ڪجهه LC مسئلا حل ڪرڻ جا موضوع ڪڏهن به پراڻا نه هوندا آهن، جيئن ته LC مشق ۾ مسئلا آهن، جيئن ته اوزارن جي ٽيڪنالاجي وقت سان گڏ بهتر ٿئي ٿي. اهڙا ڪيترائي طريقا آهن جن سان LC سسٽم ۾ مسئلا پيدا ٿي سگهن ٿا ۽ خراب چوٽي جي شڪل ۾ ختم ٿي سگهن ٿا. جڏهن چوٽي جي شڪل سان لاڳاپيل مسئلا پيدا ٿين ٿا، انهن نتيجن جي ممڪن سببن جي هڪ مختصر فهرست اسان جي مشڪلاتن جي حل جي تجربي کي آسان ڪرڻ ۾ مدد ڪري ٿي.
هي ”ايل سي ٽربل شوٽنگ“ ڪالم لکڻ ۽ هر مهيني عنوانن تي سوچڻ ڏاڍو مزو آيو، ڇاڪاڻ ته ڪجهه موضوع ڪڏهن به انداز کان ٻاهر نه ويندا آهن، جڏهن ته ڪروميٽوگرافي جي تحقيق جي ميدان ۾ ڪجهه موضوع يا خيال ختم ٿي ويندا آهن، ڇاڪاڻ ته اهي نوان ۽ بهتر نظريا، مسئلن جي حل جي ميدان ۾، نئين ۽ بهتر خيالن جي ڪري ختم ٿي ويندا آهن، ڇاڪاڻ ته پهريون ڀيرو جڏهن کان هي مسئلو حل ڪرڻ وارو مضمون (Journal LC) ۾ پهريون ڀيرو ڪجهه مضمونن جو جوڙ ۾ اچي رهيو آهي. 1983 ۾ (1) گذريل ڪجھ سالن کان، مون ڪيترن ئي LC مسئلن جي حل واري سيڪشن تي ڌيان ڏنو آھي معاصر رجحانن تي جيڪي مائع ڪروميٽوگرافي (LC) کي متاثر ڪن ٿا (مثال طور، برقرار رکڻ تي دٻاء جي اثر جي اسان جي سمجھ جو نسبتي مقابلو [2] نيون اڳڀرائيون) LC جي اسان جي تشريح هن مھيني ۾ مشڪلاتن جي نتيجي ۾، LC ۾ مشڪلاتن جي نتيجي ۾ ۽ ڪيئن. منهنجي سيريز کي جاري رکڻ (3)، جيڪو ڊسمبر 2021 ۾ شروع ٿيو، جيڪو LC جي مسئلن جي حل ڪرڻ جي "زندگي ۽ موت" جي ڪجهه عنوانن تي ڌيان ڏئي ٿو - عنصر جيڪي ڪنهن به مسئلي جي حل ڪندڙ لاءِ بهترين آهن، ضروري آهن، سسٽم جي عمر جي ڪابه پرواهه ناهي اسان استعمال ڪري رهيا آهيون. هن سيريز جو بنيادي موضوع انتهائي لاڳاپيل آهي LCGC جي مشهور “LC ٽربل شوٽنگ سيريز” جي ٽيون حصو. ، مون چوٽي جي شڪل يا چوٽي جي خاصيتن سان لاڳاپيل مسئلن تي ڌيان ڏيڻ جو انتخاب ڪيو آهي. ناقابل يقين حد تائين، وال چارٽ ۾ 44 مختلف سببن جي فهرست ڏنل آهي خراب چوٽي جي شڪل جا! اسان انهن سڀني مسئلن تي تفصيل سان هڪ مضمون ۾ غور نه ٿا ڪري سگهون، ان ڪري هن موضوع تي پهرين قسط ۾، آئون انهن مان ڪجهه تي ڌيان ڏيندس جيڪي مون کي اڪثر نظر اچن ٿا. مون کي اميد آهي ته نوجوان ۽ پوڙها استعمال ڪندڙ هن موضوع تي ڪجهه اهم مددگار ڳوليندا.
مان پاڻ کي ”ڪجهه به ممڪن آهي“ سان مسئلن جي حل واري سوالن جا جواب ڏين ٿا. اهو جواب آسان لڳي سگهي ٿو جڏهن مشاهدن تي غور ڪيو وڃي جن جي تشريح ڪرڻ مشڪل آهي، پر مون کي اهو اڪثر مناسب لڳندو آهي. خراب چوٽي جي شڪل جي ڪيترن ئي ممڪن سببن جي ڪري، اهو ضروري آهي ته هڪ کليل ذهن رکون جڏهن اهو غور ڪيو وڃي ته مسئلو ڇا ٿي سگهي ٿو، ۽ ممڪن سببن کي اوليت ڏيڻ جي قابل ٿيڻ جي قابل ٿي، اسان جي تمام اهم ڪوشش آهي انهن مسئلن کي حل ڪرڻ جي شروعاتي نقطي تي. سيبل
ڪنهن به مشڪلاتن کي حل ڪرڻ واري مشق ۾ هڪ اهم قدم - پر هڪ جيڪو مان سمجهان ٿو ته هيٺ ڏنل آهي - اهو تسليم ڪرڻ آهي ته اتي هڪ مسئلو آهي جنهن کي حل ڪرڻ جي ضرورت آهي. اهو سمجهڻ آهي ته اتي هڪ مسئلو آهي اڪثر ڪري اهو تسليم ڪرڻ جو مطلب اهو آهي ته اوزار سان ڇا ٿئي ٿو اسان جي اميدن کان مختلف آهي، جيڪي نظرياتي، تجرباتي علم، ۽ تجربو (5) جي شڪل ۾ آهن، "چوٽي جي شڪل" جو حوالو ڏنو ويو آهي، هتي صرف akmetrical جي شڪل نه آهي. oth, fluffy, leading edge, tailing, etc.)، پر چوٽيءَ تائين به. حقيقي چوٽي جي شڪل لاءِ اسان جون اميدون ساديون آهن. ٿيوري (6) درسي ڪتاب جي اميد جي چڱيءَ طرح حمايت ڪري ٿي ته، اڪثر صورتن ۾، ڪروميٽوگرافڪ چوٽيون سميٽيل هجن ۽ گس جي شڪل جي مطابق هجن. اسان هن موضوع تي مستقبل جي مضمون ۾ بحث ڪنداسين. شڪل 1 ۾ ٻيون چوٽي جي شڪلون ڪجهه ٻين امڪانن کي ڏيکارين ٿيون جيڪي مشاهدو ڪري سگهجن ٿيون- ٻين لفظن ۾، ڪجهه طريقن سان شيون غلط ٿي سگهن ٿيون. هن قسط جي باقي ۾، اسان حالتن جي ڪجهه مخصوص مثالن تي بحث ڪرڻ ۾ وقت گذاريندا سين جيڪي انهن شڪلن جي قسمن کي آڻي سگهن ٿيون.
ڪروميٽوگرام ۾ ڪڏهن ڪڏهن چوٽيون ڏسڻ ۾ نه اينديون آهن جتي انهن جي خارج ٿيڻ جي اميد ڪئي ويندي آهي. مٿي ڏنل وال چارٽ اشارو ڪري ٿو ته چوٽي جي غير موجودگي (فرض ڪيو ته نمونو اصل ۾ ٽارگيٽ اينالائيٽ ڪنسنٽريشن تي مشتمل آهي جيڪو ڊيڪٽر جواب کي ڪافي ڪرڻ گهرجي انهي کي شور کان مٿي ڏسڻ لاءِ) عام طور تي ڪجهه اوزار جي مسئلي سان لاڳاپيل هوندو آهي يا غلط مشاهدو ٿيل سڀني حالتن ۾ موبائيل).چوٽيون، عام طور تي تمام گهڻو ”ڪمزور“). هن درجي ۾ امڪاني مسئلن ۽ حلن جي هڪ مختصر فهرست ٽيبل I ۾ ملي سگهي ٿي.
جيئن مٿي ذڪر ڪيو ويو آهي، اهو سوال آهي ته چوٽي جي وسيع ٿيڻ کي ڪيترو برداشت ڪرڻ گهرجي ان تي ڌيان ڏيڻ کان اڳ ۽ ان کي درست ڪرڻ جي ڪوشش ڪرڻ هڪ پيچيده موضوع آهي جنهن تي آئون ايندڙ مضمون ۾ بحث ڪندس. منهنجو تجربو اهو آهي ته اهم چوٽي کي وسيع ڪرڻ اڪثر ڪري چوٽي جي شڪل ۾ هڪ اهم تبديلي سان گڏ هوندو آهي، ۽ چوٽي جي ٽائلنگ اڳئين چوٽي يا ورهائڻ کان وڌيڪ عام آهي. جڏهن ته، ڪجھ به مختلف سببن جي ڪري نه هوندا آهن، جن مان ڪجهه مختلف نه هوندا آهن. سبب:
انهن مسئلن مان هر هڪ تي تفصيل سان بحث ڪيو ويو آهي اڳوڻن مسئلن جي حل ڪرڻ واري ايل سي ۾، ۽ پڙهندڙ انهن موضوعن ۾ دلچسپي وٺندا آهن انهن مسئلن جي بنيادي سببن ۽ امڪاني حل جي ڄاڻ لاء انهن پوئين مضمونن جو حوالو ڏئي سگهن ٿا.وڌيڪ تفصيل.
چوٽي جي چوٽي، چوٽي جي سامهون، ۽ تقسيم سڀ ڪيميائي يا جسماني واقعن جي ڪري ٿي سگهي ٿي، ۽ انهن مسئلن جي امڪاني حل جي فهرست وڏي پئماني تي مختلف ٿي سگهي ٿي، ان تي منحصر آهي ته ڇا اسان کي ڪيميائي يا جسماني مسئلي سان ڊيل ڪري رهيا آهيون. اڪثر ڪري، مختلف چوٽين کي ڪروميٽوگرام ۾ موازنہ ڪندي، توهان اهم اشارا ڳولي سگهو ٿا، جنهن جي باري ۾ سڀ کان وڌيڪ ممڪن آهي ته سڀ کان وڌيڪ سبب آهي سڀ کان وڌيڪ هڪجهڙائي واري شڪل ۾. جسماني نه آهي. جيڪڏهن صرف هڪ يا ڪجهه چوٽيون متاثر ٿين ٿيون، پر باقي ٺيڪ نظر اچن ٿا، سبب گهڻو ڪري ڪيميائي آهي.
چوٽي جي ڇڪڻ جا ڪيميائي سبب تمام پيچيده آهن هتي مختصر طور تي بحث ڪرڻ لاءِ. دلچسپي رکندڙ پڙهندڙن کي وڌيڪ تفصيلي بحث لاءِ “LC ٽريبل شوٽنگ” جي تازي مسئلي جو حوالو ڏنو ويو آهي (10) تنهن هوندي به ، ڪوشش ڪرڻ لاءِ هڪ آسان شيءِ آهي ته انجيل ٿيل تجزيه جي ماس کي گهٽايو وڃي ۽ ڏسو ته چوٽي جي شڪل بهتر ٿئي ٿي. جيڪڏهن ائين آهي، ته پوءِ هن مسئلي کي حد کان وڌيڪ لوڊ ڪرڻ جو طريقو آهي. ننڍڙن تجزياتي ماس کي ڪڍڻ، يا ڪروميٽوگرافڪ حالتون تبديل ٿيڻ گهرجن ته جيئن وڏي ماس جي انجيڪشن سان به سٺي چوٽي جي شڪل حاصل ڪري سگهجي.
چوٽي جي ڇڪڻ جا ڪيترائي امڪاني جسماني سبب پڻ آهن. امڪانن جي تفصيلي بحث ۾ دلچسپي رکندڙ پڙهندڙن کي "LC ٽريبل شوٽنگ" (11) جي هڪ ٻئي تازي مسئلي جو حوالو ڏنو ويو آهي. چوٽي ٽيلنگ جي وڌيڪ عام جسماني سببن مان هڪ انجيڪٽر ۽ ڊيڪٽر (12) جي وچ ۾ هڪ نقطي تي خراب ڪنيڪشن آهي (12). هڪ انتهائي مثال، اسان ڪجهه هفتو اڳ ٺاهيل ليب ڪيس ۾ ڏيکاريو ويو آهي. هڪ نئين انجيڪشن والو سان هڪ سسٽم جيڪو اسان اڳ ۾ استعمال نه ڪيو هو، ۽ هڪ ننڍڙو حجم انجيڪشن لوپ هڪ فيرول سان نصب ڪيو جيڪو هڪ اسٽينلیس اسٽيل ڪيپيلري تي ٺهيل هو. ڪجهه شروعاتي مشڪلاتن جي تجربن کان پوء، اسان محسوس ڪيو ته انجيڪشن والو اسٽيٽر ۾ بندرگاهه جي کوٽائي تمام گهڻي هئي ان جي ڀيٽ ۾، اسان کي آسانيء سان حل ڪرڻ جي نتيجي ۾ وڏي پورٽلا جي وڏي مقدار ۾ مسئلو حل ڪيو ويو آهي. ٻي ٽيوب سان انجيڪشن لوپ، اسان بندرگاهن جي تري ۾ مئل حجم کي ختم ڪرڻ لاءِ فيرول کي مناسب پوزيشن ۾ ترتيب ڏئي سگھون ٿا.
شڪل 1e ۾ ڏيکاريل چوٽيءَ جا محاذ به جسماني يا ڪيميائي مسئلن جي ڪري ٿي سگهن ٿا. اڳئين ڪنڊ جو هڪ عام فزيڪل سبب اهو آهي ته ڪالمن جو ذرڙو بيڊ چڱيءَ طرح ڀريل نه آهي، يا اهو ته ذرات وقت گذرڻ سان گڏ ٻيهر منظم ٿي ويا آهن. جيئن ته هن فزيڪل رجحان جي ڪري چوٽيءَ جي چوٽيءَ جي ڪري، ان کي درست ڪرڻ جو بهترين طريقو اهو آهي ته ان کي درست ڪرڻ لاءِ ڪيميڪل شڪل کي تبديل ڪيو وڃي. اصليت اڪثر ان مان پيدا ٿيندي آهي جنهن کي اسين ”غير لڪير“ برقرار رکڻ واري حالتن کي سڏيندا آهيون. مثالي (لينيئر) حالتن جي تحت، اسٽيشنري مرحلي ذريعي رکيل تجزيي جي مقدار (تنهنڪري، برقرار رکڻ واري عنصر) لڪير سان لاڳاپيل آهي ڪالمن ۾ تجزيي جي ڪنسنٽريشن سان. ڪروميٽوگرافي طور، ان جو مطلب اهو آهي ته، ان جو مطلب اهو آهي ته مجموعي طور تي ان جي مقدار ۾ اضافو نه ٿيندو، پر ان جي مقدار ۾ اضافو نه ٿيندو. اهو تعلق تڏهن ٽٽندو آهي جڏهن برقرار رکڻ وارو رويو غير لڪير هوندو آهي، ۽ چوٽيون نه رڳو ڊگھيون ٿينديون آهن پر وسيع به ٿينديون آهن جيئن وڌيڪ ماس لڳايو ويندو آهي. ان کان علاوه، غير لڪير شڪلون ڪروميٽوگرافڪ چوٽيءَ جي شڪل کي طئي ڪنديون آهن، نتيجي ۾ اڳواٽ يا پويان ڪنارا. analyte mass.جيڪڏهن چوٽي جي شڪل بهتر ٿئي ٿي، طريقو تبديل ڪيو وڃي ته انجيڪشن جي معيار کان وڌيڪ نه ٿئي جيڪا اڳئين ڪنڊ جو سبب بڻجندي آهي، يا هن رويي کي گهٽائڻ لاءِ ڪروميٽوگرافڪ حالتون تبديل ٿيڻ گهرجن.
ڪڏهن ڪڏهن اسان ڏسون ٿا ته ”تقسيم“ جي چوٽي ڇا نظر اچي ٿي، جيئن شڪل 1f ۾ ڏيکاريل آهي. هن مسئلي کي حل ڪرڻ ۾ پهريون قدم اهو طئي ڪرڻو آهي ته ڇا چوٽي جي شڪل جزوي ڪو-ايليوشن جي ڪري آهي (يعني، ٻن ڌار ڌار پر ويجهڙائي ۾ نڪتل مرڪب جي موجودگي).جيڪڏهن اصل ۾ ٻه مختلف تجزيا آهن جيڪي هڪ ٻئي جي ويجهو اچي رهيا آهن، ته پوءِ اهو معاملو آهي، انهن جي ڳڻپ، ڳڻپ ۽ ڳڻپيوڪر جي ڳڻپ (مثال طور، ايپ جي ڳڻپ ۽ ڳڻپ لاءِ). arent ”ورهايل“ چوٽيون جسماني ڪارڪردگيءَ سان لاڳاپيل آهن، ڪالم سان ئي ڪو به واسطو نه آهي. اڪثر، هن فيصلي جو سڀ کان اهم اشارو اهو آهي ته ڇا ڪروميٽوگرام ۾ سڀ چوٽيون ورهايل شڪلون ڏيکارينديون آهن، يا صرف هڪ يا ٻه. جيڪڏهن اهو صرف هڪ يا ٻه آهي، ته اهو شايد ڪو-ايليشن مسئلو آهي؛جيڪڏهن سڀ چوٽيون ورهائجي وڃن، ته اهو شايد هڪ جسماني مسئلو آهي، گهڻو ڪري خود ڪالمن سان لاڳاپيل آهي.
خود ڪالمن جي جسماني ملڪيت سان لاڳاپيل ورهايل چوٽيون عام طور تي جزوي طور تي بند ٿيل انليٽ يا آئوٽليٽ فريٽس، يا ڪالمن ۾ ذرات جي ٻيهر ترتيب جي سبب هونديون آهن، ڪالمن جي چينل جي ٺهڻ جي مخصوص علائقن ۾ موبائيل فيز جي ڀيٽ ۾ موبائيل فيز کي تيز وهڻ جي اجازت ڏئي ٿي. ٻين علائقن ۾ (11). جزوي طور تي بند ٿيل فريٽ ڪڏهن ڪڏهن ڪالم ذريعي صاف ڪري سگهجي ٿو.بهرحال، منهنجي تجربي ۾، اهو عام طور تي ڊگهي مدي واري حل جي بجاءِ هڪ مختصر مدي وارو هوندو آهي. اهو اڪثر ڪري جديد ڪالمن سان موتمار هوندو آهي جيڪڏهن ذرڙا ڪالمن ۾ ٻيهر گڏ ٿين. هن نقطي تي، اهو بهتر آهي ته ڪالمن کي مٽايو ۽ جاري رکو.
شڪل 1g ۾ چوٽي، منهنجي پنهنجي ليبارٽري ۾ هڪ تازي مثال کان، عام طور تي اشارو ڪري ٿو ته سگنل ايترو تيز آهي ته اهو جواب جي حد تائين پهچي چڪو آهي. آپٽيڪل جاذب ڊيڪٽرز لاء (هن صورت ۾ UV-vis)، جڏهن تجزيي جي ڪنسنٽريشن تمام گهڻي آهي، تجزيي تمام گهڻو جذب ڪري ٿو، ان کي ڳولڻ لاء تمام گهٽ روشني جي حالت کي ڳولي ٿو. photodetector کان al سگنل تمام گھڻو متاثر ٿئي ٿو شور جي مختلف ذريعن کان، جهڙوڪ گمراھ ٿيل روشني ۽ ”ڊارڪ ڪرنٽ“، سگنل کي بلڪل ”فجي“ بنائڻ ۾ ۽ تجزياتي ڪنسنٽريشن کان آزاد.جڏهن اهو ٿئي ٿو، مسئلو اڪثر ڪري آساني سان حل ڪري سگهجي ٿو اينالائيٽ جي انجڻ جي مقدار کي گهٽائڻ سان- انجيڪشن جي مقدار کي گهٽائڻ، نموني کي گهٽائڻ، يا ٻئي.
ڪروميٽوگرافي اسڪول ۾، اسين ڊيڪٽر سگنل (يعني ڪروميٽوگرام ۾ y-axis) کي نموني ۾ تجزياتي ڪنسنٽريشن جي اشاري طور استعمال ڪندا آهيون. ان ڪري ڪروميٽوگرام کي صفر کان هيٺ سگنل سان ڏسڻ ۾ عجيب لڳي ٿي، جيئن سادو تعبير اهو آهي ته اهو اشارو ڏئي ٿو هڪ منفي تجزياتي ڪنسنٽريشن جو اڪثر ڪري جسماني مشاهدو ڪرڻ ممڪن ناهي. آپٽيڪل جاذب ڊيڪٽرز (مثال طور، UV-vis).
ان صورت ۾، هڪ منفي چوٽي جو سادو مطلب آهي ته ڪالمن مان نڪرندڙ ماليڪيولز موبائيل فيز جي ڀيٽ ۾ گهٽ روشني جذب ڪن ٿا ان جي چوٽي کان اڳ ۽ پوءِ. اهو ٿي سگهي ٿو، مثال طور، جڏهن نسبتاً گهٽ ڊڪشنر ويج لينٿ (<230 nm) ۽ موبائيل فيز additives استعمال ڪندا آهن جيڪي انهن موج جي ڊيگهه تي تمام گهڻي روشني جذب ڪن ٿا. ايڪٽيٽ يا فارميٽ. ڪو به اصل ۾ منفي چوٽي استعمال ڪري سگھي ٿو هڪ حساب ڪتاب جي وکر تيار ڪرڻ ۽ صحيح مقدار جي معلومات حاصل ڪرڻ لاء، تنهن ڪري انهن کان بچڻ جو ڪو به بنيادي سبب ناهي (هن طريقي کي ڪڏهن ڪڏهن "غير سڌي UV ڳولڻ" جي طور تي حوالو ڏنو ويندو آهي) (13). تنهن هوندي به، جيڪڏهن اسان حقيقت ۾ منفي چوٽي کان بچڻ چاهيون ٿا، انهي صورت ۾ مختلف طريقن جي سڃاڻپ ڪرڻ لاء بهترين حل استعمال ڪيو ويو آهي. analyte موبائيل فيز کان وڌيڪ جذب ڪري ٿو، يا موبائيل فيز جي ٺاھ جوڙ کي تبديل ڪري ٿو ته جيئن اھي اينالائيٽس کان گھٽ روشني جذب ڪن.
ناڪاري چوٽيون به ظاهر ٿي سگهن ٿيون جڏهن اضطراب واري انڊيڪس (RI) جي چڪاس استعمال ڪندي جڏهن نمونن ۾ تجزيي کان سواءِ اجزاء جو اضطراب انڊيڪس، جهڙوڪ سولوينٽ ميٽرڪس، موبائيل مرحلي جي ريفريڪٽو انڊيڪس کان مختلف آهي. اهو پڻ UV-vis detection سان ٿئي ٿو، پر اهو اثر گهٽجي ٿو وڃي. موبائيل مرحلي جي نموني ميٽرڪس جو ition.
ٽئين حصي ۾ LC مسئلن جي حل جي بنيادي موضوع تي، مون انهن حالتن تي بحث ڪيو جن ۾ مشاهدو ٿيل چوٽي جي شڪل متوقع يا عام چوٽي جي شڪل کان مختلف آهي. اهڙن مسئلن جو مؤثر حل شروع ٿئي ٿو متوقع چوٽي جي شڪلن جي ڄاڻ (جي نظريي جي بنياد تي يا موجوده طريقن سان اڳئين تجربي جي بنياد تي)، تنهن ڪري انهن اميدن کان انحراف واضح آهن. قسط ۾، مان تفصيل سان بحث ڪريان ٿو ڪجھ سببن جو آئون اڪثر ڏسان ٿو. انهن تفصيلن کي ڄاڻڻ سان مسئلو حل ڪرڻ شروع ڪرڻ لاءِ هڪ سٺي جاءِ ملي ٿي، پر سڀني امڪانن کي پڪڙي نه ٿي. سببن ۽ حلن جي وڌيڪ تفصيلي فهرست ۾ دلچسپي رکندڙ پڙهندڙن کي LCGC "LC مسئلا حل ڪرڻ واري گائيڊ" وال چارٽ ڏانهن اشارو ڪري سگهن ٿا.
(4) LCGC “LC مسئلن جي حل لاءِ گائيڊ” وال چارٽ.https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) اي فيلنگر، ڪروميٽوگرافي ۾ ڊيٽا اينالائسز ۽ سگنل پروسيسنگ (ايلسيويئر، نيو يارڪ، NY، 1998)، ص 43-96.
(8) وهاب MF، Dasgupta PK، Kadjo AF ۽ Armstrong DW، Anal.Chim.Journal.Rev.907، 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.