Nature.com වෙත පිවිසීම ගැන ඔබට ස්තූතියි. ඔබ සීමිත CSS සහායක් සහිත බ්‍රව්සර් අනුවාදයක් භාවිතා කරයි. හොඳම අත්දැකීම සඳහා, යාවත්කාලීන කළ බ්‍රව්සරයක් භාවිතා කරන ලෙස අපි නිර්දේශ කරමු (නැතහොත් Internet Explorer හි අනුකූලතා මාදිලිය අක්‍රීය කරන්න). ඊට අමතරව, අඛණ්ඩ සහාය සහතික කිරීම සඳහා, අපි විලාස සහ JavaScript නොමැතිව අඩවිය පෙන්වමු.
එකවර ස්ලයිඩ තුනක කැරොසලයක් පෙන්වයි. එකවර ස්ලයිඩ තුනක් හරහා ගමන් කිරීමට පෙර සහ ඊළඟ බොත්තම් භාවිතා කරන්න, නැතහොත් අවසානයේ ඇති ස්ලයිඩර් බොත්තම් භාවිතා කර එකවර ස්ලයිඩ තුනක් හරහා ගමන් කරන්න.
පුළුල් සිදුරු අංශු ලබා ගැනීම සඳහා සොල්-ජෙල් ක්‍රමය මගින් සිදුරු සහිත සිලිකා අංශු සකස් කරන ලදී. මෙම අංශු N-ෆීනයිල්මැලයිමයිඩ්-මෙතිල්වයිනයිල් අයිසොසයනේට් (PMI) සහ ස්ටයිරීන් සමඟ ප්‍රතිලෝම දාම හුවමාරු-ඛණ්ඩනය (RAFT) බහුඅවයවීකරණය හරහා ව්‍යුත්පන්න කර N-ෆීනයිල්මැලයිමයිඩ් අන්තර්කාලිත පොලිමයිඩ් නිපදවීය. ස්ටයිරීන් (PMP) ස්ථාවර අවධිය. පටු සිදුරු සහිත මල නොබැඳෙන වානේ තීරු (100 × 1.8 mm අභ්‍යන්තර විෂ්කම්භය) පොහොර ඇසුරුමකින් ඇසුරුම් කරන ලදී. පෙප්ටයිඩ පහකින් (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu ඇමයිනෝ අම්ලය එන්කෙෆලින්) සහ මිනිස් සෙරුම් ඇල්බියුමින් (HAS) හි ට්‍රිප්ටික් හයිඩ්‍රොලයිසේට් වලින් සමන්විත කෘතිම පෙප්ටයිඩ මිශ්‍රණයක් වෙන් කිරීම සඳහා PMP තීරුවේ වර්ණදේහ කාර්ය සාධනය ඇගයීමට ලක් කරන ලදී. ප්‍රශස්ත එලියුෂන් තත්ව යටතේ, පෙප්ටයිඩ මිශ්‍රණයක් සහිත තහඩු වල න්‍යායාත්මක සංඛ්‍යාව තහඩු 280,000/වර්ග මීටරයට ළඟා විය. වාණිජ Ascentis Express RP-Amide තීරුව සමඟ සංවර්ධනය කරන ලද තීරුවේ වෙන් කිරීමේ කාර්ය සාධනය සසඳන විට, PMP තීරුවේ වෙන් කිරීමේ කාර්යක්ෂමතාව වෙන් කිරීමේ කාර්යක්ෂමතාව සහ විභේදනය අනුව වාණිජ තීරුවට වඩා උසස් බව නිරීක්ෂණය විය.
ජෛව ඖෂධ කර්මාන්තය මෑත වසරවලදී වෙළඳපල කොටසෙහි සැලකිය යුතු වැඩිවීමක් සමඟ පුළුල් වන ගෝලීය වෙළඳපොළක් බවට පත්ව ඇත. ජෛව ඖෂධ කර්මාන්තයේ පුපුරන සුලු වර්ධනයත් සමඟ 1,2,3 පෙප්ටයිඩ සහ ප්‍රෝටීන් විශ්ලේෂණය සඳහා විශාල අවශ්‍යතාවයක් පවතී. ඉලක්කගත පෙප්ටයිඩයට අමතරව, පෙප්ටයිඩ සංස්ලේෂණය අතරතුර විවිධ අපද්‍රව්‍ය සෑදී ඇති බැවින්, පෙප්ටයිඩයේ අපේක්ෂිත සංශුද්ධතාවය ලබා ගැනීම සඳහා වර්ණදේහ පිරිසිදු කිරීම අවශ්‍ය වේ. ශරීර තරල, පටක සහ සෛලවල ප්‍රෝටීන විශ්ලේෂණය සහ ගුනාංගීකරනය කිරීම අතිශයින්ම අභියෝගාත්මක කාර්යයකි, මන්ද තනි සාම්පලයක පවතින විභවයෙන් හඳුනාගත හැකි විශේෂ විශාල සංඛ්‍යාවක් නිසාය. ස්කන්ධ වර්ණාවලීක්ෂය පෙප්ටයිඩ සහ ප්‍රෝටීන අනුක්‍රමණය කිරීම සඳහා ඵලදායී මෙවලමක් වුවද, එවැනි සාම්පල ස්කන්ධ වර්ණාවලීක්ෂයට කෙලින්ම හඳුන්වා දුන්නොත්, වෙන් කිරීම අසතුටුදායක වනු ඇත. MS විශ්ලේෂණයට පෙර ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාව (LC) සිදු කිරීමෙන් මෙම ගැටළුව විසඳා ගත හැකි අතර, එමඟින් දී ඇති කාලයකදී ස්කන්ධ වර්ණාවලීක්ෂයට ඇතුළු වන විශ්ලේෂණ ප්‍රමාණය අඩු වේ4,5,6. ඊට අමතරව, ද්‍රව අවධි වෙන් කිරීමේදී විශ්ලේෂණ ද්‍රව්‍ය පටු කලාපයක සාන්ද්‍රණය කළ හැකි අතර, එමඟින් මෙම විශ්ලේෂණ සාන්ද්‍රණය කර MS හඳුනාගැනීමේ සංවේදීතාව වැඩි කරයි. ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාව (LC) පසුගිය දශකය තුළ සැලකිය යුතු ලෙස දියුණු වී ඇති අතර ප්‍රෝටෝමික් විශ්ලේෂණය සඳහා බහුලව භාවිතා වන ක්‍රමයක් බවට පත්ව ඇත7,8,9,10.
ප්‍රතිලෝම-අදියර ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාව (RP-LC) ස්ථාවර අවධිය ලෙස ඔක්ටඩසයිල්-වෙනස් කරන ලද සිලිකා (ODS) භාවිතා කරමින් පෙප්ටයිඩ මිශ්‍රණ පිරිසිදු කර වෙන් කිරීම සඳහා බහුලව භාවිතා වේ11,12,13. කෙසේ වෙතත්, ඒවායේ සංකීර්ණ ව්‍යුහය සහ ඇම්ෆොටරික් ස්වභාවය නිසා,14,15 RP ස්ථාවර අවධීන් පෙප්ටයිඩ සහ ප්‍රෝටීන වල සතුටුදායක වෙන්වීමක් ලබා දිය නොහැක. එබැවින්, ධ්‍රැවීය සහ ධ්‍රැවීය නොවන කොටස් සහිත පෙප්ටයිඩ සහ ප්‍රෝටීන විශ්ලේෂණය කිරීම සඳහා මෙම විශ්ලේෂණ අන්තර්ක්‍රියා කර රඳවා ගැනීමට විශේෂයෙන් නිර්මාණය කරන ලද ස්ථාවර අවධීන් අවශ්‍ය වේ16. බහුමාධ්‍ය අන්තර්ක්‍රියා පිරිනමන මිශ්‍ර වර්ණදේහ විද්‍යාව, පෙප්ටයිඩ, ප්‍රෝටීන සහ අනෙකුත් සංකීර්ණ මිශ්‍රණ වෙන් කිරීම සඳහා RP-LC සඳහා විකල්පයක් විය හැකිය. මිශ්‍ර ආකාරයේ ස්ථාවර අවධීන් කිහිපයක් සකස් කරන ලද අතර මෙම ස්ථාවර අවධීන්ගෙන් පිරුණු තීරු පෙප්ටයිඩ සහ ප්‍රෝටීන වෙන් කිරීම සඳහා භාවිතා කරන ලදී17,18,19,20,21. ධ්‍රැවීය සහ ධ්‍රැවීය නොවන කාණ්ඩ පැවතීම නිසා, මිශ්‍ර මාදිලියේ ස්ථාවර අවධි (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, ධ්‍රැවීය අන්තර්කාලනය/RPLC) පෙප්ටයිඩ සහ ප්‍රෝටීන වෙන් කිරීම සඳහා සුදුසු වේ22,23,24,25,26,27,28. , සහසංයුජව බන්ධනය වූ ධ්‍රැවීය කාණ්ඩ සහිත ධ්‍රැවීය අන්තර්කාලනය කරන ලද ස්ථාවර අවධි ධ්‍රැවීය සහ ධ්‍රැවීය නොවන විශ්ලේෂණ සඳහා හොඳ වෙන් කිරීමේ හැකියාවන් සහ අද්විතීය තේරීමක් පෙන්නුම් කරයි, මන්ද වෙන්වීම විශ්ලේෂකය සහ ස්ථායී අවධිය අතර අන්තර්ක්‍රියා මත රඳා පවතී. බහුමාධ්‍ය අන්තර්ක්‍රියා 29,30,31,32. මෑතකදී, ෂැං සහ තවත් අය 30 ක් පොලිඇමයින් වල බෙහෙනයිල්-අවසන් කරන ලද ස්ථාවර අවධි ලබා ගත් අතර හයිඩ්‍රොකාබන, විෂාදනාශක, ෆ්ලේවනොයිඩ්, නියුක්ලියෝසයිඩ්, එස්ටජන් සහ තවත් සමහර විශ්ලේෂණ සාර්ථකව වෙන් කළහ. ධ්‍රැවීය කාවැද්දූ ස්ථාවර ද්‍රව්‍යයේ ධ්‍රැවීය සහ ධ්‍රැවීය නොවන කාණ්ඩ දෙකම ඇත, එබැවින් එය පෙප්ටයිඩ සහ ප්‍රෝටීන ජලභීතික සහ ජලාකර්ෂණීය කොටස් වලට වෙන් කිරීමට භාවිතා කළ හැකිය. ධ්‍රැවීය පේළිගත තීරු (උදා: ඇමයිඩ් පේළිගත C18 තීරු) Ascentis Express RP-Amide තීරු යන වෙළඳ නාමය යටතේ ලබා ගත හැකි නමුත්, මෙම තීරු ඇමයින් 33 විශ්ලේෂණය සඳහා පමණක් භාවිතා කර ඇත.
වත්මන් අධ්‍යයනයේ දී, පෙප්ටයිඩ වෙන් කිරීම සහ ට්‍රිප්ටික් HSA බෙදීම සඳහා ධ්‍රැවීය කාවැද්දීමේ ස්ථාවර අවධියක් (N-ෆීනයිල්මැලයිමයිඩ්, කාවැද්දීමේ පොලිස්ටිරීන්) සකස් කර ඇගයීමට ලක් කරන ලදී. ස්ථාවර අවධිය සකස් කිරීම සඳහා පහත උපාය මාර්ගය භාවිතා කරන ලදී. අපගේ පෙර ප්‍රකාශනවල විස්තර කර ඇති ක්‍රියා පටිපාටිවලට අනුව සිදුරු සහිත සිලිකා අංශු සකස් කරන ලද අතර, සකස් කිරීමේ යෝජනා ක්‍රම 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39 හි යම් වෙනස්කම් සිදු කරන ලදී. විශාල සිදුරු ප්‍රමාණයන් සහිත සිලිකා අංශු ලබා ගැනීම සඳහා යූරියා, පොලිඑතිලීන් ග්ලයිකෝල් (PEG), TMOS සහ ජලීය-ඇසිටික් අම්ලයේ අනුපාත සකස් කරන ලදී. දෙවනුව, නව ෆීනයිල්මැලයිමයිඩ්-මෙතිල්වයිනයිල් අයිසොසයනේට් ලිගන්ඩ් සංස්ලේෂණය කරන ලද අතර එහි ව්‍යුත්පන්න සිලිකා අංශු ධ්‍රැවීය කාවැද්දූ ස්ථාවර අදියර සකස් කිරීම සඳහා භාවිතා කරන ලදී. ලබාගත් ස්ථාවර අවධිය ප්‍රශස්ත ඇසුරුම් යෝජනා ක්‍රමයකට අනුව මල නොබැඳෙන වානේ තීරුවකට (අභ්‍යන්තර විෂ්කම්භය 100 × 1.8 මි.මී.) ඇසුරුම් කරන ලදී. තීරුව තුළ ඒකාකාර තට්ටුවක් සහතික කිරීම සඳහා තීරුවේ ඇසුරුම් කිරීම යාන්ත්‍රික කම්පනය මගින් උපකාරී වේ. ඇසුරුම් කරන ලද තීරුව, පෙප්ටයිඩ පහකින් (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin peptide) සමන්විත පෙප්ටයිඩ මිශ්‍රණයක් වෙන් කිරීම සඳහා ඇගයීමට ලක් කරන ලදී. සහ මිනිස් සෙරුම් ඇල්බියුමින් (HSA) හි ට්‍රිප්ටික් හයිඩ්‍රොලයිසේට්. පෙප්ටයිඩ මිශ්‍රණය සහ HSA ට්‍රිප්ටික් ජීර්ණය හොඳ විභේදනයකින් සහ කාර්යක්ෂමතාවයකින් වෙන් කර ඇති බව නිරීක්ෂණය විය. PMP තීරුවේ වෙන් කිරීමේ කාර්යක්ෂමතාව Ascentis Express RP-Amide තීරුවට සාපේක්ෂව සංසන්දනය කරන ලදී. PMP තීරුවේ පෙප්ටයිඩ සහ ප්‍රෝටීන හොඳ විභේදනයක් සහ ඉහළ වෙන් කිරීමේ කාර්යක්ෂමතාවයක් ඇති බව නිරීක්ෂණය කරන ලද අතර, PMP තීරුවේ වෙන් කිරීමේ කාර්යක්ෂමතාව Ascentis Express RP-Amide තීරුවට වඩා වැඩි ය.
PEG (පොලිඑතිලීන් ග්ලයිකෝල්), යූරියා, ඇසිටික් අම්ලය, ට්‍රයිමෙතොක්සිඕතොසිලිකේට් (TMOS), ට්‍රයිමෙතිල්ක්ලෝරෝසිලේන් (TMCS), ට්‍රිප්සින්, මානව සෙරුම් ඇල්බියුමින් (HSA), ඇමෝනියම් ක්ලෝරයිඩ්, යූරියා, හෙක්සමෙතිල්මෙතක්‍රිලොයිල්ඩිසිලේසේන් (HMDS), මෙතක්‍රිලොයිල් ක්ලෝරයිඩ් (MC), ස්ටයිරීන්, 4-හයිඩ්‍රොක්සි- TEMPO, බෙන්සොයිල් පෙරොක්සයිඩ් (BPO), HPLC සඳහා ඇසිටොනයිට්‍රයිල් (ACN), මෙතනෝල්, 2-ප්‍රොපනෝල් සහ ඇසිටෝන්. සිග්මා-ඇල්ඩ්‍රිච් සමාගම (ශාන්ත ලුවී, මිසූරි, ඇමරිකා එක්සත් ජනපදය).
යූරියා (ග්‍රෑම් 8), පොලිඑතිලීන් ග්ලයිකෝල් (ග්‍රෑම් 8) සහ 0.01 නයිට්‍රජන් ඇසිටික් අම්ලය මිලි ලීටර් 8 ක් මිශ්‍රණයක් විනාඩි 10 ක් කලවම් කර, අයිස් සිසිලනය යටතේ TMOS මිලි ලීටර් 24 ක් එයට එකතු කරන ලදී. ප්‍රතික්‍රියා මිශ්‍රණය පැය 6 ක් 40°C දී රත් කර, පසුව 120°C දී පැය 8 ක් මල නොබැඳෙන වානේ ස්වයංක්‍රීය ක්ලේව් එකක රත් කරන ලදී. ජලය විසුරුවා හැර, අවශේෂ 70°C දී පැය 12 ක් වියළන ලදී. වියළන ලද මෘදු කුට්ටි සුමටව අඹරා 550°C දී උඳුනක පැය 12 ක් කැල්සින් කරන ලදී. අංශු ප්‍රමාණයන්, සිදුරු ප්‍රමාණය සහ මතුපිට ප්‍රදේශයේ ප්‍රතිනිෂ්පාදන හැකියාව පරීක්ෂා කිරීම සඳහා කාණ්ඩ තුනක් සකස් කර සංලක්ෂිත කරන ලදී.
පොලිස්ටිරීන් දාම සඳහා ධ්‍රැවීය කාණ්ඩය සහ ස්ථාවර අවධිය. සකස් කිරීමේ ක්‍රියා පටිපාටිය පහත විස්තර කෙරේ.
N-ෆීනයිල්මැලයිමයිඩ් (200 mg) සහ මෙතිල් වයිනයිල් අයිසොසයනේට් (100 mg) නිර්ජලීය ටොලුයින් තුළ දියකර, පසුව ෆීනයිල්මැලයිමයිඩ් සහ මෙතිල් වයිනයිල් අයිසොසයනේට් (PMCP) වල කෝපොලිමරයක් ලබා ගැනීම සඳහා ප්‍රතික්‍රියා ප්ලාස්කුවට 2,2′-අසොයිසොබියුටිරොනිට්‍රයිල් (AIBN) මිලි ලීටර් 0.1 ක් එකතු කරන ලදී. ) මිශ්‍රණය 60°C දී පැය 3 ක් රත් කර, පෙරා 40°C දී උඳුනක පැය 3 ක් වියළා ගන්නා ලදී.
වියළි සිලිකා අංශු (ග්‍රෑම් 2) වියළි ටොලුයින් (මිලි ලීටර් 100) තුළ විසුරුවා හැර, කලවම් කර මිලි ලීටර් 500 ක වටකුරු පතුලේ ඇති ෆ්ලාස්කුවක විනාඩි 10 ක් ධ්වනිකරණය කරන ලදී. PMCP (මිලිග්‍රෑම් 10) ටොලුයින් තුළ දිය කර එකතු කිරීමේ පුනීලයක් හරහා ප්‍රතික්‍රියා ෆ්ලාස්කුවට බිංදු ආකාරයෙන් එකතු කරන ලදී. මිශ්‍රණය පැය 8 ක් 100°C දී ප්‍රත්‍යාවර්තනය කර, පෙරීම කර, ඇසිටෝන් වලින් සෝදා, පැය 3 ක් 60°C දී වියළන ලදී. ඉන්පසු, PMCP (ග්‍රෑම් 100) සමඟ සම්බන්ධ සිලිකා අංශු ටොලුයින් (මිලි ලීටර් 200) තුළ දිය කරන ලද අතර, උත්ප්‍රේරකයක් ලෙස ඩිබියුටයිල්ටින් ඩිලෝරේට් 100 μl ඉදිරියේ 4-හයිඩ්‍රොක්සි-ටෙම්පෝ (මිලි ලීටර් 2) එයට එකතු කරන ලදී. මිශ්‍රණය පැය 8 ක් 50°C දී කලවම් කර, පෙරීම කර පැය 3 ක් 50°C දී වියළන ලදී.
TEMPO-PMCP (1.5 g) ට සම්බන්ධ කර ඇති ස්ටයිරීන් (1 ml), බෙන්සොයිල් පෙරොක්සයිඩ් BPO (0.5 ml) සහ සිලිකා අංශු ටොලුයින් තුළ විසුරුවා හැර නයිට්‍රජන් සමඟ පිරිසිදු කරන ලදී. ස්ටයිරීන් බහුඅවයවීකරණය පැය 12 ක් 100°C දී සිදු කරන ලදී. ප්‍රතිඵලයක් ලෙස නිෂ්පාදිතය මෙතනෝල් වලින් සෝදා 60°C දී එක රැයකින් වියළන ලදී. ප්‍රතික්‍රියාවේ සාමාන්‍ය යෝජනා ක්‍රමය රූපයේ දැක්වේ. 1.
10–3 Torr ට අඩු අවශේෂ පීඩනයක් ලබා ගන්නා තෙක් සාම්පල පැය 1 ක් සඳහා 393 K දී වායු ඉවත් කරන ලදී. සාපේක්ෂ පීඩනය P/P0 = 0.99 දී අවශෝෂණය කරන ලද N2 ප්‍රමාණය මුළු සිදුරු පරිමාව තීරණය කිරීම සඳහා භාවිතා කරන ලදී. පිරිසිදු සහ ලිගන්ඩ්-බන්ධිත සිලිකා අංශුවල රූප විද්‍යාව ස්කෑනිං ඉලෙක්ට්‍රෝන අන්වීක්ෂයක් (හිටාචි හයි ටෙක්නොලොජීස්, ටෝකියෝ, ජපානය) භාවිතයෙන් පරීක්ෂා කරන ලදී. වියළි සාම්පල (පිරිසිදු සිලිකා සහ ලිගන්ඩ් බැඳී ඇති සිලිකා අංශු) කාබන් ටේප් භාවිතයෙන් ඇලුමිනියම් දඬු මත තබා ඇත. Q150T ස්පුටරින් උපාංගයක් භාවිතයෙන් නියැදිය මත රන් තැන්පත් කරන ලද අතර 5 nm ඝන Au ස්ථරයක් නියැදිය මත තැන්පත් කරන ලදී. මෙය අඩු වෝල්ටීයතා ක්‍රියාවලියේ කාර්යක්ෂමතාව වැඩි දියුණු කරන අතර සිහින් සීතල ඉසීම සපයයි. තාප ඉලෙක්ට්‍රෝන (වෝල්තම්, MA, USA) ෆ්ලෑෂ් EA1112 මූලද්‍රව්‍ය සංයුති විශ්ලේෂකයක් භාවිතයෙන් මූලද්‍රව්‍ය විශ්ලේෂණය සිදු කරන ලදී. අංශු ප්‍රමාණය ව්‍යාප්තිය ලබා ගැනීම සඳහා මැල්වර්න් අංශු ප්‍රමාණය විශ්ලේෂකයක් (වෝර්සෙස්ටර්ෂයර්, UK) මාස්ටර්සයිසර් 2000 භාවිතා කරන ලදී. ආලේප නොකළ සිලිකා අංශු සහ ලිගන්ඩ්-බන්ධිත සිලිකා අංශු (මිලිග්‍රෑම් 5 බැගින්) අයිසොප්‍රොපනෝල් මිලි ලීටර් 5 ක් තුළ විසුරුවා හැර, විනාඩි 10 ක් සොනිකේට් කර, විනාඩි 5 ක් කලවම් කර, මාස්ටර්සයිසර් දෘශ්‍ය බංකුවක් මත තබන ලදී. තාප ගුරුත්වාකර්ෂණමිතික විශ්ලේෂණය 30 සිට 800 °C දක්වා උෂ්ණත්ව පරාසය තුළ මිනිත්තුවකට 5 °C අනුපාතයකින් සිදු කෙරේ.
මානයන් (ID 100 × 1.8 mm) සහිත වීදුරු කෙඳි සහිත පටු සිදුරු සහිත මල නොබැඳෙන වානේ තීරු, යොමුව 31 හි ඇති ක්‍රියා පටිපාටියම අනුගමනය කරමින් පොහොර පිරවුම් ක්‍රමය මගින් ඇසුරුම් කරන ලදී. මල නොබැඳෙන වානේ තීරුව (වීදුරු ආලේපිත, ID 100 × 1 .8 mm) සහ 1 µm ෆ්‍රිට් එකක් අඩංගු පිටවීමක් පොහොර ඇසුරුම් යන්ත්‍රයකට (Alltech Deerfield, IL, USA) සම්බන්ධ කරන ලදී. මෙතනෝල් මිලි ලීටර් 1.2 ක ස්ථාවර අවධියේ මිලිග්‍රෑම් 150 ක් අත්හිටුවා එය ජලාශ තීරුවකට පෝෂණය කිරීමෙන් ස්ථාවර අවධියේ අත්හිටුවීමක් සකස් කරන්න. පොහොර ද්‍රාවකය සහ පාලන ද්‍රාවකය ලෙස මෙතනෝල් භාවිතා කරන ලදී. මිනිත්තු 10 ක් සඳහා 100 MP, මිනිත්තු 15 ක් සඳහා 80 MP සහ මිනිත්තු 30 ක් සඳහා 60 MP පීඩන අනුපිළිවෙලක් යෙදීමෙන් තීරුව ඇසුරුම් කරන්න. ඒකාකාර තීරු ඇසුරුම් කිරීම සහතික කිරීම සඳහා යාන්ත්‍රික කම්පනය සඳහා ඇසුරුම් ක්‍රියාවලියේදී ගෑස් වර්ණදේහ තීරු කම්පන යන්ත්‍ර දෙකක් (Alltech, Deerfield, IL, USA) භාවිතා කරන ලදී. පොහොර පැකරය වසා දමා නූලට හානි වීම වැළැක්වීම සඳහා පීඩනය සෙමින් මුදා හරින්න. තීරුව ස්ලරි තුණ්ඩයෙන් විසන්ධි කරන ලද අතර, එහි ක්‍රියාකාරිත්වය පරීක්ෂා කිරීම සඳහා තවත් සවි කිරීමක් ඇතුල්වීමට සවි කර LC පද්ධතියට සම්බන්ධ කරන ලදී.
LC පොම්පයක් (10AD Shimadzu, Japan), 50 nL එන්නත් ලූපයක් සහිත සාම්පලයක් (Valco (USA) C14 W.05), පටල ඩිගසර් (Shimadzu DGU-14A) සහ UV-VIS කේශනාලිකා කවුළුවක් භාවිතයෙන් අභිරුචි MLC එකක් ඉදිකරන ලදී. අනාවරක උපාංගය (UV-2075) සහ එනැමල් කරන ලද ක්ෂුද්‍ර තීරුව. අතිරේක තීරු ප්‍රසාරණයේ බලපෑම අවම කිරීම සඳහා ඉතා පටු සහ කෙටි සම්බන්ධක නල භාවිතා කරන්න. තීරුව පිරවීමෙන් පසු, 1/16″ අඩු කිරීමේ හන්දියේ පිටවන ස්ථානයේ කේශනාලිකා (50 µm id 365) ස්ථාපනය කර අඩු කිරීමේ හන්දියේ කේශනාලිකා (50 µm) ස්ථාපනය කරන්න. දත්ත රැස් කිරීම සහ වර්ණදේහ සැකසීම Multichro 2000 මෘදුකාංගය භාවිතයෙන් සිදු කෙරේ. 254 nm දී, විෂය විශ්ලේෂකවල UV අවශෝෂණය 0 කින් නිරීක්ෂණය කරන ලදී. OriginPro8 (Northampton, MA) භාවිතයෙන් වර්ණදේහ දත්ත විශ්ලේෂණය කරන ලදී.
මානව සෙරුම් ඇල්බියුමින්, ලයොෆිලීකරණය කළ කුඩු, ≥ 96% (ඇගරෝස් ජෙල් ඉලෙක්ට්‍රෝෆොරසිස්) 3 mg ට්‍රිප්සින් (1.5 mg), 4.0 M යූරියා (1 ml) සහ 0.2 M ඇමෝනියම් බයිකාබනේට් (1 ml) සමඟ මිශ්‍ර කර ඇත. ද්‍රාවණය විනාඩි 10 ක් කලවම් කර 37°C දී පැය 6 ක් ජල ස්නානයක තබා, පසුව 0.1% TFA මිලි ලීටර් 1 කින් නිවා දමන ලදී. ද්‍රාවණය පෙරා 4°C ට අඩුවෙන් ගබඩා කරන්න.
PMP තීරුවක පෙප්ටයිඩ සහ ට්‍රිප්ටික් ඩයිජෙස්ට් HSA මිශ්‍රණයක් වෙන් කිරීම වෙන වෙනම ඇගයීමට ලක් කරන ලදී. PMP තීරුවකින් වෙන් කරන ලද පෙප්ටයිඩ සහ HSA මිශ්‍රණයක ට්‍රිප්ටික් ජල විච්ඡේදනය පරීක්ෂා කර Ascentis Express RP-Amide තීරුවක් සමඟ ප්‍රතිඵල සංසන්දනය කරන්න. න්‍යායාත්මක තහඩු ගණන පහත සමීකරණය භාවිතයෙන් ගණනය කෙරේ:
පිරිසිදු සිලිකා අංශු සහ ලිගන්ඩ් බන්ධිත සිලිකා අංශු වල SEM රූප රූපය 2 හි දක්වා ඇත. පිරිසිදු සිලිකා අංශු (A, B) වල SEM රූප අපගේ පෙර අධ්‍යයනයන්ට සාපේක්ෂව අංශු දිගටි හෝ අක්‍රමවත් සමමිතියක් ඇති ගෝලාකාර හැඩයක් පෙන්වයි. ලිගන්ඩ් (C, D) මගින් බැඳී ඇති සිලිකා අංශු මතුපිට පිරිසිදු සිලිකා අංශු වලට වඩා සුමට වන අතර, එය සිලිකා අංශු මතුපිට ආවරණය කරන පොලිස්ටයිරින් දාම නිසා විය හැකිය.
පිරිසිදු සිලිකා අංශු (A, B) සහ ලිගන්ඩ් බන්ධිත සිලිකා අංශු (C, D) වල ඉලෙක්ට්‍රෝන ක්ෂුද්‍ර රූප පරිලෝකනය කිරීම.
පිරිසිදු සිලිකා අංශු සහ ලිගන්ඩ්-බන්ධිත සිලිකා අංශුවල අංශු ප්‍රමාණයේ ව්‍යාප්තිය රූපය 2. 3(A) හි දක්වා ඇත. රසායනික වෙනස් කිරීමෙන් පසු සිලිකා අංශු ප්‍රමාණය වැඩි වූ බව පරිමාමිතික අංශු ප්‍රමාණයේ ව්‍යාප්ති වක්‍රවලින් පෙන්නුම් කෙරිණි (රූපය 3A). වත්මන් අධ්‍යයනයේ සහ පෙර අධ්‍යයනයේ සිලිකා අංශු ප්‍රමාණයේ ව්‍යාප්ති දත්ත වගුව 1(A) හි සංසන්දනය කර ඇත. PMP හි පරිමාමිතික අංශු ප්‍රමාණය d(0.5) 3.36 µm වූ අතර, අපගේ පෙර අධ්‍යයනයේ (පොලිස්ටිරින් බන්ධිත සිලිකා අංශු) 34 හි ad(0.5) අගය 3.05 µm හා සසඳන විට. ප්‍රතික්‍රියා මිශ්‍රණයේ PEG, යූරියා, TMOS සහ ඇසිටික් අම්ලයේ අනුපාතයේ වෙනස හේතුවෙන්, මෙම කාණ්ඩයේ අංශු ප්‍රමාණයේ ව්‍යාප්තිය අපගේ පෙර අධ්‍යයනයට සාපේක්ෂව පටු විය. PMP අවධියේ අංශු ප්‍රමාණය අප කලින් අධ්‍යයනය කළ පොලිස්ටිරීන් බැඳුනු සිලිකා අංශු අවධියට වඩා තරමක් විශාලය. මෙහි තේරුම නම් ස්ටයිරීන් සමඟ සිලිකා අංශු මතුපිට ක්‍රියාකාරීත්වය සිලිකා මතුපිට මත පොලිස්ටයිරින් තට්ටුවක් (0.97 µm) පමණක් තැන්පත් වූ අතර, PMP අවධියේදී ස්ථරයේ ඝණකම 1.38 µm වූ බවයි.
පිරිසිදු සිලිකා අංශු සහ ලිගන්ඩ් බන්ධිත සිලිකා අංශුවල අංශු ප්‍රමාණයේ ව්‍යාප්තිය (A) සහ සිදුරු ප්‍රමාණයේ ව්‍යාප්තිය (B).
මෙම අධ්‍යයනයේදී භාවිතා කරන ලද සිලිකා අංශුවල සිදුරු ප්‍රමාණය, සිදුරු පරිමාව සහ මතුපිට ප්‍රදේශය වගුව 1 (B) හි දක්වා ඇත. පිරිසිදු සිලිකා අංශු සහ ලිගන්ඩ්-බන්ධිත සිලිකා අංශු වල PSD පැතිකඩ රූප සටහන් 3 (B) හි දක්වා ඇත. ප්‍රතිඵල අපගේ පෙර අධ්‍යයනයට සැසඳිය හැකි විය34. පිරිසිදු සහ ලිගන්ඩ්-බන්ධිත සිලිකා අංශු වල සිදුරු ප්‍රමාණය පිළිවෙලින් 310 Å සහ 241 Å වූ අතර, එයින් පෙන්නුම් කරන්නේ රසායනික වෙනස් කිරීමෙන් පසු සිදුරු ප්‍රමාණය 69 Å කින් අඩු වූ බවයි, වගුව 1 (B) හි පෙන්වා ඇති පරිදි, සහ මාරු වක්‍රය රූපයේ දැක්වේ. වත්මන් අධ්‍යයනයේ සිලිකා අංශුවල නිශ්චිත මතුපිට ප්‍රදේශය 116 m2/g වන අතර එය අපගේ පෙර අධ්‍යයනයට (124 m2/g) සැසඳිය හැකිය. වගුව 1 (B) හි පෙන්වා ඇති පරිදි, රසායනික වෙනස් කිරීමෙන් පසු සිලිකා අංශුවල මතුපිට ප්‍රදේශය (m2/g) ද 116 m2/g සිට 105 m2/g දක්වා අඩු විය.
ස්ථාවර අවධියේ මූලද්‍රව්‍ය විශ්ලේෂණයේ ප්‍රතිඵල වගුවේ දක්වා ඇත. 2. වත්මන් ස්ථාවර අවධියේ කාබන් අන්තර්ගතය 6.35% ක් වන අතර එය අපගේ පෙර අධ්‍යයනයට වඩා අඩුය (පොලිස්ටිරින් සමඟ සම්බන්ධ සිලිකා අංශු, පිළිවෙලින් 7.93%35 සහ 10.21%) 42. SP සකස් කිරීමේදී ස්ටයිරීන් වලට අමතරව ෆීනයිල්මැලයිමයිඩ් මෙතිල් වයිනයිල් අයිසොසයනේට් (PCMP) සහ 4-හයිඩ්‍රොක්සි-ටෙම්පෝ වැනි සමහර ධ්‍රැවීය ලිගන්ඩ් භාවිතා කර ඇති බැවින්, වත්මන් ස්ථාවර අවධියේ කාබන් අන්තර්ගතය පහත දැක්වේ. වත්මන් ස්ථාවර අවධියේ නයිට්‍රජන් වල බර ප්‍රතිශතය පෙර අධ්‍යයනයන්හි 0.1735 සහ 0.85% ට සාපේක්ෂව 2.21% කි. මෙයින් අදහස් කරන්නේ ෆීනයිල්මැලයිමයිඩ් නිසා වත්මන් ස්ථාවර අවධියේ නයිට්‍රජන් වල ඉහළ බර ප්‍රතිශතයක් ඇති බවයි. ඒ හා සමානව, නිෂ්පාදන (4) සහ (5) පිළිවෙලින් 2.7% සහ 2.9% කාබන් අන්තර්ගතයක් ඇති අතර, අවසාන නිෂ්පාදනයේ (6) කාබන් අන්තර්ගතය 6.35% ක් වන අතර එය වගුව 2 හි දක්වා ඇත. බර අඩු කර ගැනීම සඳහා පරීක්ෂා කිරීම සඳහා PMP හි ස්ථාවර අවධියේදී තාප ගුරුත්වාකර්ෂණ විශ්ලේෂණය (TGA) භාවිතා කරන ලද අතර, TGA වක්‍රය රූපය 4 හි දක්වා ඇත. TGA වක්‍රය 8.6% ක බර අඩු වීමක් පෙන්නුම් කරයි, එය කාබන් අන්තර්ගතය (6.35%) සමඟ හොඳ එකඟතාවයකින් යුක්ත වන අතර, මන්ද ලිගන්ඩ් වල C පමණක් නොව N, O සහ H ද අඩංගු වේ.
සිලිකා අංශුවල මතුපිට වෙනස් කිරීම සඳහා ලිගන්ඩ් ෆීනයිල්මැලයිමයිඩ්-මෙතිල්වයිනයිල් අයිසොසයනේට් තෝරා ගනු ලැබුවේ එහි ධ්‍රැවීය ෆීනයිල්මැලයිමයිඩ් සහ වයිනයිල්ඉසොසයනේට් කාණ්ඩ නිසාය. වයිනයිල් අයිසොසයනේට් කාණ්ඩවලට සජීවී රැඩිකල් බහුඅවයවීකරණය මගින් ස්ටයිරීන් සමඟ තවදුරටත් ප්‍රතික්‍රියා කළ හැකිය. දෙවන හේතුව වන්නේ විශ්ලේෂකය සමඟ මධ්‍යස්ථ අන්තර්ක්‍රියා ඇති සහ විශ්ලේෂකය සහ ස්ථාවර අවධිය අතර ශක්තිමත් විද්‍යුත් ස්ථිතික අන්තර්ක්‍රියා නොමැති කණ්ඩායමක් ඇතුළු කිරීමයි, මන්ද ෆීනයිල්මැලයිමයිඩ් කොටසට සාමාන්‍ය pH අගයේදී අථත්‍ය ආරෝපණයක් නොමැති බැවිනි. ස්ථාවර අවධියේ ධ්‍රැවීයතාව ස්ටයිරීන් ප්‍රශස්ත ප්‍රමාණය සහ නිදහස් රැඩිකල් බහුඅවයවීකරණයේ ප්‍රතික්‍රියා කාලය මගින් පාලනය කළ හැකිය. ප්‍රතික්‍රියාවේ අවසාන පියවර (නිදහස් රැඩිකල් බහුඅවයවීකරණය) තීරණාත්මක වන්නේ එය ස්ථාවර අවධියේ ධ්‍රැවීයතාව වෙනස් කරන බැවිනි. මෙම ස්ථාවර අදියරවල කාබන් අන්තර්ගතය පරීක්ෂා කිරීම සඳහා මූලද්‍රව්‍ය විශ්ලේෂණය සිදු කරන ලදී. ස්ටයිරීන් ප්‍රමාණය සහ ප්‍රතික්‍රියා කාලය වැඩි කිරීම ස්ථාවර අවධියේ කාබන් අන්තර්ගතය වැඩි කරන බව නිරීක්ෂණය වී ඇති අතර අනෙක් අතට. විවිධ සාන්ද්‍රණයන් සහිත ස්ටයිරීන් සමඟ සකස් කරන ලද SP වලට විවිධ කාබන් බර ඇත. ඒ හා සමානව, මෙම ස්ථාවර අවධි මල නොබැඳෙන වානේ තීරු මත තබා ඒවායේ වර්ණදේහ ලක්ෂණ (වරණීයතාව, විභේදනය, N අගය, ආදිය) පරීක්ෂා කරන ලදී. මෙම අත්හදා බැලීම් මත පදනම්ව, පාලිත ධ්‍රැවීයතාව සහ විශ්ලේෂකයේ හොඳ රඳවා තබා ගැනීම සැපයීම සඳහා PMP ස්ථාවර අවධිය සකස් කිරීම සඳහා ප්‍රශස්ත සංයුතියක් තෝරා ගන්නා ලදී.
ජංගම අවධියේ ධාරිතාව භාවිතා කරමින් පෙප්ටයිඩ මිශ්‍රණ පහක් (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin) විශ්ලේෂණය කිරීම සඳහා PMP තීරුව ද ඇගයීමට ලක් කරන ලදී. 80 µl/min ප්‍රවාහ අනුපාතයකින් 60/40 (v/v) ACN/ජලය (0.1% TFA). ප්‍රශස්ත ඉවත් කිරීමේ තත්වයන් යටතේ (තහඩු 200,000/m), තීරුවකට න්‍යායික තහඩු ගණන (N) (100 × 1.8 mm) 20,000 ± 100 වේ. PMP තීරු තුන සඳහා N අගයන් වගුව 3 හි දක්වා ඇති අතර වර්ණදේහ රූප සටහන 5A හි දක්වා ඇත. PMP තීරුවක ඉහළ ප්‍රවාහ අනුපාතයකින් (700 µl/min) වේගවත් විශ්ලේෂණයක්, මිනිත්තුවක් ඇතුළත පෙප්ටයිඩ පහක් ඉවත් කරන ලදී, තීරුවකට 13,500 ± 330 ක විශිෂ්ට N අගයක් (විෂ්කම්භය 100 x 1.8 mm), තහඩු 135,000/m ට සමාන වේ (රූපය 5B). ප්‍රතිනිෂ්පාදන හැකියාව පරීක්ෂා කිරීම සඳහා එකම ප්‍රමාණයේ තීරු තුනක් (අභ්‍යන්තර විෂ්කම්භය 100 x 1.8 mm) PMP ස්ථාවර අවධියේ විවිධ කාණ්ඩ තුනකින් පුරවන ලදී. ප්‍රශස්ත එලියුෂන් තත්වයන්, න්‍යායාත්මක තහඩු N ගණන සහ රඳවා ගැනීමේ කාලය භාවිතා කරමින් එක් එක් තීරුවේ එකම පරීක්ෂණ මිශ්‍රණය වෙන් කිරීමෙන් එක් එක් තීරුව සඳහා විශ්ලේෂණ වාර්තා කරන ලදී. PMP තීරු සඳහා ප්‍රජනන හැකියාව දත්ත වගුව 4 හි දක්වා ඇත. PMP තීරුවේ ප්‍රජනන හැකියාව වගුව 3 හි පෙන්වා ඇති පරිදි ඉතා අඩු %RSD අගයන් සමඟ හොඳින් සහසම්බන්ධ වේ.
PMP තීරුවක (B) සහ Ascentis Express RP-Amide තීරුවක (A) පෙප්ටයිඩ මිශ්‍රණ වෙන් කිරීම, ජංගම අවධිය 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP තීරු මානයන් (100 x 1.8 mm id), විශ්ලේෂණය සංයෝගවල ඉවත් කිරීමේ අනුපිළිවෙල: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) සහ 5 (leucic acid enkephalin).
HPLC මගින් මිනිස් සෙරුම් ඇල්බියුමින් වල ට්‍රිප්ටික් හයිඩ්‍රොලයිසේට් වෙන් කිරීම සඳහා PMP තීරුවක් (අභ්‍යන්තර විෂ්කම්භය 100 x 1.8 මි.මී.) ඇගයීමට ලක් කරන ලදී. රූප සටහන 6 හි ඇති වර්ණදේහයෙන් පෙන්නුම් කරන්නේ සාම්පල ඉතා හොඳ විභේදනයකින් හොඳින් වෙන් කර ඇති බවයි. HSA විසඳුම් 100 μl/min ප්‍රවාහ අනුපාතයක්, 70/30 ඇසිටොනිට්‍රයිල්/ජලය සහ 0.1% TFA ජංගම අවධියක් භාවිතා කරමින් විශ්ලේෂණය කරන ලදී. වර්ණදේහයේ (රූපය 6) පෙන්වා ඇති පරිදි, පෙප්ටයිඩ 17 ට අනුරූප වන පරිදි, HSA හි බිඳවැටීම කඳු මුදුන් 17 කට බෙදා ඇත. HSA හයිඩ්‍රොලයිසේට් වලින් තනි කඳු මුදුන් වෙන් කිරීමේ කාර්යක්ෂමතාව ගණනය කරන ලද අතර අගයන් 5 වගුවේ දක්වා ඇත.
HSA ට්‍රිප්ටික් හයිඩ්‍රොලයිසේට් PMP තීරුවක් (අභ්‍යන්තර විෂ්කම්භය 100 x 1.8 මි.මී.), ප්‍රවාහ අනුපාතය (මිනිත්තු 100 μl), ජංගම අවධිය 60/40 ඇසිටොනයිට්‍රයිල්/ජලය සහ 0.1% TFA මත වෙන් කරන ලදී.
මෙහි L යනු තීරු දිග, η යනු ජංගම අවධියේ දුස්ස්රාවිතතාවය, ΔP යනු තීරුවේ පසුපස පීඩනය සහ u යනු ජංගම අවධියේ රේඛීය ප්‍රවේගයයි. PMP තීරුවේ පාරගම්යතාව 2.5 × 10–14 m2 වූ අතර, ප්‍රවාහ අනුපාතය 25 µl/min විය, 60/40 v/v භාවිතා කරන ලදී. ACN/ජලය. PMP තීරුවේ පාරගම්යතාව (ID 100 × 1.8 mm) අපගේ පෙර Ref.34 අධ්‍යයනයට සමාන විය. මතුපිටින් සිදුරු සහිත අංශු වලින් පිරුණු තීරුවක පාරගම්යතාව 1.7×10 .6 µm, 5 µm අංශු සඳහා 2.5×10-14 m2 වේ43. එබැවින්, PMP අවධියේ පාරගම්යතාව 5 μm ප්‍රමාණයේ හර-කවච අංශුවල පාරගම්යතාවයට සමාන වේ.
මෙහි Wx යනු ක්ලෝරෝෆෝම් වලින් පුරවා ඇති තීරුවේ ස්කන්ධය වන අතර, Wy යනු මෙතනෝල් වලින් පුරවා ඇති තීරුවේ ස්කන්ධය වන අතර, ρ යනු ද්‍රාවකයේ ඝනත්වයයි. මෙතනෝල් (ρ = 0.7866) සහ ක්ලෝරෝෆෝම් (ρ = 1.484) වල ඝනත්වය. සිලිකා-C18 අංශු තීරුවේ (100 × 1.8 mm ID)34 සහ අපගේ පෙර අධ්‍යයනය කරන ලද C18-urea31 තීරුවේ මුළු සිදුරු පිළිවෙලින් 0.63 සහ 0.55 විය. මෙයින් අදහස් කරන්නේ යූරියා ලිගන්ඩ් පැවතීම ස්ථාවර අවධියේ පාරගම්යතාව අඩු කරන බවයි. අනෙක් අතට, PMP තීරුවේ මුළු සිදුරු (අභ්‍යන්තර විෂ්කම්භය 100 × 1.8 mm) 0.60 කි. C18 වර්ගයේ ස්ථාවර අවධිවලදී C18 ලිගන්ඩ් සිලිකා අංශු වලට රේඛීය දාමවල සම්බන්ධ වී ඇති අතර, පොලිස්ටයිරින් වර්ගයේ ස්ථාවර අවධිවලදී අංශු වටා සාපේක්ෂව ඝන බහු අවයවයක් සෑදී ඇති බැවින්, C18 බැඳුනු සිලිකා අංශු වලින් ඇසුරුම් කරන ලද තීරු වලට වඩා PMP තීරු අඩු පාරගම්යතාවයකින් යුක්ත වේ. ස්ථරය A. සාමාන්‍ය අත්හදා බැලීමකදී, තීරු සිදුරු පහත පරිදි ගණනය කෙරේ:
රූපය 7A හි, B විසින් PMP තීරුවක් (id 100 x 1.8 mm) සහ Ascentis Express RP-Amide තීරුවක් (id 100 x 1.8 mm) සඳහා එකම elution කොන්දේසි යටතේ, 60/40 ACN/H2O සහ 0 .1% TFA 20 µl/min සිට 800 µl/min දක්වා තීරු දෙකෙහිම වැන් ඩීම්ටර් බිම් කොටස් පෙන්වයි. ප්‍රශස්ත ප්‍රවාහ අනුපාතයේ (80 µl/min) අවම HETP අගයන් PMP තීරුව සහ Ascentis Express RP-Amide තීරුව සඳහා පිළිවෙලින් 2.6 µm සහ 3.9 µm විය. HETP අගයන් පෙන්නුම් කරන්නේ PMP තීරුවේ (100 x 1.8 mm id) වෙන් කිරීමේ කාර්යක්ෂමතාව වාණිජමය වශයෙන් ලබා ගත හැකි Ascentis Express RP-Amide තීරුවට (100 x 1.8 mm id) වඩා බෙහෙවින් වැඩි බවයි. රූපය 7(A) හි ඇති van Deemter ප්‍රස්ථාරයෙන් පෙන්නුම් කරන්නේ අපගේ පෙර අධ්‍යයනයට සාපේක්ෂව වැඩිවන ප්‍රවාහයත් සමඟ N අගය අඩුවීම සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි නොවන බවයි. Ascentis Express RP-Amide තීරුවට සාපේක්ෂව PMP තීරුවේ (id 100 × 1.8 mm) ඉහළ වෙන් කිරීමේ කාර්යක්ෂමතාව වැඩිදියුණු කළ අංශු හැඩය සහ ප්‍රමාණය සහ වත්මන් කාර්යයේදී භාවිතා කරන සංකීර්ණ තීරු ඇසුරුම් ක්‍රියා පටිපාටිය මත පදනම් වේ34.
(A) 0.1% TFA සහිත 60/40 ACN/H2O හි PMP තීරුවක (id 100 x 1.8 mm) ලබාගත් වෑන් ඩීම්ටර් බිම් කොටස (HETP එදිරිව ජංගම අවධි රේඛීය ප්‍රවේගය). (B) 0.1% TFA සහිත 60/40 ACN/H2O හි Ascentis Express RP-Amide තීරුවක (id 100 x 1.8 mm) ලබාගත් වෑන් ඩීම්ටර් බිම් කොටස (HETP එදිරිව ජංගම අවධි රේඛීය ප්‍රවේගය).
ඉහළ කාර්යසාධනයක් සහිත ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාවේදී කෘතිම පෙප්ටයිඩ සහ මිනිස් සෙරුම් ඇල්බියුමින් (HSA) හි ට්‍රිප්ටික් හයිඩ්‍රොලයිසේට් මිශ්‍රණයක් වෙන් කිරීම සඳහා අන්තර්කාලිත පොලිස්ටිරින් ධ්‍රැවීය ස්ථාවර අවධියක් සකස් කර ඇගයීමට ලක් කරන ලදී. පෙප්ටයිඩ මිශ්‍රණ සඳහා PMP තීරුවල වර්ණදේහ ක්‍රියාකාරිත්වය වෙන් කිරීමේ කාර්යක්ෂමතාව සහ විභේදනය අනුව විශිෂ්ටයි. PMP තීරුවල වැඩිදියුණු කළ වෙන් කිරීමේ කාර්යක්ෂමතාව සිලිකා අංශු ප්‍රමාණය සහ සිදුරු ප්‍රමාණය, ස්ථාවර අවධිවල පාලිත සංස්ලේෂණය සහ සංකීර්ණ තීරු ඇසුරුම් ද්‍රව්‍ය වැනි හේතු කිහිපයක් නිසා වේ. ඉහළ වෙන් කිරීමේ කාර්යක්ෂමතාවයට අමතරව, මෙම ස්ථාවර අවධියේ තවත් වාසියක් වන්නේ ඉහළ ප්‍රවාහ අනුපාතවලදී අඩු තීරු පසුපස පීඩනයයි. PMP තීරු ඉතා ප්‍රතිනිෂ්පාදනය කළ හැකි අතර පෙප්ටයිඩ මිශ්‍රණ සහ විවිධ ප්‍රෝටීන වල ට්‍රිප්ටික් ජීර්ණය විශ්ලේෂණය කිරීමට භාවිතා කළ හැකිය. ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාවේදී ස්වාභාවික නිෂ්පාදන, ඖෂධීය ශාක සාරය සහ හතු වලින් ජෛව ක්‍රියාකාරී සංයෝග වෙන් කිරීම සඳහා මෙම තීරුව භාවිතා කිරීමට අපි අදහස් කරමු. අනාගතයේදී, ප්‍රෝටීන සහ මොනොක්ලෝනල් ප්‍රතිදේහ වෙන් කිරීම සඳහා PMP තීරු ද ඇගයීමට ලක් කෙරේ.
ෆීල්ඩ්, ජේකේ, යුවර්බි, එම්ආර්, ලා, ජේ., තෝගර්සන්, එච්. සහ පීටර්සන්, පී. ප්‍රතිලෝම අවධි වර්ණදේහ පෙප්ටයිඩ වෙන් කිරීමේ පද්ධති පිළිබඳ විමර්ශනය I කොටස: තීරු ගුනාංගීකරනය සඳහා ප්‍රොටෝකෝලයක් සංවර්ධනය කිරීම. ෆීල්ඩ්, ජේකේ, යුවර්බි, එම්ආර්, ලා, ජේ., තෝගර්සන්, එච්. සහ පීටර්සන්, පී. ප්‍රතිලෝම අවධි වර්ණදේහ පෙප්ටයිඩ වෙන් කිරීමේ පද්ධති පිළිබඳ විමර්ශනය I කොටස: තීරු ගුනාංගීකරනය සඳහා ප්‍රොටෝකෝලයක් සංවර්ධනය කිරීම.ෆීල්ඩ්, ජේකේ, ඕවර්බි, එම්ආර්, ලාවු, ජේ., ටෝගර්සන්, එච්., සහ පීටර්සන්, පී. ප්‍රතිලෝම-අදියර වර්ණදේහ විද්‍යාව මගින් පෙප්ටයිඩ වෙන් කිරීමේ පද්ධති පිළිබඳ විමර්ශනය, I කොටස: තීරු ලක්ෂණ සඳහා ප්‍රොටෝකෝලයක් සංවර්ධනය කිරීම. ෆීල්ඩ්, ජේකේ, යුවර්බි, එම්ආර්, ලා, ජේ., තෝගර්සන්, එච්. සහ පීටර්සන්, පී. ප්‍රතිලෝම අවධි වර්ණදේහ පෙප්ටයිඩ වෙන් කිරීමේ පද්ධති පිළිබඳ විමර්ශනය I කොටස: තීරු ලක්ෂණ සඳහා ප්‍රොටෝකෝලයක් සංවර්ධනය කිරීම. ෆීල්ඩ්, ජේකේ, යුවර්බි, එම්ආර්, ලා, ජේ., තෝගර්සන්, එච්. සහ පීටර්සන්, පී. ප්‍රතිලෝම අවධි වර්ණදේහ පෙප්ටයිඩ වෙන් කිරීමේ පද්ධති පිළිබඳ විමර්ශනය I කොටස: තීරු ලක්ෂණ සඳහා ප්‍රොටෝකෝලයක් සංවර්ධනය කිරීම.ෆීල්ඩ්, ජේකේ, ඕවර්බි, එම්ආර්, ලාවු, ජේ., ටෝගර්සන්, එච්., සහ පීටර්සන්, පී. ප්‍රතිලෝම-අදියර වර්ණදේහ විද්‍යාව මගින් පෙප්ටයිඩ වෙන් කිරීමේ පද්ධති පිළිබඳ විමර්ශනය, I කොටස: තීරු ලක්ෂණ සඳහා ප්‍රොටෝකෝලයක් සංවර්ධනය කිරීම.J.色谱法。 1603,113-129。 https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019)。
ගෝමස්, බී. සහ තවත් අය. බෝවන රෝග සඳහා ප්‍රතිකාර කිරීම සඳහා වැඩිදියුණු කළ ක්‍රියාකාරී පෙප්ටයිඩ නිර්මාණය කිරීමේ ක්‍රම. ජෛව තාක්‍ෂණය. ජයග්‍රහණ 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
ව්ලීගේ, පී., ලිසොව්ස්කි, වී., මාර්ටිනෙස්, ජේ. සහ ක්‍රෙස්ට්චැටිස්කි, එම්. සින්තටික් චිකිත්සක පෙප්ටයිඩ: විද්‍යාව සහ වෙළඳපොළ. ව්ලීගේ, පී., ලිසොව්ස්කි, වී., මාර්ටිනෙස්, ජේ. සහ ක්‍රෙස්ට්චැටිස්කි, එම්. සින්තටික් චිකිත්සක පෙප්ටයිඩ: විද්‍යාව සහ වෙළඳපොළ.ව්ලීජ් පී, ලිසොව්ස්කි වී, මාටිනෙස් ජේ සහ ක්‍රෙස්චැටිස්කි එම්. කෘතිම චිකිත්සක පෙප්ටයිඩ: විද්‍යාව සහ වෙළඳපොළ.ව්ලීජ් පී, ලිසොව්ස්කි වී, මාටිනෙස් ජේ සහ ක්‍රෙස්චැට්ස්කි එම්. කෘතිම චිකිත්සක පෙප්ටයිඩ: විද්‍යාව සහ වෙළඳපොළ. ඖෂධ සොයාගැනීම. අද 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
ෂී, එෆ්., ස්මිත්, ආර්ඩී සහ ෂෙන්, වයි. උසස් ප්‍රෝටියෝමික් ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාව. ෂී, එෆ්., ස්මිත්, ආර්ඩී සහ ෂෙන්, වයි. උසස් ප්‍රෝටියෝමික් ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාව.එෆ්., ස්මිත් ආර්ඩී සහ ෂෙන් යූ බලන්න. උසස් ප්‍රෝටෝමික් ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාව. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱。 Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. උසස් ප්‍රෝටීන් සංයුතිය 液相色谱。එෆ්., ස්මිත් ආර්ඩී සහ ෂෙන් යූ බලන්න. උසස් ප්‍රෝටෝමික් ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාව.ජේ. වර්ණදේහ විද්‍යාව. ඒ 1261, 78–90 (2012).
ලියු, ඩබ්ලිව්. සහ තවත් අය. උසස් ද්‍රව වර්ණදේහ-ස්කන්ධ වර්ණාවලීක්ෂයට පුළුල් පාදක පරිවෘත්තීය විද්‍යාව සහ ප්‍රෝටියෝමික්ස් ඒකාබද්ධ කිරීමට හැකියාව ඇත. ගුදය. චිම්. ඇක්ටා 1069, 89–97 (2019).
චෙස්නට්, එස්එම් සහ සැලිස්බරි, ජේජේ ඖෂධ සංවර්ධනයේ UHPLC හි කාර්යභාරය. චෙස්නට්, එස්එම් සහ සැලිස්බරි, ජේජේ ඖෂධ සංවර්ධනයේ UHPLC හි කාර්යභාරය.චෙස්නට්, එස්එම් සහ සැලිස්බරි, ජේජේ ඖෂධ සංවර්ධනයේ UHPLC හි කාර්යභාරය.චෙස්නට්, එස්එම් සහ සැලිස්බරි, ජේජේ ඖෂධ සංවර්ධනයේ UHPLC හි කාර්යභාරය. ජේ. සැප්තැම්බර් විද්‍යාව. 30(8), 1183–1190 (2007).
වූ, එන්. සහ ක්ලවුසන්, ඒඑම් වේගවත් වෙන් කිරීම් සඳහා අතිශය අධි පීඩන ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාවේ මූලික සහ ප්‍රායෝගික අංශ. වූ, එන්. සහ ක්ලවුසන්, ඒඑම් වේගවත් වෙන් කිරීම් සඳහා අතිශය අධි පීඩන ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාවේ මූලික සහ ප්‍රායෝගික අංශ.වූ, එන්. සහ ක්ලවුසන්, ඒඑම්. වේගවත් වෙන් කිරීම සඳහා අධි පීඩන ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාවේ මූලික සහ ප්‍රායෝගික අංශ. Wu, N. සහ Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 වූ, එන්. සහ ක්ලවුසන්, ඒඑම් වේගවත් වෙන් කිරීම සඳහා අතිශය අධි පීඩන ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාවේ මූලික සහ ප්‍රායෝගික අංශ.වූ, එන්. සහ ක්ලවුසන්, ඒඑම්. වේගවත් වෙන් කිරීම සඳහා අධි පීඩන ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාවේ මූලික සහ ප්‍රායෝගික අංශ.ජේ. සැප්. සයන්ස්. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
රෙන්, එස්ඒ සහ චෙලිචෙෆ්, පී. ඖෂධ සංවර්ධනයේදී අතිශය ක්‍රියාකාරී ද්‍රව වර්ණදේහ භාවිතය. රෙන්, එස්ඒ සහ චෙලිචෙෆ්, පී. ඖෂධ සංවර්ධනයේදී අතිශය ක්‍රියාකාරී ද්‍රව වර්ණදේහ භාවිතය.රෙන්, එස්ඒ සහ චෙලිෂෙෆ්, පී. ඖෂධ සංවර්ධනයේදී අතිශය ඉහළ කාර්යසාධනයක් සහිත ද්‍රව වර්ණදේහ භාවිතය. Wren, SA සහ Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用。 රෙන්, එස්ඒ සහ චෙලිචෙෆ්, පී.රෙන්, එස්ඒ සහ චෙලිෂෙෆ්, පී. ඖෂධ සංවර්ධනයේදී අතිශය ක්‍රියාකාරී ද්‍රව වර්ණදේහයේ යෙදීම.ජේ. වර්ණදේහ විද්‍යාව. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
ගු, එච්. සහ තවත් අය. එන්ටර්වෛරසය කාර්යක්ෂමව පිරිසිදු කිරීම සඳහා ඉහළ අභ්‍යන්තර අවධියක් සහිත ජලයේ ඇති තෙල් ඉමල්ෂන් එකකින් ලබාගත් ඒකලිතික සාර්ව සිදුරු සහිත හයිඩ්‍රොජෙල් 71. රසායනික. ව්‍යාපෘතිය. ජර්නලය 401, 126051 (2020).
ෂි, වයි., ෂියැං, ආර්., හෝර්වත්, සී. සහ විල්කින්ස්, ජේඒ. ප්‍රෝටියෝමික්ස් හි ද්‍රව වර්ණදේහයේ කාර්යභාරය. ෂි, වයි., ෂියැං, ආර්., හෝර්වත්, සී. සහ විල්කින්ස්, ජේඒ. ප්‍රෝටියෝමික්ස් හි ද්‍රව වර්ණදේහයේ කාර්යභාරය.ෂි, වයි., ෂියැං, ආර්., හෝර්වත්, සී. සහ විල්කින්ස්, ජේ. ප්‍රෝටියොමික්ස් හි ද්‍රව වර්ණදේහයේ කාර්යභාරය. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JAෂි, වයි., ෂියැං, ආර්., හෝර්වත්, සී. සහ විල්කින්ස්, ජේ. ප්‍රෝටියොමික්ස් හි ද්‍රව වර්ණදේහයේ කාර්යභාරය.ජේ. වර්ණදේහ විද්‍යාව. ඒ 1053 (1-2), 27-36 (2004).
ෆෙකෙට්, එස්., වුටේ, ජේ.-එල්. සහ ගිලර්මේ, ඩී. චිකිත්සක පෙප්ටයිඩ සහ ප්‍රෝටීන වල ප්‍රතිලෝම-අදියර ද්‍රව වර්ණදේහ වෙන් කිරීම්වල නව ප්‍රවණතා: න්‍යාය සහ යෙදුම්. සහ ගිලර්මේ, ඩී. චිකිත්සක පෙප්ටයිඩ සහ ප්‍රෝටීන වල ප්‍රතිලෝම-අදියර ද්‍රව වර්ණදේහ වෙන් කිරීම්වල නව ප්‍රවණතා: න්‍යාය සහ යෙදුම්. & Guillarme, D. නෝවි ටෙන්ඩෙන්සි වර් රෙස්ඩෙලනි ටෙරපෙව්ටිචෙස්කික් පෙප්ටිඩෝව් සහ බෙල්කොව්ස් පොමෝෂ් ජිඩ්කොස්ට්නෝ обращенной фазой: теория и приложения. සහ ගිලර්මේ, ඩී. ප්‍රතිලෝම අදියර ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාව මගින් චිකිත්සක පෙප්ටයිඩ සහ ප්‍රෝටීන වෙන් කිරීමේ නව ප්‍රවණතා: න්‍යාය සහ යෙදුම්. & ගුයිලර්ම්, ඩී. සහ ගිලර්මේ, ඩී.සහ ගිලාර්මේ, ඩී. ප්‍රතිලෝම අදියර ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාව මගින් චිකිත්සක පෙප්ටයිඩ සහ ප්‍රෝටීන වෙන් කිරීමේ නව ප්‍රවණතා: න්‍යාය සහ යෙදුම්.ජේ. ෆාම්. ජෛව වෛද්‍ය විද්‍යාව. ගුදය. 69, 9–27 (2012).
ගිලාර්, එම්., ඔලිවෝවා, පී., ඩාලි, ඒඊ සහ ගෙබ්ලර්, ජේ.සී. පළමු සහ දෙවන වෙන් කිරීමේ මානයන්හි වෙනස් pH අගයක් සහිත RP-RP-HPLC පද්ධතියක් භාවිතා කරමින් පෙප්ටයිඩ ද්විමාන වෙන් කිරීම. ගිලාර්, එම්., ඔලිවෝවා, පී., ඩාලි, ඒඊ සහ ගෙබ්ලර්, ජේ.සී. පළමු සහ දෙවන වෙන් කිරීමේ මානයන්හි වෙනස් pH අගයක් සහිත RP-RP-HPLC පද්ධතියක් භාවිතා කරමින් පෙප්ටයිඩ ද්විමාන වෙන් කිරීම.ගිලාර් එම්., ඔලිවෝවා ​​පී., ඩාලි ඒඊ සහ ගෙබ්ලර් ජේකේ පළමු සහ දෙවන වෙන් කිරීමේ මානයන්හි වෙනස් pH අගයන් සහිත RP-RP-HPLC පද්ධතිය භාවිතා කරමින් පෙප්ටයිඩ ද්විමාන වෙන් කිරීම.ගිලාර් එම්., ඔලිවෝවා ​​පී., ඩාලි ඒඊ සහ ගෙබ්ලර් ජේකේ ආර්පී-ආර්පී-එච්පීඑල්සී පද්ධතිය භාවිතා කරමින් පළමු සහ දෙවන වෙන් කිරීමේ මානයන්හි විවිධ pH අගයන් භාවිතා කරමින් පෙප්ටයිඩ ද්විමාන වෙන් කිරීම. ජේ. සැප්තැම්බර් විද්‍යාව. 28 (14), 1694–1703 (2005).
ෆෙලිටි, එස්. සහ තවත් අය. 2 µm ට වඩා කුඩා සම්පූර්ණයෙන්ම සිදුරු සහිත සහ මතුපිටින් සිදුරු සහිත C18 අංශු වලින් පිරුණු ඉහළ කාර්යසාධනයක් සහිත වර්ණදේහ තීරුවල ස්කන්ධ හුවමාරුව සහ චාලක ලක්ෂණ විමර්ශනය කිරීම. ජේ. සැප්තැම්බර් විද්‍යාව. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
පියෝවේසානා, එස්. සහ තවත් අය. ශාක ජෛව ක්‍රියාකාරී පෙප්ටයිඩ හුදකලා කිරීම, හඳුනා ගැනීම සහ වලංගු කිරීම පිළිබඳ මෑත කාලීන ප්‍රවණතා සහ විශ්ලේෂණාත්මක අභියෝග. ගුදය. සත්ව ගුදය. රසායනික. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
මුලර්, ජේ.බී. සහ තවත් අය. ජීවන රාජධානියේ ප්‍රෝටියොමික් භූ දර්ශනය. නේචර් 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
ඩි ලූකා, කේ. සහ තවත් අය. සූදානම් කිරීමේ ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාව මගින් චිකිත්සක පෙප්ටයිඩවල පශ්චාත් ප්‍රතිකාර. අණු (බාසෙල්, ස්විට්සර්ලන්තය) 26(15), 4688 (2021).
යැං, වයි. සහ ජෙන්ග්, එක්ස්. මිශ්‍ර-මාදිලියේ වර්ණදේහ විද්‍යාව සහ ජෛව බහු අවයවක සඳහා එහි යෙදුම්. යැං, වයි. සහ ජෙන්ග්, එක්ස්. මිශ්‍ර-මාදිලියේ වර්ණදේහ විද්‍යාව සහ ජෛව බහු අවයවක සඳහා එහි යෙදුම්.යැං, යූ. සහ ජෙන්ග්, එක්ස්. මිශ්‍ර මාදිලියේ වර්ණදේහ විද්‍යාව සහ ජෛව බහු අවයවක සඳහා එහි යෙදුම. Yang, Y. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 යැං, වයි. සහ ජෙන්ග්, එක්ස්. මිශ්‍ර මාදිලියේ වර්ණදේහ විද්‍යාව සහ ජෛව පොලිමර් වල එහි යෙදුම.යැං, යූ. සහ ජීන්, එක්ස්. මිශ්‍ර මාදිලියේ වර්ණදේහ විද්‍යාව සහ ජෛව බහු අවයවක සඳහා එහි යෙදුම.ජේ. වර්ණදේහ විද්‍යාව. ඒ 1218(49), 8813–8825 (2011).