Faafetai mo le asiasi i le Nature.com.O le browser version o loʻo e faʻaogaina e faʻatapulaʻaina le lagolago mo le CSS.Mo le poto sili ona lelei, matou te fautuaina e te faʻaogaina se suʻesuʻega faʻafouina (pe tape le tulaga fetaui i Internet Explorer).
O vaega o le silica Porous na saunia e se metotia sol-gel ma nisi o suiga e maua mai ai ni vaega macroporous. O nei vaega na maua mai e ala i le toe faʻaopoopoina o le fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization ma le N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) ma le styrene e saunia ai le N-phenylmaleimide faʻafesoʻotaʻi uʻamea1 (P Naroleimide uʻamea uʻamea1) uʻamea uʻamea1. .8 mm id) sa teuina e slurry packing.Evaluated PMP koluma vavaeesega o se paluga peptide e aofia ai lima peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) ma le chromatosingraphic faʻataʻitaʻiga faʻataʻitaʻiga (leucine enkephalin), faʻataʻitaʻiga o le chromatosingraphic sili ona lelei o le tagata (leucine enkephalin) Theoretical plate numera o le paluga peptide e maualuga e pei o 280,000 ipu / m². Faatusatusa le faatinoga o le tuueseeseina o le koluma atiae ma le koluma pisinisi Ascentis Express RP-Amide, na matauina o le tuueseeseina o le koluma PMP na sili atu i le koluma faapisinisi i tulaga o le vavaeeseina lelei ma le fofo.
I tausaga talu ai nei, o le biopharmaceutical alamanuia ua avea ma faʻalauteleina maketi i le lalolagi atoa ma le tele o le faʻatupulaia o maketi maketi. Faatasi ai ma le faʻateleina o le tuputupu aʻe o le biopharmaceutical industry1,2,3, o le auʻiliʻiliga o peptides ma proteins e matua manaʻomia. vai, tissues ma sela o se galuega sili ona luitauina ona o le tele o ituaiga e ono mafai ona iloa i se faataitaiga e tasi. E ui o le tele o spectrometry o se meafaigaluega aoga mo le peptide ma le porotini sequencing, pe afai o ia faataitaiga e tui i le spectrometer tele i se tasi pasi, o le vavaeeseina o le a le lelei. O lenei faafitauli e mafai ona mitigated e ala i le faatinoina o le chromatography o le sua sua (LC) o le a faʻaitiitia le suʻesuʻeina o le chromatography vai (LC) mita i se taimi tuʻuina4,5,6.E le gata i lea, i le taimi o le vaeluaga o le vai, e mafai ona taulaʻi analytes i itulagi vaapiapi, ma faʻapipiʻi ai nei auʻiliʻiliga ma faʻaleleia le faʻaogaina o le MS.
Fa'aliliuina-vaega vai chromatography (RP-LC) o loʻo faʻaaogaina lautele mo le faʻamamaina ma le vavaeeseina o paluga peptide e faʻaaoga ai le silica octadecyl-modified (ODS) e pei o le tulaga tumau11,12,13. Ae ui i lea, RP tulaga tumau e le maua ai le vavaeeseina faamalieina o peptides ma porotini ona o lo latou fausaga faʻapitoa 14, philore peptide fuafuaina ma le philore tulaga faʻapitoa. auiliili peptides ma polotini faatasi ma polar ma non-polar moieties e fegalegaleai ma taofi nei analytes16. Mixed-mode chromatography, lea e maua ai fegalegaleaiga multimodal, e mafai ona avea ma se isi mea i le RP-LC mo le tuueseeseina o peptides, polotini, ma isi paluga lavelave. Several mixed-mode stationary phases ua saunia ma nei vaega peptide1paratini ua saunia, ma koluma peptide11 ua saunia ma nei vaega11peptide paratini ua saunia, ma koluma packed11paratini ua saunia, ma koluma peptide11 ua saunia ma nei vaega peptide11. 20,21. Mixed-mode tulaga tumau vaega (WAX / RPLC, HILIC / RPLC, polar intercalation / RPLC) e talafeagai mo peptide ma porotini separations ona o le i ai o vaega uma e lua polar ma non-polar vaega22,23,24,25,26,27,28 .Similarly, polar phase intercalvalent sepalent faʻaalia lelei vaega polar faʻatasi ma le polar faʻatasiga faʻapitoa faʻatasi ma le polar faʻatasiga faʻatasi ma le tulaga faʻapitoa faʻatasi ma le polar faʻatasiga faʻapitoa faʻatasi ma le faʻaputuga faʻapitoa faʻatasi ma le polar faʻatasiga faʻatasi ma le polar faʻatasiga faʻapitoa faʻapitoa ma non-polar analytes, aua o le tuueseeseina e faalagolago i le fegalegaleaiga i le va o analyte ma vaega tumau.Fegalegaleaiga tele 29, 30, 31, 32. Talu ai nei, Zhang et al.30 saunia se dodecyl-terminated polyamine tulaga tumau vaega ma manuia vavae hydrocarbons, antidepressants, flavonoids, nucleosides, estrogens, ma le tele o isi analytes.O le polar intercalator e lua vaega polar ma non-polar vaega, o lea e mafai ona faaaoga e tuueseese peptides ma polotini o loo i ai uma hydrophobic ma hydrophilic moieties e lua (Poembedded koluma C. i lalo o le igoa tau fefaʻatauaʻiga Ascentis Express RP-Amide koluma, ae o nei koluma e faʻaaogaina mo le auiliiliga o amine 33 naʻo.
I le suʻesuʻega o loʻo i ai nei, o se vaega faʻapipiʻi faʻapipiʻi polar (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) na saunia ma iloiloina mo le vavaeeseina o peptides ma trypsin digests o le HSA. O le vaega faʻamautu na saunia e faʻaaoga ai le taʻiala o loʻo i lalo. Na saunia mea faʻapipiʻi silica porous e tusa ai ma le faʻagasologa na tuʻuina atu i la tatou lomiga talu ai ma nisi o suiga i le faʻasologa o le vailaʻau o le TMOS, le fua faatatau o le TOS glycol. e saunia vaega silica ma tele pore size.Lona lua, o se ligan fou, phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate, na synthesized ma faaaoga e derivatize vaega silica e saunia ai se polar embedded stationary phase.The taunuuga tulaga tumau na teuina i totonu o se koluma uamea (100 × 1.8 mm id) faʻamautinoa o loʻo faʻaogaina le faʻapipiʻiina o le faʻapipiʻiina o le masini faʻapipiʻi faʻapipiʻi faʻapipiʻi faʻapipiʻiina o loʻo faʻaogaina le faʻapipiʻiina o le masini faʻapipiʻi e faʻapipiʻiina. le koluma. Iloilo fa'apipi'i koluma vavaeesega o paluga peptide e aofia ai peptides e lima;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) ma Trypsin digest o le serum albumin tagata (HAS) .O le peptide paluga ma trypsin digest o le HSA sa matauina e vavae ese ma le lelei iugafono ma le lelei o le faatinoga o le PMPpaRP fa'atusa ma lena serum serum albumin (HAS). .O peptides uma ma polotini na matauina e lelei ona foia ma lelei ile koluma PMP, lea na sili atu le lelei nai lo le koluma Ascentis Express RP-Amide.
PEG (Polyethylene Glycol), Urea, Acetic Acid, Trimethoxy Orthosilicate (TMOS), Trimethyl Chlorosilane (TMCS), Trypsin, Human Serum Albumin (HSA), Ammonium Chloride, Urea, Hexane Methyldisilazane (HMDS), Methacryloyl Chloride (MCTEMP-Hyrene, Styrene, MCTEMP, Styrene, Benzyl Oxide) trile (ACN), Methanol, 2-Propanol, ma Acetone Faʻatau mai Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, ISA).
O le faʻafefiloi o le urea (8 g), polyethylene glycol (8 g), ma le 8 mL o le 0.01 N acetic acid sa faʻafefeteina mo le 10 minute, ona faʻaopoopoina lea o le 24 mL o le TMOS i lalo o le aisa-malili. 70 ° C mo le 12 itula. O le masini vaivai mamago sa lamolemole i totonu o se ogaumu ma calcined i le 550 ° C mo itula 12. E tolu vaega na saunia ma faʻamaonia e suʻesuʻe ai le toe gaosia i le lapopoa, pore lapoa ma luga o le eleele.
E ala i le suia o luga o vaega silica ma muai synthesized ligand phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) sosoo ai ma le radial polymerization ma styrene, sa saunia se vaega polar-o loʻo i ai le tuufaatasiga.Vaega tumau mo agregates ma filifili polystyrene. O le faagasologa o sauniuniga o loʻo faʻamatalaina i lalo.
N-phenylmaleimide (200 mg) ma le methyl vinyl isocyanate (100 mg) na solo i toluene mago, ma 0.1 mL o le 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) na faaopoopo i le fagu tali e saunia ai le phenylmaleimide-methyl isocyanate copolymer i le vinyl isocyanate copolymer (PMC 3) na faʻafefiloi i le 6°C . 40°C mo le 3 itula.
O fasimea silica mago (2 g) na salalau i toluene mago (100 mL), faʻafefe ma sonicated i se 500 mL lapotopoto pito i lalo fagu mo le 10 min. PMCP (10 mg) na solo i toluene ma faaopoopo dropwise i le fagu tali e ala i se faʻafefe paʻu. O le paluga na refluxed i le 100 °C ma faamamago 6 itula i le 100 °C ma le 6 °C. itula. Ona, o le PMCP-faʻapipiʻiina silica particles (100 g) na faʻamavaeina i toluene (200 ml) ma le 4-hydroxy-TEMPO (2 mL) na faʻaopoopoina i le i ai o le 100 μL o le dibutyltin dilaurate e fai ma faʻamalosi. O le paluga na faʻaosoina i le 50 ° C mo le 8 itula, faʻamago ma faʻamago itula.
Styrene (1 mL), benzoyl peroxide BPO (0.5 mL), ma TEMPO-PMCP-faʻapipiʻi silica particles (1.5 g) na faʻasalalau i toluene ma faʻamamaina i le nitrogen. O le polymerization o le styrene na faia i le 100 ° C mo itula 12. O le mea na maua mai na fufuluina i le methanol ma faʻamago faʻagogo atoa i le 60 ° C.
O faʻataʻitaʻiga na faʻamalo i le 393 K mo le 1 itula e maua ai le mamafa o totoe o le itiiti ifo i le 10-3 Torr.O le aofaʻi o le N2 adsorbed i se faʻalavelave vavalalata o le P / P0 = 0.99 na faʻaaogaina e fuafua ai le aofaʻi o le pore. O le morphology o le paʻu ma le ligand-bonded silica particles na suʻesuʻeina i le suʻesuʻeina o le electron micros, Japan samples (Hōkopi silica-boned). ded silica particles) na tuʻuina i luga o se koluma alumini e faʻaaoga ai le kaponi faʻapipiʻi. Na faʻapipiʻi auro i luga o faʻataʻitaʻiga e faʻaaoga ai se Q150T sputter coater, ma se 5 nm Au lapisi na teuina i luga o faʻataʻitaʻiga. O lenei faʻaleleia le lelei o le faagasologa e faʻaaoga ai le eletise maualalo ma maua ai saito lelei, malulu malulu. Mastersizer 2000 na faʻaaogaina le suʻesuʻega tele e maua ai le tufatufaina atu o le tele o vaega. O le silica natia ma le ligand-bonded silica particles (5 mg taʻitasi) na faʻasalalauina i le 5 mL o le isopropanol, sonicated mo le 10 min, vortexed mo le 5 min, ma tuʻu i luga o le nofoa opitika o le Mastersizer.Thermogravimetric fua faatatau o le 5 °C na faia i le va o le Mastersizer.Thermogravimetric 0 °C i luga ole 0 minute o le vevela o le 8 °C.
Ua fa'apipi'i i tioata uamea u'amea vaapiapi koluma o fua (100 × 1.8 mm id) sa fa'apipi'iina i le fa'aogaina o le auala e teu ai, fa'atatau i le faiga lava e tasi sa fa'aogaina i le Ref.31.A koluma u'amea u'amea (fa'ata tioata, 100 × 1.8 mm id) fa'atasi ai ma se fa'apipi'i fa'apipi'i o lo'o i ai se 1 µm frit na fa'afeso'ota'i atu i se packer slurry (Alltech Deerfield, IL, ISA). Saunia se slurry vaega tumau e ala i le taofia 150 mg o tulaga tumau vaega i le 1.2 mL fa'aogaina le methanol fa'aoga le mL Methanol fa'aaogaina le fa'aputuina o le koluma mL methanol. faʻapea foʻi ma le soli faʻamalosi. Faatumu le koluma faʻasolosolo e ala i le faʻaogaina o le mamafa o le 100 MP mo le 10 minute, 80 MP mo le 15 minute, ma le 60 MP mo minute 30. I le taimi o le faʻapipiʻiina, sa faʻaogaina le vibration faʻainisinia ma lua GC column shakers (Alltech, Deerfield, IL, ISA) e faʻamautinoa ai le faʻapipiʻiina o le toniga o le koluma e faʻasaʻo lemu. koluma mai le vaega fa'apipi'i slurry ma fa'afeso'ota'i le isi mea fa'apipi'i i le pito i totonu ma le LC system e siaki ai lona fa'atinoga.
O se pamu LC (10AD Shimadzu, Iapani), injector (Valco (USA) C14 W.05) ma le 50nL tui matasele, membrane degasser (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS faamalama capillary sa fausia Faapitoa µLC masini detector (UV-2075) ma tioata-laina tu'u fa'alaiti fa'alaiti fa'aopoopo fa'alava fa'alava fa'alava fa'aitiitiga fa'alava fa'alava fa'alava. ter afifiina, capillaries (50 μm id 365 ma faʻaitiitia le faʻapipiʻi faʻatasi (50 μm) na faʻapipiʻiina i le 1 / 16" fafo o le faʻaitiitiga faʻatasi. O le aoina o faʻamatalaga ma le faʻaogaina o le chromatographic na faia e faʻaaoga ai le polokalama Multichro 2000. Mataʻituina i le 254 nm Analytes na faʻataʻitaʻiina mo O suʻesuʻega o UV.
Albumin mai serum tagata, lyophilized paʻu, ≥ 96% (agarose gel electrophoresis) 3 mg faʻafefiloi ma trypsin (1.5 mg), 4.0 M urea (1 mL), ma le 0.2 M ammonium bicarbonate (1 mL) .O le vaifofo na faʻaosoina mo le 10 minute ma teuina i totonu o le vai taele i le 37,00 °C quench 67,0 °C ma le 67 °C. sui le vaifofo ma teu i lalo ole 4 °C.
O le vavaeeseina o faʻafefiloi peptide ma HSA trypsin digests na iloiloina eseese i luga o koluma PMP. Siaki le vavaeeseina o le paluga peptide ma le trypsin digest o le HSA e le PMP koluma ma faʻatusatusa iʻuga i le koluma Ascentis Express RP-Amide. O le numera o le plate theoretical e fuafuaina e pei ona taua i lalo:
O ata SEM o mea'ai silika e leai ni mea'ai ma fasimea silika fa'apipi'i ligand o lo'o fa'aalia i le ATA.2 .SEM ata o fasi silica e leai ni mea (A, B) o loʻo faʻaalia ai, e ese mai i a tatou suʻesuʻega talu ai, o nei vaega o loʻo faʻataʻamilomilo lea e faʻaumiumi ai meaʻai poʻo le i ai o se faʻataʻitaʻiga e le masani ai.
Fa'ata'ita'iina o ata fa'aeletonika fa'aeletonika o ni vaega o le silica (A, B) ma vaega o le silica fa'atasi (C, D).
O le tufaina o le tele o vaega o le silica e leai ni mea ma le ligand-bonded silica particles o loʻo faʻaalia i le Ata 3 (A) .Volume-based particle size distribution curves na faʻaalia ai le tele o le silica particles na faʻateleina pe a uma le fesuiaiga o vailaʻau (Fig. 3A). i la matou suʻesuʻega talu ai ma le ad (0.5) taua o le 3.05 μm (polystyrene-bound silica particles) 34. O lenei vaega sa i ai se vaapiapi tele o le tufatufaina atu o le vaega faʻatusatusa i la matou suʻesuʻega talu ai ona o le fesuiaiga o fua faatatau o le PEG, urea, TMOS, ma le acetic acid i le faʻafefiloi tali. styrene na'o le tu'uina o le polystyrene layer (0.97 µm) i luga o le silica, ae i le PMP vaega o le mafiafia o le 1.38 µm.
Tufatufaina o le lapopoa (A) ma le lapopoa o le pore (B) o vaega o le silica e leai ni mea ma vaega o le silica ua fusifusia i ligand.
O le tele o pore, pore voluma ma luga o le vaega o le silica particles o le suʻesuʻega o loʻo tuʻuina atu i le Table 1 (B). suiga kemikolo, e pei ona faaalia i le Laulau 1(B), ma le suiga o le pupuni o loo faaalia i le Ata 3(B) .Faapena foi, o le voluma pore o le silica particles faaitiitia mai le 0.67 i le 0.58 cm3/g ina ua mavae chemical modification.O le vaega faapitoa luga o le suʻesuʻeina nei silica particles o le 116 m2/g2 suʻesuʻe muamua (o le 116 m2/g2 suʻesuʻe muamua, lea o loʻo faʻaalia i le 116 m2/g2 le suʻesuʻega muamua i le 116 m2/g2, lea o le suʻesuʻega muamua m2/g2). B), o le vaega i luga (m2 / g) o le silica particles na faʻaititia foi mai le 116 m2 / g i le 105 m2 / g pe a maeʻa suiga faʻainisinia.
O faʻaiʻuga o suʻesuʻega elemene o le vaega tumau o loʻo faʻaalia i le Laulau 2. O le uta carbon o le vaega tumau o loʻo i ai nei o le 6.35%, lea e maualalo ifo nai lo le utaina o le carbon o la tatou suʻesuʻega talu ai (polystyrene bonded silica particles, 7.93% 35 ma 10.21%, faasologa) 42. O le uta kaponi o le vaega o loʻo i ai nei SP e maualalo, o loʻo i ai nei le faʻaopoopoga o le faʻasologa o le SP i le taimi nei o le faʻaopoopoga o le popherene, lea e faʻaopoopoina i le vaega o loʻo i ai nei, o le faʻaopoopoga o le SP i le taimi nei. nylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) ma le 4-hydroxy-TEMPO na faʻaaogaina. O le pasene o le mamafa o le nitrogen o le vaega tumau o loʻo i ai nei o le 2.21%, faʻatusatusa i le 0.1735 ma le 0.85% i le mamafa o le nitrogen i suʻesuʻega talu ai, o lona uiga o le wt% o le nitrogen e maualuga atu i le taimi nei o loʻo i ai nei le phenylmaleimide. o le 2.7% ma le 2.9%, i le faasologa, ae o le uta carbon o le oloa mulimuli (6) o le 6.35%, e pei ona faʻaalia i le Laulau 2. O le paʻu o le mamafa na siakiina i le PMP tulaga tumau, ma o le TGA curve o loʻo faʻaalia i le Ata 4. O le TGA curve o loʻo faʻaalia ai le paʻu o le mamafa o le 8.6%, o loʻo i ai i le maliliega lelei ma le N.35 o loʻo i ai %) ona o le N.
O le phenylmaleimide-methylvinylisocyanate ligand na filifilia mo le suia o luga o vaega silica ona o loʻo i ai vaega polar phenylmaleimide ma vaega vinylisocyanate. Vinyl isocyanate vaega e mafai ona toe tali atu i le styrene e ola radical polymerization.O le mafuaaga lona lua o le faaofiina o se vaega o loʻo i ai se fegalegaleaiga feololo ma le analyte ma le va o le analyte ma le va o le electrostatic intermediate ma e leai se vaega malosi analyteimide. E leai se totogi mama i le pH masani.O le polarity o le vaega tumau e mafai ona pulea e le aofaiga sili ona lelei o le styrene ma le taimi tali o free radical polymerization.O le laasaga mulimuli o le tali (free-radical polymerization) e taua tele ma e mafai ona suia le polarity o le vaega tumau. Elemental suʻesuʻega sa faia e siaki le kaponi utaina o nei tulaga tumau vaega. saunia ma concentrations eseese o styrene e eseese carbon loadings.Toe, uta nei vaega tumau i koluma uʻamea stainless ma siaki latou faatinoga chromatographic (selectivity, iugafono, N tau, ma isi.) Faʻavae i luga o nei suʻega, na filifilia se optimized formulation e saunia le vaega tumau PMP e mautinoa polarity pulea ma lelei analyte faatumauina.
E lima faʻafefiloi peptide (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) na iloiloina foʻi e faʻaaoga ai se koluma PMP e faʻaaoga ai se vaega feaveaʻi;60/40 (v / v) acetonitrile / vai (0.1% TFA) i le tafe o le 80 μL / min. I lalo o tulaga elution sili ona lelei, o le numera o le ipu (N) i le koluma (100 × 1.8 mm id) o le 20,000 ± 100 (200,000 T chromato ​​3 m²). kalama o loʻo faʻaalia i le Ata 5A. Faʻataʻitaʻiga vave i luga o le koluma PMP i le maualuga o le tafe (700 μL / min), e lima peptides na faʻafefe i totonu o le minute e tasi, N tau e matua lelei lava, 13,500 ± 330 i le koluma (100 × 1.8 mm id), E fetaui ma le 135,000 T 135,000 (T 135,000 T 135,000). × 1.8 mm id) na faʻapipiʻiina i ni vaega eseese se tolu o le PMP stationary phase e siaki ai le toe faʻaleleia. O le faʻavasegaina o suʻesuʻega mo koluma taʻitasi na faʻamauina i le faʻaaogaina o tulaga elution sili ona lelei ma le numera o le faʻaogaina o ipu N ma le taimi faʻatumauina e vavae ese ai le faʻafefiloi o suʻega tutusa i luga o koluma taʻitasi.
Tuueseesega o le paluga peptide i luga ole koluma PMP (B) ma le koluma Ascentis Express RP-Amide (A);vaega feaveai 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP koluma fua (100 × 1.8 mm id);au'ili'ili Le fa'asologa o le fa'aogaina o mea fa'afefiloi: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) ma le 5 (leucine) acid enkephalin)).
O le Bmmp Laina (100 × 1.8 MM ID) na iloiloina mo le tuueseeseina o le tele o faʻataʻitaʻiga o le tele o le numera o le 100: o le cheat, o loʻo faʻaalia i le ata 6), o le Tsa Digshings ua vaeluaina i le 17 tumutumu e tusa ma le 17 peptades. O le tuueseeseina o itu uma o le HSA digrest ma mea moni o loo fuafuaina i le Lisi 5.
O se tryptic digest o le HSA (100 × 1.8 mm id) na vavaeeseina i luga o se koluma PMP;fua tafe (100 µL / min), vaega feaveai 60/40 acetonitrile / vai ma 0.1% TFA.
lea L o le umi o le koluma, η o le viscosity o le vaega feaveai, ΔP o le koluma i tua o le mamafa, ma u o le laina laina saoasaoa o le vaega feaveai. O le permeability o le PMP koluma o 2.5 × 10-14 m2, o le tafe o le tafe o le 25 μL / min, ma 60/40 v / v / v le faʻaaogaina o le PMP / v . e tutusa ma le matou suʻesuʻega talu ai Ref.34.O le faʻaogaina o le koluma o loʻo faʻapipiʻiina i mea papaʻu porous o le: 1.7 × 10-15 mo le 1.3 μm particles, 3.1 × 10-15 mo le 1.7 μm particles, 5.2 × 10-15 ma le 2.5 × 10μm 2.5 μm . toe, o le permeability o le vaega PMP e tutusa ma le 5 μm vaega autu- atigi.
lea o le Wx o le mamafa o le koluma ua tumu i le chloroform, o le Wy o le mamafa o le koluma ua tumu i le methanol, ma le ρ o le mamafa o le solvent.Densities o le methanol (ρ = 0.7866) ma le chloroform (ρ = 1.484) s 31 lea na matou suʻesuʻeina muamua o le 0.63 ma le 0.55, o lona uiga o le i ai o ligands urea e faʻaitiitia ai le faʻaogaina o le vaega faʻamautu. I le isi itu, o le aofaʻi o porosity o le PMP koluma (100 × 1.8 mm id) o le 0.60. O le permeability o le PMP1 koluma o loʻo paʻu i lalo ifo o le C1 koluma-koluma i lalo ifo o le C1 koluma. vaega o le C18 ligands o loʻo faʻapipiʻi i le silica particles e pei o laina laina, ae i le polystyrene-type stationary phases, o le A faitele polymer layer e faʻataʻamilo ai.
Ata 7A,B o loʻo faʻaalia ai le koluma PMP (100 × 1.8 mm id) ma le koluma Ascentis Express RP-Amide (100 × 1.8 mm id) e faʻaaoga ai tulaga tutusa elution (ie, 60/40 ACN / H2O ma 0.1% TFA).) o le fanua van Deemter.Fa'afefiloi peptide filifilia (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) na saunia i le 20 µL/ O le fua maualalo o le tafe mo koluma uma e 800 µL/min. o le Express RP-Amide koluma e 2.6 µm ma 3.9 µm, faasologa. O tau HETP faailoa mai o le vavaeeseina lelei o le PMP koluma (100 × 1.8 mm id) e sili atu le lelei nai lo le avanoa faapisinisi Ascentis Express RP-Amide koluma (100 × 1.8 mm id id). taua pe a faatusatusa i la matou suesuega talu ai.O le maualuga o le vavaeeseina o le PMP koluma (100 × 1.8 mm id) faʻatusatusa i le Ascentis Express RP-Amide koluma e faʻavae i luga o le faʻaleleia atili o foliga faʻapitoa, lapopoa, ma faiga faʻapipiʻi koluma lavelave o loʻo faʻaaogaina i le galuega o loʻo iai nei34.
(A) van Deemter plot (HETP versus mobile phase linear velocity) maua mai ile PMP column (100 × 1.8 mm id) ile 60/40 ACN/H2O ma le 0.1% TFA.(B) van Deemter plot (HETP versus mobile phase linear velocity) maua mai ile Ascentis Express RP-Amide × id2 koluma (100mm2 × 1.8 mm) maua mai le Ascentis Express RP-Amide / Amide 1. O ma le 0.1% TFA.
Sa saunia ma iloiloina se vaega o le polystyrene faʻapipiʻiina polar mo le vavaeeseina o faʻafefiloi peptide faʻafefiloi ma trypsin digests o le albumin serum tagata (HAS) i le maualuga o le faʻaogaina o le vai chromatography. O le faʻatinoga o le chromatographic o koluma PMP mo paluga peptide e sili ona lelei i le vavaeeseina o le lelei ma le fofo. nthesis o le vaega tumau, ma koluma lavelave packing.In faaopoopo atu i le vavaeeseina maualuga lelei, maualalo koluma tua o le mamafa i le maualuga o le tafe o le isi tulaga lelei o lenei tulaga tulaga.PMP koluma faaalia reproducibility lelei ma e mafai ona faaaoga mo le auʻiliʻiliga o paluga peptide ma trypsin digestion o proteins eseese. Matou te faamoemoe e faaaoga lenei koluma mo le tuueseeseina o oloa faalenatura, o le a maua mai i le koluma faanatura, biomedical PMP koluma i le lumanai malie. e su'esu'eina mo le tu'ueseeseina o polotini ma fa'ama'i monoclonal.
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