„Nu vă îndoiți niciodată că un grup mic de cetățeni atenți și dedicați poate schimba lumea.De fapt, este singurul de acolo.”
Misiunea lui Cureus este de a schimba modelul de lungă durată de publicare medicală, în care prezentarea cercetărilor poate fi costisitoare, complexă și consumatoare de timp.
Plasmă bogată în trombocite/prp, regenerare tisulară, activare trombocitară, terapie proliferativă de glucoză, trombocite, terapie proliferativă
Citează acest articol ca: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al.(17 mai 2022) Efectul glucozei asupra numărului și volumului trombocitelor: implicații pentru medicina regenerativă.Cure 14(5): e25081.doi:10.7759/cureus.25081
Plasma bogată în trombocite (PRP) și soluțiile de glucoză hipertonică sunt utilizate în mod obișnuit pentru injectare în medicina regenerativă, uneori împreună.Efectul glucozei hipertonice asupra lizei și activării trombocitelor nu a fost raportat anterior.Am testat efectul concentrațiilor crescute de glucoză asupra numărului de trombocite și eritrocite, precum și asupra volumelor de celule din PRP și din sângele integral (WB).O reducere parțială rapidă a numărului de trombocite a avut loc cu toate amestecurile de glucoză amestecate cu PRP sau sânge integral, în concordanță cu liza parțială. După primul minut, numărul de trombocite a rămas stabil, sugerând o adaptare rapidă a trombocitelor reziduale la hipertonicitate extremă (>2000 mOsm). După primul minut, numărul de trombocite a rămas stabil, sugerând o adaptare rapidă a trombocitelor reziduale la hipertonicitate extremă (>2000 mOsm). После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на зывает на ставалось стабильным очных тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. După primul minut, numărul de trombocite a rămas stabil, indicând o acomodare rapidă a trombocitelor reziduale la hipertonicitate extremă (>2000 mOsm).第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm 极明残板迅速适应极端（> 2000 m.2000 mOsm）高渗状态。 После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на зывает на ставалось стабильным чных тромбоцитов к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. După primul minut, numărul de trombocite a rămas stabil, indicând o adaptare rapidă a trombocitelor reziduale la starea hiperosmolară extremă (>2000 mOsm).Concentrațiile de glucoză de 25% și peste au dus la o creștere semnificativă a volumului mediu al trombocitelor (MPV), indicând un stadiu incipient al activării trombocitelor.Sunt necesare studii suplimentare pentru a determina dacă are loc liza sau activarea trombocitelor și dacă injecția hipertonică de glucoză singură sau în combinație cu PRP poate oferi beneficii clinice suplimentare.
În anii 1950, chirurgul american George Hackett a descoperit că poate ameliora definitiv durerile articulare și de spate la mulți pacienți prin injectarea unei soluții proliferative în tendoane și ligamente.Experimentele sale pe iepuri au arătat că tratamentul, pe care el l-a numit terapie proliferativă, a făcut ca tendoanele să se mărească și să se întărească.Studiile histologice au confirmat că în timpul acestui proces este produs nou colagen [1].
În primele decenii, s-au încercat multe soluții de distribuție diferite.Până în anii 1990, majoritatea practicienilor considerau concentrațiile mari de glucoză ca fiind cea mai sigură și eficientă metodă.Cu toate acestea, mecanismul de acțiune rămâne neclar.
Puține studii clinice au fost efectuate în secolul al XX-lea în urma lucrării lui Hackett.Cu toate acestea, în anii 2000 a existat un interes reînnoit și au fost finalizate mai multe studii clinice de succes de terapie proliferativă pentru tratamentul durerilor de spate [2], osteoartritei genunchiului [3] și epicondilitei laterale [4].
Regenerarea țesuturilor necesită participarea celulelor stem.Prin urmare, concentrațiile mari de glucoză trebuie să inducă cumva migrarea, replicarea și diferențierea celulelor stem.Emitem ipoteza că trombocitele pot acționa ca mesageri și că concentrațiile mari de glucoză pot determina trombocitele să elibereze citokine și factori de creștere, promovând astfel procesele de regenerare, în special migrarea celulelor stem în zonele cu concentrații mari de glucoză.
Activarea trombocitelor precede întotdeauna o creștere a calciului intracelular [5].Liu și colab.în 2008 a arătat că nivelurile ridicate de glucoză cresc activitatea canalelor de tip canonic de tip 6 (TRPC6) ale receptorului tranzitoriu din membrana plasmatică, ceea ce duce la un aflux de ioni de calciu în trombocite [6].Un alt studiu a arătat că expunerea zonei marginale a microtubulilor la ionii de calciu determină relaxarea, expansiunea și deformarea zonei marginale, care, la rândul său, provoacă o schimbare a formei de la disc la sferic, ducând la volumul mediu al trombocitelor (MPV) [7].
Ipoteza noastră din acest studiu este că expunerea trombocitelor la concentrații mari de glucoză afectează zona marginală a microtubulilor și mediul intracelular, conducând la o creștere a MPV.
Toți participanții au semnat un formular de consimțământ informat după ce au fost explicate detaliile studiului și înainte de a primi probe.În acest studiu, au fost utilizate numai probe de PRP cu un hematocrit mai mare de 2%, astfel încât numărul de eritrocite (eritrocite) și volumul corpuscular mediu al globulelor roșii (MCV) să poată fi incluse pentru comparație.
Studiul a fost realizat în patru faze, prima fază a fost PRP, iar fazele rămase au fost sânge integral (Tabelul 1).După cum s-a descris anterior [8], toate forțele centrifuge relative (RCF, forța g) au fost calculate din punctul de mijloc (Rmid, în cm) al coloanei de sânge din seringa centrifugă.Am ales să folosim MPV ca marker al sensibilizării trombocitelor și al numărului de trombocite ca indicator al potențialei lize ale trombocitelor, ambele putând fi măsurate cu ușurință pe analizoare hematologice standard.
În prima fază, 47 de voluntari au donat probe de sânge - un tub de acid etilendiaminotetraacetic (EDTA) și o probă de sânge integral PRP (anticoagulat cu citrat de sodiu (NaCl, 3%)) (Tabelul 1).Puneți balansoarul în tub imediat.Hemoleucograma completă (CBC) a fost efectuată pe probe de EDTA în trei exemplare, iar probele de NaCl au fost analizate în trei exemplare pentru analiza CBC, iar apoi PRP a fost preparat prin diferite metode descrise mai sus [8].Toate probele de PRP au fost preparate prin centrifugare la 900-1000 g.Se amestecă fiecare probă de PRP pe un mixer vortex timp de 5-10 secunde, apoi se împarte cinci alicote de 0,5 ml în tuburi.
Pentru a evalua efectul expunerii trombocitelor asupra concentrațiilor crescute de glucoză, cantități egale (0,5 ml) de glucoză 0%, 5%, 12,5%, 25% și 50% în apă au fost amestecate cu probe de trombocite pentru a obține 0%, 2,5% 6,25%, 12,5%, 12,5% și amestecul de 25 de minute pentru concentrația de eprubetă în eprubetă și amestecul de 25 de minute în eprubetă. .TAC-ul fiecărui amestec a fost analizat în trei exemplare după 15 min.Numărul de trombocite (PLT), numărul de RBC, MCV și MPV au fost calculate în medie pentru fiecare tub și au fost calculate numărul mediu de trombocite, numărul de eritrocite, MCV și MPV pentru toate probele PRP.
După ce prima fază de colectare a datelor a fost finalizată, am observat o creștere semnificativă a volumului trombocitelor în trombocitele PRP după adăugarea de D50W.Trombocitele PRP nu reprezintă neapărat toate trombocitele din sânge, iar mediul PRP diferă de mediul WB.Prin urmare, am decis să efectuăm o a doua fază de încercare a efectului adăugării D50W în sângele integral.
Pentru a doua rundă, am ales o dimensiune a eșantionului de 30 pe baza rezultatelor din prima serie, așa cum este descris în secțiunea Analiză.În această serie, 20 de voluntari au donat probe de sânge (Tabelul 1).Sânge integral (1,8 ml) a fost extras într-o seringă de 3 ml și anticoagulat cu 0,2 ml NaCl 40%.Seringa cu sânge întreg a fost amestecată timp de cinci secunde cu un mixer vortex și CBC a fost analizat în trei exemplare.După analiză, sângele anticoagulat a fost adăugat la 2 ml de glucoză 50% într-o seringă de 5 ml (concentrația finală de glucoză a fost de aproximativ 25% (D25) și plasat într-un tub agitat timp de 30 de minute. După 30 de minute, D25/CBC în seringi WB au fost analizate în trei exemplare. count, MCV și MPV au fost calculate pentru fiecare probă înainte și după adăugarea glucozei.
Deoarece trombocitele din sângele integral sunt expuse în mod obișnuit la glucoza hipertonă în timpul terapiei cu glucoză proliferativă din cauza injecției minim invazive și nu este obișnuit să se combine PRP cu glucoză hipertonă chiar înainte de injectare, am decis să studiem glucoza hipertonă în combinație cu WB în Secțiunea 1. Pasul trei și patru.La fiecare etapă, 20 de voluntari au donat 7-8 ml de ACD-A (acid care conține citrat trisodic (22,0 g/l), acid citric (8,0 g/l) și glucoză (24,5 g/l), soluție de citrat de dextroză) pentru anticoagulante sanguine (Tabelul 1).Numai amestecuri de glucoză mai mari de 12,5% au fost utilizate pentru a determina procentul de prag asociat cu o creștere a MPV.În a treia etapă, 1 ml de sânge este plasat într-o eprubetă.Apoi amestecați sângele pe un mixer vortex timp de 10 secunde adăugând 1 ml de glucoză 30%, glucoză 40% sau glucoză 50% în tub pentru a obține o concentrație finală de glucoză de 15%, 20% și, respectiv, 25%.Probele de sânge de glucoză au fost analizate pentru CBC imediat după amestecare și au fost repetate la fiecare două minute timp de 30 de minute.
În timpul amestecării inițiale, adăugarea de glucoză hipertonică 1:1 și WB sau PRP expune trombocitele la concentrații de peste 25% timp de câteva secunde.În al patrulea pas, pentru a evalua efectul glucozei hipertonice cu concentrații minime de vârf inițiale și a testa limita superioară a efectului glucozei, am adăugat doar o cantitate mică de sânge la D25W sau D50W.Puneți 1 ml de D25W sau D50W într-un tub și adăugați 0,2 ml de WB în timp ce agitați proba timp de 10 secunde.În aceste cazuri, sângele a fost expus la glucoză la o concentrație cu aproximativ 20% peste concentrația finală, mai degrabă decât cu 50% peste concentrația finală ca în faza 3, rezultând concentrații finale de glucoză de 20,8% și 41,6%.Probele mixte au fost analizate la același interval de timp ca la pasul 3.
În prima etapă a fiecărei serii de diluare a glucozei, au fost prelevate 30 de probe, deoarece aceasta a fost dimensiunea eșantionului adecvată pentru studiul pilot [9].La sfârșitul fiecărei faze (inclusiv prima fază), se evaluează caracterul adecvat al dimensiunii eșantionului utilizând formula utilizată pentru a determina dimensiunea eșantionului necesară pentru estimarea mediei variabilei de rezultat continuu într-o populație.Formula n = Z2 x SD2 /E2.În această ecuație, Z este scorul Z, SD este abaterea standard și E este eroarea dorită [10].Alfa noastră este 0,05, ceea ce corespunde unei valori Z de 1,96 și ne așteptăm la o eroare de 5 (în procente).Prin urmare, rezolvăm pentru n = (1,962 x SD2)/52.Rezultatele au arătat că dimensiunea eșantionului necesară pentru fiecare etapă a fost mai mică decât numărul real colectat.
În perioadele 1, 3 și 4 folosind mai mult de o concentrație de glucoză, efectul diferitelor concentrații de glucoză a fost analizat prin compararea variației fracționale între timpul 0 și fiecare timp ulterior (faza 1 la 15 minute, perioada 3 la 15 minute).și patru la 15 secunde, apoi la fiecare două minute.) Ratele de schimbare pentru fiecare perioadă de timp au fost comparate utilizând testul U Mann-Whitney deoarece datele nu au urmat o distribuție normală determinată de testul de normalitate Shapiro-Wilk.Deoarece a fost efectuată o analiză 1-la-1 a mai multor grupuri (cinci) în primul, al treilea și al patrulea pas (cinci în total), a fost efectuată o corecție Bonferroni pentru a ajusta valoarea alfa dorită la ≤0,01, dar nu ≤0,05.
Reducerea numărului de trombocite cu toate concentrațiile de dextroză hipertonică și o creștere a MPV în trombocitele PRP la >12,5% concentrație de dextroză: numărul de trombocite PRP a crescut de la una până la cinci ori concentrația comparativ cu sângele total inițial, variind în funcție de metodă (nu este reprezentată). Reducerea numărului de trombocite cu toate concentrațiile de dextroză hipertonică și o creștere a MPV în trombocitele PRP la > 12,5% concentrație de dextroză: numărul de trombocite PRP a crescut de la una la cinci ori concentrația comparativ cu sângele total inițial, variind în funcție de metodă (nu este prezentată). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстроцитов при всех концентрациях гипертонической декстроцитов при всех концентрациях цитах PRP при концентрации декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось в соличество тромбоцитов PRP увеличилось в соличество тромбоцитов PRP увеличилось в со ни пе 1-5 ой цельной кровью, в зависимости от метода (не показано). Scăderea numărului de trombocite la toate concentrațiile hipertonice de dextroză și creșterea MPV în trombocitele PRP la >12,5% concentrație de dextroză: numărul de trombocite PRP a crescut de 1-5 ori comparativ cu sângele total inițial, în funcție de metodă (nu este prezentată). ).在> 12,5% 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，中度度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，中度度帋小 PRP 掝 VMP：线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法而异（未揉述述 La >12,5% concentrație de glucoză, concentrația mare de glucoză reduce numărul de sânge, PRP sânge MPV crește: în comparație cu 与基线全血, hemograma PRP crește de la 1 la 5 ori mai mare decât concentrația (nu este descrisă). При концентрациях глюкозы >12,5% все концентрации гипертонической глюкозы снижтали снижтали всентрации MPV повышали в тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от 1- до 5-кратнац пистрнац повышали PRP ю с исходными концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (не описано ). La concentrații de glucoză > 12,5%, toate concentrațiile de glucoză hipertensive au scăzut numărul de trombocite și au crescut MPV în trombocitele PRP: numărul de trombocite PRP a crescut de 1 până la 5 ori în comparație cu concentrațiile inițiale din sânge integral, în funcție de metodă (așa cum este descrisă).Figura 1 arată că numărul de trombocite a scăzut cu aproape 75% după diluare în apă și cu 20-30% după 15 minute de diluare cu diferite concentrații de glucoză față de PRP de bază și o diluție 1:1 ajustată pentru volum (1- k1 cu corecție de volum).k -1 reproducere).1 reproducere).
Numărul de celule din fiecare diluție este exprimat ca o fracțiune din numărul inițial înainte de diluare.
MPV a scăzut minim în timpul producției de PRP, fără alte modificări ale concentrațiilor de diluție la 12,5% în apă sau glucoză (inclusiv amestecuri de glucoză PRP 25%) și a crescut cu mai mult de 20% după diluare în soluție de glucoză 50% (Fig. .2).).În schimb, eritrocitele nu au prezentat nicio modificare semnificativă a volumului la nicio diluție, alta decât H2O.
Volumul mediu de celule din fiecare diluție este exprimat ca procent din volumul inițial înainte de diluare.
O reducere similară, dar mai puțin pronunțată, a numărului de trombocite și creșterea CVR au fost observate în BC expus la 50% glucoză (pentru a formula cu 25% glucoză).Tabelul 2 compară numărul de celule și volumele de celule din sângele integral diluat în dextroză 50% cu datele PRP de fază 1 diluate în dextroză 50%.Modificările numărului de RBC și RBC MCV nu au fost evidente și nu au fost în centrul atenției noastre.
SD = abaterea standard, MD = diferența medie între grupuri, SE = abaterea standard a diferenței medii, RBC = eritrocite, PLT = trombocite, PRP = plasmă bogată în trombocite, WB = sânge integral
După adăugarea D50W la WB, procentul de pierdere de trombocite ajustat în funcție de diluție a fost de 7,7% (310±73 față de 286±96) comparativ cu 17,8% pentru diluția PRP în D50W (664±348 față de 544±277).MPV WB a crescut cu 16,8% (de la 10,1 ± 0,5 la 11,8 ± 0,6), în timp ce MPV PRP a crescut cu 26% (9,2 ± 0,8 vs. 11,6 ± 0,7). Deși diferențele medii atât în ​​reducerea numărului de trombocite, cât și în creșterea MPV au fost semnificativ mai mari cu PRP, modificările reducerii numărului de trombocite în WB au fost aproape semnificative (310 ± 73 până la 286 ± 96 (-7,7%); P = .06) și creșterea MPV a fost semnificativă (10,1 ± 0,5 până la 11,8 ± 0,6 (+16.8) p <.001). Deși diferențele medii atât în ​​reducerea numărului de trombocite, cât și în creșterea MPV au fost semnificativ mai mari cu PRP, modificările reducerii numărului de trombocite în WB au fost aproape semnificative (310 ± 73 până la 286 ± 96 (-7,7%); P = .06) și creșterea MPV a fost semnificativă (10,1 ± 0,5 până la 11,8 ± 0,6 (+16.8) p <.001).Deși diferențele medii atât în ​​ceea ce privește reducerea numărului de trombocite, cât și creșterea CVR au fost semnificativ mai mari cu PRP, modificările scăderii numărului de trombocite în WB au fost aproape semnificative (310 ± 73 până la 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).увеличение MPV было значительным (от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). creșterea MPV a fost semnificativă (de la 10,1 ± 0,5 la 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB 内血尡氏的平均差异显着更大，但WB几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7%)；p = .06）和MPV 的增加是显着的（10.1 ± 10..1 ±8 .. ± 6 .... ± .06）和MPV 001).尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 和 和 增加 平均 差异的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%) ； p = .06）和MPV 的增加是1 增加是昚.（1 的增加是显. ± 0,6 (+16,8) p < .001）。Modificarea reducerii numărului de trombocite în WB a fost aproape semnificativă (de la 310 ± 73 la 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), deși PRP a avut diferențe medii semnificativ mai mari în scăderea numărului de trombocite și creșterea MPV.iar creșterea MPV a fost semnificativă.(от 10,1 ± 0,5 până la 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (de la 10,1 ± 0,5 la 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
O concentrație finală de 20% glucoză a fost necesară pentru a vedea o schimbare semnificativă a MPV, dar modificarea MPV a fost mai pronunțată la concentrația finală de 25%.Pierderea trombocitelor s-a stabilizat după declinul inițial.Am observat o scădere bruscă inițială a CVR, cu toate acestea, CVR a fost restabilită rapid la concentrația finală de glucoză de 25%, care a fost semnificativ mai mare decât nivelurile CVR observate la concentrațiile finale de glucoză de 20% și 15% (Fig. 3 și în stânga tabelului 3; casete umbrite).indicați valorile p ≤ alfa cu o corecție Bonferroni de 0,01).A existat, de asemenea, o scădere bruscă inițială a numărului de PLT, observată în faza inițială de 0-15 s, iar apoi a rămas stabilă (de la 15 s la 30 min; stânga tabelului 4).
Adăugarea de diferite concentrații de glucoză în sângele integral a dus la o scădere rapidă inițială a MPV, urmată de o recuperare dependentă de concentrație de peste 20%.Legenda arată concentrația de glucoză după diluare.D15, D20 și D25 au fost efectuate într-o diluție 1:1.D21 și D41 au fost efectuate la o diluție de 1:5.
Tabelul 4 arată modificarea numărului de trombocite atunci când este diluat în glucoză hipertonică.Am observat o relație dependentă de doză între scăderea imediată a numerelor PLT la diluția 1:1 și la diluția 1:5.Comparând diluțiile 1:1 ca un singur grup cu diluțiile 1:5, grupul 1:1 a avut o scădere imediată a numărului de trombocite mai puțin decât grupul 1:5 66±48.000 (23%) față de 99±69.000 (37%)., p = 0,014) în grupul 1:5.După o scădere inițială la primul punct de măsurare, numărul de trombocite ca procent de glucoză s-a stabilizat (Fig. 4).
Când sângele integral este adăugat la glucoză într-un raport de 1:1, numărul de trombocite este redus cu aproximativ 25%.Cu toate acestea, atunci când a fost adăugat sânge integral într-un raport de 1:5, reducerea a fost mult mai mare - aproximativ 50%.
41% glucoză a crescut MPV mai rapid și mai dramatic decât 25% sau 21%.Rezultatele MPV sunt prezentate în Figura 3. La toate celelalte diluții, nu a fost observată nicio scădere inițială imediată a MPV după adăugarea a 50% glucoză.Când se utilizează glucoză 25% (concentrația de glucoză 20,8% la diluția finală), modificarea MPV a fost comparabilă cu modificarea glucozei 20% la o diluție 1:1 (Fig. 3).Deși modificările MPV au fost inițial mai mari la concentrația mixtă de 41% decât la 25%, diferența de MPV între 41% și 25% după 16 minute nu a mai fost semnificativă (Tabelul 3, dreapta).De asemenea, este interesant faptul că 25% glucoză a crescut MPV mai eficient decât 20,8%.
Acest studiu in vitro a confirmat parțial ipoteza noastră. Ea a arătat o potențială liză parțială a trombocitelor prin amestec de dextroză, o adaptare rapidă a trombocitelor la hipertonicitate extremă și o creștere semnificativă a MPV ca răspuns la concentrații > 25% de dextroză hipertonică. Ea a arătat o potențială liză parțială a trombocitelor prin amestec de dextroză, o adaptare rapidă a trombocitelor la hipertonicitate extremă și o creștere semnificativă a MPV ca răspuns la concentrații > 25% de dextroză hipertonică. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструцодатрцодобоцитов примесью декстрозы в до экстремального гипертонуса и значительное повышение MPV в ответ на гипертоничеструц ничестелц нкоструц 2 5%. Ea a arătat o potențială liză parțială a trombocitelor cu dextroză, acomodare rapidă a trombocitelor la hipertonicitate extremă și o creștere semnificativă a MPV ca răspuns la nivelurile hipertonice de dextroză >25%.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应枫潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应枫速适应枫渫应极渫应极攥25>应极% 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适庯 在 适庯 垫 枫 枫滓应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Он показывает потенциальный часzitate пертон deose и значительное уеличение mpv в ответ на концентрацию гипертонической гюкозы> 25%. Prezintă o potențială liză parțială a trombocitelor prin amestecuri de glucoză, adaptare rapidă a trombocitelor la hipertonicitate extremă și o creștere semnificativă a MPV ca răspuns la glucoza hipertonică >25%.Creșterea inițială a fost maximă la expunerea la glucoză de 41,6%, dar creșterea MPV s-a apropiat de expunerea la glucoză de 25% la aproximativ 20 de minute după expunere.
Concentrația de trombocite este afectată de glucoză.Am observat că cantitatea de PLT a scăzut la toate diluțiile de glucoză.O scădere bruscă a numărului de trombocite în diluțiile H2O (0%) din seria PRP poate fi asociată cu liza osmotică.Alternativ, acesta ar putea fi un artefact cauzat de aglomerarea trombocitelor, dar acest lucru este în contrast cu lipsa modificării MPV la această diluție.Această constatare înseamnă că unele trombocite sunt foarte sensibile la hipoosmolaritate.
În toate diluțiile 1:1 de glucoză, cantitatea de PLT a scăzut cu 20-30%, chiar și cu D5W (hipotonic la 252 mOsm), ceea ce poate indica un efect specific non-osmotic al glucozei, deoarece atât PLT, cât și MPV au rămas neschimbate la o creștere de trei ori a concentrației.glucoză.de la D5W la D25W.De fapt, concentrațiile PLT au avut tendința de a crește ușor odată cu creșterea osmolarității.
Scăderea PLT între diluțiile 1:1 și 1:5 înseamnă că efectul de dizolvare depinde de concentrația inițială și finală de glucoză.Dacă ar depinde doar de concentrația inițială, atunci s-ar aștepta să se vadă o diferență în reducerea PLT între concentrațiile 1:1.Dar noi nu.Dacă efectul de liză depinde doar de concentrația finală de glucoză, atunci nu ne așteptăm la o mare diferență între o diluție de 20% 1:1 și o diluție de 20,8% 1:5.Și totuși am făcut-o.
Dacă pierderea trombocitelor are loc din cauza lizei trombocitelor, se formează un lizat parțial, după care citokinele și factorii de creștere sunt eliberați în mediul extracelular.Mai multe studii au arătat că lizatul de trombocite este aproape la fel de eficient ca PRP ca o soluție de proliferare [11].PRP în sine s-a dovedit a fi o soluție eficientă pentru tratamentul proliferării [12-14].
Trombocitele inactive circulă sub forma unui disc întărit cu mai multe structuri interne.În timpul activării, acestea capătă o formă mai sferică sau de amibă, rezultând o creștere a volumului.Creșterea volumului necesită o creștere a suprafeței, care este rezultatul extrudării sistemului tubular deschis (OCS) și adăugării de granule exocitare la membrană.Rămâne de stabilit dacă creșterea MPV indusă de glucoza hipertonă implică unul sau ambele dintre aceste mecanisme, dar dacă acestea din urmă, atunci o creștere a MPV ar indica degranulare.
Acest studiu a arătat că expunerea la concentrații mari de glucoză pe PRP sau trombocitele din sânge integral a dus la o creștere a MPV în decurs de 15 minute, cu o concentrație de glucoză de 25%, respectiv 41,6%.
Creșterea MPV trombocitară se poate datora dilatării încurcăturilor microtubulilor din jur ca răspuns la afluxul de calciu.Liu și colab.S-a demonstrat că glucoza mediază influxul de calciu prin canalul trombocitar TRPC6 [6].Ipoteza noastră este că glucoza induce relaxarea încurcăturilor microtubulilor, ceea ce duce la o creștere a sensibilizării și/sau activării trombocitelor și MPV.Cu toate acestea, judecând după rezultatele noastre, aceasta este doar o parte a poveștii.În testele noastre, nicio concentrație sub D25W nu a dus la o creștere a MPV.Având în vedere că nu am testat expunerea la concentrații de glucoză între 12,5% și 25%, rezultatele noastre de fază 1 sugerează că poate exista un prag în acest interval de concentrații de glucoză care duce la o creștere a MPV.Testele ulterioare din etapele 3 și 4 au arătat că 20-25% glucoză pare să fie pragul pentru acest lucru, dar rămâne neclar de ce.
De asemenea, am observat o scădere de ~9% a MPV după centrifugare.Nu este clar dacă această scădere a MPV se datorează trombocitelor mai mari și mai dense prinse în stratul RBC al centrifugei.Această observație poate fi importantă pentru clinicieni, deoarece poate implica că trombocitele PRP sunt un subset mai mic și mai puțin dens de trombocite WB.
Într-un studiu anterior, am arătat că prepararea PRP prin metode manuale este ieftină [8].Dacă glucoza sensibilizează trombocitele tisulare sau PRP, făcându-le mai susceptibile la activare, sau dacă PRP este produs cu proprietăți de lizat parțial, acest lucru poate îmbunătăți regenerarea și poate reduce nevoia de terapie.Prin urmare, combinația de PRP și glucoză foarte concentrată poate fi mai rentabilă decât PRP sau glucoza singură.
Studiul nostru are mai multe deficiențe.În primul rând, folosim PRP obținut din mai multe metode diferite.Acest lucru poate duce la rezultate contradictorii.În al doilea rând, nu am putut efectua o analiză biochimică a vreunuia dintre probele noastre pentru a determina mai precis dacă a avut loc activarea trombocitelor.Am dori să măsurăm P-selectina, factorul plachetar 4, agregatele trombocite monocitare sau alți markeri ai activării trombocitelor pentru a înțelege mai bine gradul sau prezența degranulării granulelor alfa, dar acest lucru depășește scopul acestui studiu.În al treilea rând, nu am putut confirma prin microscopie electronică sau alte metode că creșterea MPV în trombocitele expuse la glucoză se datorează efectului asupra încurcăturilor de microtubuli.
Amestecuri de WB sau PRP cu glucoză 25% au crescut MPV, semnalând debutul activării trombocitelor, deși acest studiu nu a demonstrat progresia agregării sau degranulării.Amestecul de glucoză hipertonică a dus la pierderea trombocitelor, reprezentând posibil un efect litic.Activarea parțială sau liza trombocitelor poate determina regenerarea țesuturilor după injectarea trombocitelor.Nu este clar la ce consecințe clinice pot duce aceste modificări.Studiile ulterioare au demonstrat măsurători mai precise ale activării sau lizei și au evaluat diferitele efecte clinice ale amestecurilor de glucoză hipertonică cu WB sau PRP.
Terapia proliferativă cu glucoză este o terapie regenerativă simplă și ieftină, care se extinde rapid și susține cercetarea clinică.Acest studiu sugerează un mecanism fiziologic care, dacă este confirmat, ne-ar putea ajuta să înțelegem o parte a mecanismului regenerativ al terapiei proliferative.
Informatică biomedicală și medicală de la Universitatea din Missouri, Școala de Medicină din Kansas City, Kansas City, SUA
Subiecți umani: Toți participanții la acest studiu și-au dat sau nu consimțământul.Societatea Internațională pentru Medicină Celulară a emis aprobarea ICMS-2017-003.Următorul protocol a fost aprobat pentru utilizare ulterioară de către Institutional Review Board al Societății Internaționale de Medicină Celulară: Titlu: Calculul randamentului de medicamente plasmatice bogate în trombocite pe baza numărului de trombocite CBC inițial.Subiecți animale: Toți autorii au confirmat că nu au fost implicate animale sau țesuturi în acest studiu.Conflicte de interese: În conformitate cu Formularul uniform de divulgare ICMJE, toți autorii declară următoarele: Informații de plată/serviciu: Toți autorii declară că nu au primit sprijin financiar de la nicio organizație pentru lucrarea trimisă.Relații financiare: Toți autorii declară că nu au în prezent sau în ultimii trei ani relații financiare cu vreo organizație care ar putea fi interesată de lucrarea depusă.Alte relații: Toți autorii declară că nu există alte relații sau activități care ar putea afecta lucrarea trimisă.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K și colab.(17 mai 2022) Efectul glucozei asupra numărului și volumului trombocitelor: implicații pentru medicina regenerativă.Cure 14(5): e25081.doi:10.7759/cureus.25081
© Copyright 2022 Harrison et al.Acesta este un articol cu ​​acces deschis distribuit în conformitate cu termenii licenței Creative Commons Attribution License CC-BY 4.0.Utilizarea, distribuirea și reproducerea nelimitate pe orice mediu sunt permise, cu condiția să fie creditate autorul și sursa originală.