Nature.com گهمڻ لاءِ توهان جي مهرباني.برائوزر جو نسخو توهان استعمال ڪري رهيا آهيو محدود CSS سپورٽ آهي.بهترين تجربي لاءِ، اسان سفارش ڪريون ٿا ته توهان هڪ اپڊيٽ ٿيل برائوزر استعمال ڪريو (يا انٽرنيٽ ايڪسپلورر ۾ مطابقت واري موڊ کي بند ڪريو).ساڳئي وقت ۾، مسلسل حمايت کي يقيني بڻائڻ لاء، اسان سائيٽ کي بغير اسٽائل ۽ جاوا اسڪرپٽ پيش ڪنداسين.
Angustifolius lupin (NLL، Lupinus angustifolius L.) ھڪڙو ٻوٽو آھي جيڪو کاڌي جي پيداوار ۽ مٽي جي سڌاري لاء استعمال ڪيو ويندو آھي.فصل جي طور تي اين ايل ايل جي عالمي توسيع ڪيترن ئي بيمارين جي فنگي کي راغب ڪيو آهي، جنهن ۾ لوپين اينٿراڪنوز شامل آهن، جيڪي تباهه ڪندڙ اينٿراڪنوز بيماري جو سبب بڻجن ٿا.ٻه ايلليس، Lanr1 ۽ AnMan، جيڪي مزاحمت وڌائين ٿا، اين ايل ايل جي نسل ۾ استعمال ڪيا ويا آهن، پر هيٺيون ماليڪيول ميڪانيزم اڻڄاتل رهي ٿو.هن مطالعي ۾، Lanr1 ۽ AnMan مارڪر استعمال ڪيا ويا يورپي اين ايل ايل نموني کي اسڪرين ڪرڻ لاء.ڪنٽرول ٿيل ماحول ۾ ويڪسين جي جاچ ٻنهي مزاحمتي ڊونرز جي افاديت جي تصديق ڪئي.نمائندن جي مزاحمتي ۽ حساس لائينن تي مختلف جين اظهار جي پروفائلنگ ڪئي وئي.Anthracnose resistance جين آنٽولوجي اصطلاحن جي اوور ايڪسپريشن سان جڙيل هئي ”GO:0006952 دفاعي جواب“، ”GO:0055114 Redox Process“، ۽ ”GO:0015979 Photosynthesis“.ان کان علاوه، Lanr1 (83A: 476) لائن ڏيکاريو اھم ٽرانسڪروم ريپروگرامنگ کي تيزيء سان انووليشن کان پوء، جڏهن ته ٻيون لائينون ھن جواب ۾ دير سان ڏيکاريا آھن تقريبا 42 ڪلاڪ.دفاعي ردعمل TIR-NBS، CC-NBS-LRR ۽ NBS-LRR جين سان لاڳاپيل آهن، 10 پروٽينس شامل آهن پيٽوجنيسس ۾ شامل آهن، لپيد منتقلي پروٽين، اينڊوگلوڪن-1,3-β-گلوڪوسيڊيس، گليڪين-امير سيل وال پروٽين، ۽ جين آڪسيجن جي رد عمل واري رستي کان.83A:476 جا ابتدائي جواب، جن ۾ فوٽو سنٿيسس سان جڙيل جين جو محتاط دٻاءُ شامل آهي، فنگل حياتيات جي نباتاتي ترقي واري مرحلي دوران ڪامياب تحفظ سان ٺهڪي اچي ٿي، جنهن مان معلوم ٿئي ٿو ته هڪ اثر ڪندڙ قوت مدافعت کي متحرڪ ڪري ٿو.منڊيلوپ ردعمل سست ٿي ويو آهي، جيئن مجموعي طور تي افقي ڇڪڻ آهي.
تنگ پتي وارو لوپين (NLL، Lupinus angustifolius L.) ھڪڙو اعلي پروٽين اناج آھي جيڪو مغربي ميڊيٽرينين علائقي 1,2 ۾ پيدا ٿئي ٿو.اهو هن وقت جانورن ۽ انسانن لاءِ کاڌي جي فصل طور پوکيو وڃي ٿو.ان کي فصلن جي گردش واري نظام ۾ سائي مينور پڻ سمجهيو ويندو آهي ڇاڪاڻ ته نائيٽروجن کي سمبيوٽڪ نائٽروجن فيڪس ڪرڻ واري بيڪٽيريا ۽ مٽي جي مجموعي بهتري جي ڪري.NLL گذريل صديءَ ۾ گھريلو عمل جي تيزيءَ سان گذري چڪو آھي ۽ اڃا تائين اعليٰ نسل جي دٻاءَ ۾ آھي 3,4,5,6,7,8,9,10,11,12.اين ايل ايل جي وسيع پوکيءَ سان، پيٿوجينڪ فنگس جي جانشين نئين زرعي نچوض پيدا ڪيا ۽ فصلن کي تباهه ڪندڙ نئين بيماريون پيدا ڪيون. لوپين جي هارين ۽ نسل پرستن لاءِ سڀ کان وڌيڪ قابل ذڪر اينٿراڪنوز جو ظاهر ٿيڻ هو، جيڪو pathogenic fungus، Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg، Feiler ۽ Hagedorn13 سبب پيدا ٿيو. لوپين جي هارين ۽ نسل پرستن لاءِ سڀ کان وڌيڪ قابل ذڪر اينٿراڪنوز جو ظاهر ٿيڻ هو، جيڪو pathogenic fungus، Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg، Feiler ۽ Hagedorn13 سبب پيدا ٿيو. Наиболее примечательным для фермеров и селекционеров люпина было появление антракноза, вызванного патогеннымирбреным для фермеров Hagedorn13. لوپين جي هارين ۽ نسل پرستن لاءِ سڀ کان وڌيڪ قابل ذڪر اينٿراڪنوز جو ظهور هو جنهن سبب پيدا ٿيندڙ فنگس Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg، Feiler ۽ Hagedorn13.对于羽扇豆农民和饲养者来说,最引人注目的是炭疽病的出现،它是由病原农民和饲养者来说,最引人注目的是炭疽病的出现،它是由病原农民和饲养者来说,Feillenbergto orn13 引起的.- Наиболее поразительным для фермеров и селекционеров люпина является появление авляется появление антракноза, вызываемого для фермеров (collection) ، فيلر ۽ هيگيڊورن13. لوپين جي هارين ۽ پالڻ وارن لاءِ سڀ کان وڌيڪ متاثر ڪندڙ اينٿراڪنوز جو ظهور آهي جيڪو پيٿوجينڪ فنگس Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg، Feiler ۽ Hagedorn13 جي ڪري ٿئي ٿو.بيماري جي ابتدائي رپورٽون برازيل ۽ آمريڪا کان آيون، عام علامتون 1912 ۽ 1929 ۾ ظاهر ٿيا.بهرحال، اٽڪل 30 سالن کان پوءِ، ان بيماريءَ کي ڪوليٽوٽريچم گلويو اسپوريائڊس (Penz.) Penz قرار ڏنو ويو. ۽ ساڪ.، ٽيليمورف گلوميرلا سينگولاتا (اسٽون مين) اسپالڊ. ۽ ساڪ.، ٽيليمورف گلوميرلا سينگولاتا (اسٽون مين) اسپالڊ. ۽ Sacc.، телеоморф Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. ۽ ساڪ.، ٽيليمورف آف گلوميرلا سينگولاٽا (اسٽون مين) اسپالڊ. ۽ Sacc.،有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. ۽ Sacc.،有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc.، Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld в Целенаправленной морфологии. ۽ Sacc.، Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld in Targeted Morphology. ۽ ايڇ شرينڪ،. ۽ ايڇ شرينڪ، .۽ ايڇ شرينڪ. & H. 施伦克،. & H. 施伦克،.۽ H. Schlenk، .20 صدي جي وچ ۾ ابتدائي بيماري فينوٽائپنگ ڪئي وئي NLL ۽ پيلي لوپين (L. luteus L.) جي رسائي ۾ ڪجهه مزاحمت ڏيکاري، پر سڀ اڇا لوپين (L. albus L.) Accessions آزمايا ويا انتهائي حساس 15,16.اڀياس ڏيکاريا آهن ته anthracnose جي ترقي ورن (هوا جي نمي) ۽ گرمي پد (12-28 ° C جي حد ۾) سان لاڳاپيل آهي، جنهن جي ڪري وڌيڪ گرمي پد تي مزاحمت جي خلاف ورزي جي ڪري ٿي 17، 18. حقيقت ۾، ڪونڊيا جي ڄمڻ ۽ بيماري شروع ٿيڻ لاء گهربل وقت، 4 ڀيرا گهٽ هو 12 ° C کان گهٽ ڪلاڪ (4 ° C کان گهٽ ڪلاڪ) حالتون19.ان ڪري، جاري گلوبل وارمنگ اينٿراڪنوز جي پکيڙ جو سبب بڻيل آهي.بهرحال، اها بيماري فرانس (1982) ۽ يوڪرين (1983) ۾ هڪ ايندڙ خطري جي هاربنر جي طور تي ڏٺو ويو، پر 20,21 وقت تي لوپين انڊسٽري طرفان ظاهري طور تي نظر انداز ڪيو ويو.ڪجهه سالن کان پوءِ اها تباهي واري بيماري سڄي دنيا ۾ پکڙجي وئي ۽ لوپين پيدا ڪندڙ وڏن ملڪن جهڙوڪ آسٽريليا، پولينڊ ۽ جرمني کي به متاثر ڪيو 22,23,24.1990 واري ڏهاڪي جي وچ ۾ اينٿراڪنوز جي وبا جي پٺيان، وسيع اسڪريننگ جي نتيجي ۾ NLL19 نموني ۾ ڪيترن ئي مزاحمتي ڊونرز جي سڃاڻپ ٿي.اينٿراڪنوز جي خلاف اين ايل ايل جي مزاحمت ٻن الڳ الڳ غالب ايلليز جي ذريعي ڪنٽرول ڪئي وئي آهي جيڪي مختلف جراثيم جي ذريعن ۾ مليا آهن: لان آر 1 ڪلٽيور ۾ تنجيل ۽ وانگا ۽ ڪلٽيور ۾ AnMan.Mandalay 25, 26. اهي ايلليس ماليڪيولر مارڪرز کي مڪمل ڪن ٿا جيڪي نسل جي پروگرامن ۾ مزاحمتي جراثيم جي چونڊ کي سپورٽ ڪن ٿا 25,26,27,28,29,30.Anthracnose resistance لاءِ RIL جي آباديءَ کي الڳ ڪرڻ لاءِ، Lanr1 allele کي کڻڻ واري مزاحمتي نسل واري لائن 83A:476 کي حساس وائلڊ لائين P27255 سان پار ڪيو ويو، جنهن اهو ممڪن بڻايو ته Lanr1 لوڪس کي ڪروموزوم NLL-1131، locignmentance، 32.32 سان لاڳاپو. جينومڪ فريم ورڪ سان anthracnose ڪرڻ لاءِ، NLL هڪ ئي ڪروموزوم (NLL-11) تي ٽنهي ايلليس جي جڳهه کي ظاهر ڪيو، پر مختلف پوزيشن ۾ 29,34,35.جڏهن ته، RILs جي ننڍڙي تعداد ۽ مارڪرز ۽ لاڳاپيل ايلليز جي وچ ۾ وڏي جينياتي فاصلي جي ڪري، انهن جي بنيادي جين بابت ڪو به قابل اعتماد نتيجو نه ٿو ڪڍي سگهجي.ٻئي طرف، لوپين ۾ ريورس جينيٽڪس جو استعمال مشڪل آهي، ڇاڪاڻ ته انهن جي تمام گهٽ ٻيهر پيدا ٿيڻ واري صلاحيت آهي، جيڪا جينياتي ڦيرڦار کي مشڪل بڻائي ٿي37.
گھريلو جراثيم جي ترقيءَ سان گھرجون پوريون حالتون، جھڙوڪ 83A:476 (Lanr1) ۽ Mandelup (AnMan) ۾ گھربل ايليل کڻي وڃڻ، جھنگلي آباديءَ ۾ مخالفن جي ميلاپ جي موجودگيءَ ۾ اينٿراڪنوز جي مزاحمت جو مطالعو ڪرڻ جو دروازو کولي ڇڏيو آھي.ماليڪيولر ميڪانيزم جا امڪان.مخصوص جينوٽائپس پاران ٺاهيل دفاعي جوابن جو مقابلو ڪريو.ھن مطالعي ۾ اين ايل ايل جي سي. لوپيني ويڪسينيشن جي شروعاتي ٽرانسڪرپٽ جواب جو جائزو ورتو.پهريون، هڪ يورپي اين ايل ايل گرمپلازم پينل جنهن ۾ 215 لائينون شامل آهن، ماليڪيولر مارڪرز جي استعمال سان اسڪريننگ ڪئي وئي جيڪي Lanr1 ۽ AnMan alleles کي نشانو بڻائين ٿيون.Anthracnose phenotyping پوءِ 50 اين ايل ايل لائينن تي ڪيو ويو، اڳ ۾ چونڊيل ماليڪيولر مارڪرز لاءِ، ڪنٽرول ٿيل حالتن هيٺ.انهن تجربن جي بنياد تي، چار لائينون مختلف اينٿراڪنوز مزاحمت ۽ Lanr1/AnMan allelic composition ۾ مختلف دفاعي جين ايڪسپريس پروفائيلنگ لاءِ چونڊيا ويا ٻه مڪمل طريقا استعمال ڪندي: اعليٰ ذريعي آر اين اي ترتيب ڏيڻ ۽ حقيقي وقت پي سي آر جي مقدار.
اين ايل ايل گرمپلازم جي هڪ سيٽ جي اسڪريننگ (N = 215) مارڪر Lanr1 (Anseq3 ۽ Anseq4) ۽ AnMan (Anseq4) ۽ AnMan (AnManM1) سان ڏيکاريل آهي ته صرف هڪ لڪير (95726، Salamanca-b جي ويجهو) کي وڌايو ويو آهي، جڏهن ته سڀني جي "مزاحمت" جي نشانين جي "مقابلي" سڀني لاء موجود آهي. 158 (~ 73.5٪) لائنن ۾ سڀني نشانن جو تناسب.تيرهن لائينن Lanr1 مارڪر جا ٻه ”مزاحمتي“ ايلليس پيدا ڪيا، ۽ 8 لائينون Lanr1 جا ”مزاحمتي“ ايلليس پيدا ڪيون.مارڪرAnMan مارڪر جو "مزاحمت" ايليل (ضمني جدول S1).Anseq3 مارڪر لاءِ ٻه ليڪون heterozygous هيون ۽ AnManM1 مارڪر لاءِ هڪ heterozygous.42 لائينون (19.5%) Anseq3 ۽ Anseq4 alleles جي مخالف مرحلن کي کڻنديون آهن، انهن ٻن هنڌن جي وچ ۾ ٻيهر ٺهڻ جي اعلي تعدد جي نشاندهي ڪن ٿا.Anthracnose phenotypes under controlled conditions (ضمني جدول S2) آزمايل جينوٽائپس جي مزاحمت ۾ تبديلي ظاهر ڪئي، جيڪا anthracnose جي شدت ۾ عڪاسي ڪئي وئي.وچولي اسڪور ۾ فرق 1.8 (معتدل طور تي مزاحمتي) کان 6.9 (مشڪل) تائين ۽ ٻوٽن جي وزن ۾ فرق 0.62 (مشڪل) کان 4.45 g (مزاحمتي) تائين. تجربو جي ٻن نقلن ۾ مشاهدو ڪيل قدرن جي وچ ۾ هڪ اهم تعلق هو (0.51 بيماري جي شدت جي اسڪينڊل لاءِ، P = 0.00017 ۽ 0.61 ٻوٽي جي وزن لاءِ، P <0.0001) ۽ گڏوگڏ انهن ٻن پيٽرولن جي وچ ۾ (− 0.59 ۽ − 0.77، P <0.000). تجربن جي ٻن نقلن ۾ مشاهدو ڪيل قدرن جي وچ ۾ هڪ اهم تعلق هو (0.51 بيماري جي شدت جي اسڪينڊل لاءِ، P = 0.00017 ۽ 0.61 ٻوٽي جي وزن لاءِ، P <0.0001) ۽ گڏوگڏ انهن ٻن پيٽرولن جي وچ ۾ (− 0.59 ۽ − 0.77، P <100). Выявлена ​​достоверная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях эксперимента (0,51 для баловлена, 0,51 для значениями, наблюдаемыми) и 0,61 для массы растения, P <0,0001) а также между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,77, Р < 0,0001) 0,0001). تجربو جي ٻن ورهاڱي ۾ مشاهدو ڪيل قدرن جي وچ ۾ هڪ اهم تعلق مليو (0.51 بيماري جي شدت جي اسڪينڊل لاء، P = 0.00017 ۽ 0.61 ٻوٽي جي وزن لاء، P <0.0001)، انهي سان گڏ انهن ٻن پيٽرولن جي وچ ۾ (- 0.59 ۽ -0.77، P <0.010، P <010).在两次重复实验中观察到的值之间存在显着相关性（疾病严重程度评分为程度评分为0.51 = 0.51 0.61، پي <0.0001) 以及这两个参数之间 (- 0.59 和- 0.77، P <0.0001).在 两 次 重复 实验 中 观察 的 值 之间 存在 相关性 （疾病 严重 程度 严重 程度 评 分丆 5 0.00017 ， 植物 为 0.61 ， p <0.0001） 以及 两 个 参数 之间 （（（- 0.59和- 0.77، پي <0.0001). Наблюдалась значительная корреляция между значениями, наблюдаемыmi в двух повторностях растения 0,61, P <0,0001), и между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,0001) 0,77، P <0,0001. نقل ۾ مشاهدو ڪيل قدرن جي وچ ۾ هڪ اهم تعلق هو (بيماري جي شدت جو نمبر 0.51، P = 0.00017 ۽ ٻوٽي جو وزن 0.61، P <0.0001) ۽ انهن ٻن پيٽرولن جي وچ ۾ (-0.59 ۽ -0 .0001) 0.707، P <010. ).حساس ٻوٽن ۾ عام علامتون ڏسڻ ۾ اچن ٿيون، جن ۾ ٿلهي جو کڙڪڻ ۽ مروڙي هڪ ”چرواڊ جي ڪمان“ جي ڍانچي سان مشابهت رکي ٿي، ان کان پوءِ نارنگي/گلابي اسپوزائٽس سان بيضوي زخم (ضمني شڪل 1).آسٽريلوي رسينس کڻڻ وارا آهن Lanr1 (83A:476 ۽ تنجيل) ۽ AnMan (Mandelup) جينز وچولي مزاحمتي، 0.0331 ۽ 0.0036).ڪجهه لائينون جيڪي پڻ کڻندا آهن "مزاحمتي" Lanr1 ۽ / يا AnMan ايلليس بيماري جي علامات کي ڏيکاري ٿو.
دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، ڪجهه اين ايل ايل لائينون جن ۾ ڪنهن به ”مزاحمتي“ مارڪر ايليل جي کوٽ آهي، ظاهر ڪيو هڪ اعليٰ سطحي اينٿراڪنوز مزاحمت (Lanr1 يا AnMan جينوٽائپس جي مقابلي ۾ يا ان کان وڌيڪ)، جيئن ته بورگين (P value <0.0001 ٻنهي پيرا ميٽرن لاءِ)، بوجار (P value <0.0001 ۽ ٻوٽن لاءِ وزن 0.0001-0.0001 ۽ 0.0001 لاءِ ٻوٽو-0001 وزن). (P قدر <0.0001 سکور لاءِ ۽ غير اھم وزن لاءِ). دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، ڪجهه اين ايل ايل لائينون جن ۾ ڪنهن به ”مزاحمتي“ مارڪر ايليل جي کوٽ آهي، ظاهر ڪيو هڪ اعليٰ سطحي اينٿراڪنوز مزاحمت (Lanr1 يا AnMan جينوٽائپس جي مقابلي ۾ يا ان کان وڌيڪ)، جيئن ته بورگين (P value <0.0001 ٻنهي پيرا ميٽرن لاءِ)، بوجار (P value <0.0001 ۽ ٻوٽن لاءِ وزن 0.0001-0.0001 ۽ 0.0001 لاءِ ٻوٽو-0001 وزن). (P قدر <0.0001 سکور لاءِ ۽ غير اھم وزن لاءِ). Интересно, что несколько линий NLL, лишенных какого-либо «резистентного» маркерного аллеля, показали высокий уровень увостой уровень вимый или более высокий, чем для генотипов Lanr1 или AnMan), таких как Boregine (значение P <0,0001 для обоих параметров)، بوجار 10001 и 0,001 для массы растения) и популяции B-549/79b (значение P <0,0001 для оценки и незначимо для массы). دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، ڪيترن ئي اين ايل ايل لائينون جن ۾ ڪنهن به ’مزاحمتي‘ مارڪر ايليل جي کوٽ آهي، ان ۾ اينٿراڪنوز (Lanr1 يا AnMan genotypes جي مقابلي ۾ يا ان کان وڌيڪ) جي مزاحمت جي اعليٰ سطح ڏيکاري ٿي، جيئن ته بورگين (P value <0.0001 ٻنهي پيرا ميٽرن لاءِ)، Bojar (P value <0.0001 for the parameters)، بوجر (P value <0.0001 آبادي ۽ 0.0001 لاءِ وزن) /79b (P قدر <0.0001 تشخيص لاءِ ۽ وزن لاءِ اهم ناهي).有趣的是，一些缺乏任何“抗性”标记等位基因的NLL 系显示出高水平的炭疽病抗怗型相当或更高），例如Boregine（两个参数的P 值<0.0001）、Bojar（P 值<得分为0.0001）得分为0.0001）得分为0.0001.种群B-549/79b（得分P 值< 0.0001، 重量不显着). اها دلچسپ ڳالهه آهي ته ڪجهه اين ايل ايل سسٽم جن ۾ ڪو به ”اينٽيجنڪ“ مارڪر نه هوندا آهن اهي اعليٰ افقي مزاحمت ڏيکاريندا آهن (Lanr1 يا AnMan جينز جي برابر يا وڌيڪ)، جهڙوڪ بورگين (ٻئي پيرا ميٽرس P <0.0001)، بوجار (P value <0.0001، ٻوٽي جو وزن) 0.090/0.091 بي بي (0.09/70) قدر 1، وزن اهم ناهي). Интересно, что некоторые линии NLL, лишенные каких-либо маркерных аллей «резистентности», показали высокие уровни устовые высокие уровни или выше, чем у генотипов Lanr1 или AnMan), такие как Boregine (значение P для обоих параметров <0,0001)، Bojar (значение P <0,000,0001,000,0001) ляция B-549/79b (оценка P-значение <0,0001, масса незначительна). دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، ڪجهه اين ايل ايل لائينون جن ۾ ڪنهن به ’مزاحمت‘ مارڪر ايلليس جي کوٽ آهي، ان ۾ اينٿراڪنوز مزاحمت جي اعليٰ سطح ڏيکاري ٿي (Lanr1 يا AnMan جينوٽائپس جي مقابلي ۾ يا ان کان وڌيڪ)، جيئن ته بورگين (P Value for both parameters <0.0001)، Bojar (P-value <b00/b 0.59، 0.59 آبادي وزن ۽ 0.59/0.49 پوپٽ) P-value <0.0001، وزن اهم ناهي).هي رجحان مزاحمت جي هڪ ناول جينياتي ذريعن جي امڪان کي ظاهر ڪري ٿو، مارڪر جينوٽائپس ۽ بيماري فينوٽائپس جي وچ ۾ لاڳاپا جي گهٽتائي جي وضاحت ڪندي (P قدر ~ 0.42 کان ~ 0.98 تائين).اهڙيء طرح، Kolmogorov-Smirnov ٽيسٽ ڏيکاري ٿي ته anthracnose مزاحمت تي ڊيٽا تقريبن عام طور تي اسڪور (P-values ​​0.25 ۽ 0.11) ۽ ٻوٽي جي ماس (P-values ​​0.47 ۽ 0.55) لاءِ ورهايل هئا، مان سمجهان ٿو ته مان سمجهان ٿو ته Anthracnose resistance کان وڌيڪ ايلليس شامل آهن.
anthracnose resistance screening جي نتيجن جي بنياد تي، 4 لائينون ٽرانسڪرپٽوم analysis لاءِ منتخب ڪيون ويون: 83A:476, Boregine, Mandelup, and Population 22660. اھي سٽون آر اين اي سيڪوئنسنگ پاران انووليشن تجربن ۾ اينٿراڪس مزاحمت لاءِ ٻيهر آزمايا ويا، بشرطيڪ اھي ساڳيا ٽيسٽ ۾ ھجن.سکور ويلز هن ريت هئا: بورگين (1.71 ± 1.39)، 83A: 476 (2.09 ± 1.38)، منڊيلپ (3.82 ± 1.42) ۽ آبادي 22660 (6.11 ± 1.29).
Illumina NovaSeq 6000 پروٽوڪول حاصل ڪيو سراسري 40.5 Mread جوڙو في نموني (29.7 کان 54.4 Mreads) (ضمني ٽيبل S3).حوالن جي ترتيب ۾ ترتيب ڏنل اسڪور 75.5٪ کان 88.6٪ تائين.0.812 کان 0.997 تائين (مطلب 0.959) جي حياتياتي نقلن جي وچ ۾ تجرباتي مختلف قسمن جي وچ ۾ پڙهڻ جي ڳڻپ جي ڊيٽا جو سراسري تعلق. 35,170 جينز مان تجزيو ڪيو ويو، 2917 ظاهر نه ڪيو ڪو به اظهار، ۽ ٻيا 4785 جينز ناگزير سطح تي ظاهر ڪيا ويا (بنيادي مطلب <5). 35,170 جينز مان تجزيو ڪيو ويو، 2917 ظاهر نه ڪيو ڪو به اظهار، ۽ ٻيا 4785 جينز ناگزير سطح تي ظاهر ڪيا ويا (بنيادي مطلب <5). IS 35 170 проанализированных генов 2917 не проявляли экспрессии, а остальные 4785 генов экспрессировались на незвнобновесть на проанализированных е <5). 35,170 جينز مان تجزيو ڪيو ويو، 2917 ظاهر نه ڪيو، ۽ باقي 4785 جينز غير معمولي سطح تي ظاهر ڪيا ويا (بنيادي مطلب <5).在分析的35,170 个基因中, 2917 个没有表达,其他4785 个基因的表达可以因的表达可以忽略不计﹡.35,170 IS 35 170 проанализированных генов 2917 не экспрессировались, а остальные 4785 генов имели незначительную незначительную экспрессировались ). 35,170 جينز جو تجزيو ڪيو ويو، 2917 جو اظهار نه ڪيو ويو ۽ باقي 4785 جينز ناگزير اظهار هئا (بنيادي مطلب <5).اهڙيءَ طرح، تجربا دوران بيان ڪيل جين جو تعداد (بنيادي مطلب ≥ 5) 27,468 (78.1٪) (ضمني جدول S4) هو.
پهرين وقت جي نقطي کان، سڀني اين ايل ايل لائينون سي. لوپيني (اسٽرين ڪول-08) جي انووليشن جو جواب ڏنو ٽرانسڪروم کي ٻيهر پروگرام ڪندي (ٽيبل 1)، جڏهن ته، لائنن جي وچ ۾ اهم فرق ڏٺو ويو.اهڙيءَ طرح، مزاحمتي ليڪ 83A:476 (Lanr1 جين کي کڻندي) هن وقت جي ٻين پوائنٽن جي مقابلي ۾ 31-69-گنا وڌيل اپ-۽-ڊائون-جينز جي تعداد ۾ 31-69-گنا واڌ سان گڏ پهرين ٽائم پوائنٽ (6 hpi) تي اهم ٽرانسڪروم ريپروگرامنگ ڏيکاريو.ان کان علاوه، هي چوٽي مختصر رهي، ڇاڪاڻ ته صرف چند جين جو اظهار ٻئي وقت جي نقطي (12 hpi) تي خاص طور تي تبديل ٿي رهيو آهي.دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، بورگين، جنهن پڻ گرافٽ ٽيسٽ ۾ اعلي سطحي مزاحمت ڏيکاري ٿي، تجربو دوران اهڙي وڏي ٽرانسپشنل ريپروگرامنگ نه ڪئي وئي.جڏهن ته، مختلف طور تي ظاهر ڪيل جين جو تعداد (DEG) بورگين ۽ 83A لاء ساڳيو هو: 476 12 HPI تي.ٻئي Mandelup ۽ آبادي 22660 ڏيکاريا DEG چوٽي تي آخري وقت جي نقطي تي (48 l / s)، ظاهر ڪري ٿو ته دفاعي جوابن ۾ نسبتا دير سان.
ڇاڪاڻ ته 83A: 476 ٻين سڀني لائينن جي مقابلي ۾ 6 HPI تي C. lupini جي جواب ۾ وڏي ٽرانسڪرپٽوم ريپروگرامنگ ڪيو، ~ 91٪ DEGs جو هن وقت ڏٺو ويو نسب سان مخصوص (تصوير 1).جڏهن ته، مطالعي جي لائينن جي وچ ۾ شروعاتي جوابن ۾ ڪجهه اوورليپ موجود هئا، جيئن ته 68.5٪، 50.9٪، ۽ 52.6٪ DEG بورگين ۾، منڊلپ، ۽ آبادي 22660، ترتيب سان، انهن سان اوورليپ ٿيل آهن جيڪي 83A ۾ مليا آهن: 476 وقت ۾ ڪجهه پوائنٽن ۾.جڏهن ته، اهي ڊي اي جي حساب سان صرف هڪ ننڍڙو حصو (0.97-1.70٪) سڀني DEGs جو في الحال 83A: 476 استعمال ڪندي معلوم ڪيو ويو آهي.ان کان علاوه، سڀني لائينن مان 11 DEGs هن وقت مربوط هئا (ضمني جدول S4-S6)، جن ۾ ٻوٽن جي دفاعي جوابن جا عام جزا شامل آهن: لپڊ ٽرانسفر پروٽين (TanjilG_32225)، endoglucan-1,3-β-glucoside enzyme (TanjilG_233384)، ٻه پروٽين (TanjilG_233384)، ۽ 2-Tanjil-2384 پروٽين. jilG_31531)، بنيادي ليٽڪس پروٽين (TanjilG_32352)، ۽ ٻه گليسائن سان مالا مال ساختي سيل وال پروٽين (تنجيل جي_19701 ۽ تنجيل جي_19702).83A:476 ۽ بورگين جي وچ ۾ 24 HPI (مجموعي طور تي 16-38٪ DEG) ۽ منڊلپ ۽ آبادي 22660 جي وچ ۾ 48 HPI تي (مجموعي طور تي 14-20٪ DEG) جي وچ ۾ ٽرانسڪروم جوابن ۾ نسبتا وڌيڪ اوورليپ پڻ هو.
وين آريگرام ڏيکاريندي مختلف انداز ۾ ظاهر ڪيل جينز (DEG) جو تعداد تنگ ٿيل لوپين (NLL) لائنن ۾ کوليوٽوٽريچم لوپيني (اسٽرين Col-08 لوپين فيلڊز مان حاصل ڪيل ويرزينيس، پولينڊ، 1999) سان لڳايو ويو آهي.اين ايل ايل لائينز جو تجزيو ڪيو ويو: 83A: 476 (مزاحمتي، Lanr1 ايليل کڻڻ)، بورگين (مزاحمتي، جينياتي پس منظر نامعلوم)، منڊلپ (اعتدال پسند مزاحمتي، AnMan ايليل کڻڻ) ۽ آبادي 22660 (تمام حساس).مخفف hpi ويڪسينيشن کان پوء ڪلاڪن تائين بيٺو آهي.گراف کي آسان ڪرڻ لاء صفر قدر هٽايو ويو آهي.
6 hpi تي اوور ايڪسپريس ٿيل جين جو سيٽ ڪيننيڪل R جين ڊومينز جي موجودگي لاءِ تجزيو ڪيو ويو (ضمني جدول S7).هن مطالعي کي صرف اين بي ايس-ايل آر آر ڊومينز سان گڏ کلاسک بيماري مزاحمت جين جي ٽرانسڪروم انڊڪشن کي 83A: 476 تي ظاهر ڪيو.ھن سيٽ ۾ ھڪڙي TIR-NBS-LRR جين (tanjilg_05042)، پنج CC-NBS-LRR جينز (tanjilg_06165, tanjilg_06162, tanjilg_22773, tanjilg_22640, and tanjilg_22640, and tanjilg_16, tanjilg_16, and tanjilg16) 62)، ۽ چار NBS-LRRE (tanjilg_16162) گڏوگڏ چار NBS-Lrr (tanjilg_16162) ۽ چار NBS-LRR (TANJILG_16162).انهن سڀني جينن ۾ ڪننيڪل ڊومينز محفوظ ڪيل ترتيبن ۾ ترتيب ڏنل آهن.NBS-LRR ڊومين جين جي علاوه، 6 hpi تي ڪيترائي RLL ڪنيز چالو ڪيا ويا، يعني ھڪڙو بورگين (TanjilG_19877) ۾، ٻه منڊلپ ۾ (TanjilG_07141 ۽ TanjilG_19877) ۽ آبادي ۾ 22660 (TanjilG_19877 ۽ TanjilG1302) 27:476.
C. lupini (strain Col-08) سان انووليشن جي جواب ۾ خاص طور تي تبديل ٿيل اظهار سان جينز کي جين آنٽولوجي (GO) جي افزودگي تجزيي (ضمني جدول S8) جي تابع ڪيو ويو. سڀ کان وڌيڪ بار بار پيش ڪيل حياتياتي عمل جو اصطلاح ”GO:0006952 دفاعي جواب“ هو جيڪو 6 مان 16 ۾ ظاهر ٿيو (وقت × لڪير) اعليٰ اهميت سان گڏ مجموعو (P قدر <0.001) (تصوير 2). سڀ کان وڌيڪ بار بار پيش ڪيل حياتياتي عمل جو اصطلاح ”GO:0006952 دفاعي جواب“ هو جيڪو 6 مان 16 ۾ ظاهر ٿيو (وقت × لڪير) اعليٰ اهميت سان گڏ مجموعو (P قدر <0.001) (تصوير 2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 защитный отвевя6», время × линия) комбинаций с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). سڀ کان وڌيڪ بار بار پيش ڪيل حياتياتي عمل جو اصطلاح 'GO: 0006952 دفاعي جواب' هو، جيڪو 6 مان 16 ۾ ظاهر ٿيو (وقت × نسب) وڏي اهميت سان گڏ (P قدر <0.001) (تصوير 2).最常被过度代表的生物过程术语是“GO:0006952 防御反应”具有高显着性（P 值<0.001））图2）. سڀ کان وڌيڪ نمايان حياتياتي عمل جو اصطلاح ”GO:0006952 دفاعي جواب“ آهي، جيڪو ظاهر ٿئي ٿو 6 مان 16 (时间×线) مجموعن ۾، وڏي اهميت سان (P value <0.001) (图2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 دفاعي جواب»، который появленным который появленным мя × линия) с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). سڀ کان وڌيڪ بار بار پيش ڪيل حياتياتي عمل جو اصطلاح 'GO: 0006952 دفاعي جواب' هو، جيڪو 6 مان 16 مجموعن ۾ ظاهر ٿيو (وقت × لڪير) وڏي اهميت سان (P قدر <0.001) (تصوير 2).هي اصطلاح 83A: 476 ۽ بورگين (6 ۽ 24 hpi) ۾ ٻن وقتن جي پوائنٽن تي وڌيڪ نمائندگي ڪئي وئي ۽ هڪ وقت تي منڊلپ ۽ آبادي 22660 (ترتيب سان 12 ۽ 6 hpi).اهو هڪ متوقع نتيجو آهي، مزاحمتي لائنن جي antifungal ردعمل کي نمايان ڪندي.ان کان علاوه، 83A:476 C. lupini جو جواب ڏنو تيزيءَ سان آڪسائيڊيوٽ برسٽ سان لاڳاپيل جين کي ظاھر ڪري ٿو "GO: 0055114 redox process" جي اصطلاح سان، ھڪڙي مخصوص دفاعي ردعمل کي ظاھر ڪري ٿو، جڏهن ته بورگين مخصوص دفاعي جوابن کي ظاهر ڪيو، اصطلاح 'GO' سان لاڳاپيل.:0006950 دٻاءُ جو جواب“.آبادي 22660 افقي مزاحمتي ردعمل کي چالو ڪيو جنهن ۾ ثانوي ميٽابولائٽس شامل آهن، اصطلاحن جي گھڻي تعداد کي نمايان ڪندي "GO:0016104 پروسيس آف ٽرٽرپين بايو سنٿيسس" ۽ "GO: 0006722 ٽرٽرپين ميٽابولزم جو عمل" (ٻنهي اصطلاحن جو تعلق ساڳيو ئي حساب سان ورتو وڃي ٿو)، نتيجن جي مقرر ڪيل اصطلاحن سان لاڳاپيل آهي. sis، Mandelup ردعمل جي استحڪام بورگين ۽ آبادي 22660 جي وچ ۾ هئي. ان کان علاوه، ابتدائي رد عمل 83A: 476 (6 hpi) ۽ دير سان رد عمل Mandelup ۽ پاپوليشن 22660 ۾ GO:0015979 'photosynthesis' ۽ ٻيا لاڳاپيل حياتياتي عمل شامل آهن.
بايوپروسيس جين آنٽولوجي اصطلاحن جي تشريح ۾ مختلف طور تي ظاهر ڪيل جين جي تشريح ۾ چونڊيل تنگ-ليڊ ليوپين (NLL) جي ٽرانسڪرپٽوم جوابن دوران اينٿراڪس لوپين (Col-08 strain حاصل ڪيل ليوپين فيلڊز وائرزينس، پولينڊ ۾، 1999 ۾) وڏي پيماني تي آهن.اين ايل ايل لائينز جو تجزيو ڪيو ويو: 83A: 476 (مزاحمتي، homozygous Lanr1 allele کڻڻ)، بورگين (مزاحمتي، نامعلوم جينياتي پس منظر)، منڊلپ (معتدل طور تي مزاحمتي، homozygous AnMan allele کڻڻ) ۽ آبادي 22660 (مشڪل).
ڇاڪاڻ ته هن مطالعي جو مقصد انهن جين جي سڃاڻپ ڪرڻ آهي جيڪي اينٿراڪنوز جي مزاحمت ۾ حصو وٺندا آهن، جين کي مقرر ڪيو ويو اصطلاحن GO “GO: 0006952 Defensive Respons” ۽ “GO: 0055114 Redox processes” ڪٽ-آف سان تجزيو ڪيو ويو ڇاڪاڻ ته بيس لائين مطلب گهٽ ۾ گهٽ ≥ 30 سان.× وقت ۾ پوائنٽ log2 جي شمارياتي طور تي اهم قدرن کي گڏ ڪندي (فولڊ تبديلي).انهن معيارن کي پورا ڪندڙ جين جو تعداد GO: 0006952 لاءِ 65 ۽ GO: 0055114 لاءِ 524 هو.
83A: 476 GO:0006952 اصطلاح سان بيان ڪيل ٻه DEG چوٽيون ظاهر ڪيون، پهرين 6 جينز في انچ (64 جينز، مٿي ۽ هيٺ ريگيوليشن) ۽ ٻيو 24 جينز في انچ (15 جينز، صرف اپ ريگيوليشن).بورگين اهو پڻ ڏيکاري ٿو ته GO: 0006952 ساڳئي وقت پوائنٽ تي، پر گهٽ DEG (11 ۽ 8) ۽ ترجيحي چالو ڪرڻ سان.منڊيلوپ GO:0006952 جون ٻه چوٽيون 12 ۽ 48 HPI تي ڏيکاريون، ٻئي 12 جين کڻي ويا (پهرين جنن کي چالو ڪندڙ جين سان، ۽ ٻيو صرف دٻائڻ واري جين سان)، جڏهن ته 22660 آبادي 6 HPI تي (13 جينز) جي واڌ جي وڏي اهميت هئي.ضابطو.اهو ياد رکڻ گهرجي ته GO:0006952 DEG جو 96.4٪ انهن چوٽي ۾ ساڳئي قسم جو جواب (مٿي يا هيٺ) هو، جنهن ۾ شامل جين جي تعداد ۾ اختلافن جي باوجود دفاعي جوابن ۾ هڪ اهم اوورليپ جو اشارو آهي.GO:0006952 اصطلاح سان لاڳاپيل ترتيبن جو سڀ کان وڏو گروپ Starvation Stress- Associated Message Protein 22 (SAM22-like) کي انڪوڊ ڪري ٿو، جنهن جو تعلق ڪلاس 10 pathogenesis سان لاڳاپيل پروٽين (PR-10) پروٽين ڪليڊ ۽ ڪور پروٽين ليٽڪس سان آهي.ملندڙ (MLP-like) پروٽين) پروٽين (Fig. 3).ٻنهي گروهن جي اظهار جي فطرت ۽ جواب جي هدايت ۾ اختلاف هئا.جينز انڪوڊنگ SAM22-جهڙوڪ پروٽينن کي شروعاتي وقت جي پوائنٽن (6 يا 12 hpi) تي هڪجهڙائي ۽ اهم انڊڪشن ڏيکاريا ويا ۽ عام طور تي تجربي جي آخر ۾ غير جوابده هئا (48 hpi)، جڏهن ته MLP-جهڙوڪ پروٽين 6 hpi تي ڪوآرڊينيشن ڏيکاريا.hpi.83A: 476 ۽ منڊلپ 48 hp/in تي، لڳ ڀڳ ٻيا سڀئي ڊيٽا پوائنٽون غير جوابدار هئا.ان کان علاوه، SAM22-جهڙوڪ پروٽين جين جي اظهار جي پروفائلز ۾ اختلاف انتھراڪينوز مزاحمت ۾ مشاهدو تبديلين جي پيروي ڪئي، جيئن ته وڌيڪ مزاحمتي لائينون وڌيڪ وقت پوائنٽون ھيون جيڪي انھن جين کي وڌيڪ حساس جين جي ڀيٽ ۾ شامل ڪن ٿا.ٻيو LlR18A/B-جهڙوڪ PR-10 جين SAM22-جهڙوڪ پروٽين جين سان تمام گهڻو ساڳيو اظهار نموني ڏيکاريو.
حياتياتي عمل جي اصطلاح جا مکيه اجزاء "GO: 0006952 دفاعي جواب" ۽ Lanr1 ۽ AnMan alleles جي اميدوار جين جي اظهار جي نمونن جي نشاندهي ڪئي وئي.Log2 اسڪيل log2 قدرن جي نمائندگي ڪري ٿو (فولڊ تبديلي) جي وچ ۾ inoculated (Colletotrichum lupini، strain Col-08، حاصل ڪيل لوپين فيلڊز، Wizhenica، Poland، 1999) ۽ ڪنٽرول (sham-inoculated) ٻوٽن جي وچ ۾ ساڳئي وقت پوائنٽ.هيٺيون narrowleaf lupin سٽون تجزيو ڪيو ويو: 83A: 476 (مزاحمتي، homozygous Lanr1 allele کڻڻ)، بورگين (مزاحمتي، جينياتي پس منظر اڻڄاتل)، منڊيلپ (معتدل طور تي مزاحمتي، homozygous AnMan allele کڻڻ)، ۽ آبادي 22660 (مثبت).
ان کان علاوه، RNA-seq اميدوار جين Lanr1 (TanjilG_05042) ۽ AnMan (TanjilG_12861) جي اظهار جي پروفائلز جو جائزو ورتو ويو (تصوير 3).TanjilG_05042 جين 83A: 476 تي هڪ اهم ردعمل (فعاليت) ڏيکاريو صرف پهرين وقت جي نقطي تي (6 hpi)، جڏهن ته TanjilG_12861 Mandeloop ۾ صرف ٻن وقتن پوائنٽن تي اهم هو: 6 hpi (ڊائون ريگيوليشن) ۽ 24 hpi (6 hpi).سان.).ترتيب ڏيڻ)).
GO: 0055114 اصطلاح ۾ سڀ کان وڌيڪ متاثر ٿيل جين "ريڊوڪس پروسيس" اهي جينز انڪوڊنگ سائٽو ڪروم P450 پروٽين ۽ پيرو آڪسائيڊس هئا (تصوير 4).83A کان الڳ ٿيل نمونن لاءِ: 476 تي 6 HPI، وڌ ۾ وڌ يا گهٽ ۾ گهٽ لاگ 2 (فولڊ تبديلي) قدر (86.6٪ جينز لاءِ) عام طور تي انوول ٿيل ۽ ڪنٽرول پلانٽس جي وچ ۾ مشاهدو ڪيو ويو، هن جينوٽائپ جي اعلي ردعمل کي نمايان ڪندي جنس کي انوول ڪرڻ لاءِ.83A: 476 ڏيکاريو سڀ کان اهم GO: 0055114 DEG 6 hpi تي (503 جينس)، جڏهن ته باقي لائينون 48 hpi تي (بورگين، 31 جينس؛ منڊلپ، 85 جينس؛ ۽ آبادي 22660، 78 جينس)).GO:0055114 خاندان جي اڪثر جين ۾، ويڪسينيشن جا ٻه قسم جا جواب ڏٺا ويا (چالو ۽ منع).دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، GO: 0055114 جي اصطلاح لاءِ 97.6 سيڪڙو تائين DEGs جي نشاندهي ڪئي وئي آهي Mandelupe ۾ 48 hp تي اهي مشاهدا پيش ڪن ٿا ته، وڏي پيماني تي ننڍي پيماني جي باوجود (يعني ميوٽيڊ ريڊڪس جين جو تعداد، 85 بمقابله 503)، دير ٿيڻ جو نمونو هڪجهڙائي واري ٽرانسڪرپٽوم جي شروعاتي ٽرانسڪرپٽوم 48 جي جوابن ۾ آهي. 76.بورگين ۽ آبادي 22660 ۾، هي ڪنورجنسي گهٽ آهي 51.6٪ ۽ 75.6٪، ترتيب سان.
حياتياتي عمل جي اصطلاح جي مکيه حصن جي اظهار جا نمونا "GO: 0055114 Redox پروسيس" ظاهر ڪيا ويا.Log2 اسڪيل log2 قدرن جي نمائندگي ڪري ٿو (فولڊ تبديلي) جي وچ ۾ inoculated (Colletotrichum lupini، strain Col-08، حاصل ڪيل لوپين فيلڊز، Wizhenica، Poland، 1999) ۽ ڪنٽرول (sham-inoculated) ٻوٽن جي وچ ۾ ساڳئي وقت پوائنٽ.هيٺيون narrowleaf lupin سٽون تجزيو ڪيو ويو: 83A: 476 (مزاحمتي، homozygous Lanr1 allele کڻڻ)، بورگين (مزاحمتي، جينياتي پس منظر اڻڄاتل)، منڊيلپ (معتدل طور تي مزاحمتي، homozygous AnMan allele کڻڻ)، ۽ آبادي 22660 (مثبت).
83A:476 C. lupini (strain Col-08) سان انوڪيوليشن لاءِ ٽرانسڪرٽوميڪ جوابن ۾ پڻ شامل ڪيل جينز جي هموار ٿيل خاموشي شامل آهي اصطلاح GO:0015979 "photosynthesis" ۽ ٻيا لاڳاپيل حياتياتي عمل (FIG. 5).هي GO: 0015979 DEG سيٽ ۾ 105 جينز شامل آهن جيڪي خاص طور تي 6 hpi تي 83A: 476 تي دٻجي ويا.هن ذيلي سيٽ ۾، 37 جين پڻ منڊلپ ۾ 48 HPI ۽ 35 تي ساڳئي وقت 22660 جي آبادي ۾ گهٽجي ويا، جن ۾ 19 DEGs ٻنهي جينوٽائپس لاءِ عام آهن.اصطلاح GO: 0015979 سان لاڳاپيل ڪوبه DEGs ڪنهن به ميلاپ ۾ خاص طور تي چالو نه ڪيا ويا (لائن x وقت).
حياتياتي عمل جي اصطلاح جي مکيه حصن جي اظهار جا نمونا "GO:0015979 Photosynthesis" ظاهر ڪيا ويا.Log2 اسڪيل log2 قدرن جي نمائندگي ڪري ٿو (فولڊ تبديلي) جي وچ ۾ inoculated (Colletotrichum lupini، strain Col-08، حاصل ڪيل لوپين فيلڊز، Wizhenica، Poland، 1999) ۽ ڪنٽرول (sham-inoculated) ٻوٽن جي وچ ۾ ساڳئي وقت پوائنٽ.هيٺيون narrowleaf lupin سٽون تجزيو ڪيو ويو: 83A: 476 (مزاحمتي، homozygous Lanr1 allele کڻڻ)، بورگين (مزاحمتي، جينياتي پس منظر اڻڄاتل)، منڊيلپ (معتدل طور تي مزاحمتي، homozygous AnMan allele کڻڻ)، ۽ آبادي 22660 (مثبت).
تفريق واري اظهار جي تجزيي جي نتيجن جي بنياد تي ۽ ممڪن طور تي pathogenic fungi جي خلاف دفاعي جوابن ۾ ملوث، ستن جينز جو هي سيٽ حقيقي وقت PCR (ضمني جدول S9) ذريعي اظهار جي پروفائيل جي مقدار جي لاءِ چونڊيو ويو.
پوٽيوٽو پروٽين جين TanjilG_10657 خاص طور تي سڀني مطالعي جي لائينن ۽ وقت جي پوائنٽن ۾ ڪنٽرول (ممڪ) ٻوٽن (ضمني جدول S10، S11) جي مقابلي ۾ شامل ڪيو ويو.ان کان علاوه، TanjilG_10657 جي اظهار جي پروفائيل سڀني لائينن جي تجربن جي دوران وڌندڙ رجحان ڏيکاري ٿي.آبادي 22660 تنجيل جي_10657 جي سڀ کان وڌيڪ حساسيت کي 114-گنا چالو ڪرڻ سان انووليشن ۽ 24 HPI (تصوير 6a) تي اعليٰ نسبتي اظهار جي سطح (4.4 ± 0.4) ڏيکاري ٿي.PR10 LlR18A پروٽين جين TanjilG_27015 پڻ سڀني لائينن ۽ ٽائيم پوائنٽس تي چالو ڪيو، اڪثر ڊيٽا پوائنٽس (تصوير 6b) تي شمارياتي اهميت سان.TanjilG_10657 وانگر، TanjilG_27015 جي بلند ترين نسبتي اظهار جي سطح 22660 انوول ٿيل آبادي ۾ 24 HPI (19.5 ± 2.4) ۾ ڏٺو ويو.تيزاب endochitinase جين TanjilG_04706 خاص طور تي سڀني لائينن ۽ هر وقت پوائنٽن ۾ خاص طور تي مٿي ڪيو ويو سواء بورگين 6 hpi (Fig. 6c).اهو مضبوط طور تي پهريون ڀيرو پوائنٽ (6 HPI) تي 83A تي وڌايو ويو: 476 (10.5 ڀيرا) ۽ وچولي طور تي ٻين لائينن ۾ وڌايو ويو (6.6-7.5 ڀيرا).تجربي دوران، TanjilG_04706 جو اظهار 83A:476 ۽ Boregine ۾ ساڳي سطح تي رهيو، جڏهن ته Mandelup ۽ Population 22660 ۾ اهو خاص طور تي وڌيو، نسبتاً اعليٰ قدرن تائين پهچي ويو (5.9 ± 1.5 ۽ 6.2 ± 1.5، ترتيب سان).Endoglucan-1,3-β-glucosidase-like جين TanjilG_23384 پهرين ٻن ٽائيم پوائنٽس (6 ۽ 12 hpi) تي تمام گهڻي چالو ڏيکاريو سواءِ آبادي 22660 (تصوير 6d).TanjilG_23384 جي بلند ترين لاڳاپي واري اظهار جي سطح ٻئي وقت جي پوائنٽ (12 hpi) تي منڊلپ (2.7 ± 0.3) ۽ 83A: 476 (1.5 ± 0.1) ۾ ڏٺو ويو.24 HPI تي، TanjilG_23384 اظهار نسبتاً گهٽ هو سڀني مطالعي ڪيل لائينن ۾ (0.04 ± 0.009 کان 0.44 ± 0.12 تائين).
چونڊيل جينز (ag) جو اظهار پروفائل مقداري PCR پاران ظاهر ڪيو ويو آهي.انگ 6، 12 ۽ 24 ويڪسينيشن کان پوء ڪلاڪ جي نمائندگي ڪن ٿا.LanDExH7 ۽ LanTUB6 جينز کي عام ڪرڻ لاءِ استعمال ڪيو ويو ۽ LanTUB6 استعمال ڪيو ويو انٽر-سيريز حساب ڪتاب لاءِ.نقص بار ٽن حياتياتي نقلن جي بنياد تي معياري انحراف جي نمائندگي ڪن ٿا، جن مان هر هڪ ٽن ٽيڪنيڪل نقلن جي اوسط آهي. انگن اکرن جي وچ ۾ اظهار جي سطحن ۾ فرق جي انگن اکرن جي اهميت (Colletotrichum lupini, strain Col-08, 1999 ۾ حاصل ڪيل لوپين فيلڊ مان وائرزينيڪا، پولينڊ) ۽ ڪنٽرول (موڪ-انوڪيولڊ) ٻوٽن جي ڊيٽا پوائنٽس مٿان نشان لڳل آهن (*P value <0.05,*P value <0.05, ***≤0. 01). انگن اکرن جي وچ ۾ اظهار جي سطحن ۾ فرق جي انگن اکرن جي اهميت (Colletotrichum lupini, strain Col-08, 1999 ۾ حاصل ڪيل لوپين فيلڊ مان وائرزينيڪا، پولينڊ) ۽ ڪنٽرول (موڪ-انوڪيولڊ) ٻوٽن جي ڊيٽا پوائنٽس مٿان نشان لڳل آهن (*P value <0.05,*P value <0.05, ***≤0. 01). Статистическая значимость различий в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамм Col-08, Волучен 9 получен в 9 рженице, Польша) и контрольными (ложно инокулированными) растениями отмечена над точками данных (*значение P < 0,05, P <0,05, P*01** ≤ 0,001). انگن اکرن جي وچ ۾ اظهار جي سطح ۾ اهم فرق (Colletotrichum lupini، strain Col-08، حاصل ڪيل 1999 ۾ هڪ لوپين فيلڊ مان وائيرزينس، پولينڊ) ۽ ڪنٽرول (شيم-انوڪيولڊ) ٻوٽن جي وچ ۾ ڊيٽا پوائنٽس (*P قدر <0.05، ***P-value <0.05, ***P-value 0≤01 ***P-value. ).接种 (Colletotrichum lupini, Col-08株, 1999年从波兰Wierzenica的羽扇豆田获得）和对照澗和对照弉澽拟接苴苏鍉龍復有素差异的统计学显着性标记在数据点上方（*P值<0.05، **P 值≤ 0.01، ***P 值≤ 0.001).接种 （colletotrichum lupini ， color-08 株 ， 1999 年 波兰 波兰 wierzenica 的 羽扇 获得） 和 对照 弈湴湉 弈湴片差异 的统计学 显着性 标记 数据点 上方*p 值 <0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001). STATISTICHESKI значимые различия в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамм Col-08, полученный полученный полученный полученный, ольша, 1999 ۾ ение ≤ 0,001). انگن اکرن جي وچ ۾ اظهار جي سطحن ۾ اهم فرق (Colletotrichum lupini, strain Col-08, حاصل ڪيل لوپين فيلڊز مان ورزينس، پولينڊ، 1999 ۾) ۽ ڪنٽرول (شيم-انوڪيولڊ) ٻوٽن جي ڊيٽا پوائنٽن جي مٿان نوٽ ڪيل آهن (*P قدر <0.05، ***P-value **P-value <0.05, ***P-value 0. 1).اين ايل ايل لائينز جو تجزيو ڪيو ويو: 83A: 476 (مزاحمتي، homozygous Lanr1 allele کڻڻ)، منڊلپ (معتدل طور تي مزاحمتي، homozygous AnMan allele کڻڻ)، بورگين (مزاحمتي، نامعلوم جينياتي پس منظر) ۽ آبادي 22660 (مشڪل).
اميدوار جين TanjilG_05042 Lanr1 locus تي RNA-seq مطالعي مان حاصل ڪيل پروفائلز (تصوير 6e) مان واضح طور تي مختلف اظهار جو نمونو ڏيکاريو.هن جين جي اهم ڪارڪردگي منڊيلپ ۽ 22660 جي آبادي ۾ (ترتيب سان 39.7 ۽ 11.7 ڀيرا تائين) ڏٺو ويو، نتيجي ۾ نسبتا اعلي سطحي اظهار جي سطح (ترتيب سان 1.4 ± 0.14 ۽ 7.2 ± 1.3 تائين).83A:476 تنجيلG_05042 جين (3.8-گنا تائين) جي ڪجهه اپ گريجوئيشن پڻ ظاهر ڪيو، جڏهن ته، حاصل ڪيل لاڳاپا اظهار جي سطح (0.044 ± 0.002) منڊيلپ ۽ 22660 جي آبادي ۾ مشاهدو ڪيل ماڻهن جي ڀيٽ ۾ 30-گنا کان گهٽ هئي.qPCR پاران تجزيو ڪيو ويو ته ظاهري سطحن ۾ نمايان فرق ظاهر ڪيا ويا جينوٽائپس جي وچ ۾ ٺٺوليون ويڪسين ٿيل (ڪنٽرول) مختلف قسمن جي وچ ۾ 58-گنا فرق تائين پهچندي آبادي 22660 ۽ 83A: 476 جي وچ ۾، انهي سان گڏ آبادي 22660 ۽ 22660 جي وچ ۾. هڪ ٻه-گنا فرق حاصل ڪيو ويو.
AnMan Locus، TanjilG_12861 تي اميدوار جين، 83A: 476 ۾ ويڪسينيشن جي جواب ۾ چالو ڪيو ويو ۽ منڊلپ، 22660 آبادي ۾ غير جانبدار هو، ۽ بورگين (تصوير 6f) ۾ گهٽجي ويو.TanjilG_12861 جين جو لاڳاپو اظهار 83A: 476 (0.14±0.01) ۾ سڀ کان وڌيڪ هو.17.4 kDa ڪلاس I گرمي جھٽڪو پروٽين جين TanjilG_05080 HSP17.4 سڀني مطالعي ڪيل اسٽرين ۽ ٽائيم پوائنٽس (تصوير 6g) ۾ گھٽ نسبتي اظهار جي سطح ڏيکاري ٿي.سڀ کان وڌيڪ قدر 24 HPI تي 22660 جي آبادي ۾ ڏٺو ويو (0.14 ± 0.02، ويڪسينيشن جي جواب ۾ اٺ گنا اضافو).
جين ايڪسپريس پروفائلز جو مقابلو (تصوير 7) تنجيل جي_10657 ۽ چئن ٻين جينز جي وچ ۾ هڪ اعلي تعلق ظاهر ڪيو: TanjilG_27015 (r = 0.89)، TanjilG_05080 (r = 0.85)، TanjilG_05042 (r = 0.85)، TanjilG_05042 (r = 0.7) ۽ TanjilG_05042 (r = 0.7).اهڙا نتيجا ظاهر ڪري سگھن ٿا انهن جين جي گڏيل ضابطي جي دفاعي جوابن دوران.TanjilG_12861 ۽ TanjilG_23384 جينز ٻين جين جي مقابلي ۾ هيٺين پيئرسن جي لاڳاپن جي کوٽائي واري قدرن (ترتيب سان 0.08 کان 0.43 ۽ -0.19 کان 0.28 تائين) سان مختلف اظهاري پروفائل ڏيکاريا.
جيني اظهار جي پروفائلز جي وچ ۾ لاڳاپا مقدار جي پي سي آر استعمال ڪندي ڳوليا ويا.هيٺيون narrowleaf lupin لائينون تجزيو ڪيو ويو: 83A: 476 (مزاحمتي، homozygous Lanr1 allele کڻڻ)، Mandelup (معتدل طور تي مزاحمتي، homozygous AnMan allele کڻڻ)، بورگين (مزاحمتي، جينياتي پس منظر اڻڄاتل)، ۽ آبادي 22660.ٽي ٽائم پوائنٽس ڳڻيا ويا (6، 12 ۽ 24 ڪلاڪ انووليشن کان پوءِ)، جنهن ۾ انوڪيولڊ (Colletotrichum lupini, strain Col-08, Wierzhenice, Poland, 1999 ۾ lupin fields مان حاصل ڪيل) ۽ ڪنٽرول (sham-inoculated) ٻوٽا شامل آهن.پيماني تي پيئرسن جي رابطي جي کوٽائي جي قيمت ڏيکاري ٿي.
6 هارس پاور في انچ تي حاصل ڪيل ڊيٽا جي بنياد تي، WGCNA 9981 DEG تي ڪيو ويو جنهن جي نشاندهي ڪئي وئي انڪوليٽيڊ ۽ ڪنٽرول پلانٽس جي ڀيٽ ڪندي ابتدائي دفاعي جوابن تي ڌيان ڏيڻ لاءِ (ضمني جدول S12).22 جين ماڊلز (ڪلسٽر) جينوٽائپس ۽ تجرباتي مختلف قسمن جي وچ ۾ باهمي تعلق رکندڙ (مثبت يا منفي) اظهار جي پروفائيل سان مليا ويا. سراسري طور تي، جين جي اظهار جي سطح 83A: 476> Mandelup> Boregine> Population 22660 جي ترتيب ۾ هيٺ اچي رهيا هئا (ٻنهي مختلف قسمن ۾، جڏهن ته، هي رجحان ڪنٽرول پلانٽ ۾ مضبوط هو). سراسري طور تي، جين جي اظهار جي سطح 83A: 476> Mandelup> Boregine> Population 22660 جي ترتيب ۾ هيٺ اچي رهيا هئا (ٻنهي مختلف قسمن ۾، جڏهن ته، هي رجحان ڪنٽرول پلانٽ ۾ مضبوط هو). В среднем уровни экспрессии генов снижались в порядке 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 ٽرولنыh растений). سراسري طور تي، جيني اظهار جي سطح 83A: 476> Mandelup> Boregine> Population 22660 ۾ گھٽجي وئي (ٻنهي مختلف قسمن ۾، جيتوڻيڪ، ڪنٽرول پلانٽ ۾ اهو رجحان مضبوط هو).平均而言，基因表达水平按83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660植物中更强).平均 而 言 ， 基因 水平 按 83a: 476> mandelup> boregine> آبادي 22660更) .. В среднем уровни экспрессии генов снижались в ряду 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 х растений). سراسري طور تي، جيني اظهار جي سطح سيريز 83A ۾ گهٽجي وئي: 476> منڊلپ> بورگين> آبادي 22660 (جڏهن ته، ٻنهي قسمن ۾، هي رجحان ڪنٽرول پلانٽ ۾ مضبوط هو).ويڪسينيشن جي نتيجي ۾ جين جي اظهار کي وڌايو ويو، خاص طور تي ماڊلز 18، 19، 14، 6 ۽ 1 (اثر جي هيٺئين ترتيب ۾)، منفي ضابطن (مثال طور ماڊل 9 ۽ 20) يا غير جانبدار اثرات سان (مثال طور ماڊلز 11، 22، 8 ۽ 13).GO اصطلاح جي افزودگي جو تجزيو (ضمني جدول S13) پڌرو ڪيو “GO: 0006952 حفاظتي جوابن” لاءِ انوڪيولڊ ماڊل (18) وڌ ۾ وڌ چالو ڪرڻ سان، جن ۾ جينز جو تجزيو ڪيو ويو qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_233384, TanjilG_233874, TanjilG_233874, TanjilG_23338,18) گھڻا انوڪوليٽ سڀ کان وڌيڪ دٻايل فوٽوسنٿيسس ماڊلز (9).ماڊل 18 ڪنسنٽريٽر (تصوير 8) جي سڃاڻپ TanjilG_26536 جين طور ڪئي وئي جيڪا PR-10-like LlR18B پروٽين کي انڪوڊنگ ڪري ٿي، ۽ ماڊل 9 ڪنسنٽريٽر تنجيلG_28955 جين طور سڃاڻپ ڪئي وئي جيڪا فوٽو سسٽم II PsbQ پروٽين کي انڪوڊنگ ڪري ٿي.هڪ اميدوار anthracnose resistance gene Lanr1، TanjilG_05042، ماڊل 22 (Fig. 9) ۾ مليو ۽ اصطلاحن سان جڙيل آهي "GO: 0044260 Cellular macromolecular metabolic processes" ۽ "GO: 0006355 Transscriptional templating dNAG1_2"جين انڪوڊ ڪري ٿو گرمي جي دٻاء واري ٽرانسپشن فيڪٽر A-4a (HSFA4a).
وزني نيٽ ورڪ تجزيا ماڊلز جي جين ڪو-اظهار جي بيان ڪيل حياتياتي عمل جي اصطلاحن سان گڏ "GO: 0006952 دفاعي جواب".qPCR (TanjilG_04706، TanjilG_23384، TanjilG_10657 ۽ TanjilG_27015) پاران تجزيو ڪيل چار جينز کي اجاگر ڪرڻ لاءِ ليگيشن کي آسان ڪيو ويو.
وزني نيٽ ورڪ جو تجزيو هڪ ماڊل جي جين ڪو-اظهار جو هڪ وڌيڪ پيش ڪيل حياتياتي عمل جي اصطلاح سان "GO: 0006355: ٽرانسپشنل ريگيوليشن، ڊي اين اي ٽيمپليٽنگ" ۽ هڪ اميدوار اينٿراڪنوز مزاحمت جيني Lanr1 TanjilG_05042 کڻڻ.TanjilG_05042 جين ۽ مرڪزي TanjilG_01212 جين کي الڳ ڪرڻ لاءِ ليگيشن کي آسان ڪيو ويو.
آسٽريليا ۾ گڏ ڪيل Anthracnose resistance screening ڏيکاريو ويو ته اڪثر ابتدائي آزاد ڪيل ٻوٽا حساس هئا؛ڪاليا، ڪورومپ ۽ منڊلپ کي معتدل مزاحمتي طور بيان ڪيو ويو آهي، جڏهن ته وونگا، تنجيل ۽ 83A:476 کي انتهائي مزاحمتي 26,27,31 طور بيان ڪيو ويو آهي.ساڳي مزاحمتي ايليل هئي، جنهن کي Lanr1 نامزد ڪيو ويو هو، ۽ Coromup ۽ Mandelup وٽ هڪ مختلف ايليل هو، جنهن کي AnMan10، 26، 39 نامزد ڪيو ويو هو، جڏهن ته ڪاليا هڪ مختلف ايليل تي گذريا هئا., Lanr2.جرمني ۾ anthracnose مزاحمت لاءِ اسڪريننگ جي نتيجي ۾ هڪ مزاحمتي ليڪ Bo7212 جي سڃاڻپ ڪئي وئي جنهن ۾ Lanr1 کان سواءِ اميدوار ايللي، نامزد ٿيل LanrBo36.
اسان جي مطالعي مان معلوم ٿئي ٿو ته آزمائشي جراثيم ۾ Lanr1 ايللي جي تمام گهٽ تعدد (اٽڪل 6٪) آهي.اهو مشاهدو Anseq3 ۽ Anseq4 مارڪر استعمال ڪندي اوڀر يورپي جراثيم جي اسڪريننگ جي نتيجن سان مطابقت رکي ٿو، جنهن ڏيکاريو ته Lanr1 ايليل صرف ٻن بيلاروسي لائينن ۾ موجود آهي.هن مان معلوم ٿئي ٿو ته Lanr1 ايللي اڃا تائين وڏي پيماني تي مقامي نسلن جي پروگرامن پاران استعمال نه ڪيو ويو آهي، برعڪس آسٽريليا ۾، جتي اهو مارڪر جي مدد سان نسل جي لاء اهم ايلليز مان هڪ آهي.اهو ٿي سگهي ٿو آسٽريلوي رپورٽ جي مقابلي ۾ يورپي فيلڊ جي حالتن ۾ Lanr1 ايليل پاران مهيا ڪيل مزاحمت جي هيٺين سطح جي ڪري.ان کان علاوه، آسٽريليا ۾ تيز برسات وارن علائقن ۾ anthracnose جي مطالعي مان معلوم ٿئي ٿو ته Lanr1 ايللي جي وچ ۾ مزاحمتي ردعمل شايد موسم جي حالتن ۾ اثرائتو نه ٿي سگھي جيڪي 19,42 جي بيماري جي ترقي ۽ تيزيء سان ترقي ڪن ٿا.حقيقت ۾، موجوده مطالعي ۾، Anthracnose جون ڪجهه علامتون Lanr1 allele کڻڻ واري جينوٽائپس ۾ پڻ ڏٺيون ويون، جن مان معلوم ٿئي ٿو ته مزاحمت سي. لوپيني جي ترقي لاء مناسب حالتن ۾ غائب ٿي سگهي ٿي.ان کان علاوه، Anseq3 ۽ Anseq4 مارڪرز جي موجودگي جي غلط مثبت تشريحون، جيڪي تقريبا 1 سينٽي ميٽر کان Lanr1 لوڪس آهن، ممڪن آهن 28,30,43.
اسان جي مطالعي مان معلوم ٿئي ٿو ته 83A:476، Lanr1 ايليل کڻي، C. lupini inoculation جو جواب ڏنو، وڏي پيماني تي ٽرانسڪرپٽوم ريپروگرامنگ سان پهرين تجزياتي ٽائيم پوائنٽ (6 hpi) تي، جڏهن ته Mandelup ۾، AnMan allele کي کڻڻ، ٽرانسڪرٽومڪ ردعمل گهڻو پوءِ ڏٺو ويو.(24 کان 48 hp تائين).دفاعي جوابن ۾ اهي عارضي تبديليون بيماري جي علامن ۾ اختلافن سان جڙيل آهن، مزاحمت جي ڪامياب ردعمل لاء ابتدائي پيٽجن جي سڃاڻپ جي اهميت کي اجاگر ڪندي.ٻوٽن جي بافتن کي متاثر ڪرڻ لاءِ، اينٿراڪس اسپورز کي ميزبان جي مٿاڇري تي ڪيترن ئي ترقياتي مرحلن مان گذرڻو پوندو، جن ۾ جراثيم، سيل ڊويزن، ۽ اپريسوريم جو ٺهڻ شامل آهن.ضميمه هڪ متاثر ٿيندڙ ڍانچي آهي جيڪو ميزبان جي مٿاڇري سان ڳنڍيندو آهي ۽ ميزبان بافتن ۾ داخل ٿيڻ کي آسان بڻائي ٿو.اهڙيءَ طرح، مٽر جي نچوڙ ۾ C. gloeosporioides جا spores 75-90 منٽن جي انڪيوبيشن کان پوءِ نيوڪلئس جي پهرين ورهاڱي، 90-120 منٽن کان پوءِ جراثيم جي ٽيوب جي ٺهڻ، ۽ 4 ڪلاڪن کان پوءِ دٻائڻ 45 ڏيکاريا.Mango C. gloeosporioides ڏيکاريا 40 سيڪڙو کان وڌيڪ ڪنڊيئل جراثيم 3 ڪلاڪن جي انڪيوبيشن کان پوءِ ۽ 4 ڪلاڪن کان پوءِ لڳ ڀڳ 20 سيڪڙو اپپريسر جي ٺهڻ.C. gloeosporioides جو وائرليس سان لاڳاپيل CAP20 جين 3.5 h incubation کان پوءِ epiphyte-forming conidia ۾ 4 h 46 min کان پوءِ CAP20 پروٽين جي اعليٰ ڪنسنٽريشن سان ايوڪاڊو مٿاڇري واري موم ۾ ٽرانسپشن واري سرگرمي ڏيکاري ٿي.اهڙيءَ طرح، C. trifolii ۾ melanin biosynthesis genes جي سرگرمي 2 ڪلاڪ انڪيوبيشن دوران پيدا ڪئي وئي جنهن کان پوءِ 1 ڪلاڪ کان پوءِ اپريسوريم ٺهي.پتي جي بافتن جي مطالعي مان معلوم ٿيو آهي ته سي. ايڪوٽتم سان انوڪيول ٿيل اسٽرابري جو پهريون دٻاءُ 8 hpi تي هوندو آهي، جڏهن ته C. coccodes سان انوول ٿيل ٽماٽن جو پهريون دٻاءُ 4 hpi48,49 هوندو آهي.گهڻو ڪري Coletotrichum spp جي ٽائيم اسڪيل سان مطابقت رکي ٿي.انفيڪشن وارو عمل.83A تي تيز دفاعي جواب: 476 هن لڪير ۾ ٻوٽي جي مزاحمت ۽ اثر ڪندڙ-ٽريگرڊ مدافعتي (ETI) جين جي شموليت جو مشورو ڏئي ٿو، جڏهن ته منڊلپ جي دير سان جوابن کي سپورٽ ڪن ٿا مائڪرو-ايسوسيئيڊ ماليڪيولر پيٽرن-ٽريگرڊ اميونٽي (MTI) مفروضو 50. ابتدائي جوابن ڏانهن 83A ۽ Mandelup476.دير ٿيل جواب ۾ مٿي يا هيٺ-منظم ٿيل جين جي وچ ۾ جزوي اوورليپ پڻ هن تصور جي حمايت ڪري ٿو، جيئن ETI اڪثر ڪري هڪ تيز ۽ بهتر MTI ردعمل سمجهيو ويندو آهي جيڪو انفڪشن جي سائيٽ تي پروگرام ٿيل سيل جي موت ۾ ختم ٿئي ٿو، جنهن کي anaphylactic shock 51,52 طور سڃاتو وڃي ٿو.
اڪثر جين منسوب ڪيل اصطلاح جين آنٽولوجي GO:0006952 “Defence Response” آهن 11 homologues of stress-induced fasting message 22 پروٽين (SAM22 سان ملندڙ جلندڙ) ۽ ست وڏيون latex protein-likes (MLPs).-جهڙوڪ پروٽين 31، 34، 43 ۽ 423 ڏيکاريا آهن تسلسل هڪجهڙائي.SAM22-جهڙوڪ جينز اهم ڪارڪردگي ڏيکاريا جيڪي گهڻي عرصي تائين هلن ٿا، ڏيکاريندي اينٿراڪنوز مزاحمت جي وڌندڙ سطحن (83A: 476 ۽ بورگين).جڏهن ته، ايم ايل پي-جهڙي جين صرف اميدوارن جي مزاحمت واري ايليل کي کڻڻ واري لائنن ۾ هيٺيون ڪيون ويون آهن (83A: 476 / Lanr1 6 hpi تي ۽ Mandelup / AnMan 24 hpi تي).اهو ياد رکڻ گهرجي ته سڀئي سڃاڻپ ٿيل SAM22-جهڙا هومولوجز هڪ جين ڪلستر مان نڪرندا آهن جيڪي تقريبن 105 kb تائين ڦهليل آهن، جڏهن ته MLP-جهڙو جين جينوم جي جدا جدا علائقن مان نڪرندا آهن.اهڙي SAM22-جهڙي جين جي همعصر چالو پڻ اسان جي پوئين مطالعي ۾ ملي وئي هئي NLL مزاحمت جي Diaporthetoxica انوکوليشن، اهو مشورو ڏئي ٿو ته اهي دفاعي ردعمل جي افقي اجزاء ۾ شامل آهن.اهو نتيجو پڻ SAM22-جهڙي جين جي مثبت ردعمل جي رپورٽن جي حمايت ڪئي وئي آهي زخم يا علاج سان سليسيلڪ ايسڊ، فنگل انڊيڪرز، يا هائيڊروجن پروڪسائيڊ.
MLP جھڙا جينس ڏيکاريا ويا آھن مختلف ابيٽڪ ۽ حياتياتي دٻاءُ جو جواب ڏيڻ لاءِ، جن ۾ ڪيترن ئي ٻوٽن جي نسلن ۾ بيڪٽيريا، وائرل ۽ پيٿوجينڪ فنگل انفيڪشن شامل آھن55.ٻوٽن ۽ پيٿوجنز جي وچ ۾ ڪجهه رابطي جي جوابن جي هدايتن ۾ سختي سان وڌندڙ (يعني ڪپهه جي ورٽيسيليئم ڊاهليا سان متاثر ٿيڻ دوران) خاص طور تي گهٽجڻ تائين (يعني الٽرنريا ايس پي پي سان انب جي وڻ جي انفيڪشن کان پوءِ) 56,57.ايم ايل پي-جهڙي 423 جين جي اهم گھٽتائي کي ايف نائجر جي انفيڪشن کي ايوڪاڊو جي حفاظت دوران ۽ سيب جي وڻ Botryosphaeria berengeriana f جي انفيڪشن دوران ڏٺو ويو آهي.cn.piricola ۽ Alternaria alternata apple pathotypes58,59 آهن.ان کان علاوه، ايپل ڪالي اوور ايڪسپريسنگ MLP جھڙي 423 جين ۾ مزاحمت سان لاڳاپيل جين جو گهٽ اظهار هو ۽ فنگل انفيڪشن 59 لاءِ وڌيڪ حساس هئا.Fusarium oxysporum f جي پٺيان، MLP جھڙي 423 جين کي به مزاحمتي عام بين جراثيمن ۾ دٻايو ويو.cn.ڀاڄيون انفيڪشن 60.
PR-10 خاندان جا ٻيا ميمبر جن جي سڃاڻپ اسان جي RNA-seq مطالعي ۾ ڪئي وئي LlR18A ۽ LlR18B جينز اپ گريجوئيشن جي جواب ۾، انهي سان گڏ اپريگيولڊ (1 جين) يا هيٺيون (3 جين) جين لپڊ ٽرانسفر پروٽين DIR1 لاءِ..ان کان علاوه، WGCNA هن ماڊل ۾ LlR18B جين کي هڪ مرڪز طور نمايان ڪري ٿو، جيڪو ويڪسينيشن لاءِ انتهائي حساس آهي ۽ ڪيترن ئي حفاظتي ردعمل جين کي کڻي ٿو.LlR18A ۽ LlR18B جينس پيلي لوپين جي پنن ۾ pathogenic بيڪٽيريا جي جواب ۾، انهي سان گڏ NLL اسٽيم ۾ D. toxica انووليشن کان پوء، جڏهن ته انهن جين جي چانورن جي homologue، RSOsPR10، تيزيء سان متاثر ڪيو ويو، هڪ فنگل ايسڊڊ انفڪشن ۾ شامل آهي. DIR1 جين غير مخصوص لپڊ ٽرانسپورٽ پروٽينن کي انڪوڊ ڪري ٿو جيڪي سسٽماتي حاصل ڪيل مزاحمت (SAR) جي شروعات لاء گهربل آهن.حفاظتي رد عمل جي ترقي سان، DIR1 پروٽين کي انفڪشن جي مرڪز مان منتقل ڪيو ويندو آهي فلوم ذريعي SAR کي پري جي عضون ۾ آڻڻ لاء.دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، TanjilG_02313 DIR1 جين خاص طور تي پهريون ڀيرو 84A: 476 ۽ آبادي 22660 جي لائنن ۾ اشارو ڪيو ويو، پر اينٿراڪنوز جي مزاحمت صرف لائن 84A: 476 ۾ ڪاميابي سان ترقي ڪئي.اهو شايد NLL ۾ DIR1 جين جي ڪجهه ذيلي فنڪشنلائيزيشن کي ظاهر ڪري سگھي ٿو، ڇو ته باقي ٽي هومولوگس صرف 83A: 476 لائن ۾ 6 hpi ۾ انووليشن جو جواب ڏنو، ۽ اهو جواب هيٺ ڏنل هدايت ڪئي وئي.
اسان جي مطالعي ۾، "GO: 0055114 ريڊڪس پروسيس" نالي حياتياتي عمل سان لاڳاپيل سڀ کان وڌيڪ عام جزا هئا cytochrome P450 پروٽين، peroxidase، linoleic acid 9S-/13S-lipoxygenase، ۽ 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase.ان کان علاوه، اسان جو WGCNA وضاحت ڪري ٿو HSFA4a homologue هڪ حب کڻندڙ ماڊلز جهڙوڪ Lanr1 مزاحمت جين اميدوار تنجيلG_05042.HSFA4a ٻوٽن ۾ ايٽمي ٽرانسپشن جي ريڊڪس-انحصار ضابطي جو هڪ حصو آهي.
Cytochrome P450 پروٽينس oxidoreductases آهن جيڪي NADPH ۽/يا O2-انحصار هائيڊروڪسيليشن رد عمل کي ابتدائي ۽ ثانوي ميٽابولزم ۾ شامل ڪن ٿا، جن ۾ xenobiotics جي ميٽابولزم، انهي سان گڏ هارمونز، فائيٽي ايسڊز، اسٽيرولز، سيل وال اجزاء، بايوپوليمرز، ۽ اسان جي مطالعي ۾ بايوپولينسس جي 6 جي جامعيت جي حفاظت ڪن ٿا. پلانٽ سائٽو ڪروم P450 فنڪشن -10.6 log2 (فولڊ تبديلي) کان گھٽجي ويو 5.7 جي ڪري وڏي تعداد ۾ تبديل ٿيل هوموولوگس (37) ۽ مخصوص جينز جي وچ ۾ جوابي نمونن ۾ فرق، هڪ مٿي واري نظرثاني کي ظاهر ڪري ٿو..صرف RNA-seq ڊيٽا کي استعمال ڪرڻ لاءِ اين ايل ايل جين جي بنيادي حياتياتي ڪم کي واضح ڪرڻ لاءِ اهڙي وڏي پروٽين ۾ وڏي خانداني طور تي تمام گهڻو قیاس هوندو.بهرحال، اها ڳالهه نوٽ ڪرڻ جي قابل آهي ته ڪجهه cytochrome P450 جينز پيٽروجنڪ فنگس يا بيڪٽيريا جي وڌندڙ مزاحمت سان لاڳاپيل آهن، جن ۾ الرجڪ رد عمل 69,70,71 شامل آهن.
ڪلاس III پيرو آڪسائيڊس ملٽي فنڪشنل پلانٽ اينزائمز آهن جيڪي ٻوٽن جي واڌ ۽ ترقي دوران ميٽابولڪ عملن جي وسيع رينج ۾ شامل آهن، انهي سان گڏ ماحولياتي دٻاءُ جهڙوڪ لوڻ، خشڪي، تيز روشنيءَ جي شدت، ۽ پيٿوجين حملي72 جي جواب ۾.Peroxidases ڪيترن ئي ٻوٽن جي نسلن جي رابطي ۾ ملوث آهن Anthracis سان، جن ۾ Stylosanthes humilis ۽ C. gloeosporioides، Lens culinaris ۽ C. truncatum، Phaseolus vulgaris ۽ C. lindemuthianum، Cucumis sativus ۽ C. lagenarium73,76,74,73.جواب تمام تيز هوندو آهي، ڪڏهن ڪڏهن 4 HPI تي به، ان کان اڳ جو فنگس ٻوٽي جي ٽشوز73 ۾ داخل ٿئي.پيرو آڪسائيڊس جين پڻ ڊي ٽوڪسيڪا اين ايل ايل انووليشن کي جواب ڏنو.آڪسائيڊيوٽ برسٽ کي ضابطي ۾ آڻڻ يا آڪسائيڊائٽي اسٽريس کي ختم ڪرڻ لاءِ انهن جي عام ڪمن کان علاوه، پيرو آڪسائيڊسز مخصوص مرکبات جي ليگنيفڪيشن، سبونٽ يا ڪراس لنڪنگ دوران سيل وال جي مضبوطيءَ جي بنياد تي جسماني رڪاوٽون پيدا ڪندي پيٿوجن جي واڌ ۾ مداخلت ڪري سگهن ٿيون.هن فنڪشن کي سليڪو ۾ منسوب ڪري سگهجي ٿو تنجيلG_03329 جين انڪوڊنگ هڪ پوٽيوٽو ليگنين ٺاهڻ واري اينون پرڪسائيڊس جنهن کي اسان جي مطالعي ۾ 83A: 476 مزاحمتي لائن ۾ 6 HPI ۾ خاص طور تي وڌايو ويو هو، پر ٻين اسٽرين ۽ ٽائيم پوائنٽس ۾ نه جن جو جواب نه ڏنو.
9S-/13S-linoleic acid جو lipoxygenase lipid biosynthesis78 جي آڪسائيڊيوٽ رستي ۾ پهريون قدم آهي.هن رستي جون شيون ٻوٽن جي حفاظت ۾ ڪيترائي ڪم ڪن ٿيون، جن ۾ ڪالز ۽ پيڪٽين جي ذخيرن جي ٺهڻ ذريعي سيل جي ڀت کي مضبوط ڪرڻ، ۽ رد عمل واري آڪسيجن جي نسلن جي پيداوار ذريعي آڪسائيڊائٽي دٻاء جي ضابطي 79,80,81,82,83 شامل آهن.موجوده مطالعي ۾، linoleic acid 9S-/13S-lipoxygenase جي اظهار کي سڀني strains ۾ تبديل ڪيو ويو، پر حساس آبادي 22660 ۾، اپ گريجوئيشن مختلف وقتن تي غالب ٿي، جڏهن ته مزاحمتي Lanr1 ۽ AnMan allele کڻڻ واري اسٽرين ۾، ان کي زور ڏئي ٿو رد عمل جي وچ ۾ مختلف قسم جي ليپڪسيجن جي حفاظت. .
1-aminocyclopropane-1-carboxylate oxidase (ACO) homologue خاص طور تي مٿي ڪيو ويو (9 جينز) يا گھٽجي ويو (2 جينز) جڏهن لوپين سان انوول ڪيو ويو.ٻن استثنا سان، اهي سڀئي جواب 6 hp تي واقع ٿيا.تي 83A: 476.اي سي او پروٽين جي وچ ۾ اينزيميٽڪ رد عمل ايٿيلين جي پيداوار ۾ شرح-محدود قدم آهي ۽ تنهن ڪري انتهائي ضابطو آهي84.ايٿيلين هڪ ٻوٽو هارمون آهي جيڪو ٻوٽن جي ترقي کي منظم ڪرڻ ۽ ابيٽڪ ۽ بايوٽڪ دٻاءُ جي حالتن جي جواب ۾ مختلف ڪردار ادا ڪري ٿو.ACO ٽرانسڪرپشن جي شموليت ۽ ايٿيلين سگنلنگ رستي کي چالو ڪرڻ ۾ شامل آهن چانورن جي مزاحمت کي وڌائڻ ۾ هيمي بايوٽروفڪ فنگس oryzae oryzae کي ريگيوليٽري آڪسيجن جي نسلن ۽ phytoalexins جي پيداوار کي منظم ڪندي.M. oryzae ۽ C. lupini88,89 جي وچ ۾ هڪ تمام ملندڙ جلندڙ پتي جي انفيڪشن جو عمل، هن مطالعي ۾ ٻڌايو ويو 83A:476 لائن ۾ ACO homologues جي هڪ اهم اپ گريجوئيشن جي پس منظر جي خلاف، NLL anthracnose Ethylene کي هڪ سگنلنگ مرڪب سگنلنگ اسٽيپ ۾ مزاحمت ڏيڻ جي امڪان کي منتقل ڪري ٿو.
موجوده مطالعي ۾، فتوسنتيسس سان لاڳاپيل ڪيترن ئي جين جو وڏي پيماني تي دٻاء 83A: 476 ۾ 6 hpi تي ۽ منڊيلوپ ۾ 48 hpi ۽ 22660 جي آبادي تي ڏٺو ويو.انهن تبديلين جي حد ۽ ترقي سطح جي متناسب آهي.هن تجربي ۾ اينٿراڪنوز جي مزاحمت جو مشاهدو ڪيو ويو.تازو، فتوسنتيسس سان لاڳاپيل ٽرانسڪرپشن جي مضبوط ۽ شروعاتي جبر جي ڪيترن ئي ماڊلن ۾ ٻڌايو ويو آهي ٻوٽي-پيٿوجين رابطي جي ڪيترن ئي ماڊل، جن ۾ پيٿوجينڪ بيڪٽيريا ۽ فنگي شامل آهن.جلدبازي (ڪجهه ڳالهين ۾ 2 HPI کان) ۽ انفيڪشن جي جواب ۾ فتوسنتيسس سان جڙيل جين جو عالمي دٻاءُ ٻوٽن جي مدافعت کي متحرڪ ڪري سگهي ٿو رد عمل واري آڪسيجن جي نسلن جي تعیناتي جي بنياد تي ۽ انهن جو سليسلڪ ايسڊ رستي سان رابطي سان الرجڪ رد عمل 90,94 کي وچولي ڪرڻ لاءِ.
نتيجي ۾، سڀ کان وڌيڪ مزاحمتي نسب (83A: 476) لاء تجويز ڪيل دفاعي ردعمل ميڪانيزم شامل آهن آر جين (ممڪن طور تي TIR-NBS-LRR TanjilG_05042) ۽ الرجڪ ردعمل-ثالث سيلسيلڪ ايسڊ ۽ ايٿيلين ايس اي آر جي ڊگهي سگنلنگ جي ذريعي تيز رفتار جي سڃاڻپ شامل آهن.عمل DIR-1 پروٽين جي حمايت ڪئي وئي آهي.اهو ياد رکڻ گهرجي ته سي. لوپيني انفيڪشن لاء بايوٽروفڪ دور تمام ننڍو آهي (تقريبن 2 ڏينهن)، جنهن جي پٺيان necrotic واڌ95 آهي.انهن مرحلن جي وچ ۾ منتقلي necrosis ۽ ethylene-inducible پروٽين جي اظهار سان لاڳاپيل ٿي سگهي ٿي جيڪي ميزبان ٻوٽن ۾ hypersensitivity جي رد عمل لاءِ محرڪ طور ڪم ڪن ٿا.ان ڪري، بائيوٽروفڪ اسٽيج تي سي. لوپيني جي ڪامياب پڪڙڻ لاءِ ٽائيم ونڊو تمام تنگ آهي.83A:476 ۾ 6 hpi ۾ مشاهدو ڪيل ريڊڪس ۽ فوٽوسنٿيسس سان لاڳاپيل جين جي ٻيهر پروگرامنگ فنگل هائفي جي ترقي سان مطابقت رکي ٿي ۽ بايوٽروفڪ اسٽيج تي هڪ ڪامياب حفاظتي ردعمل جي ترقي جو اعلان ڪري ٿو.منڊيلپ ۽ 22660 جي آبادي جا ٽرانسڪرٽومڪ جوابن ۾ فنگس کي پڪڙڻ ۾ دير ٿي سگھي ٿي اڳ ۾ necrotic واڌ کي تبديل ڪرڻ کان اڳ، جڏهن ته، Mandelup 22660 جي آبادي کان وڌيڪ اثرائتو ٿي سگهي ٿو ڇاڪاڻ ته PR-10 پروٽين جو نسبتا تيز ضابطو افقي مزاحمت کي فروغ ڏئي ٿو.
ETI، ڪيننيڪل آر جين جي ذريعي هلائي، ظاهر ٿئي ٿو هڪ عام ميکانيزم لاء بينن جي مزاحمت لاء اينٿراڪنوز.اهڙيء طرح، ماڊل legume Medicago truncatula ۾، anthracnose جي مزاحمت RCT1 جين پاران عطا ڪئي وئي آهي، جيڪو TIR-NBS-LRR97 پلانٽ R جين طبقي جو ميمبر آهي.هي جين الفالفا ۾ وسيع اسپيڪٽرم اينٿراڪنوز جي مزاحمت پڻ ڏئي ٿو جڏهن حساس ٻوٽن ڏانهن منتقل ڪيو وڃي ٿو.عام ٻوٽي (P. vulgaris) ۾، اڄ تائين ٻن درجن کان وڌيڪ اينٿراڪنوز مزاحمتي جين جي سڃاڻپ ڪئي وئي آهي.انهن مان ڪجهه جينز انهن علائقن ۾ مليا آهن جن ۾ ڪنهن به معياري آر جين جي کوٽ ناهي، جڏهن ته ٻيا ڪيترائي ڪروموزوم جي ڪنارن تي واقع آهن جيڪي NBS-LRR جين ڪلستر کڻندا آهن، بشمول TIR-NBS-LRRs99.جينوم-وائڊ ايس ايس آر مطالعي پڻ تصديق ڪئي ته اين بي ايس-ايل آر آر جين جي انجمن سان گڏ اينٿراڪنوز مزاحمت سان عام بينن ۾.Canonical R جين پڻ جينومڪ علائقي ۾ مليو هو جنهن ۾ سفيد لوپين 101 ۾ وڏي anthracnose resistance locus کڻندو هو.
اسان جو ڪم ڏيکاري ٿو ته هڪ فوري مزاحمتي رد عمل، جيڪو ٻوٽن جي انفيڪشن جي شروعاتي مرحلي ۾ چالو ٿئي ٿو (ترجيح طور تي 12 hpi کان پوءِ نه هجي)، مؤثر طريقي سان تنگ ٿيل ليوپين کي انٿراڪنوز کان بچائيندو آهي، جيڪو pathogenic fungus Collelotrichum lupini جي ڪري آهي.استعمال ڪندي اعلي throughput جي ترتيب، اسان NLL ٻوٽن ۾ anthracnose مزاحمت جين جي مختلف اظهار جي پروفائلز جو مظاهرو ڪيو Lanr1 ۽ AnMan مزاحمت جين جي وچ ۾.ڪامياب دفاع ۾ ٻوٽن جي پهرين رابطي جي ڪلاڪن اندر ريڊڪس، فوتوسنٿيسس ۽ پيٿوجنيسس ۾ شامل پروٽينن جي جين کي احتياط سان ترتيب ڏيڻ شامل آهي.ساڳيا حفاظتي رد عمل، پر دير سان، ٻوٽن کي بيمارين کان بچائڻ ۾ تمام گهٽ اثرائتو آهن.Anthrax جي مزاحمت Lanr1 جين جي وچ ۾ ڪئي وئي، R جين جي عام تيز ردعمل سان مشابهت رکي ٿي (اثر-متحرک قوت مدافعت)، جڏهن ته AnMan جين گهڻو ڪري افقي ردعمل مهيا ڪري ٿو (استثنائي هڪ مائڪروب سان لاڳاپيل ماليڪيولر نمونن جي ذريعي پيدا ٿئي ٿي)، هڪ اعتدال پسند سطح فراهم ڪري ٿي.
215 اين ايل ايل لائينون جيڪي اينٿراڪنوز مارڪرن لاءِ اسڪريننگ ڪرڻ لاءِ استعمال ڪيون ويون آھن تن ۾ 74 ڪلٽيوارز، 60 لائينون جيڪي ڪراسنگ يا نسل جي ذريعي حاصل ڪيون ويون آھن، 5 ميوٽنٽ، ۽ 76 وائلڊ يا اصل جراثيم.لائينون 17 ملڪن مان آيون، خاص طور تي پولينڊ (58)، اسپين (47)، جرمني (27)، آسٽريليا (26)، روس (19)، بيلاروس (7)، اٽلي (5) ۽ ٻيون لائينون.10 ملڪن کان.سيٽ ۾ ريفرنس رزسٽنٽ لائينون پڻ شامل آھن: 83A:476، تنجيل، وانگا جيڪو Lanr1 ايليل کڻندو آھي، ۽ Mandelup جيڪو AnMan ايليل کڻندو آھي.لائينون حاصل ڪيون ويون يورپي لوپين جينياتي ريسورس ڊيٽابيس مان حاصل ڪيون ويون جيڪي پوزنان پلانٽ بريڊنگ لميٽيڊ، وائيٽروو، پولينڊ (ضمني جدول S1) پاران قائم ڪيل آهن.
ٻوٽا ڪنٽرول ٿيل حالتن هيٺ پوکيا ويا (فوٽوپيريڊ 16 ڪلاڪ، گرمي پد 25 ° C ڏينهن ۾ ۽ 18 ° C رات جو).ٻن حياتياتي نقلن جو تجزيو ڪيو ويو.پروٽوڪول جي مطابق ڊي اين اي کي ٽن هفتن جي پراڻي پنن مان ڌار ڪيو ويو DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany) استعمال ڪندي.الڳ ٿيل ڊي اين اي جي معيار ۽ ڪنسنٽريشن جو اندازو لڳايو ويو spectrophotometric طريقن سان (NanoDrop 2000؛ Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA).AnManM1 مارڪر اينٿراڪنوز مزاحمتي جين AnMan (cv. Mandelup مان نڪتل) کي نشانو بڻايو ۽ Anseq3 ۽ Anseq4 جين Lanr1 (cv. Tanjil مان نڪتل) کي 11,26,28 جو تجزيو ڪيو ويو.مزاحمتي ايليل لاءِ Homozygotes کي ”1″، حساس – “0″، ۽ heterozygotes – 0.5 جي طور تي اسڪور ڪيو ويو.
مارڪرز AnManM1، AnSeq3 ۽ AnSeq4 لاءِ اسڪريننگ جي نتيجن جي بنياد تي ۽ آخري فالو اپ تجربن لاءِ ٻج جي دستيابي، 50 اين ايل ايل لائينون anthracnose resistance phenotyping لاءِ منتخب ڪيون ويون.تجزيا نقل ۾ ڪمپيوٽر جي ڪنٽرول ٿيل گرين هائوس ۾ 14 ڪلاڪ فوٽوپيريڊ سان ڪيو ويو جنهن جي گرمي پد جي حد 22 ° C جي ڏينهن ۾ ۽ 19 ° C رات جو.پوکڻ کان اڳ ٻج ڇٽيا ويندا آهن (سيج جي کوٽ کي جنين جي سامهون واري پاسي تي هڪ تيز بليڊ سان ڪٽيندا آهن) ته جيئن ٻج جي کوٽ تمام سخت هجڻ جي ڪري ٻج جي بيڪار ٿيڻ کي روڪيو وڃي ۽ هڪجهڙائي کي يقيني بڻائي سگهجي.ٻوٽا پوکيا ويا (11 × 11 × 21 سينٽي) جراثيم کان پاڪ مٽي سان (TS-1 REC 085 ميڊيم بيسڪ، ڪلاسمن-ڊيلمن پولسڪا، وارسا، پولينڊ).انوڪيوليشن ڪوليٽوٽريچم لوپيني Col-08 strain سان ڪئي وئي، جيڪا 1999 ۾ ويرزينيسا، گريٽر پولينڊ (52° 27′ 42″ N 17° 04′ 05″ E) جي هڪ ميدان ۾ پوکيل تنگ پٽن واري لوپين ٻوٽن جي پاڙن مان پيدا ڪئي وئي.هڪ علائقو حاصل ڪريو.ڌار ڌار SNA وچولي ۾ 20 ° C. تي ڪارو روشنيءَ هيٺ 21 ڏينهن تائين اسپوروليشن کي وڌائڻ لاءِ ڪلچر ڪيو ويو.پوکڻ کان چار هفتا پوءِ، جڏهن ٻوٽا 4-6 پنن جي اسٽيج تي پهچي ويا هئا، تڏهن 0.5 x 106 ڪانڊيا في مليل جي ڪنسنٽريشن تي ڪانڊيڊيا جي سسپينشن سان اسپري ڪيو ويو.انوڪيوليشن کان پوءِ، ٻوٽن کي 24 ڪلاڪن تائين اونداهي ۾ رکيو ويو، جنهن ۾ 98 سيڪڙو نمي ۽ 25 ڊگري سينٽي گريڊ گرمي پد تي رکيو ويو ته جيئن ڪونڊيا جي جراثيم ۽ انفيڪشن جي عمل کي آسان بڻائي سگهجي.ٻوٽا پوءِ 14 ڪلاڪ فوٽوپيريڊ ۾ 22°C ڏينهن/19°C رات ۽ 70% نمي تي پوکيا ويا.بيماريءَ جو اسڪور 22 ڏينهن جي انوڪيوليشن کان پوءِ ٺاهيو ويو ۽ 0 (مثلاً) کان 9 (تمام حساس) جي حد تائين، تنن ۽ پنن تي necrotic زخمن جي موجودگي يا غير موجودگيءَ تي منحصر آهي.ان کان علاوه، گول ڪرڻ کان پوء، ٻوٽن جو وزن ماپ ڪيو ويو.مارڪر جينوٽائپس ۽ بيماري فينوٽائپس جي وچ ۾ لاڳاپا ڳڻيا ويا نقطي ٻه-ترتيب رابطي جي طور تي (اينٿراڪنوز مزاحمت فينوٽائپ جي تجزيي لاء لائنن جي سيٽ ۾ heterozygous نشانن جي غير موجودگي).