Javascript в настоящее время отключен в вашем браузере. Некоторые функции этого веб-сайта не будут работать, если JavaScript отключен.
Зарегистрируйтесь, указав свои конкретные данные и конкретный интересующий препарат, и мы сопоставим предоставленную вами информацию со статьями в нашей обширной базе данных и незамедлительно отправим вам копию в формате PDF по электронной почте.
作者 Стелла С., Витале С.Р., Марторана Ф., Массимино М., Павоне Г., Ланзафаме К., Бьянка С., Бароне С., Горгоне С., Фичера М., Манзелла Л.
Стефания Стелла, 1,2 Сильвия Рита Витале, 1,2 Федерика Марторана, 1,2 Микеле Массимино, 1,2 Джулиана Павоне, 3 Катя Ланцафаме, 3 Себастьяно Бьянка, 4 Кьяра Бароне, 5 Кристина Горгоне, 6 Марко Фичера, 6, 7 Ливия Манцелла1,21 Кафедра клинической и экспериментальной медицины, Университет Катании, Катания , 95123, Италия;2 Центр экспериментальной онкологии и гематологии, AOU Policlinico «G.Rodolico – San Marco», Катания, 95123, Италия;3 Медицинская онкология, АОУ Поликлиника «Г.Родолико – Сан-Марко», Катания, 95123, Италия;4 Медицинская генетика, АРНАС Гарибальди, Катания, 95123, Италия;5 Медицинская генетика, ASP, Сиракузы, 96100, Италия;6 Кафедра биомедицинских и биотехнологических наук, Университет Катании, медицинская генетика, Катания, Италия, 95123;7Oasi Research Institute-IRCCS, Троина, 94018, Италия Для связи: Стефания Стелла, тел. +39 095 378 1946, электронная почта [email protected];[email protected] Цель: мутации зародышевой линии в BRCA1 и BRCA2 и установленный рак молочной железы (РМЖ), яичников (РЯ) и другие, связанные с пожизненным риском развития рака. Тестирование гена BRCA является ключом к оценке индивидуального риска, а также к поиску методов профилактики у здоровых носителей и подбору лечения для больных раком. специально нацеленные на популяции в восточной Сицилии отсутствуют. Целью нашего исследования было изучить частоту и распространение патогенных изменений зародышевой линии BRCA в когорте пациентов с РМЖ из восточной Сицилии и оценить их связь со специфическими признаками РМЖ с использованием секвенирования следующего поколения. Наличие изменений коррелировало со степенью опухоли и индексом пролиферации. РЕЗУЛЬТАТЫ. 1 и 18 (51%) в BRCA2. Изменения BRCA1 преобладают у пациентов с трижды негативным РМЖ, тогда как мутации BRCA2 чаще встречаются у пациентов с люминальным РМЖ. до н.э. В целом, эти данные согласуются с предыдущими данными, подтверждающими скрининг BRCA для надлежащей профилактики и лечения рака у носителей мутации.
Рак молочной железы (РМЖ) является наиболее распространенным злокачественным новообразованием во всем мире и самым смертоносным видом рака у женщин.1 Биологические особенности, определяющие прогноз и клиническое течение РМЖ, были тщательно изучены и частично выяснены с течением времени. Фактически, в настоящее время используется несколько суррогатных маркеров для классификации РМЖ на различные молекулярные подтипы. 67 и степень опухоли (G).2 Комбинация этих переменных идентифицировала следующие категории РМЖ: 1) люминальные опухоли, демонстрирующие экспрессию ER и/или PgR, составляли 75 % РМЖ. Эти опухоли были далее разделены на люминальные опухоли A, когда Ki-67 был ниже 20 % и HER2-отрицательный, и люминальные B, когда Ki-67 был равен или выше 20 % и в присутствии амплификации HER2, независимо от индекса пролиферации;2) HER2+ опухоли, которые являются ER и PgR-отрицательными, но обнаруживают амплификацию HER2. На эту группу приходится 10% всех опухолей молочной железы;3) Тройной негативный рак молочной железы (ТНРМЖ), который не показывает экспрессию ER и PgR и амплификацию HER2, составляет около 15% случаев рака молочной железы.2-4
Среди этих подтипов РМЖ степень опухоли и индекс пролиферации представляют собой перекрестные биомаркеры, которые прямо и независимо связаны с агрессивностью опухоли и прогнозом.5,6
В дополнение к вышеупомянутым биологическим особенностям роль наследственных генетических изменений, ведущих к развитию РМЖ, становится все более важной за последние несколько лет. Примерно 1 из 10 опухолей молочной железы наследуется из-за зародышевых изменений в определенных генах.8 В двух крупных эпидемиологических исследованиях с участием более 180 000 женщин недавно была идентифицирована группа из восьми генов (например, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB). 2, RAD51C и RAD51D), в первую очередь ответственных за наследственный РМЖ. Среди этих генов BRCA1 и BRCA2 (далее BRCA1/2) продемонстрировали самую сильную корреляцию с развитием опухолей молочной железы. oma. В возрасте от 13 до 80 лет кумулятивная заболеваемость РМЖ составляет 72% у женщин с патогенным вариантом BRCA1 (PV) и 69% у женщин с BRCA2 PV.14
Примечательно, что недавняя публикация предполагает, что риск РМЖ зависит от типа ИП. Фактически, по сравнению с патогенными укороченными вариантами, блестящие миссенс-варианты, особенно в гене BRCA1, связаны со сниженным риском РМЖ, особенно у пожилых женщин.15
Наличие BRCA1 или BRCA2 PV было связано с различными биологическими и клинико-патологическими особенностями.16,17 BRCA1-ассоциированные РМЖ, как правило, клинически агрессивны, плохо дифференцированы и высокопролиферативны. Эти опухоли обычно трижды негативны и имеют ранний возраст начала. B и обычно возникают у пожилых людей.16–18 Примечательно, что мутации в BRCA1 и BRCA2 повышают чувствительность к специфическим методам лечения, включая соли платины и таргетные препараты, такие как ингибиторы полимеразы поли(АДФ-рибозы) (PARPi)19,20.
За последние несколько лет внедрение секвенирования нового поколения (NGS) в клиническую практику позволило увеличить число пациентов с РМЖ пройти молекулярное тестирование на синдромы предрасположенности к раку, включая BRCA1/2.21 Одновременно определения, основанные на точных критериях, касающихся семейного анамнеза, демографических и клинико-патологических характеристик, позволяют лучше идентифицировать лиц, достойных тестирования на BRCA1/2.22,23 В этом контексте накапливаются данные о скрининге BRCA1/2 в определенных группах населения. , подчеркивая различия между географическими регионами. 24–27 Хотя есть отчеты о когорте BC в западной Сицилии, меньше данных доступно по скринингу BRCA1 / 2 в популяции восточной Сицилии. 28,29
Мы описываем здесь результаты скрининга зародышевой линии BRCA1/2 у пациентов с РМЖ из восточной Сицилии, дополнительно коррелируя наличие мутаций BRCA1 или BRCA2 с основными клинико-патологическими особенностями этих опухолей.
Ретроспективное исследование было проведено в «Центре экспериментальной онкологии и гематологии» при поликлинике Родолико – Сан-Марко в Катании. С января 2017 года по март 2021 года в нашу лабораторию молекулярной диагностики для генетического тестирования BRCA/2 было направлено в общей сложности 455 пациентов с раком молочной железы и яичников, меланомой, раком поджелудочной железы или простаты. Это исследование проводилось в соответствии с Хельсинкской декларацией, и все участники предоставили письменную информацию. согласие до молекулярного анализа.
Гистологические и биологические характеристики (ER, PgR, HER2-статус, Ki-67 и степень) РМЖ оценивали на толстой биопсии или хирургических образцах с учетом только агрессивных компонентов опухоли. На основании этих характеристик РМЖ классифицировали следующим образом: люминальный A (ER+ и/или PgR+, HER2-, Ki-67<20%), люминальный B (ER+ и/или PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), люминальный B -HER2+ (ER и/или PgR+, HER2+), HER2+ (ER и PgR-, HER2+) или тройной негатив (ER и PgR-, HER2-).
Перед оценкой статуса мутации BRCA1 и BRCA2 междисциплинарная группа, включающая онколога, генетика и психолога, провела консультацию генетика опухолей для каждого пациента, чтобы определить наличие BRCA1 и/или BRCA1.или лица с высоким риском PV в гене BRCA2. Отбор пациентов проводился в соответствии с рекомендациями Итальянского общества медицинской онкологии (AIOM) и местными сицилийскими рекомендациями.30,31 Эти критерии включают: (i) семейный анамнез известных патогенных вариантов в генах восприимчивости (например, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN);(ii) самцы с РМЖ;(iii) с BC и OC;(iv) женщины с РМЖ <36 лет, ТНРМЖ <60 лет или двусторонним РМЖ <50 лет;(v) личная история болезни BC <50 лет и по крайней мере один родственник первой степени родства: (a) BC <50 лет;(б) немуцинозный и непограничный РЯ любого возраста;в) двусторонний РМЖ;г – мужской БК;(д) рак поджелудочной железы;(f) рак предстательной железы;(vi) два или более РМЖ > 50 лет в личном анамнезе и семейный анамнез РМЖ, РЯ или рака поджелудочной железы у родственников, являющихся родственниками первой степени родства друг с другом (включая родственников, с которыми она является родственником первой степени родства);(vii) Личный анамнез РЯ и по крайней мере один родственник первой степени родства: (а) до н.э. <50 лет;(б) НОК;в) двусторонний РМЖ;г – мужской БК;(vii) женщина с серозным РЯ высокой степени.
Образец периферической крови объемом 20 мл был получен от каждого пациента и собран в пробирки с ЭДТА (BD Biosciences). Геномная ДНК была выделена из образцов цельной крови объемом 0,7 мл с использованием набора для выделения ДНК QIAsymphony DSP DNA Midi Kit (QIAGEN, Hilden, Италия) в соответствии с инструкциями производителя и пропущена через флуорометр Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США). Выполните количественную оценку.Обогащение мишеней и подготовка библиотеки выполняются Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, который готов к загрузке в набор Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 для автоматической подготовки библиотеки в соответствии с инструкциями производителя. Набор состоит из двух пулов мультиплексных праймеров для ПЦР, которые можно использовать для изучения всех генов BRCA1 (NM_007300.3) и BRCA2 (NM_000059.3). 5 мкл каждого разбавленного образца ДНК (10 нг) добавляли в планшеты со штрих-кодом для подготовки библиотеки, а все реагенты и расходные материалы загружали в прибор Ion Chef™. Затем на приборе Ion Chef™ выполняли автоматическую подготовку библиотеки и объединение библиотек образцов со штрих-кодом. Затем количество подготовленных библиотек оценивали с помощью флуорометра Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) в соответствии с инструкциями производителя. эквимолярных соотношений в пробирках для образцов библиотеки Ion Chef™ (пробирки со штрих-кодом) и загруженных в прибор Ion Chef™. Секвенирование проводили с использованием прибора Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) с использованием чипа Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). Анализ данных выполняли с помощью Amplicon Suite (SmartSeq srl) и программного обеспечения Ion Reporter.
Все варианты номенклатуры соответствовали текущим рекомендациям Консорциума по вариациям генома человека, доступным в Интернете (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Клиническая значимость вариантов BRCA1/2 была определена с использованием классификации Международного консорциума ENIGMA (Доказательная сеть для интерпретации мутантных аллелей зародышевой линии, https://enigmaconsortium.org/) и консультаций с различными базами данных, такими как ARUP, BRCAEXCHANGE. , ClinVar, IARC_LOVD и UMD. Классификация включает пять различных категорий риска: доброкачественные (категория I), вероятно доброкачественные (категория II), вариант с неопределенной значимостью (VUS, категория III), вероятно патогенные (категория IV) и патогенные (категория V). VarSome также проанализировал влияние мутаций на структуру и функцию белков, информативный инструмент с доступом к 30 базам данных.32
Чтобы определить потенциальную клиническую значимость каждого VUS, использовались следующие вычислительные алгоритмы прогнозирования белка: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:///genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) и Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php).V арианты, классифицированные как класс 1 и 2, считались диким типом.
Секвенирование по Сэнгеру подтвердило наличие каждого патогенного варианта. Вкратце, для каждого обнаруженного варианта была разработана пара специфических праймеров с использованием эталонных последовательностей генов BRCA1 и BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 и NG_012772.3, NM_000059.3 соответственно). Таким образом, была проведена направленная ПЦР с последующим секвенированием по Сэнгеру.
Пациенты с отрицательным результатом теста на ген BRCA1/2 были протестированы с помощью мультиплексной амплификации зонда, зависимой от лигирования (MLPA), в соответствии с инструкциями производителя для оценки наличия крупных геномных перестроек (LGR). Вкратце, образцы ДНК денатурируют и используют до 60 зондов, специфичных для генов BRCA1 и BRCA2, каждый из которых обнаруживает определенную последовательность ДНК длиной примерно 60 нуклеотидов. Продукты амплификации зондов, состоящие из уникального набора ПЦР. amplicons, затем анализировали с помощью капиллярного электрофореза и программного обеспечения Cofalyser.Net в сочетании с соответствующими таблицами Cofalyser для конкретных партий (www.mrcholland.com).
Выбранные клинико-патологические переменные (гистологическая степень и Ki-67% индекс пролиферации) были связаны с наличием BRCA1/2 PV, рассчитанным с использованием программного обеспечения Prism v. 8.4 с использованием точного критерия Фишера, предполагая значимость p-значения <0,05.
В период с января 2017 г. по март 2021 г. 455 пациентов прошли скрининг на мутации зародышевой линии BRCA1/2. Тестирование мутаций проводилось в Центре экспериментальной онкологии и гематологии поликлинической больницы. 0), «Родолико Катании – Сан-Марко» в целом, 389 пациентов. Был рак груди, 37 рак яичников, 16 рак поджелудочной железы, 8 рак предстательной железы и 5 меланома.Распределение пациентов по типу рака и результатам анализа представлено на рисунке 1.
На рис. 1 показана блок-схема, показывающая обзор исследования. Пациентов с опухолями груди, меланомы, поджелудочной железы, предстательной железы или яичников проверяли на наличие мутаций в генах BRCA1 и BRCA2.
Сокращения: PV, патогенный вариант;VUS, вариант неопределенного значения;WT, последовательность BRCA1/2 дикого типа.
Мы выборочно сосредоточили наши исследования на когортах рака молочной железы. Пациенты имели средний возраст 49 лет (диапазон 23-89) и были преимущественно женщинами (n = 376, или 97%).
Из этих субъектов 64 (17%) имели мутации BRCA1/2 и все были женщинами. Тридцать пять (9%) имели PV и 29 (7,5%) имели VUS. Рисунки 1 и 2). LGR не присутствовал в анализе MLPA.
Рисунок 2. Анализ мутаций BRCA1 и BRCA2 у 389 больных раком молочной железы. (A) Распределение патогенных вариантов (PV) (красный), вариантов неопределенной значимости (VUS) (оранжевый) и WT (синий) у 389 больных раком молочной железы;(B) 389 пациентов с раком молочной железы. Тридцать пять (9%) имели патогенные варианты BRCA1/2 (PV). Среди них 17 (48,6%) были носителями BRCA1 PV (темно-красный) и 18 (51,4%) были носителями BRCA2 (светло-красный);(C) 29 (7,5%) из 389 субъектов были носителями VUS, 5 (17,2%) генов BRCA1 (темно-оранжевые) и 24 (82,8%) генов BRCA2 (светло-оранжевые).
Сокращения: PV, патогенный вариант;VUS, вариант неопределенного значения;WT, последовательность BRCA1/2 дикого типа.
Затем мы исследовали распространенность молекулярных подтипов РМЖ у пациентов с BRCA1/2 PV. Распределение включало 2 (5,7%) люминальных A, 15 (42,9%) люминальных B, 3 (8,6%) люминальных B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ и 13 (37,1%) TNBC пациентов. Среди BRCA1-позитивных пациентов 5 (29,4%) имели просвет B РМЖ, 2 (11,8%) имели заболевание HER2+ и 10 (58,8%) имели ТНРМЖ. Опухоли без мутаций BRCA1 были либо люминальными А, либо люминальными B-HER2+ (рис. 3). (11,1%) были просветными A (рис. 3). В этой группе не было опухолей HER2+. Таким образом, мутации BRCA1 преобладают у пациентов с TNBC, тогда как изменения BRCA2 преобладают у людей с просветом B.
Рисунок 3. Распространенность подтипов рака молочной железы у пациентов с патогенными вариантами BRCA1 и BRCA2. Гистограммы, показывающие распределение BRCA1- (темно-красный) и BRCA2- (светло-красный) PV среди молекулярных подтипов пациентов с раком молочной железы. Числа, указанные в каждом поле, представляют процент пациентов с BRCA1 и BRCA2 PV для каждого подтипа рака молочной железы.
Сокращения: PV, патогенный вариант;HER2+, положительная реакция на рецептор 2 эпидермального фактора роста человека;TNBC, трижды негативный рак молочной железы.
Впоследствии мы оценили тип и локализацию генов PVS. и BRCA2 PVS.in BRCA1, мы наблюдали 7 единичных нуклеотидных вариантов (SNV), 6 делеций, 3 дублирования и 1 вставка. Только одна мутация (C.5522DELG) представляет собой новое открытие. Наиболее распространенные BRCA1 -levative -in50.5035.503. Удаление пяти нуклеотидов (CTAAT) в экзоне 15 BRCA1, что приводит к замене аминокислотного лейцина тирозином в кодоне 1679, и из -за трансляционного фрэм -снимания с прогнозируемым альтернативным кодоном, приводящим к преждевременному белкам. ) (Таблица 1).
Что касается BRCA2 PV, мы наблюдали 6 делеций, 6 SNV и 2 дупликации. Ни одно из обнаруженных изменений не является новым. Три мутации повторялись в нашей популяции, c.428dup и c.8487+1G>A, наблюдаемые у 3 субъектов, за которыми последовала c.5851_5854delAGTT, обнаруженная в двух случаях. Изменение c.428dup включает повтор C в экзоне 5 BRCA2. , который, по прогнозам, кодирует укороченный нефункциональный белок. Мутация c.8487+1G>A происходит в интронной области интрона 19 BRCA2 (± 1,2) и влияет на консенсусную последовательность сплайсинга, что приводит к изменению сплайсинга, что приводит к аномальному или отсутствующему белку. в кодирующем экзоне 10 гена BRCA2 и приводит к сдвигу рамки трансляции с предсказанным альтернативным стоп-кодоном (p.S1951WfsTer). Примечательно, что, как сообщалось ранее, оба изменения c.631G>A и c.7008-2A>T были обнаружены у одного и того же пациента. замена валина на изолейцин в кодоне 211, изолейцин. ЛВ, 4 из 18 изменений (22,2%) были интронными.
Затем мы картировали вредные мутации BRCA1/2 в функциональных доменах и областях, связывающих белок (рис. 4). В гене BRCA1 50% PV были расположены в кластерной области рака молочной железы (BCCR), а 22% мутаций были расположены в кластерной области рака яичников (OCCR) (рис. 4A). В BRCA2 PV 35,7% вариантов были расположены в области BCCR и 42,8% мутации были локализованы в OCCR (рис. 4Б). Далее мы оценили расположение PV в доменах белков BRCA1 и BRCA2. Для белка BRCA1 мы обнаружили три PV в доменах петли и спиральной катушки и две мутации в домене BRCT (рис. 4A). go/oligosaccharide-связывающий (OB) и башенный (T) домены (рис. 4B).
Рисунок 4. Схематическое изображение белков BRCA1 и BRCA2 и локализация патогенных вариантов. На этом рисунке показано распределение патогенных вариантов BRCA1 (A) и BRCA2 (B) у больных раком молочной железы. Экзонные мутации показаны синим цветом, а интронные варианты показаны оранжевым цветом. Высота столбца представляет количество случаев. последовательность (NLS), спиральный домен, кластерный домен SQ/TQ (SCD) и С-концевой домен BRCA1 (BRCT). (B) Белок BRCA2 содержит восемь повторов BRC, ДНК-связывающий домен со спиральным доменом (спиральный), три олигонуклеотидных/олигосахарид-связывающих (OB) складок, башенный домен (T) и NLS на стороне C. Области, называемые кластерной областью рака молочной железы (BC). CR) и область кластера рака яичников (OCCR) показаны внизу. * Представляет собой мутации, определяющие стоп-кодоны.
Затем мы исследовали клинико-патологические особенности РМЖ, которые могут коррелировать с наличием BRCA1/2 PV. Полные клинические записи были доступны для 181 BRCA1/2-негативного пациента (не носителей) и всех носителей (n = 35). Была обнаружена корреляция между скоростью пролиферации опухоли и степенью.
Мы рассчитали распределение Ki-67 на основе медианы нашей когорты (25%, диапазон <10-90%). Субъекты с Ki-67 <25% были определены как «низкие Ki-67», в то время как лица со значениями ≥ 25% считались «высокими Ki-67». Значимые различия Ki-67 (p<0,01) были обнаружены между неносителями и носителями BRCA1 PV (рис. 5). А).
Рисунок 5 Корреляция Ki-67 с распределением степени у женщин с раком молочной железы с и без BRCA1 и BRCA2 PV. (A) Блок-диаграмма, показывающая медианные значения Ki-67 у 181 пациента без носительства BC по сравнению с BRCA1 (18) или BRCA2 (17) PV. Значения P ниже 0,5 считались статистически значимыми. (B) Гистограмма, представляющая распределение пациентов с раком РМЖ в группы гистологической степени (G2 и G3) в соответствии со статусом мутации BRCA1 и BRCA2 (субъекты дикого типа, носители BRCA1 и BRCA2 PV).
Аналогичным образом мы изучили, коррелирует ли степень опухоли с наличием BRCA1/2 PV. Поскольку РМЖ G1 отсутствовал в нашей популяции, мы разделили пациентов на две группы (G2 или G3). В соответствии с результатами Ki-67 анализ выявил статистически значимую корреляцию между степенью опухоли и мутацией BRCA1 с более высокой долей опухолей G3 у носителей BRCA1 по сравнению с неносителями (p<0,005) (рис. 5B).
Достижения в технологии секвенирования ДНК позволили добиться беспрецедентного прогресса в генетическом тестировании BRCA1/2, что имеет решающее значение для пациентов с раком в семейном анамнезе. На сегодняшний день идентифицировано и классифицировано около 20 000 вариантов BRCA1/2 в соответствии с Американским обществом медицинской генетики 35 и системой ENIGMA.35,36 Хорошо известно, что спектр мутаций BRCA1/2 широко варьируется в зависимости от географических регионов. s колебался от 8% до 37%, что свидетельствует о широкой изменчивости внутри страны.38,39 Сицилия с населением почти 5 миллионов человек является пятым по величине регионом Италии по количеству жителей. Хотя существуют данные о распространении BRCA1/2 в западной части Сицилии, нет обширных доказательств в восточной части острова.
Наше исследование является одним из первых отчетов о заболеваемости BRCA1/2 PV у пациентов с РМЖ на востоке Сицилии.28 Мы сосредоточили наш анализ на РМЖ, поскольку это, безусловно, наиболее распространенное заболевание в нашей когорте.
При тестировании 389 пациентов с РМЖ 9% носили BRCA1/2 PV, равномерно распределенные между BRCA1 и BRCA2. Эти результаты согласуются с результатами, полученными ранее в итальянской популяции. 28 Интересно, что 3% (13/389) нашей когорты были мужчинами. разработали BRCA1/2 PV, поэтому они были кандидатами для дальнейшего молекулярного анализа, чтобы исключить присутствие менее распространенных мутаций, таких как PALB2, RAD51C и D, среди прочих. Варианты неопределенной значимости были получены у 7% субъектов, у которых был очевиден BRCA2 VUS. Даже этот результат согласуется с ранее существовавшими данными.28,41,42
Когда мы проанализировали распределение молекулярных подтипов РМЖ у женщин с мутацией BRCA1/2, мы подтвердили известную связь между TNBC и BRCA1 PV (58,8%), а также между люминальным B BC и BRCA2 PV (55,6%).
Затем мы сосредоточимся на типе и местоположении BRCA1/2 PV. В нашей когорте наиболее распространенным BRCA1 PV был c.5035_5039delCTAAT. Хотя Incorvaia et al.не описали этот вариант в своей сицилийской когорте, другие авторы сообщили о нем как о зародышевой BRCA1 PV.34 Несколько BRCA1 PV были обнаружены в нашей когорте, например, c.181T>G, c.514del, c.3253dupA и c.5266dupC, которые наблюдались на Сицилии.28 Из них две мутации основателя BRCA1 (c.181T>G и c. .5266dupC) обычно обнаруживаются у евреев-ашкенази Восточной и Центральной Европы (Польша, Чехия, словенские, австрийские, венгерские, белорусские и немецкие) 44,45, а в Соединенных Штатах и ​​Аргентине он был недавно определен как «рецидивирующий зародышевый вариант» у итальянских пациентов с РМЖ и РЯ. Вая и др.обнаружили вариант c.3253dupA в некоторых семьях в Катании.28 Наиболее репрезентативными BRCA2 PV являются c.428dup, c.5851_5854delAGTT и интронный вариант c.8487+1G>A, о которых сообщалось более подробно 28 у пациента в Палермо с c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV наблюдался в домохозяйствах на севере западной Сицилии, в основном в регионах Трапани и Палермо, тогда как c.5851_5854delAGTT PV наблюдался в семьях на северо-западе Сицилии. Вариант 8487+1G>A чаще встречался у субъектов из Мессины, Палермо и Кальтаниссетты.28 Rebbeck et al.ранее описали изменение c.5851_5854delAGTT в Колумбии.37 Другой BRCA2 PV, c.631+1G>A, был обнаружен у пациентов с РМЖ и РЯ на Сицилии (Агридженто, Сиракузы и Рагуза).28 Примечательно, что мы наблюдали сосуществование двух вариантов BRCA2 (BRCA2 c.631G>A и c.7008-2A>T) у одного и того же пациента, который мы предположили, что они сегрегированы в цис-режиме, как сообщалось ранее. 34,46 Эти мутации BRCA2 действительно часто наблюдаются в итальянском регионе, и было обнаружено, что они вводят преждевременные стоп-кодоны, влияя на сплайсинг матричной РНК и вызывая отказ белка BRCA2.47,48
Мы также картировали BRCA1 и BRCA2 PV в предполагаемых областях OCCR и BCCR белковых доменов и генов. Эти области были описаны Rebbeck et al.как области риска развития рака яичников и молочной железы соответственно. 49 Однако доказательства связи между расположением вариантов зародышевой линии и риском рака молочной железы или яичников остаются спорными. для ограниченного числа пациентов с мутациями BRCA1/2. С точки зрения домена белка, BRCA1 PV распределены по всему белку, а изменения BRCA2 преимущественно обнаруживаются в домене повторов BRC.
Наконец, мы сопоставили клинико-патологические признаки РМЖ с BRCA1/2 PV. Из-за ограниченного числа включенных пациентов мы обнаружили только достоверную корреляцию между Ki-67 и степенью опухоли. наша популяция пациентов с мутацией BRCA1/2, которая имеет среднее значение Ki-67, равное 25%. Эта тенденция к высоким показателям Ki-67 может быть объяснена преобладанием в наших когортах люминального B и TNBC, из которых присутствовало небольшое количество люминальных опухолей A. Однако некоторые данные, по-видимому, предполагают, что более высокое пороговое значение Ki-67 (25-30%) может лучше стратифицировать пациентов в соответствии с их прогнозом. 53,54 По результатам нашего анализа значительная корреляция неудивительна. .Происходит между высокими Ki-67 и степенями и наличием BRCA1 PV. Фактически, опухоли, связанные с BRCA1, типичны для TNBC и проявляют более агрессивные черты.16,17
В заключение, это исследование представляет собой отчет о мутационном статусе BRCA1/2 в когорте РМЖ из восточной Сицилии. В целом, наши результаты согласуются с ранее существовавшими данными, как с точки зрения распространенности мутаций, так и клинико-патологических особенностей РМЖ. Дополнительные исследования в более крупных популяциях пациентов с мутацией BRCA1/2, такие как использование мультигеномного расширенного мутационного анализа, необходимы для оценки наличия PV, которые являются отчетливыми и менее частыми, чем BRCA1/2. Это позволит идентифицировать и правильно лечить растущее число субъектов с повышенным риском развития рака из-за генетических мутаций.
Мы подтвердили, что пациенты подписали информированное согласие на анонимное предоставление своих образцов опухоли для исследовательских целей. Все пациенты подписали письменное информированное согласие в соответствии с Хельсинкской декларацией. В соответствии с политикой AOU Policlinico «G.Rodolico – S.Marco» это исследование было освобождено от этической проверки, поскольку анализ BRCA1/2 проводился в соответствии с клинической практикой, и все пациенты дали письменное информированное согласие. Пациенты также дают согласие на использование своих данных в исследовательских целях.
Мы благодарим профессора Паоло Виньери за его помощь в уходе за больными раком молочной железы в соответствии с просьбой Комитета по этике.
Федерика Марторана сообщает о гонорарах от Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Другие авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов в этой работе.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL и др. Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN оценивает заболеваемость и смертность от 36 видов рака в 185 странах мира. CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660