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Plasma rico em plaquetas/prp, regeneração tecidual, ativação plaquetária, terapia proliferativa de glicose, plaquetas, terapia proliferativa
Cite este artigo como: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al.(17 de maio de 2022) O efeito da glicose na contagem e volume de plaquetas: implicações para a medicina regenerativa.Cura 14(5): e25081.doi:10.7759/cureus.25081
Plasma rico em plaquetas (PRP) e soluções de glicose hipertônica são comumente usados ​​para injeção em medicina regenerativa, às vezes juntos.O efeito da glicose hipertônica na lise e ativação plaquetária não foi relatado anteriormente.Testamos o efeito de concentrações elevadas de glicose nas contagens de plaquetas e eritrócitos, bem como nos volumes celulares no PRP e no sangue total (WB).Uma rápida redução parcial na contagem de plaquetas ocorreu com todas as misturas de glicose misturadas com PRP ou sangue total, consistente com lise parcial. Após o primeiro minuto, a contagem de plaquetas manteve-se estável, sugerindo uma rápida acomodação das plaquetas residuais à hipertonicidade extrema (>2000 mOsm). Após o primeiro minuto, a contagem de plaquetas manteve-se estável, sugerindo uma rápida acomodação das plaquetas residuais à hipertonicidade extrema (>2000 mOsm). После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю аккомодацию остаточных тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. Após o primeiro minuto, a contagem de plaquetas manteve-se estável, indicando uma rápida acomodação das plaquetas residuais à hipertonicidade extrema (>2000 mOsm).第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm）高渗状态。2000 mOsm）高渗状态。 После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю адаптацию остаточных тромбоцитов к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. Após o primeiro minuto, a contagem de plaquetas manteve-se estável, indicando uma rápida adaptação das plaquetas residuais ao estado hiperosmolar extremo (>2000 mOsm).As concentrações de glicose de 25% e acima resultaram em um aumento significativo no volume médio de plaquetas (VPM), indicando um estágio inicial de ativação plaquetária.Mais estudos são necessários para determinar se ocorre lise ou ativação plaquetária e se a injeção de glicose hipertônica sozinha ou em combinação com PRP pode fornecer benefício clínico adicional.
Na década de 1950, o cirurgião americano George Hackett descobriu que poderia aliviar permanentemente as dores nas articulações e nas costas de muitos pacientes, injetando uma solução proliferativa nos tendões e ligamentos.Seus experimentos em coelhos mostraram que o tratamento, que ele chamou de terapia proliferativa, fazia com que os tendões aumentassem e se fortalecessem.Estudos histológicos confirmaram que novo colágeno é produzido durante esse processo [1].
Durante as primeiras décadas, muitas soluções de distribuição diferentes foram tentadas.Na década de 1990, a maioria dos médicos considerava altas concentrações de glicose o método mais seguro e eficaz.No entanto, o mecanismo de ação permanece obscuro.
Poucos estudos clínicos foram realizados no século 20 após o trabalho de Hackett.No entanto, na década de 2000, houve um interesse renovado e vários ensaios clínicos bem-sucedidos de terapia proliferativa foram concluídos para o tratamento da dor lombar [2], osteoartrite do joelho [3] e epicondilite lateral [4].
A regeneração tecidual requer a participação de células-tronco.Portanto, altas concentrações de glicose devem de alguma forma induzir migração, replicação e diferenciação de células-tronco.Nossa hipótese é que as plaquetas podem atuar como mensageiras e que altas concentrações de glicose podem fazer com que as plaquetas liberem citocinas e fatores de crescimento, promovendo processos regenerativos, especialmente a migração de células-tronco para áreas de altas concentrações de glicose.
A ativação plaquetária sempre precede o aumento do cálcio intracelular [5].Liu et ai.em 2008 mostraram que altos níveis de glicose aumentam a atividade dos canais canônicos de potencial receptor transitório tipo 6 (TRPC6) na membrana plasmática, o que leva a um influxo de íons de cálcio para as plaquetas [6].Outro estudo mostrou que a exposição da zona marginal do microtúbulo aos íons de cálcio causa relaxamento, expansão e deformação da zona marginal, que por sua vez causa uma mudança na forma de disco para esférica, resultando no volume plaquetário médio (VPM) [7].
Nossa hipótese neste estudo é que a exposição das plaquetas a altas concentrações de glicose afeta a zona marginal dos microtúbulos e o ambiente intracelular, levando a um aumento do VPM.
Todos os participantes assinaram um termo de consentimento informado depois que os detalhes do estudo foram explicados e antes de receber as amostras.Neste estudo, apenas amostras de PRP com hematócrito superior a 2% foram utilizadas para que a contagem de eritrócitos (eritrócitos) e o volume corpuscular médio das hemácias (VCM) pudessem ser incluídos para comparação.
O estudo foi realizado em quatro fases, a primeira fase foi PRP e as demais fases foram sangue total (Tabela 1).Conforme descrito anteriormente [8], todas as forças centrífugas relativas (RCF, força g) foram calculadas a partir do ponto médio (Rmid, em cm) da coluna de sangue na seringa centrífuga.Optamos por usar o MPV como marcador de sensibilização plaquetária e a contagem de plaquetas como indicador de potencial lise plaquetária, sendo que ambos podem ser facilmente medidos em analisadores hematológicos padrão.
Na primeira fase, 47 voluntários doaram amostras de sangue - um tubo de ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) e uma amostra de sangue total PRP (anticoagulado com citrato de sódio (NaCl, 3%)) (Tabela 1).Coloque o balanceiro no tubo imediatamente.O hemograma completo (CBC) foi realizado em amostras de EDTA em triplicado, e as amostras de NaCl foram analisadas em triplicado para análise de CBC e, em seguida, o PRP foi preparado por vários métodos descritos acima [8].Todas as amostras de PRP foram preparadas por centrifugação a 900–1000 g.Misture cada amostra de PRP em um misturador de vórtice por 5 a 10 segundos e, em seguida, divida cinco alíquotas de 0,5 ml em tubos.
Para avaliar o efeito da exposição plaquetária em concentrações elevadas de glicose, quantidades iguais (0,5 ml) de 0%, 5%, 12,5%, 25% e 50% de glicose em água foram misturadas com amostras de plaquetas para obter concentrações de 0%, 2,5%, 6,25%, 12,5% e 25% da mistura de glicose e misturar os tubos em um agitador de tubo de ensaio por 15 minutos.O TAC de cada mistura foi analisado em triplicata após 15 min.A contagem de plaquetas (PLT), contagem de hemácias, MCV e MPV foi calculada para cada tubo, e a contagem média de plaquetas, contagem de hemácias, MCV e MPV foram calculadas para todas as amostras de PRP.
Concluída a primeira fase de coleta de dados, notamos um aumento significativo do volume plaquetário nas plaquetas de PRP após a adição de D50W.As plaquetas PRP não representam necessariamente todas as plaquetas no sangue, e o meio PRP difere do meio WB.Portanto, decidimos realizar uma segunda fase de teste do efeito da adição de D50W ao sangue total.
Para a segunda rodada, escolhemos um tamanho amostral de 30 com base nos resultados da primeira série, conforme descrito na seção Análise.Nesta série, 20 voluntários doaram amostras de sangue (Tabela 1).Sangue total (1,8 ml) foi colhido para uma seringa de 3 ml e anticoagulado com 0,2 ml de NaCl a 40%.A seringa de sangue total foi misturada por cinco segundos com um misturador de vórtice e o hemograma foi analisado em triplicata.Após a análise, o sangue anticoagulado foi adicionado a 2 ml de glicose a 50% em uma seringa de 5 ml (a concentração final de glicose foi de aproximadamente 25% (D25) e colocado em um tubo de agitação por 30 minutos. Após 30 minutos, D25/CBC em seringas WB foram analisados ​​em triplicado. Contagem de plaquetas, contagem de hemácias, VCM e VPM por seringa foram calculadas a média, e PLT médio, contagem de RBC, MCV e VPM foram calculados para cada amostra antes e depois da adição de glicose .
Como as plaquetas no sangue total são comumente expostas à glicose hipertônica durante a terapia com glicose proliferativa devido à injeção minimamente invasiva, e não é comum combinar PRP com glicose hipertônica imediatamente antes da injeção, decidimos estudar a glicose hipertônica em combinação com WB na Seção 1. Etapa três e quatro.Em cada etapa, 20 voluntários doaram 7-8 ml de ACD-A (ácido contendo citrato trissódico (22,0 g/l), ácido cítrico (8,0 g/l) e glicose (24,5 g/l), solução de citrato de dextrose) para anticoagulantes sanguíneos (Tabela 1).Apenas misturas de glicose superiores a 12,5% foram usadas para determinar a porcentagem de limiar associada ao aumento do VPM.Na terceira etapa, 1 ml de sangue é colocado em um tubo de ensaio.Em seguida, misture o sangue em um misturador de vórtice por 10 segundos adicionando 1 ml de glicose a 30%, glicose a 40% ou glicose a 50% ao tubo para obter uma concentração final de glicose de 15%, 20% e 25%, respectivamente.Amostras de sangue de glicose foram analisadas para CBC imediatamente após a mistura e repetidas a cada dois minutos por 30 minutos.
Durante a mistura inicial, a adição de glicose hipertônica 1:1 e WB ou PRP expõe as plaquetas a concentrações acima de 25% por vários segundos.Na quarta etapa, para avaliar o efeito da glicose hipertônica com picos de concentração iniciais mínimos e testar o limite superior do efeito da glicose, adicionamos apenas uma pequena quantidade de sangue a D25W ou D50W.Coloque 1 ml de D25W ou D50W em um tubo e adicione 0,2 ml de WB enquanto agita a amostra no vórtex por 10 segundos.Nesses casos, o sangue foi exposto à glicose em uma concentração de aproximadamente 20% acima da concentração final, em vez de 50% acima da concentração final como na Fase 3, resultando em concentrações finais de glicose de 20,8% e 41,6%.Amostras mistas foram analisadas no mesmo intervalo de tempo da etapa 3.
Na primeira etapa de cada série de diluição de glicose, 30 amostras foram coletadas, pois esse era o tamanho de amostra apropriado para o estudo piloto [9].Ao final de cada fase (incluindo a primeira fase), avalie a adequação do tamanho da amostra usando a fórmula usada para determinar o tamanho da amostra necessário para estimar a média da variável de resultado contínua em uma população.Fórmula n = Z2 x SD2/E2.Nessa equação, Z é o escore Z, SD é o desvio padrão e E é o erro desejado [10].Nosso alfa é 0,05, que corresponde a um valor Z de 1,96, e esperamos um erro de 5 (em porcentagem).Portanto, resolvemos para n = (1,962 x SD2)/52.Os resultados mostraram que o tamanho da amostra necessária para cada etapa foi menor do que o número real coletado.
Durante os períodos 1, 3 e 4 usando mais de uma concentração de glicose, o efeito de diferentes concentrações de glicose foi analisado comparando a mudança fracional entre o tempo 0 e cada tempo subsequente (fase 1 aos 15 minutos, período 3 aos 15 minutos).e quatro a 15 segundos, depois a cada dois minutos.) As taxas de alteração para cada período de tempo foram comparadas usando o teste U de Mann-Whitney porque os dados não seguiram uma distribuição normal conforme determinado pelo teste de normalidade de Shapiro-Wilk.Como uma análise 1 para 1 de vários grupos (cinco) foi realizada na primeira, terceira e quarta etapas (cinco no total), uma correção de Bonferroni foi realizada para ajustar o valor alfa desejado para ≤0,01, mas não ≤0,05.
Redução da contagem de plaquetas com todas as concentrações de dextrose hipertônica e aumento do MPV em plaquetas de PRP em > 12,5% de concentração de dextrose: a contagem de plaquetas de PRP aumentou de uma a cinco vezes a concentração em comparação com o sangue total basal, variando de acordo com o método (não representado). Redução da contagem de plaquetas com todas as concentrações de dextrose hipertônica e aumento do VPM em plaquetas de PRP em concentração > 12,5% de dextrose: a contagem de plaquetas de PRP aumentou de uma a cinco vezes a concentração em comparação com o sangue total basal, variando de acordo com o método (não representado). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы и увеличение MPV в тр омбоцитах PRP при концентрации декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось в 1-5 раз по сравнению с исходной цельной кровью, в зависимости от метода (не показано). Diminuição da contagem de plaquetas em todas as concentrações de dextrose hipertônica e aumento do MPV em plaquetas de PRP em concentração de dextrose > 12,5%: a contagem de plaquetas de PRP aumentou 1-5 vezes em comparação com o sangue total basal, dependendo do método (não mostrado). ).在> 12,5% 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，PRP 血小板中MPV 增加:与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法而异（未描述）。 Em > 12,5% ​​de concentração de glicose, a alta concentração de glicose reduz o hemograma, o PRP no sangue aumenta o MPV: em comparação com 与基线全血, o hemograma do PRP aumenta de 1 a 5 vezes o da concentração (não descrito). При концентрациях глюкозы >12,5% все концентрации гипертонической глюкозы снижали количество тромбо цитов, а MPV повышали в тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от 1- до 5-кратных концентраций по сравнению с исходными концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (não описано ). Em concentrações de glicose > 12,5%, todas as concentrações de glicose hipertensiva diminuíram as contagens de plaquetas e aumentaram o VPM nas plaquetas de PRP: as contagens de plaquetas de PRP aumentaram de 1 a 5 vezes em comparação com as concentrações basais de sangue total, dependendo do método (conforme descrito).A Figura 1 mostra que o número de plaquetas diminuiu quase 75% após a diluição em água e 20-30% após 15 minutos de diluição com diferentes concentrações de glicose em comparação com o PRP basal e uma diluição 1:1 ajustada para volume (1-k1 com correção de volume).k -1 reprodução).1 reprodução).
O número de células em cada diluição é expresso como uma fração do número original antes da diluição.
O MPV diminuiu minimamente durante a produção de PRP, sem alteração adicional nas concentrações de diluição para 12,5% em água ou glicose (incluindo misturas de glicose 25% PRP) e aumentou em mais de 20% após diluição em solução de glicose 50% (Fig. .2).).Em contraste, os eritrócitos não apresentaram alteração significativa no volume em qualquer diluição diferente de H2O.
O volume médio de células em cada diluição é expresso como uma porcentagem do volume original antes da diluição.
Uma redução semelhante, mas menos pronunciada, na contagem de plaquetas e aumento na CVR foi observada em BC exposto a 50% de glicose (para formular com 25% de glicose).A Tabela 2 compara o número e o volume das células no sangue total diluído em dextrose a 50% com os dados da fase 1 do PRP diluído em dextrose a 50%.Alterações na contagem de hemácias e VCM de hemácias não eram óbvias e não eram o foco de nossa atenção.
SD = desvio padrão, MD = diferença média entre os grupos, SE = desvio padrão da diferença média, RBC = eritrócitos, PLT = plaquetas, PRP = plasma rico em plaquetas, WB = sangue total
Depois de adicionar D50W a WB, a porcentagem de perda de plaquetas ajustada à diluição foi de 7,7% (310±73 vs. 286±96) em comparação com 17,8% para a diluição de PRP em D50W (664±348 vs. 544±277).O MPV WB aumentou 16,8% (de 10,1 ± 0,5 para 11,8 ± 0,6), enquanto o MPV PRP aumentou 26% (9,2 ± 0,8 vs. 11,6 ± 0,7). Embora as diferenças médias na redução da contagem de plaquetas e no aumento do MPV tenham sido significativamente maiores com o PRP, as alterações na redução da contagem de plaquetas no WB foram quase significativas (310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) e o aumento no MPV foi significativo (10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Embora as diferenças médias na redução da contagem de plaquetas e no aumento do MPV tenham sido significativamente maiores com o PRP, as alterações na redução da contagem de plaquetas no WB foram quase significativas (310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) e o aumento no MPV foi significativo (10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Embora as diferenças médias na redução da contagem de plaquetas e no aumento da RCV tenham sido significativamente maiores com o PRP, as alterações no declínio da contagem de plaquetas no WB foram quase significativas (310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).увеличение MPV было значительным (от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). o aumento do VPM foi significativo (de 10,1 ± 0,5 para 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少 e MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB 内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7%)；p = 0,06） e MPV 的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001 ）。尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 但 内血小板 计数 减少的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%) ； p = 0,06) e MPV 的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0. 6 (+16,8) p < 0,001）。A mudança na redução da contagem de plaquetas dentro do WB foi quase significativa (de 310 ± 73 para 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), embora o PRP tenha diferenças médias significativamente maiores no declínio da contagem de plaquetas e aumento do VPM.e o aumento do VPM foi significativo.(de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Uma concentração final de 20% de glicose foi necessária para ver uma mudança significativa no MPV, mas a mudança no MPV foi mais pronunciada na concentração final de 25%.A perda de plaquetas estabilizou após o declínio inicial.Observamos uma diminuição acentuada inicial na CVR, no entanto, a CVR foi rapidamente restaurada na concentração final de glicose de 25%, que foi significativamente maior do que os níveis de CVR observados nas concentrações finais de glicose de 20% e 15% (Fig. 3 e à esquerda da Tabela 3; caixas sombreadas).indicam valores de p ≤ alfa com uma correção de Bonferroni de 0,01).Houve também uma queda inicial acentuada no número de PLT, observada na fase inicial de 0-15 s, e depois permaneceu estável (de 15 s para 30 min; à esquerda da tabela 4).
A adição de várias concentrações de glicose ao sangue total resultou em uma rápida diminuição inicial no VPM, seguida por uma recuperação dependente da concentração de mais de 20%.A legenda mostra a concentração de glicose após a diluição.D15, D20 e D25 foram realizados na diluição 1:1.D21 e D41 foram realizados na diluição 1:5.
A Tabela 4 mostra a alteração na contagem de plaquetas quando diluída em glicose hipertônica.Observamos uma relação dose-dependente entre a queda imediata nos números de PLT na diluição 1:1 e na diluição 1:5.Comparando as diluições 1:1 como um único grupo com as diluições 1:5, o grupo 1:1 teve uma diminuição imediata na contagem de plaquetas menor que o grupo 1:5 66±48.000 (23%) versus 99±69.000 (37%)., p = 0,014) no grupo 1:5.Após uma queda inicial no primeiro ponto de medição, a contagem de plaquetas em percentual de glicose estabilizou (Fig. 4).
Quando o sangue total é adicionado à glicose na proporção de 1:1, a contagem de plaquetas é reduzida em cerca de 25%.No entanto, quando o sangue total foi adicionado na proporção de 1:5, a redução foi muito maior – cerca de 50%.
A glicose de 41% aumentou o MPV mais rápido e dramaticamente do que 25% ou 21%.Os resultados do MPV são mostrados na Figura 3. Em todas as outras diluições, nenhuma diminuição inicial imediata no MPV foi observada após a adição de 50% de glicose.Ao usar glicose a 25% (concentração de glicose de 20,8% na diluição final), a alteração no MPV foi comparável à alteração na glicose a 20% em uma diluição de 1:1 (Fig. 3).Embora as mudanças no MPV fossem inicialmente maiores na concentração mista de 41% do que em 25%, a diferença no MPV entre 41% e 25% após 16 minutos não era mais significativa (Tabela 3, à direita).Também é interessante que 25% de glicose aumentou o VPM de forma mais eficaz do que 20,8%.
Este estudo in vitro confirmou parcialmente nossa hipótese. Mostrou potencial lise parcial de plaquetas pela mistura de dextrose, uma rápida acomodação das plaquetas à hipertonicidade extrema e um aumento significativo no VPM em resposta a concentrações > 25% de dextrose hipertônica. Mostrou potencial lise parcial de plaquetas pela mistura de dextrose, uma rápida acomodação das plaquetas à hipertonicidade extrema e um aumento significativo no VPM em resposta a concentrações > 25% de dextrose hipertônica. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю аккомодацию тро мбоцитов до экстремального гипертонуса и значительное повышение MPV в ответ на гипертоническую концентраци ю декстрозы > 25%. Mostrou potencial lise parcial de plaquetas com dextrose, acomodação rápida de plaquetas a hipertonicidade extrema e um aumento significativo no VPM em resposta a níveis de dextrose hipertônica > 25%.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> 25 % 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。Mais应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями с глюкозой, быструю адаптацию тромбоцитов к экстремальному гипертонусу и значительное увеличение MPV в ответ на концентрацию гипертоническо й глюкозы > 25%. Mostra potencial de lise parcial das plaquetas por misturas de glicose, rápida adaptação das plaquetas à hipertonicidade extrema e aumento significativo do VPM em resposta à glicose hipertônica >25%.O aumento inicial foi máximo em 41,6% de exposição à glicose, mas o aumento no VPM aproximou-se de 25% de exposição à glicose aproximadamente 20 minutos após a exposição.
A concentração de plaquetas é afetada pela glicose.Notamos que a quantidade de PLT diminuiu em todas as diluições de glicose.Uma queda acentuada no número de plaquetas em diluições de H2O (0%) da série PRP pode estar associada à lise osmótica.Alternativamente, isso pode ser um artefato causado pela aglomeração de plaquetas, mas isso contrasta com a falta de alteração do MPV nessa diluição.Esse achado significa que algumas plaquetas são muito sensíveis à hipoosmolaridade.
Em todas as diluições 1:1 de glicose, a quantidade de PLT diminuiu em 20-30%, mesmo por D5W (hipotônico a 252 mOsm), o que pode indicar um efeito não osmótico específico da glicose, uma vez que tanto PLT quanto MPV permaneceram inalterados em um aumento de três vezes na concentração.glicose.de D5W a D25W.De fato, as concentrações de PLT tenderam a aumentar ligeiramente com o aumento da osmolaridade.
A diminuição do PLT entre as diluições 1:1 e 1:5 significa que o efeito de dissolução depende da concentração inicial e final de glicose.Se dependesse apenas da concentração inicial, seria de esperar ver uma diferença na redução de PLT entre as concentrações de 1:1.Mas nós não.Se o efeito de lise depende apenas da concentração final de glicose, não esperamos muita diferença entre uma diluição de 20% 1:1 e uma diluição de 20,8% 1:5.E, no entanto, nós fizemos isso.
Se ocorrer perda de plaquetas devido à lise plaquetária, forma-se um lisado parcial, após o qual citocinas e fatores de crescimento são liberados no meio extracelular.Vários estudos mostraram que o lisado de plaquetas é quase tão eficaz quanto o PRP como uma solução de proliferação [11].O próprio PRP demonstrou ser uma solução eficaz para o tratamento da proliferação [12-14].
As plaquetas inativas circulam na forma de um disco reforçado com várias estruturas internas.Durante a ativação, eles assumem uma forma mais esférica ou de ameba, resultando em um aumento de volume.O aumento de volume requer um aumento da área de superfície, que é resultado da extrusão do sistema de túbulos abertos (OCS) e da adição de grânulos exocíticos à membrana.Resta determinar se o aumento do VPM induzido pela glicose hipertônica envolve um ou ambos os mecanismos, mas se for o último, então um aumento do VPM indicaria desgranulação.
Este estudo mostrou que a exposição a altas concentrações de glicose no PRP ou nas plaquetas do sangue total resultou em um aumento do VPM em 15 minutos com uma concentração de glicose de 25% e 41,6%, respectivamente.
O aumento do VPM plaquetário pode ser devido à dilatação dos emaranhados de microtúbulos circundantes em resposta ao influxo de cálcio.Liu et ai.Foi demonstrado que a glicose media o influxo de cálcio através do canal TRPC6 das plaquetas [6].Nossa hipótese é que a glicose induz o relaxamento dos emaranhados de microtúbulos, levando a um aumento do VPM e da sensibilização e/ou ativação plaquetária.No entanto, a julgar pelos nossos resultados, esta é apenas uma parte da história.Em nossos testes, nenhuma concentração abaixo de D25W resultou em aumento do MPV.Dado que não testamos a exposição a concentrações de glicose entre 12,5% e 25%, nossos resultados da fase 1 sugerem que pode haver um limiar nessa faixa de concentração de glicose que leva a um aumento do VPM.Testes adicionais nos estágios 3 e 4 mostraram que 20-25% de glicose parece ser o limite para isso, mas ainda não está claro o porquê.
Também observamos uma diminuição de ~9% no VPM após a centrifugação.Não está claro se essa diminuição no MPV é devida a plaquetas maiores e mais densas presas na camada de hemácias da centrífuga.Esta observação pode ser importante para os médicos, pois pode implicar que as plaquetas PRP são um subconjunto menor e menos denso das plaquetas WB.
Em um estudo anterior, mostramos que a preparação do PRP por métodos manuais é barata [8].Se a glicose sensibilizar as plaquetas teciduais ou o PRP, tornando-os mais suscetíveis à ativação, ou se o PRP for produzido com propriedades de lisado parcial, isso pode aumentar a regeneração e reduzir a necessidade de terapia.Portanto, a combinação de PRP e glicose altamente concentrada pode ser mais econômica do que PRP ou glicose isoladamente.
Nosso estudo tem várias deficiências.Primeiro, usamos o PRP obtido de vários métodos diferentes.Isso pode levar a resultados conflitantes.Em segundo lugar, não fomos capazes de realizar uma análise bioquímica de nenhuma de nossas amostras para determinar com mais precisão se ocorreu ativação plaquetária.Gostaríamos de medir a P-selectina, o fator plaquetário 4, os agregados plaquetários monocíticos ou outros marcadores de ativação plaquetária para entender melhor o grau ou a presença de degranulação dos grânulos alfa, mas isso está além do escopo deste estudo.Em terceiro lugar, não fomos capazes de confirmar por microscopia eletrônica ou outros métodos que o aumento do MPV em plaquetas expostas à glicose foi devido ao efeito nos emaranhados de microtúbulos.
Misturas de WB ou PRP com 25% de glicose aumentaram o VPM, sinalizando o início da ativação plaquetária, embora este estudo não tenha demonstrado progressão da agregação ou degranulação.A mistura hipertônica de glicose resultou em perda de plaquetas, possivelmente representando um efeito lítico.A ativação parcial ou lise das plaquetas pode causar regeneração tecidual após a injeção de plaquetas.Não está claro a que consequências clínicas essas alterações podem levar.Estudos posteriores demonstraram medidas mais precisas de ativação ou lise e avaliaram os diferentes efeitos clínicos de misturas de glicose hipertônica com WB ou PRP.
A terapia proliferativa com glicose é uma terapia regenerativa simples e barata que está se expandindo rapidamente e apoiando a pesquisa clínica.Este estudo sugere um mecanismo fisiológico que, se confirmado, poderia nos ajudar a entender parte do mecanismo regenerativo da terapia proliferativa.
Biomedical and Health Informatics na University of Missouri, Kansas City School of Medicine, Kansas City, EUA
Sujeitos humanos: Todos os participantes deste estudo deram ou não consentimento.A Sociedade Internacional de Medicina Celular emitiu a aprovação ICMS-2017-003.O protocolo a seguir foi aprovado para uso posterior pelo Conselho de Revisão Institucional da Sociedade Internacional de Medicina Celular: Título: Cálculo do rendimento de drogas plasmáticas ricas em plaquetas com base na contagem de plaquetas do CBC basal.Sujeitos Animais: Todos os autores confirmaram que nenhum animal ou tecido esteve envolvido neste estudo.Conflitos de Interesse: De acordo com o Formulário Uniforme de Divulgação do ICMJE, todos os autores declaram o seguinte: Informações sobre pagamento/serviço: Todos os autores declaram que não receberam apoio financeiro de nenhuma organização para o trabalho submetido.Relações Financeiras: Todos os autores declaram que não mantêm atualmente ou nos últimos três anos relações financeiras com nenhuma organização que possa estar interessada no trabalho submetido.Outros Relacionamentos: Todos os autores declaram que não existem outros relacionamentos ou atividades que possam afetar o trabalho submetido.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al.(17 de maio de 2022) O efeito da glicose na contagem e volume de plaquetas: implicações para a medicina regenerativa.Cura 14(5): e25081.doi:10.7759/cureus.25081
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