කාලයත් සමඟම උපකරණ තාක්‍ෂණය වැඩිදියුණු වුවද, සමහර LC දෝෂාවේක්‍ෂණ මාතෘකා කිසිදා යල් පැන ගිය ඒවා නොවේ, නමුත් කාලයත් සමඟම උපකරණ තාක්‍ෂණය වැඩිදියුණු වන විට පවා ගැටලු ඇති විය හැක. LC පද්ධතියක ගැටලු මතු විය හැකි සහ දුර්වල උච්ච හැඩයෙන් අවසන් විය හැකි බොහෝ ක්‍රම තිබේ. උච්ච හැඩයට අදාළ ගැටලු මතු වූ විට, මෙම ප්‍රතිඵල සඳහා ඇති විය හැකි හේතු පිළිබඳ කෙටි ලැයිස්තුවක් අපගේ දෝශ නිරාකරණ අත්දැකීම සරල කිරීමට උපකාරී වේ.
මෙම “LC දෝශ නිරාකරණ” තීරුව ලිවීම සහ සෑම මසකම මාතෘකා ගැන සිතීම විනෝදජනකයි, මන්ද සමහර මාතෘකා කිසි විටෙකත් විලාසිතාවෙන් බැහැර නොවේ. වර්ණදේහ ක්ෂේත්‍රයේ පර්යේෂණ කරන විට ඇතැම් මාතෘකා හෝ අදහස් යල්පැන ඇති අතර ඒවා දෝෂ නිරාකරණය ක්ෂේත්‍රයේ නව සහ වඩා හොඳ අදහස් මගින් අභිබවා යන බැවින් ඒවා යල්පැන යයි. (1).පසුගිය වසර කිහිපය පුරාවට, ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාවට (LC) බලපාන සමකාලීන ප්‍රවණතා පිළිබඳ LC දෝශ නිරාකරණ අංශ කිහිපයක් මම අවධානය යොමු කර ඇත්තෙමි (උදාහරණයක් ලෙස, රඳවා තබා ගැනීම මත පීඩනයේ බලපෑම පිළිබඳ අපගේ අවබෝධයේ සාපේක්ෂ සංසන්දනය [2] නව අත්තිකාරම්) LC ප්‍රතිඵල පිළිබඳ අපගේ අර්ථ නිරූපණය සහ නවීන LC උපකරණ සමඟ දෝශ නිරාකරණය කරන ආකාරය දෙසැම්බර් 1 සිට ආරම්භ කරන ලදී. LC දෝශ නිරාකරණයේ සමහර “ජීවිතය සහ මරණය” මාතෘකා කෙරෙහි අවධානය යොමු කර ඇත — ඕනෑම දෝශ නිරාකරණ සඳහා විශිෂ්ට වන මූලද්‍රව්‍ය අත්‍යවශ්‍ය වේ, අප භාවිතා කරන පද්ධතියේ වයස කුමක් වුවත්. මෙම මාලාවේ මූලික මාතෘකාව LCGC හි සුප්‍රසිද්ධ “LC දෝෂ නිරාකරණ මාර්ගෝපදේශය” බිත්ති සටහනට (4) බෙහෙවින් අදාළ වේ. ly, බිත්ති ප්‍රස්ථාරය දුර්වල උච්ච හැඩයට විවිධ විභව හේතු 44ක් ලැයිස්තුගත කරයි!අපට මෙම ගැටළු සියල්ලම එක් ලිපියකින් විස්තරාත්මකව සලකා බැලිය නොහැක, එබැවින් මාතෘකාව පිළිබඳ මෙම පළමු වාරිකයේදී, මම බොහෝ විට දකින ඒවායින් කිහිපයක් කෙරෙහි අවධානය යොමු කරමි. තරුණ සහ මහලු LC පරිශීලකයින්ට මෙම වැදගත් මාතෘකාව පිළිබඳ ප්‍රයෝජනවත් ඉඟි සහ මතක් කිරීම් කිහිපයක් ලැබෙනු ඇතැයි මම බලාපොරොත්තු වෙමි.
දෝශ නිරාකරණ ප්‍රශ්නවලට "ඕනෑම දෙයක් කළ හැකිය" යන්නෙන් වැඩි වැඩියෙන් පිළිතුරු සපයන බව මට පෙනී යයි. අර්ථ නිරූපණය කිරීමට අපහසු නිරීක්ෂණ සලකා බැලීමේදී මෙම ප්‍රතිචාරය පහසු බව පෙනේ, නමුත් බොහෝ විට එය සුදුසු යැයි මට පෙනේ. දුර්වල උච්ච හැඩයට හේතු විය හැකි බොහෝ හේතු සමඟ, ගැටලුව කුමක් විය හැකිද යන්න සලකා බැලීමේදී විවෘත මනසක් තබා ගැනීම වැදගත් වන අතර, අපගේ ගැටළු නිරාකරණය කිරීම ආරම්භ කිරීමට ඇති විය හැකි හේතු කෙරෙහි ප්‍රමුඛත්වය දීමට හැකි වේ.
ඕනෑම දෝශ නිරාකරණ අභ්‍යාසයක ප්‍රධාන පියවරක් - නමුත් මා සිතන්නේ අවතක්සේරු කළ එකක් - විසඳිය යුතු ගැටලුවක් ඇති බව හඳුනා ගැනීමයි. ගැටලුවක් ඇති බව හඳුනා ගැනීම යනු බොහෝ විට මෙවලමට සිදුවන දෙය න්‍යාය, ආනුභවික දැනුම සහ අත්දැකීම් අනුව හැඩගැසෙන අපගේ අපේක්ෂාවන්ට වඩා වෙනස් බව හඳුනා ගැනීමයි (5). සිනිඳු, ඉදිරි දාරය, වලිගය, ආදිය), පමණක් නොව, පළල දක්වා. සැබෑ උච්ච හැඩය සඳහා අපගේ අපේක්ෂාවන් සරල ය. බොහෝ අවස්ථාවල දී, වර්ණදේහ ශිඛර සමමිතික විය යුතු අතර, ගවුසියන් ව්‍යාප්තියක හැඩයට අනුරූප විය යුතුය යන පෙළපොත් අපේක්ෂාවට න්‍යාය (6) හොඳින් සහාය දක්වයි. රූප සටහන 1 හි s මගින් නිරීක්ෂණය කළ හැකි වෙනත් හැකියාවන් කිහිපයක් පෙන්වයි - වෙනත් වචන වලින් කිවහොත්, දේවල් වැරදී යා හැකි සමහර මාර්ග. මෙම වාරිකයේ ඉතිරි කොටසේදී, මෙම හැඩතල වර්ග වලට තුඩු දිය හැකි තත්වයන් පිළිබඳ නිශ්චිත උදාහරණ කිහිපයක් සාකච්ඡා කිරීමට අපි කාලය ගත කරමු.
සමහර විට ඒවා ඉවත් කිරීමට බලාපොරොත්තු වන ක්‍රෝමැටෝග්‍රෑම් හි මුදුන් කිසිසේත්ම නිරීක්ෂණය නොවේ.ඉහත බිත්ති ප්‍රස්ථාරයෙන් පෙන්නුම් කරන්නේ උච්චයක් නොමැතිකම (නියැදිය ඇත්ත වශයෙන්ම ඉලක්ක විශ්ලේෂකය සාන්ද්‍රණයක ඇති බව උපකල්පනය කළහොත් එය ශබ්දයට ඉහළින් එය දැකීමට ප්‍රමාණවත් අනාවරක ප්‍රතිචාරය ඇති කළ යුතු යැයි උපකල්පනය කරයි) සාමාන්‍යයෙන් යම් උපකරණ ගැටලුවකට හෝ වැරදි ජංගම අවධි තත්වයන්ට සම්බන්ධ වේ (සියල්ල නිරීක්ෂණය කළහොත්).උච්ච, සාමාන්‍යයෙන් ඉතා “දුර්වල”).මෙම කාණ්ඩයේ ඇති විය හැකි ගැටලු සහ විසඳුම් පිළිබඳ කෙටි ලැයිස්තුවක් I වගුවෙන් සොයාගත හැකිය.
ඉහත සඳහන් කළ පරිදි, අවධානය යොමු කර එය නිවැරදි කිරීමට උත්සාහ කිරීමට පෙර උච්ච පුළුල් කිරීම කොපමණ ප්‍රමාණයක් ඉවසා සිටිය යුතුද යන ප්‍රශ්නය මම ඉදිරි ලිපියකින් සාකච්ඡා කරන සංකීර්ණ මාතෘකාවකි. මගේ අත්දැකීම වන්නේ සැලකිය යුතු උච්ච පුළුල් කිරීම බොහෝ විට උච්ච හැඩයේ සැලකිය යුතු වෙනසක් සමඟ වන අතර උච්ච වලිගය පෙර-උච්ච හෝ බෙදීමට වඩා සාමාන්‍ය දෙයකි.
මෙම එක් එක් ගැටළු දෝශ නිරාකරණ LC හි පෙර නිකුතු වල විස්තරාත්මකව සාකච්ඡා කර ඇති අතර, මෙම මාතෘකා ගැන උනන්දුවක් දක්වන පාඨකයින්ට මෙම ගැටළු වලට මූලික හේතු සහ විභව විසඳුම් පිළිබඳ තොරතුරු සඳහා මෙම පෙර ලිපි වෙත යොමු විය හැක.වැඩිපුර විස්තර.
Peak tailing, peak fronting, සහ splitting යන සියල්ල රසායනික හෝ භෞතික සංසිද්ධීන් නිසා ඇති විය හැකි අතර, මෙම ගැටලු සඳහා විභව විසඳුම් ලැයිස්තුව පුළුල් ලෙස වෙනස් වේ, අපි රසායනික හෝ භෞතික ගැටලුවක් සමඟ කටයුතු කරනවාද යන්න මත පදනම්ව. බොහෝ විට, chromatogram එකක විවිධ ශිඛර සංසන්දනය කිරීමෙන්, ඔබට වැදගත් ඉඟි සොයා ගත හැකිය. කඳු මුදුන් කිහිපයකට බලපාන නමුත් ඉතිරිය හොඳින් පෙනේ, හේතුව බොහෝ විට රසායනික වේ.
Peak tailing හි රසායනික හේතූන් මෙහි කෙටියෙන් සාකච්ඡා කිරීමට නොහැකි තරම් සංකීර්ණ වේ. උනන්දුව දක්වන පාඨකයා වඩාත් ගැඹුරු සාකච්ඡාවක් සඳහා "LC දෝශ නිරාකරණය" මෑත කලාපය වෙත යොමු කරනු ලැබේ (10). කෙසේ වෙතත්, උත්සාහ කිරීමට පහසු දෙයක් නම් එන්නත් කරන ලද විශ්ලේෂකයේ ස්කන්ධය අඩු කර උච්ච හැඩය වැඩි දියුණු වන්නේ දැයි බැලීමයි. එසේ නම්, මෙය සීමා සහිත ක්‍රමයකි. කුඩා විශ්ලේෂණ ස්කන්ධ හෝ වර්ණදේහ තත්ත්වයන් වෙනස් කළ යුතු අතර එමඟින් විශාල ස්කන්ධ එන්නත් කළත් හොඳ උච්ච හැඩතල ලබා ගත හැකිය.
Peak tailing සඳහා බොහෝ විභව භෞතික හේතු ද ඇත. විභවයන් පිළිබඳ සවිස්තරාත්මක සාකච්ඡාවක් සඳහා උනන්දුවක් දක්වන පාඨකයින් "LC දෝශ නිරාකරණය" (11) හි තවත් මෑත කලාපයක් වෙත යොමු කරනු ලැබේ. උච්ච tailing සඳහා වඩාත් පොදු භෞතික හේතු වලින් එකක් වන්නේ ඉන්ජෙක්ටරය සහ අනාවරකය අතර එක් ස්ථානයක දුර්වල සම්බන්ධතාවයකි (12). සති කිහිපයකට පෙර අප විසින් ගොඩනඟන ලද නව නඩුවක, මෙම පර්යේෂණාගාරයේ රූපයක් දැක්වේ. අපි කලින් භාවිතා නොකළ ඉන්ජෙක්ෂන් වෑල්වයක් සහ මල නොබැඳෙන වානේ කේශනාලිකා මත හැඩගස්වා ඇති ෆෙරූල් සහිත කුඩා පරිමා ඉන්ජෙක්ෂන් ලූපයක් සවි කර ඇත. සමහර මූලික දෝශ නිරාකරණ පරීක්ෂණවලින් පසුව, ඉන්ජෙක්ෂන් වෑල්ව් ස්ටටෝරයේ වරාය ගැඹුර අප පුරුදු වී සිටියාට වඩා බොහෝ ගැඹුරු බව අපට වැටහුණි. වරායේ පතුලේ ඇති මිය ගිය පරිමාව ඉවත් කිරීම සඳහා ෆෙරුලය නිසි ස්ථානයට සකස් කළ හැකිය.
රූප සටහන 1e හි පෙන්වා ඇති පරිදි උච්ච පෙරමුනු භෞතික හෝ රසායනික ගැටළු නිසාද ඇති විය හැක. ප්‍රමුඛ දාරයේ ඇති පොදු භෞතික හේතුව වන්නේ තීරුවේ අංශු ඇඳ හොඳින් අසුරා නොතිබීම හෝ අංශු කාලයත් සමඟ ප්‍රතිසංවිධානය වී තිබීමයි. පරමාදර්ශී (රේඛීය) තත්ත්‍වයන් යටතේ, නිශ්චල අවධිය (එබැවින් රඳවා ගැනීමේ සාධකය) මගින් රඳවා තබා ගන්නා විශ්ලේෂණ ප්‍රමාණය තීරුවේ විශ්ලේෂකයේ සාන්ද්‍රණයට රේඛීයව සම්බන්ධ වේ. වැඩි ස්කන්ධයක් එන්නත් කරන තරමට පුළුල් වේ. ඊට අමතරව, රේඛීය නොවන හැඩයන් වර්ණදේහ ශිඛරවල හැඩය තීරණය කරයි, එහි ප්‍රතිඵලයක් ලෙස ප්‍රමුඛ හෝ පසුපස දාර ඇති වේ. උච්ච වලිගය (10) ඇති කරන ස්කන්ධ අධික බර සමඟ මෙන්, රේඛීය නොවන රඳවා තබා ගැනීම නිසා ඇතිවන උච්ච ප්‍රමුඛතාවය ද එන්නත් කරන ලද විශ්ලේෂණ ස්කන්ධය අඩු කිරීමෙන් රෝග විනිශ්චය කළ හැකිය. මෙම හැසිරීම අවම කිරීම සඳහා matographic තත්ත්වයන් වෙනස් කළ යුතුය.
සමහර විට රූප සටහන 1f හි පෙන්වා ඇති පරිදි "බෙදීම" උච්චයක් ලෙස පෙනෙන දේ අපි නිරීක්ෂණය කරමු. මෙම ගැටලුව විසඳීමේ පළමු පියවර වන්නේ උච්ච හැඩය අර්ධ සම-ඉලියුෂන් (එනම්, එකිනෙකට වෙනස් නමුත් සමීපව විකාශනය වන සංයෝග දෙකක් තිබීම) දැයි තීරණය කිරීමයි. ඇත්ත වශයෙන්ම එකිනෙකට වෙනස් විශ්ලේෂණ දෙකක් තිබේ නම්, ඒවායේ විභේදනය, විභේදනය, උදාහරණයක් ලෙස වැඩි කිරීම සඳහා තෝරා ගැනීම. සහ පෙනෙන "භේදය" මුදුන් භෞතික කාර්ය සාධනයට සම්බන්ධ වේ. තීරුව සමඟම කිසිදු සම්බන්ධයක් නැත. බොහෝ විට, මෙම තීරණයට වඩාත්ම වැදගත් ඉඟිය වන්නේ ක්‍රොමැටෝග්‍රෑම් හි ඇති සියලුම ශිඛරවල බෙදීම් හැඩතල ප්‍රදර්ශනය කරන්නේද, නැතහොත් එකක් හෝ දෙකක් පමණක්ද යන්නයි. එය එකක් හෝ දෙකක් නම්, එය බොහෝ විට සම-ප්‍රශ්නයකි;සියලුම ශිඛර බෙදී ඇත්නම්, එය බොහෝ විට භෞතික ගැටළුවක් විය හැකිය, බොහෝ විට එය තීරුවටම සම්බන්ධ වේ.
තීරුවේ භෞතික ගුණාංගවලට අදාළ බෙදීම් මුදුන් සාමාන්‍යයෙන් අර්ධ වශයෙන් අවහිර වී ඇති ඇතුල්වීම හෝ පිටවන ෆ්‍රිට්ස් හෝ තීරුවේ අංශු ප්‍රතිසංවිධානය කිරීම නිසා, තීරු නාලිකාව සෑදීමේ ඇතැම් ප්‍රදේශවල ජංගම අවධියට වඩා ජංගම අවධියට වඩා වේගයෙන් ගලා යාමට ඉඩ සලසයි.කෙසේ වෙතත්, මගේ අත්දැකීම අනුව, මෙය සාමාන්‍යයෙන් දිගුකාලීන විසඳුමකට වඩා කෙටි කාලීන විසඳුමකි. තීරුව තුළ අංශු නැවත සංකලනය වුවහොත් මෙය බොහෝ විට නවීන තීරු සමඟ මාරාන්තික වේ. මෙම අවස්ථාවේදී, තීරුව ප්‍රතිස්ථාපනය කර දිගටම කරගෙන යාම වඩාත් සුදුසුය.
Figure 1g හි උච්චතම අවස්ථාව, මගේම විද්‍යාගාරයේ මෑත කාලීන අවස්ථාවකදී, සාමාන්‍යයෙන් සංඥාව ඉතා ඉහළ බැවින් එය ප්‍රතිචාර පරාසයේ ඉහළ කෙළවරට ළඟා වී ඇති බව පෙන්නුම් කරයි. දෘෂ්‍ය අවශෝෂණය අනාවරක සඳහා (මෙම අවස්ථාවෙහි UV-vis), විශ්ලේෂක සාන්ද්‍රණය ඉතා ඉහළ වූ විට, විශ්ලේෂකය මෙම අනාවරකය හරහා ගමන් කරන ආලෝකයෙන් වැඩි ප්‍රමාණයක් අවශෝෂණය කරයි. අයාලේ යන ආලෝකය සහ "අඳුරු ධාරාව" වැනි විවිධ ශබ්ද ප්‍රභවයන්ගේ බලපෑමට ලක්ව, සංඥාව පෙනුමෙන් ඉතා "අපැහැදිලි" වන අතර විශ්ලේෂණ සාන්ද්‍රණයෙන් ස්වාධීන වේ.මෙය සිදු වූ විට, විශ්ලේෂකයේ එන්නත් පරිමාව අඩු කිරීම - එන්නත් පරිමාව අඩු කිරීම, නියැදිය තනුක කිරීම හෝ දෙකම මගින් ගැටළුව බොහෝ විට පහසුවෙන් විසඳා ගත හැකිය.
ක්රෝමොටෝග්රැෆි පාසැලේදී, නියැඩියේ විශ්ලේෂණයේ සාන්ද්රණය පිළිබඳ දර්ශකයක් ලෙස චාරෝටෝග්රැග්රාග්රාමය (එනම්, ක්රෝමතෝග්රෑම්හි Y-අක්ෂය) භාවිතා කරමු. , පාරජම්බුල කරන්න).
මෙම අවස්ථාවෙහිදී, ඍණාත්මක උච්චයක් යනු සරලවම අදහස් වන්නේ තීරුවෙන් පිටවන අණු, උච්චයට පෙර සහ පසුව ජංගම අවධියට වඩා අඩු ආලෝකයක් අවශෝෂණය කර ගැනීමයි. උදාහරණයක් ලෙස, සාපේක්ෂව අඩු හඳුනාගැනීමේ තරංග ආයාම (<230 nm) සහ ජංගම ෆේස් ආකලන භාවිතා කරන විට මෙම තරංග ආයාමයෙන් වැඩි ආලෝකයක් අවශෝෂණය කරන විට මෙය සිදුවිය හැක. ක්‍රමාංකන වක්‍රයක් සැකසීමට සහ නිවැරදි ප්‍රමාණාත්මක තොරතුරු ලබා ගැනීමට ne ට සෘණ උච්ච භාවිතා කළ හැක, එබැවින් ඒවා මග හැරීමට මූලික හේතුවක් නොමැත (මෙම ක්‍රමය සමහර විට "වක්‍ර UV හඳුනාගැනීම" ලෙස හැඳින්වේ) (13) කෙසේ වෙතත්, ඇත්ත වශයෙන්ම අපට සෘණාත්මක උච්චාවචනයන් සම්පූර්ණයෙන් වළක්වා ගැනීමට අවශ්‍ය නම්, අවශෝෂණ අනාවරනයට වඩා වෙනස් අවශෝෂණ අවධීන් වෙනස් කිරීම වඩාත් සුදුසු විසඳුමයි. විශ්ලේෂණවලට වඩා අඩු ආලෝකය අවශෝෂණය වන පරිදි ජංගම අදියරෙහි සංයුතිය.
ද්‍රාව්‍ය න්‍යාසය වැනි නියැදියේ විශ්ලේෂකය හැර අනෙකුත් සංරචකවල වර්තන දර්ශකය ජංගම අවධියේ වර්තන දර්ශකයට වඩා වෙනස් වන විට වර්තන දර්ශක (RI) අනාවරනය භාවිතා කරන විට ද සෘණ උච්ච මතු විය හැක. UV-vis අනාවරනය සමඟ ද මෙය සිදු වේ, නමුත් මෙම බලපෑම නියැදි සංයුති දෙකට සාපේක්ෂව ඍණාත්මක ලෙස සංසන්දනය වීමට නැඹුරු වේ. ජංගම අදියර සඳහා matrix.
LC දෝශ නිරාකරණයේ මූලික මාතෘකාව පිළිබඳ තුන්වන කොටසේදී, නිරීක්ෂණය කරන ලද උච්ච හැඩය අපේක්ෂිත හෝ සාමාන්‍ය උච්ච හැඩයට වඩා වෙනස් වන අවස්ථා පිළිබඳව මම සාකච්ඡා කළෙමි. එවැනි ගැටළු වල ඵලදායී දෝශ නිරාකරණය ආරම්භ වන්නේ අපේක්ෂිත උච්ච හැඩතල පිළිබඳ දැනුමෙන් (න්‍යාය හෝ පවතින ක්‍රම සමඟ පූර්ව අත්දැකීම් මත පදනම්ව) එබැවින් මෙම අපේක්ෂාවන්ගෙන් බැහැරවීම් පැහැදිලිය. මම නිතර දකින හේතු.මෙම විස්තර දැනගැනීම දෝශ නිරාකරණය ආරම්භ කිරීමට හොඳ තැනක් සපයයි, නමුත් සියලු හැකියාවන් ග්‍රහණය කර නොගනී. වඩාත් ගැඹුරු හේතු සහ විසඳුම් ලැයිස්තුවක් ගැන උනන්දුවක් දක්වන පාඨකයින්ට LCGC "LC දෝෂාවේක්‍ෂණ මාර්ගෝපදේශය" බිත්ති සටහන වෙත යොමු විය හැක.
(4) LCGC “LC දෝශ නිරාකරණ මාර්ගෝපදේශය” බිත්ති සටහන.https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Chromatography හි දත්ත විශ්ලේෂණය සහ සංඥා සැකසීම (Elsevier, New York, NY, 1998), pp. 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF සහ Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev.907, 31-44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.