„Nikdy nepochybujte o tom, že malá skupina premýšľavých, oddaných občanov môže zmeniť svet.V skutočnosti je tam jediná.“
Poslaním Cureus je zmeniť dlhoročný model medicínskeho publikovania, v ktorom môže byť predkladanie výskumu drahé, zložité a časovo náročné.
Plazma bohatá na krvné doštičky/prp, regenerácia tkaniva, aktivácia krvných doštičiek, glukózová proliferatívna terapia, krvné doštičky, proliferatívna terapia
Citujte tento článok ako: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al.(17. mája 2022) Vplyv glukózy na počet a objem krvných doštičiek: dôsledky pre regeneratívnu medicínu.Cure 14(5): e25081.doi:10.7759/cureus.25081
Plazma bohatá na krvné doštičky (PRP) a hypertonické roztoky glukózy sa bežne používajú na injekciu v regeneratívnej medicíne, niekedy spolu.Účinok hypertonickej glukózy na lýzu a aktiváciu krvných doštičiek nebol predtým hlásený.Testovali sme vplyv zvýšených koncentrácií glukózy na počet krvných doštičiek a erytrocytov, ako aj objemy buniek v PRP a plnej krvi (WB).K rýchlemu čiastočnému zníženiu počtu krvných doštičiek došlo pri všetkých zmesiach glukózy zmiešaných s PRP alebo plnou krvou, čo je v súlade s čiastočnou lýzou. Po prvej minúte zostal počet krvných doštičiek stabilný, čo naznačuje rýchle prispôsobenie reziduálnych krvných doštičiek extrémnej (> 2000 mOsm) hypertonicite. Po prvej minúte zostal počet krvných doštičiek stabilný, čo naznačuje rýchle prispôsobenie reziduálnych krvných doštičiek extrémnej (> 2000 mOsm) hypertonicite. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывацит надация ю остаточных тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. Po prvej minúte zostal počet krvných doštičiek stabilný, čo naznačuje rýchle prispôsobenie sa zvyškových krvných doštičiek extrémnej (> 2000 mOsm) hypertonicite.第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极 端８り> 2000 怼数渗2000 mOsm）高渗状态。 После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указыдаеЎт нацазыдает на остаточных тромбоцитов к эkstreмальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состояни Po prvej minúte zostal počet krvných doštičiek stabilný, čo naznačuje rýchlu adaptáciu zvyškových krvných doštičiek na extrémny (> 2000 mOsm) hyperosmolárny stav.Koncentrácie glukózy 25 % a vyššie viedli k významnému zvýšeniu stredného objemu krvných doštičiek (MPV), čo naznačuje skoré štádium aktivácie krvných doštičiek.Sú potrebné ďalšie štúdie na určenie, či dochádza k lýze alebo aktivácii krvných doštičiek a či hypertonická injekcia glukózy samotná alebo v kombinácii s PRP môže poskytnúť ďalší klinický prínos.
V 50. rokoch minulého storočia americký chirurg George Hackett zistil, že dokáže natrvalo uľaviť od bolesti kĺbov a chrbta u mnohých pacientov injekciou proliferačného roztoku do šliach a väzov.Jeho pokusy na králikoch ukázali, že liečba, ktorú nazval proliferatívna terapia, spôsobila zväčšovanie a spevnenie šliach.Histologické štúdie potvrdili, že pri tomto procese vzniká nový kolagén [1].
Počas prvých desaťročí sa vyskúšalo mnoho rôznych distribučných riešení.V deväťdesiatych rokoch minulého storočia väčšina lekárov považovala vysoké koncentrácie glukózy za najbezpečnejšiu a najúčinnejšiu metódu.Mechanizmus účinku však zostáva nejasný.
Po Hackettovej práci sa v 20. storočí uskutočnilo niekoľko klinických štúdií.V roku 2000 sa však záujem obnovil a bolo dokončených niekoľko úspešných klinických štúdií proliferatívnej liečby na liečbu bolesti dolnej časti chrbta [2], osteoartrózy kolena [3] a laterálnej epikondylitídy [4].
Regenerácia tkaniva si vyžaduje účasť kmeňových buniek.Preto vysoké koncentrácie glukózy musia nejakým spôsobom vyvolať migráciu, replikáciu a diferenciáciu kmeňových buniek.Predpokladáme, že krvné doštičky môžu pôsobiť ako poslovia a že vysoké koncentrácie glukózy môžu spôsobiť, že krvné doštičky uvoľňujú cytokíny a rastové faktory, čím podporujú regeneračné procesy, najmä migráciu kmeňových buniek do oblastí s vysokou koncentráciou glukózy.
Aktivácia trombocytov vždy predchádza zvýšeniu intracelulárneho vápnika [5].Liu a kol.v roku 2008 ukázali, že vysoké hladiny glukózy zvyšujú aktivitu kanonických kanálov typu 6 s prechodným receptorovým potenciálom (TRPC6) v plazmatickej membráne, čo vedie k prílevu iónov vápnika do krvných doštičiek [6].Ďalšia štúdia ukázala, že vystavenie okrajovej zóny mikrotubulov vápenatým iónom spôsobuje relaxáciu, expanziu a deformáciu okrajovej zóny, čo následne spôsobuje zmenu tvaru z disku na sférický, čo vedie k strednému objemu krvných doštičiek (MPV) [7].
Našou hypotézou v tejto štúdii je, že vystavenie krvných doštičiek vysokým koncentráciám glukózy ovplyvňuje marginálnu zónu mikrotubulov a intracelulárne prostredie, čo vedie k zvýšeniu MPV.
Všetci účastníci podpísali informovaný súhlas po vysvetlení podrobností štúdie a pred prijatím vzoriek.V tejto štúdii sa použili iba vzorky PRP s hematokritom vyšším ako 2 %, aby bolo možné na porovnanie zahrnúť počet erytrocytov (erytrocytov) a stredný korpuskulárny objem červených krviniek (MCV).
Štúdia sa uskutočnila v štyroch fázach, prvou fázou bola PRP a zvyšnými fázami bola plná krv (tabuľka 1).Ako bolo opísané vyššie [8], všetky relatívne odstredivé sily (RCF, g-force) boli vypočítané zo stredu (Rmid, v cm) krvného stĺpca v odstredivej striekačke.Rozhodli sme sa použiť MPV ako marker senzibilizácie krvných doštičiek a počet krvných doštičiek ako indikátor potenciálnej lýzy krvných doštičiek, pričom oboje možno ľahko merať na štandardných hematologických analyzátoroch.
V prvej fáze darovalo 47 dobrovoľníkov vzorky krvi – jednu skúmavku s kyselinou etyléndiamíntetraoctovou (EDTA) a jednu vzorku PRP plnej krvi (antikoagulovanej citrátom sodným (NaCl, 3 %)) (tabuľka 1).Okamžite umiestnite kolísku do skúmavky.Kompletný krvný obraz (CBC) bol vykonaný na vzorkách EDTA v trojitom vyhotovení a vzorky NaCl boli analyzované trojmo na analýzu CBC a potom bol PRP pripravený rôznymi spôsobmi opísanými vyššie [8].Všetky vzorky PRP boli pripravené centrifugáciou pri 900–1000 g.Miešajte každú vzorku PRP na vortexovom mixéri 5–10 sekúnd, potom rozdeľte päť 0,5 ml alikvótov do skúmaviek.
Na vyhodnotenie účinku expozície krvných doštičiek na zvýšené koncentrácie glukózy sa rovnaké množstvá (0,5 ml) 0%, 5%, 12,5%, 25% a 50% glukózy vo vode zmiešali so vzorkami krvných doštičiek, aby sa získali koncentrácie 0%, 2,5%, 6,25%, 12,5% a 25% 1 skúmavky na glukózovej zmesi a 1 skúmavka sa miešala 5 minút.TAC každej zmesi sa analyzoval trojmo po 15 minútach.Počet krvných doštičiek (PLT), počet červených krviniek, MCV a MPV boli spriemerované pre každú skúmavku a priemerný počet krvných doštičiek, počet červených krviniek, MCV a MPV boli vypočítané pre všetky vzorky PRP.
Po ukončení prvej fázy zberu údajov sme zaznamenali významné zvýšenie objemu krvných doštičiek v krvných doštičkách PRP po pridaní D50W.Krvné doštičky PRP nemusia nevyhnutne predstavovať všetky krvné doštičky v krvi a médium PRP sa líši od média WB.Preto sme sa rozhodli uskutočniť druhú fázu testu účinku pridania D50W do plnej krvi.
Pre druhé kolo sme vybrali veľkosť vzorky 30 na základe výsledkov z prvej série, ako je opísané v časti Analýza.V tejto sérii 20 dobrovoľníkov darovalo vzorky krvi (tabuľka 1).Plná krv (1,8 ml) sa odobrala do 3 ml injekčnej striekačky a antikoagulovala sa 0,2 ml 40 % NaCl.Injekčná striekačka s plnou krvou sa miešala 5 sekúnd vortexovým mixérom a CBC sa analyzovala trojmo.Po analýze sa antikoagulovaná krv pridala k 2 ml 50 % glukózy v 5 ml injekčnej striekačke (konečná koncentrácia glukózy bola približne 25 % (D25) a umiestnila sa do trepacej skúmavky na 30 minút. Po 30 minútach sa analyzovali D25/CBC v injekčných striekačkách WB v troch vyhotoveniach. Predtým boli vypočítané počty krvných doštičiek, počet červených krviniek, MCV a vypočítali sa priemerné hodnoty RMC, MPV a počet vzoriek na striekačku. a po pridaní glukózy.
Pretože krvné doštičky v plnej krvi sú bežne vystavené hypertonickej glukóze počas proliferatívnej glukózovej terapie v dôsledku minimálne invazívnej injekcie a nie je bežné kombinovať PRP s hypertonickou glukózou tesne pred injekciou, rozhodli sme sa študovať hypertonickú glukózu v kombinácii s WB v časti 1. Krok tri a štyri.V každom štádiu darovalo 20 dobrovoľníkov 7-8 ml ACD-A (kyselina obsahujúca citrát trisodný (22,0 g/l), kyselinu citrónovú (8,0 g/l) a glukózu (24,5 g/l), roztok dextrózy citrát) na krvné antikoagulanciá (tabuľka 1).Na stanovenie prahového percenta spojeného so zvýšením MPV sa použili iba zmesi glukózy väčšie ako 12,5 %.V tretej fáze sa do skúmavky umiestni 1 ml krvi.Potom miešajte krv na vortexovom mixéri počas 10 sekúnd pridaním 1 ml 30 % glukózy, 40 % glukózy alebo 50 % glukózy do skúmavky, aby ste získali konečnú koncentráciu glukózy 15 %, 20 % a 25 %.Vzorky glukózovej krvi sa analyzovali na CBC ihneď po zmiešaní a opakovali sa každé dve minúty počas 30 minút.
Počas počiatočného miešania pridanie 1:1 hypertonickej glukózy a WB alebo PRP vystavuje krvné doštičky koncentráciám nad 25 % na niekoľko sekúnd.Vo štvrtom kroku, na vyhodnotenie účinku hypertonickej glukózy s minimálnymi počiatočnými maximálnymi koncentráciami a testovanie hornej hranice účinku glukózy, sme do D25W alebo D50W pridali len malé množstvo krvi.Vložte 1 ml D25W alebo D50W do skúmavky a pridajte 0,2 ml WB za súčasného miešania vzorky 10 sekúnd.V týchto prípadoch bola krv vystavená glukóze v koncentrácii približne 20 % nad konečnou koncentráciou, a nie o 50 % nad konečnou koncentráciou ako vo fáze 3, čo viedlo ku konečným koncentráciám glukózy 20,8 % a 41,6 %.Zmiešané vzorky sa analyzovali v rovnakom časovom intervale ako v kroku 3.
V prvom kroku každej série riedenia glukózy sa odobralo 30 vzoriek, pretože to bola vhodná veľkosť vzorky pre pilotnú štúdiu [9].Na konci každej fázy (vrátane prvej fázy) vyhodnoťte primeranosť veľkosti vzorky pomocou vzorca použitého na určenie veľkosti vzorky potrebnej na odhadnutie priemeru kontinuálnej výslednej premennej v jednej populácii.Vzorec n = Z2 x SD2/E2.V tejto rovnici je Z Z-skóre, SD je štandardná odchýlka a E je požadovaná chyba [10].Naša alfa je 0,05, čo zodpovedá hodnote Z 1,96 a očakávame chybu 5 (v percentách).Riešime teda pre n = (1,962 x SD2)/52.Výsledky ukázali, že veľkosť vzorky potrebná pre každú fázu bola menšia ako skutočný počet zozbieraných.
Počas periód 1, 3 a 4 s použitím viac ako jednej koncentrácie glukózy sa analyzoval účinok rôznych koncentrácií glukózy porovnaním frakčnej zmeny medzi časom 0 a každým nasledujúcim časom (fáza 1 po 15 minútach, obdobie 3 po 15 minútach).a štyri po 15 sekundách, potom každé dve minúty.) Rýchlosti zmien pre každé časové obdobie sa porovnali pomocou Mann-Whitneyho U-testu, pretože údaje nesledovali normálnu distribúciu stanovenú Shapiro-Wilkovým testom normality.Keďže v prvom, treťom a štvrtom kroku (celkom päť) sa uskutočnila analýza 1:1 niekoľkých skupín (päť), vykonala sa Bonferroniho korekcia na úpravu požadovanej hodnoty alfa na ≤0,01, ale nie na ≤0,05.
Zníženie počtu krvných doštičiek so všetkými koncentráciami hypertonickej dextrózy a zvýšenie MPV v krvných doštičkách PRP pri koncentrácii > 12,5 % dextrózy: Počet krvných doštičiek PRP vzrástol z jedno- až päťnásobku koncentrácie v porovnaní s východiskovou hodnotou v plnej krvi, pričom sa líši podľa metódy (nie je znázornené). Zníženie počtu krvných doštičiek so všetkými koncentráciami hypertonickej dextrózy a zvýšenie MPV v krvných doštičkách PRP pri koncentrácii > 12,5 % dextrózy: Počet krvných doštičiek PRP vzrástol z jedno- až päťnásobnej koncentrácie v porovnaní s východiskovou hodnotou v plnej krvi, pričom sa líši podľa metódy (nie je znázornené). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической девекит гипертонической девекитриой декититов ромбоцитах PRP при концентрации декстрозы > 12,5 %: количество тромбоцитов PRP увелиценилос увельчиво1с с исходной цельной кровью, v зависимости от метода (не показано). Znížený počet krvných doštičiek pri všetkých hypertonických koncentráciách dextrózy a zvýšený MPV v krvných doštičkách PRP pri koncentrácii > 12,5 % dextrózy: Počet krvných doštičiek PRP sa zvýšil 1-5 krát v porovnaní s východiskovou hodnotou v plnej krvi, v závislosti od metódy (nie je znázornené). ).在> 12,5 % 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数MP，PRP 芢上仢仭基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法耉式菂（氪斏肏 Pri koncentrácii glukózy > 12,5 % vysoká koncentrácia glukózy znižuje krvný obraz, zvyšuje sa MPV v krvi PRP: v porovnaní s 与基线全血 sa krvný obraz PRP zvyšuje 1 až 5-krát oproti koncentrácii (nepopísané). При концентрациях глюкозы > 12,5 % v rámci концентрации гипертонической глюкозты снорижоат ов, а MPV повышали в тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалосцх от 1-йетноцито 5 сравнению с исходными концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (не оп). Pri koncentráciách glukózy > 12,5 % všetky koncentrácie hypertenznej glukózy znížili počet krvných doštičiek a zvýšili MPV v krvných doštičkách PRP: Počet krvných doštičiek PRP sa zvýšil 1- až 5-násobne v porovnaní so základnými koncentráciami v plnej krvi v závislosti od metódy (ako je opísané).Obrázok 1 ukazuje, že počet krvných doštičiek klesol takmer o 75 % po zriedení vo vode a o 20 – 30 % po 15 minútach riedenia s rôznymi koncentráciami glukózy v porovnaní so základným PRP a riedením 1:1 upraveným na objem (1-k1 s korekciou objemu).k -1 chov).1 chov).
Počet buniek v každom riedení je vyjadrený ako zlomok pôvodného počtu pred zriedením.
MPV klesol minimálne počas výroby PRP, bez ďalšej zmeny koncentrácií zriedenia na 12,5 % vo vode alebo glukóze (vrátane 25 % zmesí PRP glukózy) a zvýšil sa o viac ako 20 % po zriedení v 50 % roztoku glukózy (obr. .2).).Na rozdiel od toho erytrocyty nevykazovali žiadnu významnú zmenu objemu pri akomkoľvek inom riedení ako H2O.
Priemerný objem buniek v každom riedení je vyjadrený ako percento pôvodného objemu pred zriedením.
Podobné, ale menej výrazné zníženie počtu krvných doštičiek a zvýšenie CVR sa pozorovalo u BC vystavených 50 % glukóze (na formuláciu s 25 % glukózou).Tabuľka 2 porovnáva počty buniek a objemy buniek v plnej krvi zriedenej v 50 % dextróze s údajmi fázy 1 PRP zriedenými v 50 % dextróze.Zmeny v počte červených krviniek a MCV červených krviniek neboli zrejmé a neboli stredobodom našej pozornosti.
SD = štandardná odchýlka, MD = priemerný rozdiel medzi skupinami, SE = štandardná odchýlka priemerného rozdielu, RBC = erytrocyty, PLT = krvné doštičky, PRP = plazma bohatá na krvné doštičky, WB = plná krv
Po pridaní D50W k WB bola percentuálna strata krvných doštičiek upravená riedením 7,7 % (310±73 vs. 286±96) v porovnaní so 17,8 % pre riedenie PRP v D50W (664±348 vs. 544±277).MPV WB vzrástlo o 16,8 % (z 10,1 ± 0,5 na 11,8 ± 0,6), kým MPV PRP vzrástlo o 26 % (9,2 ± 0,8 vs. 11,6 ± 0,7). Hoci priemerné rozdiely v znížení počtu krvných doštičiek a zvýšení MPV boli významne väčšie pri PRP, zmeny v znížení počtu krvných doštičiek v rámci WB boli takmer signifikantné (310 ± 73 až 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06) a zvýšenie MPV bolo významné (10,1 ± 0,5 až 11,08 (p1,08) + 1,6,6). Hoci priemerné rozdiely v znížení počtu krvných doštičiek a zvýšení MPV boli významne väčšie pri PRP, zmeny v znížení počtu krvných doštičiek v rámci WB boli takmer signifikantné (310 ± 73 až 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06) a zvýšenie MPV bolo významné (10,1 ± 0,5 až 11,08 (p1,08) + 1,6,6).Hoci priemerné rozdiely v znížení počtu krvných doštičiek a zvýšení CVR boli významne väčšie pri PRP, zmeny v poklese počtu krvných doštičiek v rámci WB boli takmer významné (310 ± 73 až 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06).увеличение MPV было значительным (от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). zvýšenie MPV bolo signifikantné (z 10,1 ± 0,5 na 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB 内血儏坕血儏文几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7 %)；p = 0,06）和MPV 的增加是显着 的显着 的1.8光 10,8 p. 001).尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显 着 大 ， 但 䡰 冇 葡 氰 冇 葡 氆 冇 葡的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7 %) ； p = 0,06 ） 和 MPV 的增加1 ± 1 焼. ± 0,6 (+16,8) p < 0,001）。Zmena zníženia počtu krvných doštičiek v rámci WB bola takmer významná (z 310 ± 73 na 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06), hoci PRP mala významne väčšie priemerné rozdiely v poklese počtu krvných doštičiek a zvýšení MPV.a nárast MPV bol výrazný.(oт 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (od 10,1 ± 0,5 do 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Konečná koncentrácia glukózy 20 % bola potrebná na to, aby sa zaznamenala významná zmena MPV, ale zmena MPV bola výraznejšia pri konečnej koncentrácii 25 %.Strata krvných doštičiek sa po počiatočnom poklese stabilizovala.Zaznamenali sme počiatočný prudký pokles CVR, avšak CVR sa rýchlo obnovila pri 25 % konečnej koncentrácii glukózy, ktorá bola významne vyššia ako hladiny CVR pozorované pri konečných koncentráciách glukózy 20 % a 15 % (obr. 3 a vľavo od tabuľky 3; tieňované rámčeky).označujú p-hodnoty ≤ alfa s Bonferroniho korekciou 0,01).Došlo tiež k počiatočnému prudkému poklesu počtu PLT, pozorovanému v počiatočnej fáze 0-15 s, a potom zostal stabilný (od 15 s do 30 minút; vľavo od tabuľky 4).
Pridanie rôznych koncentrácií glukózy do plnej krvi viedlo k počiatočnému rýchlemu poklesu MPV, po ktorom nasledovalo od koncentrácie závislé obnovenie viac ako 20 %.Legenda ukazuje koncentráciu glukózy po zriedení.D15, D20 a D25 sa uskutočňovali v riedení 1:1.D21 a D41 sa uskutočňovali v riedení 1:5.
Tabuľka 4 ukazuje zmenu počtu krvných doštičiek pri zriedení v hypertonickej glukóze.Pozorovali sme na dávke závislý vzťah medzi okamžitým poklesom počtu PLT pri riedení 1:1 a pri riedení 1:5.Pri porovnaní riedení 1:1 ako jednej skupiny s riedeniami 1:5, skupina 1:1 mala okamžitý pokles počtu krvných doštičiek menší ako skupina 1:5 66 ± 48 000 (23 %) oproti 99 ± 69 000 (37 %).p = 0,014) v skupine 1:5.Po počiatočnom poklese v prvom bode merania sa počet krvných doštičiek ako percento glukózy stabilizoval (obr. 4).
Keď sa celá krv pridá ku glukóze v pomere 1:1, počet krvných doštičiek sa zníži asi o 25 %.Keď sa však pridala celá krv v pomere 1:5, zníženie bolo oveľa väčšie – asi 50 %.
41 % glukózy zvýšilo MPV rýchlejšie a výraznejšie ako 25 % alebo 21 %.Výsledky MPV sú znázornené na obrázku 3. Pri všetkých ostatných riedeniach nebolo po pridaní 50 % glukózy pozorované žiadne okamžité počiatočné zníženie MPV.Pri použití 25 % glukózy (koncentrácia glukózy 20,8 % pri konečnom riedení) bola zmena MPV porovnateľná so zmenou 20 % glukózy pri riedení 1:1 (obr. 3).Hoci zmeny v MPV boli spočiatku väčšie pri 41 % zmiešanej koncentrácii ako pri 25 %, rozdiel v MPV medzi 41 % a 25 % po 16 minútach už nebol významný (tabuľka 3 vpravo).Je tiež zaujímavé, že 25 % glukózy zvýšilo MPV efektívnejšie ako 20,8 %.
Táto in vitro štúdia čiastočne potvrdila našu hypotézu. Preukázala potenciálnu čiastočnú lýzu krvných doštičiek prímesou dextrózy, rýchle prispôsobenie krvných doštičiek extrémnej hypertonicite a významné zvýšenie MPV v reakcii na > 25 % koncentrácie hypertonickej dextrózy. Preukázala potenciálnu čiastočnú lýzu krvných doštičiek prímesou dextrózy, rýchle prispôsobenie krvných doštičiek extrémnej hypertonicite a významné zvýšenie MPV v reakcii na > 25 % koncentrácie hypertonickej dextrózy. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декастрозиоЎтабыстыроЎтабыстыроЎрут омбоцитов до экстремального гипертонуса a значительное повышение MPV в ответипонернение цию декстрозы > 25 %. Ukázala potenciálnu čiastočnú lýzu krvných doštičiek dextrózou, rýchle prispôsobenie krvných doštičiek až po extrémnu hypertonicitu a významné zvýšenie MPV ako odpoveď na hypertonické hladiny dextrózy > 25 %.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速庫速应极瓼仗应极瓼仗应极瓼仗应极瓼仗应极瓼仗应极瓼仗应极瓼仗应极瓼仗应极瓼仗应极 5 % 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 逫庌 枥板 快速 适庌 枥极 的 枥板应> 25 % 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями с глюкозой,стрюкозой тромбоцитов к эkstremalnomu гипертонусу a значительное увеличенсие MPV в ответноинененоние кой глюкозы > 25 %. Ukazuje potenciálnu čiastočnú lýzu krvných doštičiek zmesami glukózy, rýchlu adaptáciu krvných doštičiek na extrémnu hypertonicitu a významné zvýšenie MPV v reakcii na hypertonickú glukózu > 25 %.Počiatočné zvýšenie bolo maximálne pri 41,6 % expozícii glukóze, ale zvýšenie MPV sa blížilo 25 % glukóze približne 20 minút po expozícii.
Koncentrácia krvných doštičiek je ovplyvnená glukózou.Všimli sme si, že množstvo PLT sa znížilo pri všetkých riedeniach glukózy.Prudký pokles počtu krvných doštičiek v H2O (0 %) riedeniach série PRP môže byť spojený s osmotickou lýzou.Alternatívne by to mohol byť artefakt spôsobený zhlukovaním krvných doštičiek, ale to je v kontraste s neprítomnosťou zmeny MPV pri tomto riedení.Toto zistenie znamená, že niektoré krvné doštičky sú veľmi citlivé na hypoosmolaritu.
Vo všetkých riedeniach glukózy 1:1 sa množstvo PLT znížilo o 20-30%, dokonca aj o D5W (hypotonický pri 252 mOsm), čo môže naznačovať špecifický neosmotický účinok glukózy, keďže PLT aj MPV zostali nezmenené pri trojnásobnom zvýšení koncentrácie.glukózy.od D5W do D25W.V skutočnosti mali koncentrácie PLT tendenciu mierne sa zvyšovať so zvyšujúcou sa osmolaritou.
Pokles PLT medzi riedeniami 1:1 a 1:5 znamená, že účinok rozpúšťania závisí od počiatočnej a konečnej koncentrácie glukózy.Ak by to záviselo len od počiatočnej koncentrácie, potom by sa dalo očakávať, že bude vidieť rozdiel v redukcii PLT medzi koncentráciami 1:1.Ale my nie.Ak účinok lýzy závisí len od konečnej koncentrácie glukózy, potom neočakávame veľký rozdiel medzi 20% riedením 1:1 a 20,8% riedením 1:5.A predsa sme to urobili.
Ak dôjde k strate krvných doštičiek v dôsledku lýzy krvných doštičiek, vytvorí sa čiastočný lyzát, po ktorom sa cytokíny a rastové faktory uvoľnia do extracelulárneho prostredia.Niekoľko štúdií ukázalo, že lyzát krvných doštičiek je takmer rovnako účinný ako PRP ako proliferačný roztok [11].Samotná PRP sa ukázala ako účinné riešenie na liečbu proliferácie [12-14].
Neaktívne krvné doštičky cirkulujú vo forme disku vystuženého niekoľkými vnútornými štruktúrami.Počas aktivácie nadobudnú viac sférický alebo amébový tvar, čo má za následok zväčšenie objemu.Zväčšenie objemu vyžaduje zväčšenie plochy povrchu, čo je výsledkom extrúzie systému otvorených tubulov (OCS) a pridania exocytických granúl na membránu.Zostáva určiť, či zvýšenie MPV vyvolané hypertonickou glukózou zahŕňa jeden alebo obidva z týchto mechanizmov, ale ak druhý, potom zvýšenie MPV bude znamenať degranuláciu.
Táto štúdia ukázala, že vystavenie vysokým koncentráciám glukózy na PRP alebo krvných doštičkách plnej krvi viedlo k zvýšeniu MPV do 15 minút s koncentráciou glukózy 25 % a 41,6 %.
Zvýšenie MPV krvných doštičiek môže byť spôsobené dilatáciou okolitých spletí mikrotubulov v reakcii na prílev vápnika.Liu a kol.Ukázalo sa, že glukóza sprostredkováva prítok vápnika cez kanál TRPC6 krvných doštičiek [6].Naša hypotéza je, že glukóza indukuje relaxáciu spleti mikrotubulov, čo vedie k zvýšeniu MPV a senzibilizácie a/alebo aktivácie krvných doštičiek.Podľa našich výsledkov je to však len časť príbehu.V našich testoch žiadna koncentrácia pod D25W neviedla k zvýšeniu MPV.Vzhľadom na to, že sme netestovali expozíciu koncentráciám glukózy medzi 12,5 % a 25 %, naše výsledky fázy 1 naznačujú, že v tomto rozsahu koncentrácií glukózy môže existovať prah, ktorý vedie k zvýšeniu MPV.Ďalšie testovanie v štádiách 3 a 4 ukázalo, že 20-25% glukózy sa zdá byť prahovou hodnotou, ale nie je jasné prečo.
Tiež sme pozorovali ~ 9% pokles MPV po centrifugácii.Nie je jasné, či je tento pokles MPV spôsobený väčšími a hustejšími krvnými doštičkami zachytenými vo vrstve červených krviniek centrifúgy.Toto pozorovanie môže byť dôležité pre lekárov, pretože môže naznačovať, že krvné doštičky PRP sú menšou a menej hustou podskupinou krvných doštičiek WB.
V predchádzajúcej štúdii sme ukázali, že príprava PRP manuálnymi metódami je lacná [8].Ak glukóza senzibilizuje tkanivové krvné doštičky alebo PRP, čím sa stávajú náchylnejšími na aktiváciu, alebo ak sa PRP vyrába s vlastnosťami čiastočného lyzátu, môže to zvýšiť regeneráciu a znížiť potrebu terapie.Preto kombinácia PRP a vysoko koncentrovanej glukózy môže byť nákladovo efektívnejšia ako PRP alebo samotná glukóza.
Naša štúdia má viacero nedostatkov.Najprv používame PRP získaný z niekoľkých rôznych metód.To môže viesť k protichodným výsledkom.Po druhé, neboli sme schopní vykonať biochemickú analýzu žiadnej z našich vzoriek, aby sme presnejšie určili, či došlo k aktivácii krvných doštičiek.Chceli by sme zmerať P-selektín, doštičkový faktor 4, monocytové agregáty krvných doštičiek alebo iné markery aktivácie krvných doštičiek, aby sme lepšie porozumeli stupňu alebo prítomnosti degranulácie alfa granúl, ale to presahuje rámec tejto štúdie.Po tretie, elektrónovou mikroskopiou alebo inými metódami sme nedokázali potvrdiť, že zvýšenie MPV v krvných doštičkách vystavených glukóze bolo spôsobené účinkom na spleti mikrotubulov.
Zmesi WB alebo PRP s 25 % glukózy zvýšili MPV, čo signalizovalo začiatok aktivácie krvných doštičiek, hoci táto štúdia nepreukázala progresiu agregácie alebo degranulácie.Hypertonická zmes glukózy viedla k strate krvných doštičiek, čo pravdepodobne predstavuje lytický účinok.Čiastočná aktivácia alebo lýza krvných doštičiek môže spôsobiť regeneráciu tkaniva po injekcii krvných doštičiek.Nie je jasné, aké klinické dôsledky môžu tieto zmeny viesť.Ďalšie štúdie preukázali presnejšie merania aktivácie alebo lýzy a vyhodnotili rôzne klinické účinky hypertonických zmesí glukózy s WB alebo PRP.
Glukózová proliferatívna terapia je jednoduchá a nenákladná regeneračná terapia, ktorá sa rýchlo rozširuje a podporuje klinický výskum.Táto štúdia naznačuje fyziologický mechanizmus, ktorý, ak sa potvrdí, by nám mohol pomôcť pochopiť časť regeneračného mechanizmu proliferatívnej terapie.
Biomedicínska a zdravotnícka informatika na University of Missouri, Kansas City School of Medicine, Kansas City, USA
Ľudské subjekty: Všetci účastníci tejto štúdie dali alebo nedali súhlas.Medzinárodná spoločnosť pre bunkovú medicínu vydala súhlas ICMS-2017-003.Nasledujúci protokol bol schválený na ďalšie použitie Institutional Review Board Medzinárodnej spoločnosti pre bunkovú medicínu: Názov: Výpočet výťažku liečiva bohatej na krvné doštičky v plazme na základe základného počtu krvných doštičiek CBC.Zvieracie subjekty: Všetci autori potvrdili, že do tejto štúdie neboli zapojené žiadne zvieratá ani tkanivá.Konflikty záujmov: V súlade s ICMJE Jednotným formulárom na zverejnenie všetci autori vyhlasujú nasledovné: Platobné/servisné informácie: Všetci autori vyhlasujú, že nedostali finančnú podporu od žiadnej organizácie na predloženú prácu.Finančné vzťahy: Všetci autori vyhlasujú, že v súčasnosti ani v posledných troch rokoch nemajú finančné vzťahy so žiadnou organizáciou, ktorá by mohla mať záujem o predloženú prácu.Iné vzťahy: Všetci autori vyhlasujú, že neexistujú žiadne iné vzťahy alebo aktivity, ktoré by mohli ovplyvniť zaslanú prácu.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K a kol.(17. mája 2022) Vplyv glukózy na počet a objem krvných doštičiek: dôsledky pre regeneratívnu medicínu.Cure 14(5): e25081.doi:10.7759/cureus.25081
© Copyright 2022 Harrison a kol.Toto je článok s otvoreným prístupom distribuovaný za podmienok licencie Creative Commons Attribution License CC-BY 4.0.Neobmedzené používanie, distribúcia a reprodukcia na akomkoľvek médiu je povolená za predpokladu, že je uvedený pôvodný autor a zdroj.