Získavanie a distribúcia živín integruje znaky hľadania potravy a histórie života hmyzu. Aby sa kompenzoval nedostatok špecifických živín v rôznych životných štádiách, hmyz môže tieto živiny získavať doplnkovým kŕmením, napríklad kŕmením sekrétmi stavovcov v procese známom ako kaluže. Zdá sa, že komár Anopheles arabiani je podvyživený, a preto potrebuje živiny na metabolizmus a reprodukciu.arabiensis agitácia kravského moču na získanie živín zlepšuje charakteristiky života.
Uistite sa, že je to bezpečné. Arabiensis bol priťahovaný pachom čerstvého, 24-hodinového, 72-hodinového a 168-hodinového kravského moču a samice hľadajúce hostiteľa a kŕmené krvou (48 hodín po kŕmení krvi) boli merané v Y-tube olfactometru a gravidné samice boli hodnotené na biotest na neresenie. Potom sa použila kombinovaná chemická a elektrofyziologická zmes vo všetkých štyroch skupinách. Množstvo bioaktívnych zlúčenín bolo hodnotené v Y-skúmavke a v terénnych skúškach. Na vyšetrenie moču kráv a jeho hlavnej dusíkatej zlúčeniny močoviny ako potenciálnej doplnkovej stravy pre prenášačov malárie sa merali parametre kŕmenia a životné charakteristiky. Hodnotil sa podiel samíc komárov a množstvo absorbovaného kravského moču a močoviny. Po kŕmení sa samice hodnotili z hľadiska úteku, prežitia a rozmnožovania.
Hľadaj krv a potravu hostiteľa. V laboratórnych a terénnych štúdiách boli Arabi priťahovaní prirodzenou a syntetickou vôňou čerstvého a odležaného kravského moču. Tehotné samice boli ľahostajné k reakciám kravského moču na miestach neresenia. Samice hľadajúce hostiteľa a samice sajúce krv aktívne absorbujú kravský moč a močovinu a prideľujú tieto zdroje podľa životného stavu alebo fyziologického stavu pre rozmnožovanie, fyziologické funkcie prežitia.
Anopheles arabinis získavanie a distribúcia kravského moču na zlepšenie životných charakteristík. Doplnkové kŕmenie kravského moču ovplyvňuje kapacitu vektorov priamo zvýšením denného prežitia a hustoty vektorov a nepriamo zmenou letovej aktivity, a preto by sa malo zvážiť v budúcich modeloch.
Získavanie a distribúcia živín integruje hľadanie potravy hmyzu a charakteristiky životnej histórie [1,2,3]. Hmyz je schopný vyberať si a získavať potravu a vykonávať kompenzačné kŕmenie na základe dostupnosti potravy a požiadaviek na živiny [1, 3]. Distribúcia živín závisí od procesu životnej histórie a môže viesť k rôznym požiadavkám na kvalitu a kvantitu potravy v rôznych životných štádiách hmyzu [1, 2]. Na kompenzáciu týchto nedostatkov môže hmyz získať špecifické živiny prostredníctvom rôznych živín, prostredníctvom rôznych živín môže hmyz kompenzovať tento nedostatok. exkrementy a sekréty stavovcov a zdochliny, proces známy ako kaluže [2]. Hoci sú primárne opísané rôzne druhy motýľov a molí, napájadlá sa vyskytujú aj v iných radoch hmyzu a príťažlivosť k týmto druhom zdrojov a kŕmenie sa nimi môže mať významný vplyv na zdravie a ďalšie znaky životnej histórie [2, 4, 5]. l) sa objaví ako „podvyživený“ dospelý [8], takže zalievanie môže hrať dôležitú úlohu v charakteristikách jeho života, ale toto správanie sa doteraz zanedbávalo. Použitie agitácie ako prostriedku na zvýšenie príjmu živín v tomto dôležitom nosiči si vyžaduje pozornosť, pretože to môže mať závažné epidemiologické dôsledky.
Príjem dusíka u dospelých samíc komárov Anopheles je obmedzený kvôli nízkym kalorickým rezervám prenášaným z larválneho štádia a neefektívnemu využívaniu krvnej múčky [9]. Samica Ann.gambiae sl to zvyčajne kompenzuje suplementáciou doplnkovou krvnou potravou [10, 11], čím viac ľudí vystavuje riziku nákazy chorobou a zvyšuje riziko komárov pred komárom. výlučkami tebrátov získavať dusíkaté zlúčeniny, ktoré zlepšujú adaptáciu a letovú manévrovateľnosť, ako to demonštruje iný hmyz [2]. V tomto ohľade je zaujímavá silná a zreteľná príťažlivosť jedného zo súrodeneckých druhov v rámci An. Gambijský komplex druhov sl, Anopheles arabinis, čerstvý a starý moč kráv [12,13,14]. je zdroj bohatý na dusíkaté zlúčeniny, pričom močovina tvorí 50-95 % celkového dusíka v čerstvom moči [15, 16]. Ako kravský moč starne, mikroorganizmy využívajú tieto zdroje na zníženie zložitosti dusíkatých zlúčenín do 24 hodín [15]. S rýchlym nárastom amoniaku, ktorý je spojený s poklesom organického dusíka na toxické mikroorganizmy (1 alkalofilné) zlúčeniny ktorá môže byť žena Ann.arabiensis je prednostne priťahovaná močom vo veku 24 hodín alebo menej [13, 14].
V tejto štúdii sa hľadali hostiteľ a krvou kŕmené Ans. Počas svojho prvého gonadotropínového cyklu bol arabiensis hodnotený na získanie dusíkatých zlúčenín, vrátane močoviny, zmiešaním moču. Ďalej bola vykonaná séria experimentov s cieľom posúdiť, ako samice komárov prideľujú tento potenciálny zdroj živín na zlepšenie prežitia, reprodukcie a ďalšieho hodnotenia, či bol hostiteľom poskytnutý spoľahlivý a spoľahlivý spoluzápach čerstvého moču. .Pri hľadaní tohto potenciálneho zdroja výživy objavil arabiensis chemické korelácie za pozorovanou rozdielnou atraktívnosťou. Syntetické pachové zmesi prchavých organických zlúčenín (VOC) identifikované v 24-hodinovom moči boli ďalej hodnotené v terénnych podmienkach, čím sa rozšírili výsledky získané v laboratórnych podmienkach a preukázal sa vplyv zápachu hovädzieho moču na rôzne fyziologické stavy.Prilákanie komárov. Získané výsledky potvrdzujú, že An.arabiensis získava a distribuuje dusíkaté zlúčeniny nachádzajúce sa v moči stavovcov s cieľom ovplyvniť charakteristiky histórie života. Tieto výsledky sú diskutované v kontexte potenciálnych epidemiologických dôsledkov a ako ich možno použiť na sledovanie a kontrolu vektorov.
Anopheles arabicans (kmeň Dongola) sa udržiavali pri teplote 25 ± 2 °C, 65 ± 5 % relatívnej vlhkosti a cykle svetlo:tma 12:12 h. Larvy sa chovali v plastových podnosoch (20 cm × 18 cm × 7 cm) naplnených destilovanou vodou a kŕmili sa pohármi Tetramin® pre ryby, zozbierané Nolat3P DE, ml. ila, Åstorp, SE) a potom prenesené do klietok Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science, Taichung, Taiwan), aby sa umožnilo vyklíčenie dospelých jedincov. Dospelým bol poskytnutý 10 % roztok sacharózy ad libitum až do 4 dní po vzídení (dpe), v tomto bode boli zvieratám, ktoré hľadali hostiteľa, bezprostredne pred pokusom popísaná voda, alebo boli cez noc popísané samice, ktoré hľadali hostiteľa, alebo sa im ponúkla voda. Pávky používané na experimenty s letovou trubicou boli hladované iba 4-6 hodín s vodou ad libitum. Na prípravu komárov sajúcich krv na následné biologické testy sa 4 dpe samiciam podávala defibrotická ovčia krv (Håtunalab, Bro, SE) pomocou membránového kŕmneho systému (Hemotek Discovery Workshops, potom boli prenesené individuálne, Accrington a samice boli popísané nižšie, ako diéta pre samice1). % sacharózy ad libitum počas 3 dní pred experimentmi opísanými nižšie. Posledne menované samice sa použili na biotesty s letovou trubicou a preniesli sa do laboratória a potom mali destilovanú vodu ad libitum počas 4 až 6 hodín pred experimentom.
Testy kŕmenia sa použili na kvantifikáciu spotreby moču a močoviny u dospelých samíc An. Arab. Samiciam hľadajúcim hostiteľa a samiciam kŕmeným krvou bola poskytnutá strava obsahujúca 1 % zriedeného čerstvého a odležaného kravského moču, rôzne koncentrácie močoviny a dve kontroly (10 % sacharóza a voda) počas 48 hodín. ch, Štokholm, SE) bol pridaný do stravy a dodávaný v matrici 4 × 4 v 250 µl mikrocentrifugačných skúmavkách (Axygen Scientific, Union City, CA, USA; Obrázok 1A) Naplňte po okraj (~300 µl). Aby ste predišli konkurencii medzi komármi a potenciálnym účinkom farby farbiva, umiestnite 10 a 10 veľkých komárov na výšku priemeru Petri 1 cm; gen, CH;Obrázok 1A) v úplnej tme pri 25 ± 2 cm °C a 65 ± 5 % relatívnej vlhkosti. Tieto experimenty sa opakovali 5 až 10-krát.Po vystavení diéte sa komáre umiestnili do teploty -20 °C až do ďalšej analýzy.
Hľadajte bovinný moč a močovinu absorbované hostiteľom a samicou Anopheles arabianus sajúcou krv. V kŕmnej štúdii (A) dostali samice komárov potravu pozostávajúcu z čerstvého a odležaného kravského moču, rôznych koncentrácií močoviny, sacharózy (10 %) a destilovanej vody (H2O). samice absorbovali 72-hodinový kravský moč menej ako 168-hodinový kravský moč (B). Priemerný obsah celkového dusíka (± smerodajná odchýlka) v moči je uvedený vo vložke. Samice hľadajúce hostiteľa (D, F) a satie krvi (E, G) prijímajú močovinu spôsobom závislým od dávky. Stredné vdychované objemy (D, E) pomocou rôznych názvov pOVA boli významne odlišné od každého iného písmena p. .05). Chybové úsečky predstavujú štandardnú chybu priemeru (BE). Rovná prerušovaná čiara predstavuje log-lineárnu regresnú čiaru (F, G)
Aby sa uvoľnila absorbovaná potrava, komáre sa jednotlivo umiestnili do 1,5 ml mikrocentrifugačných skúmaviek obsahujúcich 230 ul destilovanej vody a tkanivo sa rozrušilo pomocou jednorazového paličky a akumulátorového motora (VWR International, Lund, SE), nasledovala centrifugácia pri 10 krpm počas 10 minút. λ620) sa určilo pomocou spektrofotometrickej čítačky mikrodoštičiek (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm). štandardná krivka sa pripravila sériovým riedením, čím sa získalo 0,2 ul až 2,4 ul 1 mg ml-1 xylénkyanidu. Potom sa optická hustota známych koncentrácií farbiva použila na stanovenie množstva potravy, ktorú každý komár požil.
Objemové údaje sa analyzovali pomocou jednosmernej analýzy rozptylu (ANOVA), po ktorej nasledovali Tukeyho post hoc párové porovnania (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, USA, 1989–2007). phPad Software, San Diego, CA, USA).
Približne 20 µl vzoriek moču z každej vekovej skupiny sa naviazalo na Chromosorb® W/AW (10 mg 80/100 mesh, Sigma Aldrich) a zapuzdrelo do plechových kapsúl (8 mm × 5 mm). podľa protokolu výrobcu. Celkový dusík (g Nl-1) sa kvantifikoval na základe známych koncentrácií močoviny použitej ako štandard.
Na posúdenie vplyvu diéty na prežitie samíc hľadajúcich hostiteľa a sania krvi sa komáre jednotlivo umiestnili do veľkých Petriho misiek (priemer 12 cm a výška 6 cm; Semadeni) s otvorom pokrytým sieťovinou vo veku (priemer 3 cm). Každá diéta bola napipetovaná na zubný tampón (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE) vložený do 5 ml injekčnej striekačky (Thermo Fisher Scientific, Göteborg, SE), piest bol odstránený a umiestnený na vrch Petriho misky (obrázok 1). 1A). Zmeňte svoju stravu dvakrát denne. Prežívanie komárov kŕmených rôznymi diétami sa štatisticky analyzovalo pomocou Kaplan-Meyerových kriviek prežitia a log-rank testov na porovnanie porovnania distribúcie prežitia medzi jednotlivými diétami (IBM SPSS Statistics 24.0.0.0).
Zákazkový mlynček na lietanie proti komárom založený na Attisano et al.[17], vyrobený z 5 mm hrubých čírych akrylátových panelov (10 cm šírka x 10 cm dĺžka x 10 cm výška) bez predných a zadných panelov (obr. 3: hore). Otočná zostava s vertikálnou trubicou vyrobenou z plynovej chromatografickej kolóny (0,25 mm id; 7,5 cm od A horizontálneho páru magnetov vyrobených z 9 cm lepených koncoviek). rovnaký materiál (6,5 cm L) rozpolil vertikálnu trubicu, aby vytvoril uviazané rameno a rameno, ktoré nesie malý kúsok hliníkovej fólie ako signál prerušujúci svetlo.
24-hodinovým vyhladovaným samičkám bola podaná vyššie uvedená strava na 30 minút pred obmedzením. Plne nakŕmené komáre samice sa potom jednotlivo anestetizovali na ľade na 2-3 minúty a pripevnili sa včelím voskom na špendlíky proti hmyzu (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE) a potom sa pomocou vodorovnej trubice zaznamenávali údaje na ramenách spoločnosti MillbuRevolution. ger, potom uložený a zobrazený pomocou softvéru PC-Lab 2000™ (v4.01; Velleman, Gavere, BE).
Na vizualizáciu vzoru letovej aktivity sa vypočítala celková preletená vzdialenosť (m) a celkový počet po sebe idúcich letových aktivít za hodinu počas 24-hodinového obdobia. Okrem toho sa priemerné vzdialenosti preletené jednotlivými ženami porovnávali medzi jednotlivými liečbami a analyzovali pomocou jednosmernej ANOVA a Tukeyho post hoc analýzy (JMP Pro, v14.0.0, pričom priemerná vzdialenosť bola považovaná za premennú, SAS Institute Inc. počet kôl sa počíta v 10-minútových prírastkoch.
Na posúdenie vplyvu stravy na reprodukčnú výkonnosť An.arabiensis sa šesť samíc (4 dpe) po odbere krvi premiestnilo priamo do klietok Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm) a potom sa im poskytla experimentálna strava počas 48 hodín, ako je opísané vyššie. Diéty sa potom odstránili a misky na neresenie (30 ml; Nolato 20 Hertila sa naplnili každé 2 hodiny 4 hodiny vodou). hodín.Opakujte každý diétny režim 20-50-krát.Vajcia sa spočítali a zaznamenali pre každú experimentálnu klietku.Podvzorky vajec sa použili na posúdenie priemernej veľkosti a variácie dĺžky jednotlivých vajec (n ≥ 200 na diétu) pomocou mikroskopu Dialux-20 (DM1000; Ernst Leitz Wetzlar, vybavený fotoaparátom 20FC Leica; DE)3Leica Microsystems Ltd., DE). Zostávajúce vajíčka boli držané v miestnosti s kontrolovanou klímou za štandardných podmienok chovu počas 24 hodín a bola zmeraná čiastková vzorka nedávno vyliahnutých lariev v 1. instare (n ≥ 200 na diétu), ako je opísané vyššie. Počet vajíčok a veľkosť vajíčok a lariev (analýza s použitím jednosmernej analýzy Tukey post, S1J0 ANOVA. Inc.).
Prchavé látky z priestoru hlavy z čerstvého (1 h po odbere), 24 h, 72 h a 168 h starého moču sa odoberali zo vzoriek odobratých od dobytka Zebu, rasy Arsi. Pre pohodlie sa vzorky moču odoberali skoro ráno, keď boli kravy ešte v maštali. Vzorky moču sa odobrali od 10 jedincov a 100-200 ml každej vzorky z polyamidu Friesco Topphale GmbH sa prenieslo Co., Minden, DE) v 3 l polyamide s vekom vo vinylchloridových plastových sudoch. Prchavé látky v hlavovom priestore z každej vzorky bovinného moču sa zbierali buď priamo (čerstvé) alebo po zrení pri izbovej teplote počas 24 hodín, 72 hodín a 168 hodín, tj každá vzorka moču bola reprezentatívna pre každú vekovú skupinu.
Na odber prchavých látok v hornom priestore sa použil systém s uzavretou slučkou na cirkuláciu prúdu plynu filtrovaného aktívnym uhlím (100 ml min-1) cez polyamidové vrecko do adsorpčnej kolóny počas 2,5 hodiny pomocou membránovej vákuovej pumpy (KNF Neuberger, Freiburg, DE). Ako kontrola sa odber priestoru nad hornou časťou uskutočnil z prázdnej vane alebo kolóny obsahujúcej polyamid 5 cm x 3 mm z polyamidu 5 cm. 35 mg Porapaku Q (50/80 mesh; Waters Associates, Milford, MA, USA) medzi zátkami zo sklenenej vaty. Pred použitím sa kolóna prepláchla 1 ml redestilovaného n-hexánu (Merck, Darmstadt, DE) a 1 ml pentánu (rozpúšťadlo čisté 99,0 % v priestore GC, elučné činidlo Thepenta 40, Aldrich, adsorbované v priestore). zbierky sa spojili a potom sa skladovali pri -20 °C až do použitia na ďalšiu analýzu.
Behaviorálne odozvy An.Headspace prchavé extrakty zozbierané z čerstvého, 24-hodinového, 72-hodinového a 168-hodinového moču boli analyzované na prchavé extrakty z komárov Arabidopsis pomocou olfaktometra s rovnou sklenenou trubicou [18]. olfaktometer (80 cm × 9,5 cm id) bol osvetlený 3 ± 1 lx červeného svetla zhora. Prúd vzduchu filtrovaného aktívnym uhlím a zvlhčený (25 ± 2 °C, 65 ± 2 % relatívna vlhkosť) prešiel biotestom pri 30 cm s-1. cm; L:D; DAB Dental AB), zavesené na 5 cm cievke na náveternom konci olfaktometra, so stimulátorom sa mení každých 5 minút. Na analýzu sa ako stimul použilo 10 μl každého extraktu headspace, zriedeného v pomere 1:10. Predtým sa použilo rovnaké množstvo pentánu ako kontrola. Individuálne hľadanie hostiteľa sa začalo s 2 3 hodinami vypúšťania komárov alebo komárov. uvoľňovacia klietka sa umiestnila na stranu čuchometra po vetre a komáre sa nechali aklimatizovať 1 minútu a potom sa otvoril motýľový ventil klietky, aby sa uvoľnili. Príťažlivosť k liečbe alebo kontrole sa analyzovala ako podiel komárov, ktoré prišli do kontaktu so zdrojom do 5 minút po vypustení. Každý priestor nad hlavou sa vyhýbal prchavým účinkom extraktu a kontroly aspoň 30 krát za deň, rovnaký počet sa opakoval pri každom ošetrení a kontrole. Boli testované každý experimentálny deň. Reakcie vyhľadávania od hostiteľa a krvou kŕmených Ans. Arabské versus headspace sady boli analyzované pomocou nominálnej logistickej regresie, po ktorej nasledovalo párové porovnanie pre nepárne pomery (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Reakcia An na trenie. Extrakty z čerstvého a odležaného kravského moču sa analyzovali v klietkach Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science). Plastové misky (30 ml; Nolato Hertila) naplnené 20 ml destilovanej vody poskytli substrát na neresenie a umiestnili sa do protiľahlých rohov každej klietky vo vzdialenosti 4 cm, Tre2 riedenie 1:10. Rovnaké množstvo pentánu sa použilo na úpravu kontrolného pohára. Ošetrovacie a kontrolné poháre sa medzi každým experimentom vymenili, aby sa kontrolovali účinky na polohu. Desať krvou kŕmených samíc bolo vypustených do experimentálnych klietok v ZT 9-11 a vajcia v pohároch boli spočítané o 24 hodín neskôr. Vzorec na výpočet počtu vajíčok počet vajíčok/ počet nakladených vajíčok v pohári je celkový počet: vajcia znesené).Každá liečba sa opakovala 8-krát.
Plynová chromatografia a analýza vzoru detekcie elektrónovej antény (GC-EAD) samíc An. arabiensis sa uskutočnila tak, ako bolo opísané vyššie [20]. Stručne, čerstvé prchavé extrakty v nadzemnom priestore sa oddelili pomocou Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA, USA) vybavenej kolónou HP-5 (30 m × 0,25 mm hrúbka filmu Agil Technologie, 25 mm id).a starnúci moč. Ako mobilná fáza sa použil vodík s priemerným lineárnym prietokom 45 cm s-1. Každá vzorka (2 μl) sa vstrekovala počas 30 sekúnd v splitless režime so vstupnou teplotou 225 °C. Teplota GC pece bola naprogramovaná od 35 °C (3 minúty zadržiavanie) do 300 °C pri 10 minútovom prerušení G min-10 psi. dusíka sa pridalo a rozdelilo sa 1:1 v Gerstel 3D/2 kríži s nízkym mŕtvym objemom (Gerstel, Mülheim, DE) medzi plameňovo-ionizačným detektorom a EAD. GC odtoková kapilára pre EAD prechádzala cez prenosovú linku Gerstel ODP-2, ktorá sleduje teplotu GC pece plus 5 °C, do sklenenej trubice s filtrom 10 mm a 10 cm sa zmiešala s uhlíkovým filtrom (10 cm) min-1). Anténa bola umiestnená 0,5 cm od vývodu skúmavky. Každý jednotlivý komár predstavoval jedno opakovanie a pre komáre hľadajúce hostiteľa sa vykonali aspoň tri replikáty na vzorkách moču každého veku.
Identifikácia bioaktívnych zlúčenín v headspace zbierkach čerstvého a starého bovinného moču pomocou kombinovaného GC a hmotnostného spektrometra (GC-MS; 6890 GC a 5975 MS; Agilent Technologies) na vyvolanie anténnych odoziev v analýze GC-EAD, pracujúcej v režime ionizácie elektrónovým nárazom pri 70 eV. Kolóna s taveným oxidom kremičitým HP 0m × 5MS bola vybavená 6 um xillary kolónou 0UI. 0,25 mm vnútorný priemer, 0,25 μm hrúbka filmu) s použitím hélia ako mobilnej fázy s priemernou lineárnou prietokovou rýchlosťou 35 cm s-1. 2 μl vzorka bola injikovaná s použitím rovnakého nastavenia injektora a teploty pece ako pri GC-EAD analýze. Zlúčeniny boli identifikované na základe ich retenčného času (Kovát index) a autentické zlúčeniny podľa hmotnostnej knižnice NIST a porovnávané pomocou NIST4Agil. (Dodatočný súbor 1: Tabuľka S2). Na kvantifikáciu sa ako externý štandard vstrekol heptylacetát (10 ng, 99,8 % chemická čistota, Aldrich).
Hodnotenie účinnosti syntetickej pachovej zmesi pozostávajúcej z bioaktívnych zlúčenín identifikovaných v čerstvom a starnutom moči na prilákanie Ans.arabiensis hľadajúceho hostiteľa a sajúceho krv pomocou rovnakého čuchometra a protokolu, ako je uvedené vyššie. Syntetické zmesi napodobňovali zloženie a pomery zlúčenín v zmiešaných prchavých extraktoch z čerstvého, 24-hodinového, 72--48-hodinového a 16-hodinového, 17-hodinového a 16-hodinového močenia. ; Ďalší súbor 1: Tabuľka S2). Na analýzu použite 10 μl plne syntetickej zmesi zriedenej v pomere 1:100, s celkovou rýchlosťou uvoľňovania v rozmedzí približne 140-2400 ng h-1, na posúdenie atraktivity pre hostiteľa a komárov sajúcich krv. Potom sa test vykoná na kompletných zmesiach hostiteľa a odoberie sa kompletná zmes krvi, z ktorých sa odoberú kompletné zmesi hostiteľských zlúčenín. Arabské verzus syntetické a subtraktívne zmesi sa analyzovali pomocou nominálnej logistickej regresie, po ktorej nasledovali párové porovnania pre nepárne pomery (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Aby sa posúdilo, či by kravský moč mohol slúžiť ako hostiteľský biotop pre komáre malárie, čerstvý a starý kravský moč, zozbieraný, ako je opísané vyššie, a voda sa umiestnili do sieťovaných 3 l vedier (100 ml) a umiestnili sa do pascí s návnadou hostiteľa.(verzia BG-HDT; BioGents, Regensburg, DE). Desať pascí umiestnených 50 m od seba na pastvine, 400 m od dedinskej komunity (Silay, Etiópia, 5°53´24´´S, 37°29´24´´E) a žiadny dobytok, päť sa striedalo na stálych hniezdiskách a v obciach. d každú noc počas celkom piatich nocí. Počty komárov zachytených v pasciach nastražených močom rôzneho veku sa porovnávali pomocou logistickej regresie s beta binomickou distribúciou (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
V dedine s endemickým výskytom malárie neďaleko mesta Maki, región Oromia, Etiópia (8° 11′ 08″ s. š., 38° 81′ 70″ v. d.; obrázok 6A). Štúdia sa uskutočnila medzi polovicou augusta a polovicou septembra pred každoročným reziduálnym postrekom v interiéri, spolu s 05-timi dlhými daždivými pármi domov5. pre štúdiu bola vybraná dedina (obr. 6A). Kritériá, ktoré sa použili na výber domov, boli: v dome nie sú povolené žiadne zvieratá, nie je povolené varenie v interiéri (ťahanie palivového dreva alebo dreveného uhlia) (aspoň počas skúšobného obdobia) a domy s maximálne dvoma obyvateľmi, ktoré spia v neinsekticídnych zariadeniach.pod ošetrenou moskytiérou. Etické schválenie udelila Rada pre etické hodnotenie inštitucionálneho výskumu (IRB/022/2016) Fakulty prírodných vied (CNS-IRB), Univerzita v Addis Abebe, v súlade s usmerneniami stanovenými Deklaráciou Svetovej lekárskej asociácie z Helsiniek. Súhlas od každej hlavy domácnosti bol získaný na helsinskej miestnej správe. Experimentálny dizajn sa riadil 2 × 2 latinským štvorcovým dizajnom, v ktorom boli syntetické zmesi a kontroly priradené párovým domom prvú noc a vymenené medzi domami ďalšiu experimentálnu noc. Tento proces sa opakoval desaťkrát. Okrem toho na odhadnutie aktivity komárov vo vybraných domoch boli pasce CDC nastavené na päť po sebe nasledujúcich nocí na začiatku, v strede a na konci poľného pokusu.
Syntetická zmes obsahujúca šesť bioaktívnych zlúčenín bola rozpustená v heptáne (97,0 % rozpúšťadlo GC grade, Sigma Aldrich) a uvoľnená pri 140 ng h-1 pomocou dávkovača bavlneného knôtu [20]. Dávkovač knôtu umožňoval uvoľňovanie všetkých zlúčenín v konštantných pomeroch počas 12-hodinového experimentu. Heptán bol použitý ako kontrola. Fľaštička (preventilácia Prevention Center pre kontrolu a lapač svetla bola zavesená vedľa lapača svetla WJChn). Hock Company, Gainesville, FL, USA; Obrázok 6A). Pasce boli zavesené 0,8 – 1 m nad zemou, v blízkosti nôh postele a dobrovoľník spal pod neošetrenou moskytiérou a operoval medzi 18:00 a 06:30. Komáre odchytené podľa pohlavia a fyziologického stavu (nekŕmené, kŕmené, kŕmené pomocou CR1 polymerázy, gravidné) identifikujte druhy morfologicky identifikované ako A. gambiae sl. Členovia komplexu [23]. V terénnej štúdii sa odchyt párových domov analyzoval pomocou nominálneho logistického modelu prispôsobenia, kde príťažlivosť bola závislou premennou a liečba (syntetická zmes vs kontrola) bola fixným účinkom (JMP® 14.0.0. SAV Institute Inc.).Tu uvádzame hodnoty χ2 a p z testu pomeru pravdepodobnosti.
Vyhodnoťte, či je bezpečný. Arabiensis bol schopný získať moč, svoj hlavný zdroj dusíka, močovinu, priamym kŕmením, do 48 hodín od podávania počas 4 dní po (dpe) pokusoch kŕmenia samičiek hľadajúcich hostiteľa a kŕmených krvou (obr. 1A). (5 299) = 56,00, p < 0,0001, v uvedenom poradí, obr. 1B,C). Okrem toho samice hľadajúce hostiteľa jedli menej moču po 72 hodinách v porovnaní s močom po 168 hodinách (obr. 1B). Keď sa im ponúkla strava obsahujúca močovinu, samice hľadajúce hostiteľa absorbovali podstatne väčšie množstvo vody v porovnaní s močovinou2.69. 10 % sacharózy (F(10,813) = 15,72, p < 0,0001; obrázok 1D). To bolo v protiklade k reakcii krvou kŕmených žien, ktoré typicky absorbovali podstatne viac stravy obsahujúcej močovinu ako vody. okrem toho, pri porovnaní dvoch fyziologických stavov, flebotomizované samice absorbovali viac močoviny ako samice hľadajúce hostiteľa pri najnižších koncentráciách a tieto samice absorbovali podobné množstvá močoviny pri vyšších koncentráciách (F(1,953)= 78,82, p < 0,0001;Obr. 1F, G). Zatiaľ čo príjem zo stravy obsahujúcej močovinu sa javil ako optimálne hodnoty (obr. 1D, E), ženy v oboch fyziologických stavoch boli schopné modulovať množstvo absorbovanej močoviny v celom rozsahu koncentrácií močoviny log-lineárnym spôsobom (obr. 1F, G).Podobne sa zdá, že komáre kontrolujú príjem dusíka reguláciou množstva absorbovaného moču, keďže množstvo dusíka v moči sa odráža v absorbovanom množstve (obrázok 1B, C a B vložky).
Na posúdenie účinkov moču a močoviny na prežívanie komárov hľadajúcich hostiteľa a cicajúcich krv sa samiciam podával moč vo všetkých štyroch vekových skupinách (čerstvý, 24 hodín, 72 hodín a 168 hodín po depozícii) a rozsah koncentrácií močoviny, ako aj destilovaná voda a 10 % sacharóza mali významný vplyv na celkové prežitie samíc –2A. moč: χ2 = 108,5, df = 5, p < 0,0001; močovina: χ2 = 122,8, df = 5, p < 0,0001; Obr. 2B, C) a krvou kŕmené ženy (moč: χ2 = 93,0; 0, 0, 010, p1 df 37,9, df = 5, p < 0,0001; Obrázok 2D, E). Vo všetkých experimentoch mali samice kŕmené potravou z moču, močoviny a vody výrazne nižšiu mieru prežitia v porovnaní so samicami kŕmenými sacharózovou stravou (obrázok 2B-E). Samice hľadajúce hostiteľa kŕmené čerstvým a zatuchnutým močom (tie, ktoré mali 72 stuchnutý moč, vykazovali najnižšiu pravdepodobnosť prežitia,072). Obr. 2B. Okrem toho samice hľadajúce hostiteľa kŕmené 135 mM močovinou prežili dlhšie ako vodné kontroly (p < 0,04) (obr.2C). V porovnaní s vodou ženy kŕmené čerstvým močom a 24-hodinovým močom prežili dlhšie (p = 0,001 a p = 0,012, v uvedenom poradí; obrázok 2D), zatiaľ čo ženy kŕmené 72-hodinovým močom prežili dlhšie ako ženy kŕmené krátkym čerstvým močom a 24-hodinovým močom (p < 0,0001 a p = 15mM1, v uvedenom poradí). močoviny, krvou kŕmené samice prežili dlhšie ako všetky ostatné koncentrácie močoviny a vody (p < 0,013; obrázok 2E).
Prežitie hostiteľských a krv sajúcich samíc Anopheles arabinis, ktoré sa živia kravským močom a močovinou. V biologickom teste (A) dostali samice komárov potravu pozostávajúcu z čerstvého a odležaného kravského moču, rôznych koncentrácií močoviny, sacharózy (10 %) a destilovanej vody (H2O). kŕmené močom (B, D) a močovinou (C, E) a kontroly, sacharóza a voda, sú mŕtve
Celková vzdialenosť a počet kôl určených v teste letového mlyna počas 24-hodinového obdobia sa líšili medzi komármi hľadajúcimi hostiteľa a komármi sajúcimi krv, ktoré vykazovali celkovo menšiu letovú aktivitu (obr. 3). Komáre hľadajúce hostiteľa, ktoré poskytovali čerstvý a odležaný moč alebo sacharózu a vodu, vykazovali odlišné vzory letu (obr. 3), pričom samice kŕmené čerstvým močom boli aktívnejšie 24 hodín a tie, ktoré boli pred 16 až 18, boli aktívnejšie. komáre, ktoré sa živili močom, vykazovali rôzne letové vzorce a boli primárne denné. Samice komárov, ktoré poskytovali sacharózu alebo 72-hodinový moč, vykazovali aktivitu počas 24-hodinového obdobia, zatiaľ čo samice, ktoré poskytovali vodu, boli aktívnejšie v polovici obdobia. Komáre kŕmené sacharózou vykazovali najvyššiu úroveň aktivity neskoro v noci a vo veku 7-2 hodiny ráno, kým v 7-2 hodiny ráno, mali pokles aktivity. (Obrázok 3).
Letový výkon samice Anopheles arabinis, ktorá saje krv, loviacu krv, kŕmiac sa kravským močom a močovinou. V teste letového mlyna sa samice komárov kŕmili čerstvým a odležaným kravským močom, rôznymi koncentráciami močoviny, sacharózy (10 %) a destilovanej vody (H2O) priviazané k horizontálnym, voľne sa otáčajúcim ramenám (voľne sa otáčajúce ramená) krvi (samice voľne sa otáčajúce) bola zaznamenaná vzdialenosť a počet letov za hodinu pre každú diétu počas 24-hodinového obdobia (tmavá: šedá; svetlá: biela). Priemerná vzdialenosť a priemerný počet zápasov sú zobrazené napravo od grafu cirkadiánnej aktivity. Chybové úsečky predstavujú štandardnú chybu priemeru. Štatistická analýza pozri text
Vo všeobecnosti sa celková letová aktivita samíc hľadajúcich hostiteľa držala vzoru podobného letovej vzdialenosti počas 24-hodinového obdobia. Priemerná vzdialenosť letu bola významne ovplyvnená požitou stravou (F(5, 138) = 28,27, p < 0,0001) a samice hľadajúce hostiteľa skonzumovali 72 hodín moču preleteli - 1 výrazne dlhšie vzdialenosti v porovnaní s 0. prsty na nohách lietali dlhšie ako čerstvé (p = 0,022) a 24-hodinové komáre kŕmené močom (p = 0,022). Na rozdiel od vzoru letovej aktivity opísaného močovou diétou vykazovali samice kŕmené močovinou, hľadajúce hostiteľa, pretrvávajúcu letovú aktivitu počas 24-hodinového obdobia, pričom vrcholili počas druhej polovice 3A-videnia hostiteľa, priemerná aktivita u samíc sa výrazne zvýšila, priemerná aktivita u samíc sa výrazne zvýšila (obr. vzdialenosť v závislosti od absorbovanej koncentrácie (F(5, 138) = 1310,91, p < 0,0001). Samice hľadajúce hostiteľa kŕmené akoukoľvek koncentráciou močoviny leteli dlhšie ako samice kŕmené vodou alebo sacharózou (p < 0,03).
Celková letová aktivita komárov sajúcich krv bola stabilná a trvala počas 24 hodín pri všetkých diétach, so zvýšenou aktivitou moču počas druhej polovice obdobia tmy u samíc kŕmených vodou, ako aj u samíc kŕmených čerstvou a 24 hodín starých (obrázok 3). Zatiaľ čo diéta s močom významne ovplyvnila priemernú vzdialenosť letu u samíc kŕmených krvou (F(5, 04 p. 138) = a = diéta 040.00. 5, 138) = 1,36, p = 0,24) s iným močom a kontrolnou stravou (čerstvá, p = 0,0091; 72 hodín, p = 0,0022; 168 hodín, p = 0,001; sacharóza, p = 0,0017, p = dH03).
Účinky kŕmenia močom a močovinou na reprodukčné parametre sa hodnotili v biologických testoch znášania vajíčok (obrázok 4A) a skúmali sa podľa počtu vajíčok znesených každou samicou, veľkosti vajíčka a novo vyliahnutých lariev v prvom instare. 24-hodinový moč, krvná múčka zniesli podstatne viac vajíčok ako samice kŕmené inou močovou diétou a boli podobné tým, ktoré boli kŕmené sacharózou (obr. 4B). Podobne sa veľkosť vajíčok znesených močom kŕmenými samicami menila podľa stravy (F(5, 209) = 12,85, p < 0,0001), pričom vajíčka znášali 24-hodinové samice močom a samice boli výrazne väčšie ako samice kŕmené sacharózou. kŕmené 168 h moču boli výrazne menšie (obr. 4C). Okrem toho močová strava významne ovplyvnila veľkosť lariev (F(5, 187) = 7,86, p < 0,0001), pričom z vajíčok nakladených 24- a 72-hodinovými samičkami kŕmenými močom vyšli podstatne väčšie larvy ako z vajíčok znesených z vajíčok 8 vajíčok kŕmených 1 a 1 larvami Wh.
Reprodukčná výkonnosť samíc Anopheles arabinis kŕmiacich sa kravským močom a močovinou. Krvom kŕmené samice komárov boli kŕmené stravou pozostávajúcou z čerstvého a odležaného kravského moču, rôznych koncentrácií močoviny, sacharózy (10 %) a destilovanej vody (H2O) počas 48 hodín pred umiestnením do biologických testov a určovaním veľkosti vajíčok C, F8 hodín. veľkosť lariev (D, G) bola významne ovplyvnená poskytovanou stravou (kravský moč: BD; močovina: EG). Priemery pre každý parameter meraný pomocou rôznych názvov písmen sa od seba výrazne líšili (jednosmerná ANOVA s použitím Tukeyho post hoc analýzy; p < 0,05). Chybové stĺpce predstavujú štandardnú chybu priemeru
Ako hlavná dusíkatá zložka moču močovina, ak bola podávaná ako potrava samiciam kŕmeným krvou, významne ovplyvňovala reprodukčné parametre vo všetkých štúdiách. Počet vajíčok znesených samicami kŕmenými močovinou po krvnej žrádle v závislosti od koncentrácie močoviny (F(11, 360) = 4,69; p < 0,0001), samice znesené vajíčka viac 34 m kŕmené 13M močovinou. E). Samice kŕmené koncentráciou močoviny 134 µM alebo vyššou znášajú väčšie vajíčka ako samice kŕmené vodou (F(10, 4245) = 36,7; p < 0,0001; Obrázok 4F) a veľkosť lariev, hoci ovplyvnená podobnými koncentráciami močoviny u matiek (F(10, 307.04) bola viac variabilná. G).
Celková príťažlivosť k prchavým extraktom z nadzemného priestoru bovinného moču hľadajúceho hostiteľa. Arabiensis hodnotený v olfaktometri so sklenenou trubicou (obr. 5A) bol významne ovplyvnený vekom moču (χ2 = 15,9, df = 4, p = 0,0032; obr. 5B). Analýza post hoc ukázala, že zatuchnutý zápach moču spôsobil výrazne vyššiu atraktivitu po 72 až 06 hodinách príťažlivosti všetkých ostatných hodín p 0, 168 hodín: p = 0,012, pentán: p = 0,00070), s výnimkou vône čerstvého moču (p = 0,13; obrázok 5B). Hoci celková príťažlivosť komárov sajúcich krv k zápachu moču, nebola výrazne odlišná (χ2 = 8,78, p5 až df 0,6 u samíc sa zistilo, že p5 až 07 je výrazne viac.04. prchavé extrakty z priestoru hlavy v porovnaní so 72-hodinovým močom v porovnaní s kontrolami (p = 0,0066; obrázok 5C).
Behaviorálne reakcie na prirodzené a syntetické pachy kravského moču pri hľadaní hostiteľa a krvou kŕmeného Anopheles arabianus. Schéma skleneného trubicového olfaktometra (A). Prilákanie prchavých extraktov z čerstvého a odležaného kravského moču k hostiteľovi (B) a krv sajúcich (C) komárov.Nájdite reakciu chápadla za 24 hodín (čerstvé extrakty z Lorda An.E). Zobrazuje sa F) a 168-hodinový (G) kravský moč. Stopy detekcie elektrónovej antény (EAD) ukazujú zmeny napätia v reakcii na bioaktívne zlúčeniny v hlavovom priestore eluované z plynového chromatografu a detegované plameňovo-ionizačným detektorom (FID). Stupnica predstavuje amplitúdu odozvy (mV) v porovnaní s nízkym retenčným časom (s). Vlastnosti a konzistentné rýchlosti uvoľňovania (µg amp*l-A) sú zobrazené ako biologické aktívne zlúčeniny (µg. h.) odpoveď.Dvojité hviezdičky (**) označujú nereprodukovateľné reakcie.Nájdite hostiteľa (H) a krv sajúceho (I).p < 0,05). Chybové úsečky predstavujú štandardnú chybu stupnice
Samica Ann.arabiensis, 72 hodín a 120 hodín po krvnej múčke, počas trenia, sa nepreukázala žiadna preferencia prchavých extraktov z priestoru nad hlavou z čerstvého a odležaného kravského moču v porovnaní s kontrolami pentánu (χ2 = 3,07, p > 0,05; Ďalší súbor 1: Obr. S1).
Pre samice Ann.arabiensis, GC-EAD a GC-MS analýzy identifikovali osem, šesť, tri a tri bioaktívne zlúčeniny (obrázok 5D-G). Hoci boli pozorované rozdiely v počte zlúčenín, ktoré vyvolali elektrofyziologické reakcie, väčšina z týchto zlúčenín bola prítomná v každom headspace prchavý extrakt zozbieraný z čerstvého a starého moču.
Celková rýchlosť uvoľňovania prchavých látok v bioaktívnych zlúčeninách v zbierke headspace sa zvýšila z 29 µg h-1 v čerstvom moči na 242 µg h-1 v 168-hodinovom moči, najmä v dôsledku nárastu p-krezolu a m-formaldehydu Fenol, ako aj fenolu. undance) v chromatograme (obr. 5D) -G ľavý panel) a fyziologické odpovede na tieto zlúčeniny (obr. 5D-G pravý panel).
Celkovo mala syntetická zmes podobný prirodzený pomer bioaktívnych zlúčenín identifikovaných v prchavých extraktoch z čerstvých a starých močových hlavíc (obr. 5D–G) a nezdalo sa, že by vyvolávala významnú príťažlivosť pri hľadaní hostiteľa (χ2 = 8,15, df = 4, p = 0,083; obr. 5H) alebo komára sajúceho krv = df χ 3 = pdfχ24 = 0. 0, obr. 5I). Avšak post hoc párové porovnania medzi ošetreniami ukázali, že komáre hľadajúce hostiteľa boli významne atraktívne pre syntetickú zmes 24-hodinového moču v porovnaní s pentánovými kontrolami (p = 0,0086; obrázok 5H).
Na posúdenie úlohy jednotlivých zložiek v syntetických zmesiach 24-hodinového moču bolo hodnotených šesť subtraktívnych zmesí oproti úplným zmesiam v teste Y-tube, v ktorom boli jednotlivé zlúčeniny odstránené. Pre komáre hľadajúce hostiteľa malo odčítanie jednotlivých zlúčenín z kompletnej zmesi významný vplyv na behaviorálne reakcie (χ2 = 19,63, df: 20,20 súbor ďalších zmesí), obrázok df:20,2 A súbor = ďalšie boli atraktívnejšie ako Menšie ako úplne zmiešané. Naproti tomu odstránenie jednotlivých zlúčenín z plne syntetickej zmesi neovplyvnilo behaviorálne reakcie komárov sajúcich krv (χ2 = 11,38, df = 6, p = 0,077), s výnimkou dekanalu, ktorý viedol k nižším hladinám v porovnaní s úplnou zmesou Atrakcia22 (p = 1 B0).
V dedine s endemickým výskytom malárie v Etiópii sa desať nocí hodnotila účinnosť syntetickej zmesi 24-hodinového kravského moču pri prilákaní komárov v poľných podmienkach (obr. 6A). Celkovo bolo zachytených a identifikovaných 4 861 komárov, z ktorých 45,7 % boli Anthropus.48% a.lesphesus sl. pp.(Doplnkový súbor 1: Tabuľka S1).Anopheles arabinis je jediným členom an.Gambijského druhového komplexu identifikovaným analýzou PCR.V priemere bolo zachytených 320 komárov za noc, pričom pasce so syntetickými zmesovými návnadami zachytili viac komárov ako párové pasce bez zmesi (χ2(0, 310106) p.0. nastavené na každú z piatich kontrolných nocí na začiatku, v strede a na konci pokusu.Podobný počet komárov bol zachytený v každom páre pascí, čo naznačuje, že medzi domami nie je žiadna odchýlka (χ2(0, 1665) = 9 × 10-13, p > 0,05) a žiadny pokles populácie počas obdobia štúdie. 2(0, 2107) = 138,7, p < 0,0001), nedávne kŕmenie krvi (χ2(0, 650) = 32,2, p < 0,0001) a tehotenstvo (χ2(0, 228) = 6,27, p = 0,0123;Dodatočný súbor 1: Tabuľka S1). To sa odráža aj v celkovom počte zachytených komárov: hľadajúci hostiteľ > krv sajúci > tehotné > polotehotné > samce.
Terénne hodnotenie účinnosti 24-hodinovej syntetickej zmesi zápachu kravského moču. Skúšky v teréne sa uskutočnili v južnej centrálnej Etiópii (mapa), v blízkosti mesta Maki (vložiť), s použitím svetelnej pasce Centra pre kontrolu chorôb (CDC) (vpravo) v párových domoch s latinským štvorcovým dizajnom (letecká snímka) (A). Anopheles farroes (C), iným spôsobom, efekt závislý od fyziologického stavu. Okrem toho tieto pasce zachytili výrazne zvýšené počty hostiteľských komárov Culex.(D) V porovnaní s kontrolou. Stĺpce vľavo predstavujú priemerný index selekcie komárov ulovených v pároch odorantovej návnady (zelená) a kontrolných (otvorených) index pascí (N = 10), zatiaľ čo priemerné pruhy v kontrolných pasciach 5 predstavujú priemer otvorených pruhov v pároch).Hviezdičky označujú hladiny štatistickej významnosti (*p = 0,01 a ***p < 0,0001)
Tieto tri druhy boli odchytené odlišne v pasciach obsahujúcich syntetické zmesi. Hľadanie hostiteľa (χ2(1, 1345) = 71,7, p < 0,0001), kŕmenie krvou (χ2 (1, 517) = 16,7, p < 0,0001) a gravidita (χ2 (1, 1801) bola arabská pasca = p.3.000. pasca uvoľňujúca syntetickú zmes (obr. 6B), pričom množstvo An sa nelíšilo. Našiel sa Pharoensis v rôznych fyziologických stavoch (obr. 6C). V pasci Culex sa zistil iba významný nárast počtu komárov hľadajúcich hostiteľov v pasciach nastražených syntetickou zmesou (χ2(1 1319) = 12,6, p. s. = 12,6, p. D. = 0. Obr.
Pasce s návnadou hostiteľa umiestnené mimo potenciálnych hostiteľov medzi miestami rozmnožovania a vidieckymi komunitami v Etiópii sa použili na posúdenie, či komáre malárie používajú zápach kravského moču ako nápovedu hostiteľského biotopu. V neprítomnosti hostiteľských signálov, tepla a s alebo bez prítomnosti zápachu kravského moču neboli zachytené žiadne komáre (doplnkový súbor 1, zachytená vysoká teplota a moč samíc albínov boli priťahované výskytom samíc komárov). v malom počte, nezávisle od veku moču (χ2(5, 25) = 2,29, p = 0,13; Doplnkový súbor 1: Obrázok S3). Naopak, vodné kontroly nezachytili komáre malárie pri vysokých teplotách (Doplnkový súbor 1: Obrázok S3).
Komáre malárie získavajú a distribuujú zlúčeniny obsahujúce dusík prostredníctvom kompenzačného kŕmenia kravským močom (tj kaluže), aby sa zlepšili životné vlastnosti, podobne ako u iného hmyzu [2, 4, 24, 25, 26]. Kravský moč je ľahko dostupný obnoviteľný zdroj úzko súvisiaci s miestami odpočinku pre vektory malárie, ako je napríklad vegetácia v kravách v blízkosti domovov a sp. tento zdroj čuchom a sú schopné regulovať príjem dusíkatých zlúčenín v moči, vrátane močoviny, hlavnej dusíkatej zložky v moči [15, 16]. V závislosti od fyziologického stavu samíc komára sa živiny v moči prideľujú tak, aby zlepšili letovú aktivitu a prežitie samíc komárov hľadajúcich hostiteľa, ako aj prežívanie a reprodukčné charakteristiky jedincov s prvým kŕmením krvou, ktoré zohrávajú dôležitú úlohu pri premiešavaní krvi u jedincov s krvou kŕmenou krvou. sú uzavreté ako podvyživení dospelí [8], pretože poskytuje samiciam komárov schopnosť získať dôležité dusíkaté zlúčeniny zapojením sa do nízkorizikového kŕmenia. Toto zistenie má významné epidemiologické dôsledky, pretože samice predlžujú dĺžku života, aktivitu a reprodukčnú produkciu, čo všetko ovplyvňuje kapacitu vektorov. Okrem toho môže byť toto správanie cieľom budúcich programov manažmentu vektorov.