«Никогда не сомневайтесь, что небольшая группа вдумчивых, преданных своему делу граждан может изменить мир. На самом деле, она там единственная».
Миссия Cureus — изменить устоявшуюся модель медицинских публикаций, в которой подача исследовательских работ может быть дорогостоящим, сложным и отнимающим много времени процессом.
Обогащенная тромбоцитами плазма/PRP, регенерация тканей, активация тромбоцитов, глюкозопролиферативная терапия, тромбоциты, пролиферативная терапия
Ссылайтесь на эту статью как: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (17 мая 2022 г.) Влияние глюкозы на количество и объем тромбоцитов: последствия для регенеративной медицины. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
Обогащенная тромбоцитами плазма (PRP) и гипертонические растворы глюкозы обычно используются для инъекций в регенеративной медицине, иногда вместе. Влияние гипертонической глюкозы на лизис и активацию тромбоцитов ранее не сообщалось. Мы проверили влияние повышенных концентраций глюкозы на количество тромбоцитов и эритроцитов, а также на объемы клеток в PRP и цельной крови (WB). Быстрое частичное снижение количества тромбоцитов наблюдалось со всеми смесями глюкозы, смешанными с PRP или цельной кровью, что согласуется с частичным лизисом. По истечении первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что свидетельствует о быстрой адаптации остаточных тромбоцитов к экстремальной (>2000 мОсм) гипертонии. По истечении первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что свидетельствует о быстрой адаптации остаточных тромбоцитов к экстремальной (>2000 мОсм) гипертонии. После первых минут количества тромбоцитов остается стабильным, что свидетельствует о периодической аккомодации остаточных тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. По истечении первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю адаптацию остаточных тромбоцитов к экстремальной (>2000 мОсм) гипертонии.第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 мосм）高渗状态。2000 мОсм). После первых минут количество тромбоцитов остается стабильным, что свидетельствует о периодической адаптации остаточных тромбоцитов к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. По истечении первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю адаптацию остаточных тромбоцитов к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию.Концентрации глюкозы 25% и выше привели к значительному увеличению среднего объема тромбоцитов (MPV), что указывает на раннюю стадию активации тромбоцитов. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы определить, происходит ли лизис или активация тромбоцитов и может ли инъекция гипертонической глюкозы отдельно или в сочетании с PRP обеспечить дополнительную клиническую пользу.
В 1950-х годах американский хирург Джордж Хакетт обнаружил, что он может навсегда облегчить боль в суставах и спине у многих пациентов, вводя пролиферативный раствор в сухожилия и связки. Его эксперименты на кроликах показали, что лечение, которое он назвал пролиферативной терапией, привело к увеличению и укреплению сухожилий. Гистологические исследования подтвердили, что во время этого процесса вырабатывается новый коллаген [1].
В течение первых нескольких десятилетий было испробовано много различных решений по распределению. К 1990-м годам большинство практиков считали высокие концентрации глюкозы наиболее безопасным и эффективным методом. Однако механизм действия остается неясным.
В 20 веке после работы Хакетта было проведено немного клинических исследований. Однако в 2000-х годах интерес к пролиферативной терапии возобновился, и было завершено несколько успешных клинических испытаний для лечения боли в пояснице [2], остеоартрита колена [3] и латерального эпикондилита [4].
Регенерация тканей требует участия стволовых клеток. Поэтому высокие концентрации глюкозы должны каким-то образом вызывать миграцию, репликацию и дифференциацию стволовых клеток. Мы предполагаем, что тромбоциты могут действовать как мессенджеры и что высокие концентрации глюкозы могут заставлять тромбоциты высвобождать цитокины и факторы роста, тем самым способствуя регенеративным процессам, особенно миграции стволовых клеток в области с высокой концентрацией глюкозы.
Активация тромбоцитов всегда предшествует повышению внутриклеточного кальция [5]. Лю и др. в 2008 году показали, что высокие уровни глюкозы увеличивают активность каналов транзиторного рецепторного потенциала канонического типа 6 (TRPC6) в плазматической мембране, что приводит к притоку ионов кальция в тромбоциты [6]. Другое исследование показало, что воздействие ионов кальция на краевую зону микротрубочек вызывает релаксацию, расширение и деформацию краевой зоны, что, в свою очередь, вызывает изменение формы с дисковой на сферическую, что приводит к среднему объему тромбоцитов (MPV) [7].
Наша гипотеза в этом исследовании заключается в том, что воздействие высоких концентраций глюкозы на тромбоциты влияет на краевую зону микротрубочек и внутриклеточную среду, что приводит к увеличению MPV.
Все участники подписали форму информированного согласия после объяснения деталей исследования и до получения образцов. В этом исследовании использовались только образцы PRP с гематокритом более 2%, чтобы можно было включить для сравнения количество эритроцитов (эритроцитов) и средний корпускулярный объем эритроцитов (MCV).
Исследование проводилось в четыре фазы, первая фаза была PRP, а остальные фазы были цельной кровью (таблица 1). Как описано ранее [8], все относительные центробежные силы (RCF, g-сила) рассчитывались от средней точки (Rmid, в см) столба крови в центрифужном шприце. Мы решили использовать MPV в качестве маркера сенсибилизации тромбоцитов и количество тромбоцитов в качестве индикатора потенциального лизиса тромбоцитов, оба из которых можно легко измерить на стандартных гематологических анализаторах.
На первом этапе 47 добровольцев сдали образцы крови — одну пробирку с этилендиаминтетрауксусной кислотой (ЭДТА) и один образец цельной крови PRP (с антикоагуляцией цитратом натрия (NaCl, 3%)) (таблица 1). Немедленно поместите качалку в пробирку. Общий анализ крови (ОАК) был выполнен на образцах ЭДТА в трех повторностях, а образцы NaCl были проанализированы в трех повторностях для анализа ОАК, а затем PRP была приготовлена ​​различными методами, описанными выше [8]. Все образцы PRP были приготовлены центрифугированием при 900–1000 g. Смешайте каждый образец PRP на вихревом смесителе в течение 5–10 секунд, затем разделите пять аликвот по 0,5 мл на пробирки.
Чтобы оценить влияние воздействия тромбоцитов на повышенные концентрации глюкозы, равные количества (0,5 мл) 0%, 5%, 12,5%, 25% и 50% глюкозы в воде смешивали с образцами тромбоцитов для получения 0%, 2,5%, 6,25%, 12,5% и 25% концентраций смеси глюкозы и перемешивали пробирки на шейкере для пробирок в течение 15 минут. TAC каждой смеси анализировали в трех повторностях через 15 минут. Количество тромбоцитов (PLT), количество эритроцитов, MCV и MPV усредняли для каждой пробирки, а среднее количество тромбоцитов, количество эритроцитов, MCV и MPV рассчитывали для всех образцов PRP.
После завершения первой фазы сбора данных мы заметили значительное увеличение объема тромбоцитов в тромбоцитах PRP после добавления D50W. Тромбоциты PRP не обязательно представляют все тромбоциты в крови, а среда PRP отличается от среды WB. Поэтому мы решили провести вторую фазу испытаний эффекта добавления D50W к цельной крови.
Для второго раунда мы выбрали размер выборки 30 на основе результатов первой серии, как описано в разделе «Анализ». В этой серии 20 добровольцев сдали образцы крови (таблица 1). Цельную кровь (1,8 мл) набирали в шприц объемом 3 мл и добавляли антикоагулянт 0,2 мл 40% NaCl. Шприц с цельной кровью смешивали в течение пяти секунд с помощью вихревого миксера, а CBC анализировали в трех повторностях. После анализа антикоагулированную кровь добавляли к 2 мл 50% глюкозы в шприце объемом 5 мл (конечная концентрация глюкозы составляла приблизительно 25% (D25) и помещали в пробирку для встряхивания на 30 минут. Через 30 минут D25/CBC в шприцах WB анализировали в трех повторностях. Количество тромбоцитов, количество эритроцитов, MCV и MPV на шприц усредняли, и для каждого образца до и после добавления глюкозы рассчитывали средние значения PLT, количества эритроцитов, MCV и MPV.
Поскольку тромбоциты в цельной крови обычно подвергаются воздействию гипертонической глюкозы во время пролиферативной глюкозотерапии из-за минимально инвазивной инъекции, и не принято комбинировать PRP с гипертонической глюкозой непосредственно перед инъекцией, мы решили изучить гипертоническую глюкозу в сочетании с WB в Разделе 1. Шаги третий и четвертый. На каждом этапе 20 добровольцев сдавали 7-8 мл ACD-A (кислота, содержащая тринатрийцитрат (22,0 г/л), лимонную кислоту (8,0 г/л) и глюкозу (24,5 г/л), раствор декстрозы цитрата) для антикоагулянтов крови (таблица 1). Только смеси глюкозы более 12,5% использовались для определения порогового процента, связанного с увеличением MPV. На третьем этапе 1 мл крови помещают в пробирку. Затем смешайте кровь на вихревом миксере в течение 10 секунд, добавив в пробирку 1 мл 30% глюкозы, 40% глюкозы или 50% глюкозы, чтобы получить конечную концентрацию глюкозы 15%, 20% и 25% соответственно. Образцы крови на глюкозу анализировались для CBC сразу после смешивания и повторялись каждые две минуты в течение 30 минут.
Во время начального смешивания добавление гипертонической глюкозы 1:1 и WB или PRP подвергает тромбоциты воздействию концентраций выше 25% в течение нескольких секунд. На четвертом этапе, чтобы оценить эффект гипертонической глюкозы с минимальными начальными пиковыми концентрациями и проверить верхний предел эффекта глюкозы, мы добавили только небольшое количество крови к D25W или D50W. Поместите 1 мл D25W или D50W в пробирку и добавьте 0,2 мл WB, встряхивая образец в течение 10 секунд. В этих случаях кровь подвергалась воздействию глюкозы в концентрации примерно на 20% выше конечной концентрации, а не на 50% выше конечной концентрации, как в Фазе 3, в результате чего конечные концентрации глюкозы составили 20,8% и 41,6%. Смешанные образцы анализировались с тем же интервалом времени, что и на этапе 3.
На первом этапе каждой серии разбавления глюкозы было взято 30 образцов, так как это был подходящий размер выборки для пилотного исследования [9]. В конце каждой фазы (включая первую фазу) оцените адекватность размера выборки, используя формулу, используемую для определения размера выборки, необходимого для оценки среднего значения непрерывной переменной результата в одной популяции. Формула n = Z2 x SD2 /E2. В этом уравнении Z — это Z-оценка, SD — это стандартное отклонение, а E — желаемая ошибка [10]. Наше значение альфа равно 0,05, что соответствует значению Z 1,96, и мы ожидаем ошибку 5 (в процентах). Следовательно, мы решаем для n = (1,962 x SD2)/52. Результаты показали, что размер выборки, необходимый для каждого этапа, был меньше фактического собранного числа.
В течение периодов 1, 3 и 4 с использованием более чем одной концентрации глюкозы, эффект различных концентраций глюкозы анализировался путем сравнения дробного изменения между временем 0 и каждым последующим временем (фаза 1 на 15 минутах, период 3 на 15 минутах). и четыре на 15 секунд, затем каждые две минуты.) Скорости изменения для каждого периода времени сравнивались с использованием U-критерия Манна-Уитни, поскольку данные не следовали нормальному распределению, как определено тестом нормальности Шапиро-Уилка. Поскольку анализ 1 к 1 нескольких групп (пять) был выполнен на первом, третьем и четвертом этапах (всего пять), была выполнена поправка Бонферрони для корректировки желаемого значения альфа до ≤0,01, но не ≤0,05.
Снижение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы и увеличение MPV в тромбоцитах PRP при концентрации декстрозы >12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от одного до пяти раз по сравнению с исходной концентрацией цельной крови, в зависимости от метода (не показано). Снижение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы и увеличение MPV в тромбоцитах PRP при концентрации декстрозы >12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от одного до пяти раз по сравнению с исходной концентрацией цельной крови, в зависимости от метода (не показано). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы и увеличение MPV тромбоцитов PRP при декстрозе > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличивалось в 1-5 раз по сравнению с исходной цельной кровью, в зависимости от метода (не показано). Снижение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы и увеличение MPV в тромбоцитах PRP при концентрации декстрозы >12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличивалось в 1-5 раз по сравнению с исходной цельной кровью в зависимости от метода (не показано). ).在> 12,5%增加:与基线全血相比, PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍,因方法而异（未描述). При концентрации глюкозы >12,5% высокая концентрация глюкозы снижает формулу крови, MPV крови PRP увеличивается: по сравнению с 与基线全血 формула крови PRP увеличивается от 1 до 5 раз по сравнению с концентрацией (не описано). При концентрации глюкозы >12,5% все компоненты гипертонической глюкозы снижают количество тромбоцитов, а MPV повышает тромбоциты PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от 1- до 5-кратных концентраций по сравнению с исходными концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (не важно). При концентрации глюкозы >12,5% все гипертензивные концентрации глюкозы снижали количество тромбоцитов и увеличивали MPV в тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось в 1–5 раз по сравнению с исходными концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (как описано).На рисунке 1 показано, что количество тромбоцитов снизилось почти на 75% после разведения в воде и на 20-30% после 15 минут разведения различными концентрациями глюкозы по сравнению с исходным PRP и разбавлением 1:1 с поправкой на объем (1-k1 с поправкой на объем). k -1 разведение).1 разведение).
Количество клеток в каждом разведении выражается как доля от исходного количества до разбавления.
MPV снизился минимально во время производства PRP, без дальнейшего изменения концентраций разбавления до 12,5% в воде или глюкозе (включая 25% смеси PRP с глюкозой) и увеличился более чем на 20% после разбавления в 50% растворе глюкозы (рис. 2). Напротив, эритроциты не показали значительного изменения объема при любом разбавлении, кроме H2O.
Средний объем клеток в каждом разведении выражается в процентах от исходного объема до разбавления.
Аналогичное, но менее выраженное снижение количества тромбоцитов и увеличение CVR наблюдалось у BC, подвергшихся воздействию 50% глюкозы (для приготовления с 25% глюкозой). Таблица 2 сравнивает количество клеток и объем клеток в цельной крови, разведенной в 50% декстрозе, с данными фазы 1 PRP, разведенной в 50% декстрозе. Изменения количества эритроцитов и MCV эритроцитов не были очевидными и не были в центре нашего внимания.
SD = стандартное отклонение, MD = средняя разница между группами, SE = стандартное отклонение средней разницы, RBC = эритроциты, PLT = тромбоциты, PRP = богатая тромбоцитами плазма, WB = цельная кровь
После добавления D50W к WB процент потери тромбоцитов с поправкой на разведение составил 7,7% (310±73 против 286±96) по сравнению с 17,8% для разведения PRP в D50W (664±348 против 544±277). MPV WB увеличился на 16,8% (с 10,1±0,5 до 11,8±0,6), тогда как MPV PRP увеличился на 26% (9,2±0,8 против 11,6±0,7). Хотя средние различия как в снижении количества тромбоцитов, так и в увеличении MPV были значительно больше при использовании PRP, изменения в снижении количества тромбоцитов в WB были почти значимыми (с 310 ± 73 до 286 ± 96 (-7,7%); p = .06), а увеличение MPV было значимым (с 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < .001). Хотя средние различия как в снижении количества тромбоцитов, так и в увеличении MPV были значительно больше при использовании PRP, изменения в снижении количества тромбоцитов в WB были почти значимыми (с 310 ± 73 до 286 ± 96 (-7,7%); p = .06), а увеличение MPV было значимым (с 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < .001).Хотя средние различия как в снижении количества тромбоцитов, так и в увеличении CVR были значительно больше при использовании PRP, изменения в снижении количества тромбоцитов в группе WB были почти значимыми (с 310 ± 73 до 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).увеличение MPV было последним (от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). увеличение MPV было значительным (с 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大, 但WB内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 · 286 ± 96 (-7,7%)；p = 0,06）和MPV的增加是显着的（10,1 ± 0,5 · 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < .001）.尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大, 但 但 内血小板 计数减少 的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%) ； p = 0,06）和MPV 的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Изменение в снижении количества тромбоцитов в пределах WB было почти значимым (с 310 ± 73 до 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), хотя PRP имел значительно большие средние различия в снижении количества тромбоцитов и увеличении MPV, а увеличение MPV было значимым.(от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Конечная концентрация глюкозы 20% потребовалась для того, чтобы увидеть значительное изменение MPV, но изменение MPV было более выраженным при конечной концентрации 25%. Потеря тромбоцитов стабилизировалась после начального снижения. Мы отметили первоначальное резкое снижение CVR, однако CVR быстро восстанавливался при конечной концентрации глюкозы 25%, что было значительно выше уровней CVR, наблюдаемых при конечных концентрациях глюкозы 20% и 15% (рис. 3 и слева от таблицы 3; затененные поля). указывают на значения p ≤ альфа с поправкой Бонферрони 0,01). Также наблюдалось начальное резкое падение числа PLT, наблюдаемое в начальной фазе 0-15 с, а затем остававшееся стабильным (от 15 с до 30 мин; слева от таблицы 4).
Добавление различных концентраций глюкозы к цельной крови привело к первоначальному быстрому снижению MPV с последующим восстановлением в зависимости от концентрации более чем на 20%. Легенда показывает концентрацию глюкозы после разбавления. D15, D20 и D25 были выполнены в разбавлении 1:1. D21 и D41 были выполнены в разбавлении 1:5.
Таблица 4 показывает изменение количества тромбоцитов при разведении в гипертонической глюкозе. Мы наблюдали дозозависимую связь между немедленным падением числа тромбоцитов при разведении 1:1 и при разведении 1:5. Сравнивая разведения 1:1 как одну группу с разведениями 1:5, группа 1:1 имела немедленное снижение количества тромбоцитов меньше, чем группа 1:5 66±48 000 (23%) против 99±69 000 (37%). , p = 0,014) в группе 1:5. После начального падения в первой точке измерения количество тромбоцитов в процентах от глюкозы стабилизировалось (рис. 4).
При добавлении цельной крови к глюкозе в соотношении 1:1 количество тромбоцитов снижается примерно на 25%. Однако при добавлении цельной крови в соотношении 1:5 снижение было гораздо больше — около 50%.
41% глюкозы увеличило MPV быстрее и более драматично, чем 25% или 21%. Результаты MPV показаны на рисунке 3. При всех других разведениях не наблюдалось немедленного начального снижения MPV после добавления 50% глюкозы. При использовании 25% глюкозы (концентрация глюкозы 20,8% при конечном разведении) изменение MPV было сопоставимо с изменением 20% глюкозы при разведении 1:1 (рис. 3). Хотя изменения MPV изначально были больше при 41% смешанной концентрации, чем при 25%, разница в MPV между 41% и 25% через 16 минут уже не была значительной (таблица 3, справа). Также интересно, что 25% глюкозы увеличило MPV более эффективно, чем 20,8%.
Это исследование in vitro частично подтвердило нашу гипотезу. Было показано, что возможен частичный лизис тромбоцитов под действием декстрозы, быстрая адаптация тромбоцитов к экстремальной гипертонии и значительный рост MPV в ответ на концентрацию гипертонической декстрозы > 25%. Было показано, что возможен частичный лизис тромбоцитов под действием декстрозы, быстрая адаптация тромбоцитов к экстремальной гипертонии и значительный рост MPV в ответ на концентрацию гипертонической декстрозы > 25%. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, циклическую аккомодацию тромбоцитов до экстремального гипертонуса и начало повышения MPV в ответ на гипертоническую устойчивость декстрозы > 25%. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов под действием декстрозы, быструю адаптацию тромбоцитов к экстремальной гипертонии и значительное увеличение MPV в ответ на гипертонические уровни декстрозы >25%.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解, 血小板快速适应极端高渗,以及响应> 25% могут быть использованы для MPV или MPV.。它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 极端 高渗 ， 以及响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями с глюкозой, схему адаптации тромбоцитов к экстремальному гипертонусу и увеличение MPV в ответ на стабильность гипертонической глюкозы > 25%. Он демонстрирует потенциальный частичный лизис тромбоцитов под действием смесей глюкозы, быструю адаптацию тромбоцитов к экстремальной гипертонии и значительное увеличение MPV в ответ на гипертоническую глюкозу >25%.Первоначальное увеличение было максимальным при воздействии 41,6% глюкозы, но увеличение MPV приблизилось к 25% воздействию глюкозы примерно через 20 минут после воздействия.
Концентрация тромбоцитов зависит от глюкозы. Мы заметили, что количество PLT уменьшалось при всех разведениях глюкозы. Резкое падение количества тромбоцитов в разведениях H2O (0%) серии PRP может быть связано с осмотическим лизисом. С другой стороны, это может быть артефактом, вызванным слипанием тромбоцитов, но это контрастирует с отсутствием изменения MPV при этом разведении. Это открытие означает, что некоторые тромбоциты очень чувствительны к гипоосмолярности.
Во всех разведениях глюкозы 1:1 количество PLT снижалось на 20-30%, даже при D5W (гипотоническом при 252 мОсм), что может указывать на специфический неосмотический эффект глюкозы, поскольку и PLT, и MPV оставались неизменными при трехкратном увеличении концентрации. глюкозы. от D5W до D25W. Фактически, концентрации PLT имели тенденцию к небольшому увеличению с увеличением осмолярности.
Уменьшение PLT между разведениями 1:1 и 1:5 означает, что эффект растворения зависит от начальной и конечной концентрации глюкозы. Если бы он зависел только от начальной концентрации, то можно было бы ожидать увидеть разницу в снижении PLT между концентрациями 1:1. Но мы этого не делаем. Если эффект лизиса зависит только от конечной концентрации глюкозы, то мы не ожидаем большой разницы между 20% разбавлением 1:1 и 20,8% разбавлением 1:5. И все же мы это сделали.
Если потеря тромбоцитов происходит из-за лизиса тромбоцитов, образуется частичный лизат, после чего цитокины и факторы роста высвобождаются во внеклеточную среду. Несколько исследований показали, что лизат тромбоцитов почти так же эффективен, как PRP, в качестве раствора для пролиферации [11]. Было показано, что PRP сама по себе является эффективным решением для лечения пролиферации [12-14].
Неактивные тромбоциты циркулируют в форме диска, укрепленного несколькими внутренними структурами. Во время активации они принимают более сферическую или амебовидную форму, что приводит к увеличению объема. Увеличение объема требует увеличения площади поверхности, что является результатом экструзии системы открытых канальцев (OCS) и добавления экзоцитарных гранул к мембране. Остается определить, включает ли увеличение MPV, вызванное гипертонической глюкозой, один или оба из этих механизмов, но если последний, то увеличение MPV будет указывать на дегрануляцию.
Это исследование показало, что воздействие высоких концентраций глюкозы на PRP или цельные тромбоциты крови приводило к увеличению MPV в течение 15 минут при концентрации глюкозы 25% и 41,6% соответственно.
Увеличение MPV тромбоцитов может быть связано с расширением окружающих клубков микротрубочек в ответ на приток кальция. Лю и др. Было показано, что глюкоза опосредует приток кальция через канал тромбоцитов TRPC6 [6]. Наша гипотеза заключается в том, что глюкоза вызывает расслабление клубков микротрубочек, что приводит к увеличению MPV и сенсибилизации и/или активации тромбоцитов. Однако, судя по нашим результатам, это только часть истории. В наших тестах ни одна концентрация ниже D25W не приводила к увеличению MPV. Учитывая, что мы не тестировали воздействие концентраций глюкозы между 12,5% и 25%, наши результаты фазы 1 предполагают, что в этом диапазоне концентраций глюкозы может быть порог, который приводит к увеличению MPV. Дальнейшее тестирование на этапах 3 и 4 показало, что 20-25% глюкозы, по-видимому, является порогом для этого, но остается неясным, почему.
Мы также наблюдали снижение MPV примерно на 9% после центрифугирования. Неясно, связано ли это снижение MPV с более крупными и плотными тромбоцитами, захваченными слоем RBC центрифуги. Это наблюдение может быть важным для врачей, поскольку оно может означать, что тромбоциты PRP являются более мелкой и менее плотной подгруппой тромбоцитов WB.
В предыдущем исследовании мы показали, что приготовление PRP ручными методами является недорогим [8]. Если глюкоза сенсибилизирует тромбоциты тканей или PRP, делая их более восприимчивыми к активации, или если PRP производится с частичными свойствами лизата, это может усилить регенерацию и снизить потребность в терапии. Таким образом, сочетание PRP и высококонцентрированной глюкозы может быть более экономически эффективным, чем PRP или глюкоза по отдельности.
В нашем исследовании есть несколько недостатков. Во-первых, мы используем PRP, полученный несколькими разными методами. Это может привести к противоречивым результатам. Во-вторых, мы не смогли провести биохимический анализ ни одного из наших образцов, чтобы более точно определить, произошла ли активация тромбоцитов. Мы хотели бы измерить P-селектин, тромбоцитарный фактор 4, моноцитарные агрегаты тромбоцитов или другие маркеры активации тромбоцитов, чтобы лучше понять степень или наличие дегрануляции альфа-гранул, но это выходит за рамки данного исследования. В-третьих, мы не смогли подтвердить с помощью электронной микроскопии или других методов, что увеличение MPV в тромбоцитах, подвергшихся воздействию глюкозы, было вызвано воздействием на клубки микротрубочек.
Смеси WB или PRP с 25% глюкозы увеличили MPV, сигнализируя о начале активации тромбоцитов, хотя это исследование не продемонстрировало прогрессирования агрегации или дегрануляции. Гипертоническая глюкозная смесь привела к потере тромбоцитов, что, возможно, представляет собой литический эффект. Частичная активация или лизис тромбоцитов может вызвать регенерацию тканей после инъекции тромбоцитов. Неясно, к каким клиническим последствиям могут привести эти изменения. Дальнейшие исследования продемонстрировали более точные измерения активации или лизиса и оценили различные клинические эффекты гипертонических глюкозных смесей с WB или PRP.
Пролиферативная терапия глюкозой — это простая и недорогая регенеративная терапия, которая быстро расширяется и поддерживает клинические исследования. Это исследование предполагает физиологический механизм, который, если подтвердится, может помочь нам понять часть регенеративного механизма пролиферативной терапии.
Биомедицинская и медицинская информатика в Университете Миссури, Медицинская школа Канзас-Сити, Канзас-Сити, США
Испытуемые-люди: Все участники данного исследования дали или не дали согласие. Международное общество клеточной медицины выдало одобрение ICMS-2017-003. Следующий протокол был одобрен для дальнейшего использования Институциональным наблюдательным советом Международного общества клеточной медицины: Название: Расчет выхода препарата из богатой тромбоцитами плазмы на основе исходного количества тромбоцитов в общем анализе крови. Испытуемые-животные: Все авторы подтвердили, что в данном исследовании не участвовали животные или ткани. Конфликты интересов: В соответствии с Единой формой раскрытия информации ICMJE все авторы заявляют следующее: Информация об оплате/услугах: Все авторы заявляют, что не получали финансовой поддержки от какой-либо организации для представленной работы. Финансовые отношения: Все авторы заявляют, что в настоящее время или в течение последних трех лет у них нет финансовых отношений с какой-либо организацией, которая может быть заинтересована в представленной работе. Другие отношения: Все авторы заявляют, что нет никаких других отношений или видов деятельности, которые могут повлиять на представленную работу.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al. (17 мая 2022 г.) Влияние глюкозы на количество и объем тромбоцитов: значение для регенеративной медицины. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Copyright 2022 Harrison et al. Это статья открытого доступа, распространяемая на условиях лицензии Creative Commons Attribution License CC-BY 4.0. Разрешается неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.