»Nikoli ne dvomite, da lahko majhna skupina premišljenih, predanih državljanov spremeni svet.Pravzaprav je edini tam.”
Poslanstvo Cureusa je spremeniti dolgoletni model medicinskega založništva, v katerem je predložitev raziskav lahko draga, zapletena in dolgotrajna.
Plazma, bogata s trombociti/prp, regeneracija tkiva, aktivacija trombocitov, proliferativno zdravljenje glukoze, trombociti, proliferativno zdravljenje
Citirajte ta članek kot: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al.(17. maj 2022) Vpliv glukoze na število in volumen trombocitov: posledice za regenerativno medicino.Zdravilo 14(5): e25081.doi:10.7759/cureus.25081
Plazma, bogata s trombociti (PRP) in hipertonične raztopine glukoze se običajno uporabljajo za injiciranje v regenerativni medicini, včasih skupaj.O učinku hipertonične glukoze na lizo in aktivacijo trombocitov še niso poročali.Preizkusili smo vpliv povišane koncentracije glukoze na število trombocitov in eritrocitov ter na celični volumen v PRP in polni krvi (PK).Pri vseh mešanicah glukoze, pomešanih s PRP ali polno krvjo, je prišlo do hitrega delnega zmanjšanja števila trombocitov, kar je skladno z delno lizo. Po prvi minuti je število trombocitov ostalo stabilno, kar kaže na hitro akomodacijo preostalih trombocitov do ekstremne (> 2000 mOsm) hipertoničnosti. Po prvi minuti je število trombocitov ostalo stabilno, kar kaže na hitro akomodacijo preostalih trombocitov do ekstremne (> 2000 mOsm) hipertoničnosti. Po prvih minutah je število trombocitov ostalo stabilno, kar kaže na hitro akomodacijo končnih trombocitov do ekstremnega (> 2000 mOsm) hipertonusa. Po prvi minuti je število trombocitov ostalo stabilno, kar kaže na hitro akomodacijo preostalih trombocitov do ekstremne (> 2000 mOsm) hipertoničnosti.第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm）高渗状态。2000 mOsm）高渗状态。 Po prvih minutah je število trombocitov ostalo stabilno, kar kaže na hitro prilagoditev končnih trombocitov k ekstremnemu (>2000 mOsm) hiperosmolarnemu stanju. Po prvi minuti je število trombocitov ostalo stabilno, kar kaže na hitro prilagoditev preostalih trombocitov na ekstremno (>2000 mOsm) hiperosmolarno stanje.Koncentracije glukoze 25 % in več so povzročile znatno povečanje srednjega volumna trombocitov (MPV), kar kaže na zgodnjo stopnjo aktivacije trombocitov.Potrebne so nadaljnje študije, da se ugotovi, ali pride do lize ali aktivacije trombocitov in ali lahko hipertonična injekcija glukoze sama ali v kombinaciji s PRP zagotovi dodatno klinično korist.
V petdesetih letih 20. stoletja je ameriški kirurg George Hackett odkril, da lahko mnogim bolnikom trajno lajša bolečine v sklepih in hrbtu z vbrizgavanjem proliferativne raztopine v kite in vezi.Njegovi poskusi na kuncih so pokazali, da je zdravljenje, ki ga je imenoval proliferativna terapija, povzročilo povečanje in krepitev tetiv.Histološke študije so potrdile, da se med tem procesom proizvaja nov kolagen [1].
V prvih nekaj desetletjih je bilo preizkušenih veliko različnih distribucijskih rešitev.Do devetdesetih let prejšnjega stoletja je večina zdravnikov menila, da so visoke koncentracije glukoze najvarnejša in najučinkovitejša metoda.Vendar mehanizem delovanja ostaja nejasen.
Po Hackettovem delu je bilo v 20. stoletju izvedenih nekaj kliničnih študij.Vendar pa je v 2000-ih ponovno prišlo do zanimanja in dokončanih je bilo več uspešnih kliničnih preskušanj proliferativne terapije za zdravljenje bolečine v križu [2], osteoartritisa kolena [3] in lateralnega epikondilitisa [4].
Regeneracija tkiva zahteva sodelovanje izvornih celic.Zato morajo visoke koncentracije glukoze nekako inducirati migracijo, replikacijo in diferenciacijo izvornih celic.Domnevamo, da lahko trombociti delujejo kot prenašalci sporočil in da lahko visoke koncentracije glukoze povzročijo, da trombociti sproščajo citokine in rastne faktorje, s čimer spodbujajo regenerativne procese, zlasti migracijo matičnih celic na območja z visoko koncentracijo glukoze.
Aktivacija trombocitov je vedno pred povečanjem intracelularnega kalcija [5].Liu et al.leta 2008 je pokazalo, da visoke ravni glukoze povečajo aktivnost prehodnih receptorskih potencialnih kanoničnih kanalov tipa 6 (TRPC6) v plazemski membrani, kar povzroči dotok kalcijevih ionov v trombocite [6].Druga študija je pokazala, da izpostavljenost robne cone mikrotubulov kalcijevim ionom povzroči sprostitev, razširitev in deformacijo robne cone, kar posledično povzroči spremembo oblike iz diska v sferično, kar ima za posledico srednji volumen trombocitov (MPV) [7].
Naša hipoteza v tej študiji je, da izpostavljenost trombocitov visokim koncentracijam glukoze vpliva na robno cono mikrotubulov in znotrajcelično okolje, kar vodi do povečanja MPV.
Vsi udeleženci so podpisali obrazec za informirano privolitev, potem ko so bile razložene podrobnosti študije in pred prejemom vzorcev.V tej študiji so bili uporabljeni samo vzorci PRP s hematokritom, večjim od 2 %, da so lahko za primerjavo vključili število eritrocitov (eritrocitov) in srednji korpuskularni volumen rdečih krvnih celic (MCV).
Študija je potekala v štirih fazah, prva faza je bila PRP, preostale faze pa polna kri (Tabela 1).Kot je opisano prej [8], so bile vse relativne centrifugalne sile (RCF, g-sila) izračunane iz sredine (Rmid, v cm) krvnega stebra v centrifugalni brizgi.Odločili smo se za uporabo MPV kot označevalca preobčutljivosti trombocitov in števila trombocitov kot indikatorja potencialne lize trombocitov, oboje pa je mogoče zlahka izmeriti na standardnih hematoloških analizatorjih.
V prvi fazi je 47 prostovoljcev darovalo vzorce krvi – eno epruveto z etilendiamintetraocetno kislino (EDTA) in en vzorec polne krvi PRP (antikoagulirano z natrijevim citratom (NaCl, 3%)) (Tabela 1).Gugalnik takoj postavite v cev.Popolna krvna slika (CBC) je bila opravljena na vzorcih EDTA v treh izvodih, vzorci NaCl pa so bili analizirani v treh izvodih za analizo CBC, nato pa je bil pripravljen PRP z različnimi metodami, opisanimi zgoraj [8].Vsi vzorci PRP so bili pripravljeni s centrifugiranjem pri 900–1000 g.Vsak vzorec PRP mešajte na vrtinčnem mešalniku 5–10 sekund, nato razdelite pet alikvotov po 0,5 ml v epruvete.
Za ovrednotenje učinka izpostavljenosti trombocitov na povišane koncentracije glukoze smo enake količine (0,5 ml) 0 %, 5 %, 12,5 %, 25 % in 50 % glukoze v vodi zmešali z vzorci trombocitov, da smo dobili 0 %, 2,5 % 6,25 %, 12,5 % in 25 % koncentracije mešanice glukoze in epruvete mešali na stresalniku za epruvete 15 minut.TAC vsake zmesi je bil analiziran v trojniku po 15 minutah.Število trombocitov (PLT), število rdečih krvnih celic, MCV in MPV je bilo povprečeno za vsako epruveto, srednje število trombocitov, število rdečih krvnih celic, MCV in MPV pa je bilo izračunano za vse vzorce PRP.
Po končani prvi fazi zbiranja podatkov smo po dodatku D50W opazili znatno povečanje volumna trombocitov v trombocitih PRP.Trombociti PRP ne predstavljajo nujno vseh trombocitov v krvi in ​​medij PRP se razlikuje od medija WB.Zato smo se odločili izvesti drugo fazo preskušanja učinka dodajanja D50W polni krvi.
Za drugi krog smo izbrali velikost vzorca 30 na podlagi rezultatov iz prve serije, kot je opisano v razdelku Analiza.V tej seriji je 20 prostovoljcev darovalo vzorce krvi (tabela 1).Polno kri (1,8 ml) smo vzeli v 3 ml brizgo in antikoagulirali z 0,2 ml 40% NaCl.Brizgo s polno krvjo smo pet sekund mešali z vrtinčnim mešalnikom in CBC analizirali v treh izvodih.Po analizi smo antikoagulirano kri dodali 2 ml 50 % glukoze v 5 ml brizgi (končna koncentracija glukoze je bila približno 25 % (D25) in jo dali v stresalno epruveto za 30 minut. Po 30 minutah smo D25/CBC v WB brizgah analizirali v treh izvodih. Število trombocitov, število rdečih krvnih celic, MCV in MPV na brizgo so bili povprečni in srednji PLT , število RBC, MCV in MPV so bili izračunani za vsak vzorec pred in po dodajanju glukoze.
Ker so trombociti v polni krvi običajno izpostavljeni hipertonični glukozi med terapijo s proliferativno glukozo zaradi minimalno invazivnega injiciranja in ni običajno kombinirati PRP s hipertonično glukozo tik pred injiciranjem, smo se odločili preučiti hipertonično glukozo v kombinaciji z WB v 1. razdelku. Tretji in četrti korak.Na vsaki stopnji je 20 prostovoljcev darovalo 7-8 ml ACD-A (kislina, ki vsebuje trinatrijev citrat (22,0 g/l), citronsko kislino (8,0 g/l) in glukozo (24,5 g/l), raztopina dekstroza citrata) za krvne antikoagulante (tabela 1).Za določitev odstotka praga, povezanega s povečanjem MPV, so bile uporabljene samo mešanice glukoze, večje od 12,5%.Na tretji stopnji se v epruveto da 1 ml krvi.Nato 10 sekund mešajte kri na vrtinčnem mešalniku, tako da v epruveto dodate 1 ml 30 % glukoze, 40 % glukoze ali 50 % glukoze, da dobite končno koncentracijo glukoze 15 %, 20 % oziroma 25 %.Vzorce glukoze v krvi so analizirali za CBC takoj po mešanju in ponovili vsaki dve minuti 30 minut.
Med začetnim mešanjem dodatek hipertonične glukoze 1:1 in WB ali PRP za nekaj sekund izpostavi trombocite koncentracijam nad 25 %.V četrtem koraku, da bi ocenili učinek hipertonične glukoze z minimalnimi začetnimi najvišjimi koncentracijami in preizkusili zgornjo mejo učinka glukoze, smo D25W ali D50W dodali le majhno količino krvi.V epruveto dajte 1 ml D25W ali D50W in med 10 sekundnim vrtinčenjem vzorca dodajte 0,2 ml WB.V teh primerih je bila kri izpostavljena glukozi v koncentraciji približno 20 % nad končno koncentracijo, namesto 50 % nad končno koncentracijo kot v fazi 3, kar je povzročilo končne koncentracije glukoze 20,8 % in 41,6 %.Mešane vzorce smo analizirali v istem časovnem intervalu kot v 3. koraku.
V prvem koraku vsake serije redčenja glukoze je bilo odvzetih 30 vzorcev, saj je bila to primerna velikost vzorca za pilotno študijo [9].Na koncu vsake faze (vključno s prvo fazo) ocenite ustreznost velikosti vzorca z uporabo formule, ki se uporablja za določitev velikosti vzorca, potrebne za oceno povprečja stalne spremenljivke izida v eni populaciji.Formula n = Z2 x SD2 /E2.V tej enačbi je Z rezultat Z, SD standardna deviacija in E želena napaka [10].Naša alfa je 0,05, kar ustreza vrednosti Z 1,96, pričakujemo pa napako 5 (v odstotkih).Zato rešujemo za n = (1,962 x SD2)/52.Rezultati so pokazali, da je bila zahtevana velikost vzorca za vsako stopnjo manjša od dejanskega zbranega števila.
Med obdobji 1, 3 in 4 z uporabo več kot ene koncentracije glukoze je bil učinek različnih koncentracij glukoze analiziran s primerjavo delne spremembe med časom 0 in vsakim naslednjim časom (faza 1 pri 15 minutah, obdobje 3 pri 15 minutah).in štiri po 15 sekundah, nato vsaki dve minuti.) Stopnje sprememb za vsako časovno obdobje so primerjali z Mann-Whitneyjevim U-testom, ker podatki niso sledili normalni porazdelitvi, kot je določeno s testom normalnosti Shapiro-Wilka.Ker je bila v prvem, tretjem in četrtem koraku izvedena analiza 1 proti 1 več skupin (pet) (skupno pet), je bila izvedena korekcija Bonferroni, da se želena vrednost alfa prilagodi na ≤0,01, vendar ne ≤0,05.
Zmanjšanje števila trombocitov pri vseh koncentracijah hipertonične dekstroze in povečanje MPV v trombocitih PRP pri koncentraciji dekstroze >12,5 %: število trombocitov PRP se je povečalo od eno- do petkratne koncentracije v primerjavi z izhodiščno vrednostjo polne krvi, odvisno od metode (ni prikazano). Zmanjšanje števila trombocitov pri vseh koncentracijah hipertonične dekstroze in povečanje MPV v trombocitih PRP pri koncentraciji dekstroze >12,5 %: število trombocitov PRP se je povečalo od eno- do petkratne koncentracije v primerjavi z izhodiščno vrednostjo polne krvi, odvisno od metode (ni prikazano). Vrednost števila trombocitov pri vseh koncentracijah hipertonične dekstroze in povečanje MPV v trombocitih PRP pri koncentraciji dekstroze > 12,5%: število trombocitov PRP se je povečalo za 1-5 krat v primerjavi z izhodno celično krvjo, odvisno od metode (ni prikazano). Zmanjšano število trombocitov pri vseh hipertoničnih koncentracijah dekstroze in povečana MPV v trombocitih PRP pri koncentraciji dekstroze >12,5 %: število trombocitov PRP se je povečalo 1-5-krat v primerjavi z izhodiščno vrednostjo polne krvi, odvisno od metode (ni prikazano). ).在> 12,5 % 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，PRP 血小板中MPV 增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法而异（未描述）。 Pri >12,5 % koncentracije glukoze visoka koncentracija glukoze zmanjša krvno sliko, PRP MPV v krvi se poveča: v primerjavi s 与基线全血 se krvna slika PRP poveča od 1- do 5-kratne koncentracije (ni opisano). Pri koncentraciji glukoze >12,5% je vsa koncentracija hipertonične glukoze zmanjšala število trombocitov, a MPV se je povečalo v trombocitih PRP: število trombocitov PRP se je povečalo od 1- do 5-kratnih koncentracij v primerjavi z izhodiščno koncentracijo celične krvi, odvisno od metode (ni opisano). Pri koncentracijah glukoze > 12,5 % so vse hipertenzivne koncentracije glukoze zmanjšale število trombocitov in povečale MPV v trombocitih PRP: število trombocitov PRP se je povečalo za 1- do 5-krat v primerjavi z izhodiščnimi koncentracijami v polni krvi, odvisno od metode (kot je opisano).Slika 1 prikazuje, da se je število trombocitov zmanjšalo za skoraj 75 % po redčenju v vodi in za 20–30 % po 15 minutah redčenja z različnimi koncentracijami glukoze v primerjavi z izhodiščnim PRP in razredčitvijo 1:1, prilagojeno volumnu (1-k1 s popravkom volumna).k -1 vzreja).1 vzreja).
Število celic v vsaki razredčitvi je izraženo kot ulomek prvotnega števila pred redčenjem.
MPV se je minimalno zmanjšal med proizvodnjo PRP, brez nadaljnje spremembe koncentracij redčenja na 12,5 % v vodi ali glukozi (vključno z mešanicami glukoze PRP 25 %) in se je povečal za več kot 20 % po redčenju v 50 % raztopini glukoze (slika .2).).Nasprotno pa eritrociti niso pokazali pomembne spremembe volumna pri nobeni drugi razredčitvi razen H2O.
Povprečna prostornina celic v vsaki razredčitvi je izražena kot odstotek prvotne prostornine pred redčenjem.
Podobno, vendar manj izrazito zmanjšanje števila trombocitov in povečanje CVR so opazili pri BC, izpostavljenem 50 % glukozi (za pripravo s 25 % glukozo).Tabela 2 primerja število celic in volumne celic v polni krvi, razredčeni v 50 % dekstrozi, s podatki PRP faze 1, razredčeni v 50 % dekstrozi.Spremembe števila eritrocitov in MCV eritrocitov niso bile očitne in niso bile v središču naše pozornosti.
SD = standardni odklon, MD = povprečna razlika med skupinami, SE = standardni odklon srednje razlike, RBC = eritrociti, PLT = trombociti, PRP = trombociti bogata plazma, WB = polna kri
Po dodajanju D50W k WB je bila odstotna izguba trombocitov, prilagojena za razredčitev, 7,7 % (310±73 proti 286±96) v primerjavi s 17,8 % za razredčitev PRP v D50W (664±348 proti 544±277).MPV WB se je povečal za 16,8 % (z 10,1 ± 0,5 na 11,8 ± 0,6), medtem ko se je MPV PRP povečal za 26 % (9,2 ± 0,8 v primerjavi z 11,6 ± 0,7). Čeprav so bile povprečne razlike v zmanjšanju števila trombocitov in povečanju MPV bistveno večje pri PRP, so bile spremembe zmanjšanja števila trombocitov znotraj WB skoraj pomembne (310 ± 73 do 286 ± 96 (-7,7 %); p = ,06) in povečanje MPV je bilo pomembno (10,1 ± 0,5 do 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < ,001). Čeprav so bile povprečne razlike v zmanjšanju števila trombocitov in povečanju MPV bistveno večje pri PRP, so bile spremembe zmanjšanja števila trombocitov znotraj WB skoraj pomembne (310 ± 73 do 286 ± 96 (-7,7 %); p = ,06) in povečanje MPV je bilo pomembno (10,1 ± 0,5 do 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < ,001).Čeprav so bile povprečne razlike v zmanjšanju števila trombocitov in povečanju CVR bistveno večje pri PRP, so bile spremembe v zmanjšanju števila trombocitov znotraj WB skoraj pomembne (310 ± 73 do 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06).povečanje MPV je bilo pomembno (od 10,1 ± 0,5 do 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). povečanje MPV je bilo pomembno (z 10,1 ± 0,5 na 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB 内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7 %)；p = 0,06）和MPV 的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < . 001).尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 但 内血小板 计数 减少的 几乎 是 显着 的 （（（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7 %) ； p = .06）和MPV 的增加是显着的＄(10,1 ± 0,5 到11,8) ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Sprememba zmanjšanja števila trombocitov v WB je bila skoraj značilna (s 310 ± 73 na 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06), čeprav je imel PRP bistveno večje povprečne razlike v zmanjšanju števila trombocitov in povečanju MPV.in povečanje MPV je bilo znatno.(od 10,1 ± 0,5 do 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (od 10,1 ± 0,5 do 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Da bi opazili pomembno spremembo MPV, je bila potrebna končna koncentracija 20 % glukoze, vendar je bila sprememba MPV bolj izrazita pri končni koncentraciji 25 %.Izguba trombocitov se je po začetnem zmanjšanju stabilizirala.Opazili smo začetno močno zmanjšanje CVR, vendar se je CVR hitro obnovil pri 25-odstotni končni koncentraciji glukoze, kar je bilo znatno višje od ravni CVR, opaženih pri končnih koncentracijah glukoze 20 % in 15 % (slika 3 in levo od tabele 3; zasenčena polja).navedite p-vrednosti ​​≤ alfa z Bonferronijevim popravkom 0,01).Prišlo je tudi do začetnega močnega padca števila PLT, opaženega v začetni fazi 0-15 s, nato pa je ostalo stabilno (od 15 s do 30 min; levo od tabele 4).
Dodajanje različnih koncentracij glukoze polni krvi je povzročilo začetno hitro zmanjšanje MPV, ki mu je sledilo od koncentracije odvisno okrevanje za več kot 20 %.Legenda prikazuje koncentracijo glukoze po redčenju.D15, D20 in D25 so bili izvedeni v razredčitvi 1:1.D21 in D41 sta bila izvedena v razredčitvi 1:5.
Tabela 4 prikazuje spremembo števila trombocitov pri razredčenju v hipertonični glukozi.Opazili smo od odmerka odvisno razmerje med takojšnjim padcem števila PLT pri razredčitvi 1:1 in pri razredčitvi 1:5.Če primerjamo razredčitve 1:1 kot posamezno skupino z razredčinami 1:5, je imela skupina 1:1 takojšnje zmanjšanje števila trombocitov manj kot skupina 1:5 66 ± 48.000 (23 %) v primerjavi z 99 ± 69.000 (37 %)., p = 0,014) v skupini 1:5.Po začetnem padcu na prvi merilni točki se je število trombocitov kot odstotek glukoze stabiliziralo (slika 4).
Ko glukozi dodamo polno kri v razmerju 1:1, se število trombocitov zmanjša za približno 25 %.Ko pa smo dodali polno kri v razmerju 1:5, je bilo zmanjšanje veliko večje – približno 50 %.
41 % glukoze je povečalo MPV hitreje in bolj dramatično kot 25 % ali 21 %.Rezultati MPV so prikazani na sliki 3. Pri vseh drugih razredčitvah po dodatku 50 % glukoze niso opazili takojšnjega začetnega zmanjšanja MPV.Pri uporabi 25 % glukoze (koncentracija glukoze 20,8 % pri končni razredčitvi) je bila sprememba MPV primerljiva s spremembo v 20 % glukozi pri razredčitvi 1:1 (slika 3).Čeprav so bile spremembe v MPV na začetku večje pri 41 % mešani koncentraciji kot pri 25 %, razlika v MPV med 41 % in 25 % po 16 minutah ni bila več pomembna (tabela 3, desno).Zanimivo je tudi, da je 25 % glukoze povečalo MPV učinkoviteje kot 20,8 %.
Ta študija in vitro je delno potrdila našo hipotezo. Pokazal je potencialno delno lizo trombocitov z dodatkom dekstroze, hitro akomodacijo trombocitov do ekstremne hipertoničnosti in znatno povečanje MPV kot odgovor na > 25-odstotne koncentracije hipertonične dekstroze. Pokazal je potencialno delno lizo trombocitov z dodatkom dekstroze, hitro akomodacijo trombocitov do ekstremne hipertoničnosti in znatno povečanje MPV kot odgovor na > 25-odstotne koncentracije hipertonične dekstroze. On je pokazal potencialno delno lizijo trombocitov v obliki dekstroze, hitro akomodacijo trombocitov do ekstremnega hipertonusa in znatno povečanje MPV v odgovoru na hipertonično koncentracijo dekstroze > 25%. Pokazal je potencialno delno lizo trombocitov z dekstrozo, hitro akomodacijo trombocitov do ekstremne hipertoničnosti in znatno povečanje MPV kot odgovor na hipertonične ravni dekstroze > 25 %.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> 25 % 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 极端 高渗 ， 以及 响应> 25 % 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Prikazuje potencialno delno lizo trombocitov v mešanici z glukozo, hitro prilagoditev trombocitov k ekstremnemu hipertonusu in znatno povečanje MPV v odgovoru na koncentracijo hipertonične glukoze > 25 %. Prikazuje potencialno delno lizo trombocitov z mešanicami glukoze, hitro prilagoditev trombocitov na ekstremno hipertoničnost in znatno povečanje MPV kot odziv na hipertonično glukozo >25 %.Začetno povečanje je bilo največje pri 41,6 % izpostavljenosti glukozi, vendar se je povečanje MPV približalo 25 % izpostavljenosti glukozi približno 20 minut po izpostavitvi.
Na koncentracijo trombocitov vpliva glukoza.Opazili smo, da se je količina PLT zmanjšala pri vseh razredčitvah glukoze.Močan padec števila trombocitov v razredčitvah H2O (0 %) serije PRP je lahko povezan z osmotsko lizo.Druga možnost je, da je to lahko artefakt, ki ga povzroči strjevanje trombocitov, vendar je to v nasprotju s pomanjkanjem spremembe MPV pri tej razredčitvi.Ta ugotovitev pomeni, da so nekateri trombociti zelo občutljivi na hipoosmolarnost.
Pri vseh razredčitvah glukoze 1:1 se je količina PLT zmanjšala za 20-30 %, celo za D5W (hipotonično pri 252 mOsm), kar lahko kaže na specifičen neosmotski učinek glukoze, saj sta tako PLT kot MPV pri trikratnem povečanju koncentracije ostala nespremenjena.glukoza.od D5W do D25W.Pravzaprav so se koncentracije PLT rahlo povečale z naraščajočo osmolarnostjo.
Zmanjšanje PLT med razredčinama 1:1 in 1:5 pomeni, da je učinek raztapljanja odvisen od začetne in končne koncentracije glukoze.Če bi bilo odvisno le od začetne koncentracije, bi pričakovali razliko v zmanjšanju PLT med koncentracijami 1:1.Ampak mi ne.Če je učinek lize odvisen samo od končne koncentracije glukoze, potem ne pričakujemo velike razlike med 20% razredčino 1:1 in 20,8% razredčino 1:5.Pa vendar nam je uspelo.
Če pride do izgube trombocitov zaradi lize trombocitov, nastane delni lizat, po katerem se citokini in rastni faktorji sprostijo v zunajcelično okolje.Več študij je pokazalo, da je lizat trombocitov kot raztopina za proliferacijo skoraj tako učinkovit kot PRP [11].Sam PRP se je izkazal za učinkovito rešitev za zdravljenje proliferacije [12-14].
Neaktivni trombociti krožijo v obliki diska, okrepljenega z več notranjimi strukturami.Med aktivacijo prevzamejo bolj sferično ali amebo obliko, kar povzroči povečanje volumna.Povečanje volumna zahteva povečanje površine, kar je posledica ekstruzije odprtega tubulnega sistema (OCS) in dodajanja eksocitnih granul na membrano.Treba je še ugotoviti, ali povečanje MPV, ki ga povzroči hipertonična glukoza, vključuje enega ali oba od teh mehanizmov, če pa slednji, bi povečanje MPV kazalo na degranulacijo.
Ta študija je pokazala, da je izpostavljenost visokim koncentracijam glukoze na PRP ali trombocitih v polni krvi povzročila povečanje MPV v 15 minutah s koncentracijo glukoze 25 % oziroma 41,6 %.
Povečanje MPV trombocitov je lahko posledica dilatacije okoliških zapletov mikrotubulov kot odgovor na dotok kalcija.Liu et al.Dokazano je, da glukoza posreduje pri dotoku kalcija skozi trombocitni kanal TRPC6 [6].Naša hipoteza je, da glukoza inducira sprostitev zapletov mikrotubulov, kar vodi do povečanja MPV in preobčutljivosti in/ali aktivacije trombocitov.A sodeč po naših rezultatih je to le del zgodbe.V naših testih nobena koncentracija pod D25W ni povzročila povečanja MPV.Glede na to, da nismo testirali izpostavljenosti koncentracijam glukoze med 12,5 % in 25 %, naši rezultati 1. faze kažejo, da lahko v tem razponu koncentracij glukoze obstaja prag, ki vodi do povečanja MPV.Nadaljnje testiranje v stopnjah 3 in 4 je pokazalo, da se zdi, da je prag za to 20-25 % glukoze, vendar ostaja nejasno, zakaj.
Opazili smo tudi ~9-odstotno zmanjšanje MPV po centrifugiranju.Ni jasno, ali je to zmanjšanje MPV posledica večjih in gostejših trombocitov, ujetih v plast RBC centrifuge.Ta ugotovitev je lahko pomembna za klinike, saj lahko pomeni, da so trombociti PRP manjša in manj gosta podskupina trombocitov WB.
V prejšnji študiji smo pokazali, da je priprava PRP z ročnimi metodami poceni [8].Če glukoza senzibilizira tkivne trombocite ali PRP, zaradi česar so bolj dovzetni za aktivacijo, ali če se PRP proizvaja z delnimi lastnostmi lizata, lahko to izboljša regeneracijo in zmanjša potrebo po terapiji.Zato je lahko kombinacija PRP in visoko koncentrirane glukoze stroškovno učinkovitejša kot samo PRP ali glukoza.
Naša študija ima več pomanjkljivosti.Najprej uporabimo PRP, pridobljen z več različnimi metodami.To lahko vodi do nasprotujočih si rezultatov.Drugič, nismo mogli izvesti biokemične analize nobenega od naših vzorcev, da bi natančneje ugotovili, ali je prišlo do aktivacije trombocitov.Radi bi izmerili P-selektin, trombocitni faktor 4, monocitne trombocitne agregate ali druge označevalce aktivacije trombocitov, da bi bolje razumeli stopnjo ali prisotnost degranulacije zrnc alfa, vendar to presega obseg te študije.Tretjič, z elektronsko mikroskopijo ali drugimi metodami nismo mogli potrditi, da je bilo povečanje MPV v trombocitih, izpostavljenih glukozi, posledica učinka na zaplete mikrotubulov.
Mešanice WB ali PRP s 25 % glukoze so povečale MPV, kar je signaliziralo začetek aktivacije trombocitov, čeprav ta študija ni pokazala napredovanja agregacije ali degranulacije.Hipertonična zmes glukoze je povzročila izgubo trombocitov, kar verjetno predstavlja litični učinek.Delna aktivacija ali liza trombocitov lahko povzroči regeneracijo tkiva po injiciranju trombocitov.Ni jasno, kakšne klinične posledice lahko povzročijo te spremembe.Nadaljnje študije so pokazale natančnejše meritve aktivacije ali lize in ovrednotile različne klinične učinke hipertoničnih mešanic glukoze z WB ali PRP.
Proliferativna terapija z glukozo je preprosta in poceni regenerativna terapija, ki se hitro širi in podpira klinične raziskave.Ta študija nakazuje fiziološki mehanizem, ki bi nam, če bi bil potrjen, lahko pomagal razumeti del regenerativnega mehanizma proliferativne terapije.
Biomedicinska in zdravstvena informatika na Univerzi Missouri, Kansas City School of Medicine, Kansas City, ZDA
Človeški subjekti: Vsi udeleženci v tej študiji so dali ali niso dali soglasja.Mednarodno združenje za celično medicino je izdalo odobritev ICMS-2017-003.Naslednji protokol je odobril za nadaljnjo uporabo Institucionalni revizijski odbor Mednarodnega združenja za celično medicino: Naslov: Izračun izkoristka zdravila v plazmi, bogati s trombociti, na podlagi izhodiščnega števila trombocitov CBC.Preiskovanci na živalih: Vsi avtorji so potrdili, da v to študijo niso bile vključene živali ali tkiva.Navzkrižje interesov: V skladu z enotnim obrazcem za razkritje ICMJE vsi avtorji izjavljajo naslednje: Podatki o plačilu/storitvah: Vsi avtorji izjavljajo, da za predloženo delo niso prejeli finančne podpore od nobene organizacije.Finančni odnosi: Vsi avtorji izjavljajo, da trenutno ali v zadnjih treh letih nimajo finančnih odnosov z nobeno organizacijo, ki bi se lahko zanimala za predloženo delo.Druga razmerja: Vsi avtorji izjavljajo, da ni nobenih drugih razmerij ali dejavnosti, ki bi lahko vplivale na predloženo delo.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al.(17. maj 2022) Vpliv glukoze na število in volumen trombocitov: posledice za regenerativno medicino.Zdravilo 14(5): e25081.doi:10.7759/cureus.25081
© Copyright 2022 Harrison et al.To je članek z odprtim dostopom, ki se distribuira pod pogoji licence Creative Commons Attribution License CC-BY 4.0.Dovoljena je neomejena uporaba, distribucija in reprodukcija v katerem koli mediju, če sta navedena izvirni avtor in vir.