Nature.com تي اچڻ لاءِ مهرباني. توهان جي استعمال ڪيل برائوزر ورزن ۾ محدود CSS سپورٽ آهي. بهترين تجربي لاءِ، اسان سفارش ڪريون ٿا ته توهان هڪ اپڊيٽ ٿيل برائوزر استعمال ڪريو (يا انٽرنيٽ ايڪسپلورر ۾ مطابقت واري موڊ کي غير فعال ڪريو). انهي دوران، مسلسل سپورٽ کي يقيني بڻائڻ لاءِ، اسان سائيٽ کي اسٽائل ۽ جاوا اسڪرپٽ کان سواءِ رينڊر ڪنداسين.
اينگسٽي فوليئس لوپين (اين ايل ايل، لوپينس اينگسٽي فوليئس ايل.) هڪ دال وارو ٻوٽو آهي جيڪو کاڌي جي پيداوار ۽ مٽي جي بهتري لاءِ استعمال ٿيندو آهي. فصل جي طور تي اين ايل ايل جي عالمي توسيع ڪيترن ئي روگجنڪ فنگس کي راغب ڪيو آهي، جنهن ۾ لوپين اينٿراڪنوز شامل آهي، جيڪو تباهي ڪندڙ اينٿراڪنوز بيماري جو سبب بڻجندو آهي. ٻه ايلليز، لين آر 1 ۽ اين مين، جيڪي وڌندڙ مزاحمت فراهم ڪن ٿا، اين ايل ايل جي نسل ۾ استعمال ڪيا ويا آهن، پر بنيادي ماليڪيولر ميڪانيزم نامعلوم آهن. هن مطالعي ۾، يورپي اين ايل ايل نمونن جي اسڪريننگ لاءِ لين آر 1 ۽ اين مين مارڪر استعمال ڪيا ويا. ڪنٽرول ٿيل ماحول ۾ ويڪسين جي جاچ ٻنهي مزاحمتي عطيو ڏيندڙن جي اثرائتي جي تصديق ڪئي. نمائندگي مزاحمتي ۽ حساس لائينن تي مختلف جين اظهار جي پروفائلنگ ڪئي وئي. اينٿراڪنوز مزاحمت جين آنٽولوجي اصطلاحن "GO:0006952 ڊفينس ريسپانس"، "GO:0055114 ريڊوڪس پروسيس"، ۽ "GO:0015979 فوٽو سنٿيسس" جي اوور ايڪسپريشن سان لاڳاپيل هئي. ان کان علاوه، Lanr1(83A:476) لائن ۾ انوڪيوليشن کان پوءِ تيزيءَ سان ٽرانسڪرپٽوم ري پروگرامنگ ڏيکاري وئي، جڏهن ته ٻين لائينن هن جواب ۾ تقريباً 42 ڪلاڪن جي دير ڏيکاري. دفاعي جواب TIR-NBS، CC-NBS-LRR ۽ NBS-LRR جينز سان لاڳاپيل آهن، 10 پروٽين جيڪي پيٿوجينيسس ۾ شامل آهن، لپڊ ٽرانسفر پروٽين، اينڊوگلوڪن-1,3-β-گلوڪوسيڊيس، گلائسين سان مالا مال سيل وال پروٽين، ۽ آڪسيجن جي رد عمل واري رستي مان جينز. 83A:476 جي شروعاتي جوابن ۾، فوٽو سنٿيسس سان لاڳاپيل جينز جي احتياط سان دٻائڻ شامل آهي، فنگل حياتيات جي نباتاتي واڌ جي مرحلي دوران ڪامياب تحفظ سان گڏ، اهو مشورو ڏئي ٿو ته هڪ اثر ڪندڙ قوت مدافعت کي متحرڪ ڪري ٿو. منڊيلوپ رد عمل سست ٿي ويو آهي، جيئن مجموعي افقي ڇڪڻ آهي.
تنگ پنن وارو لوپين (NLL، Lupinus angustifolius L.) هڪ اعليٰ پروٽين وارو اناج آهي جيڪو مغربي ميڊيٽرينين علائقي ۾ پيدا ٿئي ٿو 1,2. اهو هن وقت جانورن ۽ انسانن لاءِ کاڌي جي فصل جي طور تي پوکيو ويندو آهي. ان کي فصل جي گردش سسٽم ۾ سائي ڀاڻ پڻ سمجهيو ويندو آهي ڇاڪاڻ ته سمبيوٽڪ نائٽروجن فڪسنگ بيڪٽيريا پاران نائٽروجن فڪسيشن ۽ مٽي جي جوڙجڪ جي مجموعي بهتري جي ڪري. NLL گذريل صديءَ ۾ گهريلو عمل جي تيز عمل مان گذريو آهي ۽ اڃا تائين اعليٰ نسل جي دٻاءُ هيٺ آهي 3,4,5,6,7,8,9,10,11,12. NLL جي وسيع پوک سان، پيٿوجينڪ فنگس جي جانشين نوان زرعي نچ ٺاهيا ۽ نئين فصلن کي تباهه ڪندڙ بيماريون پيدا ڪيون. لوپين جي آبادگارن ۽ نسل ڏيندڙن لاءِ سڀ کان وڌيڪ قابل ذڪر اينٿراڪنوز جو ظاهر ٿيڻ هو، جيڪو پيٿوجينڪ فنگس، ڪوليٽوٽريچم لوپيني (بونڊار) نيرنبرگ، فيلر ۽ هيڊڊورن 13 جي ڪري ٿيو. لوپين جي آبادگارن ۽ نسل ڏيندڙن لاءِ سڀ کان وڌيڪ قابل ذڪر اينٿراڪنوز جو ظاهر ٿيڻ هو، جيڪو پيٿوجينڪ فنگس، ڪوليٽوٽريچم لوپيني (بونڊار) نيرنبرگ، فيلر ۽ هيڊڊورن 13 جي ڪري ٿيو. Наиболее примечательным для фермеров и селекционеров люпина было появление антракноза, вызванного патогенным для фермеров نيرنبرگ، فيلر ۽ هيگيڊورن13. لوپائن جي آبادگارن ۽ نسل ڏيندڙن لاءِ سڀ کان وڌيڪ قابل ذڪر اينٿراڪنوز جو ظهور هو جيڪو پيٿوجينڪ فنگس ڪوليٽوٽريچم لوپيني (بونڊار) نيرنبرگ، فيلر ۽ هيڊڊورن 13 جي ڪري ٿيو.对于羽扇豆农民和饲养者来说,最引人注目的是炭疽病的出现,它是由病原农民和饲养者来说,最引人注目的是炭疽病的出现Feiler & Hagedorn13 引起的.对于羽扇豆农民和饲养者来说,最引人注目的是炭疽病的出现،它是由病原农民和饲养者来说(بندر) وار وار. 1 Наиболее поразительным для фермеров и селекционеров люпина является появление антракноза, вызываемого патоимеров и селекционеров (بنڊار) نيرنبرگ، فيلر ۽ هيگيڊورن13. لوپين جي آبادگارن ۽ نسل ڏيندڙن لاءِ سڀ کان وڌيڪ متاثر ڪندڙ اينٿراڪنوز جو ظهور آهي جيڪو پيٿوجينڪ فنگس ڪوليٽوٽريچم لوپيني (بونڊار) نيرنبرگ، فيلر ۽ هيڊورن 13 جي ڪري ٿئي ٿو.بيماري جي شروعاتي رپورٽون برازيل ۽ آمريڪا مان آيون، جن ۾ عام علامتون ترتيب وار 1912 ۽ 1929 ۾ ظاهر ٿيون. جڏهن ته، تقريبن 30 سالن کان پوءِ، پيٿوجن کي ڪوليٽوٽريچم گلووسپوريوائيڊس (پينز.) پينز جي نالي سان نامزد ڪيو ويو. ۽ سيڪ.، ٽيليمورف گلوميريلا سينگولاٽا (اسٽون مين) اسپالڊ. ۽ سيڪ.، ٽيليمورف گلوميريلا سينگولاٽا (اسٽون مين) اسپالڊ. ۽ Sacc.، телеоморф Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. ۽ سيڪ.، گلوميريلا سينگولاٽا (اسٽون مين) اسپالڊ جو ٽيليمورف. ۽ Sacc.،有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. ۽ Sacc.،有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc.، Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld в Целенаправленной морфологии. ۽ سيڪ.، گلوميريلا سينگولاٽا (اسٽون مين) اسپالڊ ان ٽارگيٽيڊ مورفولوجي. ۽ ايڇ. شرينڪ،. ۽ ايڇ. شرينڪ، .۽ ايڇ. شرينڪ. & H. 施伦克،. & H. 施伦克،.۽ ايڇ. شلينڪ، .20 صدي جي وچ ۾ ڪيل ابتدائي بيماري جي فينوٽائپنگ NLL ۽ پيلي لوپين (L. luteus L.) جي اضافي ۾ ڪجهه مزاحمت ڏيکاري، پر جانچيل سڀئي اڇا لوپين (L. albus L.) جي اضافي انتهائي حساس هئا15,16. مطالعي مان ظاهر ٿيو آهي ته اينٿراڪنوز جي ترقي وڌندڙ برسات (هوا جي نمي) ۽ گرمي پد (12-28 ° C جي حد ۾) سان لاڳاپيل آهي، جنهن جي ڪري وڌيڪ گرمي پد 17، 18 تي مزاحمت جي خلاف ورزي ٿئي ٿي. حقيقت ۾، ڪونيڊيا کي اڀرڻ ۽ بيماري شروع ٿيڻ لاءِ گهربل وقت، 24 ° C (4 ڪلاڪ) تي 12 ° C (16 ڪلاڪ) جي ڀيٽ ۾ چار ڀيرا گهٽ هو. تيز نمي جي حالتن ۾ 19. اهڙيءَ طرح، جاري گلوبل وارمنگ اينٿراڪنوز جي پکيڙ جو سبب بڻي آهي. بهرحال، فرانس (1982) ۽ يوڪرين (1983) ۾ بيماري کي هڪ ايندڙ خطري جي اڳڪٿي طور ڏٺو ويو، پر ظاهري طور تي ان وقت لوپين انڊسٽري طرفان نظرانداز ڪيو ويو20,21. ڪجھ سالن بعد، هي تباهي ڪندڙ بيماري سڄي دنيا ۾ پکڙجي وئي ۽ آسٽريليا، پولينڊ ۽ جرمني جهڙن وڏن لوپين پيدا ڪندڙ ملڪن کي به متاثر ڪيو 22,23,24. 1990 جي وچ ڌاري اينٿراڪنوز جي وبا کان پوءِ، وسيع اسڪريننگ جي نتيجي ۾ NLL19 نمونن ۾ ڪيترن ئي مزاحمتي عطيو ڏيندڙن جي سڃاڻپ ٿي. اينٿراڪنوز جي خلاف NLL مزاحمت کي مختلف جراثيم پلازم ذريعن ۾ مليل ٻن الڳ غالب ايليلز ذريعي ڪنٽرول ڪيو ويندو آهي: تنجيل ۽ وونگا جي ڪلٽيور ۾ Lanr1 ۽ ڪُلٽيور ۾ AnMan. منڊلي 25,26. اهي ايليل ماليڪيولر مارڪرز کي مڪمل ڪن ٿا جيڪي نسل جي پروگرامن ۾ مزاحمتي جراثيم پلازم جي چونڊ جي حمايت ڪن ٿا 25,26,27,28,29,30. مزاحمتي نسل جي لائن 83A:476 جيڪا Lanr1 ايليل کڻي وڃي ٿي، ان کي حساس جهنگلي لائن P27255 سان پار ڪيو ويو ته جيئن اينٿراڪنوز مزاحمت لاءِ الڳ ٿيندڙ RIL آبادي حاصل ڪري سگهجي، جنهن Lanr1 لوڪس کي ڪروموسوم NLL-1131، 32، 33 ڏانهن تفويض ڪرڻ ممڪن بڻايو. هڪ جينومڪ فريم ورڪ سان اينٿراڪنوز کي فلانڪنگ مزاحمتي لوسي کان لنڪيج ميپ مارڪرز جي ترتيب، NLL هڪ ئي ڪروموسوم (NLL-11) تي ٽنهي ايليلز جي جڳهه کي ظاهر ڪيو، پر مختلف پوزيشن ۾ 29,34,35. بهرحال، RILs جي ننڍي تعداد ۽ مارڪرز ۽ لاڳاپيل ايليلز جي وچ ۾ وڏي جينياتي فاصلي جي ڪري، انهن جي بنيادي جين بابت ڪو به قابل اعتماد نتيجو نه ڪڍي سگهجي ٿو. ٻئي طرف، لوپين ۾ ريورس جينيٽڪس جو استعمال انهن جي تمام گهٽ بحالي جي صلاحيت جي ڪري ڏکيو آهي، جيڪو جينياتي هٿرادو کي پيچيده بڻائي ٿو 37.
گھربل جراثيم پلازم جي ترقي جيڪا هوموزائگس حالت ۾ گهربل ايليل کڻندي آهي، جهڙوڪ 83A:476 (Lanr1) ۽ منڊيلپ (AnMan)، جهنگلي آبادي ۾ ايليلز جي مخالف ميلاپ جي موجودگي جي سامهون اينٿراڪنوز مزاحمت جي مطالعي جو دروازو کوليو آهي. ماليڪيولر ميڪانيزم جا امڪان. مخصوص جينوٽائپس پاران پيدا ٿيندڙ دفاعي جوابن جو مقابلو ڪريو. هن مطالعي ۾ C. lupini ويڪسينيشن لاءِ NLL جي شروعاتي ٽرانسڪرپٽومي ردعمل جو جائزو ورتو ويو. پهرين، هڪ يورپي NLL جراثيم پلازم پينل جنهن ۾ 215 لائينون شامل هيون انهن جي اسڪريننگ ڪئي وئي ماليڪيولر مارڪرز استعمال ڪندي جيڪي Lanr1 ۽ AnMan ايليلز کي نشان لڳايو. ان کان پوءِ اينٿراڪنوز فينوٽائپنگ 50 NLL لائينن تي ڪئي وئي، جيڪي اڳ ۾ ماليڪيولر مارڪرز لاءِ چونڊيل هيون، ڪنٽرول ٿيل حالتن هيٺ. انهن تجربن جي بنياد تي، اينٿراڪنوز مزاحمت ۽ Lanr1/AnMan ايليلڪ ساخت ۾ مختلف چار لائينون ٻن مڪمل طريقن کي استعمال ڪندي ڊفرنشل ڊفينس جين ايڪسپريشن پروفائلنگ لاءِ چونڊيون ويون: هاءِ-ٿرو پُٽ آر اين اي سيڪوئنسنگ ۽ ريئل ٽائيم پي سي آر ڪوانٽيفڪيشن.
NLL جرم پلازم (N = 215) جي هڪ سيٽ جي اسڪريننگ مارڪرز Lanr1 (Anseq3 ۽ Anseq4) ۽ AnMan (Anseq4) ۽ AnMan (AnManM1) سان ڏيکاريو ويو ته صرف هڪ لائن (95726، Salamanca-b جي ويجهو) سڀني مارڪرز لاءِ "مزاحمت" ايليل کي وڌائي ٿي، جڏهن ته "'حساس' ايليلز جي موجودگي" 158 (~73.5٪) لائينن ۾ سڀني مارڪرز جو تناسب ڳولي لڌو. تيرهن لائينن Lanr1 مارڪر جا ٻه "مزاحمتي" ايليل پيدا ڪيا، ۽ 8 لائينن Lanr1 مارڪر جا "مزاحمتي" ايليل پيدا ڪيا. AnMan مارڪر جو "مزاحمتي" ايليل (ضمني جدول S1). ٻه لائينون Anseq3 مارڪر لاءِ هيٽروزائگس ۽ AnManM1 مارڪر لاءِ هڪ هيٽروزائگس هيون. 42 لائينون (19.5٪) Anseq3 ۽ Anseq4 ايلليز جي مخالف مرحلن کي کڻي ويون، جيڪي انهن ٻن لوڪي جي وچ ۾ ٻيهر ميلاپ جي هڪ اعلي تعدد کي ظاهر ڪن ٿيون. ڪنٽرول ٿيل حالتن هيٺ اينٿراڪنوز فينوٽائپس (ضمني جدول S2) آزمائشي جينوٽائپس جي مزاحمت ۾ تبديلي کي ظاهر ڪيو، جيڪو اينٿراڪنوز جي شدت ۾ ظاهر ٿيو. سراسري اسڪور ۾ فرق 1.8 (معتدل مزاحمتي) کان 6.9 (حساس) تائين ۽ ٻوٽي جي وزن ۾ فرق 0.62 (حساس) کان 4.45 گرام (مزاحمتي) تائين هو. تجربي جي ٻن نقلن ۾ ڏٺل قدرن جي وچ ۾ هڪ اهم تعلق هو (بيماري جي شدت جي اسڪور لاءِ 0.51، ٻوٽي جي وزن لاءِ P = 0.00017 ۽ 0.61، P < 0.0001) ۽ انهن ٻن پيرا ميٽرز (− 0.59 ۽ − 0.77، P < 0.0001) جي وچ ۾. تجربي جي ٻن نقلن ۾ مشاهدو ڪيل قدرن جي وچ ۾ هڪ اهم تعلق هو (بيماري جي شدت جي اسڪور لاءِ 0.51، ٻوٽي جي وزن لاءِ P = 0.00017 ۽ 0.61، P < 0.0001) ۽ انهن ٻن پيرا ميٽرز (− 0.59 ۽ − 0.77، P < 0.0001) جي وچ ۾. Выявлена ​​достоверная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях эксперимента (0,51 для бажловения, бажду значениями) 0,00017 и 0,61 для массы растения، P < 0,0001)، а также между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,77, 0,001) 0,001). تجربي جي ٻن ورجائن ۾ ڏٺل قدرن جي وچ ۾ هڪ اهم تعلق مليو (بيماري جي شدت جي اسڪور لاءِ 0.51، ٻوٽي جي وزن لاءِ P = 0.00017 ۽ 0.61، P < 0.0001)، انهي سان گڏ انهن ٻن پيرا ميٽرز (- 0.59 ۽ -0.77، P < 0.0001) 0.0001) جي وچ ۾.在两次重复实验中观察到的值之间存在显着相关性（疾病严重程度评分为0.51 0.00017، 植物重量为0.61، P <0.0001）以及这两个参数之间（- 0.59 和- 0.77، P <0.0001)在 两 次 重复 实验 中 观察 的 值 之间 存在相关性（疾病 严重 程度 评 分丈 5 ， p = 0.00017 ， 植物 为 0.61 ， p <0.0001） 以及 两 个 参数 之间اڳ - 0.59 和- 0.77، پي <0.0001). Наблюдалась значительная корреляция между значениями, наблюдаемыmy в двух повторностях масса растения 0,61, P <0,0001), и между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,0001) 0,77, P <0,0001. نقل ۾ مشاهدو ڪيل قدرن جي وچ ۾ هڪ اهم تعلق هو (بيماري جي شدت جو اسڪور 0.51، P = 0.00017 ۽ ٻوٽي جو وزن 0.61، P < 0.0001) ۽ انهن ٻن پيرا ميٽرز (-0.59 ۽ -0 .0001) 0.77، P <0.0001) جي وچ ۾. ).حساس ٻوٽن ۾ ڏسڻ ۾ ايندڙ عام علامتن ۾ "چرواه جي ڪمان" جي جوڙجڪ وانگر ٿڙ جو ڪنگڻ ۽ مروڙڻ شامل آهن، جنهن کان پوءِ نارنگي/گلابي اسپوروزائٽس سان بيضوي زخم (ضمني شڪل 1). آسٽريليا جا حصا جيڪي Lanr1 (83A:476 ۽ Tanjil) ۽ AnMan (Mandelup) جين کي کڻندا آهن اهي معتدل طور تي مزاحمتي آهن، 0.0331 ۽ 0.0036). ڪجهه لائينون جيڪي "مزاحمتي" Lanr1 ۽/يا AnMan ايلليز پڻ کڻنديون آهن، بيماري جون علامتون ڏيکارينديون آهن.
دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، ڪجهه اين ايل ايل لائينون جن ۾ ڪو به "مزاحمتي" مارڪر ايليل نه هو، انهن اينٿراڪنوز مزاحمت جي هڪ اعليٰ سطح ظاهر ڪئي (لينر 1 يا اين مين جينوٽائپس جي مقابلي ۾ يا ان کان وڌيڪ)، جهڙوڪ بورگين (ٻنهي پيرا ميٽرز لاءِ پي ويليو < 0.0001)، بوجر (اسڪور لاءِ پي ويليو < 0.0001 ۽ ٻوٽي جي وزن لاءِ 0.001) ۽ آبادي B-549/79b (اسڪور لاءِ پي ويليو < 0.0001 ۽ وزن لاءِ غير اهم). دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، ڪجهه اين ايل ايل لائينون جن ۾ ڪو به "مزاحمتي" مارڪر ايليل نه هو، انهن اينٿراڪنوز مزاحمت جي هڪ اعليٰ سطح ظاهر ڪئي (لينر 1 يا اين مين جينوٽائپس جي مقابلي ۾ يا ان کان وڌيڪ)، جهڙوڪ بورگين (ٻنهي پيرا ميٽرز لاءِ پي ويليو < 0.0001)، بوجر (اسڪور لاءِ پي ويليو < 0.0001 ۽ ٻوٽي جي وزن لاءِ 0.001) ۽ آبادي B-549/79b (اسڪور لاءِ پي ويليو < 0.0001 ۽ وزن لاءِ غير اهم). Интересно, что несколько линий NLL, лишенных какого-либо «резистентного» маркерного аллеля, показали высокий уровень увости высокий. (сопоставимый или более высокий, чем для генотипов Lanr1 или AnMan), таких как Boregine (значение P <0,0001 для обоиех парамечная) 0,0001 سالن جي لاءِ ۽ 0,001 لاءِ массы растения) и популяции B-549/79b (значение P <0,0001 для оценки и незначимо для массы). دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، ڪيتريون ئي اين ايل ايل لائينون جن ۾ ڪو به 'مزاحمتي' مارڪر ايليل نه هو، انهن اينٿراڪنوز جي خلاف مزاحمت جي اعليٰ سطح ڏيکاري (لينر 1 يا اين مين جينوٽائپس جي مقابلي ۾ يا ان کان وڌيڪ)، جهڙوڪ بورگين (ٻنهي پيرا ميٽرز لاءِ پي ويليو < 0.0001)، بوجر (پي ويليو < 0.0001 تشخيص لاءِ ۽ 0.001 ٻوٽي جي وزن لاءِ) ۽ آبادي B-549/79b (پي ويليو < 0.0001 تشخيص لاءِ ۽ وزن لاءِ اهم نه).有趣的是，一些缺乏任何“抗性”标记等位基因的NLL 系显示出高水平的炭疽病抗怗基因型相当或更高）،例如Boregine (两个参数的P 值<0.0001）、Bojar)P 值<得分为0.0001،植物重量为0.001）和种群B-549/79b（得分P 值<0.0001,重量不漉. اها دلچسپ ڳالهه آهي ته ڪجهه اين ايل ايل سسٽم جن ۾ ڪو به "اينٽي جينڪ" مارڪر نه هوندو آهي اهي اعليٰ افقي مزاحمت ڏيکاريندا آهن (لينر 1 يا اين مين جينز جي برابر يا وڌيڪ)، جهڙوڪ بورگين (ٻئي پيرا ميٽرز پي < 0.0001)، بوجر (پي ويليو < 0.0001، ٻوٽي جو وزن 0.001) ۽ اسٽرين بي-549/79b (پي ويليو < 0.0001، وزن اهم نه آهي). Интересно, что некоторые линии NLL, лишенные каких-либо маркерных аллей «резистентности»، показали высокие уровни устоиности. (сравнимые или выше, чем у генотипов Lanr1 или AnMan), такие как Boregine (значение P для обоих параметров <0,0001), Bojar (<0,00001) بوجار 0,001) и популяция B-549/79b (оценка P-значение <0,0001, масса незначительна). دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، ڪجهه اين ايل ايل لائينون جن ۾ ڪنهن به 'مزاحمت' مارڪر ايلليز جي کوٽ هئي، انهن اينٿراڪنوز مزاحمت جي اعليٰ سطح ڏيکاري (لينر 1 يا اين مين جينوٽائپس جي مقابلي ۾ يا ان کان وڌيڪ)، جهڙوڪ بورگين (ٻنهي پيرا ميٽرز لاءِ پي ويليو <0.0001)، بوجر (پي- ويليو <0.0001، ٻوٽي جو وزن 0.001) ۽ آبادي بي-549/79b (پي- ويليو <0.0001، وزن اهم نه آهي).هي رجحان مزاحمت جي هڪ نئين جينياتي ذريعن جي امڪان کي ظاهر ڪري ٿو، مارڪر جينوٽائپس ۽ بيماري جي فينوٽائپس جي وچ ۾ رابطي جي گهٽتائي جي وضاحت ڪري ٿو (P قدر ~0.42 کان ~0.98 تائين). اهڙيءَ طرح، ڪولموگوروف-سميرونوف ٽيسٽ ڏيکاريو ته اينٿراڪنوز مزاحمت تي ڊيٽا تقريبن عام طور تي اسڪور (P-قدر 0.25 ۽ 0.11) ۽ ٻوٽي جي ماس (P-قدر 0.47 ۽ 0.55) لاءِ ورهايل هئا، جنهن مان اهو ظاهر ٿئي ٿو ته مان اهو فرض ڪريان ٿو ته Lanr1 ۽ AnMan کان وڌيڪ ايلليز شامل آهن.
اينٿراڪنوز مزاحمت جي اسڪريننگ جي نتيجن جي بنياد تي، ٽرانسڪرپٽومي تجزيو لاءِ 4 لائينون چونڊيون ويون: 83A:476، بورگين، منڊيلپ، ۽ آبادي 22660. انهن لائينن کي آر اين اي سيڪوئنسنگ ذريعي انووليشن تجربن ۾ اينٿراڪس مزاحمت لاءِ ٻيهر آزمايو ويو، بشرطيڪ اهي پوئين ٽيسٽ وانگر هجن. اسڪور قدر هن ريت هئا: بورگين (1.71 ± 1.39)، 83A: 476 (2.09 ± 1.38)، منڊيلپ (3.82 ± 1.42) ۽ آبادي 22660 (6.11 ± 1.29).
Illumina NovaSeq 6000 پروٽوڪول في نموني سراسري طور تي 40.5 Mread جوڙا حاصل ڪيا (29.7 کان 54.4 Mreads) (ضمني جدول S3). حوالن جي ترتيب ۾ ترتيب جا اسڪور 75.5٪ کان 88.6٪ تائين هئا. حياتياتي نقلن جي وچ ۾ تجرباتي مختلف قسمن جي وچ ۾ پڙهڻ جي ڳڻپ جي ڊيٽا جو سراسري لاڳاپو 0.812 کان 0.997 (مطلب 0.959) تائين هو. تجزيو ڪيل 35,170 جين مان، 2917 ڪو به اظهار ظاهر نه ڪيو، ۽ ٻيا 4785 جين غير معمولي سطح تي ظاهر ڪيا ويا (بنيادي اوسط < 5). تجزيو ڪيل 35,170 جين مان، 2917 ڪو به اظهار ظاهر نه ڪيو، ۽ ٻيا 4785 جين غير معمولي سطح تي ظاهر ڪيا ويا (بنيادي اوسط < 5). IS 35 170 проанализированных генов 2917 не проявляли экспрессии, а остальные 4785 генов экспрессировались на незвновначем. среднее <5). تجزيو ڪيل 35,170 جينز مان، 2917 ڪو به اظهار نه ڏيکاريو، ۽ باقي 4785 جينز هڪ غير معمولي سطح تي ظاهر ڪيا ويا (بنيادي اوسط <5).在分析的35,170 个基因中，2917 个没有表达，其他4785个基因的表达可以忽略不计！ 5).35,170 IS 35 170 проанализированных генов 2917 не экспрессировались, а остальные 4785 генов имели незначительную экспрессировались значение <5). تجزيو ڪيل 35,170 جينز مان، 2917 ظاهر نه ڪيا ويا ۽ باقي 4785 جينز جو اظهار نه هجڻ برابر هو (بنيادي اوسط <5).تنهن ڪري، تجربي دوران ظاهر ڪيل جين جو تعداد (بنيادي اوسط ≥ 5) 27,468 (78.1٪) هو (ضمني جدول S4).
پهرين ٽائيم پوائنٽ کان، سڀني اين ايل ايل لائينن ٽرانسڪرپٽوم (ٽيبل 1) کي ٻيهر پروگرام ڪندي سي لوپيني (اسٽرين ڪول-08) جي انوڪوليشن جو جواب ڏنو، جڏهن ته، لائينن جي وچ ۾ اهم فرق ڏٺو ويو. اهڙيءَ طرح، مزاحمتي لائن 83A:476 (Lanr1 جين کڻندڙ) پهرين ٽائيم پوائنٽ (6 hpi) تي اهم ٽرانسڪرپٽوم ري پروگرامنگ ڏيکاريو، هن ٽائيم پوائنٽ تي ٻين ٽائيم پوائنٽن جي مقابلي ۾ الڳ ٿيل مٿي ۽ هيٺ جين جي تعداد ۾ 31-69 گنا واڌ سان. ان کان علاوه، هي چوٽي مختصر مدت جي هئي، ڇاڪاڻ ته صرف ڪجهه جين جو اظهار ٻئي ٽائيم پوائنٽ (12 hpi) تي خاص طور تي تبديل رهيو. دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، بورگين، جنهن گرافٽ ٽيسٽ ۾ مزاحمت جي هڪ اعليٰ سطح پڻ ڏيکاري، تجربي دوران اهڙي وڏي ٽرانسڪرپشنل ري پروگرامنگ مان نه گذريو. جڏهن ته، مختلف طور تي ظاهر ڪيل جين (DEG) جو تعداد بورگين ۽ 83A:476 لاءِ 12 HPI تي ساڳيو هو. منڊيلپ ۽ آبادي 22660 ٻنهي آخري وقت جي نقطي (48 l/s) تي DEG جي چوٽي ڏيکاري، جيڪا دفاعي جوابن ۾ نسبتاً دير جي نشاندهي ڪري ٿي.
ڇاڪاڻ ته 83A:476 ٻين سڀني لائينن جي مقابلي ۾ 6 HPI تي C. lupini جي جواب ۾ وڏي پيماني تي ٽرانسڪرپٽوم ريپروگرامنگ مان گذريو، هن وقت مشاهدو ڪيل DEGs مان ~91٪ نسب جي مخصوص هئا (شڪل 1). بهرحال، مطالعي جي لائينن جي وچ ۾ شروعاتي جوابن ۾ ڪجهه اوورليپ هو، جيئن بورگين، منڊيلپ، ۽ آبادي 22660 ۾ ترتيب وار 68.5٪، 50.9٪، ۽ 52.6٪ DEG، وقت جي ڪجهه پوائنٽن ۾ 83A:476 ۾ مليل ماڻهن سان اوورليپ ڪيو ويو. بهرحال، اهي DEGs 83A:476 استعمال ڪندي هن وقت دريافت ڪيل سڀني DEGs جو صرف هڪ ننڍڙو حصو (0.97–1.70٪) هئا. ان کان علاوه، سڀني لائينن مان 11 DEGs هن وقت مربوط هئا (ضمني جدول S4-S6)، جنهن ۾ ٻوٽن جي دفاعي جوابن جا عام جزا شامل آهن: لپڊ ٽرانسفر پروٽين (TanjilG_32225)، اينڊوگلوڪن-1,3-β-گلوڪوسائيڊ اينزائم (TanjilG_23384)، ٻه دٻاءُ-انڊيڪيبل پروٽين جهڙوڪ SAM22 (TanjilG_31528 ۽ TanjilG_31531)، بنيادي ليٽڪس پروٽين (TanjilG_32352)، ۽ ٻه گلائسين سان مالا مال structural cell wall پروٽين (TanjilG_19701 ۽ TanjilG_19702). 83A:476 ۽ بورگين جي وچ ۾ 24 HPI (ڪل 16-38% DEG) ۽ منڊيلپ ۽ آبادي 22660 جي وچ ۾ 48 HPI (ڪل 14-20% DEG) تي ٽرانسڪرپٽوم جوابن ۾ هڪ نسبتاً وڌيڪ اوورليپ پڻ هو.
وين ڊاگرام جيڪو تنگ-پتين واري لوپين (NLL) لائينن ۾ مختلف طور تي ظاهر ڪيل جين (DEG) جو تعداد ڏيکاري ٿو جيڪو ڪوليٽوٽريچم لوپيني (پولينڊ جي ويرزنيس، 1999 ۾ لوپين فيلڊ مان حاصل ڪيل اسٽرين Col-08) سان انڪوليٽ ڪيو ويو آهي. تجزيو ڪيل NLL لائينون ھيون: 83A:476 (مزاحمتي، Lanr1 ايليل کڻندڙ)، بورگين (مزاحمتي، جينياتي پس منظر نامعلوم)، منڊيلپ (معمولي طور تي مزاحمتي، AnMan ايليل کڻندڙ) ۽ آبادي 22660 (تمام گهڻو حساس). مخفف hpi ويڪسينيشن کان پوءِ ڪلاڪن لاءِ آهي. گراف کي آسان ڪرڻ لاءِ صفر قدرن کي هٽايو ويو آهي.
6 hpi تي اوور ايڪسپريس ٿيل جينز جي سيٽ جو تجزيو ڪيننيڪل R جين ڊومينز جي موجودگي لاءِ ڪيو ويو (ضمني جدول S7). هن مطالعي ۾ صرف 83A:476 تي NBS-LRR ڊومينز سان ڪلاسيڪل بيماري مزاحمت جينز جي ٽرانسڪرپٽومي انڊڪشن ظاهر ڪئي وئي. هن سيٽ ۾ هڪ TIR-NBS-LRR جين (tanjilg_05042)، پنج CC-NBS-LRR جين (tanjilg_06165، tanjilg_06162، tanjilg_22773، tanjilg_22640، ۽ tanjilg_16162)، ۽ چار NBS-LR، Tanjilg_16162)، ۽ چار NBS-LRRE (tanjilg_16162) سان گڏ چار NBS-Lrr (tanjilg_16162) ۽ چار NBS-LRR (TANJILG_16162) شامل هئا. انهن سڀني جينز ۾ ڪيننيڪل ڊومينز محفوظ ترتيبن ۾ ترتيب ڏنل آهن. NBS-LRR ڊومين جينز کان علاوه، ڪيترائي RLL ڪائنس 6 hpi تي چالو ڪيا ويا، يعني هڪ بورگين (TanjilG_19877) ۾، ٻه منڊيلپ (TanjilG_07141 ۽ TanjilG_19877) ۾ ۽ آبادي 22660 (TanjilG_09014 ۽ TanjilG_10361) ۾ ۽ ٻه 83A 27:476 ۾.
سي. لوپيني (اسٽرين ڪول-08) سان انوڪيوليشن جي جواب ۾ نمايان طور تي تبديل ٿيل اظهار سان جين کي جين آنٽولوجي (GO) افزودگي تجزيو (ضمني جدول S8) جي تابع ڪيو ويو. سڀ کان وڌيڪ پيش ڪيل حياتياتي عمل جو اصطلاح "GO:0006952 دفاعي جواب" هو جيڪو 16 مان 6 (وقت × لائن) جي ميلاپ ۾ اعليٰ اهميت (P قدر < 0.001) سان ظاهر ٿيو (شڪل 2). سڀ کان وڌيڪ پيش ڪيل حياتياتي عمل جو اصطلاح "GO:0006952 دفاعي جواب" هو جيڪو 16 مان 6 (وقت × لائن) جي ميلاپ ۾ اعليٰ اهميت (P قدر < 0.001) سان ظاهر ٿيو (شڪل 2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 защитный ответный отвеловяко», из 16 (время × линия) комбинаций с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). سڀ کان وڌيڪ پيش ڪيل حياتياتي عمل جو اصطلاح 'GO:0006952 دفاعي جواب' هو، جيڪو 16 مان 6 (وقت × نسب) جي ميلاپ ۾ اعليٰ اهميت (P قدر < 0.001) (شڪل 2) سان ظاهر ٿيو.最常被过度代表的生物过程术语是“GO:0006952 防御反应”个中، 具有高显着性（P 值<0.001）（图2）. سڀ کان وڌيڪ نمائندگي ڪندڙ حياتياتي عمل جو اصطلاح "GO:0006952 دفاعي جواب" آهي، جيڪو 16 (时间×线) مجموعن مان 6 ۾ ظاهر ٿئي ٿو، جنهن جي وڏي اهميت آهي (P قدر < 0.001) (图2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 دفاعي جواب»، который появленным который появленным комбинаций (время × линия) с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). سڀ کان وڌيڪ پيش ڪيل حياتياتي عمل جو اصطلاح 'GO:0006952 ڊفينس ريسپانس' هو، جيڪو 16 مان 6 مجموعن (وقت × لائن) ۾ اعليٰ اهميت (P ويليو < 0.001) (شڪل 2) سان ظاهر ٿيو.هي اصطلاح 83A ۾ ٻن وقتي نقطن تي وڌيڪ نمائندگي ڪئي وئي: 476 ۽ بورگين (6 ۽ 24 hpi) ۽ منڊيلپ ۽ آبادي 22660 (ترتيب وار 12 ۽ 6 hpi) ۾ هڪ وقتي نقطي تي. هي هڪ متوقع نتيجو آهي، مزاحمتي لائينن جي اينٽي فنگل ردعمل کي اجاگر ڪري ٿو. ان کان علاوه، 83A:476 سي. لوپيني کي تيزيءَ سان آڪسائيڊيوٽو برسٽ سان لاڳاپيل جين کي "GO:0055114 ريڊوڪس عمل" جي اصطلاح سان نمائندگي ڪندي جواب ڏنو، هڪ مخصوص دفاعي ردعمل کي ظاهر ڪيو، جڏهن ته بورگين مخصوص دفاعي ردعمل ظاهر ڪيا، جيڪي 'GO' اصطلاح سان لاڳاپيل هئا. :0006950 دٻاءُ جو جواب". آبادي 22660 ثانوي ميٽابولائٽس سان لاڳاپيل افقي مزاحمتي ردعمل کي چالو ڪيو، اصطلاحن جي گهڻي تعداد کي اجاگر ڪيو "GO:0016104 ٽرائٽرپين بايو سنٿيسس جو عمل" ۽ "GO:0006722 ٽرائٽرپين ميٽابولزم جو عمل" (ٻئي اصطلاح جين جي ساڳئي سيٽ سان تعلق رکن ٿا)، GO اصطلاح جي افزودگي تجزيي جي نتيجن کي نظر ۾ رکندي، منڊيلپ رد عمل جي استحڪام بورگين ۽ آبادي 22660 جي وچ ۾ هئي. ان کان علاوه، شروعاتي رد عمل 83A:476 (6 hpi) ۽ دير سان رد عمل منڊيلپ ۽ آبادي 22660 ۾ اصطلاح GO:0015979 'فوٽو سنٿيسس' ۽ ٻيا لاڳاپيل حياتياتي عمل شامل آهن.
اينٿراڪس لوپائن (1999 ۾ ويرزينيس، پولينڊ ۾ لوپائن جي ميدانن مان حاصل ڪيل ڪول-08 اسٽرين) سان انوڪيوليشن ڪيل تنگ-پتي واري لوپائن (NLL) جي ٽرانسڪرپٽومي جوابن دوران مختلف طور تي ظاهر ڪيل جين جي تشريح ۾ چونڊيل بايو پروسيس جين آنٽولوجي اصطلاحون تمام گهڻيون آهن. تجزيو ڪيل NLL لائينون هيون: 83A:476 (مزاحمتي، هوموزائگس لين آر 1 ايليل کڻندڙ)، بورگين (مزاحمتي، نامعلوم جينياتي پس منظر)، منڊيلپ (معمولي طور تي مزاحمتي، هوموزائگس اين مين ايليل کڻندڙ) ۽ آبادي 22660 (حساس).
ڇاڪاڻ ته هن مطالعي جو مقصد اينٿراڪنوز مزاحمت ۾ حصو وٺندڙ جين جي سڃاڻپ ڪرڻ هو، GO "GO: 0006952 دفاعي جواب" ۽ "GO: 0055114 ريڊوڪس عمل" جي اصطلاحن کي مقرر ڪيل جين جو تجزيو ڪٽ آف سان ڪيو ويو ڇاڪاڻ ته بنيادي مطلب ≥ 30 گهٽ ۾ گهٽ هڪ لائن سان. × وقت ۾ پوائنٽ log2 (فولڊ تبديلي) جي شمارياتي طور تي اهم قدرن کي گڏ ڪندي. انهن معيارن تي پورو لهندڙ جين جو تعداد GO:0006952 لاءِ 65 ۽ GO:0055114 لاءِ 524 هو.
83A:476 ٻن DEG چوٽين کي ظاهر ڪيو جيڪي GO:0006952 جي اصطلاح سان بيان ڪيون ويون آهن، پهرين 6 جين في انچ (64 جين، مٿي ۽ هيٺ ريگيوليشن) تي ۽ ٻي 24 جين في انچ (15 جين، صرف مٿي ريگيوليشن) تي. بورگين اهو پڻ ڏيکاريو ته GO:0006952 ساڳئي وقت نقطي تي چوٽي تي پهتو، پر گهٽ DEG (11 ۽ 8) ۽ ترجيحي چالو ڪرڻ سان. منڊيلوپ 12 ۽ 48 HPI تي GO:0006952 جون ٻه چوٽيون ڏيکاريون، ٻئي 12 جين کڻي رهيا هئا (پهرين چالو ڪندڙ جين سان، ۽ ٻيو صرف دٻائيندڙ جين سان)، جڏهن ته 6 HPI (13 جين) تي 22660 آبادي ۾ واڌ جي چوٽي جي ضابطي جي وڌيڪ برتري هئي. اهو نوٽ ڪرڻ گهرجي ته انهن چوٽين ۾ GO:0006952 DEG جي 96.4٪ ساڳئي قسم جي ردعمل (مٿي يا هيٺ) هئي، جيڪا شامل جين جي تعداد ۾ فرق جي باوجود دفاعي ردعمل ۾ هڪ اهم اوورليپ کي ظاهر ڪري ٿي. GO:0006952 اصطلاح سان لاڳاپيل تسلسل جو سڀ کان وڏو گروپ اسٽارويشن اسٽريس-ايسوسيئيٽڊ ميسيج پروٽين 22 (SAM22-جهڙو) کي انڪوڊ ڪري ٿو، جيڪو ڪلاس 10 پيٿوجينيسس-ايسوسيئيٽڊ پروٽين (PR-10) پروٽين ڪليڊ ۽ ڪور پروٽين ليٽڪس سان تعلق رکي ٿو. ساڳيو (MLP-جهڙو) پروٽين) پروٽين (شڪل 3). ٻئي گروپ اظهار جي نوعيت ۽ جواب جي هدايت ۾ مختلف هئا. SAM22-جهڙو پروٽين کي انڪوڊ ڪندڙ جين شروعاتي وقت جي پوائنٽن (6 يا 12 hpi) تي مسلسل ۽ اهم انڊڪشن ڏيکاريا ۽ تجربي جي آخر ۾ عام طور تي غير جوابده هئا (48 hpi)، جڏهن ته MLP-جهڙو پروٽين 6 hpi تي هم آهنگي ڏيکاري. hpi. 83A:476 ۽ منڊيلپ 48 hp/in تي، تقريبن سڀئي ٻيا ڊيٽا پوائنٽ غير جوابده هئا. ان کان علاوه، SAM22-جهڙي پروٽين جين جي اظهار جي پروفائلز ۾ فرق اينٿراڪنوز مزاحمت ۾ مشاهدو ڪيل متغير جي پٺيان آيو، ڇاڪاڻ ته وڌيڪ مزاحمتي لائينن ۾ وڌيڪ وقت پوائنٽ هئا جيڪي انهن جين کي وڌيڪ حساس جين جي ڀيٽ ۾ خاص طور تي متاثر ڪندا هئا. هڪ ٻيو LlR18A/B-جهڙو PR-10 جين SAM22-جهڙي پروٽين جين سان تمام گهڻو ملندڙ جلندڙ اظهار جو نمونو ڏيکاريو.
حياتياتي عمل جي اصطلاح "GO:0006952 ڊفينس ريسپانس" جا مکيه جزا ۽ Lanr1 ۽ AnMan ايلليز جي اميدوار جين جي اظهار جا نمونا سڃاڻپ ڪيا ويا. Log2 اسڪيل انوڪوليٽيڊ (Colletotrichum lupini، strain Col-08، lupine فيلڊز مان حاصل ڪيل، Wizhenica، Poland، 1999) ۽ ڪنٽرول (sham-inoculated) ٻوٽن جي وچ ۾ ساڳئي وقت تي log2 قدرن (فولڊ تبديلي) جي نمائندگي ڪري ٿو. هيٺ ڏنل تنگ پتي جي لوپائن لائينن جو تجزيو ڪيو ويو: 83A:476 (مزاحمتي، هوموزائگس Lanr1 ايللي کڻندڙ)، بورگين (مزاحمتي، جينياتي پس منظر نامعلوم)، منڊيلپ (معمولي طور تي مزاحمتي، هوموزائگس اينMan ايللي کڻندڙ)، ۽ آبادي 22660 (حساس).
ان کان علاوه، RNA-seq اميدوار جينز Lanr1 (TanjilG_05042) ۽ AnMan (TanjilG_12861) جي اظهار جي پروفائلز جو جائزو ورتو ويو (شڪل 3). TanjilG_05042 جين صرف پهرين ٽائيم پوائنٽ (6 hpi) تي 83A:476 تي هڪ اهم ردعمل (فعاليت) ڏيکاريو، جڏهن ته TanjilG_12861 صرف ٻن ٽائيم پوائنٽس تي منڊيلوپ ۾ اهم هو: 6 hpi (ڊائون ريگيوليشن) ۽ 24 hpi (6 hpi) سان.). ترتيب ڏيڻ وارو)).
اصطلاح GO:0055114 "ريڊوڪس پروسيس" ۾ سڀ کان وڌيڪ ظاهر ٿيل جين سائٽو ڪروم P450 پروٽين ۽ پيرو آڪسائيڊس کي انڪوڊ ڪندڙ جين هئا (شڪل 4). 83A:476 کان 6 HPI تي الڳ ٿيل نمونن لاءِ، وڌ ۾ وڌ يا گهٽ ۾ گهٽ log2 (فولڊ تبديلي) قدر (86.6٪ جينز لاءِ) عام طور تي انوڪيوليٽيڊ ۽ ڪنٽرول پلانٽس جي وچ ۾ ڏٺا ويا، هن جينوٽائپ جي انوڪيوليشن جنس لاءِ اعليٰ ردعمل کي اجاگر ڪيو. 83A:476 سڀ کان اهم GO ڏيکاريو: 0055114 DEG 6 hpi (503 جينز) تي، جڏهن ته باقي لائينون 48 hpi تي (بوريگين، 31 جينز؛ منڊيلپ، 85 جينز؛ ۽ آبادي 22660، 78 جينز)). GO:0055114 خاندان جي گھڻن جين ۾، ويڪسينيشن لاءِ ٻن قسمن جا ردعمل (چالو ڪرڻ ۽ روڪڻ) ڏٺا ويا. دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، منڊيلوپ ۾ 48 hp تي GO: 0055114 اصطلاح لاءِ سڃاڻپ ڪيل DEGs جو 97.6٪ تائين. اهي مشاهدا اهو ظاهر ڪن ٿا ته، خاص طور تي ننڍي پيماني جي باوجود (يعني، تبديل ٿيل ريڊوڪس جينز جو تعداد، 85 بمقابله 503)، منڊيلوپ جي اينٿراڪنوز ڏانهن دير سان ٽرانسڪرپٽومي جوابن جو نمونو 83A:476 جي شروعاتي جواب سان ملندڙ جلندڙ آهي. بورگين ۽ آبادي 22660 ۾، هي ڪنورجن ترتيب وار 51.6٪ ۽ 75.6٪ تي گهٽ آهي.
حياتياتي عمل "GO:0055114 ريڊوڪس عمل" جي اصطلاح جي مکيه حصن جي اظهار جا نمونا ظاهر ڪيا ويا. Log2 اسڪيل انوڪوليٽيڊ (Colletotrichum lupini، strain Col-08، lupine fields مان حاصل ڪيل، Wizhenica، Poland، 1999) ۽ ڪنٽرول (sham-inoculated) ٻوٽن جي وچ ۾ ساڳئي وقت تي log2 قدرن (fold change) جي نمائندگي ڪري ٿو. هيٺ ڏنل تنگ پتي جي lupine لائينن جو تجزيو ڪيو ويو: 83A:476 (مزاحمتي، homozygous Lanr1 allele کڻندڙ)، Boregine (مزاحمتي، جينياتي پس منظر نامعلوم)، Mandelup (معمولي طور تي مزاحمتي، homozygous AnMan allele کڻندڙ)، ۽ آبادي 22660 (حساس).
83A:476 سي. لوپيني (اسٽين ڪول-08) سان انوڪيوليشن جي ٽرانسڪرپٽوميڪ جوابن ۾ GO:0015979 "فوٽو سنٿيسس" ۽ ٻين لاڳاپيل حياتياتي عملن (شڪل 5) سان منسوب جين جي هم آهنگ خاموشي پڻ شامل هئي. هن GO:0015979 DEG سيٽ ۾ 105 جين شامل هئا جيڪي 83A:476 تي 6 hpi تي خاص طور تي دٻايو ويو هو. هن سب سيٽ ۾، 22660 آبادي ۾ 37 جين کي 48 HPI تي ۽ 35 کي ساڳئي وقت تي منڊيلپ ۾ پڻ گهٽايو ويو، جنهن ۾ ٻنهي جينوٽائپس لاءِ عام 19 DEG شامل آهن. اصطلاح GO: 0015979 سان لاڳاپيل ڪو به DEG ڪنهن به ميلاپ ۾ خاص طور تي چالو نه ڪيو ويو (لائن x وقت).
حياتياتي عمل "GO:0015979 فوٽو سنٿيسس" جي اصطلاح جي مکيه حصن جي اظهار جا نمونا ظاهر ڪيا ويا. Log2 اسڪيل انوڪوليٽيڊ (Colletotrichum lupini، strain Col-08، lupine fields مان حاصل ڪيل، Wizhenica، Poland، 1999) ۽ ڪنٽرول (sham-inoculated) ٻوٽن جي وچ ۾ ساڳئي وقت تي log2 قدرن (fold change) جي نمائندگي ڪري ٿو. هيٺ ڏنل تنگ پتي جي lupine لائينن جو تجزيو ڪيو ويو: 83A:476 (مزاحمتي، homozygous Lanr1 allele کڻندڙ)، Boregine (مزاحمتي، جينياتي پس منظر نامعلوم)، Mandelup (معمولي طور تي مزاحمتي، homozygous AnMan allele کڻندڙ)، ۽ آبادي 22660 (حساس).
فرق جي اظهار جي تجزيي جي نتيجن جي بنياد تي ۽ ممڪن طور تي پيٿوجينڪ فنگس جي خلاف دفاعي جوابن ۾ شامل، ستن جينز جو هي سيٽ ريئل ٽائيم پي سي آر (سپليمينٽري ٽيبل S9) ذريعي اظهار جي پروفائلز جي مقدار جي لاءِ چونڊيو ويو.
ڪنٽرول (مِمِڪ) ٻوٽن جي مقابلي ۾ سڀني مطالعي ڪيل لائينن ۽ ٽائيم پوائنٽس ۾ پوٽيٽو پروٽين جين TanjilG_10657 خاص طور تي متاثر ٿيو (ضمني جدول S10، S11). ان کان علاوه، TanjilG_10657 جي ايڪسپريشن پروفائل سڀني لائينن لاءِ تجربي جي دوران وڌندڙ رجحان ڏيکاريو. آبادي 22660 114-گنا ايڪٽيويشن ۽ 24 HPI تي سڀ کان وڌيڪ نسبتي ايڪسپريشن ليول (4.4 ± 0.4) سان TanjilG_10657 جي انوڪيوليشن لاءِ سڀ کان وڌيڪ حساسيت ڏيکاري (شڪل 6a). PR10 LlR18A پروٽين جين TanjilG_27015 پڻ سڀني لائينن ۽ ٽائيم پوائنٽس ۾ ايڪٽيويشن ڏيکاريو، گھڻن ڊيٽا پوائنٽس تي شمارياتي اهميت سان (شڪل 6b). TanjilG_10657 وانگر، TanjilG_27015 جي سڀ کان وڌيڪ نسبتي اظهار جي سطح 22660 انوڪوليٽ ٿيل آبادي ۾ 24 HPI (19.5 ± 2.4) تي ڏٺي وئي. تيزابي اينڊوچيٽينيس جين TanjilG_04706 سڀني لائينن ۽ سڀني ٽائيم پوائنٽس ۾ خاص طور تي اپريگيولڊ ڪيو ويو سواءِ بورگين 6 hpi (شڪل 6c) جي. اهو پهرين ٽائيم پوائنٽ (6 HPI) تي 83A:476 (10.5 ڀيرا) تي مضبوطي سان متاثر ٿيو ۽ ٻين لائينن ۾ اعتدال سان وڌيو (6.6-7.5 ڀيرا). تجربي دوران، TanjilG_04706 جو اظهار 83A:476 ۽ بورگين ۾ ساڳئي سطح تي رهيو، جڏهن ته منڊيلپ ۽ آبادي 22660 ۾ اهو خاص طور تي وڌيو، نسبتا اعلي قدرن تائين پهچي ويو (ترتيب وار 5.9 ± 1.5 ۽ 6.2 ± 1.5). اينڊوگلوڪن-1,3-β-گلوڪوسيڊيس جهڙو جين TanjilG_23384 پهرين ٻن ٽائيم پوائنٽس (6 ۽ 12 hpi) تي سڀني لائينن ۾ وڌيڪ چالو ڏيکاريو سواءِ آبادي 22660 (شڪل 6d). TanjilG_23384 جي سڀ کان وڌيڪ نسبتي اظهار جي سطح منڊيلپ (2.7 ± 0.3) ۽ 83A:476 (1.5 ± 0.1) ۾ ٻئي ٽائيم پوائنٽ (12 hpi) تي ڏٺي وئي. 24 HPI تي، TanjilG_23384 اظهار سڀني مطالعي ڪيل لائينن ۾ نسبتاً گهٽ هو (0.04 ± 0.009 کان 0.44 ± 0.12 تائين).
چونڊيل جينز (ag) جي اظهار جي پروفائلز جيڪي مقداري PCR پاران ظاهر ڪيا ويا آهن. انگ 6، 12 ۽ 24 ويڪسينيشن کان پوءِ ڪلاڪن جي نمائندگي ڪن ٿا. LanDExH7 ۽ LanTUB6 جينز کي نارملائيزيشن لاءِ استعمال ڪيو ويو ۽ LanTUB6 کي انٽر-سيريز ڪيليبريشن لاءِ استعمال ڪيو ويو. غلطي بار ٽن حياتياتي نقلن جي بنياد تي معياري انحراف جي نمائندگي ڪن ٿا، جن مان هر هڪ ٽن ٽيڪنيڪل نقلن جو سراسري آهي. انوڪيوليشن (ڪوليٽوٽريچم لوپيني، اسٽرين ڪول-08، جيڪو 1999 ۾ ويرزينيڪا، پولينڊ ۾ لوپن فيلڊ مان حاصل ڪيو ويو) ۽ ڪنٽرول (مڪ-انوڪيوليشن) ٻوٽن جي وچ ۾ اظهار جي سطحن ۾ فرق جي شمارياتي اهميت ڊيٽا پوائنٽس جي مٿان نشان لڳل آهي (*P ويليو < 0.05، **P ويليو ≤ 0.01، ***P ويليو ≤ 0.001). انوڪيوليشن (ڪوليٽوٽريچم لوپيني، اسٽرين ڪول-08، جيڪو 1999 ۾ ويرزينيڪا، پولينڊ ۾ لوپن فيلڊ مان حاصل ڪيو ويو) ۽ ڪنٽرول (مڪ-انوڪيوليشن) ٻوٽن جي وچ ۾ اظهار جي سطحن ۾ فرق جي شمارياتي اهميت ڊيٽا پوائنٽس جي مٿان نشان لڳل آهي (*P ويليو < 0.05، **P ويليو ≤ 0.01، ***P ويليو ≤ 0.001). STATISTICHESKAIA значимость различий в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамм Col-08, получен 9 получен 9 в Верженице, Польша) и контрольными (ложно инокулированными) растениями отмечена над точками данных (*значение P <0,01,05,015 *** خبر پي ≤ 0,001). انگ اکر (Colletotrichum lupini، strain Col-08، جيڪو 1999 ۾ ويرزينيس، پولينڊ ۾ هڪ لوپائن فيلڊ مان حاصل ڪيو ويو) ۽ ڪنٽرول (شيم-انوڪوليٽڊ) ٻوٽن جي وچ ۾ اظهار جي سطحن ۾ شمارياتي طور تي اهم فرق ڊيٽا پوائنٽس (*P ويليو < 0.05، **P- ويليو ≤ 0.01، ***P- ويليو ≤ 0.001) جي مٿان نوٽ ڪيا ويا آهن.接种 (Colletotrichum) Lupini، Col-08株، 1999年从波兰Wierzenica的羽扇豆田获得和对照（模拟接种）植物之间表达水平差异的统计学显着性标记在数据繀） 0.05، **P 值≤ 0.01، ***P 值≤ 0.001).接种 （colletotrichum lupini ， color-08 株 ， 1999 年 波兰 波兰 wierzenica 的 羽扇 获得） 和 对照（接片接片水平 差异 的统计学 显着性 标记 数据点 上方*p 值 <0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001). Статистически значимые различия в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамм Col-08, полученповлейский Верженице, Польша, в 1999 г.) и контрольными (ложно инокулированными) растениями отмечены над точками данных (* зечками данных,* з50** P-значение ≤ 0,01, ***P-значение ≤ 0,001). انگ اکر (Colletotrichum lupini، strain Col-08، جيڪو 1999 ۾ Verzhenice، Poland ۾ lupine fields مان حاصل ڪيو ويو) ۽ ڪنٽرول (sham-inoculated) ٻوٽن جي وچ ۾ اظهار جي سطحن ۾ شمارياتي طور تي اهم فرق ڊيٽا پوائنٽس (*P value < 0.05، **P-value ≤ 0.01، ***P-value ≤ 0.001) جي مٿان نوٽ ڪيا ويا آهن.تجزيو ڪيل اين ايل ايل لائينون ھيون: 83A:476 (مزاحمتي، هوموزائگس لين آر 1 ايليل کڻندڙ)، منڊيلپ (معمولي طور تي مزاحمتي، هوموزائگس اين مين ايليل کڻندڙ)، بورگين (مزاحمتي، نامعلوم جينياتي پس منظر) ۽ آبادي 22660 (حساس).
Lanr1 لوڪوس تي اميدوار جين TanjilG_05042 RNA-seq مطالعي مان حاصل ڪيل پروفائلز کان هڪ واضح طور تي مختلف اظهار جو نمونو ڏيکاريو (شڪل 6e). هن جين جي اهم چالو ٿيڻ منڊيلپ ۽ 22660 آبادي ۾ ڏٺو ويو (ترتيب سان 39.7 ۽ 11.7 ڀيرا تائين)، جنهن جي نتيجي ۾ نسبتاً وڌيڪ اظهار جي سطح (ترتيب سان 1.4 ± 0.14 ۽ 7.2 ± 1.3 تائين) هئي. 83A:476 پڻ تنجيلپ_05042 جين جي ڪجهه اپ ريگيوليشن (3.8 ڀيرا تائين) کي ظاهر ڪيو، جڏهن ته، حاصل ڪيل نسبتي اظهار جي سطح (0.044 ± 0.002) منڊيلپ ۽ 22660 آبادي ۾ مشاهدو ڪيل کان 30 ڀيرا گهٽ هئي. qPCR پاران تجزيو ڪيل نموني ويڪسين ٿيل (ڪنٽرول) مختلف قسمن ۾ جينوٽائپس جي وچ ۾ اظهار جي سطحن ۾ اهم فرق ڏيکاريا ويا، آبادي 22660 ۽ 83A:476 جي وچ ۾ 58 گنا فرق تائين پهچي ويو، انهي سان گڏ آبادي 22660 ۽ 22660 جي وچ ۾. بورگين ۽ منڊلپ جي وچ ۾ ٻه ڀيرا فرق حاصل ڪيو ويو.
اين مين لوڪس، ٽينجل جي 12861 تي اميدوار جين، 83A:476 ۾ ويڪسينيشن جي جواب ۾ چالو ڪيو ويو ۽ منڊيلپ، 22660 آبادي ۾ غير جانبدار هو، ۽ بورگين ۾ گهٽجي ويو (شڪل 6f). ٽينجل جي 12861 جين جو لاڳاپو اظهار انوڪيوليشن 83A: 476 (0.14±0.01) ۾ سڀ کان وڌيڪ هو. 17.4 kDa ڪلاس I هيٽ شاڪ پروٽين جين ٽينجل جي 05080 HSP17.4 سڀني مطالعي ڪيل اسٽرين ۽ وقت جي پوائنٽن ۾ گهٽ لاڳاپو اظهار جي سطح ڏيکاري (شڪل 6g). 22660 آبادي ۾ سڀ کان وڌيڪ قدر 24 HPI تي ڏٺو ويو (0.14 ± 0.02، ويڪسينيشن جي جواب ۾ اٺ ڀيرا واڌ).
جين ايڪسپريشن پروفائلز جي مقابلي (شڪل 7) تانجل جي 10657 ۽ چئن ٻين جينز جي وچ ۾ هڪ اعليٰ لاڳاپو ظاهر ڪيو: تانجل جي 27015 (r = 0.89)، تانجل جي 05080 (r = 0.85)، تانجل جي 05042 (r = 0.80)، ۽ تانجل جي 04706 (r = 0.79). اهڙا نتيجا دفاعي جوابن دوران انهن جينز جي گڏيل ضابطي جي نشاندهي ڪري سگهن ٿا. تانجل جي 12861 ۽ تانجل جي 23384 جينز ٻين جينز جي مقابلي ۾ گهٽ پيئرسن ڪوليريشن ڪوفيشيٽ قدرن (ترتيب وار 0.08 کان 0.43 ۽ -0.19 کان 0.28 تائين) سان مختلف اظهار پروفائلز ڏيکاريا.
مقداري پي سي آر استعمال ڪندي جين ايڪسپريشن پروفائلز جي وچ ۾ لاڳاپا معلوم ڪيا ويا. هيٺ ڏنل تنگ پتي واري لوپائن لائينن جو تجزيو ڪيو ويو: 83A:476 (مزاحمتي، هوموزائگس لين آر 1 ايليل کڻندڙ)، منڊيلپ (معمولي طور تي مزاحمتي، هوموزائگس اين مين ايليل کڻندڙ)، بورگين (مزاحمتي، جينياتي پس منظر نامعلوم)، ۽ آبادي 22660 (حساس). ٽي ٽائيم پوائنٽس ڳڻيا ويا (6، 12 ۽ 24 ڪلاڪ انوڪيوليشن کان پوءِ)، جنهن ۾ انوڪيوليشن (ڪوليٽوٽريچم لوپيني، اسٽرين ڪول-08، 1999 ۾ ويرزينيس، پولينڊ ۾ لوپائن فيلڊز مان حاصل ڪيل) ۽ ڪنٽرول (شيم-انوڪيوليشن) ٻوٽا شامل آهن. پيئرسن جي رابطي جي کوٽائي جي قدر کي ڏيکاري ٿو.
6 هارس پاور في انچ تي حاصل ڪيل ڊيٽا جي بنياد تي، WGCNA 9981 DEG تي ڪيو ويو جيڪو ابتدائي دفاعي جوابن تي ڌيان ڏيڻ لاءِ انوڪوليٽڊ ۽ ڪنٽرول پلانٽس جي مقابلي ذريعي سڃاڻپ ڪيو ويو (ضمني جدول S12). جينوٽائپس ۽ تجرباتي مختلف قسمن جي وچ ۾ باهمي (مثبت يا منفي) اظهار پروفائلز سان گڏ 22 جين ماڊلز (ڪلسٽر) مليا. سراسري طور تي، جين جي اظهار جي سطح 83A:476 > منڊيلپ > بورگين > آبادي 22660 جي ترتيب ۾ گهٽجي رهي هئي (ٻنهي قسمن ۾، بهرحال، هي رجحان ڪنٽرول پلانٽس ۾ وڌيڪ مضبوط هو). سراسري طور تي، جين جي اظهار جي سطح 83A:476 > منڊيلپ > بورگين > آبادي 22660 جي ترتيب ۾ گهٽجي رهي هئي (ٻنهي قسمن ۾، بهرحال، هي رجحان ڪنٽرول پلانٽس ۾ وڌيڪ مضبوط هو). В среднем уровни экспрессии генов снижались в порядке 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 у контрольных растений). سراسري طور تي، جين جي اظهار جي سطح 83A:476 > منڊيلپ > بورگين > آبادي 22660 جي ترتيب ۾ گهٽجي وئي (ٻنهي قسمن ۾، بهرحال، هي رجحان ڪنٽرول پلانٽس ۾ وڌيڪ مضبوط هو).平均而言，基因表达水平按83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660的顺序下降（然而،在两种变体中،这种趋势在对照植物中更强.平均 而 言 ， 基因 水平 按 83a: 476> mandelup> boregine> آبادي 22660中 更) .............. В среднем уровни экспрессии генов снижались в ряду 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 контрольных растений). سراسري طور تي، سيريز 83A:476 > منڊيلپ > بورگين > آبادي 22660 ۾ جين جي اظهار جي سطح گهٽجي وئي (بهرحال، ٻنهي قسمن ۾، هي رجحان ڪنٽرول پلانٽس ۾ وڌيڪ مضبوط هو).ويڪسينيشن جي نتيجي ۾ جين جي اظهار جي اپ ريگيوليشن ٿي، خاص طور تي ماڊيول 18، 19، 14، 6 ۽ 1 ۾ (اثر جي نزولي ترتيب ۾)، منفي ضابطو (مثال طور ماڊيول 9 ۽ 20) يا غير جانبدار اثرات سان (مثال طور ماڊيول 11، 22، 8 ۽ 13). GO اصطلاح افزودگي تجزيو (ضمني جدول S13) وڌ ۾ وڌ چالو ڪرڻ سان انوڪيوليڊ ماڊل (18) لاءِ "GO: 0006952 حفاظتي جواب" ظاهر ڪيو، جنهن ۾ qPCR (TanjilG_04706، TanjilG_23384، TanjilG_10657 ۽ TanjilG_27015) پاران تجزيو ڪيل جين شامل آهن، انهي سان گڏ ڪيترائي انوڪيوليڊ سڀ کان وڌيڪ دٻايل فوٽو سنٿيسس ماڊل (9). ماڊيول 18 ڪنسنٽريٽر (شڪل 8) کي TanjilG_26536 جين طور سڃاتو ويو جيڪو PR-10 جهڙي LlR18B پروٽين کي انڪوڊ ڪري رهيو هو، ۽ ماڊيول 9 ڪنسنٽريٽر کي TanjilG_28955 جين طور سڃاتو ويو جيڪو فوٽو سسٽم II PsbQ پروٽين کي انڪوڊ ڪري رهيو هو. هڪ اميدوار اينٿراڪنوز مزاحمتي جين Lanr1، TanjilG_05042، ماڊيول 22 (شڪل 9) ۾ مليو ۽ "GO:0044260 سيلولر ميڪرو ماليڪيولر ميٽابولڪ عمل" ۽ "GO:0006355 ٽرانسڪرپشنل ريگيوليشن، ڊي اين اي ٽيمپليٽنگ" جي اصطلاحن سان لاڳاپيل آهي جيڪو TanjilG_01212 حب کڻندو آهي. جين گرمي جي دٻاءُ ٽرانسڪرپشن فيڪٽر A-4a (HSFA4a) کي انڪوڊ ڪري ٿو.
وڌيڪ نمائندگي ڪندڙ حياتياتي عمل جي اصطلاحن "GO: 0006952 دفاعي جوابن" سان ماڊلز جي جين ڪو-اظهار جو وزندار نيٽ ورڪ تجزيو. qPCR (TanjilG_04706، TanjilG_23384، TanjilG_10657 ۽ TanjilG_27015) پاران تجزيو ڪيل چار جين کي اجاگر ڪرڻ لاءِ ليگيشن کي آسان بڻايو ويو.
هڪ ماڊيول جي جين ڪو-ايپريشن جو وزندار نيٽ ورڪ تجزيو جنهن ۾ هڪ وڌيڪ نمائندگي ڪيل حياتياتي عمل جي اصطلاح "GO: 0006355: ٽرانسڪرپشنل ريگيوليشن، ڊي اين اي ٽيمپليٽنگ" ۽ هڪ اميدوار اينٿراڪنوز مزاحمتي جين Lanr1 TanjilG_05042 کڻي وڃي ٿي. TanjilG_05042 جين ۽ مرڪزي TanjilG_01212 جين کي الڳ ڪرڻ لاءِ ليگيشن کي آسان بڻايو ويو.
آسٽريليا ۾ گڏ ڪيل اينٿراڪنوز مزاحمت جي اسڪريننگ مان ظاهر ٿيو ته شروعاتي طور تي جاري ڪيل گھڻا قسم حساس هئا؛ ڪاليا، ڪورومپ ۽ منڊيلپ کي وچولي مزاحمتي طور بيان ڪيو ويو آهي، جڏهن ته وونگا، تنجيل ۽ 83A:476 کي انتهائي مزاحمتي طور بيان ڪيو ويو آهي26,27,31. ۾ ساڳيو مزاحمتي ايليل هو، جنهن کي Lanr1 نامزد ڪيو ويو، ۽ ڪورومپ ۽ منڊيلپ ۾ هڪ مختلف ايليل هو، جنهن کي AnMan10, 26, 39 نامزد ڪيو ويو، جڏهن ته ڪاليا هڪ مختلف ايليل تي گذريو.، Lanr2. جرمني ۾ اينٿراڪنوز مزاحمت جي اسڪريننگ جي نتيجي ۾ هڪ مزاحمتي لائن Bo7212 جي سڃاڻپ ٿي جنهن ۾ Lanr1 کان سواءِ هڪ اميدوار ايليل هو، جنهن کي LanrBo36 نامزد ڪيو ويو.
اسان جي مطالعي مان آزمائشي جرم پلازم ۾ Lanr1 ايليل جي تمام گهٽ فريڪوئنسي (تقريبن 6٪) ظاهر ٿي. هي مشاهدو Anseq3 ۽ Anseq4 مارڪرز استعمال ڪندي اوڀر يورپي جرم پلازم جي اسڪريننگ جي نتيجن سان مطابقت رکي ٿو، جنهن ڏيکاريو ته Lanr1 ايليل صرف ٻن بيلاروسي لائينن ۾ موجود آهي. اهو مشورو ڏئي ٿو ته Lanr1 ايليل اڃا تائين مقامي نسل جي پروگرامن پاران وڏي پيماني تي استعمال نه ڪيو ويو آهي، آسٽريليا جي برعڪس، جتي اهو مارڪر جي مدد سان نسل جي لاءِ اهم ايليلز مان هڪ آهي. اهو آسٽريليا جي رپورٽ جي مقابلي ۾ يورپي فيلڊ حالتن ۾ Lanr1 ايليل پاران مهيا ڪيل مزاحمت جي گهٽ سطح جي ڪري ٿي سگهي ٿو. ان کان علاوه، آسٽريليا ۾ وڌيڪ برسات وارن علائقن ۾ اينٿراڪنوز جي مطالعي مان ظاهر ٿيو آهي ته Lanr1 ايليل پاران وچولي مزاحمتي ردعمل موسمي حالتن ۾ اثرائتو نه ٿي سگهن ٿا جيڪي پيٿوجن جي واڌ ۽ تيز ترقي جي حق ۾ آهن19,42. حقيقت ۾، موجوده مطالعي ۾، اينٿراڪنوز جون ڪجهه علامتون Lanr1 ايليل کڻندڙ جينوٽائپس ۾ پڻ ڏٺيون ويون، اهو مشورو ڏئي ٿو ته مزاحمت C. lupini جي ترقي لاءِ بهترين حالتن ۾ غائب ٿي سگهي ٿي. ان کان علاوه، Anseq3 ۽ Anseq4 مارڪرز جي موجودگي جي غلط مثبت تشريحون، جيڪي Lanr1 لوڪس کان تقريبن 1 سينٽي ميٽر آهن، ممڪن آهن 28,30,43 .
اسان جي مطالعي مان ظاهر ٿيو ته 83A:476، Lanr1 ايليل کڻي، پهرين تجزيي واري وقت جي نقطي (6 hpi) تي وڏي پيماني تي ٽرانسڪرپٽومي ريپروگرامنگ سان C. lupini انووليشن جو جواب ڏنو، جڏهن ته منڊيلپ ۾، AnMan ايليل کڻي، ٽرانسڪرپٽوميڪ ردعمل گهڻو بعد ۾ ڏٺا ويا. (24 کان 48 hp تائين). دفاعي ردعمل ۾ اهي وقتي تبديليون بيماري جي علامتن ۾ فرق سان لاڳاپيل آهن، مزاحمت جي ڪامياب ردعمل لاءِ ابتدائي پيٿوجن جي سڃاڻپ جي اهميت کي اجاگر ڪن ٿيون. ٻوٽي جي ٽشو کي متاثر ڪرڻ لاءِ، اينٿراڪس اسپورس کي ميزبان جي مٿاڇري تي ڪيترن ئي ترقياتي مرحلن مان گذرڻو پوندو، جنهن ۾ انڪروميشن، سيل ڊويزن، ۽ ايپريسوريم جي ٺهڻ شامل آهن. هڪ اپينڊيج هڪ متاثر ٿيندڙ ڍانچي آهي جيڪو ميزبان جي مٿاڇري سان ڳنڍيل آهي ۽ ميزبان ٽشوز ۾ دخول کي آسان بڻائي ٿو. اهڙيءَ طرح، مٽر جي عرق ۾ C. gloeosporioides جي اسپورس 75-90 منٽن جي انڪيوبيشن کان پوءِ نيوڪليس جي پهرين ڊويزن، 90-120 منٽن کان پوءِ جراثيم ٽيوب جي ٺهڻ، ۽ 4 ڪلاڪ 45 کان پوءِ دٻائڻ ڏيکاريو. مينگو سي. گلوئسپوريوائيڊس 3 ڪلاڪن جي انڪيوبيشن کان پوءِ 40 سيڪڙو کان وڌيڪ ڪونڊيئل جراثيم ۽ 4 ڪلاڪن کان پوءِ ايپريسرز جي ٺهڻ ۾ تقريبن 20 سيڪڙو واڌ ڏيکاري. سي. گلوئسپوريوائيڊس جي وائرلينس سان لاڳاپيل CAP20 جين 4 ڪلاڪ 46 منٽن کان پوءِ CAP20 پروٽين جي اعليٰ ڪنسنٽريشن سان ايپوفائيٽ ٺاهڻ واري ڪونڊيا ۾ ٽرانسڪرپشنل سرگرمي ڏيکاري. ساڳئي طرح، سي. ٽرائي فولي ۾ ميلانين بايو سنٿيسس جين جي سرگرمي 2 ڪلاڪن جي انڪيوبيشن دوران پيدا ٿي ۽ ان کان پوءِ 1 ڪلاڪ کان پوءِ ايپريسوريم جي ٺهڻ جو سبب بڻي. پتي جي ٽشوز جي مطالعي مان ظاهر ٿيو آهي ته سي. ايڪوٽيٽم سان انوڪيل اسٽرابيري ۾ پهريون دٻاءُ 8 hpi تي هوندو آهي، جڏهن ته سي. ڪوڪوڊس سان انوڪيل ٽماٽن ۾ 4 hpi48,49 تي پهريون دٻاءُ هوندو آهي. ڪوليٽوٽريچم ايس پي پي جي وقت جي پيماني سان وڏي حد تائين مطابقت رکي ٿو. متعدي عمل. 83A:476 تي تيز دفاعي جواب هن لائن ۾ ٻوٽي جي مزاحمت ۽ اثر ڪندڙ-ٽريگرڊ اميونٽي (ETI) جينز جي شموليت جو اشارو ڏين ٿا، جڏهن ته منڊيلپ جا دير سان جواب مائڪرو-ايسوسيئيٽڊ ماليڪيولر پيٽرن-ٽريگرڊ اميونٽي (MTI) مفروضي 50 جي حمايت ڪن ٿا. 83A: 476 ۽ منڊيلپ جا شروعاتي جواب. دير سان جواب ۾ مٿي يا هيٺ-ريگوليٽيڊ جينز جي وچ ۾ جزوي اوورليپ پڻ هن تصور جي حمايت ڪري ٿو، ڇاڪاڻ ته ETI کي اڪثر هڪ تيز ۽ بهتر MTI جواب سمجهيو ويندو آهي جيڪو انفيڪشن جي جڳهه تي پروگرام ٿيل سيل موت ۾ ختم ٿئي ٿو، جنهن کي anaphylactic جھٽڪو 51,52 طور سڃاتو وڃي ٿو.
جين اونٽولوجي GO:0006952 "ڊفينس ريسپانس" جي اصطلاح سان منسوب گھڻا جين دٻاءُ-حوصلہ افزائي روزو پيغام 22 پروٽين (SAM22 سان ملندڙ جلندڙ) ۽ ست وڏيون ليٽڪس پروٽين-لائيڪس (MLPs) جا 11 هومولوگ آهن. -جهڙا پروٽين 31، 34، 43 ۽ 423 تسلسل جي هڪجهڙائي ڏيکاري. SAM22 جهڙا جين اهم چالو ڏيکاريا جيڪي گهڻي وقت تائين هليا، اينٿراڪنوز مزاحمت جي وڌندڙ سطح ڏيکاريندي (83A:476 ۽ بورگين). جڏهن ته، MLP جهڙا جين صرف اميدوار مزاحمت ايليل (83A:476/Lanr1 تي 6 hpi ۽ Mandelup/AnMan تي 24 hpi) کڻندڙ لائينن ۾ گهٽجي ويا. اهو ياد رکڻ گهرجي ته سڀئي سڃاڻپ ٿيل SAM22 جهڙا هومولوگ تقريبن 105 kb تي پکڙيل جين ڪلسٽر مان نڪرندا آهن، جڏهن ته MLP جهڙا جين جينوم جي الڳ الڳ علائقن مان نڪرندا آهن. اهڙين SAM22 جهڙين جينز جي مربوط چالو ٿيڻ اسان جي پوئين مطالعي ۾ ڊائيپورٿيٽوڪسيڪا انووليشن جي خلاف NLL مزاحمت جي پڻ ملي هئي، جنهن مان اهو ظاهر ٿئي ٿو ته اهي دفاعي ردعمل جي افقي حصن ۾ شامل آهن. هي نتيجو SAM22 جهڙين جينز جي سيليسيلڪ ايسڊ، فنگل انڊيوسرز، يا هائيڊروجن پيرو آڪسائيڊ سان زخم يا علاج لاءِ مثبت ردعمل جي رپورٽن جي حمايت پڻ ڪري ٿو.
ايم ايل پي جھڙا جين مختلف ابيوٽڪ ۽ حياتياتي دٻاءُ جو جواب ڏيڻ لاءِ ڏيکاريا ويا آهن، جن ۾ ڪيترن ئي ٻوٽن جي نسلن ۾ بيڪٽيريا، وائرل ۽ پيٿوجينڪ فنگل انفيڪشن شامل آهن55. ٻوٽن ۽ پيٿوجين جي وچ ۾ ڪجهه رابطي جي جواب جون هدايتون مضبوطي سان وڌڻ (يعني، ورٽيسيليم ڊاهليا سان ڪپهه جي انفيڪشن دوران) کان وٺي خاص طور تي گهٽجڻ تائين (يعني، الٽرنيريا ايس پي پي سان سيب جي وڻ جي انفيڪشن کان پوءِ)56,57. ايف نائجر انفيڪشن جي خلاف ايواڪاڊو دفاع دوران ۽ سيب جي وڻ جي انفيڪشن دوران ايم ايل پي جھڙا 423 جين جو اهم گهٽتائي ڏٺو ويو آهيبوٽريوسفيريا بيرينجيريانا ايف. سي اين. پيرڪولا ۽ الٽرنيريا الٽرنيٽا ايپل پيٿوٽائپس58,59 آهن. ان کان علاوه، ايپل ڪيلي ايم ايل پي جھڙا 423 جين کي اوور ايڪسپريس ڪرڻ ۾ مزاحمت سان لاڳاپيل جين جو اظهار گهٽ هو ۽ فنگل انفيڪشن لاءِ وڌيڪ حساس هئا59. فيوزيريم آڪسي اسپورم ايف جي پٺيان، ايم ايل پي جھڙا 423 جين کي مزاحمتي عام بين جراثيم پلازم ۾ پڻ دٻايو ويو. سي اين. لوبيا جي انفيڪشن 60.
اسان جي آر اين اي-سيڪ مطالعي ۾ سڃاڻپ ڪيل PR-10 خاندان جا ٻيا ميمبر اپ ريگيوليشن جي جواب ۾ LlR18A ۽ LlR18B جين هئا، انهي سان گڏ لپڊ ٽرانسفر پروٽين DIR1 لاءِ اپ ريگيوليشن (1 جين) يا ڊائون ريگيوليشن (3 جين) جين. ان کان علاوه، WGCNA هن ماڊل ۾ LlR18B جين کي هڪ مرڪز طور نمايان ڪري ٿو، جيڪو ويڪسينيشن لاءِ تمام گهڻو حساس آهي ۽ ڪيترائي حفاظتي جوابي جين کڻندو آهي. LlR18A ۽ LlR18B جين پيٿوجينڪ بيڪٽيريا جي جواب ۾ پيلي لوپين جي پنن ۾، انهي سان گڏ D. ٽوڪسيڪا انوڪيوليشن کان پوءِ NLL اسٽيم ۾ پيدا ڪيا ويا، جڏهن ته انهن جين جو چانورن جو هم جنس، RSOsPR10، تيزي سان هڪ فنگل انفيڪشن جي ڪري پيدا ٿيو جيڪو ممڪن طور تي جيسمونڪ ايسڊ سگنلنگ رستي ۾ شامل هو53,61, 62. DIR1 جين غير مخصوص لپڊ ٽرانسپورٽ پروٽين کي انڪوڊ ڪري ٿو جيڪي سسٽماتي حاصل ڪيل مزاحمت (SAR) جي شروعات لاءِ گهربل آهن. حفاظتي رد عمل جي ترقي سان، DIR1 پروٽين کي انفيڪشن جي مرڪز کان فلوئم ذريعي منتقل ڪيو ويندو آهي ته جيئن SAR کي دور جي عضون ۾ شامل ڪري سگهجي. دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، TanjilG_02313 DIR1 جين کي پهرين وقت جي نقطي تي لائن 84A:476 ۽ پاپوليشن 22660 ۾ خاص طور تي متاثر ڪيو ويو هو، پر اينٿراڪنوز مزاحمت صرف لائن 84A:476 ۾ ڪاميابي سان ترقي ڪئي. اهو شايد NLL ۾ DIR1 جين جي ڪجهه ذيلي فنڪشنلائيزيشن کي ظاهر ڪري سگهي ٿو، ڇاڪاڻ ته باقي ٽي هومولوگ صرف 83A:476 لائن ۾ 6 hpi تي انوڪيوليشن جو جواب ڏنو، ۽ هي جواب هيٺئين طرف هدايت ڪئي وئي.
اسان جي مطالعي ۾، "GO:0055114 ريڊوڪس پروسيس" نالي حياتياتي عمل سان لاڳاپيل سڀ کان وڌيڪ عام جزا سائٽو ڪروم P450 پروٽين، پيرو آڪسائيڊس، لينولڪ ايسڊ 9S-/13S-ليپو آڪسيجنيس، ۽ 1-امينو سائڪلوپروپين-1-ڪاربوڪسيلڪ ايسڊ آڪسائيڊس هئا. ان کان علاوه، اسان جو WGCNA HSFA4a هومولوگ کي هڪ حب کڻڻ واري ماڊلز جي طور تي بيان ڪري ٿو جهڙوڪ Lanr1 مزاحمتي جين اميدوار TanjilG_05042. HSFA4a ٻوٽن ۾ نيوڪليئر ٽرانسڪرپشن جي ريڊوڪس تي منحصر ضابطي جو هڪ جزو آهي.
سائٽو ڪروم P450 پروٽين آڪسائيڊوريڊڪٽيس آهن جيڪي پرائمري ۽ سيڪنڊري ميٽابولزم ۾ NADPH ۽/يا O2 تي منحصر هائيڊروڪسيليشن رد عمل کي متحرڪ ڪن ٿا، جنهن ۾ زينوبائيٽڪس جو ميٽابولزم، انهي سان گڏ هارمونز، فيٽي ايسڊ، اسٽيرول، سيل وال اجزاء، بايوپوليمر، ۽ حفاظتي مرکبات جي بايو سنٿيسس شامل آهن 69. اسان جي هڪ مطالعي ۾، ٻوٽن جي سائيٽو ڪروم P450 فنڪشن ۾ تبديلي -10.6 لاگ 2 (فولڊ تبديلي) کان 5.7 تائين گهٽجي وئي هئي ڇاڪاڻ ته وڏي تعداد ۾ تبديل ٿيل هومولوگس (37) ۽ مخصوص جين جي وچ ۾ ردعمل جي نمونن ۾ فرق، هڪ مٿي واري نظرثاني کي ظاهر ڪري ٿو. . اهڙي وڏي پروٽين سپر فيملي ۾ NLL جين جي پوٽيٽو حياتياتي ڪم کي واضح ڪرڻ لاءِ صرف RNA-seq ڊيٽا استعمال ڪرڻ انتهائي قياس آرائي وارو هوندو. بهرحال، اهو قابل ذڪر آهي ته ڪجهه سائيٽو ڪروم P450 جين پيٿوجينڪ فنگس يا بيڪٽيريا جي مزاحمت ۾ اضافو سان لاڳاپيل آهن، جنهن ۾ الرجڪ رد عمل ۾ حصو شامل آهي 69,70,71.
ڪلاس III پيرو آڪسائيڊس ٻوٽن جي واڌ ويجهه ۽ ترقي دوران ميٽابولڪ عملن جي وسيع رينج ۾ شامل ٿيندڙ ملٽي فنڪشنل پلانٽ اينزائمز آهن، انهي سان گڏ ماحولياتي دٻاءُ جهڙوڪ لوڻ، خشڪي، تيز روشني جي شدت، ۽ پيٿوجن حملي جي جواب ۾ 72. پيرو آڪسائيڊس اينٿراسس سان ڪيترن ئي ٻوٽن جي نسلن جي رابطي ۾ شامل آهن، جن ۾ اسٽائلوسانٿس هوميلس ۽ سي. گلووسپوريوائيڊس، لينس ڪليناريس ۽ سي. ٽرنڪٽم، فيزولس ولگارس ۽ سي. لنڊيموٿينم، ڪڪومس سيٽيوس ۽ سي. ليجناريم 73،74،75،76 شامل آهن. جواب تمام تيز آهي، ڪڏهن ڪڏهن 4 HPI تي به، فنگس ٻوٽي جي ٽشو ۾ داخل ٿيڻ کان اڳ 73. پيرو آڪسائيڊس جين ڊي. ٽوڪسيڪا اين ايل ايل انوڪوليشن جو به جواب ڏنو. آڪسائيڊيٽو برسٽ کي منظم ڪرڻ يا آڪسائيڊيٽو دٻاءُ کي ختم ڪرڻ لاءِ انهن جي عام ڪمن کان علاوه، پيرو آڪسائيڊس مخصوص مرکبات جي ليگنيفڪيشن، سب يونٽ يا ڪراس لنڪنگ دوران سيل وال مضبوطي جي بنياد تي جسماني رڪاوٽون پيدا ڪندي پيٿوجن جي واڌ ۾ مداخلت ڪري سگهن ٿا. سليڪو ۾ هن ڪم کي TanjilG_03329 جين سان منسوب ڪري سگهجي ٿو جيڪو هڪ پوٽيٽو ليگنن ٺاهڻ واري اينين ​​پيرو آڪسائيڊيس کي انڪوڊ ڪري ٿو جيڪو اسان جي مطالعي ۾ 83A:476 مزاحمتي لائن ۾ 6 HPI تي خاص طور تي اپ ريگيوليٽ ڪيو ويو هو، پر ٻين اسٽرين ۽ وقت جي پوائنٽن ۾ نه جيڪي جواب نه ڏيندا هئا.
لينولڪ ايسڊ جو 9S-/13S-lipoxygenase لپڊ بايو سنٿيسس 78 جي آڪسيڊيٽو رستي ۾ پهريون قدم آهي. هن رستي جي شين جا ٻوٽن جي دفاع ۾ ڪيترائي ڪم آهن، جن ۾ ڪيلوز ۽ پيڪٽين جي ذخيرن جي ٺهڻ ذريعي سيل وال کي مضبوط ڪرڻ، ۽ رد عمل واري آڪسيجن نسلن جي پيداوار ذريعي آڪسائيڊيوٽيو دٻاءُ کي منظم ڪرڻ شامل آهن 79,80,81,82,83. موجوده مطالعي ۾، لينولڪ ايسڊ 9S-/13S-lipoxygenase جو اظهار سڀني قسمن ۾ تبديل ڪيو ويو، پر حساس آبادي 22660 ۾، مختلف وقتن تي اپ ريگيوليشن غالب رهيو، جڏهن ته مزاحمتي Lanr1 ۽ AnMan allele کڻندڙ قسمن ۾، اهو انهن جينوٽائپس جي وچ ۾ حفاظتي اينٿراڪس رد عمل ۾ آڪسي لپن پرت جي تنوع تي زور ڏئي ٿو.
1-امينوسائيڪلوپروپين-1-ڪاربوڪسيليٽ آڪسيڊيس (ACO) هومولوگ کي لوپائن سان انڪوليٽ ڪرڻ وقت خاص طور تي اپريگيولڊ (9 جينز) يا ڊائونريگيولڊ (2 جينز) ڪيو ويو. ٻن استثنائن سان، اهي سڀئي ردعمل 6 hp تي 83A:476 تي ٿيا. ACO پروٽين پاران وچولي اينزيميٽڪ رد عمل ايٿيلين جي پيداوار ۾ شرح کي محدود ڪرڻ وارو قدم آهي ۽ تنهن ڪري انتهائي منظم آهي84. ايٿيلين هڪ ٻوٽي جو هارمون آهي جيڪو ٻوٽن جي ترقي کي منظم ڪرڻ ۽ ابيوٽڪ ۽ بايوٽڪ دٻاءُ جي حالتن جي جواب ۾ مختلف ڪردار ادا ڪري ٿو. ACO ٽرانسڪرپشن جي شموليت ۽ ايٿيلين سگنلنگ رستي جي چالو ڪرڻ رد عمل آڪسيجن جي نسلن ۽ فائٽو اليڪسين جي پيداوار کي منظم ڪندي هيمي بايوٽروفڪ فنگس اوريزا اوريزا جي خلاف چانورن جي مزاحمت کي وڌائڻ ۾ شامل آهي. هن مطالعي ۾ رپورٽ ڪيل 83A:476 لائن ۾ ACO هومولوگس جي هڪ اهم اپ ريگيوليشن جي پس منظر ۾، M. oryzae ۽ C. lupini88,89 جي وچ ۾ هڪ تمام گهڻو ملندڙ پتي جي انفيڪشن جو عمل، NLL اينٿراڪنوز ايٿيلين کي مزاحمت ڏيڻ جي امڪان کي تبديل ڪري ٿو جيڪو ماليڪيولر رستن ۾ هڪ سگنلنگ مرڪزي قدم آهي.
موجوده مطالعي ۾، فوٽو سنٿيسس سان لاڳاپيل ڪيترن ئي جينز جي وڏي پيماني تي دٻاءُ 83A:476 ۾ 6 hpi تي ۽ منڊيلوپ ۽ 22660 آبادي ۾ 48 hpi تي ڏٺو ويو. انهن تبديلين جي حد ۽ ترقي سطح جي متناسب آهي. هن تجربي ۾ اينٿراڪنوز مزاحمت جو مشاهدو ڪيو ويو. تازو، ٻوٽي-پيٿوجن رابطي جي ڪيترن ئي ماڊلز ۾ فوٽو سنٿيسس سان لاڳاپيل ٽرانسڪرپٽس جي مضبوط ۽ ابتدائي دٻاءُ جي رپورٽ ڪئي وئي آهي، جنهن ۾ پيٿوجنڪ بيڪٽيريا ۽ فنگس شامل آهن. جلدي (ڪجهه رابطي ۾ 2 HPI کان) ۽ انفيڪشن جي جواب ۾ فوٽو سنٿيسس سان لاڳاپيل جينز جي عالمي دٻاءُ رد عمل آڪسيجن نسلن جي تعیناتي ۽ الرجڪ رد عمل جي وچولي لاءِ سيليسيلڪ ايسڊ رستي سان انهن جي رابطي جي بنياد تي ٻوٽي جي مدافعت کي متحرڪ ڪري سگهي ٿو 90,94.
نتيجي ۾، سڀ کان وڌيڪ مزاحمتي نسب (83A:476) لاءِ تجويز ڪيل دفاعي جوابي ميڪانيزم ۾ R جين (ممڪن طور تي TIR-NBS-LRR TanjilG_05042) ۽ الرجڪ رد عمل جي وچ ۾ سليسيلڪ ايسڊ ۽ ايٿيلين سگنلنگ ذريعي تيز پيٿوجن جي سڃاڻپ شامل آهي، جنهن کان پوءِ ڊگهي رينج SAR جو قيام. عمل DIR-1 پروٽين جي مدد سان ٿئي ٿو. اهو نوٽ ڪيو وڃي ته C. lupini انفيڪشن لاءِ بايوٽروفڪ عرصو تمام ننڍو آهي (تقريبن 2 ڏينهن)، جنهن کان پوءِ necrotic واڌ 95. انهن مرحلن جي وچ ۾ منتقلي necrosis ۽ ethylene-inducible پروٽين جي اظهار سان لاڳاپيل ٿي سگهي ٿي جيڪي ميزبان ٻوٽن ۾ انتهائي حساسيت جي رد عمل لاءِ محرڪ طور ڪم ڪن ٿا. تنهن ڪري، بايوٽروفڪ اسٽيج تي C. lupini جي ڪامياب گرفتاري لاءِ وقت جي ونڊو تمام تنگ آهي. 83A:476 ۾ 6 hpi تي مشاهدو ڪيل ريڊوڪس ۽ فوٽو سنٿيسس سان لاڳاپيل جين جي ٻيهر پروگرامنگ فنگل هائيفي جي ترقي سان مطابقت رکي ٿي ۽ بايوٽروفڪ اسٽيج تي هڪ ڪامياب حفاظتي ردعمل جي ترقي جو اعلان ڪري ٿي. منڊيلپ ۽ 22660 آبادي جا ٽرانسڪرپٽوميڪ ردعمل شايد فنگس کي پڪڙڻ لاءِ تمام دير سان هجن ان کان اڳ جو اهي نيڪروٽڪ واڌ ڏانهن منتقل ٿين، جڏهن ته، منڊيلپ 22660 آبادي کان وڌيڪ اثرائتو ٿي سگهي ٿو ڇاڪاڻ ته PR-10 پروٽين جو نسبتا تيز ضابطو افقي مزاحمت کي فروغ ڏئي ٿو.
ETI، جيڪو ڪيننيڪل آر جين جي ذريعي هلائي ٿو، اهو اينٿراڪنوز جي خلاف بين جي مزاحمت لاءِ هڪ عام طريقو نظر اچي ٿو. تنهن ڪري، ماڊل ليگيوم ميڊيڪاگو ٽرنڪيٽولا ۾، اينٿراڪنوز جي مزاحمت RCT1 جين پاران ڏني وئي آهي، جيڪو TIR-NBS-LRR97 پلانٽ آر جين ڪلاس جو ميمبر آهي. هي جين حساس ٻوٽن ڏانهن منتقل ٿيڻ تي الفالفا ۾ وسيع اسپيڪٽرم اينٿراڪنوز مزاحمت پڻ ڏئي ٿو. عام بين (P. vulgaris) ۾، اڄ تائين ٻن درجن کان وڌيڪ اينٿراڪنوز مزاحمتي جين جي سڃاڻپ ڪئي وئي آهي. انهن مان ڪجهه جين انهن علائقن ۾ مليا آهن جتي ڪنهن به ڪيننيڪل آر جين جي کوٽ آهي، جڏهن ته ٻيا ڪيترائي ڪروموزوم جي ڪنارن تي واقع آهن جيڪي NBS-LRR جين ڪلسٽر کڻندا آهن، جن ۾ TIR-NBS-LRRs99 شامل آهن. جينوم جي وسيع SSR مطالعي پڻ NBS-LRR جين جي عام بين ۾ اينٿراڪنوز مزاحمت سان ايسوسيئيشن جي تصديق ڪئي. ڪيننيڪل آر جين پڻ جينومڪ علائقي ۾ مليو هو جيڪو اڇي لوپائن 101 ۾ وڏي اينٿراڪنوز مزاحمتي لوڪس کڻندو هو.
اسان جو ڪم ڏيکاري ٿو ته هڪ فوري مزاحمتي رد عمل، جيڪو ٻوٽي جي انفيڪشن جي شروعاتي مرحلي تي چالو ٿئي ٿو (ترجيحي طور تي 12 hpi کان پوءِ نه)، مؤثر طريقي سان تنگ پنن واري لوپين کي اينٿراڪنوز کان بچائي ٿو جيڪو پيٿوجينڪ فنگس ڪوليلوٽريچم لوپيني جي ڪري ٿئي ٿو. اعليٰ ٿرو پُٽ سيڪوئنسنگ استعمال ڪندي، اسان اين ايل ايل ٻوٽن ۾ اينٿراڪنوز مزاحمتي جين جي فرق واري اظهار جي پروفائلز جو مظاهرو ڪيو جيڪي Lanr1 ۽ AnMan مزاحمتي جين جي وچ ۾ آهن. ڪامياب دفاع ۾ ٻوٽي جي پهرين رابطي جي ڪلاڪن اندر ريڊوڪس، فوٽو سنٿيسس، ۽ پيٿوجينيسس ۾ شامل پروٽين لاءِ جين کي احتياط سان ڊزائين ڪرڻ شامل آهي. ساڳيا حفاظتي رد عمل، پر وقت ۾ دير سان، ٻوٽن کي بيمارين کان بچائڻ ۾ تمام گهٽ اثرائتو آهن. Lanr1 جين جي وچ ۾ اينٿراڪس مزاحمت R جين (اثر ڪندڙ-ٽرگرڊ مدافعت) جي عام تيز ردعمل سان مشابهت رکي ٿي، جڏهن ته AnMan جين گهڻو ڪري افقي ردعمل (مائڪروب سان لاڳاپيل ماليڪيولر نموني پاران شروع ٿيندڙ مدافعت) مهيا ڪري ٿو، جيڪو استحڪام جي هڪ معتدل سطح فراهم ڪري ٿو.
اينٿراڪنوز مارڪرز جي اسڪريننگ لاءِ استعمال ٿيندڙ 215 اين ايل ايل لائينن ۾ 74 ڪلٽيورز، 60 لائينون جيڪي ڪراسنگ يا بريڊنگ ذريعي حاصل ڪيون ويون، 5 ميوٽنٽ، ۽ 76 جهنگلي يا اصل جرم پلازم شامل هئا. لائينون 17 ملڪن مان آيون، خاص طور تي پولينڊ (58)، اسپين (47)، جرمني (27)، آسٽريليا (26)، روس (19)، بيلاروس (7)، اٽلي (5) ۽ ٻيون لائينون. 10 ملڪن مان. سيٽ ۾ ريفرنس مزاحمتي لائينون پڻ شامل آهن: 83A:476، تنجيل، وونگا Lanr1 ايليل کڻندڙ، ۽ منڊيلپ AnMan ايليل کڻندڙ. لائينون يورپي لوپائن جينياتي وسيلن جي ڊيٽابيس مان حاصل ڪيون ويون آهن جيڪي پوزنان پلانٽ بريڊنگ لميٽيڊ، وائيٽروو، پولينڊ (سپليمينٽري ٽيبل S1) پاران برقرار رکيون ويون آهن.
ٻوٽا ڪنٽرول ٿيل حالتن ۾ پوکيا ويا (فوٽو پيريڊ 16 ڪلاڪ، ڏينهن ۾ گرمي پد 25 ° C ۽ رات جو 18 ° C). ٻن حياتياتي نقلن جو تجزيو ڪيو ويو. پروٽوڪول جي مطابق ڊي اين ايزي پلانٽ ميني ڪِٽ (ڪيگين، هيلڊن، جرمني) استعمال ڪندي ٽن هفتن جي پنن مان ڊي اين اي کي الڳ ڪيو ويو. الڳ ٿيل ڊي اين اي جي معيار ۽ ڪنسنٽريشن جو جائزو اسپيڪٽروفوٽوميٽرڪ طريقن (نانو ڊراپ 2000؛ ٿرمو فشر سائنٽيفڪ، والٿم، ايم اي، يو ايس اي) ذريعي ورتو ويو. اينٿراڪنوز مزاحمت جين کي نشان لڳائڻ وارو اين مين (سي وي. منڊيلپ مان نڪتل) ۽ جين لين آر 1 (سي وي. تنجيل مان نڪتل) جي چوڌاري نشان لڳائڻ وارو اين سي ڪيو 3 ۽ اين سي ڪيو 4 جو تجزيو 11,26,28 ڪيو ويو. مزاحمتي ايليل لاءِ هوموزائيگوٽس کي "1"، حساس - "0"، ۽ هيٽروزائيگوٽس - 0.5 طور تي اسڪور ڪيو ويو.
مارڪرز AnManM1، AnSeq3 ۽ AnSeq4 جي اسڪريننگ جي نتيجن ۽ آخري فالو اپ تجربن لاءِ ٻج جي دستيابي جي بنياد تي، اينٿراڪنوز مزاحمت فينوٽائپنگ لاءِ 50 NLL لائينون چونڊيون ويون. تجزيو ڪمپيوٽر ڪنٽرول ٿيل گرين هائوس ۾ 14 ڪلاڪن جي فوٽو پيريڊ سان نقل ۾ ڪيو ويو جنهن ۾ ڏينهن ۾ 22 ° C ۽ رات ۾ 19 ° C جي درجه حرارت جي حد هئي. ٻج کي ڇڪيو ويندو آهي (جنين جي مخالف پاسي تي ٻج جي ڪوٽ کي تيز بليڊ سان ڪٽيو ويندو آهي) ته جيئن ٻج جي ڪوٽ تمام سخت هجڻ جي ڪري ٻج جي ننڊ کي روڪي سگهجي ۽ هڪجهڙائي جي اُڀرڻ کي يقيني بڻائي سگهجي. ٻوٽا ٿانوَن ۾ (11 × 11 × 21 سينٽي ميٽر) جراثيم کان پاڪ مٽي (TS-1 REC 085 ميڊيم بيسڪ، ڪلاسمن-ڊيلمن پولسڪا، وارسا، پولينڊ) سان پوکيا ويا. انوڪوليشن ڪوليٽوٽريچم لوپيني ڪول-08 اسٽرين سان ڪئي وئي، جيڪا 1999 ۾ ورزنيٽسا، گريٽر پولينڊ (52° 27′ 42″ N 17° 04′ 05″ E) ۾ هڪ ميدان ۾ پوکيل تنگ پنن واري لوپائن ٻوٽن جي تنن مان پوکي وئي هئي. هڪ علائقو حاصل ڪريو. آئسوليٽس کي SNA ميڊيم ۾ 20° C تي ڪاري روشنيءَ ۾ 21 ڏينهن تائين ڪلچر ڪيو ويو ته جيئن اسپوروليشن کي وڌايو وڃي. پوکڻ کان چار هفتا پوءِ، جڏهن ٻوٽا 4-6 پنن جي مرحلي تي پهچي ويا، ته انوڪوليشن 0.5 x 106 ڪونيڊيا في ملي ليٽر جي ڪنسنٽريشن تي ڪونيڊيا جي معطلي سان اسپري ڪندي ڪئي وئي. انوڪوليشن کان پوءِ، ٻوٽن کي 24 ڪلاڪن لاءِ اونداهي ۾ رکيو ويو، جنهن ۾ ڪونيڊيا جي ڄمڻ ۽ انفيڪشن جي عمل کي آسان بڻايو ويو. پوءِ ٻوٽن کي 14 ڪلاڪن جي فوٽو پيريڊ هيٺ 22°C ڏينهن/19°C رات ۽ 70% نمي تي پوکيو ويو. بيماري جو اسڪور انوڪيوليشن کان 22 ڏينهن پوءِ ٺاهيو ويو ۽ 0 (مدافعتي) کان 9 (تمام گهڻو حساس) تائين هو جيڪو تنن ۽ پنن تي نيڪروٽڪ زخمن جي موجودگي يا غير موجودگي تي منحصر هو. ان کان علاوه، اسڪورنگ کان پوءِ، ٻوٽن جو وزن ماپيو ويو. مارڪر جينوٽائپس ۽ بيماري جي فينوٽائپس جي وچ ۾ لاڳاپن کي پوائنٽ ٽو-سيڪونس ڪنيڪشن (اينٿراڪنوز مزاحمت فينوٽائپ جي تجزيي لاءِ لائينن جي سيٽ ۾ هيٽروزائگس مارڪرز جي غير موجودگي) جي طور تي ڳڻيو ويو.