«Никогда не сомневайтесь в том, что небольшая группа вдумчивых, преданных своему делу граждан может изменить мир.На самом деле, он там один».
Миссия Cureus состоит в том, чтобы изменить давнюю модель медицинских публикаций, в которой представление исследований может быть дорогим, сложным и занимать много времени.
Обогащенная тромбоцитами плазма/prp, регенерация тканей, активация тромбоцитов, пролиферативная терапия глюкозой, тромбоциты, пролиферативная терапия
Цитируйте эту статью как: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al.(17 мая 2022 г.) Влияние глюкозы на количество и объем тромбоцитов: значение для регенеративной медицины.Излечение 14(5): e25081.дои: 10.7759/cureus.25081
Обогащенная тромбоцитами плазма (PRP) и гипертонические растворы глюкозы обычно используются для инъекций в регенеративной медицине, иногда вместе.О влиянии гипертонической глюкозы на лизис и активацию тромбоцитов ранее не сообщалось.Мы проверили влияние повышенных концентраций глюкозы на количество тромбоцитов и эритроцитов, а также объемы клеток в PRP и цельной крови (WB).Быстрое частичное снижение количества тромбоцитов происходило при использовании всех смесей глюкозы, смешанных с PRP или цельной кровью, что соответствовало частичному лизису. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю аккомодацию остаточных тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю аккомодацию остаточных тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. После первой минуты количество тромбоцитов выделяется стабильным образом, что вызывает быструю аккомодацию остаточных тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю аккомодацию остаточных тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса.第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 мОсм）高渗状态。2000 мОсм）高渗状态。 После первой минуты количество тромбоцитов выделяется стабильным, что вызывает быструю адаптацию остаточных тромбоцитов к экстремальному (> 2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю адаптацию остаточных тромбоцитов к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию.Концентрация глюкозы 25% и выше приводила к значительному увеличению среднего объема тромбоцитов (MPV), что указывает на раннюю стадию активации тромбоцитов.Необходимы дальнейшие исследования, чтобы определить, происходит ли лизис или активация тромбоцитов и может ли гипертоническая инъекция глюкозы отдельно или в сочетании с PRP обеспечить дополнительный клинический эффект.
В 1950-х годах американский хирург Джордж Хакетт обнаружил, что он может навсегда облегчить боль в суставах и спине у многих пациентов, вводя пролиферативный раствор в сухожилия и связки.Его эксперименты на кроликах показали, что лечение, которое он назвал пролиферативной терапией, приводит к увеличению и укреплению сухожилий.Гистологические исследования подтвердили, что в ходе этого процесса вырабатывается новый коллаген [1].
В течение первых нескольких десятилетий было опробовано множество различных решений для распространения.К 1990-м годам большинство практикующих врачей считали высокие концентрации глюкозы самым безопасным и наиболее эффективным методом.Однако механизм действия остается неясным.
После работы Хакетта в 20 веке было проведено несколько клинических исследований.Однако в 2000-х годах возобновился интерес, и было завершено несколько успешных клинических испытаний пролиферативной терапии для лечения болей в пояснице [2], остеоартрита коленного сустава [3] и латерального эпикондилита [4].
Регенерация тканей требует участия стволовых клеток.Следовательно, высокие концентрации глюкозы должны каким-то образом вызывать миграцию, репликацию и дифференцировку стволовых клеток.Мы предполагаем, что тромбоциты могут действовать как мессенджеры и что высокие концентрации глюкозы могут заставлять тромбоциты высвобождать цитокины и факторы роста, тем самым способствуя регенеративным процессам, особенно миграции стволовых клеток в области с высокими концентрациями глюкозы.
Активация тромбоцитов всегда предшествует увеличению внутриклеточного кальция [5].Лю и др.в 2008 г. показали, что высокие уровни глюкозы повышают активность каналов транзиторного рецепторного потенциала канонического типа 6 (TRPC6) в плазматической мембране, что приводит к притоку ионов кальция в тромбоциты [6].Другое исследование показало, что воздействие ионов кальция на маргинальную зону микротрубочек вызывает релаксацию, расширение и деформацию маргинальной зоны, что, в свою очередь, вызывает изменение формы с дисковой на сферическую, что приводит к среднему объему тромбоцитов (MPV) [7].
Наша гипотеза в этом исследовании заключается в том, что воздействие высоких концентраций глюкозы на тромбоциты влияет на маргинальную зону микротрубочек и внутриклеточную среду, что приводит к увеличению MPV.
Все участники подписали форму информированного согласия после объяснения деталей исследования и до получения образцов.В этом исследовании использовались только образцы PRP с гематокритом более 2%, чтобы можно было включить для сравнения количество эритроцитов (эритроцитов) и средний корпускулярный объем эритроцитов (MCV).
Исследование проводилось в четыре фазы, первая фаза — PRP, а остальные фазы — цельная кровь (таблица 1).Как описано ранее [8], все относительные центробежные силы (RCF, g-сила) рассчитывались от средней точки (Rmid, в см) колонки крови в центробежном шприце.Мы решили использовать MPV в качестве маркера сенсибилизации тромбоцитов и количество тромбоцитов в качестве индикатора потенциального лизиса тромбоцитов, оба из которых могут быть легко измерены на стандартных гематологических анализаторах.
На первом этапе 47 добровольцев сдали образцы крови — одну пробирку с этилендиаминтетрауксусной кислотой (ЭДТА) и один образец цельной крови PRP (с антикоагулянтом цитратом натрия (NaCl, 3%)) (таблица 1).Немедленно поместите коромысло в трубку.Общий анализ крови (ОАК) выполняли на образцах ЭДТА в трех повторах, а образцы NaCl анализировали в трех повторах для анализа ОАК, а затем готовили ОТП различными методами, описанными выше [8].Все образцы PRP готовили центрифугированием при 900–1000 g.Смешайте каждый образец PRP на вихревой мешалке в течение 5–10 секунд, затем разделите пять аликвот по 0,5 мл в пробирки.
Чтобы оценить влияние воздействия тромбоцитов на повышенные концентрации глюкозы, равные количества (0,5 мл) 0%, 5%, 12,5%, 25% и 50% глюкозы в воде смешивали с образцами тромбоцитов для получения 0%, 2,5%, 6,25%, 12,5% и 25% концентраций смеси глюкозы и перемешивали пробирки на шейкере для пробирок в течение 15 минут.ТАС каждой смеси анализировали в трех повторностях через 15 мин.Количество тромбоцитов (PLT), количество эритроцитов, MCV и MPV усредняли для каждой пробирки, а среднее количество тромбоцитов, количество эритроцитов, MCV и MPV рассчитывали для всех образцов PRP.
После того, как первая фаза сбора данных была завершена, мы заметили значительное увеличение объема тромбоцитов в тромбоцитах PRP после добавления D50W.Тромбоциты PRP не обязательно представляют все тромбоциты в крови, и среда PRP отличается от среды WB.Поэтому мы решили провести вторую фазу испытаний эффекта добавления D50W к цельной крови.
Для второго раунда мы выбрали размер выборки 30 на основе результатов первой серии, как описано в разделе «Анализ».В этой серии образцы крови сдавали 20 добровольцев (таблица 1).Цельную кровь (1,8 мл) набирали в шприц на 3 мл и антикоагулировали 0,2 мл 40% NaCl.Шприц с цельной кровью перемешивали в течение пяти секунд с помощью вихревого смесителя, и CBC анализировали в трех экземплярах.После анализа антикоагулированную кровь добавляли к 2 мл 50% глюкозы в шприце на 5 мл (конечная концентрация глюкозы составляла примерно 25% (D25) и помещали во встряхиваемую пробирку на 30 минут. Через 30 минут D25/CBC в шприцах WB анализировали в трех повторах. Количество тромбоцитов, количество эритроцитов, MCV и MPV на шприц усредняли, а среднее значение PLT, количество эритроцитов, MCV и MPV рассчитывали для каждого образца до и после добавление глюкозы.
Поскольку тромбоциты в цельной крови обычно подвергаются воздействию гипертонической глюкозы во время пролиферативной терапии глюкозой из-за минимально инвазивной инъекции, и не принято сочетать PRP с гипертонической глюкозой непосредственно перед инъекцией, мы решили изучить гипертоническую глюкозу в сочетании с WB в Разделе 1. Шаги третий и четвертый.На каждом этапе 20 добровольцев сдавали по 7-8 мл ACD-A (кислота, содержащая тринатрийцитрат (22,0 г/л), лимонную кислоту (8,0 г/л) и глюкозу (24,5 г/л), раствор декстрозы цитрат) в качестве антикоагулянтов крови (табл. 1).Только смеси глюкозы более 12,5% использовались для определения порогового процента, связанного с увеличением MPV.На третьем этапе в пробирку помещают 1 мл крови.Затем перемешайте кровь на вихревом смесителе в течение 10 секунд, добавив в пробирку 1 мл 30% глюкозы, 40% глюкозы или 50% глюкозы, чтобы получить конечную концентрацию глюкозы 15%, 20% и 25% соответственно.Образцы крови с глюкозой анализировали на CBC сразу после смешивания и повторяли каждые две минуты в течение 30 минут.
Во время начального смешивания добавление гипертонической глюкозы 1:1 и WB или PRP подвергает тромбоциты воздействию концентраций выше 25% в течение нескольких секунд.На четвертом этапе для оценки эффекта гипертонической глюкозы с минимальными начальными пиковыми концентрациями и проверки верхнего предела эффекта глюкозы мы добавляли лишь небольшое количество крови к D25W или D50W.Поместите 1 мл D25W или D50W в пробирку и добавьте 0,2 мл WB, встряхивая образец в течение 10 секунд.В этих случаях кровь подвергалась воздействию глюкозы в концентрации примерно на 20% выше конечной концентрации, а не на 50% выше конечной концентрации, как в Фазе 3, в результате чего конечные концентрации глюкозы составляли 20,8% и 41,6%.Смешанные образцы анализировали с тем же интервалом времени, что и на шаге 3.
На первом этапе каждой серии разведений глюкозы отбирали 30 образцов, поскольку это был подходящий размер образца для пилотного исследования [9].В конце каждой фазы (включая первую фазу) оцените адекватность размера выборки, используя формулу, используемую для определения размера выборки, необходимого для оценки среднего значения непрерывной переменной результата в одной совокупности.Формула n = Z2 x SD2/E2.В этом уравнении Z — это Z-показатель, SD — стандартное отклонение, а E — желаемая ошибка [10].Наша альфа равна 0,05, что соответствует значению Z, равному 1,96, и мы ожидаем ошибку 5 (в процентах).Следовательно, мы находим n = (1,962 x SD2)/52.Результаты показали, что размер выборки, необходимый для каждого этапа, был меньше, чем фактическое количество собранных.
Во время периодов 1, 3 и 4 с использованием более чем одной концентрации глюкозы влияние различных концентраций глюкозы анализировали путем сравнения фракционного изменения между временем 0 и каждым последующим временем (фаза 1 через 15 минут, период 3 через 15 минут).и четыре в 15 секунд, затем каждые две минуты.) Скорость изменения для каждого периода времени сравнивалась с использованием U-критерия Манна-Уитни, поскольку данные не следовали нормальному распределению, как определено критерием нормальности Шапиро-Уилка.Поскольку на первом, третьем и четвертом этапах (всего пять) был выполнен анализ 1-к-1 нескольких групп (пяти), была выполнена коррекция Бонферрони, чтобы отрегулировать желаемое значение альфа до ≤0,01, но не ≤0,05.
Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы и увеличение MPV в тромбоцитах PRP при концентрации декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось в 1-5 раз по сравнению с исходной цельной кровью, в зависимости от метода (не показано). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы и увеличение MPV в тромбоцитах PRP при концентрации декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось от концентрации от одного до пяти раз по сравнению с исходной цельной кровью, в зависимости от метода (не показано). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы и увеличение MPV в тромбоцитах PRP при концентрации декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось в 1-5 раз по сравнению с исходной цельной кровью, в зависимости от метода (не выявлено). Снижение количества тромбоцитов при всех гипертонических концентрациях декстрозы и увеличение MPV в тромбоцитах PRP при концентрации декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось в 1-5 раз по сравнению с исходным уровнем цельной крови, в зависимости от метода (не показано). ).在> 12,5%基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法而异（未描述）。 При концентрации глюкозы > 12,5% высокая концентрация глюкозы снижает количество крови, PRP увеличивает MPV крови: по сравнению с 与基线全血 количество PRP крови увеличивается от 1 до 5 раз по сравнению с концентрацией (не описано). При концентрации >12,5%, все концентрации, гипертоническая скорость, повышение количества тромбоцитов, увеличение MPV в тромбоцитах, PRP: количество тромбоцитов, PRP, увеличивалось от 1- до 5-кратных концентраций по сравнению с исходными концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (не выявлено). При концентрации глюкозы >12,5% все гипертензивные концентрации глюкозы снижали количество тромбоцитов и повышали СОК в тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось в 1-5 раз по сравнению с исходными концентрациями в цельной крови, в зависимости от метода (как описано).На рисунке 1 показано, что количество тромбоцитов уменьшилось почти на 75% после разведения в воде и на 20-30% после 15-минутного разведения с различными концентрациями глюкозы по сравнению с исходным уровнем PRP и разведением 1:1 с поправкой на объем (1-k1 с коррекцией объема).k -1 разведение).1 разведение).
Количество клеток в каждом разведении выражается как часть исходного числа до разведения.
MPV минимально снижался при производстве PRP, без дальнейшего изменения концентраций разведения до 12,5% в воде или глюкозе (включая 25% смеси PRP с глюкозой) и увеличивался более чем на 20% после разведения в 50% растворе глюкозы (рис. 2).).Напротив, эритроциты не показали значительных изменений в объеме при любом разведении, кроме H2O.
Средний объем клеток в каждом разведении выражается в процентах от исходного объема до разведения.
Аналогичное, но менее выраженное снижение числа тромбоцитов и увеличение ССС наблюдались при РМЖ, подвергнутом воздействию 50% глюкозы (для рецептуры с 25% глюкозой).В таблице 2 сравниваются количество клеток и объемы клеток в цельной крови, разведенной в 50% декстрозе, с данными фазы 1 PRP, разведенной в 50% декстрозе.Изменения количества эритроцитов и MCV эритроцитов не были очевидными и не были в центре нашего внимания.
SD = стандартное отклонение, MD = средняя разница между группами, SE = стандартное отклонение средней разницы, RBC = эритроциты, PLT = тромбоциты, PRP = богатая тромбоцитами плазма, WB = цельная кровь
После добавления D50W к WB потеря тромбоцитов с поправкой на процентное разведение составила 7,7% (310±73 против 286±96) по сравнению с 17,8% для разведения PRP в D50W (664±348 против 544±277).MPV WB увеличился на 16,8% (с 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6), а MPV PRP увеличился на 26% (9,2 ± 0,8 против 11,6 ± 0,7). Хотя средние различия как в снижении количества тромбоцитов, так и в увеличении СЦК были значительно больше при PRP, изменения в снижении количества тромбоцитов в пределах WB были почти значимыми (с 310 ± 73 до 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), а увеличение MPV было значительным (с 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Хотя средние различия как в снижении количества тромбоцитов, так и в увеличении СЦК были значительно больше при PRP, изменения в снижении количества тромбоцитов в пределах WB были почти значимыми (с 310 ± 73 до 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), а увеличение MPV было значительным (с 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Хотя средние различия как в снижении количества тромбоцитов, так и в повышении ССР были значительно выше при использовании PRP, изменения в снижении количества тромбоцитов в пределах WB были почти значимыми (от 310 ± 73 до 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).увеличение MPV было (от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). прирост MPV был достоверным (с 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB 内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 · 286 ± 96 (-7,7%)；p = 0,06）和MPV 的增加是显着的（10,1 ± 0,5 · 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001 ）。尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 但 内血小板 计数 减少的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 · 286 ± 96 (-7,7%) ； p = 0,06 · 和MPV 的增加是显着的（10,1 ± 0,5 · 11,8 ± 0. 6 (+16,8) р < 0,001).Изменение снижения количества тромбоцитов в WB было почти значимым (с 310 ± 73 до 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), хотя PRP имела значительно большие средние различия в снижении количества тромбоцитов и увеличении MPV.и увеличение MPV было значительным.(от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001).
Конечная концентрация 20% глюкозы требовалась, чтобы увидеть значительное изменение MPV, но изменение MPV было более выраженным при конечной концентрации 25%.Потеря тромбоцитов стабилизировалась после первоначального снижения.Мы отметили начальное резкое снижение ЦСС, однако ЦСС быстро восстанавливался при конечной концентрации глюкозы 25%, что было значительно выше уровней ЦСС, наблюдаемых при конечных концентрациях глюкозы 20% и 15% (рис. 3 и слева от табл. 3; заштрихованные прямоугольники).указать p-значения ≤ альфа с поправкой Бонферрони 0,01).Также имело место начальное резкое падение числа PLT, наблюдаемое в начальной фазе 0-15 с, а затем остававшееся стабильным (от 15 с до 30 мин; слева от табл. 4).
Добавление различных концентраций глюкозы к цельной крови приводило к начальному быстрому снижению MPV с последующим восстановлением в зависимости от концентрации более чем на 20%.Легенда показывает концентрацию глюкозы после разбавления.Д15, Д20 и Д25 проводили в разведении 1:1.Д21 и Д41 проводили в разведении 1:5.
В таблице 4 показано изменение количества тромбоцитов при разведении в гипертонической глюкозе.Мы наблюдали дозозависимую зависимость между немедленным падением числа PLT при разведении 1:1 и при разведении 1:5.Сравнивая разведения 1:1 как единую группу с разведениями 1:5, в группе 1:1 наблюдалось немедленное снижение количества тромбоцитов меньше, чем в группе 1:5 66±48000 (23%) по сравнению с 99±69000 (37%)., р = 0,014) в группе 1:5.После начального падения в первой точке измерения число тромбоцитов в процентах от глюкозы стабилизировалось (рис. 4).
При добавлении цельной крови к глюкозе в соотношении 1:1 количество тромбоцитов снижается примерно на 25%.Однако при добавлении цельной крови в соотношении 1:5 снижение было намного больше – около 50%.
41% глюкоза повышала MPV быстрее и более резко, чем 25% или 21%.Результаты MPV показаны на рисунке 3. При всех других разведениях не наблюдалось немедленного начального снижения MPV после добавления 50% глюкозы.При использовании 25% глюкозы (концентрация глюкозы 20,8% при конечном разведении) изменение СОК было сравнимо с изменением 20% глюкозы при разведении 1:1 (рис. 3).Хотя изменения MPV изначально были больше при смешанной концентрации 41%, чем при 25%, разница в MPV между 41% и 25% через 16 минут перестала быть значимой (таблица 3, справа).Также интересно, что 25%-ная глюкоза увеличивала MPV более эффективно, чем 20,8%.
Это исследование in vitro частично подтвердило нашу гипотезу. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю аккомодацию тромбоцитов до экстремального гипертонуса и значительное повышение MPV в ответ на гипертоническую концентрацию декстрозы > 25%. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю аккомодацию тромбоцитов до экстремального гипертонуса и значительное повышение MPV в ответ на гипертоническую концентрацию декстрозы > 25%. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю аккомодацию тромбоцитов до повышенного гипертонуса и значительное повышение MPV в ответ на гипертоническую совокупность декстрозы > 25%. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов декстрозой, быструю аккомодацию тромбоцитов до экстремального гипертонуса и значительное увеличение MPV в ответ на гипертонические уровни декстрозы> 25%.25 % 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 极端 高渗 ， 以及 响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями с глюкозой, быструю адаптацию тромбоцитов к повышенному гипертонусу и значительное увеличение MPV в ответ на наличие гипертонической гипертонической болезни > 25%. Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями с глюкозой, быструю адаптацию тромбоцитов к экстремальному гипертонусу и значительное увеличение MPV в ответ на гипертоническую глюкозу > 25%.Первоначальное увеличение было максимальным при воздействии глюкозы 41,6%, но увеличение MPV приближалось к воздействию глюкозы 25% примерно через 20 минут после воздействия.
На концентрацию тромбоцитов влияет глюкоза.Мы заметили, что количество PLT снижалось при всех разведениях глюкозы.Резкое падение количества тромбоцитов в H2O (0%) разведениях серии PRP может быть связано с осмотическим лизисом.В качестве альтернативы, это может быть артефакт, вызванный слипанием тромбоцитов, но это контрастирует с отсутствием изменения MPV при этом разведении.Это открытие означает, что некоторые тромбоциты очень чувствительны к гипоосмолярности.
Во всех разведениях глюкозы 1:1 количество PLT снижалось на 20-30%, даже на D5W (гипотоническом при 252 мОсм), что может свидетельствовать о специфическом неосмотическом действии глюкозы, так как и PLT, и MPV оставались неизменными при трехкратном увеличении концентрации.глюкоза.от D5W до D25W.Фактически концентрации PLT имели тенденцию к небольшому увеличению с увеличением осмолярности.
Снижение PLT между разведениями 1:1 и 1:5 означает, что эффект растворения зависит от начальной и конечной концентрации глюкозы.Если бы это зависело только от начальной концентрации, то можно было бы ожидать увидеть разницу в снижении PLT между концентрациями 1:1.Но мы этого не делаем.Если эффект лизиса зависит только от конечной концентрации глюкозы, то мы не ожидаем большой разницы между 20% разведением 1:1 и 20,8% разведением 1:5.И все же мы это сделали.
Если потеря тромбоцитов происходит вследствие лизиса тромбоцитов, образуется частичный лизат, после чего во внеклеточную среду высвобождаются цитокины и факторы роста.Несколько исследований показали, что лизат тромбоцитов почти так же эффективен, как PRP, в качестве раствора для пролиферации [11].Было показано, что PRP сама по себе является эффективным решением для лечения пролиферации [12-14].
Неактивные тромбоциты циркулируют в виде диска, укрепленного несколькими внутренними структурами.Во время активации они принимают более сферическую форму или форму амебы, что приводит к увеличению объема.Увеличение объема требует увеличения площади поверхности, что является результатом экструзии системы открытых канальцев (OCS) и добавления экзоцитарных гранул к мембране.Остается определить, включает ли увеличение MPV, вызванное гипертонической глюкозой, один или оба этих механизма, но если последнее, то увеличение MPV будет указывать на дегрануляцию.
Это исследование показало, что воздействие высоких концентраций глюкозы на PRP или тромбоциты цельной крови приводило к увеличению MPV в течение 15 минут при концентрации глюкозы 25% и 41,6% соответственно.
Увеличение MPV тромбоцитов может быть связано с дилатацией окружающих клубков микротрубочек в ответ на приток кальция.Лю и др.Было показано, что глюкоза опосредует приток кальция через канал тромбоцитов TRPC6 [6].Наша гипотеза состоит в том, что глюкоза вызывает расслабление клубков микротрубочек, что приводит к увеличению MPV и сенсибилизации и/или активации тромбоцитов.Однако, судя по нашим результатам, это только часть истории.В наших тестах ни одна концентрация ниже D25W не приводила к увеличению MPV.Учитывая, что мы не тестировали воздействие концентраций глюкозы от 12,5% до 25%, наши результаты фазы 1 предполагают, что в этом диапазоне концентраций глюкозы может существовать порог, который приводит к увеличению MPV.Дальнейшее тестирование на стадиях 3 и 4 показало, что 20-25% глюкозы является порогом для этого, но остается неясным, почему.
Мы также наблюдали снижение MPV примерно на 9% после центрифугирования.Неясно, связано ли это снижение MPV с более крупными и плотными тромбоцитами, попавшими в слой эритроцитов центрифуги.Это наблюдение может быть важным для клиницистов, поскольку оно может означать, что тромбоциты PRP представляют собой меньшую и менее плотную подгруппу тромбоцитов WB.
В предыдущем исследовании мы показали, что подготовка PRP ручными методами недорога [8].Если глюкоза сенсибилизирует тканевые тромбоциты или PRP, делая их более восприимчивыми к активации, или если PRP вырабатывается со свойствами частичного лизата, это может усилить регенерацию и снизить потребность в терапии.Таким образом, комбинация PRP и высококонцентрированной глюкозы может быть более рентабельной, чем только PRP или глюкоза.
Наше исследование имеет несколько недостатков.Во-первых, мы используем PRP, полученный несколькими различными методами.Это может привести к противоречивым результатам.Во-вторых, мы не смогли провести биохимический анализ ни одного из наших образцов, чтобы более точно определить, произошла ли активация тромбоцитов.Мы хотели бы измерить P-селектин, тромбоцитарный фактор 4, агрегаты моноцитарных тромбоцитов или другие маркеры активации тромбоцитов, чтобы лучше понять степень или наличие дегрануляции альфа-гранул, но это выходит за рамки данного исследования.В-третьих, мы не смогли подтвердить с помощью электронной микроскопии или других методов, что увеличение MPV в тромбоцитах, подвергшихся воздействию глюкозы, было связано с влиянием на клубки микротрубочек.
Смеси WB или PRP с 25% глюкозой увеличивали MPV, сигнализируя о начале активации тромбоцитов, хотя это исследование не продемонстрировало прогрессирования агрегации или дегрануляции.Гипертоническая смесь глюкозы приводила к потере тромбоцитов, что, возможно, представляло литический эффект.Частичная активация или лизис тромбоцитов может вызвать регенерацию тканей после инъекции тромбоцитов.Неясно, к каким клиническим последствиям могут привести эти изменения.Дальнейшие исследования продемонстрировали более точные измерения активации или лизиса и оценили различные клинические эффекты гипертонических смесей глюкозы с WB или PRP.
Глюкозопролиферативная терапия — это простая и недорогая регенеративная терапия, которая быстро расширяется и поддерживает клинические исследования.Это исследование предлагает физиологический механизм, который, если он подтвердится, может помочь нам понять часть регенеративного механизма пролиферативной терапии.
Биомедицинская и медицинская информатика в Университете Миссури, Медицинская школа Канзас-Сити, Канзас-Сити, США
Субъекты-люди: все участники этого исследования дали или не дали согласие.Международное общество клеточной медицины выдало одобрение ICMS-2017-003.Следующий протокол был одобрен для дальнейшего использования Институциональным наблюдательным советом Международного общества клеточной медицины: Название: Расчет выхода препарата из богатой тромбоцитами плазмы на основе исходного количества тромбоцитов в общем анализе крови.Субъекты-животные: Все авторы подтвердили, что в этом исследовании не участвовали животные или ткани.Конфликт интересов: В соответствии с Единой формой раскрытия информации ICMJE все авторы заявляют следующее: Информация об оплате/услугах: Все авторы заявляют, что они не получали финансовой поддержки от какой-либо организации для представленной работы.Финансовые отношения: Все авторы заявляют, что в настоящее время или в течение последних трех лет они не имеют финансовых отношений с какой-либо организацией, которая может быть заинтересована в представленной работе.Другие отношения: Все авторы заявляют, что нет никаких других отношений или действий, которые могут повлиять на представленную работу.
Харрисон Т.Э., Боулер Дж., Ривз К. и др.(17 мая 2022 г.) Влияние глюкозы на количество и объем тромбоцитов: значение для регенеративной медицины.Излечение 14(5): e25081.дои: 10.7759/cureus.25081
© Copyright 2022 Harrison et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая на условиях лицензии Creative Commons Attribution License CC-BY 4.0.Разрешается неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания оригинального автора и источника.