terapia regenerativa simples e barata que está se expandindo rapidamente e apoiando a pesquisa clínica. Este estudo sugere um mecanismo fisiológico que, se confirmado, poderá nos ajudar a compreender parte do mecanismo regenerativo da terapia proliferativa.
Informática Biomédica e em Saúde na Faculdade de Medicina da Universidade do Missouri, Kansas City, Kansas City, EUA
Sujeitos humanos: Todos os participantes deste estudo deram ou não consentimento. A Sociedade Internacional de Medicina Celular emitiu a aprovação ICMS-2017-003. O protocolo a seguir foi aprovado para uso posterior pelo Conselho de Revisão Institucional da Sociedade Internacional de Medicina Celular: Título: Cálculo do rendimento do fármaco em plasma rico em plaquetas com base na contagem de plaquetas do hemograma completo basal. Sujeitos animais: Todos os autores confirmaram que nenhum animal ou tecido esteve envolvido neste estudo. Conflitos de interesse: De acordo com o Formulário de divulgação uniforme do ICMJE, todos os autores declaram o seguinte: Informações de pagamento/serviço: Todos os autores declaram que não receberam apoio financeiro de nenhuma organização para o trabalho submetido. Relações financeiras: Todos os autores declaram que não têm, atualmente ou nos últimos três anos, relações financeiras com nenhuma organização que possa estar interessada no trabalho submetido. Outras relações: Todos os autores declaram que não há outras relações ou atividades que possam afetar o trabalho submetido.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al. (17 de maio de 2022) O efeito da glicose na contagem e no volume plaquetário: implicações para a medicina regenerativa. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
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