"Nikoli ne dvomite, da lahko majhna skupina premišljenih, predanih državljanov spremeni svet. Pravzaprav je edina, ki obstaja."
Cureusovo poslanstvo je spremeniti dolgoletni model medicinskega objavljanja, v katerem je lahko oddaja raziskav draga, zapletena in dolgotrajna.
Plazma, bogata s trombociti/prp, regeneracija tkiva, aktivacija trombocitov, glukozno proliferativna terapija, trombociti, proliferativna terapija
Citirajte ta članek kot: Harrison TE, Bowler J, Reeves K in sod. (17. maj 2022) Vpliv glukoze na število in volumen trombocitov: posledice za regenerativno medicino. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
Plazma, bogata s trombociti (PRP), in hipertonične raztopine glukoze se v regenerativni medicini pogosto uporabljajo za injiciranje, včasih skupaj. Učinek hipertonične glukoze na lizo in aktivacijo trombocitov še ni bil opisan. Preizkusili smo učinek povišanih koncentracij glukoze na število trombocitov in eritrocitov ter na volumen celic v PRP in polni krvi (WB). Pri vseh mešanicah glukoze, pomešanih s PRP ali polno krvjo, je prišlo do hitrega delnega zmanjšanja števila trombocitov, kar je skladno z delno lizo. Po prvi minuti je število trombocitov ostalo stabilno, kar kaže na hitro akomodacijo preostalih trombocitov do ekstremne (> 2000 mOsm) hipertoničnosti. Po prvi minuti je število trombocitov ostalo stabilno, kar kaže na hitro akomodacijo preostalih trombocitov do ekstremne (> 2000 mOsm) hipertoničnosti. Po prvih minutah je število trombocitov ostalo stabilno, kar kaže na hitro akomodacijo končnih trombocitov do ekstremnega (> 2000 mOsm) hipertonusa. Po prvi minuti je število trombocitov ostalo stabilno, kar kaže na hitro prilagoditev preostalih trombocitov ekstremni (> 2000 mOsm) hipertoničnosti.第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm）高渗状态。2000 mOsm）高渗状态。 Po prvih minutah je število trombocitov ostalo stabilno, kar kaže na hitro prilagoditev končnih trombocitov k ekstremnemu (>2000 mOsm) hiperosmolarnemu stanju. Po prvi minuti je število trombocitov ostalo stabilno, kar kaže na hitro prilagoditev preostalih trombocitov ekstremnemu (>2000 mOsm) hiperosmolarnemu stanju.Koncentracije glukoze 25 % in več so povzročile znatno povečanje povprečnega volumna trombocitov (MPV), kar kaže na zgodnjo fazo aktivacije trombocitov. Potrebne so nadaljnje študije, da bi ugotovili, ali pride do lize ali aktivacije trombocitov in ali lahko hipertonična injekcija glukoze sama ali v kombinaciji s PRP prinese dodatno klinično korist.
V petdesetih letih prejšnjega stoletja je ameriški kirurg George Hackett odkril, da lahko pri mnogih bolnikih trajno lajša bolečine v sklepih in hrbtu z injiciranjem proliferativne raztopine v kite in vezi. Njegovi poskusi na kuncih so pokazali, da zdravljenje, ki ga je imenoval proliferativna terapija, povzroči povečanje in krepitev kit. Histološke študije so potrdile, da se med tem postopkom proizvaja nov kolagen [1].
V prvih nekaj desetletjih so preizkusili številne različne rešitve za distribucijo. Do devetdesetih let prejšnjega stoletja je večina zdravnikov menila, da so visoke koncentracije glukoze najvarnejša in najučinkovitejša metoda. Vendar mehanizem delovanja ostaja nejasen.
V 20. stoletju je bilo po Hackettovem delu izvedenih le malo kliničnih študij. Vendar pa se je v 2000-ih letih zanimanje ponovno pojavilo in izvedenih je bilo več uspešnih kliničnih preskušanj proliferativne terapije za zdravljenje bolečin v križu [2], osteoartritisa kolena [3] in lateralnega epikondilitisa [4].
Regeneracija tkiv zahteva sodelovanje matičnih celic. Zato morajo visoke koncentracije glukoze nekako sprožiti migracijo, replikacijo in diferenciacijo matičnih celic. Domnevamo, da lahko trombociti delujejo kot prenašalci informacij in da lahko visoke koncentracije glukoze povzročijo sproščanje citokinov in rastnih faktorjev s strani trombocitov, s čimer spodbujajo regenerativne procese, zlasti migracijo matičnih celic na območja z visokimi koncentracijami glukoze.
Aktivacija trombocitov vedno predhodi povečanju znotrajceličnega kalcija [5]. Liu in sodelavci so leta 2008 pokazali, da visoke ravni glukoze povečajo aktivnost kanalov TRPC6 (tranzient receptor potent canonical type 6) v plazemski membrani, kar vodi do pritoka kalcijevih ionov v trombocite [6]. Druga študija je pokazala, da izpostavljenost marginalne cone mikrotubulov kalcijevim ionom povzroči sprostitev, ekspanzijo in deformacijo marginalne cone, kar posledično povzroči spremembo oblike iz diskaste v okroglo, kar povzroči povprečni volumen trombocitov (MPV) [7].
Naša hipoteza v tej študiji je, da izpostavljenost trombocitov visokim koncentracijam glukoze vpliva na marginalno cono mikrotubulov in znotrajcelično okolje, kar vodi do povečanja MPV.
Vsi udeleženci so podpisali obrazec za informirano soglasje, potem ko so jim bile pojasnjene podrobnosti študije in pred prejemom vzorcev. V tej študiji so bili uporabljeni le vzorci PRP s hematokritom, večjim od 2 %, da bi lahko za primerjavo vključili število eritrocitov in povprečni volumen rdečih krvničk (MCV).
Študija je bila izvedena v štirih fazah, prva faza je bila PRP, preostale faze pa polna kri (tabela 1). Kot je bilo opisano že prej [8], so bile vse relativne centrifugalne sile (RCF, g-sila) izračunane iz srednje točke (Rmid, v cm) krvnega stolpca v centrifugalni brizgi. Odločili smo se za uporabo MPV kot označevalca senzibilizacije trombocitov in števila trombocitov kot indikatorja potencialne lize trombocitov, ki ju je mogoče enostavno izmeriti na standardnih hematoloških analizatorjih.
V prvi fazi je 47 prostovoljcev darovalo vzorce krvi – eno epruveto z etilendiamintetraocetno kislino (EDTA) in en vzorec polne krvi PRP (antikoagulirane z natrijevim citratom (NaCl, 3 %)) (tabela 1). Zibalko takoj namestite v epruveto. Popolna krvna slika (KKS) je bila opravljena na vzorcih EDTA v treh izvodih, vzorci NaCl pa so bili analizirani v treh izvodih za analizo KKS, nato pa je bil PRP pripravljen z različnimi zgoraj opisanimi metodami [8]. Vsi vzorci PRP so bili pripravljeni s centrifugiranjem pri 900–1000 g. Vsak vzorec PRP mešajte na vrtinčnem mešalniku 5–10 sekund, nato pa razdelite pet 0,5 ml alikvotov v epruvete.
Za oceno učinka izpostavljenosti trombocitom na povišane koncentracije glukoze smo z vzorci trombocitov zmešali enake količine (0,5 ml) 0 %, 5 %, 12,5 %, 25 % in 50 % glukoze v vodi, da smo dobili 0 %, 2,5 %, 6,25 %, 12,5 % ​​in 25 % koncentracije glukozne mešanice, in epruvete mešali na stresalniku za epruvete 15 minut. TAC vsake mešanice smo po 15 minutah analizirali v treh ponovitvah. Za vsako epruveto smo izračunali povprečje števila trombocitov (PLT), števila eritrocitov, MCV in MPV, za vse vzorce PRP pa smo izračunali povprečno število trombocitov, števila eritrocitov, MCV in MPV.
Po zaključku prve faze zbiranja podatkov smo po dodatku D50W opazili znatno povečanje volumna trombocitov v trombocitih PRP. Trombociti PRP ne predstavljajo nujno vseh trombocitov v krvi, gojišče PRP pa se razlikuje od gojišča WB. Zato smo se odločili za izvedbo druge faze preskušanja učinka dodajanja D50W polni krvi.
Za drugi krog smo na podlagi rezultatov prve serije izbrali velikost vzorca 30, kot je opisano v poglavju Analiza. V tej seriji je 20 prostovoljcev darovalo vzorce krvi (tabela 1). Polno kri (1,8 ml) smo odvzeli v 3 ml brizgo in jo antikoagulirali z 0,2 ml 40 % NaCl. Kri v brizgi smo mešali pet sekund z vrtinčnim mešalnikom, celotno krvno sliko pa smo analizirali v treh ponovitvah. Po analizi smo antikoagulirano kri dodali 2 ml 50 % glukoze v 5 ml brizgi (končna koncentracija glukoze je bila približno 25 % (D25)) in jo za 30 minut postavili v stresalno epruveto. Po 30 minutah smo analizirali D25/polno krvno sliko v brizgah z epruveto v treh ponovitvah. Izračunali smo povprečje števila trombocitov, števila eritrocitov, MCV in MPV na brizgo, za vsak vzorec pred in po dodajanju glukoze pa smo izračunali povprečne vrednosti PLT, števila eritrocitov, MCV in MPV.
Ker so trombociti v polni krvi med proliferativno glukozno terapijo zaradi minimalno invazivnega injiciranja pogosto izpostavljeni hipertonični glukozi in ker ni običajno kombinirati PRP s hipertonično glukozo tik pred injiciranjem, smo se odločili, da bomo v 1. poglavju, tretji in četrti korak, preučevali hipertonično glukozo v kombinaciji z WB. V vsaki fazi je 20 prostovoljcev darovalo 7–8 ml ACD-A (kislina, ki vsebuje trinatrijev citrat (22,0 g/l), citronsko kislino (8,0 g/l) in glukozo (24,5 g/l), raztopina dekstroznega citrata) za krvne antikoagulante (tabela 1). Za določitev praga, povezanega s povečanjem MPV, so bile uporabljene le mešanice glukoze z več kot 12,5 %. V tretji fazi se v epruveto da 1 ml krvi. Nato kri mešajte na vrtinčnem mešalniku 10 sekund tako, da v epruveto dodate 1 ml 30 % glukoze, 40 % glukoze ali 50 % glukoze, da dobite končno koncentracijo glukoze 15 %, 20 % oziroma 25 %. Vzorce glukoze v krvi analizirajte na kompletno krvno sliko takoj po mešanju in nato ponavljajte vsaki dve minuti 30 minut.
Med začetnim mešanjem dodatek hipertonične glukoze in WB ali PRP v razmerju 1:1 izpostavi trombocite koncentracijam nad 25 % za nekaj sekund. V četrtem koraku smo za oceno učinka hipertonične glukoze z minimalnimi začetnimi vršnimi koncentracijami in preizkus zgornje meje učinka glukoze v D25W ali D50W dodali le majhno količino krvi. V epruveto damo 1 ml D25W ali D50W in med mešanjem vzorca 10 sekund mešamo v vrtinčniku dodamo 0,2 ml WB. V teh primerih je bila kri izpostavljena glukozi v koncentraciji približno 20 % nad končno koncentracijo in ne 50 % nad končno koncentracijo kot v 3. fazi, kar je povzročilo končni koncentraciji glukoze 20,8 % in 41,6 %. Mešani vzorci so bili analizirani v istem časovnem intervalu kot v 3. koraku.
V prvem koraku vsake serije redčenja glukoze je bilo odvzetih 30 vzorcev, saj je bila to ustrezna velikost vzorca za pilotno študijo [9]. Na koncu vsake faze (vključno s prvo fazo) ocenite ustreznost velikosti vzorca z uporabo formule, ki se uporablja za določitev velikosti vzorca, potrebne za oceno povprečja zvezne spremenljivke izida v eni populaciji. Formula n = Z2 x SD2 /E2. V tej enačbi je Z Z-vrednost, SD je standardni odklon in E je želena napaka [10]. Naša alfa je 0,05, kar ustreza vrednosti Z 1,96, in pričakujemo napako 5 (v odstotkih). Zato rešimo za n = (1,962 x SD2)/52. Rezultati so pokazali, da je bila velikost vzorca, potrebna za vsako fazo, manjša od dejansko zbranega števila.
V obdobjih 1, 3 in 4 z uporabo več kot ene koncentracije glukoze je bil učinek različnih koncentracij glukoze analiziran s primerjavo frakcijske spremembe med časom 0 in vsakim naslednjim časom (faza 1 pri 15 minutah, obdobje 3 pri 15 minutah) in štirimi pri 15 sekundah, nato vsaki dve minuti. Stopnje sprememb za vsako časovno obdobje so bile primerjane z Mann-Whitneyjevim U-testom, ker podatki niso sledili normalni porazdelitvi, kot je bila določena s Shapiro-Wilkovim testom normalnosti. Ker je bila v prvem, tretjem in četrtem koraku (skupaj pet) izvedena analiza 1 proti 1 več skupin (pet), je bila izvedena Bonferronijeva korekcija za prilagoditev želene vrednosti alfa na ≤0,01, vendar ne ≤0,05.
Zmanjšanje števila trombocitov pri vseh koncentracijah hipertonične dekstroze in povečanje MPV v trombocitih PRP pri koncentraciji dekstroze > 12,5 %: število trombocitov PRP se je povečalo od enkratne do petkratne koncentracije v primerjavi z izhodiščno polno krvjo, odvisno od metode (ni prikazano). Zmanjšanje števila trombocitov pri vseh koncentracijah hipertonične dekstroze in povečanje MPV v trombocitih PRP pri koncentraciji dekstroze > 12,5 %: število trombocitov PRP se je povečalo od enkratne do petkratne koncentracije v primerjavi z izhodiščno polno krvjo, odvisno od metode (ni prikazano). Vrednost števila trombocitov pri vseh koncentracijah hipertonične dekstroze in povečanje MPV v trombocitih PRP pri koncentraciji dekstroze > 12,5%: število trombocitov PRP se je povečalo za 1-5 krat v primerjavi z izhodno celično krvjo, odvisno od metode (ni prikazano). Zmanjšano število trombocitov pri vseh hipertoničnih koncentracijah dekstroze in povečan MPV v trombocitih PRP pri koncentraciji dekstroze > 12,5 %: število trombocitov PRP se je povečalo od 1 do 5-krat v primerjavi z izhodiščno polno krvjo, odvisno od metode (ni prikazano). ).在> 12,5 % 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，PRP 血小板中MPV增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法而异（未描述）。 Pri koncentraciji glukoze > 12,5 % visoka koncentracija glukoze zmanjša krvno sliko, MPV krvi po PRP pa se poveča: v primerjavi z zdravilom 与基线全血 se krvna slika po PRP poveča od 1- do 5-krat v primerjavi s koncentracijo (ni opisano). Pri koncentraciji glukoze >12,5% je vsa koncentracija hipertonične glukoze zmanjšala število trombocitov, a MPV se je povečalo v trombocitih PRP: število trombocitov PRP se je povečalo od 1- do 5-kratnih koncentracij v primerjavi z izhodiščno koncentracijo celične krvi, odvisno od metode (ni opisano). Pri koncentracijah glukoze > 12,5 % so vse hipertenzivne koncentracije glukoze zmanjšale število trombocitov in povečale MPV v trombocitih, izpostavljenih PRP: število trombocitov v PRP se je povečalo za 1- do 5-krat v primerjavi z izhodiščnimi koncentracijami v polni krvi, odvisno od metode (kot je opisano).Slika 1 kaže, da se je število trombocitov po redčenju v vodi zmanjšalo za skoraj 75 % in po 15 minutah redčenja z različnimi koncentracijami glukoze za 20–30 % v primerjavi z izhodiščno PRP in redčenjem 1:1, prilagojenim volumnu (1-k1 s korekcijo volumna). k -1 vzreja).1 vzreja).
Število celic v vsaki razredčitvi je izraženo kot delež prvotnega števila pred razredčitvijo.
MPV se je med proizvodnjo PRP minimalno zmanjšal, brez nadaljnje spremembe koncentracij redčenja na 12,5 % v vodi ali glukozi (vključno s 25 % mešanicami PRP z glukozo) in se po redčenju v 50 % raztopini glukoze povečal za več kot 20 % (slika 2). Nasprotno pa se volumen eritrocitov pri nobenem drugem redčenju, razen s H2O, ni bistveno spremenil.
Povprečni volumen celic v vsaki razredčitvi je izražen kot odstotek prvotnega volumna pred razredčitvijo.
Podobno, vendar manj izrazito zmanjšanje števila trombocitov in povečanje CVR so opazili pri BC, izpostavljeni 50 % glukozi (za formulacijo s 25 % glukoze). Tabela 2 primerja število in volumen celic v polni krvi, razredčeni s 50 % dekstrozo, s podatki PRP faze 1, razredčenimi s 50 % dekstrozo. Spremembe števila eritrocitov in MCV eritrocitov niso bile očitne in niso bile v središču naše pozornosti.
SD = standardni odklon, MD = povprečna razlika med skupinama, SE = standardni odklon povprečne razlike, RBC = eritrociti, PLT = trombociti, PRP = plazma, bogata s trombociti, WB = polna kri
Po dodatku D50W k WB je bila odstotna izguba trombocitov, prilagojena redčenju, 7,7 % (310 ± 73 v primerjavi z 286 ± 96) v primerjavi s 17,8 % pri redčenju PRP v D50W (664 ± 348 v primerjavi s 544 ± 277). MPV WB se je povečal za 16,8 % (z 10,1 ± 0,5 na 11,8 ± 0,6), medtem ko se je MPV PRP povečal za 26 % (9,2 ± 0,8 v primerjavi z 11,6 ± 0,7). Čeprav so bile povprečne razlike v zmanjšanju števila trombocitov in povečanju MPV bistveno večje pri PRP, so bile spremembe v zmanjšanju števila trombocitov znotraj WB skoraj statistično značilne (310 ± 73 na 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06), povečanje MPV pa je bilo statistično značilno (10,1 ± 0,5 na 11,8 ± 0,6 (+16,8), p < 0,001). Čeprav so bile povprečne razlike v zmanjšanju števila trombocitov in povečanju MPV bistveno večje pri PRP, so bile spremembe v zmanjšanju števila trombocitov znotraj WB skoraj statistično značilne (310 ± 73 na 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06), povečanje MPV pa je bilo statistično značilno (10,1 ± 0,5 na 11,8 ± 0,6 (+16,8), p < 0,001).Čeprav so bile povprečne razlike v zmanjšanju števila trombocitov in povečanju CVR bistveno večje pri PRP, so bile spremembe v zmanjšanju števila trombocitov znotraj WB skoraj statistično značilne (310 ± 73 do 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06).povečanje MPV je bilo pomembno (od 10,1 ± 0,5 do 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Povečanje MPV je bilo statistično značilno (z 10,1 ± 0,5 na 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB内血小板计数减少的变化几乎是显着的＄(310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7 %)；p = .06）和MPV的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 但 内血小板 计数减少 的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7 %) ； p = .06）和MPV 的增加是显着的＄(10,1) ± 0,5 ± 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Sprememba zmanjšanja števila trombocitov znotraj SB je bila skoraj statistično značilna (s 310 ± 73 na 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06), čeprav je imela PRP statistično značilno večje povprečne razlike v zmanjšanju števila trombocitov in povečanju MPV, povečanje MPV pa je bilo statistično značilno.(od 10,1 ± 0,5 do 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (od 10,1 ± 0,5 do 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Za znatno spremembo MPV je bila potrebna končna koncentracija glukoze 20 %, vendar je bila sprememba MPV bolj izrazita pri končni koncentraciji 25 %. Izguba trombocitov se je po začetnem upadu stabilizirala. Opazili smo začetni močan upad CVR, vendar se je CVR hitro obnovil pri končni koncentraciji glukoze 25 %, kar je bilo bistveno višje od ravni CVR, opaženih pri končnih koncentracijah glukoze 20 % in 15 % (slika 3 in levo od tabele 3; osenčeni okvirji). Označujejo p-vrednosti ≤ alfa z Bonferronijevo korekcijo 0,01). Prav tako je prišlo do začetnega močnega upada števila PLT, opaženega v začetni fazi 0–15 s, nato pa je ostalo stabilno (od 15 s do 30 min; levo od tabele 4).
Dodatek različnih koncentracij glukoze polni krvi je povzročil začetno hitro zmanjšanje MPV, ki mu je sledilo od koncentracije odvisno okrevanje za več kot 20 %. Legenda prikazuje koncentracijo glukoze po redčenju. D15, D20 in D25 so bili izvedeni v razredčitvi 1:1. D21 in D41 sta bila izvedena v razredčitvi 1:5.
Tabela 4 prikazuje spremembo števila trombocitov pri razredčitvi s hipertonično glukozo. Opazili smo od odmerka odvisno razmerje med takojšnjim padcem števila PLT pri razredčitvi 1:1 in pri razredčitvi 1:5. Če primerjamo razredčitve 1:1 kot eno samo skupino z razredčitvami 1:5, je skupina 1:1 imela takojšnje zmanjšanje števila trombocitov manjše kot skupina 1:5, 66 ± 48.000 (23 %) v primerjavi z 99 ± 69.000 (37 %), p = 0,014) v skupini 1:5. Po začetnem padcu na prvi merilni točki se je število trombocitov kot odstotek glukoze stabiliziralo (slika 4).
Ko se polna kri doda glukozi v razmerju 1:1, se število trombocitov zmanjša za približno 25 %. Ko pa se polna kri doda v razmerju 1:5, je bilo zmanjšanje veliko večje – približno 50 %.
Rezultati 41-odstotne glukoze so povečali MPV hitreje in bolj dramatično kot rezultati 25-odstotne ali 21-odstotne MPV, ki so prikazani na sliki 3. Pri vseh drugih razredčitvah ni bilo opaziti takojšnjega začetnega zmanjšanja MPV po dodatku 50-odstotne glukoze. Pri uporabi 25-odstotne glukoze (koncentracija glukoze 20,8 % pri končni razredčitvi) je bila sprememba MPV primerljiva s spremembo 20-odstotne glukoze pri razredčitvi 1:1 (slika 3). Čeprav so bile spremembe MPV sprva večje pri 41-odstotni mešani koncentraciji kot pri 25 %, razlika v MPV med 41 % in 25 % po 16 minutah ni bila več pomembna (tabela 3, desno). Zanimivo je tudi, da je 25-odstotna glukoza povečala MPV učinkoviteje kot 20,8 %.
Ta in vitro študija je delno potrdila našo hipotezo. Pokazala je potencialno delno lizo trombocitov z dodatkom dekstroze, hitro prilagoditev trombocitov ekstremni hipertoničnosti in znatno zvišanje MPV kot odziv na > 25 % koncentracije hipertonične dekstroze. Pokazala je potencialno delno lizo trombocitov z dodatkom dekstroze, hitro prilagoditev trombocitov ekstremni hipertoničnosti in znatno zvišanje MPV kot odziv na > 25 % koncentracije hipertonične dekstroze. On je pokazal potencialno delno lizijo trombocitov v obliki dekstroze, hitro akomodacijo trombocitov do ekstremnega hipertonusa in znatno povečanje MPV v odgovoru na hipertonično koncentracijo dekstroze > 25%. Pokazala je potencialno delno lizo trombocitov z dekstrozo, hitro akomodacijo trombocitov do ekstremne hipertoničnosti in znatno povečanje MPV kot odziv na hipertonične ravni dekstroze > 25 %.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> 25 % 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 极端 高渗 ， 以及响应> 25 % 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Prikazuje potencialno delno lizo trombocitov v mešanici z glukozo, hitro prilagoditev trombocitov k ekstremnemu hipertonusu in znatno povečanje MPV v odgovoru na koncentracijo hipertonične glukoze > 25 %. Kaže potencialno delno lizo trombocitov z glukoznimi mešanicami, hitro prilagoditev trombocitov ekstremni hipertoničnosti in znatno povečanje MPV kot odziv na hipertonično glukozo > 25 %.Začetno povečanje je bilo največje pri 41,6 % izpostavljenosti glukozi, vendar se je povečanje MPV približalo 25 % izpostavljenosti glukozi približno 20 minut po izpostavljenosti.
Na koncentracijo trombocitov vpliva glukoza. Opazili smo, da se je količina PLT zmanjšala pri vseh razredčitvah glukoze. Močan padec števila trombocitov v razredčitvah H2O (0 %) serije PRP je lahko povezan z osmotsko lizo. Lahko pa je to tudi artefakt, ki ga povzroča zlepljanje trombocitov, vendar je to v nasprotju s pomanjkanjem spremembe MPV pri tej razredčitvi. Ta ugotovitev pomeni, da so nekateri trombociti zelo občutljivi na hipoosmolarnost.
Pri vseh razredčitvah glukoze v razmerju 1:1 se je količina PLT zmanjšala za 20–30 %, celo do D5W (hipotonično pri 252 mOsm), kar lahko kaže na specifičen neosmotski učinek glukoze, saj sta tako PLT kot MPV ostala nespremenjena pri trikratnem povečanju koncentracije glukoze od D5W do D25W. Pravzaprav so se koncentracije PLT z naraščajočo osmolarnostjo rahlo povečevale.
Zmanjšanje PLT med razredčitvami 1:1 in 1:5 pomeni, da je učinek raztapljanja odvisen od začetne in končne koncentracije glukoze. Če bi bil odvisen le od začetne koncentracije, bi pričakovali razliko v zmanjšanju PLT med koncentracijama 1:1. Vendar te razlike ne pričakujemo. Če je učinek lize odvisen le od končne koncentracije glukoze, potem ne pričakujemo velike razlike med 20-odstotno razredčitvijo 1:1 in 20,8-odstotno razredčitvijo 1:5. Pa vendar nam je uspelo.
Če pride do izgube trombocitov zaradi lize trombocitov, se tvori delni lizat, nakar se citokini in rastni faktorji sprostijo v zunajcelično okolje. Več študij je pokazalo, da je lizat trombocitov skoraj tako učinkovit kot PRP kot raztopina za proliferacijo [11]. PRP sam se je izkazal za učinkovito rešitev za zdravljenje proliferacije [12–14].
Neaktivni trombociti krožijo v obliki diska, ojačanega z več notranjimi strukturami. Med aktivacijo dobijo bolj okroglo ali amebno obliko, kar povzroči povečanje volumna. Povečanje volumna zahteva povečanje površine, kar je posledica iztiskanja sistema odprtih tubulov (OCS) in dodajanja eksocitnih granul na membrano. Še vedno ni jasno, ali povečanje MPV, ki ga povzroča hipertonična glukoza, vključuje enega ali oba mehanizma, če pa gre za slednjega, potem povečanje MPV kaže na degranulacijo.
Ta študija je pokazala, da je izpostavljenost visokim koncentracijam glukoze na trombocitih PRP ali polne krvi povzročila povečanje MPV v 15 minutah s koncentracijo glukoze za 25 % oziroma 41,6 %.
Povečanje MPV trombocitov je lahko posledica dilatacije okoliških mikrotubularnih snopov kot odziv na dotok kalcija. Liu in sod. Dokazano je bilo, da glukoza posreduje pri dotoku kalcija skozi kanal TRPC6 trombocitov [6]. Naša hipoteza je, da glukoza povzroči sprostitev mikrotubularnih snopov, kar vodi do povečanja MPV ter senzibilizacije in/ali aktivacije trombocitov. Vendar pa je to, sodeč po naših rezultatih, le del zgodbe. V naših testih nobena koncentracija pod D25W ni povzročila povečanja MPV. Glede na to, da nismo testirali izpostavljenosti koncentracijam glukoze med 12,5 % in 25 %, naši rezultati 1. faze kažejo, da lahko v tem območju koncentracij glukoze obstaja prag, ki vodi do povečanja MPV. Nadaljnje testiranje v 3. in 4. fazi je pokazalo, da se zdi, da je prag za to 20–25 % glukoze, vendar ostaja nejasno, zakaj.
Po centrifugiranju smo opazili tudi ~9-odstotno zmanjšanje MPV. Ni jasno, ali je to zmanjšanje MPV posledica večjih in gostejših trombocitov, ujetih v plasti eritrocitov centrifuge. To opažanje je lahko pomembno za zdravnike, saj lahko pomeni, da so trombociti PRP manjša in manj gosta podskupina trombocitov v celičnem tkivu.
V prejšnji študiji smo pokazali, da je priprava PRP z ročnimi metodami poceni [8]. Če glukoza senzibilizira tkivne trombocite ali PRP, zaradi česar so bolj dovzetni za aktivacijo, ali če je PRP proizveden z delnimi lastnostmi lizata, lahko to pospeši regeneracijo in zmanjša potrebo po terapiji. Zato je lahko kombinacija PRP in visoko koncentrirane glukoze stroškovno učinkovitejša kot PRP ali glukoza sama.
Naša študija ima več pomanjkljivosti. Prvič, uporabljamo PRP, pridobljen z več različnimi metodami. To lahko privede do nasprotujočih si rezultatov. Drugič, nismo mogli izvesti biokemijske analize nobenega od naših vzorcev, da bi natančneje ugotovili, ali je prišlo do aktivacije trombocitov. Radi bi izmerili P-selektin, trombocitni faktor 4, monocitne agregate trombocitov ali druge označevalce aktivacije trombocitov, da bi bolje razumeli stopnjo ali prisotnost degranulacije alfa granul, vendar to presega obseg te študije. Tretjič, z elektronsko mikroskopijo ali drugimi metodami nismo mogli potrditi, da je povečanje MPV v trombocitih, izpostavljenih glukozi, posledica učinka na mikrotubularne vozle.
Mešanice WB ali PRP z 25 % glukoze so povečale MPV, kar je signaliziralo začetek aktivacije trombocitov, čeprav ta študija ni pokazala napredovanja agregacije ali degranulacije. Hipertonična mešanica glukoze je povzročila izgubo trombocitov, kar verjetno predstavlja litični učinek. Delna aktivacija ali liza trombocitov lahko po injiciranju trombocitov povzroči regeneracijo tkiva. Ni jasno, kakšne klinične posledice lahko te spremembe povzročijo. Nadaljnje študije so pokazale natančnejše meritve aktivacije ali lize in ocenile različne klinične učinke hipertoničnih mešanic glukoze z WB ali PRP.
Glukozna proliferativna terapija je preprosta in poceni regenerativna terapija, ki se hitro širi in podpira klinične raziskave. Ta študija nakazuje fiziološki mehanizem, ki bi nam, če bi bil potrjen, lahko pomagal razumeti del regenerativnega mehanizma proliferativne terapije.
Biomedicinska in zdravstvena informatika na Univerzi v Missouriju, Medicinska fakulteta Kansas City, Kansas City, ZDA
Človeški subjekti: Vsi udeleženci v tej študiji so dali ali ne soglasje. Mednarodno združenje za celično medicino je izdalo odobritev ICMS-2017-003. Naslednji protokol je odobril za nadaljnjo uporabo Institucionalni revizijski odbor Mednarodnega združenja za celično medicino: Naslov: Izračun izkoristka zdravila v plazmi, bogati s trombociti, na podlagi izhodiščnega števila trombocitov v splošni krvni preiskavi. Živalski subjekti: Vsi avtorji so potrdili, da v to študijo niso bile vključene nobene živali ali tkiva. Navzkrižje interesov: V skladu z enotnim obrazcem za razkritje ICMJE vsi avtorji izjavljajo naslednje: Podatki o plačilu/storitvi: Vsi avtorji izjavljajo, da za predloženo delo niso prejeli finančne podpore nobene organizacije. Finančna razmerja: Vsi avtorji izjavljajo, da trenutno ali v zadnjih treh letih nimajo finančnih razmerij z nobeno organizacijo, ki bi jo lahko zanimalo predloženo delo. Druga razmerja: Vsi avtorji izjavljajo, da ni drugih razmerij ali dejavnosti, ki bi lahko vplivale na predloženo delo.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al. (17. maj 2022) Vpliv glukoze na število in volumen trombocitov: posledice za regenerativno medicino. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Avtorske pravice 2022 Harrison et al. To je članek z odprtim dostopom, distribuiran pod pogoji licence Creative Commons Attribution CC-BY 4.0. Dovoljena je neomejena uporaba, distribucija in reprodukcija v katerem koli mediju, pod pogojem, da sta naveden izvirni avtor in vir.