Nature.com تي اچڻ لاءِ مهرباني. توهان جي استعمال ڪيل برائوزر ورزن ۾ محدود CSS سپورٽ آهي. بهترين تجربي لاءِ، اسان سفارش ڪريون ٿا ته توهان هڪ اپڊيٽ ٿيل برائوزر استعمال ڪريو (يا انٽرنيٽ ايڪسپلورر ۾ مطابقت واري موڊ کي غير فعال ڪريو). انهي دوران، مسلسل سپورٽ کي يقيني بڻائڻ لاءِ، اسان سائيٽ کي اسٽائل ۽ جاوا اسڪرپٽ کان سواءِ رينڊر ڪنداسين.
پکين جي زرخيزي انهن جي صلاحيت تي منحصر آهي ته اهي سپرم اسٽوريج ٽيوبلز (SST) ۾ ڊگهي عرصي تائين ڪافي قابل عمل سپرم ذخيرو ڪري سگهن ٿا. صحيح طريقو جنهن سان سپرميٽوزوا داخل ٿئي ٿو، ان ۾ رهي ٿو ۽ ڇڏي ٿو SST متنازع رهي ٿو. شارڪي ڪڪڙين جي سپرم ۾ ايگلوٽينيشن جو رجحان وڌيڪ هو، جنهن ۾ ڪيترائي سيل هوندا هئا، موبائل فليمينٽس بنڊل ٺاهيندا هئا. هڪ مبهم فيلوپيئن ٽيوب ۾ اسپرميٽوزوا جي حرڪت ۽ رويي کي ڏسڻ ۾ مشڪل جي ڪري، اسان اسپرميٽوزوا جي حرڪت ۽ حرڪت جو مطالعو ڪرڻ لاءِ اسپرميٽوزوا جي برابر مائڪرو چينل ڪراس سيڪشن سان هڪ مائڪرو فلوئڊڪ ڊيوائس استعمال ڪئي. هي مطالعو بحث ڪري ٿو ته اسپرم بنڊل ڪيئن ٺهن ٿا، اهي ڪيئن هلن ٿا، ۽ SST ۾ اسپرم جي رهائش کي وڌائڻ ۾ انهن جي ممڪن ڪردار. اسان اسپرم جي رفتار ۽ ريولوجيڪل رويي جي جاچ ڪئي جڏهن هائيڊروسٽيٽڪ پريشر (وهڪري جي شرح = 33 µm/s) ذريعي مائڪرو فلوئڊڪ چينل اندر سيال جو وهڪرو پيدا ڪيو ويو. اسپرميٽوزوا ڪرنٽ جي خلاف ترڻ جو رجحان رکن ٿا (مثبت ريولوجي) ۽ اسپرميٽوزون بنڊل جي رفتار سنگل اسپرميٽوزوا جي مقابلي ۾ تمام گهٽجي ويندي آهي. اسپرم بنڊل کي سرپل ۾ حرڪت ڪندي ڏٺو ويو آهي ۽ ڊيگهه ۽ ٿلهي ۾ اضافو ٿيندو آهي جيئن وڌيڪ سنگل اسپرم ڀرتي ڪيا ويندا آهن. سپرم بنڊلن کي مائڪرو فلوئڊڪ چينلز جي پاسي واري ڀتين جي ويجهو ايندي ۽ انهن سان لڳل ڏٺو ويو ته جيئن سيال جي وهڪري جي رفتار 33 µm/s کان وڌيڪ هجي. سپرم بنڊلن کي مائڪرو فلوئڊڪ چينلز جي پاسي واري ڀتين جي ويجهو ايندي ۽ انهن سان لڳل ڏٺو ويو ته جيئن سيال جي وهڪري جي رفتار 33 µm/s کان وڌيڪ هجي. Было замечено, что пучки сперматозоидов приближаются и прилипают к боковым стенкам микрофлюидных каналов скоростью потока жидкости> 33 мкм / с. ڏٺو ويو آهي ته سپرم بنڊل مائڪرو فلوئڊڪ چينلز جي پاسي واري ڀتين جي ويجهو اچن ٿا ۽ انهن سان لڳل آهن ته جيئن 33 µm/s کان وڌيڪ سيال جي وهڪري جي شرح تي وهڻ کان بچي سگهجي.观察到精子束接近并粘附在微流体通道的侧壁，以避免被流体流速> 33 µm/s 扫上.33 µm/s 扫过. Было замечено, что пучки сперматозоидов приближаются и прилипают к боковым стенкам микрожидкостного канала, чтобы жидкостного канала жидкости со скоростью > 33 mkm/с. ڏٺو ويو آهي ته سپرم بنڊل مائڪرو فلوئڊڪ چينل جي پاسي واري ڀتين جي ويجهو اچن ٿا ۽ انهن سان لڳل آهن ته جيئن 33 µm/s کان وڌيڪ جي رفتار سان سيال جي وهڪري ۾ وهڻ کان بچي سگهن.اسڪيننگ ۽ ٽرانسميشن اليڪٽران مائڪروسڪوپي ظاهر ڪيو ته سپرم بنڊلن کي گهڻي مقدار ۾ گهاٽي مواد جي مدد حاصل هئي. حاصل ڪيل ڊيٽا شرڪازي ڪڪڙ جي اسپرميٽوزوا جي منفرد حرڪت کي ظاهر ڪري ٿو، انهي سان گڏ اسپرميٽوزوا جي متحرڪ ٿيڻ ۽ موبائل بنڊل ٺاهڻ جي صلاحيت، جيڪا ايس ايم ٽي ۾ اسپرميٽوزوا جي ڊگهي مدت جي اسٽوريج جي بهتر سمجھ ۾ مدد ڪري ٿي.
انسانن ۽ گھڻن جانورن ۾ ڀاڻ حاصل ڪرڻ لاءِ، سپرم ۽ بيضا صحيح وقت تي ڀاڻ جي جاءِ تي پهچڻ گهرجن. تنهن ڪري، ميلاپ بيضوي ٿيڻ کان اڳ يا ان وقت ٿيڻ گهرجي. ٻئي طرف، ڪجهه ٿلهي جانور، جهڙوڪ ڪتا، ۽ غير ٿلهي جانور، جهڙوڪ حشرات، مڇي، رينگڻ وارا جانور، ۽ پکي، پنهنجي پيدائشي عضون ۾ سپرم کي ڊگهي عرصي تائين ذخيرو ڪندا آهن جيستائين انهن جا آنا ڀاڻ لاءِ تيار نه ٿين (غير هم وقت ساز ڀاڻ 1). پکي 2-10 هفتن تائين بيضن کي ڀاڻ ڏيڻ جي قابل سپرميٽوزوا جي عملداري کي برقرار رکڻ جي قابل هوندا آهن2.
هي هڪ منفرد خصوصيت آهي جيڪا پکين کي ٻين جانورن کان ڌار ڪري ٿي، ڇاڪاڻ ته اهو ڪيترن ئي هفتن تائين هڪ ئي حمل کان پوءِ ڀاڻ جو وڏو امڪان فراهم ڪري ٿو بغير هڪ ئي وقت ملن ۽ ovulation جي. مکيه سپرم اسٽوريج عضوو، جنهن کي سپرم اسٽوريج ٽيوبول (SST) سڏيو ويندو آهي، uterovaginal junction تي اندروني mucosal folds ۾ واقع آهي. اڄ تائين، اهي طريقا جن ذريعي سپرم اسپرم بينڪ ۾ داخل ٿين ٿا، رهن ٿا ۽ ٻاهر نڪرن ٿا، مڪمل طور تي سمجهي نه سگهيا آهن. پوئين مطالعي جي بنياد تي، ڪيترائي مفروضا پيش ڪيا ويا آهن، پر انهن مان ڪنهن جي به تصديق نه ڪئي وئي آهي.
فارمن 4 اهو تصور ڪيو ته اسپرميٽوزوا ايس ايس ٽي اپيٿيليل سيلز (ريولوجي) تي واقع پروٽين چينلز ذريعي سيال جي وهڪري جي هدايت جي خلاف مسلسل اوسيليٽري حرڪت ذريعي ايس ايس ٽي گفا ۾ پنهنجو رهائش برقرار رکندا آهن. ايس ايس ٽي لومن ۾ اسپرم کي رکڻ لاءِ گهربل مسلسل فليجيلر سرگرمي جي ڪري اي ٽي پي ختم ٿي ويندو آهي ۽ حرڪت آخرڪار گهٽجي ويندي آهي جيستائين اسپرم کي سيال جي وهڪري ذريعي اسپرم بينڪ مان ٻاهر ڪڍيو وڃي ۽ سپرم کي ڀاڻ ڏيڻ لاءِ چڙهندڙ فيلوپيئن ٽيوب هيٺ هڪ نئون سفر شروع نه ڪيو وڃي. ايگ (فارمن 4). سپرم اسٽوريج جو هي ماڊل ايس ايس ٽي اپيٿيليل سيلز ۾ موجود ايڪواپورين 2، 3 ۽ 9 جي امونوسائيٽو ڪيمسٽري جي ڳولا سان سهڪار ڪيو ويو آهي. اڄ تائين، ڪڪڙ جي سيمن ريولوجي تي مطالعي ۽ ايس ايس ٽي اسٽوريج، ويجنل سپرم جي چونڊ، ۽ سپرم مقابلي ۾ ان جي ڪردار جي کوٽ آهي. ڪڪڙين ۾، سپرم قدرتي ميلاپ کان پوءِ ويجن ۾ داخل ٿئي ٿو، پر 80 سيڪڙو کان وڌيڪ اسپرميٽوزوا ملن کان ٿوري دير بعد ويجن مان خارج ٿي ويندا آهن. اهو مشورو ڏئي ٿو ته ويجنا پکين ۾ سپرم جي چونڊ لاءِ بنيادي جڳهه آهي. ان کان علاوه، اهو ٻڌايو ويو آهي ته ويجنا ۾ ڀاڻيل اسپرميٽوزوا جو 1٪ کان گهٽ SSTs2 ۾ ختم ٿئي ٿو. ويجنا ۾ ٻچن جي مصنوعي حمل ۾، SST تائين پهچڻ واري اسپرميٽوزوا جو تعداد حمل کان 24 ڪلاڪن بعد وڌي ويندو آهي. اڃا تائين، هن عمل دوران اسپرم جي چونڊ جو طريقو واضح ناهي، ۽ اسپرم جي حرڪت SST سپرم جي اپٽيڪ ۾ اهم ڪردار ادا ڪري سگهي ٿي. فيلوپيئن ٽيوب جي ٿلهي ۽ مبهم ڀتين جي ڪري، پکين جي فيلوپيئن ٽيوب ۾ اسپرم جي حرڪت جي سڌي طرح نگراني ڪرڻ ڏکيو آهي. تنهن ڪري، اسان وٽ بنيادي ڄاڻ جي کوٽ آهي ته سپرم ڪيئن ڀاڻ کان پوءِ SST ۾ منتقل ٿئي ٿو.
تازو ئي ريولوجي کي مماليا جي جينيٽيليا ۾ سپرم ٽرانسپورٽ کي ڪنٽرول ڪرڻ واري هڪ اهم عنصر طور تسليم ڪيو ويو آهي. حرڪت ڪندڙ اسپرميٽوزوا جي موجوده طور تي منتقل ٿيڻ جي صلاحيت جي بنياد تي، زفيراني ۽ ٻيا 8 قلم ٿيل سيمن نمونن مان متحرڪ اسپرميٽوزوا کي غير فعال طور تي الڳ ڪرڻ لاءِ ڪورا مائڪرو فلائيڊڪ سسٽم استعمال ڪيو. هن قسم جي سيمن جي ترتيب طبي بانجھ پن جي علاج ۽ ڪلينڪل تحقيق لاءِ ضروري آهي، ۽ روايتي طريقن تي ترجيح ڏني ويندي آهي جيڪي وقت ۽ محنت سان ڪم ڪن ٿا ۽ سپرم مورفولوجي ۽ ساخت جي سالميت کي نقصان پهچائي سگهن ٿا. بهرحال، اڄ تائين، ڪڪڙن جي جينيٽي عضون مان نڪرندڙ رطوبتن جي سپرم جي حرڪت تي اثر تي ڪو به مطالعو نه ڪيو ويو آهي.
ايس ايس ٽي ۾ ذخيرو ٿيل سپرم کي برقرار رکڻ واري ميڪانيزم کان سواءِ، ڪيترن ئي تحقيق ڪندڙن اهو ڏٺو آهي ته رهائشي اسپرماٽوزوا مرغي 9، 10، بٽير 2، ۽ ترڪي 11 جي ايس ايس ٽي ۾ سر کان مٿي گڏ ٿين ٿا ته جيئن ايگلوٽينيٽڊ اسپرم بنڊل ٺاهين. ليکڪ تجويز ڪن ٿا ته ايس ايس ٽي ۾ اسپرماٽوزوا جي هن ايگلوٽينيشن ۽ ڊگهي مدت جي اسٽوريج جي وچ ۾ هڪ تعلق آهي.
ٽنگاري ۽ ليڪ 12 ڪڪڙ جي سپرم وصول ڪندڙ غدود ۾ سپرميٽوزوا جي وچ ۾ هڪ مضبوط تعلق جي رپورٽ ڪئي ۽ سوال ڪيو ته ڇا ايويئن سپرميٽوزوا مماليائي سپرميٽوزوا وانگر ساڳئي طرح گڏ ٿئي ٿو. انهن جو خيال آهي ته ويس ڊيفرنس ۾ سپرم جي وچ ۾ گهرو تعلق شايد ننڍڙي جاءِ ۾ وڏي تعداد ۾ سپرم جي موجودگي جي ڪري پيدا ٿيندڙ دٻاءُ جي ڪري هجي.
جڏهن تازي لٽڪندڙ شيشي جي سلائيڊن تي اسپرماتوزوا جي رويي جو جائزو ورتو وڃي ٿو، ته ايگلوٽينيشن جا عارضي نشان ڏسي سگهجن ٿا، خاص طور تي مني جي قطرن جي ڪنارن تي. بهرحال، ايگلوٽينيشن اڪثر ڪري مسلسل حرڪت سان لاڳاپيل گردش جي عمل جي ڪري خراب ٿي ويندي هئي، جيڪا هن رجحان جي عارضي نوعيت جي وضاحت ڪري ٿي. محققن اهو پڻ ڏٺو ته جڏهن ڊائلوئنٽ کي سيمن ۾ شامل ڪيو ويو، ته ڊگھا "ڌاڙي جهڙا" سيل مجموعا ظاهر ٿيا.
سپرميٽوزون جي نقل ڪرڻ جي شروعاتي ڪوششون هڪ لٽڪندڙ قطري مان هڪ پتلي تار کي هٽائي ڪيون ويون، جنهن جي نتيجي ۾ هڪ ڊگهو سپرم جهڙو ويسيڪل مني جي قطري مان ٻاهر نڪرندو هو. سپرميٽوزوا فوري طور تي ويسيڪل اندر هڪ متوازي انداز ۾ قطار ۾ بيٺو هو، پر 3D حد جي ڪري سڄو يونٽ جلدي غائب ٿي ويو. تنهن ڪري، سپرميٽوزوا جي ايگلوٽينيشن جو مطالعو ڪرڻ لاءِ، سپرميٽوزوا جي حرڪت ۽ رويي کي سڌو سنئون الڳ ٿيل سپرم اسٽوريج ٽيوبلز ۾ ڏسڻ ضروري آهي، جيڪو حاصل ڪرڻ ڏکيو آهي. تنهن ڪري، هڪ اهڙو اوزار تيار ڪرڻ ضروري آهي جيڪو سپرميٽوزوا جي نقل ڪري ته جيئن سپرم جي حرڪت ۽ ايگلوٽينيشن رويي جي مطالعي جي حمايت ڪري سگهجي. برلارڊ ۽ ٻيا 13 رپورٽ ڪيو ته بالغ ڪڪڙن ۾ سپرم اسٽوريج ٽيوبلز جي سراسري ڊيگهه 400-600 µm آهي، پر ڪجهه SSTs 2000 µm تائين ڊگهيون ٿي سگهن ٿيون. ميرو ۽ اوگاساوارا 14 سيمينيفيرس غدودن کي وڌايل ۽ غير وڌايل اسپرم اسٽوريج ٽيوبلز ۾ ورهايو، جيڪي ٻئي ڊيگهه ۾ ساڳيا هئا (~500 µm) ۽ ڳچيءَ جي ويڪر (~38 µm)، پر ٽيوبلز جو سراسري ليمن قطر 56.6 ۽ 56.6 µm هو. . . ترتيب وار 11.2 µm. موجوده مطالعي ۾، اسان هڪ مائڪرو فلائيڊڪ ڊيوائس استعمال ڪئي جنهن جي چينل سائيز 200 µm × 20 µm (W × H) هئي، جنهن جو ڪراس سيڪشن ڪجهه حد تائين ايمپليفائيڊ ايس ايس ٽي جي ويجهو آهي. ان کان علاوه، اسان وهندڙ سيال ۾ سپرم جي حرڪت ۽ ايگلوٽينيشن رويي جو جائزو ورتو، جيڪو فورمين جي مفروضي سان مطابقت رکي ٿو ته ايس ايس ٽي ايپيٿيليل سيلز پاران پيدا ٿيندڙ سيال سپرم کي ليمن ۾ هڪ مخالف ڪرنٽ (ريولوجيڪل) هدايت ۾ رکي ٿو.
هن مطالعي جو مقصد فيلوپيئن ٽيوب ۾ اسپرميٽوزوا جي حرڪت کي ڏسڻ جي مسئلن کي دور ڪرڻ ۽ متحرڪ ماحول ۾ اسپرميٽوزوا جي ريولوجي ۽ رويي جي مطالعي جي مشڪلاتن کان بچڻ هو. هڪ مائڪرو فلائيڊڪ ڊيوائس استعمال ڪئي وئي جيڪا ڪڪڙ جي جينياتي عضون ۾ اسپرم جي حرڪت کي نقل ڪرڻ لاءِ هائيڊرو اسٽيٽڪ دٻاءُ پيدا ڪري ٿي.
جڏهن هڪ ٿلهي ٿيل سپرم نموني (1:40) جو هڪ قطرو مائڪرو چينل ڊيوائس ۾ لوڊ ڪيو ويو، ته ٻن قسمن جي سپرم جي حرڪت جي سڃاڻپ ٿي سگهي ٿي (الڳ ٿيل سپرم ۽ پابند سپرم). ان کان علاوه، سپرميٽوزوا موجوده جي خلاف ترڻ جو رجحان رکندو هو (مثبت ريولوجي؛ وڊيو 1، 2). جيتوڻيڪ اسپرم بنڊلن ۾ اڪيلو اسپرم جي ڀيٽ ۾ گهٽ رفتار هئي (p < 0.001)، انهن مثبت ريوٽڪسس ڏيکاريندڙ اسپرم جي فيصد کي وڌايو (p < 0.001؛ ٽيبل 2). جيتوڻيڪ اسپرم بنڊلن ۾ اڪيلو اسپرم جي ڀيٽ ۾ گهٽ رفتار هئي (p < 0.001)، انهن مثبت ريوٽڪسس ڏيکاريندڙ اسپرم جي فيصد کي وڌايو (p < 0.001؛ ٽيبل 2). Хотя пучки сперматозоидов имели более низкую скорость, чем у одиночных сперматозоидов (p < 0,001), они увеличева сперматозоидов, демонстрирующих положительный реотаксис (p <0,001; таблица 2). جيتوڻيڪ اسپرميٽوزوا بنڊلن ۾ هڪ اسپرميٽوزوا جي ڀيٽ ۾ گهٽ رفتار هئي (p < 0.001)، انهن اسپرميٽوزوا جي فيصد کي وڌايو جيڪو مثبت ريوٽڪسس ڏيکاري ٿو (p < 0.001؛ ٽيبل 2).尽管精子束的速度低于孤独精子的速度（p < 0.001)، 但它们增加了显示阳性流变性的精子百分比） (p <0.001；表2）).尽管 精子束 的 速度 低于 孤独 的 速度 （p <0.001） ， 但 增加 了 显示 孤史嵧性百分比 (p <0.001) Хотя скорость пучков сперматозоидов была ниже, чем у одиночных сперматозоидов (p < 0,001), они увеличивали процозоидов положительной реологией (p <0,001; таблица 2). جيتوڻيڪ اسپرم بنڊلن جي رفتار سنگل اسپرميٽوزوا (p < 0.001) جي ڀيٽ ۾ گهٽ هئي، انهن مثبت ريولوجي (p < 0.001؛ ٽيبل 2) سان اسپرميٽوزوا جي فيصد کي وڌايو.سنگل اسپرميٽوزوا ۽ ٽفٽس لاءِ مثبت ريولوجي جو اندازو ترتيب وار تقريبن 53٪ ۽ 85٪ آهي.
اهو ڏٺو ويو آهي ته شارڪاسي ڪڪڙين جا اسپرماتوزوا انزال کان فوري پوءِ لڪير وارا بنڊل ٺاهيندا آهن، جن ۾ درجنين فرد شامل هوندا آهن. اهي ٽفٽ وقت سان گڏ ڊيگهه ۽ ٿلهي ۾ وڌندا آهن ۽ ڪيترن ئي ڪلاڪن تائين ان ويٽرو ۾ رهي سگهن ٿا ان کان اڳ جو اهي ختم ٿي وڃن (ويڊيو 3). اهي تنتي بنڊل ايچڊنا اسپرماتوزوا جي شڪل جا هوندا آهن جيڪي ايپيڊيڊيمس جي آخر ۾ ٺهندا آهن. شارڪاسي هين سيمن ۾ گڏ ٿيڻ کان پوءِ هڪ منٽ کان به گهٽ وقت ۾ گڏ ٿيڻ ۽ ريٽيڪيوليٽ بنڊل ٺاهڻ جو رجحان وڌيڪ هوندو آهي. اهي شعاع متحرڪ آهن ۽ ڪنهن به ويجهي ڀتين يا جامد شين سان چپڪڻ جي قابل آهن. جيتوڻيڪ سپرم بنڊل سپرم سيلز جي رفتار کي گهٽائيندا آهن، اهو واضح آهي ته ميڪرو اسڪوپي طور تي اهي پنهنجي لڪير کي وڌائيندا آهن. بنڊلن جي ڊيگهه بنڊلن ۾ گڏ ڪيل سپرم جي تعداد تي منحصر ڪري ٿي. بنڊل جا ٻه حصا الڳ ڪيا ويا: شروعاتي حصو، جنهن ۾ جمع ٿيل سپرم جو آزاد مٿو شامل آهي، ۽ ٽرمينل حصو، جنهن ۾ دم ۽ سپرم جو پورو ڊسٽل آخر شامل آهي. تيز رفتار ڪئميرا (950 fps) استعمال ڪندي، بنڊل جي شروعاتي حصي ۾ ايگلوٽينيٽڊ اسپرميٽوزوا جا آزاد سر ڏٺا ويا، جيڪي انهن جي اوسيليٽري حرڪت جي ڪري بنڊل جي حرڪت لاءِ ذميوار هئا، باقي وارن کي هيليڪل موشن سان بنڊل ۾ ڇڪيندا هئا (ويڊيو 4). بهرحال، ڊگهن ٽفٽن ۾، اهو ڏٺو ويو آهي ته ڪجهه آزاد اسپرم سر جسم سان لڳل آهن ۽ ٽفٽ جي ٽرمينل حصي کي ٽفٽ کي اڳتي وڌائڻ ۾ مدد لاءِ وين طور ڪم ڪن ٿا.
جڏهن ته رطوبت جي سست وهڪري ۾، سپرم بنڊل هڪ ٻئي جي متوازي هلندا آهن، جڏهن ته، اهي اوورليپ ٿيڻ شروع ڪندا آهن ۽ هر شيءِ سان چپڪي ويندا آهن جيڪا اڃا تائين آهي، ته جيئن وهڪري جي رفتار وڌندي موجوده وهڪري سان ڌوئي نه وڃن. بنڊل تڏهن ٺهندا آهن جڏهن ڪجهه سپرم سيل هڪ ٻئي جي ويجهو ايندا آهن، اهي هم وقت سازي ۾ هلڻ شروع ڪندا آهن ۽ هڪ ٻئي جي چوڌاري لپيٽندا آهن، ۽ پوءِ هڪ چپچپا مادو سان چپڪي ويندا آهن. شڪل 1 ۽ 2 ڏيکارين ٿا ته سپرم ڪيئن هڪ ٻئي جي ويجهو ايندا آهن، هڪ سنگم ٺاهيندا آهن جيئن پڇ هڪ ٻئي جي چوڌاري لپيٽندا آهن.
محققن سپرم ريولوجي جو مطالعو ڪرڻ لاءِ هڪ مائڪرو چينل ۾ سيال جي وهڪري پيدا ڪرڻ لاءِ هائيڊرو اسٽيٽڪ پريشر لاڳو ڪيو. 200 µm × 20 µm (W × H) جي سائيز ۽ 3.6 µm جي ڊيگهه سان هڪ مائڪرو چينل استعمال ڪيو ويو. ڪنٽينرن جي وچ ۾ مائڪرو چينل استعمال ڪريو جن جي سرن تي سرنج لڳل آهن. چينلن کي وڌيڪ نظر اچڻ لاءِ کاڌي جو رنگ استعمال ڪيو ويو.
انٽر ڪنيڪٽ ڪيبل ۽ لوازمات کي ڀت سان ڳنڍيو. وڊيو هڪ فيز ڪنٽراسٽ مائڪروسڪوپ سان ڪڍيو ويو هو. هر تصوير سان، فيز ڪنٽراسٽ مائڪروسڪوپي ۽ ميپنگ تصويرون پيش ڪيون ويون آهن. (الف) ٻن وهڪري جي وچ ۾ ڪنيڪشن هيليڪل موشن (ڳاڙهو تير) جي ڪري وهڪري جي مزاحمت ڪري ٿو. (ب) ٽيوب بنڊل ۽ چينل وال (ڳاڙهو تير) جي وچ ۾ ڪنيڪشن، ساڳئي وقت اهي ٻن ٻين بنڊلن (پيلو تير) سان ڳنڍيل آهن. (ج) مائڪرو فلوئڊڪ چينل ۾ اسپرم بنڊل هڪ ٻئي سان ڳنڍڻ شروع ڪن ٿا (ڳاڙهو تير)، اسپرم بنڊلن جو هڪ ميش ٺاهيندا آهن. (د) اسپرم بنڊلن جي نيٽ ورڪ جي ٺهڻ.
جڏهن ٿلهي ٿيل سپرم جو هڪ قطرو مائڪرو فلوئڊڪ ڊيوائس ۾ لوڊ ڪيو ويو ۽ هڪ وهڪرو ٺاهيو ويو، ته سپرم بيم کي وهڪري جي هدايت جي خلاف حرڪت ڪندي ڏٺو ويو. بنڊل مائڪرو چينلز جي ڀتين سان مضبوطي سان فٽ ٿين ٿا، ۽ بنڊلز جي شروعاتي حصي ۾ آزاد سر انهن جي خلاف مضبوطي سان فٽ ٿين ٿا (ويڊيو 5). اهي پنهنجي رستي ۾ ڪنهن به اسٽيشنري ذرڙن سان پڻ چپڪي ويندا آهن، جهڙوڪ ملبہ، ته جيئن وهڪري جي وهڪري جي مزاحمت ڪري سگهجي. وقت سان گڏ، اهي ٽفٽ ڊگها تار بڻجي ويندا آهن جيڪي ٻين سنگل اسپرميٽوزوا ۽ ننڍڙن ٽفٽس کي ڦاسائيندا آهن (ويڊيو 6). جيئن وهڪري سست ٿيڻ شروع ٿئي ٿي، سپرم جون ڊگهيون لائينون سپرم لائينن جو هڪ نيٽ ورڪ ٺاهڻ شروع ڪن ٿيون (ويڊيو 7؛ شڪل 2).
تيز وهڪري جي رفتار (V > 33 µm/s) تي، ڌاڙن جي سرپل حرڪتن کي وڌايو ويندو آهي ته جيئن ڪيترن ئي انفرادي سپرم ٺاهڻ وارن بنڊلن کي وهڪري جي وهندڙ قوت جي مزاحمت ڪرڻ لاءِ پڪڙي سگهجي. تيز وهڪري جي رفتار (V > 33 µm/s) تي، ڌاڙن جي سرپل حرڪتن کي وڌايو ويندو آهي ته جيئن ڪيترن ئي انفرادي سپرم ٺاهڻ وارن بنڊلن کي وهڪري جي وهندڙ قوت جي مزاحمت ڪرڻ لاءِ پڪڙي سگهجي. При высокой скорости потока (V > 33 мкм/с) спиралевидные движения нитей усиливаются, поскольку они пытаются поймавидные мкм/с сперматозоидов, образующих пучки, которые лучше противостоят дрейфующей силе потока. تيز وهڪري جي شرح (V > 33 µm/s) تي، تارن جي هيليڪل حرڪتون وڌي وينديون آهن جيئن اهي ڪيترن ئي انفرادي سپرماتوزوا کي پڪڙڻ جي ڪوشش ڪندا آهن جيڪي بنڊل ٺاهيندا آهن جيڪي وهڪري جي وهندڙ قوت جي مزاحمت ڪرڻ جي قابل هوندا آهن.在高流速(V > 33 µm/s)时,螺纹的螺旋运动增加,以试图捕捉许多形成束的单个精子,从而更好地抵抗抗.在 高 流速 (v> 33 µm/s) 时, 的螺旋 运动 增加, 以 试图 许多 形成 束 单 个 精廰 图图抵抗 的漂移力 .. При высоких скоростях потока (V > 33 мкм/с) спиральное движение нитей увеличивается в попытке захватить множество множество. сперматозоидов, образующих пучки, чтобы лучше сопротивляться силам дрейфа потока. تيز وهڪري جي شرح (V > 33 µm/s) تي، وهڪري جي وهڪري جي قوتن کي بهتر طور تي مزاحمت ڪرڻ لاءِ ڪيترن ئي انفرادي اسپرماتوزوا کي پڪڙڻ جي ڪوشش ۾ تنتن جي هيليڪل حرڪت وڌي ٿي.انهن مائڪرو چينلز کي پاسي واري ڀتين سان ڳنڍڻ جي ڪوشش پڻ ڪئي.
هلڪي مائڪروسڪوپي (LM) استعمال ڪندي سپرم بنڊلن کي سپرم هيڊز ۽ ڪرلنگ ٽيلز جي ڪلسٽر طور سڃاتو ويو. مختلف مجموعن سان سپرم بنڊلن کي ٽوڙيل هيڊز ۽ فليجيلر ايگريگيٽس، گھڻن فيوز ٿيل سپرم ٽيلز، دم سان ڳنڍيل سپرم هيڊز، ۽ مڙيل نيوڪلئي سان سپرم هيڊز کي گھڻن فيوز ٿيل نيوڪلئي طور سڃاتو ويو آهي. ٽرانسميشن اليڪٽران مائڪروسڪوپي (TEM). اسڪيننگ اليڪٽران مائڪروسڪوپي (SEM) ڏيکاريو ته سپرم بنڊل اسپرم هيڊز جا ڍڪيل مجموعا هئا ۽ سپرم ايگريگيٽس لپيل ٽيلز جو هڪ ڳنڍيل نيٽ ورڪ ڏيکاريو.
اسپرميٽوزوا جي مورفولوجي ۽ الٽرا اسٽرڪچر، اسپرميٽوزوا بنڊلز جي ٺهڻ جو مطالعو هلڪي مائڪروسڪوپي (اڌ سيڪشن)، اسڪيننگ اليڪٽران مائڪروسڪوپي (SEM) ۽ ٽرانسميشن اليڪٽران مائڪروسڪوپي (TEM) استعمال ڪندي ڪيو ويو، اسپرم سميئرز کي ايڪريڊائن نارنگي سان داغ ڏنو ويو ۽ ايپي فلوروسينس مائڪروسڪوپي استعمال ڪندي جانچيو ويو.
اسپرم سمير کي ايڪريڊين نارنگي سان داغ ڏيڻ (شڪل 3B) ڏيکاريو ته اسپرم هيڊز هڪ ٻئي سان ڳنڍيل هئا ۽ سيڪريٽري مواد سان ڍڪيل هئا، جنهن جي ڪري وڏا ٽفٽس ٺهيا (شڪل 3D). اسپرم بنڊلز ۾ اسپرم ايگريگيٽس شامل هئا جن ۾ ڳنڍيل پڇن جو هڪ نيٽ ورڪ هو (شڪل 4A-C). اسپرم بنڊل ڪيترن ئي اسپرميٽوزوا جي پڇن مان ٺهيل آهن جيڪي هڪ ٻئي سان ڳنڍيل آهن (شڪل 4D). راز (شڪل 4E،F) اسپرميٽوزوا بنڊلز جي سرن کي ڍڪي ڇڏيو.
اسپرميٽوزوا بنڊل جي ٺهڻ، فيز ڪنٽراسٽ مائڪروسڪوپي ۽ ايڪريڊائن نارنگي سان داغدار اسپرم سميئر استعمال ڪندي، اهو ظاهر ڪيو ته اسپرميٽوزوا جا مٿا هڪ ٻئي سان چپڪي رهيا آهن. (الف) شروعاتي اسپرم ٽفٽ ٺهڻ هڪ اسپرم (اڇو دائرو) ۽ ٽن اسپرم (پيلو دائرو) سان شروع ٿئي ٿو، جنهن جو سرپل دم کان شروع ٿئي ٿو ۽ مٿي تي ختم ٿئي ٿو. (ب) ايڪريڊائن نارنگي سان داغدار هڪ اسپرم سميئر جو فوٽو مائڪروگراف جيڪو اسپرم سرن (تيرن) کي ڏيکاري ٿو. خارج ٿيڻ مٿو (تيرن) کي ڍڪيندو آهي. ميگنيفڪيشن × 1000. (سي) هڪ وڏي بيم جي ترقي جيڪا مائڪرو فلوئڊڪ چينل ۾ وهڪري ذريعي منتقل ڪئي وئي آهي (950 fps تي تيز رفتار ڪئميرا استعمال ڪندي). (ڊي) ايڪريڊائن نارنگي سان داغدار هڪ اسپرم سميئر جو مائڪروگراف جيڪو وڏا ٽفٽ (تير) ڏيکاري ٿو. ميگنيفڪيشن: × 200.
هڪ سپرم بيم ۽ هڪ سپرم سمير جو اسڪيننگ اليڪٽران مائڪروگراف ايڪريڊين نارنگي سان داغدار. (A، B، D، E) اسپرميٽوزوا جا ڊجيٽل رنگ اسڪيننگ اليڪٽران مائڪروگراف آهن، ۽ C ۽ F ايڪريڊين نارنگي رنگدار اسپرم سمير جا مائڪروگراف آهن جيڪي ڪيترن ئي سپرميٽوزوا جي ڪنڊل ويب کي ويڙهيل هجڻ کي ڏيکارين ٿا. (AC) اسپرم ايگريگيٽس کي ڳنڍيل پڇن (تيرن) جي نيٽ ورڪ جي طور تي ڏيکاريو ويو آهي. (D) ڪيترن ئي سپرميٽوزوا جو چپڪندڙ (چپڪندڙ مادو، گلابي آئوٽ لائن، تير سان) دم جي چوڌاري ويڙهيل هجڻ. (E ۽ F) اسپرم هيڊ ايگريگيٽس (پوائنٽر) چپڪندڙ مواد (پوائنٽر) سان ڍڪيل. اسپرميٽوزوا ڪيترن ئي وورٽيڪس جهڙين بناوتن سان گڏ بنڊل ٺاهيا (F). (C) ×400 ۽ (F) ×200 ميگنيفڪيشن.
ٽرانسميشن اليڪٽران مائڪروسڪوپي استعمال ڪندي، اسان ڏٺو ته سپرم بنڊلن ۾ پڇ ڳنڍيل هئا (شڪل 6A، سي)، پڇ سان ڳنڍيل سر (شڪل 6B)، يا پڇ سان ڳنڍيل سر (شڪل 6D). بنڊل ۾ سپرميٽوزوا جا سر وکر آهن، سيڪشن ٻن نيوڪليئر علائقن ۾ پيش ڪن ٿا (شڪل 6D). چيرا بنڊل ۾، سپرميٽوزوا جو هڪ مروڙي مٿو هو جنهن ۾ ٻه نيوڪليئر علائقا ۽ ڪيترائي فليجيلر علائقا هئا (شڪل 5A).
ڊجيٽل رنگين اليڪٽران مائڪروگراف جيڪو اسپرم بنڊل ۾ ڳنڍيندڙ پڇن ۽ سپرم سرن کي ڳنڍيندڙ جمع ڪندڙ مواد ڏيکاري ٿو. (الف) وڏي تعداد ۾ اسپرميٽوزوا جي ڳنڍيل پڇ. ڏسو ته پڇ پورٽريٽ (تير) ۽ لينڊ اسڪيپ (تير) پروجئشن ٻنهي ۾ ڪيئن نظر اچي ٿو. (ب) اسپرم جو مٿو (تير) دم (تير) سان ڳنڍيل آهي. (ج) ڪيترائي سپرم پڇ (تير) ڳنڍيل آهن. (د) جمع ڪرڻ وارو مواد (AS، نيرو) چار سپرم سرن (جامني) کي ڳنڍي ٿو.
اسڪيننگ اليڪٽران مائڪروسڪوپي کي اسپرم هيڊز کي ڳولڻ لاءِ استعمال ڪيو ويو جيڪي رطوبتن يا جھلين سان ڍڪيل هئا (شڪل 6B)، اهو ظاهر ڪري ٿو ته اسپرم بنڊل ٻاهرين سيلولر مواد سان لنگر انداز هئا. جمع ٿيل مواد اسپرم هيڊ (جيلي فش هيڊ جهڙو اسيمبلي؛ شڪل 5B) ۾ مرڪوز هو ۽ پري تائين وڌايو ويو، جڏهن ايڪريڊائن نارنگي سان داغ ڪيو ويو ته فلوروسينس مائڪروسڪوپي هيٺ هڪ شاندار پيلو ظهور ڏنو ويو (شڪل 6C). هي مادو اسڪيننگ مائڪروسڪوپي هيٺ واضح طور تي نظر اچي ٿو ۽ ان کي هڪ بائنڊر سمجهيو ويندو آهي. نيم پتلي حصن (شڪل 5C) ۽ ايڪريڊائن نارنگي سان داغ ٿيل اسپرم سميئرز ۾ اسپرم بنڊل ڏيکاريا ويا جن ۾ گهاٽي ڀريل سر ۽ ڪرل ٿيل دم هئا (شڪل 5D).
مختلف طريقن سان اسپرم هيڊز ۽ فولڊ ٿيل پڇن جي مجموعي کي ڏيکاريندڙ مختلف فوٽو مائڪروگراف. (الف) هڪ اسپرم بنڊل جو ڪراس-سيڪشنل ڊجيٽل رنگ ٽرانسميشن اليڪٽران مائڪروگراف جيڪو ٻن حصن واري نيوڪليس (نيرو) ۽ ڪيترن ئي فليجيلر حصن (سائي) سان گڏ هڪ ڪوئل ٿيل اسپرم هيڊ ڏيکاري ٿو. (ب) ڊجيٽل رنگ اسڪيننگ اليڪٽران مائڪروگراف جيڪو جيلي فش وانگر اسپرم هيڊز (تير) جو هڪ ڪلستر ڏيکاري ٿو جيڪو ڍڪيل نظر اچي ٿو. (ج) نيم پتلي حصي جيڪو اسپرم هيڊز (تير) ۽ وکر ٿيل پڇن (تير) ڏيکاري ٿو. (د) ايڪريڊين نارنگي سان داغ ٿيل اسپرم سمير جو مائڪروگراف جيڪو اسپرم هيڊز (تير) ۽ وکر ٿيل پٺيدار پڇن (تير) جي مجموعي کي ڏيکاري ٿو. نوٽ ڪريو ته هڪ چپچپا مادو (S) اسپرميٽوزون جي مٿي کي ڍڪيندو آهي. (د) × 1000 ميگنيفڪيشن.
ٽرانسميشن اليڪٽران مائڪروسڪوپي (شڪل 7A) استعمال ڪندي، اهو پڻ نوٽ ڪيو ويو ته سپرم هيڊز مروڙي ويا هئا ۽ نيوڪلئي هڪ سرپل شڪل هئي، جيئن اسپرم سميئرز پاران تصديق ڪئي وئي جيڪي ايڪريڊائن نارنگي سان داغدار هئا ۽ فلوروسينس مائڪروسڪوپي (شڪل 7B) استعمال ڪندي جانچيا ويا.
(الف) ڊجيٽل رنگ ٽرانسميشن اليڪٽران مائڪروگراف ۽ (ب) ايڪريڊائن نارنگي رنگ وارو اسپرم سمير جيڪو ڪوئليڊ هيڊز ۽ اسپرم هيڊز ۽ پڇن (تيرن) جي ڳنڍڻ کي ڏيکاري ٿو. (ب) × 1000 ميگنيفڪيشن.
هڪ دلچسپ دريافت اها آهي ته شرڪازي جا اسپرم گڏ ٿي موبائل تنتي بنڊل ٺاهيندا آهن. انهن بنڊلن جون خاصيتون اسان کي ايس ايس ٽي ۾ اسپرميٽوزوا جي جذب ۽ اسٽوريج ۾ انهن جي ممڪن ڪردار کي سمجهڻ جي اجازت ڏين ٿيون.
ملن کان پوءِ، سپرم ويجنا ۾ داخل ٿئي ٿو ۽ هڪ شديد چونڊ جي عمل مان گذري ٿو، جنهن جي نتيجي ۾ صرف محدود تعداد ۾ سپرم SST15,16 ۾ داخل ٿين ٿا. اڄ تائين، اهي طريقا واضح نه آهن جن ذريعي سپرم SST ۾ داخل ٿين ٿا ۽ ٻاهر نڪرن ٿا. پولٽري ۾، سپرميٽوزوا 2 کان 10 هفتن جي ڊگهي عرصي تائين SST ۾ ذخيرو ٿيل آهن، نسلن تي منحصر ڪري ٿو6. SST ۾ اسٽوريج دوران مني جي حالت بابت تڪرار رهي ٿو. ڇا اهي حرڪت ۾ آهن يا آرام ۾؟ ٻين لفظن ۾، سپرم سيلز ايتري عرصي تائين SST ۾ پنهنجي پوزيشن ڪيئن برقرار رکندا آهن؟
فارمن 4 تجويز ڪيو ته ايس ايس ٽي جي رهائش ۽ خارج ٿيڻ کي سپرم جي حرڪت جي لحاظ کان بيان ڪري سگهجي ٿو. ليکڪ اهو قياس ڪن ٿا ته سپرم ايس ايس ٽي ايپيٿيليم پاران پيدا ڪيل سيال جي وهڪري جي خلاف ترڻ سان پنهنجي پوزيشن برقرار رکندا آهن ۽ اهو سپرم ايس ايس ٽي مان خارج ٿي ويندو آهي جڏهن انهن جي رفتار ان نقطي کان هيٺ اچي ويندي آهي جتي اهي توانائي جي کوٽ جي ڪري پوئتي هلڻ شروع ڪندا آهن. زانيبوني 5 ايس ايس ٽي ايپيٿيليل سيلز جي اپيڪل حصي ۾ ايڪواپورين 2، 3، ۽ 9 جي موجودگي جي تصديق ڪئي، جيڪا شايد اڻ سڌي طرح فورمن جي سپرم اسٽوريج ماڊل جي حمايت ڪري سگهي ٿي. موجوده مطالعي ۾، اسان ڏٺو ته شارڪاشي جي اسپرميٽوزوا جو لڳ ڀڳ اڌ وهندڙ سيال ۾ مثبت ريولوجي ڏيکاري ٿو، ۽ اهو ايگلوٽينيٽڊ اسپرم بنڊل اسپرميٽوزوا جي تعداد کي وڌائي ٿو جيڪو مثبت ريولوجي ڏيکاري ٿو، جيتوڻيڪ ايگلوٽينيشن انهن کي سست ڪري ٿو. اسپرم سيلز پکين جي فيلوپيئن ٽيوب کان ڀاڻ جي جاءِ تائين ڪيئن سفر ڪن ٿا اهو مڪمل طور تي سمجهي نه سگهيو آهي. ٿلهي جانورن ۾، فولڪولر فلوئڊ ڪيمو اسپرميٽوزوا کي راغب ڪري ٿو. جڏهن ته، ڪيموآٽريڪٽنٽ سپرماتوزوا کي ڊگهي فاصلي تائين پهچڻ لاءِ هدايت ڪندا آهن 7. تنهن ڪري، ٻيا ميڪانيزم سپرماتوزوا جي نقل و حمل لاءِ ذميوار آهن. ملن کان پوءِ نڪرندڙ فيلوپيئن ٽيوب فلوئڊ جي خلاف اسپرم جي هدايت ۽ وهڪري جي صلاحيت کي چوٿين ۾ سپرم کي نشانو بڻائڻ ۾ هڪ اهم عنصر قرار ڏنو ويو آهي. پارڪر 17 تجويز ڪيو ته اسپرماتوزوا پکين ۽ ريپٽائلز ۾ سليري ڪرنٽ جي خلاف ترڻ سان بيضوي نالن کي پار ڪري ٿو. جيتوڻيڪ اهو پکين ۾ تجرباتي طور تي ظاهر نه ڪيو ويو آهي، ايڊولفي 18 پهريون شخص هو جنهن اهو ڳولي لڌو ته ايويئن سپرم مثبت نتيجا ڏئي ٿو جڏهن فلٽر پيپر جي پٽي سان ڪور سلپ ۽ سلائيڊ جي وچ ۾ مائع جي هڪ پتلي پرت ٺاهي ويندي آهي. ريولوجي. هينو ۽ ياناگيماچي [19] هڪ ماؤس اووري-ٽيوبل-يوٽرائن ڪمپليڪس کي پرفيوژن رنگ ۾ رکيو ۽ فيلوپيئن ٽيوب ۾ سيال جي وهڪري کي ڏسڻ لاءِ اسٿمس ۾ 1 µl مس داخل ڪئي. انهن فيلوپيئن ٽيوب ۾ سڪون ۽ آرام جي هڪ تمام سرگرم حرڪت کي ڏٺو، جنهن ۾ سڀئي انڪ بال مسلسل فيلوپيئن ٽيوب جي امپولا ڏانهن وڌي رهيا هئا. ليکڪ سپرم اپلائيٽمينٽ ۽ فرٽيلائيزيشن لاءِ هيٺين کان مٿئين فيلوپيئن ٽيوب تائين ٽيوبل فلوئڊ جي وهڪري جي اهميت تي زور ڏين ٿا. برلارڊ 20 رپورٽ ڪيو ته ڪڪڙين ۽ ترڪي ۾، اسپرميٽوزوا اندام جي داخلا کان فعال حرڪت ذريعي منتقل ٿين ٿا، جتي اهي ذخيرو ٿيل آهن، utero-vaginal جنڪشن ڏانهن، جتي اهي ذخيرو ٿيل آهن. بهرحال، هي حرڪت uterovaginal جنڪشن ۽ infundibulum جي وچ ۾ گهربل ناهي ڇاڪاڻ ته اسپرميٽوزوا غير فعال بي گھرڻ ذريعي منتقل ڪيا ويندا آهن. انهن پوئين سفارشن ۽ موجوده مطالعي ۾ حاصل ڪيل نتيجن کي ڄاڻڻ سان، اهو فرض ڪري سگهجي ٿو ته اسپرميٽوزوا جي اپ اسٽريم (ريولوجي) منتقل ڪرڻ جي صلاحيت انهن خاصيتن مان هڪ آهي جنهن تي چونڊ جو عمل ٻڌل آهي. اهو ويجنا ذريعي اسپرميٽوزوا جي گذرڻ ۽ اسٽوريج لاءِ سي سي ٽي ۾ انهن جي داخلا کي طئي ڪري ٿو. جيئن Forman4 تجويز ڪيو، اهو سپرم جي ايس ايس ٽي ۽ ان جي رهائش ۾ ڪجهه وقت لاءِ داخل ٿيڻ ۽ پوءِ ٻاهر نڪرڻ جي عمل کي به آسان بڻائي سگهي ٿو جڏهن انهن جي رفتار سست ٿيڻ شروع ٿئي ٿي.
ٻئي طرف، ماتسوزاڪي ۽ ساسانامي 21 تجويز ڪيو ته پکين جي اسپرميٽوزوا نر ۽ مادي جي پيدائشي رستن ۾ ڊورمنسي کان حرڪت ۾ تبديلين مان گذرن ٿا. ايس ايس ٽي ۾ رهائشي اسپرم جي حرڪت جي روڪٿام کي سپرم جي ڊگهي اسٽوريج وقت ۽ پوءِ ايس ايس ٽي ڇڏڻ کان پوءِ ٻيهر جوان ٿيڻ جي وضاحت ڪرڻ لاءِ تجويز ڪيو ويو آهي. هائپوڪسڪ حالتن ۾، ماتسوزاڪي ۽ ٻيا. 1 ايس ايس ٽي ۾ ليڪٽيٽ جي اعلي پيداوار ۽ ڇڏڻ جي رپورٽ ڪئي، جيڪا رهائشي اسپرم جي حرڪت کي روڪي سگھي ٿي. هن صورت ۾، سپرم ريولوجي جي اهميت سپرميٽوزوا جي چونڊ ۽ جذب ۾ ظاهر ٿئي ٿي، ۽ انهن جي اسٽوريج ۾ نه.
ايس ايس ٽي ۾ سپرم جي ڊگهي اسٽوريج جي مدت لاءِ سپرم ايگلوٽينيشن نموني کي هڪ قابل قبول وضاحت سمجهيو ويندو آهي، ڇاڪاڻ ته اهو پولٽري 2،22،23 ۾ سپرم برقرار رکڻ جو هڪ عام نمونو آهي. بڪسٽ ۽ ٻين 2 مشاهدو ڪيو ته گهڻا اسپرميٽوزوا هڪ ٻئي سان چپڪي رهيا هئا، فاشيڪيولر مجموعا ٺاهيندا هئا، ۽ اڪيلو اسپرميٽوزوا ڪوئل سي سي ايم ۾ گهٽ ئي مليا هئا. ٻئي طرف، وين ۽ ٻين 24 مرغين ۾ ايس ايس ٽي ليمن ۾ وڌيڪ پکڙيل اسپرميٽوزوا ۽ گهٽ اسپرميٽوزوا ٽفٽس جو مشاهدو ڪيو. انهن مشاهدن جي بنياد تي، اهو فرض ڪري سگهجي ٿو ته سپرم ايگلوٽينيشن لاءِ رجحان پکين جي وچ ۾ ۽ ساڳئي انزال ۾ اسپرميٽوزوا جي وچ ۾ مختلف آهي. ان کان علاوه، وان ڪري ۽ ٻين 9 تجويز ڪيو ته ايگلوٽينيٽڊ اسپرميٽوزوا جو بي ترتيب الڳ ٿيڻ فيلوپيئن ٽيوب جي ليمن ۾ اسپرميٽوزوا جي بتدريج دخول لاءِ ذميوار آهي. هن مفروضي جي مطابق، گهٽ ايگلوٽينيشن جي صلاحيت سان اسپرميٽوزوا کي پهريان ايس ايس ٽي مان ڪڍيو وڃي. هن حوالي سان، اسپرميٽوزوا جي گڏ ٿيڻ جي صلاحيت گندي پکين ۾ سپرم مقابلي جي نتيجي تي اثر انداز ٿيندڙ عنصر ٿي سگهي ٿي. ان کان علاوه، جيترو وقت تائين گڏ ٿيل سپرم الڳ ٿيندو، اوترو ئي وڌيڪ زرخيزي برقرار رهندي.
جيتوڻيڪ ڪيترن ئي مطالعي 2،22،24 ۾ اسپرميٽوزوا جي مجموعي ۽ بنڊلن ۾ مجموعي کي ڏٺو ويو آهي، پر انهن کي SST اندر انهن جي حرڪي مشاهدي جي پيچيدگي جي ڪري تفصيل سان بيان نه ڪيو ويو آهي. ويٽرو ۾ اسپرم ايگلوٽينيشن جو مطالعو ڪرڻ لاءِ ڪيتريون ئي ڪوششون ڪيون ويون آهن. جڏهن ٿلهي تار کي لٽڪندڙ ٻج جي قطري مان هٽايو ويو ته وسيع پر عارضي مجموعي کي ڏٺو ويو. اهو حقيقت ڏانهن وٺي ٿو ته هڪ ڊگهو بلبلو قطري مان نڪرندو آهي، جيڪو سيمينل غدود جي نقل ڪندو آهي. 3D حدن ۽ مختصر ڊرپ سڪي وڃڻ جي وقت جي ڪري، سڄو بلاڪ جلدي خراب ٿي ويو 9. موجوده مطالعي ۾، شارڪاشي ڪڪڙين ۽ مائڪرو فلائيڊڪ چپس استعمال ڪندي، اسان بيان ڪرڻ جي قابل هئاسين ته اهي ٽفٽ ڪيئن ٺهن ٿا ۽ اهي ڪيئن هلن ٿا. اسپرم بنڊل مني گڏ ڪرڻ کان فوري طور تي ٺاهيا ويا ۽ هڪ سرپل ۾ حرڪت ڪندي ڏٺا ويا، جڏهن وهڪري ۾ موجود مثبت ريولوجي ڏيکاريندي. وڌيڪ، جڏهن ميڪرو اسڪوپي طور تي ڏٺو ويو، ته اسپرم بنڊلن کي الڳ ٿيل اسپرميٽوزوا جي مقابلي ۾ حرڪت جي لڪير کي وڌائڻ لاءِ ڏٺو ويو آهي. ان مان ظاهر ٿئي ٿو ته اسپرم ايگلوٽينيشن ايس ايس ٽي جي دخول کان اڳ ٿي سگهي ٿو ۽ اهو ته اسپرم جي پيداوار دٻاءُ جي ڪري هڪ ننڍڙي علائقي تائين محدود ناهي جيئن اڳ ۾ تجويز ڪيو ويو آهي (ٽنگاري ۽ ڍنڍ 12). ٽفٽ ٺهڻ دوران، اسپرميٽوزوا هم وقت سازي ۾ ترندا آهن جيستائين اهي هڪ سنگم نه ٺاهين، پوءِ انهن جون پڇون هڪ ٻئي جي چوڌاري ويڙهيل هونديون آهن ۽ اسپرميٽوزون جو مٿو آزاد رهندو آهي، پر اسپرميٽوزون جو دم ۽ ڊسٽل حصو هڪ چپچپا مادو سان گڏ چپڪي ويندا آهن. تنهن ڪري، لئگيمينٽ جو آزاد مٿو حرڪت جو ذميوار آهي، باقي لئگيمينٽ کي ڇڪيندو آهي. اسپرم بنڊلن جي اليڪٽران مائڪروسڪوپي اسڪين ڪرڻ سان ڳنڍيل اسپرم هيڊز تمام گهڻي چپچپا مواد سان ڍڪيل ڏيکاريا ويا، اهو ظاهر ڪري ٿو ته اسپرم هيڊز آرام ڪندڙ بنڊلن ۾ جڙيل هئا، جيڪو شايد اسٽوريج سائيٽ (SST) تائين پهچڻ کان پوءِ ٿيو هوندو.
جڏهن هڪ سپرم سمير کي ايڪريڊين نارنگي سان رنگيو ويندو آهي، ته سپرم سيلز جي چوڌاري ٻاهرين سيلولر چپڪندڙ مواد کي فلوروسينٽ خوردبيني هيٺ ڏسي سگهجي ٿو. هي مادو سپرم بنڊلن کي ڪنهن به آس پاس جي سطحن يا ذرڙن سان چپڪڻ ۽ چمڪڻ جي اجازت ڏئي ٿو ته جيئن اهي آس پاس جي وهڪري سان نه وهن. اهڙيءَ طرح، اسان جا مشاهدا موبائل بنڊلن جي صورت ۾ سپرميٽوزوا چپکڻ جو ڪردار ڏيکارين ٿا. ڪرنٽ جي خلاف ترڻ ۽ ويجهي سطحن تي چپڪڻ جي انهن جي صلاحيت سپرم کي SST ۾ وڌيڪ وقت تائين رهڻ جي اجازت ڏئي ٿي.
روٿس چائلڊ 25 هڪ هيموسيٽوميٽري ڪئميرا استعمال ڪيو ته جيئن سسپنشن جي هڪ بوند ۾ بوائن سيمن جي ترندڙ ورڇ جو مطالعو ڪري سگهجي، مائڪروسڪوپ جي عمودي ۽ افقي آپٽيڪل محور سان ڪئميرا ذريعي فوٽو مائڪروگرافس ورهايا وڃن. نتيجن مان ظاهر ٿيو ته اسپرماتوزوا چيمبر جي مٿاڇري ڏانهن متوجه ٿيا. ليکڪ تجويز ڪن ٿا ته اسپرم ۽ مٿاڇري جي وچ ۾ هائيڊروڊائنامڪ رابطي ٿي سگهي ٿي. ان کي نظر ۾ رکندي، شارڪشي چڪ سيمن جي چپچپا ٽفٽ ٺاهڻ جي صلاحيت سان گڏ، اهو امڪان وڌائي سگھي ٿو ته سيمن SST ڀت سان لڳل هوندو ۽ ڊگهي عرصي تائين ذخيرو ڪيو ويندو.
بيسيٽي ۽ افزيليو 26 رپورٽ ڪئي ته گيميٽ جي سڃاڻپ ۽ ايگلوٽينيشن لاءِ اسپرم گلائڪوڪاليڪس جي ضرورت آهي. فارمن 10 ڏٺو ته گلائڪوپروٽين-گلائڪوليپڊ ڪوٽنگز ۾ α-گلائڪوسائيڊڪ بانڊز جي هائيڊولائيسس، نيورامينيڊيس سان ايويئن سيمن جو علاج ڪرڻ سان، سپرم جي حرڪت کي متاثر ڪرڻ کان سواءِ زرخيزي گهٽجي وئي. ليکڪ تجويز ڪن ٿا ته گلائڪوڪاليڪس تي نيورامينيڊيس جو اثر يوٽرو-ويجنل جنڪشن تي سپرم جي تسلسل کي خراب ڪري ٿو، جنهن ڪري زرخيزي گهٽجي ٿي. انهن جا مشاهدا ان امڪان کي نظرانداز نٿا ڪري سگهن ته نيورامينيڊيس علاج سپرم ۽ اووسائيٽ جي سڃاڻپ کي گهٽائي سگهي ٿو. فارمن ۽ اينگل 10 اهو معلوم ڪيو ته جڏهن ڪڪڙين کي نيورامينيڊيس سان علاج ٿيل سيمن سان اندروني طور تي حمل ڪيو ويو ته زرخيزي گهٽجي وئي. بهرحال، نيورامينيڊيس سان علاج ٿيل اسپرم سان IVF ڪنٽرول ڪڪڙين جي مقابلي ۾ زرخيزي کي متاثر نه ڪيو. ليکڪن اهو نتيجو ڪڍيو ته سپرم جھلي جي چوڌاري گلائڪوپروٽين-گلائڪوليپڊ ڪوٽنگ ۾ تبديلين سپرم جي ڀاڻ جي صلاحيت کي گهٽائي ڇڏيو، جنهن جي ڪري utero-vaginal junction تي سپرم جي جڪڙڻ ۾ خرابي آئي، جنهن جي نتيجي ۾ utero-vaginal junction جي رفتار جي ڪري سپرم جي نقصان ۾ اضافو ٿيو، پر سپرم ۽ بيضي جي سڃاڻپ کي متاثر نه ڪيو.
ترڪي ۾ بڪسٽ ۽ باؤچن 11 کي SST جي لومن ۾ ننڍڙا ويسيڪل ۽ جھلي جا ٽڪرا مليا ۽ ڏٺو ته انهن مان ڪجهه گرينول سپرم جھلي سان مليا هئا. ليکڪن جو مشورو آهي ته اهي لاڳاپا SST ۾ سپرميٽوزوا جي ڊگهي مدت جي اسٽوريج ۾ حصو وٺي سگهن ٿا. بهرحال، محققن انهن ذرڙن جو ذريعو بيان نه ڪيو، ڇا اهي CCT اپيٿيليل سيلز پاران لڪيل آهن، مرد جي پيدائشي نظام پاران پيدا ڪيل ۽ لڪيل آهن، يا سپرم پاران پاڻ پيدا ڪيل آهن. ان کان علاوه، اهي ذرات جمع ڪرڻ جا ذميوار آهن. گرٽزنر ۽ ٻيا 27 رپورٽ ڪئي ته ايپيڊيڊيمل ايپيٿيليل سيلز هڪ مخصوص پروٽين پيدا ڪن ٿا ۽ لڪيل آهن جيڪو سنگل-پور سيمينل ٽريڪٽس جي ٺهڻ لاءِ گهربل آهي. ليکڪ اهو به رپورٽ ڪن ٿا ته انهن بنڊلن جو ڦهلاءُ ايپيڊيڊيمل پروٽين جي رابطي تي منحصر آهي. نڪسن ۽ ٻيا 28 ڏٺائين ته ايڊنيڪسا هڪ پروٽين، تيزابي سيسٽين سان مالا مال آسٽيونيڪٽين کي خارج ڪري ٿو؛ SPARC ننڍڙي چونچ واري ايچڊناس ۽ پليٽيپس ۾ سپرم ٽفٽس جي ٺهڻ ۾ شامل آهي. انهن شعاعن جو ٽٽڻ هن پروٽين جي نقصان سان لاڳاپيل آهي.
موجوده مطالعي ۾، اليڪٽران مائڪروسڪوپي استعمال ڪندي الٽرا اسٽرڪچرل تجزيي مان ظاهر ٿيو ته اسپرماتوزوا وڏي مقدار ۾ گهاٽي مواد سان چنبڙيل هو. انهن مادن کي ايگلوٽينيشن لاءِ ذميوار سمجهيو ويندو آهي جيڪو پيروڪار سرن جي وچ ۾ ۽ چوڌاري ڳري ويندو آهي، پر دم واري علائقي ۾ گهٽ ڪنسنٽريشن تي. اسان فرض ڪريون ٿا ته هي ايگلوٽينيٽنگ مادو مرد جي پيدائشي نظام (ايپيڊيڊيمس يا ويس ڊيفرنس) مان سيمن سان گڏ خارج ٿئي ٿو، ڇاڪاڻ ته اسان اڪثر انزال دوران لفف ۽ سيمينل پلازما کان الڳ ٿيندڙ سيمن کي ڏسندا آهيون. اهو ٻڌايو ويو آهي ته جيئن ايويئن اسپرماتوزوا ايپيڊيڊمس ۽ ويس ڊيفرنس مان گذري ٿو، اهي پختگي سان لاڳاپيل تبديلين مان گذرن ٿا جيڪي پروٽين کي ڳنڍڻ ۽ پلازما ليما سان لاڳاپيل گلائڪوپروٽين حاصل ڪرڻ جي انهن جي صلاحيت جي حمايت ڪن ٿا. ايس ايس ٽي ۾ رهائشي اسپرم جھلي تي انهن پروٽين جي مستقل مزاجي مان ظاهر ٿئي ٿو ته اهي پروٽين اسپرم جھلي جي استحڪام 30 جي حصول کي متاثر ڪري سگهن ٿا ۽ انهن جي زرخيزي 31 کي طئي ڪري سگهن ٿا. احمد ۽ ٻين 32 رپورٽ ڪئي ته مرد جي پيدائشي نظام جي مختلف حصن (خصيص کان وٺي ڊسٽل ويس ڊيفرنس تائين) مان حاصل ڪيل اسپرماتوزوا مائع اسٽوريج حالتن ۾، اسٽوريج جي درجه حرارت جي پرواهه ڪرڻ کان سواءِ، عمل جي قابليت ۾ ترقي پسند اضافو ڏيکاريو، ۽ ڪڪڙن ۾ عمل جي قابليت مصنوعي حمل کان پوءِ فيلوپيئن ٽيوب ۾ پڻ وڌي ٿي.
شارڪشي ڪڪڙ جي اسپرم ٽفٽس ۾ ٻين نسلن جهڙوڪ ايچڊناس، پليٽيپس، ڪاٺ جي چوٿون، هرڻ جي چوٿون ۽ گني پگ کان مختلف خاصيتون ۽ ڪم آهن. شارڪشي ڪڪڙين ۾، اسپرميٽوزوا بنڊلن جي ٺهڻ سنگل اسپرميٽوزوا جي مقابلي ۾ انهن جي ترڻ جي رفتار کي گهٽائي ڇڏيو. بهرحال، انهن بنڊلن ريولوجيڪل طور تي مثبت اسپرميٽوزوا جي سيڪڙو کي وڌايو ۽ اسپرميٽوزوا جي صلاحيت کي متحرڪ ماحول ۾ پاڻ کي مستحڪم ڪرڻ ۾ وڌايو. ان ڪري، اسان جا نتيجا پوئين تجويز جي تصديق ڪن ٿا ته SST ۾ اسپرم ايگگلوٽينيشن ڊگهي مدت جي اسپرم اسٽوريج سان لاڳاپيل آهي. اسان اهو پڻ فرض ڪريون ٿا ته اسپرم جي ٽفٽس ٺاهڻ جي رجحان SST ۾ اسپرم جي نقصان جي شرح کي ڪنٽرول ڪري سگهي ٿي، جيڪو اسپرم مقابلي جي نتيجي کي تبديل ڪري سگهي ٿو. هن مفروضي جي مطابق، گهٽ ايگگلوٽينيشن جي صلاحيت سان اسپرميٽوزوا پهرين SST کي آزاد ڪري ٿو، جڏهن ته اعلي ايگگلوٽينيشن جي صلاحيت سان اسپرميٽوزوا گهڻو ڪري اولاد پيدا ڪري ٿو. سنگل-پور اسپرم بنڊلن جي ٺهڻ فائديمند آهي ۽ والدين-ٻار جي تناسب کي متاثر ڪري ٿي، پر هڪ مختلف ميڪانيزم استعمال ڪري ٿي. ايچڊناس ۽ پليٽيپس ۾، اسپرميٽوزوا هڪ ٻئي جي متوازي ترتيب ڏنل آهن ته جيئن بيم جي اڳتي وڌڻ جي رفتار وڌي سگهي. ايچڊناس جا بنڊل هڪ اسپرميٽوزوا کان ٽي ڀيرا تيز هلن ٿا. اهو سمجهيو ويندو آهي ته ايچڊناس ۾ اهڙن اسپرم ٽفٽس جي ٺهڻ غلبو برقرار رکڻ لاءِ هڪ ارتقائي موافقت آهي، ڇاڪاڻ ته ماديون بيضوي آهن ۽ عام طور تي ڪيترن ئي نر سان ملن ٿيون. تنهن ڪري، مختلف انزال مان اسپرميٽوزوا بيضي جي ڀاڻ لاءِ سخت مقابلو ڪندا آهن.
شارڪاسي ڪڪڙين جي ايگلوٽينيٽڊ اسپرميٽوزوا کي فيز ڪنٽراسٽ مائڪروسڪوپي استعمال ڪندي ڏسڻ ۾ آسان آهي، جيڪا فائديمند سمجهي ويندي آهي ڇاڪاڻ ته اها ان ويٽرو ۾ اسپرميٽوزوا جي رويي جو آسان مطالعو ڪرڻ جي اجازت ڏئي ٿي. شارڪاسي ڪڪڙين ۾ اسپرم ٽفٽ ٺهڻ جو طريقو پڻ ڪجهه پلاسينٽل ٿلهي جانورن ۾ ڏسڻ ۾ اچي ٿو جيڪو ڪوآپريٽو اسپرم رويي جي نمائندگي ڪري ٿو جهڙوڪ ڪاٺ جو چوٿون، جتي ڪجهه اسپرميٽوزوا هڏين تائين پهچن ٿا، ٻين لاڳاپيل فردن کي انهن جي هڏين تائين پهچڻ ۽ نقصان پهچائڻ ۾ مدد ڪن ٿا. پاڻ کي ثابت ڪرڻ لاءِ. پرهيزگار رويو. خود ڀاڻ 34. اسپرميٽوزوا ۾ ڪوآپريٽو رويي جو هڪ ٻيو مثال هرڻ جي چوٿين ۾ مليو، جتي اسپرميٽوزوا سڀ کان وڌيڪ جينياتي طور تي لاڳاپيل اسپرميٽوزوا کي سڃاڻڻ ۽ گڏ ڪرڻ ۽ غير لاڳاپيل اسپرميٽوزوا جي مقابلي ۾ انهن جي رفتار کي وڌائڻ لاءِ ڪوآپريٽو گروپ ٺاهڻ جي قابل هئا. 35.
هن مطالعي ۾ حاصل ڪيل نتيجا SWS ۾ اسپرماتوزوا جي ڊگهي مدت جي اسٽوريج جي فومن جي نظريي جي خلاف نه آهن. محقق رپورٽ ڪن ٿا ته اسپرم سيلز ايس ايس ٽي جي استر ۾ ايپيٿيليل سيلز جي وهڪري ۾ هڪ ڊگهي عرصي تائين حرڪت ڪندا رهندا آهن، ۽ هڪ خاص عرصي کان پوءِ، اسپرم سيلز جا توانائي جا ذخيرا ختم ٿي ويندا آهن، جنهن جي نتيجي ۾ رفتار ۾ گهٽتائي ايندي آهي، جيڪا ننڍڙن ماليڪيولر وزن وارين مادن جي خارج ٿيڻ جي اجازت ڏئي ٿي. ايس ايس ٽي جي لومن مان سيال جي وهڪري سان اسپرماتوزوا جي توانائي فيلوپيئن ٽيوب جي گفا. موجوده مطالعي ۾، اسان ڏٺو ته هڪ اسپرم جي اڌ حصي وهندڙ سيال جي خلاف ترڻ جي صلاحيت ڏيکاري، ۽ بنڊل ۾ انهن جي چپکڻ انهن جي مثبت ريولوجي ڏيکارڻ جي صلاحيت کي وڌايو. ان کان علاوه، اسان جو ڊيٽا ميٽسوزاڪي ۽ ٻين سان مطابقت رکي ٿو. 1 جن رپورٽ ڪئي ته ايس ايس ٽي ۾ وڌندڙ ليڪٽيٽ رطوبت رهائشي سپرم جي حرڪت کي روڪي سگهي ٿي. بهرحال، اسان جا نتيجا ايس ايس ٽي ۾ انهن جي رويي کي واضح ڪرڻ جي ڪوشش ۾ هڪ مائڪرو چينل اندر هڪ متحرڪ ماحول جي موجودگي ۾ سپرم موٽائل لئگيمنٽس جي ٺهڻ ۽ انهن جي ريولوجيڪل رويي کي بيان ڪن ٿا. مستقبل جي تحقيق شايد ايگلوٽينيٽنگ ايجنٽ جي ڪيميائي ساخت ۽ اصليت کي طئي ڪرڻ تي ڌيان ڏئي سگهي ٿي، جيڪا بلاشبہ محققن کي مائع مني کي ذخيرو ڪرڻ ۽ زرخيزي جي مدت کي وڌائڻ جا نوان طريقا پيدا ڪرڻ ۾ مدد ڪندي.
مطالعي ۾ پندرهن 30 هفتن جي ننگي ڳچيءَ واري نر شارڪاسي (هوموزائگس ڊوميننٽ؛ نا نا) کي سپرم ڊونرز طور چونڊيو ويو. پکين کي فيڪلٽي آف ايگريڪلچر، اشٽ يونيورسٽي، اشٽ گورنريٽ، مصر جي ريسرچ پولٽري فارم ۾ پاليو ويو. پکين کي انفرادي پنجرن ۾ رکيو ويو (30 x 40 x 40 سينٽي ميٽر)، هڪ روشني پروگرام (16 ڪلاڪ روشني ۽ 8 ڪلاڪ اونداهي) جي تابع ڪيو ويو ۽ هڪ غذا ڏني وئي جنهن ۾ 160 گرام خام پروٽين، 2800 ڪلو ڪلوري ميٽابولائيزبل توانائي، هر هڪ 35 گرام ڪيلشيم. غذا جي في ڪلوگرام 5 گرام موجود فاسفورس.
ڊيٽا 36، 37 جي مطابق، پيٽ جي مساج ذريعي مردن کان مني گڏ ڪئي وئي. 3 ڏينهن دوران 15 مردن کان ڪل 45 مني جا نمونا گڏ ڪيا ويا. مني (n = 15/ڏينهن) کي فوري طور تي بيلسويل پولٽري مني ڊائيلوئنٽ سان 1:1 (v:v) ملائي ڇڏيو ويو، جنهن ۾ پوٽاشيم ڊائي فاسفيٽ (1.27 گرام)، مونوسوڊيم گلوٽاميٽ مونو هائيڊريٽ (0.867 گرام)، فرڪٽوز (0.5 ڊي) اينهائيڊروس سوڊيم شامل آهي. ايسٽيٽ (0.43 گرام)، ٽريس (هائيڊروڪسي ميٿائل) امينو ميٿين (0.195 گرام)، پوٽاشيم سائٽريٽ مونو هائيڊريٽ (0.064 گرام)، پوٽاشيم مونو فاسفيٽ (0.065 گرام)، ميگنيشيم ڪلورائڊ (0.034 گرام) ۽ H2O (100 ملي ليٽر)، پي ايڇ = 7، 5، آسمولريٽي 333 mOsm/kg38. ڳريل مني جي نمونن کي پهرين هلڪي خوردبيني هيٺ جانچيو ويو ته جيئن مني جي سٺي معيار (نمي) کي يقيني بڻائي سگهجي ۽ پوءِ گڏ ڪرڻ کان پوءِ اڌ ڪلاڪ اندر استعمال ٿيڻ تائين 37 ° C تي پاڻي جي غسل ۾ محفوظ ڪيو ويو.
اسپرماتوزوا جي حرڪيات ۽ ريولوجي کي مائڪرو فلوئڊڪ ڊوائيسز جي هڪ سسٽم استعمال ڪندي بيان ڪيو ويو آهي. مني جي نمونن کي بيلٽس ويل ايون سيمن ڊائيلوئنٽ ۾ 1:40 تائين وڌيڪ گهٽايو ويو، هڪ مائڪرو فلوئڊڪ ڊوائيس ۾ لوڊ ڪيو ويو (هيٺ ڏسو)، ۽ ڪائنيٽڪ پيرا ميٽرز کي ڪمپيوٽرائيزڊ سيمن اينالائسز (CASA) سسٽم استعمال ڪندي طئي ڪيو ويو جيڪو اڳ ۾ مائڪرو فلوئڊڪس جي خاصيت لاءِ تيار ڪيو ويو هو. مائع ميڊيا ۾ اسپرماتوزوا جي حرڪت تي (مڪينيڪل انجنيئرنگ ڊپارٽمينٽ، فيڪلٽي آف انجنيئرنگ، اسيوٽ يونيورسٽي، مصر). پلگ ان کي ڊائون لوڊ ڪري سگهجي ٿو: http://www.assiutmicrofluidics.com/research/casa39. وکر جي رفتار (VCL، μm/s)، لڪير جي رفتار (VSL، μm/s) ۽ سراسري ٽريجڪٽري جي رفتار (VAP، μm/s) ماپي وئي. اسپرميٽوزوا جون وڊيوز هڪ الٽي آپٽيڪا XDS-3 فيز ڪنٽراسٽ مائڪروسڪوپ (40x مقصد سان) استعمال ڪندي ورتيون ويون جيڪي ٽڪسن ISH1000 ڪئميرا سان ڳنڍيل آهن، 3 سيڪنڊن لاءِ 30 fps تي. CASA سافٽ ويئر استعمال ڪندي گهٽ ۾ گهٽ ٽن علائقن ۽ هر نموني ۾ 500 اسپرم ٽريجڪٽريز جو مطالعو ڪريو. رڪارڊ ٿيل وڊيو کي گهر ۾ ٺهيل CASA استعمال ڪندي پروسيس ڪيو ويو. CASA پلگ ان ۾ حرڪت جي تعريف وهڪري جي شرح جي مقابلي ۾ سپرم جي ترڻ جي رفتار تي ٻڌل آهي، ۽ ان ۾ ٻيا پيرا ميٽر شامل نه آهن جهڙوڪ پاسي کان پاسي حرڪت، ڇاڪاڻ ته اهو سيال جي وهڪري ۾ وڌيڪ قابل اعتماد مليو آهي. ريولوجيڪل حرڪت کي سيال جي وهڪري جي هدايت جي خلاف سپرم سيلز جي حرڪت جي طور تي بيان ڪيو ويو آهي. ريولوجيڪل خاصيتن سان اسپرميٽوزوا کي حرڪتي اسپرميٽوزوا جي تعداد سان ورهايو ويو؛ اسپرميٽوزوا جيڪي آرام تي هئا ۽ ڪنويڪٽو طور تي حرڪت ڪندڙ اسپرميٽوزوا کي ڳڻپ مان خارج ڪيو ويو.
استعمال ٿيندڙ سڀئي ڪيميڪل ايلگوم هوريا دواسازي (قاهره، مصر) کان حاصل ڪيا ويا جيستائين ٻي صورت ۾ نوٽ نه ڪيو وڃي. ڊوائيس ايل-شيري ۽ ٻين پاران بيان ڪيل طور تي تيار ڪئي وئي هئي. 40 ڪجهه ترميمن سان. مائڪرو چينلز ٺاهڻ لاءِ استعمال ٿيندڙ مواد ۾ شيشي جون پليٽون (هاورڊ گلاس، ووسٽر، ايم اي)، ايس يو-8-25 منفي مزاحمت (مائڪرو ڪيم، نيوٽن، سي اي)، ڊائيسٽون الڪوحل (سگما الڊرچ، اسٽينهائيم، جرمني)، ۽ پولي ايسٽون شامل هئا. -184، ڊو ڪارننگ، مڊلينڊ، مشي گن). مائڪرو چينلز نرم ليٿوگرافي استعمال ڪندي ٺاهيا ويا آهن. پهرين، هڪ صاف حفاظتي چهري جو ماسڪ گهربل مائڪرو چينل ڊيزائن سان هڪ هاءِ ريزوليوشن پرنٽر تي پرنٽ ڪيو ويو (پرزميٽڪ، قاهره، مصر ۽ پئسفڪ آرٽس اينڊ ڊيزائن، مارخم، او اين). ماسٽرز شيشي جي پليٽن کي سبسٽريٽ طور استعمال ڪندي ٺاهيا ويا هئا. پليٽن کي ايسٽون، آئسوپروپنول ۽ ڊيونائيزڊ پاڻي ۾ صاف ڪيو ويو ۽ پوءِ اسپن ڪوٽنگ (3000 آر پي ايم، 1 منٽ) ذريعي ايس يو 8-25 جي 20 µm پرت سان ڍڪيل هو. پوءِ SU-8 پرتن کي نرميءَ سان خشڪ ڪيو ويو (65°C، 2 منٽ ۽ 95°C، 10 منٽ) ۽ 50 سيڪنڊن لاءِ UV شعاعن جي سامهون رکيو ويو. نمائش کان پوءِ 65°C ۽ 95°C تي 1 منٽ ۽ 4 منٽن لاءِ بيڪ ڪيو ويو ته جيئن SU-8 پرتن کي ڪراس لنڪ ڪري سگهجي، ان کان پوءِ 6.5 منٽن لاءِ ڊائيسيٽون الڪوحل ۾ ترقي ڪئي وئي. SU-8 پرت کي وڌيڪ مضبوط ڪرڻ لاءِ وافلز کي سختي سان بيڪ ڪيو ويو (200°C تي 15 منٽن لاءِ).
پي ڊي ايم ايس مونومر ۽ هارڊنر کي 10:1 جي وزن جي تناسب ۾ ملائي تيار ڪيو ويو، پوءِ ويڪيوم ڊيسيڪيٽر ۾ ڊيگيس ڪيو ويو ۽ ايس يو-8 مين فريم تي وجھي ڇڏيو ويو. پي ڊي ايم ايس کي اوون (120°C، 30 منٽ) ۾ ڪيو ويو، پوءِ چينلز کي ڪٽيو ويو، ماسٽر کان الڳ ڪيو ويو، ۽ سوراخ ڪيو ويو ته جيئن ٽيوبز کي مائڪرو چينل جي انليٽ ۽ آئوٽ ليٽ تي ڳنڍڻ جي اجازت ڏني وڃي. آخرڪار، پي ڊي ايم ايس مائڪرو چينلز کي پورٽيبل ڪورونا پروسيسر (اليڪٽرو-ٽيڪنڪ پراڊڪٽس، شڪاگو، آئي ايل) استعمال ڪندي مستقل طور تي مائڪروسڪوپ سلائيڊز سان ڳنڍيو ويو جيئن ٻئي هنڌ بيان ڪيو ويو آهي. هن مطالعي ۾ استعمال ٿيندڙ مائڪرو چينل 200 µm × 20 µm (W × H) جي ماپ ڪري ٿو ۽ 3.6 سينٽي ميٽر ڊگهو آهي.
مائڪرو چينل اندر هائيڊروسٽيٽڪ پريشر جي ڪري پيدا ٿيندڙ سيال جو وهڪرو آئوٽليٽ رزروائر ۾ اوچائي فرق Δh39 کان مٿي انليٽ رزروائر ۾ سيال جي سطح کي برقرار رکڻ سان حاصل ڪيو ويندو آهي (شڪل 1).
جتي f رگڙ جو ڪوئفيشينٽ آهي، جيڪو مستطيل چينل ۾ ليمينار وهڪري لاءِ f = C/Re طور بيان ڪيو ويو آهي، جتي C چينل جي اسپيڪٽ ريشو تي منحصر هڪ مستقل آهي، L مائڪرو چينل جي ڊيگهه آهي، Vav مائڪرو چينل اندر سراسري رفتار آهي، Dh چينل جو هائيڊروڪ قطر آهي، g - ڪشش ثقل جي تيزي. هن مساوات کي استعمال ڪندي، سراسري چينل جي رفتار کي هيٺ ڏنل مساوات استعمال ڪندي حساب ڪري سگهجي ٿو: