Nature.com වෙත පිවිසීම ගැන ඔබට ස්තුතියි.ඔබ භාවිතා කරන බ්‍රවුසර අනුවාදය CSS සඳහා සීමිත සහයක් ඇත.හොඳම අත්දැකීම සඳහා, ඔබ යාවත්කාලීන බ්‍රවුසරයක් (හෝ Internet Explorer හි ගැළපුම් මාදිලිය ක්‍රියාවිරහිත කිරීම) භාවිතා කරන ලෙස අපි නිර්දේශ කරමු. මේ අතරතුර, අඛණ්ඩ සහාය සහතික කිරීම සඳහා, අපි විලාසිතා සහ JavaScript නොමැතිව වෙබ් අඩවිය ප්‍රදර්ශනය කරන්නෙමු.
සිදුරු සහිත සිලිකා අංශු මැක්‍රොපොරස් අංශු ලබා ගැනීම සඳහා සෝල්-ජෙල් ක්‍රමයකින් සකස් කරන ලදී.මෙම අංශු N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) සමඟ ප්‍රතිවර්ත කළ හැකි එකතු කිරීමේ ඛණ්ඩනය දාම හුවමාරු (RAFT) බහුඅවයවීකරණය සහ Nimiderestyren arrow-bore මල නොබැඳෙන වානේ තීරු (100 × 1.8 mm id) පොහොර ඇසුරුම් මගින් අසුරා ඇත. පෙප්ටයිඩ පහකින් (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyrg-Arg-Arg-Glyr-Arg, Tyrgle, මැටෝග්‍රැෆික් කාර්ය සාධනය) සහ මිනිස් සෙරුම් ඇල්බියුමින් (එච්ඒඑස්) හි ට්‍රයිප්සින් ජීර්ණය. ප්‍රශස්ත ඉලියුෂන් තත්ත්‍වයන් යටතේ පෙප්ටයිඩ මිශ්‍රණයේ න්‍යායාත්මක තහඩු ගණන තහඩු 280,000/m² තරම් ඉහළ අගයක් ගනී. සංවර්ධිත තීරුවේ වෙන් කිරීමේ කාර්ය සාධනය වාණිජ Ascentis Express සමඟ සසඳන විට එය වාණිජ Ascentis Express RP-Amide තීරුව දක්වා වෙන් කිරීමේ තීරුවේ සුපිරි ක්‍රියාකාරීත්වය විය. සහ විභේදනය.
මෑත වසරවලදී, ජෛව ඖෂධ කර්මාන්තය වෙළඳපල කොටසෙහි සැලකිය යුතු වැඩි වීමක් සමඟ පුළුල් වන ගෝලීය වෙළඳපොළක් බවට පත්ව ඇත. ජෛව ඖෂධ කර්මාන්තයේ පුපුරන සුලු වර්ධනයත් සමඟ 1,2,3, පෙප්ටයිඩ සහ ප්‍රෝටීන විශ්ලේෂණය කිරීම ඉතා අවශ්‍ය වේ. ඉලක්කගත පෙප්ටයිඩයට අමතරව, පෙප්ටයිඩ සංස්ලේෂණය කිරීමේදී අපද්‍රව්‍ය කිහිපයක් ජනනය වේ. එක් නියැදියක හඳුනාගත හැකි විශේෂ විශාල සංඛ්‍යාවක් නිසා ශරීර තරලවල, පටකවල සහ සෛලවල ඇති ප්‍රෝටීන විශ්ලේෂණය කිරීම සහ ගුනාංගීකරනය කිරීම අතිශය අභියෝගාත්මක කාර්යයකි. ස්කන්ධ වර්ණාවලීක්ෂය පෙප්ටයිඩ සහ ප්‍රෝටීන් අනුක්‍රමණය සඳහා ඵලදායී මෙවලමක් වුවද, එවැනි සාම්පල ස්කන්ධ වර්ණාවලීක්ෂයට එක් ප්‍රමාණයකින් එන්නත් කළ හොත්, ද්‍රව වින්‍යාසය මඟින් වෙන් කිරීම ප්‍රිමාණය ක්‍රියාත්මක කළ නොහැකි වනු ඇත. MS විශ්ලේෂණය, දෙන ලද වේලාවක ස්කන්ධ වර්ණාවලීක්ෂයට ඇතුළු වන විශ්ලේෂණ සංඛ්‍යාව අඩු කරනු ඇත4,5,6. මීට අමතරව, ද්‍රව අවධි වෙන් කිරීමේදී, විශ්ලේෂණ පටු කලාපවල නාභිගත කළ හැකි අතර, එමඟින් මෙම විශ්ලේෂණ සාන්ද්‍රණය කර MS හඳුනාගැනීමේ සංවේදීතාව වැඩි දියුණු කරයි. ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාව (LC) අතීතයේ දී සැලකිය යුතු ලෙස දියුණු වී ඇත.
ප්‍රතිලෝම-අදියර ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාව (RP-LC) පෙප්ටයිඩ මිශ්‍රණ පිරිසිදු කිරීම සහ වෙන් කිරීම සඳහා octadecyl-modified silica (ODS) ස්ථායී අදියර 11,12,13 ලෙස භාවිතා කරයි.කෙසේ වෙතත්, RP ස්ථිතික අවධීන් ඔවුන්ගේ පෙප්ටයිඩ, සංකීර්ණ ව්‍යුහය සහ ප්‍රෝටීන් 5 හි සංකීර්ණ ව්‍යුහය හේතුවෙන් සතුටුදායක ලෙස වෙන් කිරීම සපයන්නේ නැත. මෙම විශ්ලේෂණ සමඟ අන්තර් ක්‍රියා කිරීමට සහ රඳවා ගැනීමට ධ්‍රැවීය සහ ධ්‍රැවීය නොවන කොටස් සහිත පෙප්ටයිඩ සහ ප්‍රෝටීන විශ්ලේෂණය කිරීමට ary අදියර අවශ්‍ය වේ ප්‍රෝටීන් වෙන්කිරීම් lar කන්ඩායම් ධ්‍රැවීය සහ ධ්‍රැවීය නොවන විශ්ලේෂණ සඳහා හොඳ වෙන් කිරීමේ බලයක් සහ අද්විතීය තේරීමක් පෙන්නුම් කරයි, මන්ද වෙන්වීම විශ්ලේෂකය සහ ස්ථාවර අවධිය අතර අන්තර්ක්‍රියා මත රඳා පවතී.බහුවිධ අන්තර්ක්‍රියා 29, 30, 31, 32. මෑතදී, ෂැං සහ අල්.30 dodecyl-terminated polyamine ස්ථිතික අදියරක් සකස් කර සාර්ථක ලෙස හයිඩ්‍රොකාබන, විෂාදනාශක, ෆ්ලේවනොයිඩ්, නියුක්ලියෝසයිඩ්, estrogen සහ තවත් විශ්ලේෂණ කිහිපයක් වෙන් කරන ලදී. ධ්‍රැවීය අන්තර් කැලේටරයට ධ්‍රැවීය සහ ධ්‍රැවීය නොවන කාණ්ඩ දෙකම ඇති බැවින් එය පෙප්ටයිඩ සහ හයිඩ්‍රොෆොලික් ප්‍රෝටීන් සහ හයිඩ්‍රොෆොලික් ප්‍රෝටීන් සහ හයිඩ්‍රොෆොලික් ප්‍රෝටීන් යන දෙකම වෙන් කිරීමට භාවිතා කළ හැක. ide-embedded C18 columns) Ascentis Express RP-Amide තීරු යන වෙළඳ නාමය යටතේ වාණිජමය වශයෙන් ලබා ගත හැක, නමුත් මෙම තීරු amine 33 විශ්ලේෂණය සඳහා පමණක් භාවිතා වේ.
වත්මන් අධ්‍යයනයේ දී, HSA හි පෙප්ටයිඩ සහ ට්‍රයිප්සින් ජීර්ණය වෙන් කිරීම සඳහා ධ්‍රැවීය-කාවද්දන ලද ස්ථාවර අවධියක් (N-phenylmaleimide-Embedded polystyrene) සකස් කර ඇගයීමට ලක් කරන ලදී. එම නිශ්චල අදියර පහත සඳහන් ක්‍රමෝපාය භාවිතා කර සකස් කරන ලදී. lycol (PEG), TMOS, ජල ඇසිටික් අම්ලය විශාල සිදුරු ප්‍රමාණයෙන් සිලිකා අංශු සකස් කිරීම සඳහා සකස් කරන ලදී. දෙවනුව, නව ලිගන්ඩ්, phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate, සංස්ලේෂණය කර සිලිකා අංශු ව්‍යුත්පන්න කිරීම සඳහා භාවිතා කරන ලදී. id) ප්‍රශස්ත ඇසුරුම් ක්‍රමය භාවිතා කිරීම. තීරුව තුළ සමජාතීය ඇඳක් සෑදී ඇති බව සහතික කිරීම සඳහා තීරු ඇසුරුම් යාන්ත්‍රික කම්පනය සමඟ සහාය වේ.(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Ag, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) සහ Human serum albumin (HAS) හි ට්‍රයිප්සින් ඩයිජස්ට් (HAS) පෙප්ටයිඩ මිශ්‍රණය සහ ට්‍රයිප්සින් ඩයිජස්ට් එච්එස්ඒ හි හොඳ විභේදනය හා කාර්ය සාධනය සමඟ සංසන්දනය කරන ලදී. RP-Amide තීරුව. PMP තීරුව මත පෙප්ටයිඩ සහ ප්‍රෝටීන යන දෙකම හොඳින් විසඳා ඇති බවත්, Ascentis Express RP-Amide තීරුවට වඩා කාර්යක්ෂම බවත් නිරීක්ෂණය විය.
PEG (පොලිඑතිලීන් ග්ලයිකෝල්), යූරියා, ඇසිටික් අම්ලය, ට්‍රයිමෙතොක්සි ඕතොසිලිකේට් (TMOS), ට්‍රයිමෙතයිල් ක්ලෝරෝසිලේන් (TMCS), ට්‍රිප්සින්, හියුමන් සෙරුම් ඇල්බියුමින් (HSA), ඇමෝනියම් ක්ලෝරයිඩ්, යූරියා, හෙක්සෙන් මෙතිල්ඩිසිලසේන් (HMDS), බෙන්ඩ්‍රොක්සයිල්-පීඕ 4 ක්ලෝරයිඩ් ide (BPO), HPLC ශ්‍රේණියේ Acetonitrile (ACN), Methanol, 2-Propanol, සහ Acetone Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) වෙතින් මිලදී ගන්නා ලදී.
යූරියා (ග්‍රෑම් 8), පොලිඑතිලීන් ග්ලයිකෝල් (ග්‍රෑම් 8) සහ 0.01 එන් ඇසිටික් අම්ලයේ මිලිලීටර් 8 මිශ්‍රණයක් විනාඩි 10 ක් කලවම් කර, පසුව ටීඑම්ඕඑස් මිලිලීටර් 24 ක් අයිස්-සීතල තත්ව යටතේ එයට එකතු කරන ලදී. ප්‍රතික්‍රියා මිශ්‍රණය 40 ° C ට පැය 6 ක් රත් කර පසුව සෙල්සියස් අංශක 120 ට ස්වයංක්‍රීයව වාෂ්පීකරණය කරන ලද ජලය මෙම ද්‍රව්‍ය පැය 12ක් සඳහා 70°C ට වියලනු ලැබේ. වියලන ලද මෘදු ස්කන්ධය උඳුන තුල සිනිඳු කර පැය 12 ක් 550°C දී ගණනය කරන ලදී. අංශු ප්‍රමාණය, සිදුරු ප්‍රමාණය සහ මතුපිට ප්‍රමාණයේ ප්‍රජනනය පරීක්ෂා කිරීම සඳහා කාණ්ඩ තුනක් සකස් කර සංලක්ෂිත කරන ලදී.
පූර්ව සංස්ලේෂණය කරන ලද ලිගන්ඩ් ෆීනයිල්මැලෙයිමයිඩ්-මෙතිල්වයිනයිලිසොසයනේට් (PCMP) සමඟ සිලිකා අංශු මතුපිට වෙනස් කිරීමෙන් පසුව ස්ටයිරීන් සමඟ රේඩියල් බහුඅවයවීකරණය කිරීමෙන්, ධ්‍රැවීය කාණ්ඩයක් අඩංගු සංයෝගයක් සකස් කරන ලදී.සමස්ථ සහ ෙපොලිස්ටිරින් දම්වැල් සඳහා ස්ථීර අදියර. සකස් කිරීමේ ක්රියාවලිය පහත විස්තර කෙරේ.
N-phenylmaleimide (200 mg) සහ methyl vinyl isocyanate (100 mg) වියළි ටොලුයින්වල දියකර, 0.1 mL 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ප්‍රතික්‍රියා කුප්පියට එකතු කර ෆීනයිල්මලෙයිමයිඩ්-මෙතයිල් වයිනයිල් එම්සීපී මිශ්‍රණය තාපාංකය (Phenylmaleimide-methyl CP00C) පැය 3 ක් සඳහා, පැය 3 ක් සඳහා 40 ° C උඳුන තුල පෙරීම සහ වියළන්න.
වියලන ලද සිලිකා අංශු (ග්‍රෑම් 2) වියළි ටොලුයින් (මිලි ලීටර් 100) තුළ විසුරුවා හරින ලද අතර, මිලි ලීටර් 500 ක වටකුරු ප්ලාස්ක් එකක විනාඩි 10 ක් කලවම් කර සොනික් කර ඇත. පීඑම්සීපී (10 mg) ටොලුයින් තුළ දිය කර ප්‍රතික්‍රියා නළයට බින්දු ආකාරයෙන් එකතු කරන ලදී. පැය 3ක් සඳහා 60°C. පසුව PMCP-බන්ධිත සිලිකා අංශු (ග්‍රෑම් 100) ටොලුයින් (මිලි ලීටර් 200) තුළ දිය කර, 4-හයිඩ්‍රොක්සි-ටෙම්පෝ (2 mL) 100 µL dibutyltin dilaurate ෆිල්ටරය හමුවේ උත්ප්‍රේරකයක් ලෙස එකතු කරන ලදී. මිශ්‍රණය ° C පැය 5 ට කලවම් කර පැය 50 ට කලවම් කරන ලදී.
ස්ටයිරීන් (මිලි ලීටර් 1), බෙන්සොයිල් පෙරොක්සයිඩ් බීපීඕ (මිලි ලීටර් 0.5), සහ ටෙම්පෝ-පීඑම්සීපී අමුණා ඇති සිලිකා අංශු (ග්‍රෑම් 1.5) ටොලුයින් තුළ විසුරුවා නයිට්‍රජන් සමඟ පිරිසිදු කරන ලදී. ස්ටයිරීන් බහුඅවයවීකරණය 100 ° C දී සිදු කරන ලදී. ප්‍රතික්‍රියාව සෙල්සියස් අංශක 12 ට වඩා රාත්‍රී 6 කින් වියළන ලදී. රූප සටහන 1 හි.
10-3 Torr ට වඩා අඩු අවශේෂ පීඩනයක් ලබා ගැනීම සඳහා සාම්පල පැය 1 ක් සඳහා 393 K දී වායුව ඉවත් කරන ලදී. P/P0 = 0.99 සාපේක්ෂ පීඩනයකදී N2 adsorbed ප්‍රමාණය මුළු සිදුරු පරිමාව තීරණය කිරීම සඳහා භාවිතා කරන ලදී. හිස් සහ ligand-bonded silica particles සමඟ හිස් සහ ligand-bonded silica අංශුවල රූප විද්‍යාව (High and ligand-bonded silica particles) , ජපානය) වියලන ලද සාම්පල (හිස් සිලිකා සහ ලිගන්ඩ්-බන්ධිත සිලිකා අංශු) ඇලවුම් කාබන් ටේප් භාවිතයෙන් ඇලුමිනියම් තීරුවක් මත තබා ඇත. Q150T ස්පුටර් කෝටරයක් ​​භාවිතයෙන් සාම්පල මත රත්‍රන් ආලේප කර ඇති අතර 5 nm Au ස්ථරයක් සාම්පල මත තැන්පත් කර ඇත. tham, MA, USA) Flash EA1112 මූලද්‍රව්‍ය විශ්ලේෂකය මූලද්‍රව්‍ය විශ්ලේෂණය සඳහා භාවිතා කරන ලදී. A Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 අංශු ප්‍රමාණයේ විශ්ලේෂකය අංශු ප්‍රමාණයේ ව්‍යාප්තිය ලබා ගැනීමට භාවිතා කරන ලදී. නිරුවත් සිලිකා අංශු සහ ligand-bonded silica particles සඳහා 5 mg විසිරී ඇත. , විනාඩි 5 ක් සඳහා සුළි කර ඇති අතර, Mastersizer හි දෘශ්ය බංකුව මත තබා ඇත. Thermogravimetric විශ්ලේෂණය 30 සිට 800 ° C දක්වා උෂ්ණත්ව පරාසයක විනාඩියකට 5 ° C අනුපාතයකින් සිදු කරන ලදී.
විදුරු අතුරන ලද මල නොබැඳෙන වානේ පටු සිදුරු සහිත මානයන් සහිත තීරු (100 × 1.8 මි.මී. id) පොහොර ඇසුරුම් ක්‍රමය භාවිතා කරමින් ඇසුරුම් කර ඇත.31. මල නොබැඳෙන වානේ තීරුවක් (වීදුරු අතුරන ලද, 100 × 1.8 මි.මී. හැඳුනුම්පතක්) 1 µm ෆ්‍රිට් අඩංගු පිටවාන සවි කිරීමක් පොහොර පැකර් එකකට සම්බන්ධ කර ඇත (Alltech Deerfield, IL, USA). ස්ථාවර ෆේස් පොහොරක් සකස් කරන්න. එය ස්ටේෂරීල් 150 mg ට වඩා 150 mL ක ගබඩාවට යවන්න. පොහොර ද්‍රාවකය මෙන්ම ප්‍රචාලන ද්‍රාවකය ලෙසද භාවිතා කරයි. මිනිත්තු 10ක් සඳහා 100 MP, මිනිත්තු 15ක් සඳහා 80 MP සහ විනාඩි 30ක් සඳහා MP 60ක පීඩනයක් යොදමින් තීරුව අනුක්‍රමිකව පුරවන්න. ඇසුරුම් කිරීමේදී GC තීරු ෂේකර් දෙකකින් යාන්ත්‍රික කම්පනය යොදන ලදී. තීරුව තුළ යම් හානියක් වැලැක්වීම සඳහා. පොහොර ඇසුරුම් ඒකකයෙන් තීරුව විසන්ධි කර එහි ක්‍රියාකාරීත්වය පරීක්ෂා කිරීම සඳහා ඇතුල්වීමට සහ LC පද්ධතියට වෙනත් සවි කිරීමක් සම්බන්ධ කරන්න.
LC පොම්පයක් (10AD Shimadzu, Japan), injector (Valco (USA) C14 W.05) සමඟ 50nL ඉන්ජෙක්ෂන් ලූප්, membrane degasser (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS කේශනාලිකා කවුළුව ඉදිකරන ලදී විශේෂ µLC උපාංග අනාවරකය (UV-2075 ට කුඩා කුඩා කුඩා කුඩා කුඩා COLONS උපාංග අනාවරකය) අමතර තීරු තීරු පුළුල් කිරීමේ බලපෑම ize.ඇසුරුම් කිරීමෙන් පසු, කේශනාලිකා (50 μm id 365 සහ අඩු කරන යුනියන් කේශනාලිකා (50 μm) අඩු කිරීමේ සංගමයේ 1/16″ අලෙවිසැලේ ස්ථාපනය කරන ලදී.Multichro 2000 Multichro 2000 පරීක්ෂණ මෘදුකාංගයක් භාවිතා කරමින් Multichro 2000 පරීක්ෂණ මෘදුකාංගයක් භාවිතා කරමින් දත්ත රැස්කිරීම සහ වර්ණදේහ සැකසීම සිදු කරන ලදී. ග්‍රැෆික් දත්ත OriginPro8 (Northampton, MA) විසින් විශ්ලේෂණය කරන ලදී.
මිනිස් සෙරම් වලින් ඇල්බියුමින්, lyophilized කුඩු, ≥ 96% (agarose gel electrophoresis) 3 mg ට්‍රයිප්සින් (1.5 mg), 4.0 M යූරියා (1 mL), සහ 0.2 M ඇමෝනියම් බයිකාබනේට් (1 mL) සමඟ මිශ්‍ර කර ඇත. ද්‍රාවණය විනාඩි 10 ක් කලවම් කර, 01 ° C ජලය ස්නානයක තබා පැය 03 ට පසුව සෙල්සියස් අංශක 7 ක් වතුර ස්නානයක තබා ඇත. 1% TFA. ද්‍රාවණය පෙරා 4 °Cට අඩුවෙන් ගබඩා කරන්න.
පෙප්ටයිඩ මිශ්‍රණ සහ HSA ට්‍රයිප්සින් දිරවීම PMP තීරු මත වෙන වෙනම ඇගයීමට ලක් කරන ලදී. PMP තීරුවෙන් HSA හි පෙප්ටයිඩ මිශ්‍රණය සහ ට්‍රයිප්සින් ජීර්ණය වෙන් කිරීම පරීක්ෂා කර ප්‍රතිඵල Ascentis Express RP-Amide තීරුවට සංසන්දනය කරන්න. න්‍යායාත්මක තහඩු අංකය පහත පරිදි ගණනය කෙරේ:
හිස් සිලිකා අංශු සහ ලිගන්ඩ්-බන්ධිත සිලිකා අංශු වල SEM රූප FIG හි පෙන්වා ඇත.හිස් සිලිකා අංශු (A, B) හි SEM රූප පෙන්නුම් කරන්නේ, අපගේ පෙර අධ්‍යයනයන්ට ප්‍රතිවිරුද්ධව, මෙම අංශු අංශු දිග් වූ හෝ අක්‍රමවත් සමමිතියක් ඇති ගෝලාකාර වන බවයි. ලිගන්ඩ්-බන්ධිත සිලිකා අංශු (C, D) මතුපිට නිරුවත් සිලිකා අංශුවල මතුපිටට වඩා සිනිඳුයි. සිලිකා අංශු.
හිස් සිලිකා අංශු (A, B) සහ ලිගන්ඩ්-බන්ධිත සිලිකා අංශු (C, D) ඉලෙක්ට්‍රෝන අන්වීක්ෂ රූප පරිලෝකනය කිරීම.
හිස් සිලිකා අංශු සහ ලිගන්ඩ්-බන්ධිත සිලිකා අංශුවල අංශු ප්‍රමාණයේ ව්‍යාප්තිය රූප සටහන 3(A) හි පෙන්වා ඇත.පරිමාව මත පදනම් වූ අංශු ප්‍රමාණයේ ව්‍යාප්ති වක්‍ර පෙන්නුම් කළේ රසායනික වෙනස් කිරීමෙන් පසු සිලිකා අංශුවල ප්‍රමාණය වැඩි වී ඇති බවයි (රූපය 3A). අංශු ප්‍රමාණයේ ව්‍යාප්තිය දත්ත (පසුගිය අධ්‍යයනයෙන් සිලිකා අංශුවල ප්‍රමාණය 0) සංසන්දනය කළ හැකිය. .5), PMP හි 3.36 μm, අපගේ පෙර අධ්‍යයනයට සාපේක්ෂව 3.05 μm (පොලිස්ටිරින් බැඳුනු සිලිකා අංශු) 34. මෙම කණ්ඩායමට අපගේ පෙර අධ්‍යයනයට සාපේක්ෂව පටු අංශු ප්‍රමාණයේ ව්‍යාප්තියක් තිබුණේ PEG, යූරියා සහ ප්‍රතික්‍රියා ප්‍රමාණයේ PMP අංශු ප්‍රමාණයට වඩා විශාල ප්‍රමාණයේ PMP, ප්‍රතික්‍රියා අම්ලයයි. අප කලින් අධ්‍යයනය කරන ලද ෙපොලිස්ටිරින් බැඳුණු සිලිකා අංශු අවධිය. මෙයින් අදහස් කරන්නේ ස්ටයිරීන් සමඟ සිලිකා අංශුවල මතුපිට ක්‍රියාකාරීත්වය සිලිකා මතුපිටට පොලි ස්ටයිරීන් ස්ථරයක් (0.97 µm) පමණක් තැන්පත් වූ අතර PMP අදියරේදී ස්ථරයේ ඝනකම 1.38 µm විය.
අංශු ප්‍රමාණය ව්‍යාප්තිය (A) සහ සිදුරු ප්‍රමාණය ව්‍යාප්තිය (B) හිස් සිලිකා අංශු සහ ලිගන්ඩ්-බැඳි සිලිකා අංශු.
වත්මන් අධ්‍යයනයේ සිලිකා අංශුවල සිදුරු ප්‍රමාණය, සිදුරු පරිමාව සහ පෘෂ්ඨ වර්ගඵලය 1(B) වගුවේ දක්වා ඇත. හිස් සිලිකා අංශු සහ ලිංගේන්ද්‍ර-බන්ධිත සිලිකා අංශු වල PSD පැතිකඩ රූප සටහන 3(B) හි පෙන්වා ඇත. ප්‍රතිඵල අපගේ පෙර අධ්‍යයනය හා සැසඳිය හැක. වගුව 1(B) හි පෙන්වා ඇති පරිදි රසායනික වෙනස් කිරීමෙන් පසු සිදුරු ප්‍රමාණය 69 කින් අඩු වන අතර, වක්‍රයේ වෙනස් වීම Fig. 3(B) හි පෙන්වා ඇත. ඒ හා සමානව, රසායනික වෙනස් කිරීමෙන් පසු සිලිකා අංශුවල සිදුරු පරිමාව 0.67 සිට 0.58 cm3/g දක්වා අඩු විය. දැනට අධ්‍යයනය කර ඇති සිලිකා අංශු 1 හි නිශ්චිත මතුපිට ප්‍රදේශය m2 ට සංසන්දනය කළ හැකි m6 කොටසයි. 4 m2/g).වගුව 1(B) හි පෙන්වා ඇති පරිදි, රසායනික වෙනස් කිරීමෙන් පසු සිලිකා අංශුවල මතුපිට වර්ගඵලය (m2/g) ද 116 m2/g සිට 105 m2/g දක්වා අඩු විය.
නිශ්චල අවධියේ මූලද්‍රව්‍ය විශ්ලේෂණයේ ප්‍රතිඵල වගුව 2 හි දක්වා ඇත. වත්මන් ස්ථාවර අවධියේ කාබන් පැටවීම 6.35% වන අතර එය අපගේ පෙර අධ්‍යයනයේ කාබන් පැටවීමට වඩා අඩුය (පොලිස්ටිරින් බන්ධිත සිලිකා අංශු, පිළිවෙලින් 7.93% 35 සහ 10.21%) 42. වත්මන් එකතු කිරීමේ අදියරෙහි වත්මන් එකතු කිරීම අඩු බැවින්, SP වත්මන් එකතු කිරීම ස්ටයිරීන්, phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) සහ 4-hydroxy-TEMPO වැනි සමහර ධ්‍රැවීය ලිගන්ඩ් භාවිතා කරන ලදී. වත්මන් නිශ්චල අවධියේ නයිට්‍රජන් බර ප්‍රතිශතය 2.21% වන අතර, 0.1735 සහ 0.85% ට සාපේක්ෂව 2.21% වේ. phenylmaleimide වෙත. ඒ හා සමානව, නිෂ්පාදනවල කාබන් පූරණය (4) සහ (5) පිළිවෙලින් 2.7% සහ 2.9% වන අතර, අවසාන නිෂ්පාදනයේ (6) කාබන් පැටවීම 6.35% වන අතර, වගුව 2 හි පෙන්වා ඇත. බර අඩු වීම PMP නිශ්චල අවධිය සමඟ පරීක්ෂා කර ඇත. TGA වක්‍රය 8 හි පෙන්වා ඇත. කාබන් පැටවීම සමඟ හොඳ එකඟතාවයක් (6.35%) ලිගන්ඩ් වල C පමණක් නොව N, O සහ H ද අඩංගු වේ.
සිලිකා අංශු මතුපිට වෙනස් කිරීම සඳහා phenylmaleimide-methylvinylisocyanate ligand තෝරා ගනු ලැබුවේ එහි ධ්‍රැවීය phenylmaleimide කණ්ඩායම් සහ vinylisocyanate කාණ්ඩ ඇති බැවිනි. Vinyl isocyanate කාණ්ඩවලට ස්ටයිරීන් සමඟ තවදුරටත් ප්‍රතික්‍රියා කළ හැක්කේ රැඩිකල් බහුඅවයවීකරණය වීමෙනි. දෙවන හේතුව නම් මධ්‍යස්ථ ස්ථිතික අන්තර්ක්‍රියාවක් සහ විද්‍යුත් ස්ථිතික අන්තර්ක්‍රියාවක් නොමැති මධ්‍යස්ථ අන්තර්ක්‍රියා සහ විද්‍යුත් ස්ථිතික අන්තර්ක්‍රියා සමූහයක් ඇතුළත් කිරීමයි. නිශ්චල අවධිය, phenylmaleimide moiety ට සාමාන්‍ය pH අගයේදී අතථ්‍ය ආරෝපණයක් නොමැති නිසා. ස්ථිතික අවධියේ ධ්‍රැවීයතාව ප්‍රශස්ත ස්ටයිරීන් ප්‍රමාණයෙන් සහ නිදහස් රැඩිකල් බහුඅවයවීකරණයේ ප්‍රතික්‍රියා කාලය මගින් පාලනය කළ හැක. ප්‍රතික්‍රියාවේ අවසාන පියවර (නිදහස් රැඩිකල් බහුඅවයවීකරණය) ඉතා වැදගත් වන අතර එය නිරීක්ෂණය කරන ලද ස්ථිතික අවධියේ ධ්‍රැවීයතාව වෙනස් කළ හැකිය. ස්ටයිරීන් ප්‍රමාණය සහ ප්‍රතික්‍රියා කාලය නිශ්චල අවධියේ කාබන් පැටවීම වැඩි කළ අතර අනෙක් අතට ස්ටයිරීන් විවිධ සාන්ද්‍රණයකින් සකස් කරන ලද SPs විවිධ කාබන් පැටවීම් ඇත. නැවතත්, මෙම නිශ්චල අවධීන් මල නොබැඳෙන වානේ තීරුවලට පටවා ඒවායේ වර්ණදේහ කාර්ය සාධනය පරීක්ෂා කරන්න (තෝරාගත් අදියර, විභේදනය, N අගය, යනාදිය පාලනය කිරීම සඳහා තෝරා ගන්නා ලද ස්ථානය සහතික කර ඇත. ධ්රැවීයතාව සහ හොඳ විශ්ලේෂණ රඳවා තබා ගැනීම.
පෙප්ටයිඩ මිශ්‍රණ පහක් (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) ජංගම අදියරක් භාවිතයෙන් PMP තීරුවක් භාවිතයෙන් ඇගයීමට ලක් කරන ලදී;60/40 (v/v) ඇසිටොනිට්‍රයිල්/ජලය (0.1% TFA) 80 μL/min ප්‍රවාහ අනුපාතයකින්. ප්‍රශස්ත elution තත්ත්‍වයන් යටතේ, තීරුවකට (100 × 1.8 mm id) න්‍යායාත්මක තහඩු අංකය (N) 20,000 ± 100² 3 සඳහා පිඟාන 20,000 ± 100² 3 අගය ලබා දෙයි. MP තීරු සහ වර්ණදේහ රූප සටහන 5A හි පෙන්වා ඇත. PMP තීරුවක වේගවත් විශ්ලේෂණයක් ඉහළ ප්‍රවාහ අනුපාතයකින් (700 μL/min), පෙප්ටයිඩ පහක් විනාඩියක් ඇතුළත ඉවත් කරන ලදී, N අගයන් ඉතා හොඳ විය, තීරුවකට 13,500 ± 330 (100 × 1.8 mm id දක්වා) තීරුවකට (100 × 1.8 mm id දක්වා), ප්‍රතිනිෂ්පාදනය පරීක්ෂා කිරීම සඳහා සමාන ප්‍රමාණයේ තීරු (100 × 1.8 මි.මී. id) PMP ස්ථායී අදියරේ විවිධ කොටස් තුනකින් අසුරා ඇත. එක් එක් තීරුව සඳහා විශ්ලේෂණ සාන්ද්‍රණය ප්‍රශස්ත elution තත්ත්‍වයන් සහ න්‍යායාත්මක තහඩු ගණන N සහ රඳවා ගැනීමේ කාලය භාවිතා කර වාර්තා කරන ලදී. වගුව 3 හි පෙන්වා ඇති පරිදි ඉතා අඩු %RSD අගයන් සමඟ හොඳින් සම්බන්ධ වේ.
PMP තීරුව (B) සහ Ascentis Express RP-Amide තීරුව (A) මත පෙප්ටයිඩ මිශ්රණය වෙන් කිරීම;ජංගම අදියර 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP තීරු මානයන් (100 × 1.8 mm id);විශ්ලේෂණාත්මක සංයෝගවල විශ්ලේෂණ අනුපිළිවෙල: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) සහ 5 (ලියුසීන්) අම්ලය enkephalin)).
PMP තීරුවක් (100 × 1.8 mm id) ඉහළ ක්‍රියාකාරී ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාවේදී මානව සෙරුමය ඇල්බියුමින්වල ට්‍රයිප්ටික් ජීර්ණය වෙන් කිරීම සඳහා ඇගයීමට ලක් කරන ලදී. 6 හි ඇති ක්‍රෝමැටෝග්‍රෑම් මගින් නියැදිය හොඳින් වෙන් කර ඇති අතර විභේදනය ඉතා හොඳ බව පෙන්නුම් කරයි. .ක්‍රොමැටෝග්‍රෑම් හි පෙන්වා ඇති පරිදි (රූපය 6), HSA ජීර්ණය පෙප්ටයිඩ 17 ට අනුරූප වන උච්ච 17 කට බෙදා ඇත. HSA digest හි එක් එක් උච්චයේ වෙන් කිරීමේ කාර්යක්ෂමතාව ගණනය කරන ලද අතර අගයන් 5 වගුවේ දක්වා ඇත.
HSA (100 × 1.8 mm id) හි ට්‍රයිප්ටික් ජීර්ණයක් PMP තීරුවක් මත වෙන් කරන ලදී;ප්‍රවාහ අනුපාතය (100 µL/min), ජංගම අදියර 60/40 acetonitrile/ජලය 0.1% TFA සමඟ.
මෙහි L යනු තීරු දිග, η යනු ජංගම අදියරෙහි දුස්ස්රාවීතාවය, ΔP යනු තීරු පසුපස පීඩනය, සහ u යනු ජංගම අවධියේ රේඛීය ප්‍රවේගයයි. PMP තීරුවේ පාරගම්යතාව 2.5 × 10-14 m2, ප්‍රවාහ අනුපාතය 25 μL/min, සහ 60/40 v/v තීරුවේ ACN/me 1 හැකියාව භාවිතා කරන ලදී. 8 mm id) අපගේ පෙර අධ්‍යයනයට සමාන විය Ref.34. මතුපිටින් සිදුරු සහිත අංශු වලින් අසුරා ඇති තීරුවේ පාරගම්යතාව: 1.3 μm අංශු සඳහා 1.7 × 10-15, 1.7 μm අංශු සඳහා 3.1 × 10-15, 1.7 μm අංශු සඳහා 10-2 × 5.2 × 5.2 × අංශු 5 μm අංශු සඳහා 43. එබැවින්, PMP අදියරෙහි පාරගම්යතාව 5 μm මූලික කවච අංශු වලට සමාන වේ.
මෙහි Wx යනු ක්ලෝරෝෆෝම් ඇසුරුම් කළ තීරුවේ බර, Wy යනු මෙතනෝල් ඇසුරුම් කළ තීරුවේ බර, සහ ρ යනු ද්‍රාවකයේ ඝනත්වයයි.මෙතනෝල් (ρ = 0.7866) සහ ක්ලෝරෝෆෝම් (ρ = 1.484) ඝනත්වය. අප කලින් අධ්‍යයනය කළ C18-යූරියා තීරු 31 පිළිවෙලින් 0.63 සහ 0.55 විය. මෙයින් අදහස් කරන්නේ යූරියා ලිගන්ඩ් තිබීම නිශ්චල අවධියේ පාරගම්යතාව අඩු කරන බවයි. අනෙක් අතට, PMP තීරුවේ (100 × 1.8 mm- id) සම්පූර්ණ සිදුරු බව (100 × 1.8 mm- id සමඟ CMP තීරු 1 ට වඩා 0.60 ට අඩුයි. C18 වර්ගයේ නිශ්චල අවධීන්හිදී C18 ligands රේඛීය දාම ලෙස සිලිකා අංශුවලට සම්බන්ධ කර ඇති අතර, පොලිස්ටයිරින් වර්ගයේ ස්ථාවර අවධීන්හිදී, A සාපේක්ෂ ඝන බහු අවයවීය ස්ථරයක් ඒ වටා සෑදී ඇත. සාමාන්‍ය පරීක්ෂණයකදී, තීරු සිදුරු ගණනය කරනු ලබන්නේ:
රූප සටහන 7A,B මගින් PMP තීරුව (100 × 1.8 mm id) සහ Ascentis Express RP-Amide තීරුව (100 × 1.8 mm id) එකම ඉවත් කිරීමේ කොන්දේසි (එනම්, 60/40 ACN/H2O සහ 0.1% TFA) භාවිතා කරයි.) ඩීම්ටර් වෑන් රථයේ.තෝරාගත් පෙප්ටයිඩ මිශ්‍රණ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) 20 µL/ කින් සකස් කර ඇත. තීරු දෙකෙහිම අවම ප්‍රවාහ අනුපාතය 800 µL ප්‍රශස්ත අගයයි (HE/min 80 TP ප්‍රශස්ත අගයයි. ) PMP තීරුව සහ Ascentis Express RP-Amide තීරුව සඳහා පිළිවෙලින් 2.6 µm සහ 3.9 µm විය. HETP අගයන් පෙන්නුම් කරන්නේ PMP තීරුවේ (100 × 1.8 mm id) වෙන් කිරීමේ කාර්යක්ෂමතාවය වාණිජමය වශයෙන් ලබා ගත හැකි Ascentis Express 1 mmid තීරුව (RP-Am 10 1 mmid) ට වඩා හොඳ බවයි. 7(A) මගින් පෙන්නුම් කරන්නේ අපගේ පෙර අධ්‍යයනයට සාපේක්ෂව N ​​අගය වැඩි වීමත් සමඟ සැලකිය යුතු නොවන බවයි. Ascentis Express RP-Amide තීරුවට සාපේක්ෂව PMP තීරුවේ (100 × 1.8 mm id) ඉහළ වෙන් කිරීමේ කාර්යක්ෂමතාවය වත්මන් කාර්යයේ භාවිතා වන අංශු හැඩය, ප්‍රමාණය සහ සංකීර්ණ තීරු ඇසුරුම් ක්‍රියා පටිපාටිවල වැඩිදියුණු කිරීම් මත පදනම් වේ.
(A) 0.1% TFA සමඟ 60/40 ACN/H2O හි PMP තීරුවක් (100 × 1.8 mm id) භාවිතයෙන් ලබා ගත් වෑන් Deemter බිම් කොටස (HETP එදිරිව ජංගම ෆේස් රේඛීය ප්‍රවේගය) 60/40 ACN/H2O හි 0.1% TFA සමඟ.
ඉහළ ක්‍රියාකාරී ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාවේදී කෘතිම පෙප්ටයිඩ මිශ්‍රණ සහ මානව සෙරුම් ඇල්බියුමින් (HAS) හි ට්‍රයිප්සින් ජීර්ණය වෙන් කිරීම සඳහා ධ්‍රැවීය-කාවද්දන ලද ෙපොලිස්ටිරින් ස්ථාවර අදියරක් සකස් කර ඇගයීමට ලක් කරන ලදී. සිලිකා අංශු, නිශ්චල අවධියේ පාලිත සංස්ලේෂණය සහ සංකීර්ණ තීරු ඇසුරුම් කිරීම. ඉහළ වෙන් කිරීමේ කාර්යක්ෂමතාවයට අමතරව, ඉහළ ප්‍රවාහ අනුපාතයකින් අඩු තීරු පිටුපස පීඩනය මෙම ස්ථාවර අවධියේ තවත් වාසියකි. PMP තීරු හොඳ ප්‍රතිනිෂ්පාදනයක් පෙන්නුම් කරන අතර පෙප්ටයිඩ මිශ්‍රණ සහ ට්‍රයිප්සින් විවිධ ප්‍රෝටීන් ද්‍රව්‍ය ජීර්ණය කිරීම සඳහා යොදා ගත හැකිය. s ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාවේ. අනාගතයේදී, ප්‍රෝටීන සහ මොනොක්ලෝනල් ප්‍රතිදේහ වෙන් කිරීම සඳහා PMP තීරු ද ඇගයීමට ලක් කෙරේ.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Reverse Phase Cromatography මගින් Peptide Separation Systems පිළිබඳ පර්යේෂණ I කොටස: තීරු සංලක්ෂිත ප්‍රොටෝකෝලය සංවර්ධනය කිරීම.Chromatography.1603, 113-129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al. බෝවෙන රෝග සඳහා ප්‍රතිකාර කිරීම සඳහා නිර්මාණය කර ඇති වැඩිදියුණු කළ ක්‍රියාකාරී පෙප්ටයිඩ.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. සින්තටික් චිකිත්සක පෙප්ටයිඩ: විද්‍යාව සහ වෙළඳපොල.drug Discovery.15 (1-2) අද, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis (20009.1009).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Cromatography.J.Chromatography.A 1261, 78-90 (2012).
Liu, W. et al.උසස් ද්‍රව වර්ණදේහ-ස්කන්ධ වර්ණාවලීක්ෂය පුළුල් ලෙස ඉලක්ක කරගත් පරිවෘත්තීය සහ ප්‍රෝටියෝමික්ස්.anus.Chim.Acta 1069, 89-97 (2019) සංස්ථාගත කිරීම සක්‍රීය කරයි.
Chesnut, SM & Salisbury, JJ ඖෂධ සංවර්ධනයේදී UHPLC හි කාර්යභාරය.සැප්තැම්බර් Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM වේගවත් වෙන් කිරීම් සඳහා අතිශය අධි පීඩන ද්‍රව වර්ණදේහයේ මූලික සහ ප්‍රායෝගික අංශ.සැප්තැම්බර් Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. මත්ද්‍රව්‍ය සංවර්ධනයේදී අතිශය ඉහළ කාර්යසාධනයක් සහිත ද්‍රව වර්ණදේහයේ යෙදීම.Chromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. Enteroviruses කාර්යක්ෂමව පිරිසිදු කිරීම සඳහා තෙල්-තුළ-ජලයේ ඉහළ අභ්‍යන්තර අවධි ඉමල්ෂන් වලින් සකස් කරන ලද Monolithic macroporous hydrogels.Chemical.Britain.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA ප්‍රෝටෝමික්ස් හි ද්‍රව වර්ණදේහයේ භූමිකාව.Chromatography.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L.& Guillarme, D. චිකිත්සක පෙප්ටයිඩ සහ ප්‍රෝටීන වල ප්‍රතිලෝම-අදියර ද්‍රව වර්ණදේහ වෙන් කිරීම් වල නැගී එන ප්‍රවණතා: න්‍යාය සහ යෙදුම්.Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC RP-RP-HPLC පද්ධතියක් භාවිතා කරමින් පෙප්ටයිඩ ද්විමාන වෙන් කිරීම පළමු සහ දෙවන වෙන් කිරීමේ මානයන්හි විවිධ pH අගයන් භාවිතා කරයි.සැප්තැම්බර් Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al. C18 sub-2 μm සම්පූර්ණයෙන් සහ මතුපිටින් සිදුරු සහිත අංශුවලින් පිරුණු අධි-කාර්යක්ෂම වර්ණදේහ තීරුවල ස්කන්ධ හුවමාරු ලක්ෂණ සහ චාලක ක්‍රියාකාරිත්වය විමර්ශනය කරන ලදී.සැප්තැම්බර් Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
ශාක ජෛව ජෛව ජෛව ජෛව ජීවීන් තුළ PosaNA, S. Et al.ech an.itions.biolics ansmical. 410 (15), 3425-344.htps: 3425344.htps (2018 2452-0852-x (2018).
Mueller, JB et al.The proteomic landscape of the kingdom of life.Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al. සූදානම් දියර වර්ණදේහ මගින් චිකිත්සක පෙප්ටයිඩවල පහළට සැකසීම. අණු (බාසල්, ස්විට්සර්ලන්තය) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Mixed-mode chromatography සහ biopolymers සඳහා එහි යෙදීම.J.Chromatography.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. මිශ්‍ර මාදිලියේ ප්‍රෝටීන් වර්ණදේහ සඳහා Ligands: මූලධර්මය, ගුනාංගීකරනය සහ නිර්මාණය.Biotechnology.144(1), 3-11 (2009).