Vă mulțumim că vizitați Nature.com.Versiunea de browser pe care o utilizați are suport limitat pentru CSS. Pentru cea mai bună experiență, vă recomandăm să utilizați un browser actualizat (sau să dezactivați modul de compatibilitate în Internet Explorer). Între timp, pentru a asigura suport continuu, vom afișa site-ul fără stiluri și JavaScript.
Particulele poroase de silice au fost preparate printr-o metodă sol-gel cu unele modificări pentru a obține particule macroporoase. Aceste particule au fost derivatizate prin polimerizare prin transfer reversibil de fragmentare în lanț (RAFT) cu N-fenilmaleimidă-metilvinilizocianat (PMI) și stiren pentru a prepara intercalarea N-fenilmaleimidă a coloanei staționare din oțel inoxidabil. mm id) au fost împachetate prin slurry ambaling. Separarea pe coloană PMP evaluată a unui amestec de peptide format din cinci peptide (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucină encefalină) condiții cromatografice optime de digestie și digestie cromatografică umană, digestie optimă a albumului și digestie HA). Numărul de plăci oretice a amestecului de peptide este de până la 280.000 plăci/m². Comparând performanța de separare a coloanei dezvoltate cu coloana comercială Ascentis Express RP-Amide, s-a observat că performanța de separare a coloanei PMP a fost superioară coloanei comerciale în ceea ce privește eficiența separării și rezoluția.
În ultimii ani, industria biofarmaceutică a devenit o piață globală în expansiune, cu o creștere substanțială a cotei de piață. Odată cu creșterea explozivă a industriei biofarmaceutice1,2,3, analiza peptidelor și proteinelor este foarte dorită. În plus față de peptida țintă, mai multe impurități sunt generate în timpul sintezei peptidelor, necesitând astfel purificarea cromatografică a peptidelor și analiza corpului fluidelor pentru a obține puritatea peptidelor și a țesuturilor corporale dorite. este o sarcină extrem de dificilă din cauza numărului mare de specii potențial detectabile într-o singură probă. Deși spectrometria de masă este un instrument eficient pentru secvențierea peptidelor și proteinelor, dacă astfel de probe sunt injectate în spectrometrul de masă într-o singură trecere, separarea nu va fi ideală. Această problemă poate fi atenuată prin implementarea cromatografiei lichide (LC), separările care se vor inspecta înainte de analizarea MS, care va reduce numărul de analize de masă la momentul analizei MS. 5,6.În plus, în timpul separării fazei lichide, analiții pot fi concentrați în regiuni înguste, concentrând astfel acești analiți și îmbunătățind sensibilitatea de detecție a MS. Cromatografia lichidă (LC) a avansat semnificativ în ultimul deceniu și a devenit o tehnică populară în analiza proteomică7,8,9,10.
Cromatografia lichidă în fază inversă (RP-LC) este utilizată pe scară largă pentru purificarea și separarea amestecurilor de peptide folosind silice modificată cu octadecil (ODS) ca fază staționară. cromatografia în mod mixt, care asigură interacțiuni multimodale, poate fi o alternativă la RP-LC pentru separarea peptidelor, proteinelor și a altor amestecuri complexe. Au fost pregătite mai multe faze staționare în mod mixt, iar coloanele, peptide și separări au fost folosite, împachetate, peptide, peptide, 291, 291, coloane. 21. Fazele staționare în mod mixt (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, intercalare polară/RPLC) sunt potrivite pentru separările de peptide și proteine ​​datorită prezenței atât a grupurilor polare, cât și a celor nepolare22,23,24,25,26,27,28. În mod similar, fazele polare de intercalare și separarea polară staționară cu grupări polare covalente prezintă o separare polară bună și covalentă polară. r analiți, deoarece separarea depinde de interacțiunea dintre analit și faza staționară.Interacțiuni multimodale 29, 30, 31, 32. Recent, Zhang și colab.30 a preparat o fază staționară de poliamină terminată cu dodecil și a separat cu succes hidrocarburi, antidepresive, flavonoide, nucleozide, estrogeni și alți câțiva analiți. Intercalatorul polar are atât grupări polare, cât și nepolare, astfel încât poate fi utilizat pentru a separa peptidele și proteinele care au atât peptide hidrofobe, cât și coloană hidrofilă încorporată în poliamidă. 8 coloane) sunt disponibile comercial sub denumirea comercială de coloane Ascentis Express RP-Amide, dar aceste coloane sunt utilizate numai pentru analiza aminei 33.
În studiul actual, o fază staționară înglobat polar (polistiren încorporat în N-fenilmaleimidă) a fost preparată și evaluată pentru separarea peptidelor și digerații cu tripsină de HSA. Faza staționară a fost preparată folosind următoarea strategie. Particulele de silice poroasă au fost preparate conform procedurii prezentate în publicația noastră anterioară, cu unele modificări la protocolul de preparare a acidului glicenic, polietil, TMOSG, apă, apă. a fost ajustat pentru a prepara particule de silice cu pori mari. În al doilea rând, un nou ligand, fenilmaleimidă-metil vinil izocianat, a fost sintetizat și utilizat pentru a derivatiza particulele de silice pentru a prepara o fază staționară polară încorporată. d în cadrul coloanei. Evaluați separarea coloanei împachetate a amestecurilor de peptide constând din cinci peptide;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) și Tripsină digerată a albuminei serice umane (HAS). - Coloana cu amidă. S-a observat că atât peptidele, cât și proteinele sunt bine rezolvate și eficiente pe coloana PMP, care a fost mai eficientă decât coloana Ascentis Express RP-Amide.
PEG (polietilen glicol), uree, acid acetic, trimetoxi ortosilicat (TMOS), trimetil clorosilan (TMCS), tripsină, albumină serică umană (HSA), clorură de amoniu, uree, hexan metildisilazan (HMDS), clorură de metacriloil (MC), peroxid de metacriloil (MC), peroxid de polietilenă (MC), peroxid de polietilen (HPS), peroxid de polietilenă Acetonitril de calitate (ACN), metanol, 2-propanol și acetonă achiziționate de la Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, SUA).
Un amestec de uree (8 g), polietilen glicol (8 g) și 8 ml de acid acetic 0,01 N a fost agitat timp de 10 minute, apoi s-au adăugat la acesta 24 ml de TMOS în condiții de gheață. Amestecul de reacție a fost încălzit la 40°C timp de 6 ore și apoi la 120°C, iar materialul rezidual a fost turnat în autoclav pentru oțel inoxidabil. s-a macinat la 70°C timp de 12 ore. Masa moale uscată a fost măcinată neted într-un cuptor și calcinată la 550°C timp de 12 ore. Au fost preparate și caracterizate trei loturi pentru a examina reproductibilitatea în dimensiunea particulelor, dimensiunea porilor și suprafața.
Prin modificarea suprafeței particulelor de silice cu ligand pre-sintetizat fenilmaleimidă-metilvinilizocianat (PCMP) urmată de polimerizare radială cu stiren, s-a preparat un compus care conține gruparea polară.Faza staționară pentru agregate și lanțuri de polistiren. Procesul de preparare este descris mai jos.
N-fenilmaleimidă (200 mg) și izocianat de metil vinil (100 mg) au fost dizolvate în toluen uscat și s-au adăugat 0,1 ml de 2,2′-azoizobutironitril (AIBN) în balonul de reacție pentru a prepara fenilmaleimidă-izocianat de metil vinil. se pune la cuptor la 40°C timp de 3 ore.
Particulele de silice uscate (2 g) au fost dispersate în toluen uscat (100 ml), agitate și sonicate într-un balon cu fund rotund de 500 ml timp de 10 minute. PMCP (10 mg) a fost dizolvat în toluen și adăugat prin picurare în balonul de reacție printr-o pâlnie de picurare. 0°C timp de 3 ore. Apoi, particulele de silice legate cu PMCP (100 g) s-au dizolvat în toluen (200 ml) și s-a adăugat 4-hidroxi-TEMPO (2 ml) în prezența a 100 ui de dilaurat de dibutil staniu ca catalizator. Amestecul a fost agitat la 50°C, filtrat timp de 5°C timp de 38 de ore.
Stiren (1 ml), peroxid de benzoil BPO (0,5 ml) și particule de silice atașate TEMPO-PMCP (1,5 g) au fost dispersate în toluen și purjate cu azot. Polimerizarea stirenului a fost efectuată la 100°C timp de 12 ore.
Probele au fost degazate la 393 K timp de 1 oră pentru a obține o presiune reziduală mai mică de 10-3 Torr. Cantitatea de N2 adsorbită la o presiune relativă de P/P0 = 0,99 a fost utilizată pentru a determina volumul total al porilor. particule de silice ligate) au fost plasate pe o coloană de aluminiu folosind bandă de carbon adezivă. Pe probe a fost placat cu aur folosind un strat de pulverizare Q150T, iar pe probe a fost depus un strat de Au de 5 nm. Acest lucru îmbunătățește eficiența procesului folosind tensiuni joase și oferă granulație fină, pulverizare la rece. n (Worcestershire, Marea Britanie) S-a folosit analizorul de dimensiunea particulelor Mastersizer 2000 pentru a obține distribuția dimensiunii particulelor. Particulele de silice goale și particulele de silice legate de ligand (5 mg fiecare) au fost dispersate în 5 ml de izopropanol, sonicate timp de 10 minute, agitate timp de 5 minute și plasate pe bancul optic de analiză optic Master 5 minut. interval de temperatură de la 30 la 800 °C.
Coloane din oțel inoxidabil căptușite cu sticlă cu orificiu îngust de dimensiuni (100 × 1,8 mm id) au fost ambalate folosind metoda de ambalare a șlamului, aplicând aceeași procedură utilizată în Ref.31. O coloană din oțel inoxidabil (căptușită cu sticlă, 100 × 1,8 mm id) cu un fiting de ieșire care conține o frită de 1 µm a fost conectată la un dispozitiv de ambalare a șlamului (Alltech Deerfield, IL, SUA). Pregătiți o suspensie în fază staționară prin suspendarea a 150 mg de fază staționară în 1,2 mL de fază staționară în 1,2 mL de solvenți ca coloană de depozitare și apoi trimiteți-o la solul ca soluție de depozitare. Solventul propulsor. Umpleți coloana secvențial aplicând presiuni de 100 MP timp de 10 minute, 80 MP timp de 15 minute și 60 MP timp de 30 de minute. În timpul ambalării, vibrația mecanică a fost aplicată cu două agitatoare de coloană GC (Alltech, Deerfield, IL, SUA) pentru a preveni împachetarea uniformă a coloanei. de la unitatea de ambalare a nămolului și conectați un alt fiting la admisie și la sistemul LC pentru a verifica performanța acestuia.
A fost construită o pompă LC (10AD Shimadzu, Japonia), injector (Valco (SUA) C14 W.05) cu buclă de injecție de 50 nL, degazor cu membrană (Shimadzu DGU-14A), fereastră capilară UV-VIS Detector special de dispozitiv µLC (UV-2075) și microcoloane căptușite cu sticlă pentru a minimiza efectul de conexiune foarte îngust al coloanei. ambalaj, capilare (50 μm id 365 și capilare reductoare (50 μm) au fost instalate la ieșirea de 1/16″ a uniunii reducătoare. Colectarea datelor și prelucrarea cromatografică s-au făcut folosind software-ul Multichro 2000. Monitorizarea la 254 nm Analiții au fost testați pentru absorbția UV. Date cromatografice, analizate MA8.
Albumină din ser uman, pulbere liofilizată, ≥ 96% (electroforeză pe gel de agaroză) 3 mg amestecată cu tripsină (1,5 mg), uree 4,0 M (1 ml) și bicarbonat de amoniu 0,2 M (1 ml). % TFA.Se filtrează soluția și se păstrează sub 4 °C.
Separarea amestecurilor de peptide și digerații cu tripsină HSA au fost evaluate separat pe coloane PMP. Verificați separarea amestecului de peptide și digerarea tripsină a HSA de către coloana PMP și comparați rezultatele cu coloana Ascentis Express RP-Amide. Numărul teoretic al plăcii se calculează după cum urmează:
Imaginile SEM ale particulelor de silice goale și ale particulelor de silice legate de ligand sunt prezentate în FIG.2. Imaginile SEM ale particulelor de silice goale (A, B) arată că, spre deosebire de studiile noastre anterioare, aceste particule sunt sferice, în care particulele sunt alungite sau au simetrie neregulată. Suprafața particulelor de silice legate de ligand (C, D) este mai netedă decât cea a particulelor de silice goale, ceea ce se poate datora acoperirii particulelor de siliciu de suprafață.
Imagini de microscop electronic cu scanare ale particulelor de silice goale (A, B) și particulelor de silice legate de ligand (C, D).
Distribuțiile dimensiunilor particulelor de silice goale și ale particulelor de silice legate de ligand sunt prezentate în Figura 3(A). Curbele de distribuție a dimensiunii particulelor bazate pe volum au arătat că dimensiunea particulelor de silice a crescut după modificarea chimică (Fig. 3A). , în comparație cu studiul nostru anterior cu o valoare ad (0,5) de 3,05 μm (particule de silice legate de polistiren) 34. Acest lot a avut o distribuție mai îngustă a dimensiunii particulelor în comparație cu studiul nostru anterior, datorită raporturilor variate de PEG, uree, TMOS și acid acetic în amestecul de reacție. studiat anterior. Aceasta înseamnă că funcționalizarea suprafeței particulelor de silice cu stiren a depus doar un strat de polistiren (0,97 µm) pe suprafața silicei, în timp ce în faza PMP grosimea stratului a fost de 1,38 µm.
Distribuția dimensiunii particulelor (A) și distribuția dimensiunii porilor (B) a particulelor de silice goale și a particulelor de silice legate de ligand.
Dimensiunea porilor, volumul porilor și aria suprafeței particulelor de silice din studiul curent sunt prezentate în Tabelul 1 (B). Profilurile PSD ale particulelor de silice goale și particulelor de silice legate de ligand sunt prezentate în Figura 3 (B). Rezultatele sunt comparabile cu studiul nostru anterior. Dimensiunile porilor particulelor de silice goale și legate de ligand sunt 310 și respectiv 2941, care indică dimensiunea porilor, respectiv 2941, după modificarea chimică a porilor. așa cum se arată în Tabelul 1(B), iar modificarea curbei este prezentată în Fig. 3(B). În mod similar, volumul porilor particulelor de silice a scăzut de la 0,67 la 0,58 cm3/g după modificarea chimică. Suprafața specifică a particulelor de silice studiate în prezent este de 116 m2/g, care este comparabilă cu suprafața prezentată în tabelul nostru anterior (124m2/g). /g) a particulelor de silice a scăzut, de asemenea, de la 116 m2/g la 105 m2/g după modificarea chimică.
Rezultatele analizei elementare a fazei staționare sunt prezentate în Tabelul 2. Încărcarea cu carbon a fazei staționare actuale este de 6,35%, ceea ce este mai mică decât încărcarea cu carbon din studiul nostru anterior (particule de silice legate cu polistiren, 7,93%35 și respectiv 10,21%) S-au folosit substanțe precum fenilmaleimidă-metilvinilizocianat (PCMP) și 4-hidroxi-TEMPO. Procentul în greutate de azot din faza staționară actuală este de 2,21%, față de 0,1735 și, respectiv, 0,85% în greutate de azot din studiile anterioare. Aceasta înseamnă că procentul în greutate de azot din faza staționară actuală este mai mare din cauza încărcăturii de azot și a fazei staționare curente a carbonului. 4) și (5) au fost de 2,7% și, respectiv, 2,9%, în timp ce încărcarea cu carbon a produsului final (6) a fost de 6,35%, așa cum se arată în tabelul 2. Pierderea în greutate a fost verificată cu faza staționară PMP, iar curba TGA este prezentată în Figura 4. Curba TGA prezintă o pierdere în greutate de 8,6%, care conține și carbonul în acord (6%, dar nu conține doar ligand C35%). , O și H.
Ligandul fenilmaleimidă-metilvinilizocianat a fost ales pentru modificarea suprafeței particulelor de silice deoarece are grupări polare de fenilmaleimidă și grupări vinilizocianat. Grupările vinilizocianat pot reacționa în continuare cu stirenul prin polimerizarea radicalilor vii. Imidă nu are încărcătură virtuală la pH normal. Polaritatea fazei staționare poate fi controlată de cantitatea optimă de stiren și timpul de reacție de polimerizare radicalică. Ultima etapă a reacției (polimerizarea radicalilor liberi) este critică și poate modifica polaritatea fazei staționare. din nou, încărcați aceste faze staționare în coloane de oțel inoxidabil și verificați performanța cromatografică a acestora (selectivitate, rezoluție, valoare N, etc.).Pe baza acestor experimente, a fost selectată o formulare optimizată pentru a pregăti faza staționară a PMP pentru a asigura o bună retenție a polarității analitice controlată.
Cinci amestecuri de peptide (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucină encefalină) au fost de asemenea evaluate utilizând o coloană PMP utilizând o fază mobilă;60/40 (v/v) acetonitril/apă (0,1% TFA) la un debit de 80 μL/min. În condiții optime de eluare, numărul teoretic al plăcilor (N) pe coloană (100 × 1,8 mm id) este de 20.000 ± 100 (200.000 μL/min). grame sunt prezentate în Figura 5A. Analiză rapidă pe o coloană PMP la debit mare (700 μL/min), cinci peptide au fost eluate în decurs de un minut, valorile N au fost foarte bune, 13.500 ± 330 pe coloană (100 × 1,8 mm id), Corespunde la 135.000 plăci / coloană identice (fig. .8 mm id) au fost împachetate cu trei loturi diferite de fază staționară PMP pentru a verifica reproductibilitatea. Concentrația de analit pentru fiecare coloană a fost înregistrată utilizând condițiile optime de eluare și numărul de plăci teoretice N și timpul de retenție pentru a separa același amestec de testat pe fiecare coloană.
Separarea amestecului de peptide pe coloana PMP (B) și coloana Ascentis Express RP-Amide (A);fază mobilă 60/40 ACN/H2O (TFA 0,1%), dimensiuni coloanei PMP (100 × 1,8 mm id);analitică Ordinea de eluție a compușilor: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) și 5 (leucină) encefalina acidă)).
O coloană PMP (100 × 1,8 mm id) a fost evaluată pentru separarea digerelor triptice de albumină serică umană în cromatografie lichidă de înaltă performanță. Cromatograma din Figura 6 arată că proba este bine separată și rezoluția este foarte bună. cromatogramă (Figura 6), digestia HSA a fost împărțită în 17 vârfuri corespunzătoare a 17 peptide. Eficiența de separare a fiecărui vârf din digerarea HSA a fost calculată, iar valorile sunt date în Tabelul 5.
Un digerat triptic de HSA (100 × 1,8 mm id) a fost separat pe o coloană PMP;debit (100 uL/min), fază mobilă 60/40 acetonitril/apă cu 0,1% TFA.
unde L este lungimea coloanei, η este vâscozitatea fazei mobile, ΔP este contrapresiunea coloanei și u este viteza liniară a fazei mobile. Studiul nostru anterior Ref.34. Permeabilitatea coloanei pline cu particule poroase superficial este de: 1,7 × 10-15 pentru particule de 1,3 μm, 3,1 × 10-15 pentru particule de 1,7 μm, 5,2 × 10-15 și 2,5 × 10-14 pentru particulele de 1,3 μm. permeabilitatea fazei PMP este similară cu cea a particulelor miez-înveliș de 5 μm.
unde Wx este greutatea coloanei umplute cu cloroform, Wy este greutatea coloanei umplute cu metanol și ρ este densitatea solventului. Densități metanol (ρ = 0,7866) și cloroform (ρ = 1,484). 31 pe care le-am studiat anterior au fost 0,63, respectiv 0,55. Aceasta înseamnă că prezența liganzilor de uree reduce permeabilitatea fazei staționare. Pe de altă parte, porozitatea totală a coloanei PMP (100 × 1,8 mm id) este de 0,60. fazele liganzii C18 sunt atașați de particulele de silice sub formă de lanțuri liniare, în timp ce în fazele staționare de tip polistiren, în jurul acestuia se formează un strat relativ gros de polimer. Într-un experiment tipic, porozitatea coloanei este calculată ca:
Figura 7A, B arată coloana PMP (100 × 1,8 mm id) și coloana Ascentis Express RP-Amide (100 × 1,8 mm id) folosind aceleași condiții de eluție (adică 60/40 ACN/H2O și 0,1% TFA).) din parcela van Deemter.Amestecuri de peptide selectate (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucină Enkefalin) au fost preparate în 20 µL/ Debitul minim pentru ambele coloane este de 800 µL/min. Coloana Express RP-Amide a fost de 2,6 µm, respectiv 3,9 µm. Valorile HETP indică faptul că eficiența de separare a coloanei PMP (100 × 1,8 mm id) este mult mai bună decât coloana Ascentis Express RP-Amide disponibilă comercial (100 × 1,8 mm id). Eficiența de separare mai mare a coloanei PMP (100 × 1,8 mm id) în comparație cu coloana Ascentis Express RP-Amide se bazează pe îmbunătățirea formei particulelor, a dimensiunii și a procedurilor complexe de împachetare a coloanei utilizate în lucrarea curentă34.
(A) diagramă van Deemter (HETP versus viteza liniară a fazei mobile) obținut folosind o coloană PMP (100 × 1,8 mm id) în 60/40 ACN/H2O cu 0,1% TFA. cu 0,1% TFA.
O fază staționară din polistiren încorporat polar a fost pregătită și evaluată pentru separarea amestecurilor de peptide sintetice și a digerărilor cu tripsină de albumină serică umană (HAS) în cromatografie lichidă de înaltă performanță. Performanța cromatografică a coloanelor PMP pentru amestecuri de peptide este excelentă în ceea ce privește eficiența separării și rezoluția. , sinteza controlată a fazei staționare și împachetarea complexă a coloanei. Pe lângă eficiența ridicată a separării, contrapresiunea scăzută a coloanei la debite mari este un alt avantaj al acestei faze staționare. vor fi evaluate si pentru separarea proteinelor si a anticorpilor monoclonali.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Research on Peptide Separation Systems by Reversed Phase Chromatography Part I: Development of a Column Characterization Protocol.J.Cromatografie.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al.Peptide active îmbunătățite concepute pentru tratamentul bolilor infecțioase.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic therapeutic peptides: science and the market.drug discovery.15 (1-2) today, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2001009).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.Cromatografie.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. și colab. Cromatografie lichidă avansată-spectrometrie de masă permite încorporarea metabolomicelor și proteomicelor țintite pe scară largă.anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Rolul UHPLC în dezvoltarea medicamentelor.J.Sep. Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Aspecte fundamentale și practice ale cromatografiei lichide de ultraînaltă presiune pentru separări rapide.J.Sep. Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Aplicarea cromatografiei lichide de ultra-înaltă performanță în dezvoltarea medicamentelor.J.Cromatografie.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al.Hidrogeluri macroporoase monolitice preparate din emulsii ulei-în-apă cu fază internă înaltă pentru purificarea eficientă a enterovirusurilor.Chemical.Britain.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Rolul cromatografiei lichide în proteomică.J.Chromatography.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. Emerging trends in reverse-phase liquid chromatography separations of therapeutic peptides and proteins: theory and applications.J.Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Separarea bidimensională a peptidelor folosind un sistem RP-RP-HPLC folosind diferite valori ale pH-ului în prima și a doua dimensiune de separare.J.Sep. Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al. Au fost investigate caracteristicile transferului de masă și performanța cinetică a coloanelor cromatografice de înaltă eficiență ambalate cu particule C18 sub-2 μm poroase complet și superficial.J.Sept. Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al.Tendințe recente și provocări analitice în izolarea, identificarea și validarea peptidelor bioactive din plante.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-018-x (02018-x).
Mueller, JB et al.The proteomic landscape of the kingdom of life.Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. şi colab. Procesarea în aval a peptidelor terapeutice prin cromatografie lichidă preparativă. Molecule (Basel, Switzerland) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Cromatografia în mod mixt și aplicarea acesteia la biopolimeri.J.Cromatografie.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. Liganzii pentru cromatografia proteinelor în mod mixt: principiu, caracterizare și proiectare.J.Biotehnologie.144(1), 3-11 (2009).