Nature.com تي وڃڻ لاءِ توهان جي مهرباني. توهان جو برائوزر ورشن استعمال ڪري رهيا آهيو CSS لاءِ محدود سپورٽ آهي. بهترين تجربي لاءِ، اسان سفارش ڪريون ٿا ته توهان هڪ اپڊيٽ ٿيل برائوزر استعمال ڪريو (يا انٽرنيٽ ايڪسپلورر ۾ مطابقت واري موڊ کي بند ڪريو). ان دوران، مدد جاري رکڻ کي يقيني بڻائڻ لاءِ، اسان سائيٽ کي بغير اسٽائل ۽ JavaScript جي ڏيکارينداسين.
پورس سليڪا ذرڙا هڪ سول-جيل طريقي سان تيار ڪيا ويا جن کي ميڪروپورس ذرات حاصل ڪرڻ لاءِ ڪجهه تبديليون ڏنيون ويون. اهي ذرڙا ريورسيبل اضافي فريگمينٽيشن چين ٽرانسفر (RAFT) پوليمرائيزيشن سان N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) ۽ اسٽيرين تيار ڪرڻ لاءِ N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) ۽ اسٽيرين ذريعي تيار ڪيا ويا. ري اسٽينلیس اسٽيل ڪالمن (100 × 1.8 ملي ايم id) slurry packing سان ڀريل هئا. پي ايم پي ڪالمن جي علحدگي جو اندازو لڳايو پيپٽائيڊ مرکب جي پنجن پيپٽائڊس تي مشتمل آهي (گلي-ٽائر، گلي-ليو-ٽائر، گلي-گلي-ٽائر-آرگ، ٽائروگرافڪ-ايڪس-ايڪس-ايڪس-اي-) ic ڪارڪردگي) ۽ انساني سيرم البومين (HAS) جي ٽرپسين هضمي. بهترين خارج ٿيڻ واري حالتن ۾، پيپٽائڊ مرکب جي نظرياتي پليٽ ڳڻپ 280,000 پليٽس / m² جيتري آهي. ترقي يافته ڪالمن جي علحدگي جي ڪارڪردگي کي تجارتي Ascentis Express RP-Amide ڪالمن ۾ ڏٺو ويو ته ڪارڪردگي ڪالم جي پي ايم پي جي اعلي ڪارڪردگي هئي. علحدگيء جي ڪارڪردگي ۽ قرارداد جا شرط.
تازن سالن ۾، biopharmaceutical صنعت مارڪيٽ شيئر ۾ ڪافي اضافو سان هڪ وسيع عالمي مارڪيٽ بڻجي چڪو آهي. biopharmaceutical صنعت 1,2,3 جي ڌماڪيدار ترقي سان گڏ، peptides ۽ پروٽين جي تجزيي انتهائي گهربل آهي. ٽارگيٽ peptide جي اضافي ۾، ڪيترن ئي impurities پيدا ڪري رهيا آهن peptides synthematics جي peptides synthesis reforming دوران. جسم جي رطوبتن، ٽشوز ۽ سيلز ۾ پروٽينن جو تجزيو ۽ خاصيت هڪ ئي نموني ۾ وڏي تعداد ۾ امڪاني طور تي سڃاڻڻ لائق نسلن جي ڪري هڪ انتهائي مشڪل ڪم آهي. جيتوڻيڪ ماس اسپيڪٽروميٽري پيپٽائيڊ ۽ پروٽين جي ترتيب لاءِ هڪ مؤثر اوزار آهي، جيڪڏهن اهڙن نمونن کي انجيڪشن ۾ لڳايو وڃي ته هڪ ماس اسپيڪٽ سان اهو مسئلو پيدا نه ٿيندو. ing مائع ڪروميٽوگرافي (LC) MS تجزيي کان اڳ الڳ ٿيڻ، جيڪا ڏنل وقت 4,5,6 تي ماس اسپيڪٽروميٽر ۾ داخل ٿيندڙ تجزين جي تعداد کي گھٽائي ڇڏيندي. ان کان علاوه، مائع مرحلن جي علحدگيء دوران، تجزين کي تنگ علائقن ۾ مرکوز ڪري سگهجي ٿو، ان ڪري انهن تجزين کي مرڪوز ڪري سگهجي ٿو ۽ ايل سي ايم ايس جي تشخيص (ايل سي ايم ايس) جي تشخيص ۾ خاص طور تي واڌارو ڪيو ويو آهي. گذريل ڏهاڪي دوران ۽ پروٽوميڪ تجزيي ۾ هڪ مشهور ٽيڪنڪ بڻجي چڪو آهي 7,8,9,10.
Reversed-phase liquid chromatography (RP-LC) وڏي پيماني تي پيپٽائيڊ مرکب جي صفائي ۽ علحدگيءَ لاءِ octadecyl-modified silica (ODS) کي اسٽيشنري مرحلي طور استعمال ڪيو ويندو آهي 11,12,13. تنهن هوندي به، RP اسٽيشنري مرحلن کي اطمينان بخش علحدگي فراهم نه ڪندا آهن. اڳ ۾، خاص طور تي ٺهيل اسٽيشنري مرحلن جي ضرورت هوندي آهي ته پيپٽائڊس ۽ پروٽينن کي پولر ۽ غير پولر moieties سان ڳنڍڻ ۽ انهن کي برقرار رکڻ لاء. انهن مرحلن سان ڀريل پيپٽائڊ ۽ پروٽين جي علحدگيءَ لاءِ استعمال ڪيا ويا آهن 17,18,19,20,21. مخلوط موڊ اسٽيشنري مرحلن (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polar intercalation/RPLC) ٻنهي پولر ۽ غير پولر گروپن جي موجودگي جي ڪري پيپٽائيڊ ۽ پروٽين جي الڳ ٿيڻ لاءِ موزون آهن. ڪليٽنگ اسٽيشنري مرحلن کي covalently bonded پولر گروپن سان سٺي علحدگيءَ جي طاقت ۽ قطبي ۽ غير قطبي تجزين لاءِ منفرد چونڊ ڏيکاري ٿو، جيئن علحدگيءَ جو دارومدار analyte ۽ اسٽيشنري مرحلن جي وچ ۾ رابطي تي آهي.Multimodal interactions 29, 30, 31, 32. Recently, Zhang et al.30 هڪ ڊوڊيڪل ختم ٿيل پوليامين اسٽيشنري مرحلو تيار ڪيو ۽ ڪاميابيء سان هائيڊرو ڪاربن، اينٽي ڊيپريسنٽس، فلاوونائڊز، نيوڪليو سائڊس، ايسٽروجن ۽ ٻيا ڪيترائي تجزيا جدا ڪيا. پولر انٽرڪيليٽر ٻنهي پولر ۽ غير پولر گروپن تي مشتمل آهي، تنهنڪري اهو پيپٽائڊس ۽ پروٽينن کي الڳ ڪرڻ لاءِ استعمال ڪري سگهجي ٿو جن ۾ ڪو هائيڊرو ڪاربن ۽ ڪو هائيڊرو ڪاربن شامل آهن. مثال طور، amide-embedded C18 ڪالمن) تجارتي طور تي موجود آهن تجارتي نالو Ascentis Express RP-Amide ڪالمن، پر اهي ڪالم صرف amine 33 جي تجزيي لاءِ استعمال ڪيا ويندا آهن.
موجوده مطالعي ۾، پولر-ايمبيڊڊ اسٽيشنري مرحلو (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) تيار ڪيو ويو ۽ جائزو ورتو ويو پيپٽائڊس ۽ HSA جي ٽريپسين هضم کي الڳ ڪرڻ لاء. اسٽيشنري مرحلو هيٺ ڏنل حڪمت عملي کي استعمال ڪندي تيار ڪيو ويو. پورس سليڪا ذرات اسان جي پوئين اشاعت ۾ ڏنل طريقيڪار جي مطابق تيار ڪيا ويا آهن. (PEG)، TMOS، واٽر ايسٽڪ ايسڊ کي سليڪا جي ذرڙن کي تيار ڪرڻ لاءِ ايڊجسٽ ڪيو ويو وڏي پور جي سائيز سان. ٻيو، هڪ نئون ligand، phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate، synthesized ڪيو ويو ۽ استعمال ڪيو ويو سليڪا جي ذرڙن کي تيار ڪرڻ لاءِ پولر ايمبيڊڊ اسٽيشنري فيز تيار ڪرڻ لاءِ. نتيجي ۾ اسٽيشنري فيز کي 1mm0 1mm کان سواءِ اسٽيل 1 ۾ پيڪ ڪيو ويو. بهتر ٿيل پيڪنگ اسڪيم. ڪالمن جي پيڪنگ کي ميڪيڪل وائبريشن سان مدد ڏني وئي آهي انهي کي يقيني بڻائڻ لاءِ ته ڪالمن ۾ هڪجهڙائي وارو بسترو ٺهيل آهي. پيپٽائيڊ مرکب جي پيڪ ٿيل ڪالمن جي الڳ ٿيڻ جو اندازو لڳايو جنهن ۾ پنج پيپٽائيڊس شامل آهن؛(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) ۽ انساني سيرم البومين (HAS) جو Trypsin هضم. HSA جي پيپٽائڊ مرکب ۽ trypsin هضم کي الڳ ڪرڻ لاءِ ڏٺو ويو. سٺي ريزوليوشن ۽ ڪارڪردگيءَ جو مظاهرو ڪيو ويو. -امائيڊ ڪالم.ٻئي پيپٽائڊس ۽ پروٽين کي پي ايم پي ڪالمن تي چڱيءَ طرح حل ۽ ڪارائتو ڏٺو ويو، جيڪو Ascentis Express RP-Amide ڪالمن کان وڌيڪ ڪارائتو هو.
PEG (Polyethylene Glycol)، Urea، Acetic Acid، Trimethoxy Orthosilicate (TMOS)، Trimethyl Chlorosilane (TMCS)، Trypsin، Human Serum Albumin (HSA)، امونيم کلورائڊ، يوريا، Hexane Methyldisilazane (HMDS)، Methacryloyl-Chloride (Benycryloyl-Chloride)، Benemcryloyl کلورائڊ (BPO)، HPLC گريڊ Acetonitrile (ACN)، Methanol، 2-Propanol، ۽ Acetone Sigma-Aldrich (سينٽ لوئس، MO، USA) کان خريد ڪيا ويا.
يوريا (8 گرام)، پوليٿيلين گلائڪول (8 گرام) ۽ 8 ملي ليٽر 0.01 اين ايسٽڪ ايسڊ کي 10 منٽن لاءِ اُڇليو ويو، ۽ پوءِ ان ۾ 24 ملي ليٽر TMOS شامل ڪيو ويو، برفاني سرد ​​حالتن ۾ ان ۾ شامل ڪيو ويو. رد عمل واري مرکب کي 40 ڊگري سينٽي گريڊ تي 6 ڪلاڪن لاءِ گرم ڪيو ويو ۽ پوءِ 120 ڊگري سينٽي گريڊ تي پاڻيءَ ۾ 120 ڊگري سينٽي گريڊ تي پاڻي ڀريو ويو. باقي بچيل مواد 70 ° C تي 12 ڪلاڪن تائين خشڪ ڪيو ويو. خشڪ نرم ماس کي تندور ۾ هموار ڪيو ويو ۽ 550 ° C تي 12 ڪلاڪن تائين ڪلائن ڪيو ويو. ٽن بيچ تيار ڪيا ويا ۽ خاص طور تي ذرات جي سائيز، سوراخ جي سائيز ۽ سطح جي ايراضي ۾ پيداوار جي صلاحيت کي جانچڻ لاء.
سليڪا جي ذرڙن جي مٿاڇري جي تبديليءَ سان اڳ ۾ ٺهيل ligand phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) سان گڏ ريڊيل پوليمرائيزيشن سان اسٽائرين، پولر گروپ تي مشتمل مرڪب تيار ڪيو ويو.مجموعن ۽ پولسٽريئر زنجيرن لاءِ اسٽيشنري مرحلو. تياري جو عمل ھيٺ بيان ڪيو ويو آھي.
N-phenylmaleimide (200 mg) ۽ methyl vinyl isocyanate (100 mg) خشڪ ٽولين ۾ ڦهلجي ويا، ۽ 0.1 mL of 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) تيار ڪرڻ لاءِ رد عمل واري فلاسڪ ۾ شامل ڪيو ويو phenylmaleimide-methylPythylPovin-6. هيٽلائيمائيمائيڊ-ميٿيل ايم سي پي 6. 0 ° C 3 ڪلاڪ لاء، فلٽر ڪيو ۽ 3 ڪلاڪ لاء 40 ° C تي تندور ۾ خشڪ ڪيو.
خشڪ سليڪا ذرات (2 گرام) کي خشڪ ٽوليني (100 ml) ۾ ورهايو ويو، 10 منٽ لاء 500 ml جي گول هيٺان فلاسڪ ۾ 10 منٽ لاء پکڙيل ۽ سونيڪ ڪيو ويو. PMCP (10 mg) کي ٽوليوين ۾ ٽوڙيو ويو ۽ ڊراپنگ فينل ذريعي رد عمل جي فلاسڪ ۾ dropwise شامل ڪيو ويو. اهو مرکب 10 ° C تي 10 ° C تي فلٽر ڪيو ويو. ايسٽون ۽ 60 ڊگري سينٽي گريڊ تي 3 ڪلاڪن لاءِ خشڪ ڪيو ويو، پوءِ، PMCP بانڊڊ سليڪا ذرڙا (100 گرام) ٽوليون (200 ml) ۾ حل ڪيا ويا ۽ 4-hydroxy-TEMPO (2 mL) 100 µL dibutyltin dilaurate جي موجودگي ۾ شامل ڪيا ويا، 100 °C تي 100 ° سي ميٽر فلٽر ڪيو ويو. 3 ڪلاڪ لاء 50 ° C تي خشڪ.
Styrene (1 mL)، benzoyl peroxide BPO (0.5 mL)، ۽ TEMPO-PMCP سان جڙيل سليڪا ذرڙا (1.5 g) ٽوليون ۾ ورهايا ويا ۽ نائٽروجن سان صاف ڪيا ويا. اسٽائرين جي پوليمرائيزيشن 100 ° C تي 12 ڪلاڪن تائين ڪئي وئي. نتيجي ۾ رات جي وقت 6 ° C تي رد عمل ڪيو ويو ۽ 6 ° C جي نتيجي ۾ رات جي ڀيٽ ۾ 6 سينٽي گريڊ تي رد عمل ڪيو ويو. تصوير 1 ۾ ڏيکاريل آهي.
نمونن کي 1 ڪلاڪ لاءِ 393 K تي 10-3 Torr کان گھٽ جي بقايا دٻاءُ حاصل ڪرڻ لاءِ ڊيگاس ڪيو ويو. P/P0 = 0.99 جي نسبتي دٻاءَ تي جذب ٿيل N2 جو مقدار ڪل پور جي مقدار کي طئي ڪرڻ لاءِ استعمال ڪيو ويو. جاپان) خشڪ نموني (ننگي سليڪا ۽ ligand-bonded سليڪا ذرات) هڪ ايلومينيم ڪالمن تي چپکندڙ ڪاربان ٽيپ استعمال ڪندي رکيا ويا. سون کي Q150T اسپٽر ڪوٽر استعمال ڪندي نمونن تي لڳايو ويو، ۽ نموني تي 5 nm Au پرت جمع ڪئي وئي. اهو عمل کي بهتر بڻائي ٿو، گهٽ اسپريٽرنگ جي ڪارڪردگي کي بهتر بڻائي ٿو، گهٽ اسپٽرنگ جي ڪارڪردگي کي بهتر بڻائي ٿو. ron (Waltham, MA, USA) Flash EA1112 عنصري تجزيه ڪندڙ عنصري تجزيي لاءِ استعمال ڪيو ويو. A Malvern (Worcestershire, UK) ماسٽرسائيزر 2000 ذرو سائيز اينالائزر استعمال ڪيو ويو ذرات جي سائيز جي تقسيم حاصل ڪرڻ لاءِ. ننگا سليڪا ذرڙا ۽ هر هڪ mlg 5 جي سليگ ذرڙا ۽ mLgboned (5) isopropanol، 10 منٽ لاءِ سونيڪ ڪيو ويو، 5 منٽ لاءِ ويرٽڪس ڪيو ويو، ۽ ماسٽرسائيزر جي آپٽيڪل بينچ تي رکيو ويو. Thermogravimetric تجزيو 30 کان 800 °C جي درجه حرارت جي حد تي 5 °C في منٽ جي شرح تي ڪيو ويو.
شيشي جي قطار واري اسٽينلیس سٹیل جي تنگ بور ڪالمن جي طول و عرض (100 × 1.8 ملي ايم id) سلري پيڪنگ جي طريقي سان ڀريل هئا، ساڳئي طريقي کي لاڳو ڪندي Ref.31.A اسٽينلیس اسٽيل ڪالمن (شيشي جي قطار، 100 × 1.8 ملي ايم id) هڪ آئوٽليٽ فٽنگ سان گڏ 1 µm فريٽ هڪ سلري پيڪر سان ڳنڍيل هو (Alltech Deerfield, IL, USA). اسٽيشنري فيز اسلري کي معطل ڪندي تيار ڪريو اسٽيشنري اسٽيل اسلري کي 150 m.gn کان اسٽيج جي اسٽوريج ۾ 150 m.gn. ميٿانول کي سلري سولوينٽ ۽ پروپيلنگ سولوينٽ طور استعمال ڪيو ويو. 10 منٽن لاءِ 100 ايم پي، 15 منٽن لاءِ 80 ايم پي ۽ 30 منٽن لاءِ 60 ايم پي جو دٻاءُ لاڳو ڪري ترتيب وار ڪالمن کي ڀريو. پيڪنگ دوران، ميڪيڪل وائبريشن لاڳو ڪئي وئي ٻن GC فيلڊر، يو ايس فيلڊر، ڊي ايل اي ايل ايل جي ڪالمن کي يقيني بڻائڻ لاءِ. ڪالم. سلوري پيڪر کي بند ڪريو ۽ ڪالمن جي اندر ڪنهن به نقصان کي روڪڻ لاءِ دٻاءُ کي آھستي ڇڏي ڏيو. ڪالمن کي سلري پيڪنگ يونٽ کان ڌار ڪريو ۽ ان جي ڪارڪردگي کي جانچڻ لاءِ انٽ ۽ ايل سي سسٽم سان ٻي فِٽنگ کي ڳنڍيو.
هڪ LC پمپ (10AD Shimadzu، جاپان)، انجيڪٽر (Valco (USA) C14 W.05) 50nL انجيڪشن لوپ سان، ميمبرين ڊيگاسر (Shimadzu DGU-14A)، UV-VIS ڪيپيلري ونڊو تعمير ڪيو ويو خاص µLC ڊيوائس ڊيڪٽر (UV-2075 مائيڪرو ڪولن سان ڳنڍڻ ۽ شارٽ ڪلينر سان ڳنڍڻ واري شيشي) اضافي ڪالمن بينڊ کي وسيع ڪرڻ جي اثر کي وڌايو. پيڪنگنگ کان پوء، ڪيپليئرز (50 μm id 365 ۽ گھٽائڻ واري يونين ڪيپليئرز (50 μm) کي گھٽائڻ واري يونين جي 1/16 انچ آئوٽ تي نصب ڪيو ويو. ڊيٽا گڏ ڪرڻ ۽ ڪروميٽوگرافڪ پروسيسنگ استعمال ڪيو ويو. ڪروميٽوگرافڪ ڊيٽا جو تجزيو ڪيو ويو OriginPro8 (Northampton, MA).
انساني سيرم مان البومين، لائوفيلائيز پائوڊر، ≥ 96٪ (agarose gel electrophoresis) 3 mg tripsin (1.5 mg) سان ملايو، 4.0 M يوريا (1 mL) ۽ 0.2 M امونيم بائيڪاربونيٽ (1 mL) ان محلول کي 10 منٽن لاءِ هلايو ويو، پوءِ 3 mg پاڻيءَ ۾ 3 ° C تي رکيل 10 ° C تي رکيل. 0.1% TFA. حل کي فلٽر ڪريو ۽ 4 °C کان هيٺ ذخيرو ڪريو.
پي ايم پي ڪالمن تي پيپٽائيڊ مرکب ۽ HSA ٽريپسن ڊائجسٽ جي جداگي جو جائزو ورتو ويو. پي ايم پي ڪالمن ذريعي پيپٽائيڊ مرکب ۽ HSA جي ٽريپسن ڊائجسٽ جي علحدگي کي چيڪ ڪريو ۽ نتيجن جو مقابلو Ascentis Express RP-Amide ڪالمن سان ڪيو. نظرياتي پليٽ نمبر هن ريت آهي:
ننگي سليڪا ذرڙن ۽ ligand-bonded سليڪا ذرات جون SEM تصويرون FIG ۾ ڏيکاريل آهن.2. بيئر سليڪا ذرڙن (A, B) جون SEM تصويرون ڏيکارين ٿيون ته، اسان جي پوئين اڀياس جي برعڪس، اهي ذرڙا گول هوندا آهن جن ۾ ذرڙا ڊگھا هوندا آهن يا انهن ۾ غير منظم هم آهنگي هوندي آهي. ligand-bonded سليڪا ذرڙن (C، D) جي مٿاڇري کان وڌيڪ هموار هوندي آهي، جنهن جي ڪري سليڪا جي مٿاڇري تي بيئر سليڪا جي ٿلهي هوندي آهي. ica ذرات.
ننگي سليڪا ذرڙن (A, B) ۽ ligand-bonded silica particles (C, D) جون اليڪٽران خوردبيني تصويرون اسڪين ڪرڻ.
بيئر سليڪا ذرڙن ۽ ligand-bonded سليڪا ذرڙن جي ذرڙن جي ماپ جي تقسيم کي شڪل 3(A) ۾ ڏيکاريو ويو آهي. حجم جي بنياد تي ذرات جي ماپ جي تقسيم وکر ڏيکاريو ويو آهي ته سليڪا ذرڙن جي سائيز کي ڪيميائي ترميمن کان پوء وڌايو ويو آهي (Fig. 3A). ذرڙن جي ماپ جي ورڇ واري ڊيٽا کي موجوده مطالعي ۾ سليڪا ذرات جي ڀيٽ ۾ آهي. le سائيز، d(0.5)، PMP جو 3.36 μm آهي، اسان جي پوئين مطالعي جي مقابلي ۾ 3.05 μm جي اشتهار (0.5) جي قيمت سان (پوليسٽيئرين پابند سليڪا ذرات) 34. هن بيچ ۾ اسان جي پوئين مطالعي جي مقابلي ۾ هڪ تنگ ذرو سائيز جي تقسيم هئي، ڇاڪاڻ ته PEG جي مختلف نسبتن جي ڪري، PEG جي مختلف تناسب، PEG ۽ ايڪليڪ ايسڊ جي تيزاب، جزياتي تيزاب ۾. ايم پي مرحلو پولسٽريئر جي پابند سليڪا ذرڙن واري مرحلي کان ٿورو وڏو آهي جنهن جو اسان اڳ مطالعو ڪيو هو. ان جو مطلب اهو آهي ته اسٽائرين سان سليڪا ذرڙن جي مٿاڇري ڪارڪردگي صرف سليڪا جي مٿاڇري تي پولسٽريئر پرت (0.97 µm) جمع ڪئي، جڏهن ته PMP مرحلي ۾ پرت جي ٿلهي 1.38 µm هئي.
ذرڙن جي ماپ جي ورڇ (A) ۽ سوراخ جي ماپ جي ورڇ (B) بيئر سليڪا ذرڙن ۽ ligand- پابند سليڪا ذرات جي.
موجوده مطالعي جي سليڪا ذرڙن جي سوراخ جي ماپ، سوراخ جي مقدار ۽ سطح جي ايراضي ٽيبل 1 (B) ۾ ڏني وئي آهي. بيئر سليڪا ذرات ۽ ligand-bonded سليڪا ذرات جي PSD پروفائل تصوير 3 (B) ۾ ڏيکاريا ويا آهن. نتيجا اسان جي پوئين مطالعي جي مقابلي ۾ آهن. ننگي ۽ ligand-bonded سليڪا ذرات جو اشارو آهي، جيڪو pore sizes of ligand-bonded , pore 100 particles. ڪيميائي تبديليءَ کان پوءِ ري سائز 69 تائين گھٽجي ٿو، جيئن جدول 1(B) ۾ ڏيکاريو ويو آھي، ۽ وکر جي تبديلي تصوير 3(B) ۾ ڏيکاريل آھي. اھڙيءَ طرح، ڪيميائي تبديليءَ کان پوءِ سليڪا جي ذرڙن جو pore حجم 0.67 کان 0.58 cm3/g تائين گھٽجي ويو آھي. سليڪا جي مخصوص مٿاڇري واري ايراضي، جيڪا ھن وقت اسان جي اڳئين حصي ۾ 6/1/g جي اڀياس ڪئي وئي آھي. 24 m2/g). جيئن جدول 1(B) ۾ ڏيکاريل آهي، سليڪا ذرڙن جي مٿاڇري واري ايراضي (m2/g) پڻ ڪيميائي ترميم کان پوءِ 116 m2/g کان 105 m2/g تائين گهٽجي وئي.
اسٽيشنري مرحلي جي عنصري تجزيي جا نتيجا جدول 2 ۾ ڏيکاريا ويا آهن. موجوده اسٽيشنري مرحلي جي ڪاربان لوڊشيڊنگ 6.35٪ آهي، جيڪا اسان جي پوئين مطالعي جي ڪاربان لوڊشيڊنگ کان گهٽ آهي (پوليسٽيرين بانڊڊ سليڪا ذرات، 7.93٪ 35 ۽ 10.21٪، ترتيب سان) ڇاڪاڻ ته موجوده اسٽيشن جي تياري 42 ۾ ڪاربن جي لوڊشيڊنگ، موجوده اسٽيشن جي 42، ايس پي لوڊشيڊنگ گهٽ آهي. اسٽائرين کان علاوه، ڪجهه پولر ligands جهڙوڪ phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) ۽ 4-hydroxy-TEMPO استعمال ڪيا ويا. موجوده اسٽيشنري مرحلي جو نائيٽروجن وزن سيڪڙو 2.21٪ آهي، 0.1735 ۽ 0.85٪ جي مقابلي ۾، موجوده مطالعي ۾ نائٽروجن جو وزن وڌيڪ آهي. phenylmaleimide جي ڪري مرحلو. ساڳئي طرح، مصنوعات جي ڪاربن لوڊنگ (4) ۽ (5) جي ترتيب سان 2.7٪ ۽ 2.9٪ هئا، جڏهن ته حتمي پيداوار (6) جي ڪاربان لوڊشيڊنگ 6.35٪ هئي، جيئن ٽيبل 2 ۾ ڏيکاريل آهي. وزن جي نقصان کي PMP اسٽيشنري مرحلن سان جانچيو ويو، ۽ TGA 4 جي وزن گھٽائڻ جي وکر ڏيکاريو ويو آهي. ، جيڪو ڪاربن جي لوڊشيڊنگ (6.35٪) سان سٺي معاهدي ۾ آهي ڇاڪاڻ ته ligands ۾ نه رڳو C پر N، O ۽ H پڻ شامل آهن.
phenylmaleimide-methylvinylisocyanate ligand کي سليڪا جي ذرڙن جي مٿاڇري جي ترميم لاءِ چونڊيو ويو ڇاڪاڻ ته ان ۾ پولر phenylmaleimide گروپ ۽ vinylisocyanate گروپ آهن. Vinyl isocyanate گروپ وڌيڪ ريڊيڪل پوليمرائيزيشن ذريعي اسٽائرين سان رد عمل ظاهر ڪري سگھن ٿا. ٻيو سبب اهو آهي ته هڪ گروپ داخل ڪيو وڃي جنهن ۾ هڪ مضبوط اليڪٽريڪل اسٽيشن ۽ اليڪٽريڪل اسٽينشن جي وچ ۾ رابطي جي وچ ۾ ڪو به تعامل نه هجي. ary مرحلو، ڇاڪاڻ ته phenylmaleimide moiety عام pH تي ڪو به مجازي چارج نه آهي. اسٽيشنري مرحلي جي polarity کي ڪنٽرول ڪري سگهجي ٿو اسٽائرين جي وڌ کان وڌ مقدار ۽ آزاد ريڊيڪل پوليمرائيزيشن جي رد عمل جي وقت. رد عمل جو آخري مرحلو (آزاد ريڊيڪل پوليمرائيزيشن) نازڪ آهي ۽ ان عمل جي پولارٽي کي تبديل ڪري سگهي ٿو اسٽيشنري اسٽيشنري اسٽيشنري اسٽيشنن جي اسٽينڊنگ اسٽيشنن کي چڪاس ڪيو ويو. اهو ڏٺو ويو ته اسٽائرين جي مقدار ۾ واڌ ۽ رد عمل واري وقت اسٽيشنري مرحلي جي ڪاربان لوڊشيڊنگ کي وڌايو ۽ ان جي برعڪس. اسٽائرين جي مختلف ڪنسنٽريشن سان تيار ڪيل SPs ۾ مختلف ڪاربان لوڊشيڊنگ آهي. ٻيهر، انهن اسٽيشنري مرحلن کي اسٽينلیس اسٽيل ڪالمن ۾ لوڊ ڪريو ۽ انهن جي ڪروميٽوگرافڪ ڪارڪردگي کي چيڪ ڪريو (چونڊيو ويو، ريزوليوشن تيار ڪرڻ لاءِ منتخب ٿيل فارم، اين. PMP اسٽيشنري مرحلو ڪنٽرول پولارٽي ۽ سٺي تجزياتي برقرار رکڻ کي يقيني بڻائڻ لاءِ.
پنج پيپٽائڊ مرکب (گلي-ٽائر، گلي-ليو-ٽائر، گلي-گلي-ٽائر-آرگ، ٽائر-ايل-گلي-سر-آرگ، ليوسين اينڪيفالين) پڻ هڪ موبائل مرحلو استعمال ڪندي پي ايم پي ڪالمن کي استعمال ڪندي جائزو ورتو ويو؛60/40 (v / v) ايسيٽائيٽل / پاڻي (0.1 μF / MAN.ERUNED ENTER) 20،000 پليٽون (100،000 پليٽون) ۾ نظرياتي طور تي (100،000 پليٽون). وهڪري جي شرح (700 μl / منٽ)، پنج پتي جي اندر داخل ڪيا ويا، ن قيمتون (100،000 ± 330 ± 330 ± 330) هر ڪالم جي ترتيب سان ترتيب ڏين ٿيون. بهترين ماحولياتي يا نظرياتي پلاٽ جو تعداد ۽ هر ڪالم تي ساڳيو ٽيسٽ مرکب جو تعداد پي ايم پي ڪالمن جي پسمانده ڊيٽا کي گهٽ ۾ گهٽ٪ آر ايس ڊي قيمتن سان گڏ ڏيکاريل آهي.
پي ايم پي ڪالمن (B) ۽ Ascentis Express RP-Amide ڪالمن (A) تي پيپٽائيڊ مرکب جي الڳ ٿيڻ؛موبائل مرحلو 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1٪)، PMP ڪالمن جي طول و عرض (100 × 1.8 mm id)؛تجزياتي مرڪب جي اخراج جي ترتيب: 1 (گلي-ٽائر)، 2 (گلي-ليو-ٽائر)، 3 (گلي-گلي-ٽائر-آرگ)، 4 (ٽائر-ايل-گلي-سر-آرگ) ۽ 5 (ليوسين) ايسڊ اينڪيفيلين)).
هڪ PMP ڪالمن (100 × 1.8 mm id) کي اعلي ڪارڪردگي مائع ڪروميٽوگرافي ۾ انساني سيرم البومين جي ٽريپٽڪ هضم جي جداگي لاءِ اڀياس ڪيو ويو. شڪل 6 ۾ ڪروميٽگرام ڏيکاري ٿو ته نموني چڱي طرح جدا ٿيل آهي ۽ ريزوليوشن تمام سٺو آهي. HSA هضم جو تجزيو ڪيو ويو هڪ فيز 100/000/00/00000000000000/00/00/2000 فيز /000/00000000-00000000000000000000000000 منٽ rile/water ۽ 0.1% TFA. جيئن ڪروميٽوگرام (شڪل 6) ۾ ڏيکاريل آهي، HSA هضم کي 17 چوٽي ۾ ورهايو ويو آهي 17 peptides سان ملندڙ جلندڙ آهي. HSA ڊائجسٽ ۾ هر چوٽي جي علحدگيءَ جي ڪارڪردگيءَ جو اندازو لڳايو ويو آهي ۽ قيمتون Table 5 ۾ ڏنل آهن.
PMP ڪالمن تي HSA (100 × 1.8 ملي ايم id) جي هڪ آزمائشي هضم کي الڳ ڪيو ويو؛وهڪري جي شرح (100 µL/min)، موبائل مرحلو 60/40 acetonitrile/پاڻي 0.1% TFA سان.
جتي L ڪالمن جي ڊيگهه آهي، η آهي موبائيل مرحلي جي viscosity، ΔP ڪالمن جي پوئتي پريشر آهي، ۽ u موبائيل مرحلي جي لڪير جي رفتار آهي. PMP ڪالمن جي پارمائيبلٽي 2.5 × 10-14 m2 هئي، وهڪري جي شرح 25 μL/min هئي، ۽ 60/40 AC/40MP جي column/40m. 0 × 1.8 mm id) اسان جي پوئين مطالعي Ref.34 سان ملندڙ جلندڙ هئي. سطحي طور تي ٻرندڙ ذرڙن سان ڀريل ڪالمن جي پارميابلٽي هي آهي: 1.7 × 10-15 1.3 μm ذرڙن لاءِ، 3.1 × 10-15 1.7 μm ذرڙن لاءِ، 3.1 × 10-15 1.7 μm ذرڙن لاءِ ۽ .251 × 251 × 51. .6 μm ذرڙا 5 μm ذرڙن لاءِ 43. ان ڪري، PMP مرحلي جي پارمميتا 5 μm ڪور-شيل ذرڙن جي برابر آهي.
جتي Wx ڪلوروفارم سان ڀريل ڪالمن جو وزن آهي، Wy ميٿانول سان ڀريل ڪالمن جو وزن آهي، ۽ ρ سالوينٽ جي کثافت آهي. ميٿانول جي کثافت (ρ = 0.7866) ۽ ڪلوروفارم (ρ = 1.484) آهي. ڪل پورسيٽي SIIDC10mm-18mm. ) 34 ۽ C18-يوريا ڪالمن 31 جن جو اسان اڳ ۾ اڀياس ڪيو هو، ترتيبوار 0.63 ۽ 0.55 هئا. ان جو مطلب آهي ته يوريا ligands جي موجودگي اسٽيشنري مرحلي جي پارمميبلٽي کي گھٽائي ٿي. ٻئي طرف، PMP ڪالمن جي ڪل پورسيٽي (100 × 1.8 mm idm.0MP جي columns کان گھٽ آهي). C18-باننڊ ٿيل سليڪا ذرڙن سان ڀريل آهي ڇاڪاڻ ته C18-قسم جي اسٽيشنري مرحلن ۾ C18 ligands سليڪا جي ذرڙن سان لڪير زنجيرن جي طور تي جڙيل آهن، جڏهن ته پولسٽريئر قسم جي اسٽيشنري مرحلن ۾، هڪ نسبتا ٿلهي پوليمر پرت ان جي چوڌاري ٺهيل آهي. هڪ عام تجربي ۾، ڪالمن جي پورسيٽي جي حساب سان:
شڪل 7A,B ڏيکاريو PMP ڪالمن (100 × 1.8 mm id) ۽ Ascentis Express RP-Amide ڪالمن (100 × 1.8 mm id) استعمال ڪندي ساڳيون حالتون استعمال ڪندي (يعني 60/40 ACN/H2O ۽ 0.1% TFA).) جي وين ڊيمٽر پلاٽ.چونڊيل پيپٽائڊ مرکب (Gly-Tyr، Gly-Leu-Tyr، Gly-Gly-Tyr-Arg، Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg، Leucine Enkephalin) 20 µL/ ۾ تيار ڪيا ويا ٻنهي ڪالمن لاءِ گھٽ ۾ گھٽ وهڪري جي شرح 800 µminL/min umtheat the value the umtp 800 µminL/min. L/min) PMP ڪالمن ۽ Ascentis Express RP-Amide ڪالمن لاءِ ترتيبوار 2.6 µm ۽ 3.9 µm هئا. HETP قدر ظاهر ڪن ٿا ته PMP ڪالمن (100 × 1.8 mm id) جي علحدگيءَ جي ڪارڪردگيءَ کان گهڻو بهتر آهي. تصوير 7(A) ۾ وان ڊيمٽر پلاٽ ڏيکاري ٿو ته وڌندڙ وهڪري سان N قدر ۾ گهٽتائي اسان جي پوئين مطالعي جي مقابلي ۾ اهم نه آهي. PMP ڪالمن جي اعلي علحدگي جي ڪارڪردگي (100 × 1.8 mm id) Ascentis Express RP-Amide ڪالمن جي ڀيٽ ۾ بهتري تي مبني آهي.
(A) وان ڊيمٽر پلاٽ (HETP بمقابله موبائيل مرحلو لڪير جي رفتار) 60/40 ACN/H2O ۾ 0.1٪ TFA سان PMP ڪالمن (100 × 1.8 ملي ايم id) استعمال ڪندي حاصل ڪيو. .8 mm id) 60/40 ACN/H2O ۾ 0.1٪ TFA سان.
هڪ پولر-ايمبيڊڊ پولسٽريئر اسٽيشنري مرحلو تيار ڪيو ويو ۽ ان جو جائزو ورتو ويو مصنوعي پيپٽائيڊ مرکب جي الڳ ڪرڻ ۽ انساني سيرم البومين (HAS) جي ٽريپسن هضم کي اعلي ڪارڪردگي مائع ڪروميٽوگرافي ۾. پي ايم پي ڪالمن جي ڪروميٽوگرافڪ ڪارڪردگي پيپٽائڊ مرکبن لاءِ پي ايم پي ڪالمن جي ڪروميٽوگرافڪ ڪارڪردگي کي بهتر ڪرڻ لاءِ پي ايم پي جي مختلف قسم جي ڪارڪردگي جي الڳ ٿيڻ ۽ الڳ ڪرڻ جي ڪارڪردگي سبب آهي. s، جهڙوڪ سليڪا ذرات جي ذرات جي سائيز ۽ سوراخ جي ماپ، اسٽيشنري مرحلي جي ڪنٽرول ٿيل جوڙجڪ، ۽ پيچيده ڪالمن جي پيڪنگ. اعلي علحدگيء جي ڪارڪردگي کان علاوه، تيز وهڪري جي شرح تي گهٽ ڪالمن جو دٻاء هن اسٽيشنري مرحلي جو هڪ ٻيو فائدو آهي. PMP ڪالمن کي سٺي پيداوار جي نمائش ڏيکاري ٿو ۽ مختلف قسم جي پروٽينن جي پيٽرسن ۽ مختلف پيٽرن کي استعمال ڪرڻ لاء استعمال ڪري سگهجي ٿو. هن ڪالمن کي قدرتي شين جي الڳ ڪرڻ لاءِ استعمال ڪريو، دوائن جي ٻوٽن مان حياتياتي مرڪب ۽ مائع ڪروميٽوگرافيءَ ۾ ڦڦڙن جو نڪتل. مستقبل ۾، پي ايم پي ڪالمن جو پڻ جائزو ورتو ويندو پروٽين ۽ مونوڪلونل اينٽي باڊيز جي الڳ ٿيڻ لاءِ.
فيلڊ، JK، Euerby، MR، Lau، J.، Thøgersen، H. & Petersson، P. ريورسڊ فيز ڪروميٽوگرافي پاران پيپٽائڊ سيپريشن سسٽم تي ريسرچ پارٽ I: ڊولپمينٽ آف اي ڪالمن ڪرڪٽرائزيشن پروٽوڪول.J.Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al.Improved فعال پيپٽائڊس جيڪي متعدي بيمارين جي علاج لاءِ ٺاهيا ويا. Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic therapeutic peptides: Science and the market.drug Discovery.15 (1-2) Today, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.02016 ().
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.Chromatography.A 1261، 78-90 (2012).
Liu, W. et al.Advanced liquid chromatography-mass spectrometry قابل بنائي ٿي شامل ڪرڻ جي وسيع حدف ٿيل ميٽابولومڪس ۽ proteomics.anus.Chim.Acta 1069, 89-97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ دوا جي ترقي ۾ UHPLC جو ڪردار.سيپٽمبر Sci.30 (8) 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM ultrahigh pressure liquid chromatography for fast separations.J. بنيادي ۽ عملي پهلوسيپٽمبر Sci.30(8)، 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren، SA ۽ Tchelitcheff، P. دوا جي ترقي ۾ الٽرا-هائي ڪارڪردگي مائع ڪروميٽوگرافي جي درخواست.ڪروميٽوگرافي.1119(1-2)، 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. Monolithic macroporous hydrogels تيار ڪيا ويا آئل-ان-واٽر هاءِ انٽرنل فيز ايمولشنز لاءِ موثر صاف ڪرڻ لاءِ enteroviruses.Chemical.Britain.J.401، 126051 (2020).
شي، Y.، Xiang، R.، Horváth، C. ۽ Wilkins، JA پروٽومڪس ۾ مائع ڪروميٽوگرافي جو ڪردار. جي.Chromatography.A 1053 (1-2)، 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. اڀرندڙ رجحانات ان ريورسڊ فيز مائع ڪروميٽوگرافي جي علاج واري پيپٽائڊس ۽ پروٽين جي جداگين: ٿيوري ۽ ايپليڪيشنز. جي.دواسازي.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar، M.، Olivova، P.، Daly، AE ۽ Gebler، JC پهرين ۽ ٻئي علحدگي جي طول و عرض ۾ مختلف pH قدرن کي استعمال ڪندي هڪ RP-RP-HPLC سسٽم استعمال ڪندي پيپٽائڊس جي ٻه طرفي علحدگي.سيپٽمبر سائنس 28 (14) 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al. C18 ذيلي-2 μm سان ڀريل اعلي ڪارڪردگي ڪروميٽوگرافڪ ڪالمن جي ماس منتقلي جون خاصيتون ۽ متحرڪ ڪارڪردگي جي تحقيق ڪئي وئي.سيپٽمبر Sci.43 (9-10)، 1737-1745 (2020).
Piovesana.
Mueller, JB et al.The proteomic landscape of the kingdom of life.Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al. Downstream پروسيسنگ جي علاج واري پيپٽائڊس جي تياري واري مائع ڪروميٽوگرافي طرفان. ماليڪيول (بيسل، سوئٽزرلينڊ) 26(15)، 4688(2021).
يانگ، يو ۽ گينگ، ايڪس مخلوط موڊ ڪروميٽوگرافي ۽ ان جي ايپليڪيشن کي بايوپوليمر. جي.Chromatography.A 1218(49)، 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y. & Sun, Y. Ligands for mixed-mode protein chromatography: principle, characterization, and design.J.بايو ٽيڪنالاجي. 144(1)، 3-11 (2009).