Javascript je momentálne vo vašom prehliadači zakázaný. Niektoré funkcie tejto webovej stránky nebudú fungovať, keď je JavaScript zakázaný.
Zaregistrujte sa so svojimi špecifickými údajmi a konkrétnym liekom, ktorý vás zaujíma, a my vám poskytnuté informácie spojíme s článkami v našej rozsiahlej databáze a ihneď vám pošleme kópiu PDF e-mailom.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 1, 7, klinika Univerzity Catania, 291, klinika Catella a Experimental Livia Manz 123, Taliansko;2 Centrum pre experimentálnu onkológiu a hematológiu, AOU Policlinico „G.Rodolico – San Marco“, Catania , 95123, Taliansko;3 Lekárska onkológia, AOU Poliklinika „G.Rodolico – San Marco“, Catania, 95123, Taliansko;4 Lekárska genetika, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Taliansko;5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Taliansko;6 Katedra biomedicínskych a biotechnologických vied, Univerzita v Catanii, Lekárska genetika, Catania, Taliansko, 95123;7Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, Italy Komunikácia: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, email [email protected];[email protected] Účel: Zárodočné mutácie v BRCA1 a BRCA2 a potvrdená rakovina prsníka (BC), vaječníkov (OC) a iné spojené s celoživotným rizikom rakoviny. Testovanie génu BRCA je kľúčom k posúdeniu individuálneho rizika, ako aj k nájdeniu metód prevencie u zdravých nosičov a prispôsobeniu liečby pacientom s rakovinou. Hoci prevalencia BRCABR a BRCABRCA1ogénnych údajov existuje naprieč rôznymi geografickými variantmi a variantmi V sicílskych rodinách chýbajú štúdie špecificky zamerané na populácie vo východnej Sicílii. Cieľom našej štúdie bolo preskúmať incidenciu a distribúciu BRCA patogénnych zárodočných zmien v kohorte pacientov s BC z východnej Sicílie a posúdiť ich asociáciu so špecifickými znakmi BC pomocou sekvenovania ďalšej generácie. Variant, 17 (49 %) u BRCA1 a 18 (51 %) u BRCA2. Zmeny BRCA1 prevládajú u trojnásobne negatívnych pacientov s BC, zatiaľ čo mutácie BRCA2 sú bežnejšie u pacientov s luminálnym BC. V porovnaní s nenosičmi mali jedinci s variantmi BRCA1 od pacientov s BRCA1 významne vyšší stupeň indexu nádoru a proliferatívne nálezy u SBC: prehľad proliferácie Icely a potvrdzujú úlohu analýzy NGS pri identifikácii pacientov s dedičnou BC. Celkovo sú tieto údaje v súlade s predchádzajúcimi dôkazmi podporujúcimi skríning BRCA na správnu prevenciu a liečbu rakoviny u nosičov mutácií.
Rakovina prsníka (BC) je celosvetovo najčastejšou malignitou a najsmrteľnejšou rakovinou u žien.1 Biologické znaky, ktoré určujú prognózu a klinické správanie BC, boli rozsiahle študované a čiastočne objasnené v priebehu času. V skutočnosti sa v súčasnosti používa niekoľko náhradných markerov na klasifikáciu BC do rôznych molekulárnych podtypov. Sú to estrogénový (ER) a/alebo progesterónový receptor (receptor progesterónu) ampl2 epidermálny rastový faktor, ľudský progesterónový receptor2 (PgER6 rastový faktor), ľudský progesterónový receptor ampl-2 epidermálny rastový faktor 7 a stupeň tumoru (G).2 Kombinácia týchto premenných identifikovala nasledujúce kategórie BC: 1) Luminálne tumory, ktoré vykazovali expresiu ER a/alebo PgR, predstavovali 75 % BC. Tieto tumory sa ďalej delili na Luminal A, keď Ki-67 bol pod 20 % a HER2 negatívny, a Luminálny B, keď bola prítomnosť Ki-67 HER2 a prolife rovná alebo prolife rovná 20 % a prolife2) HER2+ nádory, ktoré sú ER a PgR negatívne, ale vykazujú HER2 amplifikáciu. Táto skupina predstavuje 10 % všetkých nádorov prsníka;3) Triple-negatívna rakovina prsníka (TNBC), ktorá nevykazuje expresiu ER a PgR a amplifikáciu HER2, predstavuje asi 15 % prípadov rakoviny prsníka.2-4
Medzi týmito podtypmi BC predstavuje stupeň nádoru a index proliferácie prierezové biomarkery, ktoré sú priamo a nezávisle spojené s agresivitou a prognózou nádoru.5,6
Okrem vyššie uvedených biologických znakov sa v posledných rokoch stáva čoraz dôležitejšou aj úloha dedičných genetických zmien vedúcich k rozvoju BC.7 Asi 1 z 10 nádorov prsníka je zdedených v dôsledku zárodočných zmien v špecifických génoch.8 Dve veľké epidemiologické štúdie zahŕňajúce viac ako 180 000 žien nedávno identifikovali skupinu ôsmich génov, PA2BRCALB,1,2 RAD51C a RAD51D) primárne zodpovedné za dedičnú BC. Spomedzi týchto génov vykazovali BRCA1 a BRCA2 (ďalej len BRCA1/2) najsilnejšiu koreláciu s vývojom nádorov prsníka.9-12 V skutočnosti zárodočné mutácie BRCA1/2, vrátane iných farebných, pankreatických, melanómových BC, významne zvyšujú celoživotné riziko, ako aj iné protalmancia, melanómy BC as a.Vo veku 13 až 80 rokov je kumulatívna incidencia BC 72 % u žien s BRCA1 patogénnym variantom (PV) a 69 % u žien s BRCA2 PV.14
Predovšetkým nedávna publikácia naznačuje, že riziko BC závisí od typu PV. V skutočnosti v porovnaní s patogénnymi skrátenými variantmi sú do očí bijúce missense varianty, najmä v géne BRCA1, spojené so zníženým rizikom BC, najmä u starších žien.15
Prítomnosť BRCA1 alebo BRCA2 PV bola spojená s rôznymi biologickými a klinicko-patologickými znakmi.16,17 BRCA1-asociované BC majú tendenciu byť klinicky agresívne, slabo diferencované a vysoko proliferatívne. Tieto nádory sú zvyčajne trikrát negatívne a majú skorý vek nástupu. sú častejšie v lúmene B a zvyčajne sa vyskytujú u starších dospelých.16-18 Je pozoruhodné, že mutácie v BRCA1 a BRCA2 zvyšujú citlivosť na špecifickú liečbu, vrátane platinových solí a cielených liekov, ako sú inhibítory poly(ADP-ribóza) polymerázy (PARPi).19,20
Za posledných niekoľko rokov umožnila implementácia sekvenovania novej generácie (NGS) v klinickej praxi rastúcemu počtu pacientov s BC podstúpiť molekulárne testovanie syndrómov náchylnosti na rakovinu, vrátane BRCA1/2.21. s, zvýrazňujúce rozdiely medzi geografickými regiónmi.24–27 Hoci existujú správy o kohorte BC v západnej Sicílii, o skríningu BRCA1/2 v populácii východnej Sicílie je dostupných menej údajov.28,29
Opisujeme tu výsledky skríningu zárodočnej línie BRCA1/2 u pacientov s BC z východnej Sicílie, pričom ďalej korelujeme prítomnosť mutácií BRCA1 alebo BRCA2 s hlavnými klinickopatologickými znakmi týchto nádorov.
Retrospektívna štúdia bola vykonaná v „Centre pre experimentálnu onkológiu a hematológiu“ v Policlinico Hospital.Rodolico – San Marco v Catanii. Od januára 2017 do marca 2021 bolo celkovo 455 pacientov s rakovinou prsníka a vaječníkov, melanómu, pankreasu alebo prostaty odoslaných do nášho molekulárno-genetického laboratória pre všetkých účastníkov s písomným informovaným súhlasom BRCA, Decembra a Helsinskej štúdie v súlade s BRCA/2. pred molekulárnou analýzou.
Histologické a biologické charakteristiky (stav ER, PgR, HER2, Ki-67 a stupeň) BC boli hodnotené na vzorkách z jadrovej biopsie alebo chirurgických vzorkách, pričom sa brali do úvahy iba agresívne zložky nádoru. Na základe týchto charakteristík boli BC klasifikované nasledovne: luminálne A (ER+ a/alebo PgR+, HER2-, Ki-67<20 %), luminálne PgR-2, B-2, B-HER2+ a-0 %) HER2+ (ER a/alebo PgR+, HER2+), HER2+ (ER a PgR-, HER2+) alebo trojnásobne negatívny (ER a PgR-, HER2-).
Pred hodnotením stavu mutácie BRCA1 a BRCA2 vykonal multidisciplinárny tím vrátane onkológa, genetika a psychológa u každého pacienta konzultáciu týkajúcu sa genetiky nádoru s cieľom určiť prítomnosť BRCA1 a/alebo BRCA1.alebo jedinci s vysokým rizikom PV v géne BRCA2. Výber pacientov sa uskutočnil podľa pokynov Talianskej spoločnosti lekárskej onkológie (AIOM) a miestnych sicílskych odporúčaní.30,31 Tieto kritériá zahŕňajú: (i) rodinnú anamnézu známych patogénnych variantov v génoch citlivosti (napr. BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN);(ii) muži s BC;(iii) tie s BC a OC;(iv) ženy s BC <36 rokov, TNBC <60 rokov alebo bilaterálne BC <50 rokov;(v) osobná anamnéza BC < 50 rokov a aspoň jeden príbuzný prvého stupňa: (a) BC < 50 rokov;b) nemucinózne a nehraničné OC akéhokoľvek veku;c) bilaterálne BC;d) muž BC;(e) rakovina pankreasu;(f) rakovina prostaty;(vi) dve alebo viac osobnej anamnézy BC > 50 rokov a rodinná anamnéza BC, OC alebo rakoviny pankreasu pre príbuzných, ktorí sú navzájom prvostupňovými príbuznými (vrátane príbuzných, s ktorými je prvostupňovou);(vii) Osobná anamnéza OC a aspoň jeden príbuzný prvého stupňa: (a) BC <50 rokov;(b) NOC;c) bilaterálne BC;d) muž BC;vii) samica s vysoko kvalitným seróznym OC.
Od každého pacienta sa odobrala 20 ml vzorka periférnej krvi a odobrala sa do skúmaviek EDTA (BD Biosciences). Genomická DNA sa izolovala z 0,7 ml vzoriek plnej krvi pomocou súpravy QIAsymphony DSP DNA Midi Kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Taliansko) podľa inštrukcií výrobcu a prešla cez Qubit® 3.0 Fishertific S Fluortific, USA.Obohatenie cieľa a príprava knižnice sa vykonáva pomocou Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, pripravený na vloženie do súpravy Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit na automatickú prípravu knižnice podľa pokynov výrobcu. Súprava pozostáva z dvoch multiplexných zdrojov PCR primérov, ktoré je možné použiť na štúdium všetkých génov BRCA1 (NM_00730030.3) a všetkých génov BRCA1 (NM_00730030.3). 5 ul každej zriedenej vzorky DNA (10 ng) sa pridalo na platne s čiarovým kódom na prípravu knižnice a všetky činidlá a spotrebný materiál sa vložili do prístroja Ion Chef™. Automatická príprava knižnice a spájanie knižnice vzoriek s čiarovým kódom sa potom uskutočnilo na prístroji Ion Chef™. Počet pripravených knižníc sa potom vyhodnotil pomocou prístroja Qubit® Waltham® 3,0 od výrobcu Fishtcient, výrobca Fishermo Thermo Thermo, Fisherometer. Nakoniec sa knižnice skombinujú v ekvimolárnych pomeroch v skúmavkách so vzorkami knižnice Ion Chef™ (skúmavky s čiarovým kódom) a vložia sa do prístroja Ion Chef™. Sekvenovanie sa uskutočnilo pomocou prístroja Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) s použitím analýzy Ion 510 Ampli (ThermoDrlConScientific) od spoločnosti Ion 510 Scientific (ThermoDrl) Fisher. Reportérsky softvér.
Všetky varianty názvoslovia sa riadili aktuálnymi usmerneniami Human Genome Variation Consortium, ktoré sú dostupné online (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Klinický význam variantov BRCA1/2 bol definovaný pomocou klasifikácie medzinárodného konzorcia ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles) BR a konzultácie rôznych databáz Germline UPigmaconsorg, CAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD a UMD. Klasifikácia zahŕňa päť rôznych rizikových kategórií: benígne (kategória I), pravdepodobne benígne (kategória II), variant s neistým významom (VUS, kategória III), pravdepodobne patogénny (kategória IV) a patogénny (kategória V). VarSome tiež analyzoval účinok 0 mutácií, informačný nástroj na prístup k databáze33 na štruktúru proteínu3
Na priradenie potenciálnej klinickej významnosti každému VUS boli použité nasledujúce výpočtové algoritmy na predikciu proteínov: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:///genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) a (agvgd. input.php). Varianty klasifikované ako trieda 1 a 2 sa považovali za divoký typ.
Sangerovo sekvenovanie potvrdilo prítomnosť každého patogénneho variantu. V stručnosti, pár špecifických primérov bol navrhnutý pre každý detegovaný variant použitím referenčných sekvencií génu BRCA1 a BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 a NG_012772.3, NM_000059.3, po NM_000059.3, nasledovalo sekvenovanie PCR, v tomto poradí).
Pacienti s negatívnym testom na gén BRCA1/2 boli testovaní pomocou multiplexnej ligácie závislej amplifikácie sondy (MLPA) podľa pokynov výrobcu na posúdenie prítomnosti veľkých genómových prestavieb (LGR). Stručne povedané, vzorky DNA sa denaturujú a používa sa až 60 BRCA1 a BRCA2 génovo špecifických sond, z ktorých každá deteguje špecifickú DNA sekvenciu a špecifickú dĺžku nukleotidov a nukleotidov Pro PCR amplikóny sa potom analyzovali kapilárnou elektroforézou a softvérom Cofalyser.Net v spojení s príslušnými tabuľkami Cofalyser špecifickými pre šarže (www.mrcholland.com).
Vybrané klinicko-patologické premenné (histologický stupeň a Ki-67% index proliferácie) boli spojené s prítomnosťou BRCA1/2 PV, vypočítané pomocou softvéru Prism v. 8.4 s použitím Fisherovho presného testu za predpokladu, že p-hodnota <0,05 je významná.
V období od januára 2017 do marca 2021 bolo 455 pacientov vyšetrených na zárodočné mutácie BRCA1/2. Testovanie mutácií sa uskutočnilo v Centre experimentálnej onkológie a hematológie nemocnice Policlinico. Podľa sicílskej smernice (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep.20.1. 0), Rodolico of Catania – San Marco“, celkovo 389 pacientov. Vyskytla sa rakovina prsníka, 37 rakovina vaječníkov, 16 rakovina pankreasu, 8 rakovina prostaty a 5 melanóm.Rozdelenie pacientov podľa typu rakoviny a výsledkov analýzy je znázornené na obrázku 1.
Obrázok 1 ukazuje vývojový diagram znázorňujúci prehľad štúdie. Pacienti s nádormi prsníka, melanómu, pankreasu, prostaty alebo vaječníkov boli testovaní na mutácie v génoch BRCA1 a BRCA2.
Skratky: PVs, patogénny variant;VUS, variant neurčitého významu;WT, sekvencia BRCA1/2 divokého typu.
Naše štúdie sme selektívne zamerali na kohorty rakoviny prsníka. Medián veku pacientok bol 49 rokov (rozsah 23-89) a boli to prevažne ženy (n=376, alebo 97 %).
Z týchto subjektov malo 64 (17 %) mutácie BRCA1/2 a všetky boli ženy. Tridsaťpäť (9 %) malo PV a 29 (7,5 %) malo VUS. Sedemnásť (48,6 %) z 35 patogénnych variantov sa vyskytlo v BRCA1 a 18 (51,4 %) v BRCA2 %) a 8 %), zatiaľ čo 245 v BRUS2. CA2 (obrázky 1 a 2). LGR nebol prítomný v analýze MLPA.
Obrázok 2. Analýza mutácií BRCA1 a BRCA2 u 389 pacientok s rakovinou prsníka. (A) Distribúcia patogénnych variantov (PV) (červená), variantov s neurčitým významom (VUS) (oranžová) a WT (modrá) u 389 pacientok s rakovinou prsníka;(B) 389 pacientok s rakovinou prsníka Tridsaťpäť (9 %) malo BRCA1/2 patogénne varianty (PV). Medzi nimi bolo 17 (48,6 %) nositeľov BRCA1 PV (tmavočervené) a 18 (51,4 %) bolo nositeľov BRCA2 (svetlo červené);(C) 29 (7,5 %) z 389 jedincov malo VUS, 5 (17,2 %) gény BRCA1 (tmavo oranžová) a 24 (82,8 %) gény BRCA2 (svetlo oranžová).
Skratky: PVs, patogénny variant;VUS, variant neurčitého významu;WT, sekvencia BRCA1/2 divokého typu.
Ďalej sme skúmali prevalenciu BC molekulárnych podtypov u pacientov s BRCA1/2 PV. Distribúcia zahŕňala 2 (5,7 %) luminálnych A, 15 (42,9 %) luminálnych B, 3 (8,6 %) luminálnych B-HER2+, 2 (5,7 %) HER2+ a 13 (37,1 %) luminálnych pacientov s TN2BC. B BC malo 2 (11,8 %) ochorenie HER2+ a 10 (58,8 %) malo TNBC. Nádory bez mutácií BRCA1 boli buď luminálne A alebo luminálne B-HER2+ (obrázok 3). V BRCA2-pozitívnej podskupine bolo 10 (55,6 %) tumorov (HER16 luminálnych B.-3 %) (HER167+, 3 %) TNBC a 2 (11,1 %) boli luminálne A (obrázok 3). V tejto skupine neboli prítomné žiadne nádory HER2+. Mutácie BRCA1 teda prevládajú u pacientov s TNBC, zatiaľ čo zmeny BRCA2 prevládajú u jedincov s lúmenom B.
Obrázok 3 Prevalencia podtypov rakoviny prsníka u pacientok s patogénnymi variantmi v BRCA1 a BRCA2. Histogramy ukazujúce distribúciu BRCA1- (tmavo červená) a BRCA2- (svetlo červená) PV medzi molekulárnymi podtypmi pacientok s rakovinou prsníka. Čísla uvedené v každom rámčeku predstavujú percento pacientok s BRCA1 a BRCA2 PV pre každý podtyp PV prsníka.
Skratky: PVs, patogénny variant;HER2+, pozitívny receptor 2 ľudského epidermálneho rastového faktora;TNBC, triple-negatívna rakovina prsníka.
Následne sme zhodnotili typ a génovú lokalizáciu BRCA1 a BRCA2 PVs. V BRCA1 PV sme pozorovali 7 jednoduchých nukleotidových variantov (SNV), 6 delécií, 3 duplikácie a 1 inzerciu. Iba jedna mutácia (c.5522delG) predstavuje nový objav. Najbežnejšia BRCA1 alter alter bol detegovaný u oboch subjektov.53AT. delécia piatich nukleotidov (CTAAT) v BRCA1 exóne 15, čo vedie k substitúcii aminokyseliny leucínu tyrozínom na kodóne 1679 a v dôsledku posunu translačného rámca s predpovedaným alternatívnym stop kodónom vedie k predčasnému skráteniu proteínu. Všetky ostatné zmeny sa detegujú iba v jednom prípade. Pozoruhodné je, že jedna z hlásených oblastí zostrihu T57+ bola lokalizovaná G>>43 (T5 PVc1) 1).
Čo sa týka BRCA2 PV, pozorovali sme 6 delécií, 6 SNV a 2 duplikácie. Žiadna zo zistených zmien nie je nová. V našej populácii sa opakovali tri mutácie, c.428dup a c.8487+1G>A pozorované u 3 subjektov, po ktorých nasledovala c.5851_5854 indelácia dvoch prípadov alterácie48TT zahŕňala opakovanie c. 5 z BRCA2, o ktorom sa predpokladá, že kóduje skrátený, nefunkčný proteín. Mutácia c.8487+1G>A sa vyskytuje v intrónovej oblasti intrónu BRCA2 19 (± 1,2) a ovplyvňuje konsenzuálnu sekvenciu zostrihu, čo vedie k zmenenému zostrihu, čo vedie k abnormálnemu alebo neprítomnému zostrihu nukleotidu z pozícií 54-58 nukleotidu v dôsledku delécie nukleotidu c.5851 do variantu nukleotidu c.5851_5TT 51 až 5854 v kódujúcom exóne 10 génu BRCA2 a vedie k translačnému posunu rámca s predpovedaným alternatívnym stop kodónom (p.S1951WfsTer). Predovšetkým, ako už bolo uvedené, obe zmeny c.631G>A a c.7008-2A>T sa detegovali u tej istej mutácie (a2) adenovírusu u7BR3 pacientov3. guanín (G) obsahujúci nukleotid, čo vedie k zmene valínu na izoleucín na kodóne 211, izoleucín Aminokyselina je aminokyselina s veľmi podobnými vlastnosťami. Táto zmena ovplyvňuje normálny zostrih mRNA. Druhý variant sa nachádza v intrónovej oblasti a vedie k dvojitej substitúcii A za tymín (T) pred exónom 13, môže generovať násobná zmena kódovania cBR-CA2A génu cBR-CA2A. rôzne dĺžky. Okrem toho v skupine BRCA2 PV boli 4 z 18 zmien (22,2 %) intronické.
Potom sme zmapovali škodlivé mutácie BRCA1/2 vo funkčných doménach a oblastiach viažucich proteíny (obr. 4). V géne BRCA1 sa 50 % PV nachádzalo v oblasti klastra rakoviny prsníka (BCCR), zatiaľ čo 22 % mutácií sa nachádzalo v oblasti klastra rakoviny vaječníkov (OCCR) (obr. 4A). % mutácií sa nachádzalo v OCCR (obr. 4B). Ďalej sme hodnotili umiestnenie PV v rámci proteínových domén BRCA1 a BRCA2. Pre proteín BRCA1 sme našli tri PV v doméne slučky a coiled coil a dve mutácie v doméne BRCT (obr. 4A). sa detegovali v doméne oligo/oligosacharid viažucej (OB) a vežovej (T) doméne (obrázok 4B).
Obrázok 4 Schematické znázornenie proteínov BRCA1 a BRCA2 a lokalizácia patogénnych variantov. Tento obrázok ukazuje distribúciu patogénnych variantov BRCA1 (A) a BRCA2 (B) u pacientok s rakovinou prsníka. Exónové mutácie sú znázornené modrou farbou, zatiaľ čo intrónové varianty sú znázornené oranžovou farbou. Výška stĺpca predstavuje počet prípadov. Uvádzané proteíny BRCA1 a ich domény BRCA1 sú funkčné domény proteínu BRCA1 a ich domény BRCA1 ING) a nukleárnu lokalizačnú sekvenciu (NLS), coiled-coil doménu, SQ/TQ klastrovú doménu (SCD) a BRCA1 C-terminálnu doménu (BRCT).(B) BRCA2 proteín obsahuje osem BRC opakovaní, DNA-väzbovú doménu so helikálnou doménou (Helical), tri oligonukleotidy/oligosacharidy na bočnej strane, C.A.A. ast Cancer Cluster Region (BCCR) a Ovarian Cancer Cluster Region (OCCR) sú zobrazené v spodnej časti.*Reprezentuje mutácie, ktoré určujú stop kodóny.
Potom sme skúmali BC klinickopatologické znaky, ktoré by mohli korelovať s prítomnosťou BRCA1/2 PV. Kompletné klinické záznamy boli dostupné pre 181 BRCA1/2-negatívnych pacientov (nenosičov) a všetkých nosičov (n = 35). Existovala korelácia medzi rýchlosťou proliferácie nádoru a stupňom.
Distribúciu Ki-67 sme vypočítali na základe mediánu našej kohorty (25 %, rozsah <10-90 %). Subjekty s Ki-67 < 25 % boli definované ako „nízke Ki-67“, zatiaľ čo jedinci s hodnotami ≥ 25 % boli považovaní za „vysoké Ki-67“. Zistili sa signifikantné rozdiely medzi nosičmi Ki-67 a CA-1 BR. 5A).
Obrázok 5 Korelácia Ki-67 s distribúciou stupňov u žien s rakovinou prsníka s BRCA1 a BRCA2 PVs a bez nich.(A) Boxplot zobrazujúci stredné hodnoty Ki-67 u 181 pacientov s BC bez nosiča verzus BRCA1 (18) alebo BRCA2 (17) pacientov s PV (hodnoty P histogramu pacientov s rakovinou pod 0,5 sa považovali za štatisticky významné priradenie pacientov s rakovinou GBC (t. B) za štatisticky významné 2 a G3) podľa stavu mutácie BRCA1 a BRCA2 (subjekty WT, nosiči BRCA1 a BRCA2 PVs).
Podobne sme skúmali, či stupeň nádoru koreluje s prítomnosťou BRCA1/2 PV. Keďže G1 BC v našej populácii chýbal, rozdelili sme pacientov do dvoch skupín (G2 alebo G3). V súlade s výsledkami Ki-67 analýza odhalila štatisticky významnú koreláciu medzi stupňom nádoru a mutáciou BRCA1, s vyšším podielom nádorov G3 v porovnaní s BRCA105 (obr. 05 non-BRCA1). ).
Pokroky v technológii sekvenovania DNA umožnili bezprecedentný pokrok v genetickom testovaní BRCA1/2 s rozhodujúcimi dôsledkami pre pacientov s rodinnou anamnézou rakoviny. K dnešnému dňu bolo identifikovaných a klasifikovaných približne 20 000 variantov BRCA1/2 podľa Americkej spoločnosti lekárskej genetiky 35 a systému ENIGMA.35,36 Je dobre známe, že v geografickom spektre BRCA1/2 v Taliansku je všeobecne známe. BRCA1/2 PV sa pohybovalo od 8 % do 37 %, čo vykazuje veľkú vnútroštátnu variabilitu.38,39 S takmer 5 miliónmi obyvateľov je Sicília piatym najväčším regiónom v Taliansku z hľadiska počtu obyvateľov. Hoci existujú údaje o distribúcii BRCA1/2 na západe Sicílie, vo východnej časti ostrova neexistujú žiadne rozsiahle dôkazy.
Naša štúdia je jednou z prvých správ o výskyte BRCA1/2 PV u pacientov s BC vo východnej Sicílii.28 Našu analýzu sme zamerali na BC, keďže ide o zďaleka najbežnejšie ochorenie v našej kohorte.
Pri testovaní 389 pacientov pred naším letopočtom malo 9 % BRCA1/2 PV, rovnomerne rozdelené medzi BRCA1 a BRCA2. Tieto výsledky sú v súlade s tými, ktoré boli predtým zaznamenané v talianskej populácii.28 Je zaujímavé, že 3 % (13/389) našej kohorty boli muži. Táto miera je vyššia, ako sa očakávalo pre mužskú rakovinu prsníka (1 % zo všetkých 1 BC na základe nášho výberu na základe žiadneho z 2 BC),40 u mužov sa vyvinula BRCA1/2 PV, takže boli kandidátmi na ďalšiu molekulárnu analýzu, aby sa vylúčila prítomnosť menej bežných mutácií, ako sú okrem iného PALB2, RAD51C a D. Varianty neistého významu boli nájdené u 7 % jedincov, u ktorých bol BRCA2 VUS evidentný. Aj tento výsledok je v súlade s existujúcimi dôkazmi.28,41,42
Keď sme analyzovali distribúciu molekulárnych podtypov BC u mutantných žien BRCA1/2, potvrdili sme známe asociácie medzi TNBC a BRCA1 PV (58,8 %) a medzi luminálnym B BC a BRCA2 PV (55,6 %).16,43 Luminálne nádory A a HER2+ v BRCA1 a BRCA2 PV sú v súlade s 1 existujúcimi údajmi z literatúry, 4 z literatúry.
Potom sa zameriame na typ a umiestnenie BRCA1/2 PV. V našom súbore bola najbežnejšia BRCA1 PV c.5035_5039delCTAAT. Hoci Incorvaia et al.neopísali tento variant vo svojej sicílskej kohorte, iní autori ho uviedli ako zárodočnú líniu BRCA1 PV.34 V našej kohorte sa našlo niekoľko BRCA1 PV – napr. c.181T>G, c.514del, c.3253dupA a c.5266dupC – ktoré boli pozorované na Sicílii28 (z týchto dvoch zakladateľov 1.81 GBR28> .5266dupC) sa bežne vyskytujú u aškenázskych Židov z východnej a strednej Európy (Poľsko, Česka), Slovinska, Rakúska, Maďarska, Bieloruska a Nemecka, 44,45 a v Spojených štátoch a Argentíne bol nedávno definovaný ako „recidivujúci zárodočný variant“ u talianskych pacientov s BC a OC. 34c.514 s rakovinou prsníka u pacientov s rakovinou prsníka v Severnej časti bol predtým identifikovaný aj u pacientov s rakovinou SPI144, v Messine. vaia a kol.našli variant c.3253dupA v niektorých rodinách v Catanii.28 Najreprezentatívnejšie BRCA2 PV sú c.428dup, c.5851_5854delAGTT a intronický variant c.8487+1G>A, ktoré boli podrobnejšie pozorované 28 u pacienta v Palerme s c.428PVsever. tern Sicília, hlavne v regiónoch Trapani a Palermo, zatiaľ čo c.5851_5854delAGTT PV bola pozorovaná v domácnostiach na severozápade Sicílie. Variant 8487+1G>A bol bežnejší u subjektov z Messiny, Palerma a Caltanissetta.28 Rebbeck et al.predtým opísali zmenu c.5851_5854delAGTT v Kolumbii.37 Ďalší BRCA2 PV, c.631+1G>A, bol nájdený u pacientov s BC a OC zo Sicílie (Agrigento, Siracusa a Ragusa). pacient, o ktorom sme predpokladali, že je segregovaný v cis móde, ako už bolo predtým uvedené.34,46 Tieto BRCA2 uble mutácie sú skutočne často pozorované v talianskej oblasti a zistilo sa, že zavádzajú predčasné stop kodóny, čo ovplyvňuje zostrih messengerovej RNA a spôsobuje zlyhanie proteínu BRCA2.47,48
Tiež sme zmapovali BRCA1 a BRCA2 PVs v domnelých OCCR a BCCR oblastiach proteínových domén a génov. Tieto oblasti opísali Rebbeck et al.ako rizikové oblasti pre rozvoj rakoviny vaječníkov a prsníka.49 Dôkazy týkajúce sa asociácie medzi lokalizáciou zárodočných variantov a rizikom rakoviny prsníka alebo vaječníkov však zostávajú kontroverzné.28,50-52 V našej populácii sa BRCA1 PVs prevažne nachádzali v oblasti BCCR, zatiaľ čo BRCA2 PV boli neschopné nájsť žiadnu súvislosť medzi OCCR a akoukoľvek lokalitou medzi nimi. Môže to byť spôsobené obmedzeným počtom pacientov s mutáciami BRCA1/2. Z hľadiska proteínovej domény sú BRCA1 PV distribuované pozdĺž celého proteínu a zmeny BRCA2 sa prednostne nachádzajú v doméne opakovania BRC.
Nakoniec sme korelovali BC klinickopatologické znaky s BRCA1/2 PV. Kvôli obmedzenému počtu zahrnutých pacientov sme našli iba významnú koreláciu medzi Ki-67 a stupňom nádoru. Hoci hodnotenie a interpretácia Ki-67 zostáva do istej miery kontroverzná, je isté, že vysoké miery proliferácie sú spojené so zvýšeným rizikom recidívy ochorenia a „nízkym dátumom prežitia“7 a zníženým prežitím2006. %.Táto hranica sa však nevzťahuje na našu populáciu pacientov s mutáciou BRCA1/2, ktorá má strednú hodnotu Ki-67 25 %. Tento trend vo vysokých hodnotách Ki-67 možno vysvetliť prevalenciou v našich luminálnych kohortách B a TNBC, z ktorých bolo prítomných málo luminálnych A tumorov. Niektoré dôkazy však naznačujú, že vyššia hranica prognózy Ki-67 môže byť u 5 %, 5 %) pacientov lepšia. Výsledky našej analýzy, významná korelácia nie je prekvapujúca. Vyskytuje sa medzi vysokými Ki-67 a stupňami a prítomnosťou BRCA1 PV. V skutočnosti sú nádory súvisiace s BRCA1 typické pre TNBC a vykazujú agresívnejšie znaky.16,17
Na záver, táto štúdia poskytuje správu o mutačnom stave BRCA1/2 v kohorte BC z východnej Sicílie. Celkovo sú naše zistenia v súlade s už existujúcimi dôkazmi, pokiaľ ide o prevalenciu mutácií a klinicko-patologické znaky v BC. Viac štúdií na väčších populáciách BRCA1/2-mutovaných pacientov s BC, ktoré sú odlišné od rozšírených mutácií a rozšírených multigenómových PV, ako je napríklad rozšírená prítomnosť multigenómových PV BRCA1/2. Umožní to identifikáciu a správnu liečbu zvyšujúceho sa počtu subjektov so zvýšeným rizikom rakoviny v dôsledku genetických mutácií.
Potvrdili sme, že pacienti podpísali informovaný súhlas s anonymným uvoľnením vzoriek ich nádorov na výskumné účely. Všetci pacienti podpísali písomný informovaný súhlas podľa Helsinskej deklarácie. Podľa politiky AOU Policlinico „G.Rodolico – S.Marco“ bola táto štúdia vyňatá z etického preskúmania, pretože analýza BRCA1/2 bola vykonaná v súlade s klinickou praxou a všetci pacienti tiež poskytli písomný informovaný súhlas s použitím údajov.
Ďakujeme Prof. Paolovi Vignerimu za jeho pomoc pri starostlivosti o pacientky s rakovinou prsníka, ako to požadovala Etická komisia.
Federica Martorana hlási honoráre od Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Ostatní autori nevyhlasujú žiadne konflikty záujmov v tejto práci.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al.Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN odhaduje výskyt a úmrtnosť 36 druhov rakoviny v 185 krajinách sveta.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 122/caac.33