„Nu te îndoi niciodată că un mic grup de cetățeni atenți și dedicați poate schimba lumea. De fapt, este singurul care există.”
Misiunea Cureus este de a schimba modelul îndelungat de publicare medicală, în care depunerea cercetărilor poate fi costisitoare, complexă și consumatoare de timp.
Plasmă bogată în trombocite/prp, regenerare tisulară, activare plachetară, terapie proliferativă a glucozei, trombocite, terapie proliferativă
Citați acest articol astfel: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (17 mai 2022) Efectul glucozei asupra numărului și volumului trombocitelor: implicații pentru medicina regenerativă. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
Plasma bogată în trombocite (PRP) și soluțiile de glucoză hipertonice sunt utilizate în mod obișnuit pentru injectare în medicina regenerativă, uneori împreună. Efectul glucozei hipertonice asupra lizei și activării plachetelor nu a fost raportat anterior. Am testat efectul concentrațiilor crescute de glucoză asupra numărului de trombocite și eritrocite, precum și asupra volumelor celulare în PRP și sânge integral (WB). O reducere parțială rapidă a numărului de trombocite a avut loc la toate amestecurile de glucoză amestecate cu PRP sau sânge integral, în concordanță cu liza parțială. După primul minut, numărul de trombocite a rămas stabil, sugerând o acomodare rapidă a trombocitelor reziduale la o hipertonicitate extremă (>2000 mOsm). După primul minut, numărul de trombocite a rămas stabil, sugerând o acomodare rapidă a trombocitelor reziduale la o hipertonicitate extremă (>2000 mOsm). После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на зывает на ставалось стабильным остаточных тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. După primul minut, numărul de trombocite a rămas stabil, indicând o acomodare rapidă a trombocitelor reziduale la o hipertonicitate extremă (>2000 mOsm).第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm）高渗状态。2000 mOsm）高渗状态。 После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на зывает на зывает на боцитов оставалось стабильным остаточных тромбоцитов к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. După primul minut, numărul de trombocite a rămas stabil, indicând o adaptare rapidă a trombocitelor reziduale la starea hiperosmolară extremă (>2000 mOsm).Concentrațiile de glucoză de 25% și peste au dus la o creștere semnificativă a volumului plachetar mediu (VPM), indicând un stadiu incipient al activării plachetare. Sunt necesare studii suplimentare pentru a determina dacă are loc liza sau activarea plachetară și dacă injecția hipertonică de glucoză, singură sau în combinație cu PRP, poate oferi beneficii clinice suplimentare.
În anii 1950, chirurgul american George Hackett a descoperit că poate ameliora permanent durerile articulare și de spate la mulți pacienți prin injectarea unei soluții proliferative în tendoane și ligamente. Experimentele sale pe iepuri au arătat că tratamentul, pe care l-a numit terapie proliferativă, a determinat mărirea și întărirea tendoanelor. Studiile histologice au confirmat că în timpul acestui proces se produce colagen nou [1].
În primele decenii, au fost încercate multe soluții diferite de distribuție. Până în anii 1990, majoritatea practicienilor considerau concentrațiile mari de glucoză ca fiind cea mai sigură și mai eficientă metodă. Cu toate acestea, mecanismul de acțiune rămâne neclar.
Puține studii clinice au fost efectuate în secolul al XX-lea după munca lui Hackett. Cu toate acestea, în anii 2000 a existat un interes reînnoit și au fost finalizate mai multe studii clinice de succes privind terapia proliferativă pentru tratamentul durerilor lombare [2], osteoartritei genunchiului [3] și epicondilitei laterale [4].
Regenerarea țesuturilor necesită participarea celulelor stem. Prin urmare, concentrațiile mari de glucoză trebuie să inducă cumva migrarea, replicarea și diferențierea celulelor stem. Ipotezăm că trombocitele pot acționa ca mesageri și că concentrațiile mari de glucoză pot determina trombocitele să elibereze citokine și factori de creștere, promovând astfel procesele regenerative, în special migrarea celulelor stem către zone cu concentrații mari de glucoză.
Activarea plachetară precede întotdeauna o creștere a calciului intracelular [5]. Liu și colab. au arătat în 2008 că nivelurile ridicate de glucoză cresc activitatea canalelor TRPC6 (tranzitoriu receptor potential canonic type 6) din membrana plasmatică, ceea ce duce la un influx de ioni de calciu în trombocite [6]. Un alt studiu a arătat că expunerea zonei marginale a microtubulilor la ionii de calciu provoacă relaxarea, expansiunea și deformarea zonei marginale, ceea ce, la rândul său, determină o schimbare a formei de la disc la sferică, rezultând un volum mediu plachetar (MPV) [7].
Ipoteza noastră în acest studiu este că expunerea trombocitelor la concentrații mari de glucoză afectează zona marginală a microtubulilor și mediul intracelular, ducând la o creștere a MPV.
Toți participanții au semnat un formular de consimțământ informat după ce detaliile studiului au fost explicate și înainte de a primi probele. În acest studiu, au fost utilizate doar probe PRP cu un hematocrit mai mare de 2%, astfel încât numărul de eritrocite (eritrocite) și volumul corpuscular mediu al globulelor roșii (MCV) să poată fi incluse pentru comparație.
Studiul a fost realizat în patru faze, prima fază a fost PRP, iar fazele rămase au fost sânge integral (Tabelul 1). Așa cum s-a descris anterior [8], toate forțele centrifuge relative (RCF, forța g) au fost calculate din punctul de mijloc (Rmid, în cm) al coloanei de sânge din seringa centrifugă. Am ales să folosim MPV ca marker al sensibilizării plachetare și numărul de trombocite ca indicator al potențialei lize plachetare, ambele putând fi ușor măsurate pe analizoare hematologice standard.
În prima fază, 47 de voluntari au donat probe de sânge - un tub cu acid etilendiaminotetraacetic (EDTA) și o probă de sânge integral PRP (anticoagulată cu citrat de sodiu (NaCl, 3%)) (Tabelul 1). Se plasează imediat comutatorul în tub. Hemoleucograma completă (CBC) a fost efectuată pe probele de EDTA în triplicat, iar probele de NaCl au fost analizate în triplicat pentru analiza CBC, iar apoi PRP a fost preparat prin diverse metode descrise mai sus [8]. Toate probele de PRP au fost preparate prin centrifugare la 900–1000 g. Se amestecă fiecare probă de PRP pe un mixer vortex timp de 5–10 secunde, apoi se împart cinci alicote de 0,5 ml în tuburi.
Pentru a evalua efectul expunerii la trombocite asupra concentrațiilor crescute de glucoză, cantități egale (0,5 ml) de glucoză 0%, 5%, 12,5%, 25% și 50% în apă au fost amestecate cu probe de trombocite pentru a obține concentrații de amestec de glucoză de 0%, 2,5%, 6,25%, 12,5% și 25%, iar tuburile s-au amestecat pe un agitator de eprubete timp de 15 minute. TAC-ul fiecărui amestec a fost analizat în triplicat după 15 minute. Numărul de trombocite (PLT), numărul de eritrocite, volumul mediu de sânge (MCV) și volumul mediu de sânge (MPV) au fost mediate pentru fiecare tub, iar numărul mediu de trombocite, numărul de eritrocite, MCV și MPV au fost calculate pentru toate probele de PRP.
După finalizarea primei faze de colectare a datelor, am observat o creștere semnificativă a volumului plachetar în trombocitele PRP după adăugarea de D50W. Trombocitele PRP nu reprezintă neapărat toate trombocitele din sânge, iar mediul PRP diferă de mediul WB. Prin urmare, am decis să efectuăm un al doilea studiu clinic de fază a efectului adăugării de D50W la sângele integral.
Pentru a doua rundă, am ales o dimensiune a eșantionului de 30 pe baza rezultatelor din prima serie, așa cum este descris în secțiunea Analiză. În această serie, 20 de voluntari au donat probe de sânge (Tabelul 1). Sânge integral (1,8 ml) a fost prelevat într-o seringă de 3 ml și anticoagulat cu 0,2 ml NaCl 40%. Seringa de sânge integral a fost amestecată timp de cinci secunde cu un mixer vortex, iar hemoleucocitul complet (CBC) a fost analizat în triplicat. După analiză, sângele anticoagulat a fost adăugat la 2 ml de glucoză 50% într-o seringă de 5 ml (concentrația finală de glucoză a fost de aproximativ 25% (D25) și plasat într-un tub agitator timp de 30 de minute. După 30 de minute, D25/CBC în seringi WB au fost analizate în triplicat. Numărul de trombocite, numărul de eritrocite, MCV și MPV per seringă au fost mediate, iar PLT (plachete trombotice), numărul de eritrocite, MCV și MPV (volumul mediu de sânge) medii au fost calculate pentru fiecare probă înainte și după adăugarea glucozei.
Deoarece trombocitele din sângele integral sunt expuse în mod obișnuit la glucoză hipertonică în timpul terapiei proliferative cu glucoză, datorită injecției minim invazive, și nu este obișnuit să se combine PRP cu glucoză hipertonică chiar înainte de injecție, am decis să studiem glucoza hipertonică în combinație cu WB în Secțiunea 1, Etapele trei și patru. În fiecare etapă, 20 de voluntari au donat 7-8 ml de ACD-A (acid care conține citrat trisodic (22,0 g/l), acid citric (8,0 g/l) și glucoză (24,5 g/l), soluție de citrat de dextroză) pentru anticoagulante sanguine (Tabelul 1). Doar amestecuri de glucoză mai mari de 12,5% au fost utilizate pentru a determina procentul prag asociat cu o creștere a MPV. În a treia etapă, 1 ml de sânge este plasat într-o eprubetă. Apoi, amestecați sângele pe un mixer vortex timp de 10 secunde adăugând 1 ml de glucoză 30%, glucoză 40% sau glucoză 50% în tub pentru a obține o concentrație finală de glucoză de 15%, 20% și respectiv 25%. Probele de sânge cu glucoză au fost analizate pentru hemoleucogramă completă imediat după amestecare și repetate la fiecare două minute timp de 30 de minute.
În timpul amestecării inițiale, adăugarea de glucoză hipertonică în proporție 1:1 și WB sau PRP expune trombocitele la concentrații de peste 25% timp de câteva secunde. În a patra etapă, pentru a evalua efectul glucozei hipertonice cu concentrații inițiale minime de vârf și pentru a testa limita superioară a efectului glucozei, am adăugat doar o cantitate mică de sânge la D25W sau D50W. S-a plasat 1 ml de D25W sau D50W într-un tub și s-a adăugat 0,2 ml de WB, amestecând proba timp de 10 secunde. În aceste cazuri, sângele a fost expus la glucoză la o concentrație cu aproximativ 20% peste concentrația finală, mai degrabă decât cu 50% peste concentrația finală, ca în Faza 3, rezultând concentrații finale de glucoză de 20,8% și 41,6%. Probele amestecate au fost analizate la același interval de timp ca în etapa 3.
În prima etapă a fiecărei serii de diluție a glucozei, au fost prelevate 30 de probe, deoarece aceasta a fost dimensiunea eșantionului adecvată pentru studiul pilot [9]. La sfârșitul fiecărei faze (inclusiv prima fază), evaluați adecvarea dimensiunii eșantionului utilizând formula utilizată pentru a determina dimensiunea eșantionului necesară pentru a estima media variabilei continue de rezultat într-o populație. Formula n = Z2 x SD2 /E2. În această ecuație, Z este scorul Z, SD este deviația standard, iar E este eroarea dorită [10]. Alfa noastră este 0,05, ceea ce corespunde unei valori Z de 1,96 și ne așteptăm la o eroare de 5 (în procente). Prin urmare, rezolvăm pentru n = (1,962 x SD2)/52. Rezultatele au arătat că dimensiunea eșantionului necesară pentru fiecare etapă a fost mai mică decât numărul real colectat.
În perioadele 1, 3 și 4, utilizând mai mult de o concentrație de glucoză, efectul diferitelor concentrații de glucoză a fost analizat prin compararea modificării fracționare între momentul 0 și fiecare moment ulterior (faza 1 la 15 minute, perioada 3 la 15 minute și patru la 15 secunde, apoi la fiecare două minute). Ratele de modificare pentru fiecare perioadă de timp au fost comparate utilizând testul U Mann-Whitney, deoarece datele nu au urmat o distribuție normală, așa cum a fost determinată de testul de normalitate Shapiro-Wilk. Deoarece în prima, a treia și a patra etapă a fost efectuată o analiză 1 la 1 a mai multor grupuri (cinci) (cinci în total), s-a efectuat o corecție Bonferroni pentru a ajusta valoarea alfa dorită la ≤0,01, dar nu ≤0,05.
Reducerea numărului de trombocite la toate concentrațiile de dextroză hipertonică și o creștere a MPV în trombocitele PRP la o concentrație de dextroză >12,5%: numărul de trombocite PRP a crescut de la una până la cinci ori concentrația față de concentrația inițială din sângele integral, variind în funcție de metodă (neprezentată). Reducerea numărului de trombocite la toate concentrațiile de dextroză hipertonică și o creștere a MPV în trombocitele PRP la o concentrație de dextroză >12,5%: numărul de trombocite PRP a crescut de la una până la cinci ori concentrația față de concentrația inițială din sângele integral, variind în funcție de metodă (neprezentată). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстроцитов при всех концентрациях гипертонической декстроцитов при всех концентрациях тромбоцитах PRP при концентрации декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличило 1-пь 5 сравнению с исходной цельной кровью, в зависимости от метода (не показано). Scăderea numărului de trombocite la toate concentrațiile hipertonice de dextroză și creșterea MPV în trombocitele PRP la o concentrație de dextroză >12,5%: numărul de trombocite PRP a crescut de 1-5 ori față de sângele integral inițial, în funcție de metodă (neprezentat). ).在> 12,5% 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，丰度度下 PRP 板度的高渗葡萄糖降低血小板计数，丰度的高渗增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法，因方法，氏方法（氏而浓度的1 La o concentrație de glucoză >12,5%, concentrația mare de glucoză reduce hemoleucograma, iar volumul sanguin maxim al PRP crește: comparativ cu utilizarea lactoză chinezească, hemoleucograma PRP crește de 1 până la 5 ori față de concentrație (nedescris). При концентрациях глюкозы >12,5% все концентрации гипертонической глюкозы снижтали ксолиции тромбоцитов, а MPV повышали в тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось оты нось от51-рах концентраций по сравнению с исходными концентрациями цельной крови, в зависимости отамето (nu este descris). La concentrații de glucoză >12,5%, toate concentrațiile de glucoză hipertensivă au scăzut numărul de trombocite și au crescut MPV-ul în trombocitele PRP: numărul de trombocite PRP a crescut de 1 până la 5 ori față de concentrațiile inițiale din sângele integral, în funcție de metodă (așa cum este descrisă).Figura 1 arată că numărul de trombocite a scăzut cu aproape 75% după diluarea în apă și cu 20-30% după 15 minute de diluare cu diferite concentrații de glucoză comparativ cu PRP inițial și o diluție 1:1 ajustată în funcție de volum (1-k1 cu corecție de volum). k-1 reproducere).1 reproducere).
Numărul de celule din fiecare diluție este exprimat ca o fracție din numărul inițial înainte de diluție.
MPV a scăzut minim în timpul producției de PRP, fără modificări ulterioare ale concentrațiilor de diluție la 12,5% în apă sau glucoză (inclusiv amestecuri de glucoză PRP 25%) și a crescut cu peste 20% după diluarea în soluție de glucoză 50% (Fig. 2). În schimb, eritrocitele nu au prezentat nicio modificare semnificativă a volumului la nicio diluție, alta decât H2O.
Volumul mediu de celule din fiecare diluție este exprimat ca procent din volumul inițial înainte de diluție.
O reducere similară, dar mai puțin pronunțată, a numărului de trombocite și o creștere a ratei de reactivitate a sângelui (RCV) au fost observate la pacienții cu cancer (BC) expuși la glucoză 50% (pentru a formula cu glucoză 25%). Tabelul 2 compară numărul și volumele celulare din sângele integral diluat în dextroză 50% cu datele PRP din faza 1 diluate în dextroză 50%. Modificările numărului de eritrocite și ale volumului mediu al eritrocitelor (RCV) nu au fost evidente și nu au reprezentat subiectul principal al atenției noastre.
SD = deviație standard, MD = diferența medie dintre grupuri, SE = deviația standard a diferenței medii, RBC = eritrocite, PLT = trombocite, PRP = plasmă bogată în trombocite, WB = sânge integral
După adăugarea de D50W la WB, pierderea procentuală de trombocite ajustată în funcție de diluție a fost de 7,7% (310±73 vs. 286±96) comparativ cu 17,8% pentru diluția PRP în D50W (664±348 vs. 544±277). MPV WB a crescut cu 16,8% (de la 10,1 ± 0,5 la 11,8 ± 0,6), în timp ce MPV PRP a crescut cu 26% (9,2 ± 0,8 vs. 11,6 ± 0,7). Deși diferențele medii atât în ​​reducerea numărului de trombocite, cât și în creșterea MPV au fost semnificativ mai mari în cazul PRP, modificările reducerii numărului de trombocite în cadrul grupului de sânge au fost aproape semnificative (310 ± 73 până la 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), iar creșterea MPV a fost semnificativă (10,1 ± 0,5 până la 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Deși diferențele medii atât în ​​reducerea numărului de trombocite, cât și în creșterea MPV au fost semnificativ mai mari în cazul PRP, modificările reducerii numărului de trombocite în cadrul grupului de sânge au fost aproape semnificative (310 ± 73 până la 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), iar creșterea MPV a fost semnificativă (10,1 ± 0,5 până la 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Deși diferențele medii atât în ​​reducerea numărului de trombocite, cât și în creșterea RCV au fost semnificativ mai mari în cazul tratamentului cu PRP, modificările scăderii numărului de trombocite în cadrul grupului de sânge au fost aproape semnificative (310 ± 73 până la 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).увеличение MPV было значительным (от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). creșterea MPV a fost semnificativă (de la 10,1 ± 0,5 la 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7%)；p = .06）和MPV的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < .001）。尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 但 但 但 冡揮 潆 冡 差异减少 的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%) ； p = .06）和MPV 的增昊1的增昊＄增昊＄增. ± 0,5 到 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Modificarea reducerii numărului de trombocite în cadrul celulelor sanguine (WB) a fost aproape semnificativă (de la 310 ± 73 la 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), deși PRP a prezentat diferențe medii semnificativ mai mari în scăderea numărului de trombocite și creșterea MPV, iar creșterea MPV a fost semnificativă.(от 10,1 ± 0,5 până la 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (de la 10,1 ± 0,5 la 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
O concentrație finală de glucoză de 20% a fost necesară pentru a observa o modificare semnificativă a MPV-ului, dar modificarea MPV-ului a fost mai pronunțată la concentrația finală de 25%. Pierderea trombocitelor s-a stabilizat după declinul inițial. Am observat o scădere inițială bruscă a CVR, însă CVR a fost restabilită rapid la concentrația finală de glucoză de 25%, care a fost semnificativ mai mare decât nivelurile CVR observate la concentrațiile finale de glucoză de 20% și 15% (Fig. 3 și în stânga Tabelului 3; casetele umbrite). indică valori p ≤ alfa cu o corecție Bonferroni de 0,01). De asemenea, a existat o scădere inițială bruscă a numărului de PLT, observată în faza inițială de 0-15 s, apoi a rămas stabilă (de la 15 s la 30 min; în stânga tabelului 4).
Adăugarea diferitelor concentrații de glucoză în sângele integral a dus la o scădere inițială rapidă a MPV, urmată de o recuperare dependentă de concentrație de peste 20%. Legenda prezintă concentrația de glucoză după diluție. D15, D20 și D25 au fost efectuate la o diluție 1:1. D21 și D41 au fost efectuate la o diluție 1:5.
Tabelul 4 prezintă modificarea numărului de trombocite atunci când este diluat în glucoză hipertonică. Am observat o relație dependentă de doză între scăderea imediată a numărului de PLT la diluția 1:1 și la diluția 1:5. Comparând diluțiile 1:1 ca un singur grup cu diluțiile 1:5, grupul 1:1 a prezentat o scădere imediată a numărului de trombocite mai mică decât grupul 1:5, 66±48.000 (23%) față de 99±69.000 (37%)., p = 0,014) în grupul 1:5. După o scădere inițială la primul punct de măsurare, numărul de trombocite ca procent din glucoză s-a stabilizat (Fig. 4).
Când sângele integral este adăugat la glucoză într-un raport de 1:1, numărul de trombocite este redus cu aproximativ 25%. Cu toate acestea, când sângele integral a fost adăugat într-un raport de 1:5, reducerea a fost mult mai mare - cu aproximativ 50%.
Glucoza 41% a crescut MPV-ul mai rapid și mai dramatic decât 25% sau 21%. Rezultatele MPV sunt prezentate în Figura 3. La toate celelalte diluții, nu s-a observat nicio scădere inițială imediată a MPV după adăugarea de glucoză 50%. Când s-a utilizat glucoză 25% (concentrație de glucoză 20,8% la diluția finală), modificarea MPV a fost comparabilă cu modificarea glucozei 20% la o diluție 1:1 (Fig. 3). Deși modificările MPV au fost inițial mai mari la concentrația mixtă de 41% decât la 25%, diferența de MPV între 41% și 25% după 16 minute nu a mai fost semnificativă (Tabelul 3, dreapta). De asemenea, este interesant faptul că glucoza 25% a crescut MPV mai eficient decât 20,8%.
Acest studiu in vitro a confirmat parțial ipoteza noastră. A demonstrat o potențială liză parțială a trombocitelor prin amestecul de dextroză, o acomodare rapidă a trombocitelor la hipertonicitate extremă și o creștere semnificativă a volumului maxim al trombocitelor ca răspuns la concentrații > 25% de dextroză hipertonică. A demonstrat o potențială liză parțială a trombocitelor prin amestecul de dextroză, o acomodare rapidă a trombocitelor la hipertonicitate extremă și o creștere semnificativă a volumului maxim al trombocitelor ca răspuns la concentrații > 25% de dextroză hipertonică. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю дакцитов тромбоцитов до экстремального гипертонуса и значительное повышение MPV в ответ на гипючерток концентрацию декстрозы > 25%. A demonstrat o potențială liză parțială a plachetelor cu dextroză, acomodare rapidă a plachetelor până la hipertonicitate extremă și o creștere semnificativă a MPV ca răspuns la niveluri hipertonice de dextroză >25%.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> 25% 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 在 适庯 枫 枫 枫枻响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями с глюкозой, бтацдрауюп тромбоцитов к экстремальному гипертонусу и значительное увеличение MPV в ответ на контрацение гипертонической глюкозы > 25%. Prezintă o potențială liză parțială a trombocitelor de către amestecurile de glucoză, adaptare rapidă a trombocitelor la hipertonicitate extremă și o creștere semnificativă a MPV ca răspuns la glucoza hipertonică >25%.Creșterea inițială a fost maximă la o expunere la glucoză de 41,6%, dar creșterea MPV-ului s-a apropiat de o expunere la glucoză de 25% la aproximativ 20 de minute după expunere.
Concentrația trombocitelor este afectată de glucoză. Am observat că cantitatea de PLT a scăzut la toate diluțiile de glucoză. O scădere bruscă a numărului de trombocite în diluțiile H2O (0%) din seria PRP poate fi asociată cu liza osmotică. Alternativ, acesta ar putea fi un artefact cauzat de aglomerarea trombocitelor, dar acest lucru contrastează cu lipsa modificării MPV la această diluție. Această constatare înseamnă că unele trombocite sunt foarte sensibile la hipoosmolaritate.
În toate diluțiile de glucoză 1:1, cantitatea de PLT a scăzut cu 20-30%, chiar și la D5W (hipotonic la 252 mOsm), ceea ce poate indica un efect non-osmotic specific al glucozei, deoarece atât PLT, cât și MPV au rămas neschimbate la o creștere de trei ori a concentrației de glucoză de la D5W la D25W. De fapt, concentrațiile de PLT au avut tendința de a crește ușor odată cu creșterea osmolarității.
Scăderea PLT între diluțiile 1:1 și 1:5 înseamnă că efectul de dizolvare depinde de concentrația inițială și finală de glucoză. Dacă ar depinde doar de concentrația inițială, atunci ne-am aștepta să vedem o diferență în reducerea PLT între concentrațiile 1:1. Dar nu o vedem. Dacă efectul de liză depinde doar de concentrația finală de glucoză, atunci nu ne așteptăm la o diferență prea mare între o diluție 1:1 de 20% și o diluție 1:5 de 20,8%. Și totuși am reușit.
Dacă are loc pierderea trombocitelor din cauza lizei plachetare, se formează un lizat parțial, după care citokinele și factorii de creștere sunt eliberați în mediul extracelular. Mai multe studii au arătat că lizatul plachetar este aproape la fel de eficient ca PRP ca o soluție de proliferare [11]. PRP în sine s-a dovedit a fi o soluție eficientă pentru tratamentul proliferării [12-14].
Trombocitele inactive circulă sub forma unui disc întărit cu mai multe structuri interne. În timpul activării, acestea capătă o formă mai sferică sau de amibă, rezultând o creștere a volumului. Creșterea volumului necesită o creștere a suprafeței, care este rezultatul extrudării sistemului tubular deschis (SCO) și al adăugării de granule exocitare la membrană. Rămâne de stabilit dacă creșterea MPV indusă de glucoza hipertonică implică unul sau ambele mecanisme, dar dacă este vorba de cel de-al doilea, atunci o creștere a MPV ar indica degranulare.
Acest studiu a arătat că expunerea la concentrații mari de glucoză pe PRP sau trombocite din sângele integral a dus la o creștere a MPV în decurs de 15 minute, cu o concentrație de glucoză de 25%, respectiv 41,6%.
Creșterea MPV-ului plachetar se poate datora dilatării înghesuielilor de microtubuli din jur, ca răspuns la influxul de calciu. Liu și colab. S-a demonstrat că glucoza mediază influxul de calciu prin canalul plachetar TRPC6 [6]. Ipoteza noastră este că glucoza induce relaxarea înghesuielilor de microtubuli, ducând la o creștere a MPV-ului și la sensibilizarea și/sau activarea plachetară. Cu toate acestea, judecând după rezultatele noastre, aceasta este doar o parte a poveștii. În testele noastre, nicio concentrație sub D25W nu a dus la o creștere a MPV-ului. Având în vedere că nu am testat expunerea la concentrații de glucoză între 12,5% și 25%, rezultatele noastre din faza 1 sugerează că ar putea exista un prag în acest interval de concentrații de glucoză care duce la o creștere a MPV-ului. Testele ulterioare în etapele 3 și 4 au arătat că glucoza de 20-25% pare a fi pragul pentru acest lucru, dar rămâne neclar de ce.
De asemenea, am observat o scădere de ~9% a MPV după centrifugare. Nu este clar dacă această scădere a MPV se datorează trombocitelor mai mari și mai dense prinse în stratul de eritrocite al centrifugei. Această observație poate fi importantă pentru medici, deoarece poate implica faptul că trombocitele PRP sunt un subset mai mic și mai puțin dens al trombocitelor din sângele blanc.
Într-un studiu anterior, am arătat că prepararea PRP prin metode manuale este ieftină [8]. Dacă glucoza sensibilizează trombocitele tisulare sau PRP, făcându-le mai susceptibile la activare, sau dacă PRP este produs cu proprietăți parțiale de lizat, acest lucru poate spori regenerarea și reduce nevoia de terapie. Prin urmare, combinația de PRP și glucoză cu concentrație ridicată poate fi mai rentabilă decât PRP sau glucoză în monoterapie.
Studiul nostru are mai multe deficiențe. În primul rând, folosim PRP obținut prin mai multe metode diferite. Acest lucru poate duce la rezultate contradictorii. În al doilea rând, nu am putut efectua o analiză biochimică a niciuneia dintre probele noastre pentru a determina mai precis dacă a avut loc activarea plachetară. Am dori să măsurăm P-selectina, factorul plachetar 4, agregatele plachetare monocitare sau alți markeri ai activării plachetare pentru a înțelege mai bine gradul sau prezența degranulării granulelor alfa, dar acest lucru depășește scopul acestui studiu. În al treilea rând, nu am putut confirma prin microscopie electronică sau alte metode că creșterea MPV în trombocitele expuse la glucoză s-a datorat efectului asupra încurcăturilor de microtubuli.
Amestecurile de WB sau PRP cu glucoză 25% au crescut MPV-ul, semnalând debutul activării plachetare, deși acest studiu nu a demonstrat progresia agregării sau degranulării. Amestecul hipertonic de glucoză a dus la pierderea trombocitelor, reprezentând posibil un efect litic. Activarea parțială sau liza trombocitelor poate provoca regenerarea țesuturilor după injectarea cu trombocite. Nu este clar la ce consecințe clinice pot duce aceste modificări. Studii ulterioare au demonstrat măsurători mai precise ale activării sau lizei și au evaluat diferitele efecte clinice ale amestecurilor hipertonice de glucoză cu WB sau PRP.
Terapia proliferativă cu glucoză este o terapie regenerativă simplă și ieftină, aflată în rapidă expansiune și care susține cercetarea clinică. Acest studiu sugerează un mecanism fiziologic care, dacă este confirmat, ne-ar putea ajuta să înțelegem o parte a mecanismului regenerativ al terapiei proliferative.
Informatică Biomedicală și a Sănătății la Universitatea din Missouri, Facultatea de Medicină din Kansas City, Kansas City, SUA
Subiecți umani: Toți participanții la acest studiu și-au dat sau nu consimțământul. Societatea Internațională pentru Medicină Celulară a emis aprobarea ICMS-2017-003. Următorul protocol a fost aprobat pentru utilizare ulterioară de către Comitetul de Etică Instituțională al Societății Internaționale pentru Medicină Celulară: Titlu: Calculul randamentului de medicament din plasma bogată în trombocite pe baza numărului inițial de trombocite din hemoleucograma completă. Subiecți animale: Toți autorii au confirmat că nu au fost implicați animale sau țesuturi în acest studiu. Conflicte de interese: În conformitate cu Formularul Uniform de Dezvăluire ICMJE, toți autorii declară următoarele: Informații privind plata/serviciile: Toți autorii declară că nu au primit sprijin financiar de la nicio organizație pentru lucrarea depusă. Relații financiare: Toți autorii declară că nu au în prezent sau în ultimii trei ani relații financiare cu nicio organizație care ar putea fi interesată de lucrarea depusă. Alte relații: Toți autorii declară că nu există alte relații sau activități care ar putea afecta lucrarea depusă.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K și colab. (17 mai 2022) Efectul glucozei asupra numărului și volumului trombocitelor: implicații pentru medicina regenerativă. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Copyright 2022 Harrison și colab. Acesta este un articol cu ​​acces liber, distribuit în conformitate cu termenii licenței Creative Commons Attribution CC-BY 4.0. Utilizarea, distribuirea și reproducerea nelimitate în orice mediu sunt permise, cu condiția ca autorul și sursa originală să fie menționate.