Nature.com تي اچڻ لاءِ مهرباني. توهان جيڪو برائوزر ورجن استعمال ڪري رهيا آهيو ان ۾ CSS لاءِ محدود سپورٽ آهي. بهترين تجربي لاءِ، اسان سفارش ڪريون ٿا ته توهان هڪ اپڊيٽ ٿيل برائوزر استعمال ڪريو (يا انٽرنيٽ ايڪسپلورر ۾ مطابقت واري موڊ کي بند ڪريو). ساڳئي وقت، مسلسل سپورٽ کي يقيني بڻائڻ لاءِ، اسان سائيٽ کي اسٽائل ۽ جاوا اسڪرپٽ کان سواءِ ڏيکارينداسين.
سسٽڪ فائبروسس ڦڦڙن جي بيماري جي علاج لاءِ جين ویکٹرز کي هلندڙ هوائي رستن کي نشانو بڻائڻ گهرجي ڇاڪاڻ ته پردي جي ڦڦڙن جي منتقلي علاج جو فائدو فراهم نه ڪندي آهي. وائرل ٽرانسڊڪشن ڪارڪردگي سڌو سنئون ویکٹر جي رهائش جي وقت سان لاڳاپيل آهي. بهرحال، جين ڪيريئرز وانگر ترسيل سيال قدرتي طور تي انسپائريشن دوران اليوولي ۾ ڦهلجي ويندا آهن، ۽ ڪنهن به شڪل جا علاج جا ذرات ميوڪوسليري ٽرانسپورٽ ذريعي تيزيءَ سان صاف ڪيا ويندا آهن. ايئر ويز ۾ جين ڪيريئرز جي رهائش جي وقت کي ڊگهو ڪرڻ اهم آهي پر حاصل ڪرڻ ڏکيو آهي. جين ڪيريئرز سان ملندڙ مقناطيسي ذرات جيڪي ايئر ويز جي مٿاڇري ڏانهن هدايت ڪري سگهجن ٿا علائقائي ٽارگيٽنگ کي بهتر بڻائي سگهن ٿا. ان ويوو ويزولائيزيشن جي چئلينجن جي ڪري، لاڳو ٿيل مقناطيسي فيلڊ جي موجودگي ۾ ايئر وي جي مٿاڇري تي اهڙن ننڍڙن مقناطيسي ذرڙن جي رويي کي خراب طور تي سمجهيو ويو آهي. هن مطالعي جو مقصد سنڪروٽرون اميجنگ استعمال ڪرڻ هو ته جيئن اينسٿيٽائيزڊ چوهڙن جي ٽريچيا ۾ مقناطيسي ذرڙن جي هڪ سيريز جي ان ويوو حرڪت کي ڏسڻ لاءِ انفرادي ۽ بلڪ پارٽيڪل رويي جي متحرڪ ۽ نمونن کي جانچيو وڃي. اسان پوءِ اهو پڻ جائزو ورتو ته ڇا مقناطيسي ميدان جي موجودگي ۾ لينٽيو وائرل مقناطيسي ذرڙن جي ترسيل چوهڙن ۾ ٽرانسڊڪشن جي ڪارڪردگي کي وڌائيندو. trachea.Synchrotron ايڪس ري اميجنگ ويٽرو ۽ ان ويوو ۾ اسٽيشنري ۽ حرڪت ڪندڙ مقناطيسي شعبن ۾ مقناطيسي ذرڙن جي رويي کي ظاهر ڪري ٿي. مقناطيس سان ذرات کي زنده هوائي رستي جي مٿاڇري تي آساني سان ڇڪي نه ٿو سگهجي، پر ٽرانسپورٽ دوران، ذخيرا ڏسڻ جي ميدان ۾ مرڪوز ٿين ٿا جتي مقناطيسي ميدان مضبوط آهي. جڏهن لينٽيو وائرل مقناطيسي ذرات کي مقناطيسي ميدان جي موجودگي ۾ پهچايو ويو ته ٽرانسپشن جي ڪارڪردگي پڻ ڇهه ڀيرا وڌي وئي. گڏجي، اهي نتيجا ظاهر ڪن ٿا ته لينٽيو وائرل مقناطيسي ذرڙا ۽ مقناطيسي شعبا جين ویکٹر ٽارگيٽنگ کي بهتر بڻائڻ ۽ ويٽو ۾ ايئر ويز کي هلائڻ ۾ ٽرانسپشن جي سطح کي وڌائڻ لاءِ قيمتي طريقا ٿي سگهن ٿا.
سسٽڪ فائبروسس (CF) هڪ واحد جين ۾ تبديلي جي ڪري ٿئي ٿو جنهن کي CF ٽرانسميمبرين ڪنڊڪٽنس ريگيوليٽر (CFTR) سڏيو ويندو آهي. CFTR پروٽين هڪ آئن چينل آهي جيڪو سڄي جسم ۾ ڪيترن ئي اپيٿيليل سيلز ۾ موجود آهي، جنهن ۾ ڪنڊڪٽنگ ايئر ويز شامل آهن، جيڪو CF پيٿوجينيسس جو هڪ اهم هنڌ آهي. CFTR خرابيون غير معمولي پاڻي جي ٽرانسپورٽ جو سبب بڻجن ٿيون، ايئر وي جي مٿاڇري کي پاڻي جي کوٽائي ڪري ٿي ۽ ايئر وي جي مٿاڇري جي مائع (ASL) پرت جي کوٽائي کي گهٽائي ٿي. اهو پڻ ميوڪوسليري ٽرانسپورٽ (MCT) سسٽم جي صلاحيت کي خراب ڪري ٿو ته هو ايئر ويز مان سانس ۾ داخل ٿيندڙ ذرات ۽ پيٿوجنز کي صاف ڪري. اسان جو مقصد CFTR جين جي صحيح ڪاپي پهچائڻ ۽ ASL، MCT، ۽ ڦڦڙن جي صحت کي بهتر بڻائڻ لاءِ هڪ لينٽي وائرل (LV) جين ٿراپي تيار ڪرڻ آهي، ۽ انهن پيرا ميٽرز کي ماپڻ جي قابل نئين ٽيڪنالاجي کي ترقي ڪرڻ جاري رکڻ آهي. vivo1.
LV ویکٹر CF ايئر وي جين ٿراپي لاءِ اهم اميدوارن مان هڪ آهن، خاص طور تي ڇاڪاڻ ته اهي مستقل طور تي ايئر وي بيسل سيلز (ايئر وي اسٽيم سيلز) ۾ علاج جي جين کي ضم ڪري سگهن ٿا. اهو اهم آهي ڇاڪاڻ ته اهي فنڪشنل جين سان درست ٿيل CF سان لاڳاپيل ايئر وي جي مٿاڇري جي سيلز ۾ فرق ڪندي عام هائيڊريشن ۽ بلغم جي صفائي کي بحال ڪري سگهن ٿا، جنهن جي نتيجي ۾ زندگي ڀر فائدا آهن. LV ویکٹرز کي هلندڙ ايئر وي جي خلاف هدايت ڪئي وڃي، ڇاڪاڻ ته هي اهو هنڌ آهي جتي CF ڦڦڙن جي بيماري شروع ٿئي ٿي. ویکٹر جي ڦڦڙن ۾ وڌيڪ گہرائي ۾ پهچائڻ جي نتيجي ۾ اليوولر ٽرانسڊڪشن ٿي سگهي ٿو، پر CF ۾ ان جو ڪو به علاج جو فائدو ناهي. بهرحال، جين ڪيريئرز جهڙا سيال قدرتي طور تي ترسيل 3,4 کان پوءِ الهام تي اليوولي ڏانهن منتقل ٿين ٿا ۽ علاج جا ذرات MCT ذريعي زباني گفا ۾ تيزيءَ سان صاف ڪيا ويندا آهن. LV ٽرانسڊڪشن جي ڪارڪردگي سڌو سنئون ان وقت جي ڊيگهه سان لاڳاپيل آهي جيڪو ویکٹر سيلولر اپٽيڪ جي اجازت ڏيڻ لاءِ ٽارگيٽ سيلز جي اڳيان رهي ٿو - "رهائش جو وقت" 5 - جيڪو عام علائقائي هوا جي وهڪري سان گڏوگڏ هم آهنگ ذرڙن جي بلغم جي قبضي ۽ MCT ذريعي آساني سان گهٽجي ويندو آهي. CF لاءِ، ايئر وي اندر LV جي رهائش جي وقت کي ڊگهو ڪرڻ جي صلاحيت هن علائقي ۾ ٽرانسڊڪشن جي اعلي سطح حاصل ڪرڻ لاءِ اهم آهي، پر هاڻي تائين چئلينجنگ رهيو آهي.
هن رڪاوٽ کي دور ڪرڻ لاءِ، اسان تجويز ڪريون ٿا ته LV مقناطيسي ذرڙا (MPs) ٻن مڪمل طريقن سان مدد ڪري سگھن ٿا. پهرين، انهن کي مقناطيسي طور تي هوائي رستي جي مٿاڇري ڏانهن هدايت ڪري سگهجي ٿو ته جيئن ٽارگيٽنگ کي بهتر بڻائي سگهجي ۽ جين ڪيريئر ذرات کي گهربل هوائي رستي واري علائقي ۾ رهڻ ۾ مدد ملي سگهي؛ ۽ ASL) سيل پرت 6 ڏانهن منتقل ٿيڻ لاءِ. MPs کي وڏي پيماني تي نشانو بڻايل دوا پهچائڻ واري گاڏين جي طور تي استعمال ڪيو ويو آهي جڏهن اهي اينٽي باڊيز، ڪيموٿراپيٽڪ دوائن، يا ٻين ننڍڙن ماليڪيولن سان جڙيل آهن جيڪي سيل جھلي سان ڳنڍيل آهن يا لاڳاپيل سيل مٿاڇري ريڪٽرز سان جڙيل آهن ۽ جامد بجلي جي موجودگي ۾ ٽيومر سائيٽن تي جمع ٿين ٿا. ڪينسر جي علاج لاءِ مقناطيسي ميدان 7. ٻيون "هائپر ٿرمل" ٽيڪنڪون ايم پيز کي گرم ڪرڻ جو مقصد رکن ٿيون جڏهن اهي اوسيليٽنگ مقناطيسي شعبن جي سامهون اچن ٿا، جنهن سان ٽيومر سيلز کي تباهه ڪيو وڃي ٿو. مقناطيسي منتقلي جو اصول، جنهن ۾ هڪ مقناطيسي ميدان کي سيلز ڏانهن ڊي اين اي جي منتقلي کي وڌائڻ لاءِ ٽرانسفڪشن ايجنٽ طور استعمال ڪيو ويندو آهي، عام طور تي غير وائرل ۽ وائرل جين ویکٹرز جي هڪ رينج کي استعمال ڪندي ان ويٽرو ۾ استعمال ڪيو ويندو آهي جيڪو ڏکيو منتقلي سيل لائنن لاءِ آهي. LV ميگنيٽو ٽرانسفڪشن جي اثرائتي قائم ڪئي وئي آهي، هڪ جامد مقناطيسي ميدان جي موجودگي ۾ LV-MPs جي انساني برونڪيل ايپيٿيليل سيل لائن تائين ان ويٽرو پهچائڻ سان، صرف LV ویکٹر جي مقابلي ۾ ٽرانسڊڪشن ڪارڪردگي کي 186 ڀيرا وڌايو. LV-MP کي ان ويٽرو CF ماڊل تي پڻ لاڳو ڪيو ويو آهي، جتي مقناطيسي منتقلي CF اسپتم جي موجودگي ۾ ايئر-مائع انٽرفيس ڪلچرز ۾ LV ٽرانسڊڪشن کي 20 ڀيرا وڌايو 10. بهرحال، عضون جي ان ويوو ميگنيٽو ٽرانسفڪشن کي نسبتاً گهٽ ڌيان ڏنو ويو آهي ۽ صرف ڪجهه جانورن ۾ ان جو جائزو ورتو ويو آهي. مطالعي 11،12،13،14،15، خاص طور تي ڦڦڙن ۾ 16،17. تنهن هوندي به، CF ڦڦڙن جي علاج ۾ مقناطيسي منتقلي جا موقعا واضح آهن. ٽين ۽ ٻين (2020) چيو ته "موثر مقناطيسي نانو پارٽيڪل پلمونري پهچائڻ جو هڪ ثبوت جو تصور مطالعو مستقبل جي CFTR سانس جي حڪمت عملين لاءِ رستو هموار ڪندو ته جيئن CF مريضن ۾ ڪلينڪل نتيجا بهتر ٿي سگهن"6.
لاڳو ٿيل مقناطيسي ميدان جي موجودگي ۾ ايئر وي جي مٿاڇري تي ننڍڙن مقناطيسي ذرڙن جي رويي کي ڏسڻ ۽ مطالعو ڪرڻ ڏکيو آهي، ۽ ان ڪري خراب طور تي سمجهي سگهجي ٿو. ٻين مطالعي ۾، اسان هڪ سنڪروٽرون-پروپيگيشن-بنياد فيز-ڪنٽراسٽ ايڪس ري اميجنگ (PB-PCXI) طريقو تيار ڪيو آهي ته جيئن غير جارحانه طور تي ASL ڊيپٿ 18 ۽ MCT رويي ۾ منٽ ان ويوو تبديلين کي ڏسڻ ۽ مقدار ڏيڻ لاءِ 19,20 گئس ڪينال جي مٿاڇري جي هائيڊريشن کي سڌو سنئون ماپڻ لاءِ ۽ علاج جي اثرائتي جي شروعاتي اشاري طور استعمال ڪيو وڃي. ان کان علاوه، اسان جو MCT تشخيصي طريقو 10-35 µm قطر جي ذرات کي استعمال ڪري ٿو جيڪو ايلومينا يا اعلي ريفريڪٽو انڊيڪس گلاس مان ٺهيل آهي جيئن MCT مارڪر PB-PCXI21 استعمال ڪندي نظر اچن ٿا. ٻئي ٽيڪنڪون ذرڙن جي قسمن جي هڪ حد جي تصور لاءِ موزون آهن، بشمول MP.
ان جي اعليٰ مقامي ۽ وقتي ريزوليوشن جي ڪري، اسان جون PB-PCXI تي ٻڌل ASL ۽ MCT تجزياتي ٽيڪنڪون vivo ۾ سنگل ۽ بلڪ پارٽيڪل رويي جي حرڪيات ۽ نمونن کي جانچڻ لاءِ مناسب آهن ته جيئن اسان کي MP جين پهچائڻ جي طريقن کي سمجهڻ ۽ بهتر ڪرڻ ۾ مدد ملي سگهي. هتي اسان جيڪو طريقو استعمال ڪريون ٿا اهو SPring-8 BL20B2 بيم لائن استعمال ڪندي اسان جي مطالعي مان نڪتل آهي، جنهن ۾ اسان چوٿين جي نڪ ۽ پلمونري ايئر ويز ۾ شيم ویکٹر ڊوز پهچائڻ کان پوءِ سيال جي حرڪت کي تصور ڪيو ته جيئن اسان جي جين ڪيريئر ڊوز جانورن جي مطالعي 3,4 ۾ مشاهدو ڪيل اسان جي غير يونيفارم جين اظهار جي نمونن کي بيان ڪرڻ ۾ مدد ملي سگهي.
هن مطالعي جو مقصد سنڪروٽرون PB-PCXI استعمال ڪرڻ هو ته جيئن زنده چوهڙن جي ٽريچيا ۾ MPs جي هڪ سيريز جي ان ويوو حرڪتن کي تصور ڪري سگهجي. اهي PB-PCXI اميجنگ مطالعي کي MPs جي هڪ حد، مقناطيسي فيلڊ جي طاقت، ۽ جڳهن کي جانچڻ لاءِ ٺاهيو ويو هو ته جيئن MP حرڪت تي انهن جي اثر کي طئي ڪري سگهجي. اسان اهو فرض ڪيو ته هڪ ٻاهرين طور تي لاڳو ٿيل مقناطيسي فيلڊ پهچائيندڙ MP کي رهڻ يا ٽارگيٽ ايريا ڏانهن منتقل ڪرڻ ۾ مدد ڪندو. انهن مطالعي اسان کي مقناطيس ترتيبن جي سڃاڻپ ڪرڻ جي پڻ اجازت ڏني جيڪي جمع ٿيڻ کان پوءِ ٽريچيا ۾ رکيل ذرات جي تعداد کي وڌ کان وڌ ڪن ٿا. مطالعي جي هڪ ٻئي سلسلي ۾، اسان هن بهترين ترتيب کي استعمال ڪرڻ جي ڪوشش ڪئي ته جيئن LV-MPs جي ان ويوو پهچائڻ جي نتيجي ۾ چوٿين ايئر وي ڏانهن منتقلي جي نتيجي ۾ ٽرانسڊڪشن نموني کي ظاهر ڪيو وڃي، ان مفروضي جي بنياد تي ته ايئر وي ٽارگيٽنگ جي حوالي سان LV-MPs جي پهچائڻ جي نتيجي ۾ LV ٽرانسڊڪشن ڪارڪردگي بهتر ٿيندي.
سڀني جانورن جي مطالعي کي ايڊيليڊ يونيورسٽي (M-2019-060 ۽ M-2020-022) ۽ SPring-8 Synchrotron Animal Ethics Committee پاران منظور ڪيل پروٽوڪول مطابق ڪيو ويو. تجربا ARRIVE هدايتن مطابق ڪيا ويا.
سڀ ايڪس ري اميجنگ جاپان ۾ SPring-8 سنڪروٽرون تي BL20XU بيم لائن تي ڪئي وئي، اڳ بيان ڪيل 21,22 وانگر هڪ سيٽ اپ استعمال ڪندي. مختصر طور تي، تجرباتي باڪس سنڪروٽرون اسٽوريج رنگ کان 245 ميٽر جي مفاصلي تي واقع هو. فيز ڪنٽراسٽ اثرات پيدا ڪرڻ لاءِ پارٽيڪل اميجنگ مطالعي لاءِ 0.6 ميٽر جو نمونو کان ڊيٽيڪٽر فاصلو ۽ ان ويوو اميجنگ مطالعي لاءِ 0.3 ميٽر استعمال ڪيو ويندو آهي. 25 keV جي هڪ مونوڪروميٽڪ بيم توانائي استعمال ڪئي وئي. تصويرون هڪ sCMOS ڊيٽيڪٽر سان ملائي هڪ هاءِ ريزوليوشن ايڪس ري ڪنورٽر (SPring-8 BM3) استعمال ڪندي قبضو ڪيون ويون. ڪنورٽر 10 µm ٿلهي سنٽيليٽر (Gd3Al2Ga3O12) استعمال ڪندي ايڪس ري کي نظر ايندڙ روشني ۾ تبديل ڪري ٿو، جيڪو پوءِ × 10 مائڪروسڪوپ آبجيڪٽو (NA 0.3) استعمال ڪندي هڪ sCMOS سينسر ڏانهن هدايت ڪئي وئي آهي. sCMOS ڊيٽيڪٽر Orca-Flash4.0 (Hamamatsu Photonics، جاپان) هو. 2048 × 2048 پکسلز جي هڪ ايري سائيز ۽ 6.5 × 6.5 µm جي خام پکسل سائيز. هي سيٽ اپ 0.51 µm جي هڪ مؤثر آئسوٽروپڪ پکسل سائيز ۽ تقريبن 1.1 ملي ميٽر × 1.1 ملي ميٽر جي فيلڊ آف ويو پيدا ڪري ٿو. سانس جي حرڪت واري نموني کي گهٽ ڪندي هوائي رستي جي اندر ۽ ٻاهر مقناطيسي ذرڙن جي سگنل-کان-شور تناسب کي وڌائڻ لاءِ 100 ايم ايس جي نمائش جي ڊيگهه چونڊيو ويو. ان ويوو مطالعي لاءِ، ايڪس ري رستي ۾ هڪ تيز ايڪس ري شٽر رکيو ويو هو ته جيئن ايڪس ري بيم کي ايڪس ري بيم کي ايڪس ري بيم کي بلاڪ ڪندي تابڪاري جي مقدار کي محدود ڪري سگهجي.
LV ڪيريئر ڪنهن به SPring-8 PB-PCXI اميجنگ مطالعي ۾ استعمال نه ڪيو ويو ڇاڪاڻ ته BL20XU اميجنگ چيمبر بايو سيفٽي ليول 2 تصديق ٿيل ناهي. ان جي بدران، اسان ٻن ڪمرشل سپلائرز مان سٺي خاصيت واري MPs جي هڪ رينج کي چونڊيو - مختلف سائزن، مواد، لوهه جي ڪنسنٽريشن، ۽ ايپليڪيشنن کي ڍڪيندي - پهرين اهو سمجهڻ لاءِ ته مقناطيسي فيلڊ شيشي جي ڪيپيلريز اندر MP حرڪت کي ڪيئن متاثر ڪن ٿا، ۽ پوءِ زنده هوائي رستن ۾. مٿاڇري تي.MPs جي سائيز 0.25 کان 18 μm تائين آهي ۽ اهي مختلف مواد مان ٺهيل آهن (ٽيبل 1 ڏسو)، پر هر نموني جي جوڙجڪ، جنهن ۾ MP اندر مقناطيسي ذرڙن جي سائيز شامل آهي، نامعلوم آهي. اسان جي وسيع MCT مطالعي 19، 20، 21، 23، 24 جي بنياد تي، اسان اميد ڪريون ٿا ته 5 μm جيترو ننڍو MPs tracheal airway جي مٿاڇري تي ڏسي سگهجي ٿو، مثال طور MP حرڪت جي بهتر نمائش ڏسڻ لاءِ لڳاتار فريم کي گھٽائڻ سان. هڪ واحد 0.25 μm سائيز جو MP اميجنگ ڊيوائس جي ريزوليوشن کان ننڍو آهي، پر PB-PCXI کان توقع ڪئي وئي آهي ته انهن جي حجم جي برعڪس ۽ سطح جي سيال جي حرڪت کي ڳولي سگهندو جنهن تي اهي جمع ٿيڻ کان پوءِ جمع ڪيا ويندا آهن.
ٽيبل 1 ۾ هر ايم پي لاءِ نمونا 20 μl شيشي جي ڪيپليئرز (ڊرمنڊ مائڪرو ڪيپس، پي اي، آمريڪا) ۾ تيار ڪيا ويا هئا جن جو اندروني قطر 0.63 ملي ميٽر هو. ڪارپسڪولر ذرات پاڻي ۾ موجود آهن، جڏهن ته ڪومبي ميگ ذرات ٺاهيندڙ جي ملڪيت واري سيال ۾ موجود آهن. هر ٽيوب اڌ مائع سان ڀريل آهي (تقريبن 11 μl) ۽ نموني هولڊر تي رکيل آهي (شڪل 1 ڏسو). شيشي جي ڪيپليئرز کي ترتيب وار تصويرنگ باڪس ۾ نموني اسٽيج تي افقي طور تي رکيو ويو، ۽ سيال جي ڪنارن کي پوزيشن ڪيو ويو. هڪ 19 ملي ميٽر قطر (28 ملي ميٽر ڊگهو) نڪل شيل ناياب زمين نيوڊيميم آئرن بورون (NdFeB) مقناطيس (N35، ٻلي نمبر LM1652، جي ڪار اليڪٽرانڪس، آسٽريليا) 1.17 جي باقي مقناطيس سان ٽيسلا کي تصويرنگ دوران ان جي پوزيشن کي دور کان تبديل ڪرڻ لاءِ هڪ الڳ ترجمي واري اسٽيج سان ڳنڍيو ويو. ايڪس ري تصوير حاصل ڪرڻ شروع ٿئي ٿو جڏهن مقناطيس نموني کان تقريبن 30 ملي ميٽر مٿي رکيل آهي، ۽ تصويرون في سيڪنڊ 4 فريم جي شرح تي حاصل ڪيون وينديون آهن. تصويرنگ دوران، مقناطيس کي شيشي جي ڪيپيلري ٽيوب جي ويجهو آندو ويو (تقريبن 1 ملي ميٽر پري) ۽ پوءِ ٽيوب سان گڏ ترجمو ڪيو ويو ته جيئن فيلڊ جي طاقت ۽ پوزيشن جي اثرات جو جائزو وٺي سگهجي.
نموني xy ترجمي واري مرحلي تي شيشي جي ڪيپليئرز ۾ MP نمونن تي مشتمل ان ويٽرو اميجنگ سيٽ اپ. ايڪس ري بيم جو رستو ڳاڙهي ڊيشڊ لائين سان نشان لڳل آهي.
هڪ ڀيرو ايم پيز جي ان ويٽرو ويزيبلٽي قائم ٿي وئي، انهن مان هڪ ذيلي سيٽ کي جهنگلي قسم جي مادي البينو وِسٽار چوٽن (~12 هفتا پراڻا، ~200 گرام) ۾ ان ويوو ۾ آزمايو ويو. 0.24 ملي گرام/ڪلوگرام ميڊيٽومائيڊين (ڊوميٽر®، زينواق، جاپان)، 3.2 ملي گرام/ڪلوگرام ميڊازولم (ڊورميڪم®، ايسٽيلاس فارما، جاپان) ۽ 4 ملي گرام/ڪلوگرام بٽورفينول (ويٽورفيل®، ميجي سيڪا) چوٿن کي فارما جي مرکب سان انٽراپيريٽونيل انجيڪشن ذريعي بي هوشي ڪئي وئي. بي هوشي کان پوءِ، انهن کي ٽريچيا جي چوڌاري فر کي هٽائي، هڪ اينڊوٽريچيل ٽيوب (ET؛ 16 Ga iv ڪينولا، ٽيرومو BCT) داخل ڪري ۽ انهن کي جسم جي گرمي پد 22 برقرار رکڻ لاءِ هڪ تھرمل بيگ تي هڪ ڪسٽم ٺهيل اميجنگ پليٽ تي سوپائن کي متحرڪ ڪندي تصويري باڪس ۾ نموني جي ترجمي واري مرحلي سان ٿوري زاويه تي ڳنڍيو ويو. ان کان پوءِ اميجنگ پليٽ کي ٽريچيا کي افقي طور تي ترتيب ڏيڻ لاءِ تصويري باڪس ۾ نموني جي ترجمي واري مرحلي سان ڳنڍيو ويو. ايڪس ري تصوير، جيئن شڪل 2a ۾ ڏيکاريل آهي.
(a) SPring-8 اميجنگ باڪس ۾ ويوو اميجنگ سيٽ اپ ۾، ايڪس ري بيم جو رستو ڳاڙهي ڊشڊ لائين سان نشان لڳل آهي. (b,c) ٽريچيا تي مقناطيس لوڪلائيزيشن ٻن آرٿوگونل طور تي لڳل IP ڪيمرائن کي استعمال ڪندي ريموٽ طور تي ڪئي وئي. اسڪرين تصوير جي کاٻي پاسي، هيڊ کي جهليندڙ تار لوپ ڏسي سگهجي ٿو، ۽ ET ٽيوب اندر جاءِ تي پهچائڻ وارو ڪينولا.
هڪ ريموٽ ڪنٽرول ٿيل سرنج پمپ سسٽم (UMP2، ورلڊ پريسيشن انسٽرومينٽس، ساراسوٽا، FL) 100 μl گلاس سرنج استعمال ڪندي PE10 ٽيوبنگ (OD 0.61 mm، ID 0.28 mm) سان 30 Ga سوئي ذريعي ڳنڍيل هو. ET ٽيوب داخل ڪرڻ وقت پڪ ڪرڻ لاءِ ٽيوب کي نشان لڳايو ته ٽپ trachea ۾ صحيح پوزيشن ۾ آهي. مائڪروپمپ استعمال ڪندي، سرنج پلنگر کي ڪڍيو ويو جڏهن ته ٽيوب جي ٽپ کي پهچائڻ لاءِ MP نموني ۾ ٻوڙيو ويو. لوڊ ٿيل ڊليوري ٽيوب کي پوءِ اينڊوٽريچيل ٽيوب ۾ داخل ڪيو ويو، ٽپ کي اسان جي متوقع لاڳو ٿيل مقناطيسي فيلڊ جي مضبوط ترين حصي ۾ رکيو ويو. تصوير جي حصول کي اسان جي Arduino تي ٻڌل ٽائمنگ باڪس سان ڳنڍيل هڪ تنفس ڊيڪٽر استعمال ڪندي ڪنٽرول ڪيو ويو، ۽ سڀئي سگنل (مثال طور گرمي پد، تنفس، شٽر کولڻ/بند ڪرڻ ۽ تصوير حاصل ڪرڻ) پاور ليب ۽ ليب چارٽ (AD انسٽرومينٽس، سڊني، آسٽريليا) 22 استعمال ڪندي رڪارڊ ڪيا ويا. جڏهن تصوير سازي ناقابل رسائي هئي، ٻه IP ڪيمرا (Panasonic BB-SC382) تقريبن 90° تي رکيا ويا هئا. هڪ ٻئي سان ۽ تصويرن دوران trachea جي نسبت مقناطيس جي پوزيشن جي نگراني ڪرڻ لاءِ استعمال ڪيا ويا (شڪل 2b، c). حرڪت جي نمونن کي گھٽ ڪرڻ لاءِ، آخري ٽائيڊل وهڪري جي پليٽو دوران هر سانس ۾ هڪ تصوير حاصل ڪئي وئي.
هڪ مقناطيس ٻئي اسٽيج سان ڳنڍيل آهي جيڪو تصويري هائوسنگ کان ٻاهر کان پري واقع ٿي سگهي ٿو. مقناطيس جي مختلف پوزيشن ۽ ترتيبن جي جانچ ڪئي وئي، جنهن ۾ شامل آهن: trachea جي مٿان تقريبن 30° جي زاويه تي نصب ٿيل (شڪل 2a ۽ 3a ۾ ڏيکاريل ترتيبون)؛ هڪ مقناطيس جانور جي مٿان ۽ ٻيو هيٺ، قطبن کي راغب ڪرڻ لاءِ مقرر ڪيو ويو آهي (شڪل 3b)؛ هڪ مقناطيس جانور جي مٿان ۽ ٻيو هيٺ، قطبن کي پوئتي هٽائڻ لاءِ مقرر ڪيو ويو آهي (شڪل 3c)؛ ۽ هڪ مقناطيس مٿي ۽ trachea ڏانهن عمودي (شڪل 3d). هڪ دفعو جانور ۽ مقناطيس ترتيب ڏنل آهن ۽ جانچڻ لاءِ MP سرنج پمپ ۾ لوڊ ڪيو ويندو آهي، تصويرون حاصل ڪرڻ دوران 4 μl/سيڪنڊ جي شرح سان 50 μl دوز پهچايو ويندو آهي. پوءِ مقناطيس کي تصويرون حاصل ڪرڻ جاري رکندي trachea جي پار اڳتي ۽ پوئتي منتقل ڪيو ويندو آهي.
ان ويوو تصويرنگ لاءِ مقناطيس جي ترتيب (الف) ٽريچيا جي مٿان لڳ ڀڳ 30° جي زاويه تي هڪ واحد مقناطيس، (ب) ٻه مقناطيس ڪشش لاءِ مقرر ڪيا ويا آهن، (ج) ٻه مقناطيس پوئتي هٽائڻ لاءِ مقرر ڪيا ويا آهن، (د) هڪ واحد مقناطيس مٿي ۽ ٽريچيا ۾ عمودي. مبصر وات کان ٽريچيا ذريعي ڦڦڙن ڏانهن ڏٺو، ۽ ايڪس ري شعاع چوهيءَ جي کاٻي پاسي مان گذري ۽ ساڄي پاسي کان ٻاهر نڪري ويو. مقناطيس يا ته هوائي رستي جي ڊيگهه سان گڏ منتقل ڪيو ويندو آهي يا ايڪس ري شعاع جي طرف ٽريچيا جي مٿان کاٻي ۽ ساڄي طرف منتقل ڪيو ويندو آهي.
اسان سانس جي رستي ۽ دل جي حرڪت جي غير موجودگي ۾ هوا جي رستن ۾ ذرڙن جي نمائش ۽ رويي کي طئي ڪرڻ جي ڪوشش پڻ ڪئي. تنهن ڪري، تصويري دور جي آخر ۾، جانورن کي پينٽوباربيٽل اوور ڊوز لاءِ انساني طور تي ماريو ويو (سومنوپنٽيل، پٽمن-مور، واشنگٽن ڪراسنگ، آمريڪا؛ ~65 ملي گرام/ڪلوگرام آئي پي). ڪجهه جانورن کي تصويري پليٽ فارم تي ڇڏيو ويو، ۽ هڪ ڀيرو سانس ۽ دل جي ڌڙڪڻ بند ٿي وئي، تصويري عمل کي بار بار ڪيو ويو، جيڪڏهن هوائي رستي جي مٿاڇري تي ڪو به MP نظر نه آيو ته MP جو اضافي دوز شامل ڪيو ويو.
حاصل ڪيل تصويرن کي فليٽ فيلڊ ۽ ڊارڪ فيلڊ ۾ درست ڪيو ويو ۽ پوءِ MATLAB (R2020a، The Mathworks) ۾ لکيل ڪسٽم اسڪرپٽ استعمال ڪندي هڪ فلم (20 فريم في سيڪنڊ؛ 15-25 × عام رفتار سانس جي شرح تي منحصر آهي) ۾ گڏ ڪيو ويو.
سڀئي LV جين ویکٹر پهچائڻ جا اڀياس ايڊيليڊ يونيورسٽي ۾ ليبارٽري جانورن جي تحقيق جي سهولت تي ڪيا ويا ۽ مقصد SPring-8 تجربي جي نتيجن کي استعمال ڪرڻ هو ته ڇا مقناطيسي ميدان جي موجودگي ۾ LV-MP پهچائڻ vivo ۾ جين جي منتقلي کي وڌائي سگهي ٿو. MP ۽ مقناطيسي ميدان جي اثرات جو جائزو وٺڻ لاءِ، جانورن جي ٻن گروپن جو علاج ڪيو ويو: هڪ گروپ کي LV-MP ڏنو ويو جنهن ۾ هڪ مقناطيس رکيل هو، ۽ ٻئي گروپ کي مقناطيس کان سواءِ LV-MP سان هڪ ڪنٽرول گروپ مليو.
LV جين ویکٹر اڳ ۾ بيان ڪيل طريقن 25، 26 استعمال ڪندي پيدا ڪيا ويا. LacZ ویکٹر ڪنسٽيٽيو MPSV پروموٽر (LV-LacZ) پاران هلائيندڙ نيوڪليئر-لوڪلائيزڊ بيٽا-گليڪٽوسائيڊيس جين کي ظاهر ڪري ٿو، جيڪو ٽرانسڊيوسڊ سيلز ۾ هڪ نيرو رد عمل پيداوار پيدا ڪري ٿو، جيڪو ڦڦڙن جي ٽشو فرنٽ ۽ ٽشو سيڪشن ۾ نظر اچي ٿو. سيل ڪلچرز ۾ ٽائيٽر کي TU/ml ۾ ڳڻڻ لاءِ هيموسيٽوميٽر سان LacZ مثبت سيلز جي تعداد کي دستي طور تي ڳڻڻ سان ٽائيٽريشن ڪيو ويو. ڪيريئرز کي -80 °C تي ڪرائوپريزرو ڪيو ويندو آهي، استعمال کان اڳ پگھلايو ويندو آهي، ۽ 1:1 جي تناسب تي ملائي ۽ پهچائڻ کان گهٽ ۾ گهٽ 30 منٽن تائين برف تي انڪيوبيٽ ڪندي CombiMag سان ڳنڍيل هوندو آهي.
نارمل اسپراگ ڊولي چوٿون (n = 3/گروپ، ~2-3) کي 0.4 mg/kg ميڊيٽومائيڊين (ڊوميٽر، ايليئم، آسٽريليا) ۽ 60 mg/kg ڪيٽامائن (ايليئم، آسٽريليا) مهيني جي عمر واري) ip) انجڪشن ۽ غير سرجري زباني ڪينوليشن جي ميلاپ سان 16 Ga iv ڪينولا سان اندروني طور تي بي هوشي ڪئي وئي. انهي کي يقيني بڻائڻ لاءِ ته ٽريچيل ايئر وي ٽشو LV ٽرانسڊڪشن حاصل ڪري، ان کي اسان جي اڳ ۾ بيان ڪيل ميڪيڪل پرٽربيشن پروٽوڪول استعمال ڪندي ڪنڊيشن ڪيو ويو، جنهن ۾ ٽريچيل ايئر وي جي مٿاڇري کي تار جي ٽوڪري (N-سرڪل، نٽينول ٽپليس اسٽون ايڪسٽرڪٽر NTSE-022115) -UDH، ڪڪ ميڊيڪل، آمريڪا) 30 s28 سان محوري طور تي رگڙيو ويو. LV-MP جي ٽريچيل انتظاميه کي پوءِ بايولوجيڪل سيفٽي ڪيبينيٽ ۾ پرٽربيشن کان تقريبن 10 منٽن بعد ڪيو ويو.
هن تجربي ۾ استعمال ٿيندڙ مقناطيسي ميدان کي ان ويوو ايڪس ري اميجنگ اسٽڊي جي ساڳي طريقي سان ترتيب ڏنو ويو هو، ساڳين مقناطيس کي ڊسٽليشن اسٽينٽ ڪلپس استعمال ڪندي ٽريچيا جي مٿان رکيو ويو هو (شڪل 4). LV-MP جو 50 μl حجم (2 × 25 μl aliquots) ٽريچيا (n = 3 جانورن) ۾ هڪ پائيپٽ استعمال ڪندي پهچايو ويو جنهن ۾ جيل ٽِپ هئي جيئن اڳ بيان ڪيو ويو هو. هڪ ڪنٽرول گروپ (n = 3 جانورن) مقناطيس جي استعمال کان سواءِ ساڳيا LV-MP حاصل ڪيا. انفيوژن مڪمل ٿيڻ کان پوءِ، ڪينولا کي ET ٽيوب مان ڪڍيو ويندو آهي ۽ جانور کي ڪڍيو ويندو آهي. مقناطيس 10 منٽن تائين جاءِ تي رهي ٿو، پوءِ ان کي هٽايو ويندو آهي. چوهڙن کي ميلوڪسيڪم (1 ml/kg) (Ilium، آسٽريليا) جي subcutaneous dose ملي جنهن کان پوءِ 1 mg/kg atipamazole hydrochloride (Antisedan، Zoetis، آسٽريليا) جي ip انجيڪشن ذريعي اينستيسيا کي الٽ ڪيو ويو. چوهڙن کي اينستيسيا کان مڪمل بحالي تائين گرم رکيو ويو ۽ نگراني ڪئي وئي.
حياتياتي حفاظتي ڪابينا ۾ LV-MP پهچائڻ وارو اوزار. ET ٽيوب جو هلڪو گرين رنگ جو Luer حب وات مان نڪرندي ڏسي سگهجي ٿو ۽ تصوير ۾ ڏيکاريل پائپٽ جي جيل ٽپ کي ET ٽيوب ذريعي ٽريچيا ۾ گهربل کوٽائي تائين داخل ڪيو ويو آهي.
LV-MP ڊوزنگ جي طريقيڪار کان هڪ هفتي بعد، جانورن کي 100٪ CO2 سانس ذريعي انساني طور تي ماريو ويو ۽ اسان جي معياري X-gal علاج استعمال ڪندي LacZ اظهار جو جائزو ورتو ويو. ٽنهي ڪيڊل سڀ کان وڌيڪ ڪارٽيلاجينس رِنگز کي هٽايو ويو ته جيئن اهو يقيني بڻائي سگهجي ته اينڊوٽريچيل ٽيوب جي جڳهه مان ڪو به ميڪيڪل نقصان يا سيال برقرار رکڻ تجزيي ۾ شامل نه ڪيو ويو. هر ٽريچيا کي طول بلد ۾ ڪٽيو ويو ته جيئن تجزيو لاءِ ٻه اڌ ٺاهيا وڃن، ۽ انهن کي هڪ ڊش ۾ نصب ڪيو ويو جنهن ۾ سلڪون ربر (سلگارڊ، ڊاؤ انڪ) هڪ منٽين سوئي (فائن سائنس ٽولز) استعمال ڪندي لومينل مٿاڇري کي ڏسڻ لاءِ. ٽرانسڊيوس ٿيل سيلز جي ورڇ ۽ نموني جي تصديق ڊجي لائيٽ ڪئميرا ۽ ٽي ڪيپچر سافٽ ويئر (ٽڪسن فوٽونڪس، چائنا) سان نڪون مائڪرو اسڪوپ (SMZ1500) استعمال ڪندي فرنٽل فوٽوگرافي ذريعي ڪئي وئي. تصويرون 20x ميگنيفڪيشن تي حاصل ڪيون ويون (ٽريچيا جي مڪمل ويڪر لاءِ سڀ کان وڌيڪ سيٽنگ سميت)، ٽريچيا جي پوري ڊيگهه کي قدم بہ قدم تصوير ڪيو ويو، هر تصوير جي وچ ۾ ڪافي اوورليپ کي يقيني بڻائي ته جيئن تصوير جي اجازت ڏئي سگهجي. "سلائي". هر ٽريچيا مان تصويرون پوءِ تصويري ڪمپوزٽ ايڊيٽر v2.0.3 (مائڪروسافٽ ريسرچ) استعمال ڪندي هڪ واحد جامع تصوير ۾ گڏ ڪيون ويون، هڪ پلانر موشن الگورتھم استعمال ڪندي. هر جانور مان ٽريچيا جي جامع تصويرن ۾ LacZ اظهار وارن علائقن کي هڪ خودڪار MATLAB اسڪرپٽ (R2020a، MathWorks) استعمال ڪندي مقدار ۾ طئي ڪيو ويو جيئن اڳ بيان ڪيو ويو هو، 0.35 < < < 0.58، Saturation > 0.15، ۽ Value < 0.7 جي سيٽنگن کي استعمال ڪندي. ٽشو جي شڪلن کي ٽريڪ ڪندي، هر جامع تصوير لاءِ GIMP v2.10.24 ۾ هڪ ماسڪ دستي طور تي تيار ڪيو ويو ته جيئن ٽشو علائقي جي سڃاڻپ ڪري سگهجي ۽ ٽريچيل ٽشو جي ٻاهران ڪنهن به غلط ڳولا کي روڪي سگهجي. هر جانور مان سڀني جامع تصويرن مان داغدار علائقن کي ان جانور لاءِ ڪل داغدار علائقو پيدا ڪرڻ لاءِ گڏ ڪيو ويو. داغدار علائقي کي پوءِ ڪل ماسڪ علائقي سان ورهايو ويو ته جيئن نارمل ٿيل علائقو پيدا ٿئي.
هر ٽريچيا کي پيرافين ۾ شامل ڪيو ويو ۽ 5 μm حصا ڪٽيا ويا. حصن کي 5 منٽن لاءِ غير جانبدار تيز ڳاڙهي سان داغ ڏنو ويو ۽ تصويرون نڪون ايڪليپس E400 مائڪروسڪوپ، DS-Fi3 ڪئميرا ۽ NIS عنصر ڪيپچر سافٽ ويئر (ورژن 5.20.00) استعمال ڪندي حاصل ڪيون ويون.
سڀئي شمارياتي تجزيا گراف پيڊ پرزم v9 (گراف پيڊ سافٽ ويئر، انڪارپوريٽيڊ) ۾ ڪيا ويا. شمارياتي اهميت p ≤ 0.05 تي مقرر ڪئي وئي. Shapiro-Wilk ٽيسٽ استعمال ڪندي معمول جي تصديق ڪئي وئي، ۽ LacZ اسٽيننگ ۾ فرق جو جائزو اڻ جوڙيل ٽي-ٽيسٽ استعمال ڪندي ڪيو ويو.
ٽيبل 1 ۾ بيان ڪيل ڇهن ايم پيز کي PCXI استعمال ڪندي جانچيو ويو، ۽ نمائش ٽيبل 2 ۾ بيان ڪئي وئي آهي. ٻه پولسٽريئر ايم پيز (MP1 ۽ MP2؛ ترتيب وار 18 μm ۽ 0.25 μm) PCXI جي تحت نظر نه آيا، پر باقي نمونا سڃاڻپ لائق هئا (مثال شڪل 5 ۾ ڏيکاريا ويا آهن). MP3 ۽ MP4 (ترتيب وار 10-15٪ Fe3O4؛ 0.25 μm ۽ 0.9 μm) ٿوري نظر اچن ٿا. جيتوڻيڪ ٽيسٽ ڪيل ڪجهه ننڍڙن ذرڙن تي مشتمل آهي، MP5 (98٪ Fe3O4؛ 0.25 μm) سڀ کان وڌيڪ واضح هو. CombiMag پراڊڪٽ MP6 کي ڏسڻ ڏکيو آهي. سڀني حالتن ۾، اسان جي MP کي ڳولڻ جي صلاحيت مقناطيس کي ڪيپيلري جي متوازي اڳتي ۽ پوئتي ترجمو ڪندي خاص طور تي وڌي وئي. جڏهن مقناطيس ڪيپيلري کان پري ٿي ويا، ذرڙا ڊگهن تارن ۾ وڌندا ويا، پر جيئن مقناطيس ويجهو ايندا ويا ۽ مقناطيسي ميدان جي طاقت وڌي وئي، ذرڙن جي تارن کي ننڍو ڪيو ويو جيئن ذرات ڪيپيلري جي مٿئين سطح ڏانهن منتقل ٿيا (ڏسو) اضافي وڊيو S1: MP4)، مٿاڇري جي ذرڙن جي کثافت کي وڌائي ٿو. ان جي برعڪس، جڏهن مقناطيس کي ڪيپيلري مان هٽايو ويندو آهي، ته فيلڊ جي طاقت گهٽجي ويندي آهي ۽ MPs ڪيپيلري جي مٿئين مٿاڇري کان ڊگھي تارن ۾ ٻيهر ترتيب ڏين ٿا (ضمني وڊيو S2: MP4 ڏسو). مقناطيس جي حرڪت بند ٿيڻ کان پوءِ، توازن واري پوزيشن تي پهچڻ کان پوءِ ذرات ٿوري وقت لاءِ حرڪت ڪندا رهندا آهن. جيئن MP ڪيپيلري جي مٿئين مٿاڇري ڏانهن ۽ ان کان پري هلندو آهي، مقناطيسي ذرڙا عام طور تي ملبي کي سيال ذريعي ڇڪيندا آهن.
PCXI تحت MP جي نمائش نموني جي وچ ۾ خاص طور تي مختلف آهي. (a) MP3، (b) MP4، (c) MP5 ۽ (d) MP6. هتي ڏيکاريل سڀئي تصويرون هڪ مقناطيس سان ورتيون ويون آهن جيڪي تقريباً 10 ملي ميٽر سڌو ڪيپيلري جي مٿان واقع آهن. ظاهري وڏا دائرا ڪيپيلري ۾ ڦاٿل هوائي بلبل آهن، جيڪي واضح طور تي فيز ڪنٽراسٽ اميجنگ جي ڪاري ۽ اڇي ڪنڊ جي خاصيتن کي ڏيکاري رهيا آهن. ڳاڙهي دٻي ۾ ڪنٽراسٽ وڌائڻ وارو ميگنيفڪيشن شامل آهي. نوٽ ڪريو ته سڀني انگن اکرن ۾ مقناطيس اسڪيميٽڪس جا قطر ماپڻ لاءِ نه آهن ۽ ڏيکاريل کان تقريبن 100 ڀيرا وڏا آهن.
جيئن مقناطيس کي ڪيپيلري جي چوٽيءَ تي کاٻي ۽ ساڄي طرف ترجمو ڪيو ويندو آهي، ايم پي اسٽرنگ جو زاويه مقناطيس سان ترتيب ڏيڻ لاءِ تبديل ٿي ويندو آهي (شڪل 6 ڏسو)، اهڙيءَ طرح مقناطيسي فيلڊ لائينن کي بيان ڪيو ويندو آهي. MP3-5 لاءِ، جڏهن ڪورڊ هڪ حد جي زاويه تي پهچي ٿو، ته ذرات ڪيپيلري جي مٿين مٿاڇري سان گڏ ڇڪيا ويندا آهن. ان جي نتيجي ۾ اڪثر ڪري ايم پيز وڏن گروپن ۾ ڪلسٽر ٿي ويندا آهن جتي مقناطيسي ميدان مضبوط هوندو آهي (ضمني وڊيو S3:MP5 ڏسو). اهو خاص طور تي واضح ٿئي ٿو جڏهن ڪيپيلري جي آخر جي ويجهو تصويرنگ ڪئي ويندي آهي، جنهن جي ڪري ايم پيز کي فلوئڊ-ايئر انٽرفيس تي گڏ ڪيو ويندو آهي ۽ مرڪوز ڪيو ويندو آهي. MP6 ۾ ذرڙا، جيڪي MP3-5 کان وڌيڪ سمجهڻ ڏکيو هئا، انهن کي نه ڇڪيو ويو جيئن مقناطيس ڪيپيلري سان گڏ هليو ويو، پر ايم پي اسٽرنگ الڳ ٿي ويا، ذرڙن کي ڏسڻ جي ميدان ۾ ڇڏي ڏنو ويو (ضمني وڊيو S4:MP6 ڏسو). ڪجهه حالتن ۾، جڏهن لاڳو ٿيل مقناطيسي ميدان کي تصوير جي جڳهه کان وڏي فاصلي تي مقناطيس کي منتقل ڪرڻ سان گهٽايو ويو، باقي باقي ايم پيز ڪشش ثقل ذريعي ٽيوب جي هيٺئين سطح تي آهستي آهستي هيٺ لهي ويا جڏهن ته تار ۾ رهي (ضمني وڊيو S5:MP3 ڏسو).
ايم پي اسٽرنگ جو زاويه تبديل ٿئي ٿو جيئن مقناطيس ڪيپيلري جي مٿان ساڄي پاسي منتقل ٿئي ٿو. (a) MP3، (b) MP4، (c) MP5 ۽ (d) MP6. ڳاڙهي دٻي ۾ برعڪس وڌائڻ وارو ميگنيفڪيشن شامل آهي. نوٽ ڪريو ته ضمني وڊيوز معلوماتي آهن ڇاڪاڻ ته اهي اهم ذرڙن جي جوڙجڪ ۽ متحرڪ معلومات کي ظاهر ڪن ٿا جيڪي انهن جامد تصويرن ۾ نظر نه ٿا اچي سگهن.
اسان جي تجربن مان ظاهر ٿيو ته مقناطيس کي آهستي آهستي اڳتي ۽ پوئتي منتقل ڪرڻ سان vivo ۾ پيچيده حرڪت جي حوالي سان MP جي تصور کي آسان بڻائي ٿو. ان vivo ٽيسٽنگ نه ڪئي وئي ڇاڪاڻ ته پولسٽريئر موتي (MP1 ۽ MP2) ڪيپيلري ۾ نظر نه آيا. باقي چئن MPs مان هر هڪ کي vivo ۾ ٽيسٽ ڪيو ويو مقناطيس ڊگهي محور سان trachea جي مٿان ترتيب ڏنل تقريباً 30° کان عمودي تائين (شڪلون 2b ۽ 3a ڏسو)، ڇاڪاڻ ته ان جي نتيجي ۾ ڊگهي MP زنجير پيدا ٿي ۽ مقناطيس ترتيب ختم ٿيڻ کان وڌيڪ اثرائتو هو. ڪنهن به زنده جانور جي trachea ۾ MP3، MP4 ۽ MP6 نه مليا. جڏهن جانورن کي انساني طور تي مارڻ کان پوءِ چوهڙن جي هوائي رستن جي تصوير ڪڍي وئي، ته سرنج پمپ استعمال ڪندي اضافي حجم شامل ڪرڻ تي به ذرڙا پوشيده رهيا. MP5 ۾ سڀ کان وڌيڪ آئرن آڪسائيڊ مواد هو ۽ اهو واحد نظر ايندڙ ذرو هو، ۽ تنهن ڪري MP جي in vivo رويي جو جائزو وٺڻ ۽ ان جي خاصيت ڪرڻ لاءِ استعمال ڪيو ويو.
ايم پي ڊليوري دوران ٽريچيا جي مٿان مقناطيس رکڻ جي نتيجي ۾ ڪيترائي، پر سڀئي نه، ايم پي ڏسڻ جي ميدان ۾ مرڪوز ٿيا. ٽريچيا ۾ داخل ٿيندڙ ذرات انساني طور تي قربان ڪيل جانورن ۾ بهترين طور تي مشاهدو ڪيا ويندا آهن. شڪل 7 ۽ ضمني وڊيو S6: ايم پي 5 تيز مقناطيسي قبضو ۽ وينٽرل ٽريچيا جي مٿاڇري تي ذرڙن جي ترتيب ڏيکاري ٿو، جيڪو ظاهر ڪري ٿو ته ايم پي کي ٽريچيا جي گهربل علائقن ڏانهن هدايت ڪري سگهجي ٿو. ايم پي ڊليوري کان پوءِ ٽريچيا سان وڌيڪ پري ڳولا ڪرڻ تي، ڪجهه ايم پي ڪيرينا جي ويجهو مليا، اهو مشورو ڏئي ٿو ته مقناطيسي ميدان جي طاقت سڀني ايم پي کي گڏ ڪرڻ ۽ برقرار رکڻ لاءِ ڪافي نه هئي، ڇاڪاڻ ته اهي سيال جي عمل دوران وڌ ۾ وڌ مقناطيسي ميدان جي طاقت جي علائقي ذريعي پهچائي رهيا هئا. تنهن هوندي به، تصوير ٿيل علائقي جي چوڌاري پوسٽ پارٽم ايم پي ڪنسنٽريشن وڌيڪ هئي، اهو مشورو ڏئي ٿو ته ڪيترائي ايم پي هوائي رستي وارن علائقن ۾ رهيا جتي لاڳو ٿيل مقناطيسي ميدان جي طاقت سڀ کان وڌيڪ هئي.
تصويرون (الف) کان اڳ ۽ (ب) MP5 جي تازي طور تي euthanized چوٿين جي trachea ۾ پهچائڻ کان پوءِ، مقناطيس کي تصوير واري علائقي جي مٿان سڌو رکيل آهي. تصوير وارو علائقو ٻن ڪارٽيليج رِنگز جي وچ ۾ واقع آهي. MP پهچائڻ کان اڳ، هوائي رستي ۾ ڪجهه سيال هوندو آهي. ڳاڙهي دٻي ۾ برعڪس وڌائڻ وارو ميگنيفڪيشن شامل آهي. اهي تصويرون اضافي وڊيو S6:MP5 ۾ ڏيکاريل وڊيو مان آهن.
مقناطيس کي trachea سان گڏ vivo ۾ ترجمو ڪرڻ سان MP زنجير ايئر وي جي مٿاڇري اندر زاويه تبديل ڪري ٿي جيئن ڪيپليئرز ۾ ڏٺو ويو آهي (شڪل 8 ۽ ضمني وڊيو S7:MP5 ڏسو). جڏهن ته، اسان جي مطالعي ۾، MPs کي زنده ايئر وي جي مٿاڇري سان گڏ نه ڇڪي سگهجي ٿو جيئن اهي ڪيپليئرز سان ڪري سگهن ٿا. ڪجهه حالتن ۾، MP زنجير ڊگهو ٿيندو ويندو جيئن مقناطيس کاٻي ۽ ساڄي طرف منتقل ٿئي ٿو. دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، اسان اهو پڻ ڏٺو ته جڏهن مقناطيس کي trachea سان طول بلد طور تي منتقل ڪيو ويندو آهي ته ذرڙي جي تار مٿاڇري جي سيال پرت جي کوٽائي کي تبديل ڪندي نظر ايندي آهي، ۽ جڏهن مقناطيس کي سڌو مٿي منتقل ڪيو ويندو آهي ۽ ذرڙي جي تار کي عمودي پوزيشن ڏانهن گھمايو ويندو آهي ته وڌندي آهي (اضافي وڊيو S7 ڏسو). : MP5 0:09 تي، هيٺ ساڄي پاسي). حرڪت جو خاص نمونو تبديل ٿي ويو جڏهن مقناطيس کي ٽريچيا جي چوٽيءَ تي پاسي کان منتقل ڪيو ويو (يعني، ٽريچيا جي ڊيگهه جي بدران جانور جي کاٻي يا ساڄي طرف). ذرات اڃا تائين واضح طور تي نظر اچي رهيا هئا جيئن اهي هلندا هئا، پر جڏهن مقناطيس کي ٽريچيا مان هٽايو ويو، ته ذرڙن جي تارن جا ڪنارا نظر اچڻ لڳا (اضافي وڊيو S8:MP5 ڏسو، 0:08 تي شروع ٿئي ٿو). اهو MP رويي سان مطابقت رکي ٿو جيڪو اسان هڪ شيشي جي ڪيپيلري ۾ لاڳو ٿيل مقناطيسي ميدان هيٺ ڏٺو.
مثال طور تصويرون جيڪي هڪ زنده بي هوشي واري چوٿين جي ٽريچيا ۾ MP5 ڏيکارين ٿيون. (a) مقناطيس کي ٽريچيا جي مٿي ۽ کاٻي پاسي تصويرون حاصل ڪرڻ لاءِ استعمال ڪيو ويندو آهي، پوءِ (b) مقناطيس کي ساڄي پاسي منتقل ڪرڻ کان پوءِ. ڳاڙهي دٻي ۾ برعڪس وڌائڻ وارو ميگنيفڪيشن شامل آهي. اهي تصويرون ضمني وڊيو S7:MP5 ۾ ڏيکاريل وڊيو مان آهن.
جڏهن ٻه قطب trachea جي مٿان ۽ هيٺ اتر-ڏکڻ رخ ۾ ترتيب ڏنل هئا (يعني ڪشش؛ شڪل 3b)، MP chords ڊگھا نظر آيا ۽ ڊورسل tracheal مٿاڇري جي بدران trachea جي پاسي واري ڀت تي واقع هئا (ضمني وڊيو S9:MP5 ڏسو). جڏهن ته، هڪ واحد جڳهه تي ذرڙن جي اعلي ڪنسنٽريشن (يعني، trachea جي ڊورسل مٿاڇري) کي فلوئڊ پهچائڻ کان پوءِ نه ڏٺو ويو جڏهن هڪ ڊبل-مقناطيس ڊيوائس استعمال ڪئي وئي هئي، جيڪو عام طور تي تڏهن ٿيندو آهي جڏهن هڪ سنگل-مقناطيس ڊيوائس استعمال ڪيو ويندو آهي. پوءِ جڏهن هڪ مقناطيس قطبن کي الٽ ڪرڻ لاءِ ترتيب ڏنو ويو (شڪل 3c)، ڏيک جي ميدان ۾ نظر ايندڙ ذرڙن جو تعداد ترسيل کان پوءِ وڌي نه سگهيو. ٻنهي ڊبل-مقناطيس ترتيبن جو سيٽ اپ چئلينجنگ آهي ڇاڪاڻ ته اعلي مقناطيسي فيلڊ طاقتون جيڪي مقناطيس کي ڇڪيندا يا ڌڪيندا آهن، ترتيب وار. پوءِ سيٽ اپ کي ايئر وي جي متوازي هڪ واحد مقناطيس ۾ تبديل ڪيو ويو پر 90 درجن تي ايئر وي مان گذرڻ لاءِ ته جيئن فيلڊ لائينون tracheal ڀت کي آرٿوگونل طور پار ڪن (شڪل 3d)، هڪ رخ جيڪو اهو طئي ڪرڻ لاءِ ٺهيل آهي ته ڇا ذرات جي مجموعي تي پاسي واري ڀت جو مشاهدو ڪري سگهجي ٿو. تاهم، هن ترتيب ۾، ايم پي جمع يا مقناطيس جي حرڪت جي ڪا به سڃاڻپ ڪندڙ حرڪت نه هئي. انهن سڀني نتيجن جي بنياد تي، هڪ واحد مقناطيس، 30-درجي اورينٽيشن ترتيب (شڪل 3a) کي ان ويوو جين ڪيريئر مطالعي لاءِ چونڊيو ويو.
جڏهن جانور کي انساني قتل کان فوري طور تي بار بار تصوير ڏني وئي، ته مونجهاري واري ٽشو حرڪت جي غير موجودگي جو مطلب اهو هو ته صاف انٽرڪونڊرل فيلڊ ۾ باریک ۽ ننڍيون ذرڙا لڪيرون ڏسي سگهجن ٿيون، جيڪي مقناطيس جي ترجمي واري حرڪت سان "ڊگهيون" آهن. تنهن هوندي به، اڃا تائين MP6 ذرڙن جي موجودگي ۽ حرڪت کي واضح طور تي ڏسي نه ٿو سگهجي.
LV-LacZ ٽائيٽر 1.8 × 108 TU/ml هو، ۽ 1:1 CombiMag MP (MP6) سان ملائڻ کان پوءِ، جانورن کي 9 × 107 TU/ml LV گاڏي (يعني 4.5 × 106 TU/چوٿون) جي 50 μl tracheal dose ملي. انهن مطالعي ۾، ليبر دوران مقناطيس کي ترجمو ڪرڻ جي بدران، اسان مقناطيس کي هڪ پوزيشن ۾ مقرر ڪيو ته اهو طئي ڪيو وڃي ته ڇا LV ٽرانسڊڪشن (a) کي مقناطيسي فيلڊ جي غير موجودگي ۾ ویکٹر ڊليوري جي مقابلي ۾ بهتر بڻائي سگهجي ٿو، ۽ (b) فوڪس ڪري سگهجي ٿو ايئر وي سيلز کي مٿئين ايئر وي جي مقناطيسي ٽارگيٽ علائقن ڏانهن منتقل ڪيو وڃي ٿو.
مقناطيس جي موجودگي ۽ LV ویکٹرز سان گڏ CombiMag جي استعمال سان جانورن جي صحت تي خراب اثر نه پيا، جيئن اسان جي معياري LV ویکٹر پهچائڻ واري پروٽوڪول تي ٿيو. ميڪيڪل خرابي جي تابع tracheal علائقي جي سامهون واري تصويرن (ضمني شڪل 1) ظاهر ڪيو ته جڏهن مقناطيس موجود هو ته LV-MP سان علاج ڪيل جانورن جي گروپ ۾ ٽرانسڊڪشن جي سطح تمام گهڻي هئي (شڪل 9a). ڪنٽرول گروپ ۾ صرف ٿوري مقدار ۾ نيرو LacZ اسٽيننگ موجود هئي (شڪل 9b). نارملائيزڊ X-Gal اسٽين ٿيل علائقن جي مقدار ڏيکاري ٿي ته مقناطيسي فيلڊ جي موجودگي ۾ LV-MP جي انتظاميه تقريبن 6 گنا بهتري پيدا ڪئي (شڪل 9c).
مثال طور جامع تصويرون جيڪي LV-MP ذريعي tracheal transduction ڏيکارين ٿيون (a) مقناطيسي ميدان جي موجودگي ۾ ۽ (b) مقناطيس جي غير موجودگي ۾. (c) مقناطيس استعمال ڪرڻ وقت trachea اندر نارملائيزڊ LacZ ٽرانسڊڪشن ايريا ۾ شمارياتي طور تي اهم بهتري (*p = 0.029، t-test، n = 3 في گروپ، مطلب ± SEM).
غير جانبدار تيز ڳاڙهي رنگ جا داغدار حصا (مثال طور ضمني شڪل 2 ۾ ڏيکاريل آهي) LacZ رنگ وارا سيل ساڳي نموني ۽ جڳهه ۾ موجود ڏيکاريا جيئن اڳ ۾ ٻڌايو ويو هو.
ايئر وي جين ٿراپي لاءِ هڪ اهم چئلينج دلچسپي وارن علائقن ۾ ڪيريئر پارٽيڪلز جي صحيح لوڪلائيزيشن ۽ هوا جي وهڪري ۽ فعال بلغم جي صفائي جي موجودگي ۾ هلندڙ ڦڦڙن ۾ ٽرانسڊڪشن ڪارڪردگي جي اعليٰ سطح حاصل ڪرڻ رهي ٿو. CF ايئر وي جي بيماري جي علاج لاءِ ٺهيل LV ڪيريئرز لاءِ، هلندڙ ايئر ويز اندر ڪيريئر پارٽيڪلز جي رهائش جو وقت وڌائڻ هڪ اڃا تائين هڪ ناقابلِ تسخير مقصد رهيو آهي. جيئن ڪيسٽيلاني ۽ ٻين پاران اشارو ڪيو ويو آهي، ٽرانسڊڪشن کي بهتر بڻائڻ لاءِ مقناطيسي شعبن جي استعمال ۾ ٻين جين پهچائڻ جي طريقن جهڙوڪ اليڪٽروپوريشن جي مقابلي ۾ فائدا آهن، ڇاڪاڻ ته اهو سادگي، قيمت جي اثرائتي، پهچائڻ جي مقامي ڪرڻ، وڌندڙ ڪارڪردگي، ۽ مختصر انڪيوبيشن وقت، ۽ ممڪن طور تي هڪ ننڍڙو ڪيريئر ڊوز 10 کي گڏ ڪري سگهي ٿو. بهرحال، ٻاهرين مقناطيسي قوتن جي اثر هيٺ ايئر ويز ۾ مقناطيسي ذرات جي ان ويوو جمع ۽ رويي کي ڪڏهن به بيان نه ڪيو ويو آهي، ۽ نه ئي اصل ۾ هن طريقي جي فزيبلٽي کي برقرار رهندڙ ايئر ويز ۾ جين اظهار جي سطح کي وڌائڻ لاءِ ان ويوو ۾ ظاهر ڪيو ويو آهي.
اسان جي ان ويٽرو سنڪروٽرون PCXI تجربن مان ظاهر ٿيو ته سڀئي ذرڙا جيڪي اسان آزمايا، پولسٽريئر ايم پي جي استثنا سان، اسان جي استعمال ڪيل تصويري سيٽ اپ ۾ نظر اچن ٿا. مقناطيسي ميدان جي موجودگي ۾، ايم پي تار ٺاهيندا آهن جن جي ڊيگهه ذرڙن جي قسم ۽ مقناطيسي ميدان جي طاقت (يعني مقناطيس جي قربت ۽ حرڪت) سان لاڳاپيل هوندي آهي. جيئن شڪل 10 ۾ ڏيکاريل آهي، اسان جيڪي تارون ڏسون ٿا اهي هر انفرادي ذرڙي جي مقناطيسي ٿيڻ ۽ ان جي پنهنجي مقامي مقناطيسي ميدان کي پيدا ڪرڻ جي ڪري ٺهيل آهن. اهي الڳ الڳ ميدان ٻين ساڳين ذرڙن کي گڏ ڪرڻ ۽ ڳنڍڻ جو سبب بڻجن ٿا، گروپ تار جهڙيون حرڪتون ٻين ذرڙن جي مقامي پرڪشش ۽ رد ڪندڙ قوتن جي مقامي قوتن جي ڪري.
اسڪيميٽڪ ڏيکاري ٿو (a,b) سيال سان ڀريل ڪيپيلريز اندر پيدا ٿيندڙ ذرات جون ٽرينون ۽ (c,d) هوا سان ڀريل ٽريچيا. نوٽ ڪريو ته ڪيپيلريز ۽ ٽريچيا پيماني تي نه ٺاهيا ويا آهن. پينل (a) ۾ MP جي وضاحت پڻ شامل آهي، جنهن ۾ Fe3O4 ذرات شامل آهن جيڪي تارن ۾ ترتيب ڏنل آهن.
جڏهن مقناطيس کي ڪيپيلري جي مٿان منتقل ڪيو ويو، ته پارٽيڪل اسٽرنگ جو زاويه MP3-5 لاءِ هڪ نازڪ حد تي پهچي ويو جنهن ۾ Fe3O4 شامل هو، جنهن کان پوءِ پارٽيڪل اسٽرنگ هاڻي اصل پوزيشن ۾ نه رهيو، پر مٿاڇري سان گڏ هڪ نئين پوزيشن ڏانهن هليو ويو. مقناطيس. هي اثر ٿيڻ جو امڪان آهي ڇاڪاڻ ته شيشي جي ڪيپيلري مٿاڇري ڪافي هموار آهي ته جيئن هن حرڪت کي ممڪن بڻائي سگهجي. دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، MP6 (CombiMag) هن طريقي سان عمل نه ڪيو، ممڪن طور تي ڇاڪاڻ ته ذرات ننڍا هئا، مختلف ڪوٽنگ يا مٿاڇري چارج هئا، يا هڪ ملڪيتي ڪيريئر فلوئڊ انهن جي حرڪت جي صلاحيت کي متاثر ڪيو. CombiMag ذرات جي تصوير جي برعڪس پڻ ڪمزور آهي، اهو مشورو ڏئي ٿو ته سيال ۽ ذرات ۾ هڪجهڙا کثافت هوندا آهن ۽ تنهن ڪري آساني سان هڪ ٻئي ڏانهن نه ويندا آهن. جيڪڏهن مقناطيس تمام تيز حرڪت ڪري ٿو ته ذرات پڻ ڦاسي سگهن ٿا، اهو ظاهر ڪري ٿو ته مقناطيسي فيلڊ جي طاقت هميشه سيال ۾ ذرڙن جي وچ ۾ رگڙ کي ختم نه ڪري سگهي ٿي، اهو مشورو ڏئي ٿو ته شايد اهو حيران ڪندڙ نه آهي ته مقناطيسي فيلڊ جي طاقت ۽ مقناطيس ۽ ٽارگيٽ ايريا جي وچ ۾ فاصلو تمام ضروري آهي. گڏ ڪيو وڃي، اهي نتيجا اهو پڻ مشورو ڏين ٿا ته، جڏهن ته مقناطيس ڪيترن ئي MPs کي پڪڙي سگهن ٿا جيڪي ٽارگيٽ ايريا مان وهندا آهن، اهو ممڪن ناهي. ته مقناطيس تي ڀروسو ڪري سگهجي ٿو ته جيئن CombiMag ذرات کي trachea جي مٿاڇري تي منتقل ڪري سگهجي. تنهن ڪري، اسان اهو نتيجو ڪڍون ٿا ته in vivo LV-MP مطالعي کي جامد مقناطيسي شعبن کي استعمال ڪرڻ گهرجي ته جيئن هوائي رستي جي مخصوص علائقن کي جسماني طور تي نشانو بڻايو وڃي.
جڏهن ذرات جسم ۾ پهچايا ويندا آهن، ته انهن کي پيچيده حرڪت ڪندڙ جسم جي بافتن جي حوالي سان سڃاڻڻ ڏکيو هوندو آهي، پر انهن کي ڳولڻ جي صلاحيت کي وڌايو ويو مقناطيس کي trachea جي مٿان افقي طور تي ترجمو ڪرڻ سان ته جيئن MP تارن کي "وِگل" ڪري سگهجي. جيتوڻيڪ لائيو تصويرنگ ممڪن آهي، جڏهن جانور کي انساني طور تي ماريو ويو آهي ته ذرڙن جي حرڪت کي سمجهڻ آسان آهي. جڏهن مقناطيس تصويرنگ واري علائقي جي مٿان رکيل هو ته MP ڪنسنٽريشن عام طور تي هن جڳهه تي سڀ کان وڌيڪ هئي، جيتوڻيڪ ڪجهه ذرات عام طور تي trachea سان گڏ وڌيڪ مليا هئا. ان ويٽرو مطالعي جي برعڪس، ذرڙن کي مقناطيس جو ترجمو ڪندي trachea سان گڏ نه ٿو ڇڪي سگهجي. هي ڳولا ان سان مطابقت رکي ٿي ته ڪيئن بلغم جيڪو trachea جي مٿاڇري کي ڍڪيندو آهي عام طور تي سانس ۾ داخل ٿيندڙ ذرات کي پروسيس ڪندو آهي، انهن کي بلغم ۾ ڦاسائيندو آهي ۽ بعد ۾ mucociliary clearance mechanism ذريعي صاف ڪيو ويندو آهي.
اسان اهو تصور ڪيو ته trachea جي مٿان ۽ هيٺان ڪشش لاءِ مقناطيس جو استعمال (شڪل 3b) هڪ وڌيڪ يونيفارم مقناطيسي ميدان جي نتيجي ۾ ٿي سگهي ٿو، هڪ مقناطيسي ميدان جي بدران جيڪو هڪ نقطي تي تمام گهڻو مرڪوز آهي، ممڪن طور تي ذرڙن جي وڌيڪ يونيفارم ورڇ جو سبب بڻجندو. بهرحال، اسان جي ابتدائي مطالعي کي هن مفروضي جي حمايت ڪرڻ لاءِ واضح ثبوت نه مليا. ساڳئي طرح، (شڪل 3c) کي هٽائڻ لاءِ مقناطيس جي هڪ جوڙي کي ترتيب ڏيڻ سان تصوير ٿيل علائقي ۾ وڌيڪ ذرڙا جمع نه ٿيا. اهي ٻئي نتيجا ظاهر ڪن ٿا ته ٻٽي مقناطيس سيٽ اپ ايم پي ٽارگيٽنگ جي مقامي ڪنٽرول کي خاص طور تي بهتر نٿو ڪري، ۽ نتيجي ۾ مضبوط مقناطيسي قوتن کي ترتيب ڏيڻ ڏکيو آهي، هن طريقي کي گهٽ عملي بڻائي ٿو. ساڳئي طرح، مقناطيس کي مٿي ۽ trachea ذريعي رخ ڪرڻ (شڪل 3d) پڻ تصوير ٿيل علائقي ۾ رکيل ذرڙن جي تعداد ۾ اضافو نه ڪيو. انهن مان ڪجهه متبادل ترتيبون ڪامياب نه ٿي سگهن ٿيون ڇاڪاڻ ته اهي جمع ٿيل علائقي اندر گهٽ مقناطيسي ميدان جي طاقت جو نتيجو آهن. تنهن ڪري، واحد 30-ڊگري زاويه مقناطيس ترتيب (شڪل 3a) کي ان ويوو ٽيسٽنگ لاءِ سڀ کان آسان ۽ ڪارآمد طريقو سمجهيو ويندو آهي.
LV-MP مطالعي مان ظاهر ٿيو ته جڏهن LV ویکٹرز کي CombiMag سان ملايو ويو ۽ مقناطيسي ميدان جي موجودگي ۾ جسماني خرابي کان پوءِ پهچايو ويو، ته ڪنٽرول جي مقابلي ۾ trachea ۾ ٽرانسڊڪشن جي سطح ۾ نمايان اضافو ٿيو. سنڪروٽرون اميجنگ مطالعي ۽ LacZ نتيجن جي بنياد تي، مقناطيسي ميدان ظاهري طور تي trachea اندر LV کي محفوظ ڪرڻ ۽ ویکٹر ذرڙن جي تعداد کي گهٽائڻ جي قابل هو جيڪي فوري طور تي ڦڦڙن ۾ گهيرو ڪن ٿا. اهڙيون ٽارگيٽنگ بهتريون وڌيڪ اثرائتي ٿي سگهن ٿيون جڏهن ته پهچائڻ واري ٽائيٽرز، آف ٽارگيٽ ٽرانسڊڪشن، سوزش ۽ مدافعتي ضمني اثرات، ۽ جين ڪيريئر جي قيمتن کي گهٽائي سگهن ٿيون. اهم طور تي، ٺاهيندڙ جي مطابق، CombiMag کي ٻين جين منتقلي طريقن سان گڏ استعمال ڪري سگهجي ٿو، بشمول ٻين وائرل ویکٹرز (جهڙوڪ AAV) ۽ نيوڪلڪ ايسڊز سان.