Waad ku mahadsan tahay booqashada Nature.com.Nooca browserka aad isticmaalayso waxa uu leeyahay taageerada CSS oo xadidan.Waayo-aragnimada ugu fiican, waxaan kugula talineynaa inaad isticmaasho browser-ka la cusboonaysiiyay (ama aad damiso Habka Laqabsiga ee Internet Explorer).Dhanka kale, si loo xaqiijiyo taageerada joogtada ah, waxaan ka dhigi doonaa goobta iyada oo aan lahayn qaabab iyo JavaScript.
Waxaa jirta baahi loo qabo hab la isku halayn karo in vitro oo si sax ah u soo saari kara jawiga jireed ee wadnaha si loogu tijaabiyo daroogada.Helitaanka xaddidan ee hababka dhaqanka unugyada unugyada wadnaha ee bini'aadamka ayaa horseeday fasiraad aan sax ahayn ee saameynta daroogada wadnaha.Halkan, waxaan ku soo saarnay qaabka dhaqanka unugyada wadnaha (CTCM) kaas oo si elektaroonik ah u kiciya jeexjeexyada wadnaha oo uu maro fiditaan jireed inta lagu jiro marxaladaha systolic iyo diastolic ee wareegga wadnaha.Ka dib 12 maalmood oo dhaqan ah, habkani wuxuu qayb ahaan wanaajiyay jiritaanka qaybaha wadnaha, laakiin si buuxda uma ilaalin sharaftooda qaabdhismeed.Sidaa darteed, baadhista molecule yar ka dib, waxaan ogaanay in ku darida 100 nM triiodothyronine (T3) iyo 1 μM dexamethasone (Dex) ee dhexdeena ay ilaalisay qaabdhismeedka yar yar ee qaybaha muddo 12 maalmood ah.Marka lagu daro daawaynta T3/Dex, nidaamka CTCM waxa uu hayaa muuqaalo qoraal ah, karti, hawl-qabad dheef-shiid kiimikaad, iyo hufnaan qaabdhismeed oo la mid ah unugyada wadnaha cusub ee 12 maalmood.Intaa waxaa dheer, fidinta xad-dhaafka ah ee unugyada wadnaha ee dhaqanka waxay keenaysaa calaamadaynta wadnaha hypertrophic, taasoo bixisa caddaynta awoodda CTCM si ay u ekaato xaaladaha hypertrophic ee ay keentay fiditaanka wadnaha.Gebogebadii, CTCM waxay qaabayn kartaa physiology iyo pathophysiology ee wadnaha ee dhaqanka muddo dheer, taas oo awood u siinaysa baadhista daroogada lagu kalsoonaan karo.
Ka hor inta aan la samayn cilmi-baaris caafimaad, hababka la isku halleyn karo ee vitro ayaa loo baahan yahay kuwaas oo si sax ah u soo saari kara deegaanka jir ahaaneed ee wadnaha bini'aadamka.Nidaamyada noocan oo kale ah waa inay ku ekaadaan fidinta farsamada ee isbeddelay, garaaca wadnaha, iyo sifooyinka elektiroonigga ah.Moodooyinka xayawaanka ayaa caadi ahaan loo isticmaalaa sidii goob lagu baaro physiology wadnaha iyada oo la isku halleyn karo xaddidan ee ka tarjumaysa saameynta daroogada ee wadnaha aadanaha1,2.Ugu dambeyntii, Qaabka Tijaabada Dhaqaneed ee Unugyada Wadnaha ee Wadnaha (CTCM) waa nooc aad xasaasi u ah oo gaar u ah faragelinta daaweynta iyo dawooyinka kala duwan, si sax ah u soo saara physiology iyo pathophysiology ee wadnaha aadanaha3.Maqnaanshaha nidaamkan oo kale ayaa xaddidaya helitaanka daawaynta cusub ee wadne-gabka4,5 waxayna keentay in daroogada wadne-wadnaha ay tahay sababta ugu weyn ee suuqa looga baxo6.
Tobankii sano ee la soo dhaafay, sideed dawooyinka aan wadnaha iyo xididada ahayn ayaa laga saaray isticmaalka kiliinikada sababtoo ah waxay sababaan mudada dheer ee QT taasoo keenta wadna xanuun iyo dhimasho degdeg ah7.Sidaa darteed, waxaa jirta baahi sii kordheysa oo loo qabo istaraatiijiyado baaris sax ah oo la isku halayn karo si loo qiimeeyo waxtarka iyo sunta wadnaha iyo xididdada.Isticmaalkii ugu dambeeyay ee bini'aadanku ay keentay unugyada tarma ee wadnaha-ka-soo-baxa wadnaha (hiPS-CM) ee baaritaanka daroogada iyo baaritaanka sunta waxay siisaa xal qayb ahaan dhibaatadan.Si kastaba ha ahaatee, dabeecadda aan qaan-gaarin ee hiPS-CMs iyo la'aanta kakanaanta unugyada badan ee unugyada wadnaha ayaa ah xaddidaadyo waaweyn oo habkan ah.Daraasadihii ugu dambeeyay waxay muujiyeen in xaddidan qayb ahaan looga gudbi karo iyadoo la adeegsanayo hore ee hiPS-CM si loo sameeyo unugyada wadnaha ee hydrogels wax yar ka dib bilawga foosha lama filaanka ah iyo si tartiib tartiib ah u kordhinaya kicinta korantada waqti ka dib.Si kastaba ha ahaatee, kuwan microtissues-hiPS-CM waxay ka maqan yihiin sifooyinka korantada ee bislaaday iyo kuwa qandaraasle ee myocardium ee qaangaarka ah.Intaa waxaa dheer, unugyada wadnaha ee bini'aadamku waxay leeyihiin qaab dhismeed aad u adag, oo ka kooban isku dhafka kala duwan ee noocyada unugyada kala duwan, oo ay ku jiraan unugyada endothelial, neurons, iyo fibroblasts stromal, oo ay ku xiran yihiin qaybo gaar ah oo borotiinno matrix ah oo ka baxsan unugyada.Kala duwanaanshiyahan dadka aan ahayn kardiomyocyte11,12,13 ee ku jira wadnaha naasleyda qaangaarka ah ayaa caqabad weyn ku ah qaabeynta unugyada wadnaha iyadoo la adeegsanayo noocyada unugyada gaarka ah.Xaddidaadahan waaweyni waxay xooga saarayaan muhiimada horumarinta hababka loogu talagalay dhaqamada unugyada wadnaha ee aan qummanayn ee hoos yimaada xaaladaha jireed iyo cudurada.
Qaybaha dhuuban ee dhaqanka (300 µm) ee wadnaha bini'aadamka waxay caddeeyeen inay yihiin moodal rajo leh oo ah myocardium-ka bini'aadamka.Habkani wuxuu bixiyaa helitaanka nidaam dhamaystiran oo 3D multicellular la mid ah unugyada wadnaha aadanaha.Si kastaba ha ahaatee, ilaa 2019, isticmaalka qaybaha wadnaha ee dhaqameed waxaa xaddiday badbaadada dhaqanka gaaban (24 h).Tani waxay sabab u tahay dhowr arrimood oo ay ka mid yihiin la'aanta fidinta farsamada-farsamada, is-dhexgalka hawada-dareere, iyo isticmaalka warbaahinta fudud oo aan taageerin baahida unugyada wadnaha.2019, dhawr kooxood oo cilmi baaris ah ayaa muujiyay in ku darista arrimo farsamo ee hababka dhaqanka unugyada wadnaha ay kordhin karaan nolosha dhaqanka, hagaajinta muujinta wadnaha, oo ay ku dayan karto cudurada wadnaha.Laba daraasadood oo xarrago leh 17 iyo 18 ayaa muujinaya in culeyska farsamada uniaxial ay saameyn togan ku leedahay phenotype wadnaha inta lagu jiro dhaqanka.Si kastaba ha noqotee, daraasadahani ma aysan isticmaalin culeyska jimicsiga jirka ee saddex-geesoodka ah ee dhaqdhaqaaqa wareegga wadnaha, maaddaama qaybaha wadnaha lagu rakibay mid ka mid ah xoogagga jilicsan ee isometric 17 ama loading auxotonic toosan 18.Hababkan kala-baxa nudaha waxay keeneen in la xakameeyo hiddo-wadaha wadnaha oo badan ama xad-dhaafka hiddo-wadaha la xidhiidha jawaabaha fidinta aan caadiga ahayn.Gaar ahaan, Pitoulis et al.19 waxay soo saartay qubeyska dhaqan jeex jeexjeexa wadnaha oo firfircoon oo loogu talagalay dib-u-dhiska wareegga wadnaha iyadoo la adeegsanayo jawaab-celinta beddelkayaasha iyo kicinta xiisadda.Inkasta oo nidaamkani uu u oggolaanayaa in si sax ah loo qaabeeyo wareegga wadnaha ee vitro, kakanaanta iyo soo-saarka hooseeya ee habka ayaa xaddidaya codsiga nidaamkan.Shaybaadhkayagu waxa uu dhawaan sameeyay nidaam dhaqan oo la fududeeyay iyada oo la adeegsanayo kicinta korantada iyo dhexdhexaad ah oo la hagaajiyay si loo ilaaliyo waxtarka qaybaha boorashka iyo unugyada wadnaha bini'aadamka ilaa 6 days20,21.
Qoraal-gacmeedka hadda, waxaan ku qeexnay qaabka dhaqanka unugyada wadnaha (CTCM) iyadoo la adeegsanayo qaybo ka mid ah wadnaha porcine kuwaas oo ku daraya tilmaamo kaftan ah si dib loogu habeeyo jimicsiga wadnaha ee saddex-geesoodka ah iyo fidsanaanta pathophysiological inta lagu jiro wareegga wadnaha.CTCM-kani waxa uu kordhin karaa saxnaanta saadaasha daawaynta ka hor ilaa heer aan waligeed la gaadhin iyada oo la bixinayo kharash-ku-ool ah, habka wadnaha dhex-dhaxaadka ah kaas oo u ekaysiiya physiology / pathophysiology ee wadnaha naasleyda ee tijaabada dawada ka hor.
Calaamadaha farsamada hemodynamic waxay door muhiim ah ka ciyaaraan ilaalinta shaqada kardiomyocyte ee vitro 22,23,24.Qoraal-gacmeedka hadda jira, waxaan ku soo saarnay CTCM (Jaantuska 1a) kaas oo ku ekaan kara jawiga wadnaha ee qaangaarka isagoo kicinaya kicinta korantada iyo farsamada labadaba inta jeer ee jireed (1.2 Hz, 72 garaac daqiiqaddii).Si looga fogaado fiditaanka nudaha xad-dhaafka ah inta lagu jiro diastole, aaladda daabacaadda 3D ayaa la isticmaalay si loo kordhiyo cabbirka nudaha 25% (Jaantus. 1b).Dhaqdhaqaaqa korantada ee uu keenay nidaamka C-PACE waxaa lagu beegay in la bilaabo 100 ms ka hor systole iyadoo la adeegsanayo habka xogta si loo soo saaro si buuxda wareegga wadnaha.Nidaamka dhaqanka unuggu waxa uu isticmaalaa firfircoone sambabada sambabada ah (LB Engineering, Germany) si uu meerto ahaan u ballaadhiyo xuub silikoon dabacsan si uu u keeno balaadhinta jeexjeexyada wadnaha ee qolka sare.Nidaamku wuxuu ku xiran yahay khadka hawada dibadda iyada oo loo marayo transducer cadaadiska, taas oo suurtogal ka dhigtay in si sax ah loo hagaajiyo cadaadiska (± 1 mmHg) iyo waqtiga (± 1 ms) (Jaantus 1c).
a Ku dheji qaybta nudaha giraanta taageerada 7 mm, ee lagu muujiyay buluug, gudaha qolka dhaqanka ee qalabka.Qolka dhaqanka waxaa laga soocaa qolka hawada iyadoo loo eegayo xuubka silikoon dhuuban oo dabacsan.Dhig baakidh qol kasta dhexdooda si aad uga hortagto inay dillaacdo.Daboolka aaladda waxaa ku jira electrodes graphite oo bixiya kicinta korantada.b Qaabka qaabaysan ee aaladda unugga weyn, giraanta hagaha iyo giraanta taageerada.Qaybaha nudaha (brown) ayaa la dulsaaraa aaladda baaxadda leh iyadoo giraanta hagaha lagu dhejiyay godka cidhifka dibadda ee qalabka.Adiga oo isticmaalaya hagaha, si taxadar leh u dhig giraanta taageerada ee ku dahaadhay xabagta akril ee unugyada qaybta unugyada wadnaha.c Sawirka muujinaya wakhtiga kicinta korantada oo ah shaqada cadaadiska qolka hawada ee ay maamusho firfircoonida pneumatic programmable (PPD).Aalad xog-helid ah ayaa loo isticmaalay in la isku xidho kicinta korantada iyadoo la isticmaalayo dareemayaasha cadaadiska.Marka cadaadiska qolka dhaqanka uu gaaro heerka loo dejiyay, calaamadda garaaca wadnaha ayaa loo diraa C-PACE-EM si loo kiciyo kicinta korantada.d Sawirka afar CTCM oo lagu dhejiyay shelf incubator.Afar qalab ayaa ku xiran hal PPD iyada oo loo sii marayo wareegga pneumatic, iyo dareemayaasha cadaadiska ayaa la geliyo valve hemostatic si ay ula socdaan cadaadiska wareegga pneumatic.Qalab kastaa wuxuu ka kooban yahay lix qaybood oo unug ah.
Isticmaalka hal-abuure pneumatic ah, waxaan awoodnay inaan xakameyno 4 qalabka CTCM, mid kasta oo ka mid ah wuxuu hayn karaa qaybaha unugyada 6 (Jaantus. 1d).CTCM gudaheeda, cadaadiska hawada qolka hawadu waxa loo beddelaa cadaadis isku mid ah oo ku jira qolka dareeraha oo keena balaadhinta jireed ee jeexjeexa wadnaha (Jaantuska 2a iyo Filimka Dheeraadka ah 1).Qiimaynta fiditaanka nudaha oo ah 80 mm Hg.Fanka.waxay muujisay fidinta qaybaha unugyada 25% (Jaantus. 2b).Boqolkiiba fiditaankan ayaa la muujiyay inuu u dhigmayo dhererka sarcomere physiological ee 2.2-2.3 µm qaybta wadnaha ee caadiga ah qandaraasle17,19,25.Dhaqdhaqaaqa unugyada waxaa lagu qiimeeyay iyada oo la adeegsanayo jaangooyooyinka kamaradaha gaarka ah (Jaantuska Dheeraadka ah 1).Baaxadda iyo xawaaraha dhaqdhaqaaqa unugyada (Jaantus. 2c, d) waxay u dhigantaa fidinta inta lagu jiro wareegga wadnaha iyo waqtiga inta lagu jiro systole iyo diastole (Jaantus. 2b).Fidinta iyo xawaaraha unugyada wadnaha inta lagu jiro foosha iyo nasashada ayaa ah mid joogto ah 12 maalmood ee dhaqanka (Jaantus. 2f).Si loo qiimeeyo saameynta kicinta korantada ee qandaraas-qaadista inta lagu jiro dhaqanka, waxaan soo saarnay hab lagu go'aamiyo naafonimada firfircoon iyadoo la adeegsanayo algorithm shading (Sawir Dheeraad ah. 2a,b) waxaana awoodnay inaan kala saarno cilladaha leh iyo iyada oo aan lahayn kicin koronto.Isla qaybta wadnaha (Jaantus. 2f).Gobolka la guuri karo ee goynta (R6-9), korantada inta lagu jiro kicinta korantada ayaa 20% ka sarreysay maqnaanshaha kicinta korantada, taas oo muujinaysa ka qayb qaadashada kicinta korantada ee shaqada qandaraaska.
Raadka matalayaasha cadaadiska qolka hawada, cadaadiska qolka dareeraha, iyo cabbirada dhaqdhaqaaqa unugyada ayaa xaqiijinaya in cadaadiska qolku uu beddelo cadaadiska qolka dareeraha, taasoo keenta dhaqdhaqaaq u dhigma oo jeexjeexa nudaha.b Raadka matale ee boqolkiiba fidsan (buluug) ee qaybaha unugga ee u dhiganta boqolkiiba fidsan (orange).c Dhaqdhaqaaqa la qiyaasay ee jeexjeexa wadnaha ayaa la socda xawaaraha dhaqdhaqaaqa la qiyaasay.(d) Dariiqyada matalayaasha dhaqdhaqaaqa meertada ah (khadka buluuga ah) iyo xawaaraha (khadka dhibicda orange) ee qayb ka mid ah wadnaha.e Qiyaasta wakhtiga wareegga (n = 19 xaleef koox kasta, doofaarro kala duwan), wakhtiga foosha (n = 19 xaleef koox kasta), wakhtiga nasashada (n = 19 xaleef koox kasta, doofaarro kala duwan), dhaqdhaqaaqa unugyada (n = 25).jeex)/koox ka yimid doofaarro kala duwan), xawaaraha ugu sarreeya ee systolic (n = 24 (D0), 25(D12) xaleef/koox doofaarro kala duwan ah) iyo heerka ugu sarreeya ee nasashada (n=24(D0), 25(D12) xaleef/koox ka yimid doofaarro kala duwan).Imtixaanka t-Ardayga laba-dabo leh ma muujin farqi la taaban karo oo u dhexeeya cabbir kasta.• Raad-raacyada falanqaynta cadaadiska wakiilka ee qaybaha unugyada leh (casaan) iyo aan lahayn (buluug) kicinta korantada, toban qaybood oo gobol oo qaybo unug ah oo isla qaybta ah.Qaybaha hoose waxay muujinayaan qiyaasida farqiga boqolkiiba boqol ee culeyska qaybaha unugyada leh iyo aan lahayn kicin koronto oo toban meelood laga soo qaatay qaybo kala duwan. (n = 8 xabbo/koox laga soo qaaday doofaarro kala duwan, Imtixaanka t-Ardayga Laba-dabo leh ayaa la sameeyaa; ****p <0.0001, **p <0.01, *p <0.05). (n = 8 xabbo/koox laga soo qaaday doofaarro kala duwan, Imtixaanka t-Ardayga Laba-dabo leh ayaa la sameeyaa; ****p <0.0001, **p <0.01, *p <0.05). (n = 8 срезов/группу от разных свиней, проводится двусторонний t-критерий Стьюдента; ****p<0,0001, **p<0,01). (n = 8 qaybood/koox doofaarro kala duwan ah, t-tijaabada Ardayga laba-dabo leh; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05). (n = 8 片/组，来自不同的猪，进行双尾学生t 检验： (n = 8 片/组，来自不同的猪，进行双尾学生t 检验： (n = 8 срезов/группу, от разных свиней, двусторонний критерий Стьюдента; ****p <0,0001, **p <0,01, *p <0,05). (n = 8 qaybood/koox, laga soo bilaabo doofaarro kala duwan, t-tijaabada Ardayga laba-dabo leh; ****p <0.0001, ** p<0.01, *p<0.05).Baararka khaladku waxay matalaan celceliska ± weecanka caadiga ah.
Nidaamkeena dhaqameed ee jeexjeexa wadnaha ee biomimetic ee hore [20, 21], waxaanu ilaalinay jiritaanka, shaqada, iyo sharafta qaab dhismeedka jeexjeexyada wadnaha muddo 6 maalmood ah anagoo adeegsanayna kicinta korantada iyo wanaajinta halabuurka dhexdhexaadka ah.Si kastaba ha ahaatee, 10 maalmood ka dib, tirooyinkan ayaa aad hoos ugu dhacay.Waxaan tixraaci doonaa qaybaha lagu caadaystay nidaamkeenii hore ee dhaqameed biomimetic 20, 21 xaaladaha xakamaynta (Ctrl) waxaanan u isticmaali doonaa dhexdhexaadinteena hore loo hagaajiyay sida xaaladaha MC iyo dhaqanka iyadoo la raacayo kicinta farsamada iyo korantada ee isku mar ah (CTCM).loo yaqaan .Marka hore, waxaan go'aansanay in kicinta farsamada iyada oo aan lahayn kicinta korantada aysan ku filneyn si loo ilaaliyo jiritaanka unugyada maalmaha 6 (Jaantuska Dheeraadka ah. 3a,b).Waxa xiisaha lihi leh, iyada oo la soo bandhigayo kicinta physio-farsamo iyo korantada iyadoo la adeegsanayo STCM, suurtagalnimada qaybaha wadnaha ee 12-maalin ayaa isku mid ah sida qaybaha wadnaha cusub ee hoos yimaada xaaladaha MS, laakiin aan hoos iman xaaladaha Ctrl, sida lagu muujiyay falanqaynta MTT (Jaantus 1).3a)Tani waxay soo jeedinaysaa in kicinta farsamada iyo jilitaanka wareegga wadnaha ay sii wadi karaan qaybaha unuggu inay shaqeeyaan laba jeer ilaa inta laga soo sheegayo nidaam dhaqameedkayaga hore.Si kastaba ha noqotee, qiimeynta qaabdhismeedka qaabdhismeedka qaybaha unugyada iyadoo la adeegsanayo tallaalka troponin wadnaha T iyo connexin 43 ayaa muujisay in connexin 43 muujinta uu aad uga sarreeyo unugyada MC maalinta 12 marka loo eego kontaroolada isla maalintaas.Si kastaba ha ahaatee, isku duubnida isku duubnida 43 iyo samaynta Z-disc si buuxda looma ilaalin (Jaantus. 3b).Waxaan isticmaalnaa qaab-dhismeedka sirdoonka macmal (AI) si aan u qiyaasno daacadnimada qaabdhismeedka unugyada26, dhuumaha waxbarashada qoto dheer ee ku saleysan sawirka ee ku saleysan troponin-T iyo connexin wasakheynta43 si aan si toos ah u qiyaasno sharafta qaab dhismeedka iyo fluorescence ee jeexjeexyada wadnaha marka la eego xoogga meelaynta.Habkani waxa uu adeegsanayaa Isku-xidhka Neural-ka ee Convolutional (CNN) iyo qaab barasho qoto dheer si si la isku halleyn karo loo qiyaaso qaab dhismeedka unugyada wadnaha si toos ah oo aan eex lahayn, sida lagu qeexay tixraaca.26. Unugyada MC waxay muujiyeen isku ekaanshaha qaabdhismeedka oo soo hagaagay maalinta 0 marka loo eego qaybaha xakamaynta joogtada ah.Intaa waxaa dheer, midabaynta trichrome ee Masson ayaa shaaca ka qaaday boqolkiiba aad uga hooseeya fibrosis ee xaaladaha MS marka loo eego xaaladaha xakamaynta maalinta 12 ee dhaqanka (Jaantus. 3c).Halka CTCM ay kordhisay suurtagalnimada qaybaha unugyada wadnaha maalintii 12 ilaa heer la mid ah kan unugyada cusub ee wadnaha, si weyn uma hagaajin sharafta qaabdhismeedka qaybaha wadnaha.
Jaantuska Bar wuxuu muujinayaa qiyaasida awoodda MTT ee jeexjeexyada wadnaha cusub (D0) ama jeexjeexyada wadnaha muddo 12 maalmood ah ama dhaqanka joogtada ah (D12 Ctrl) ama CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) jeexyo/koox NO #0 ah, hal qaab oo pigs ah ayaa loo sameeyay. ilaa D0 iyo **p <0.01 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). Jaantuska Bar wuxuu muujinayaa qiyaasidda awoodda MTT ee jeexjeexyada wadnaha cusub (D0) ama jeexjeexyada wadnaha muddo 12 maalmood ah ama dhaqanka joogtada ah (D12 Ctrl) ama CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) jeexyo/koox NO #0 ah, hal qaab oo kala duwan marka la barbar dhigo D0 iyo ** p <0.01 marka la barbar dhigo D12 Ctrl).Histogram-ku wuxuu muujinayaa qiyaasta suurtagalnimada qaybaha wadnaha cusub ee MTT (D0) ama dhaqanka qaybaha wadnaha 12 maalmood midkoodna dhaqanka joogtada ah (D12 control) ama CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 control).####p <0,0001 по сравнению с D0 и **p <0,01 по сравнению с D12 Ctrl). ####p <0.0001 marka la barbar dhigo D0 iyo **p <0.01 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心心切片(D0)天的MTT 活力的量化)，来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；与D0 ，#12相比，**p <0.01) a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心脏切片 (D0) MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；与D0 相比，####p <0.0001，与D12 Ctrl 相比，**p。)histogram muujinaya cabbirka jiritaanka MTT ee qaybaha wadnaha cusub (D0) ama qaybaha wadnaha ee 12 maalmood ee dhaqanka taagan (D12 control) ama CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 control))####p <0,0001 по сравнению с D0, **p <0,01 по сравнению с D12 Ctrl). ####p <0.0001 marka la barbar dhigo D0, **p <0.01 marka la barbar dhigo D12 Ctrl).b Troponin-T (cagaar), connexin 43 (casaan) iyo DAPI (buluug) oo ku jira qaybaha wadnaha ee go'doonsan (D0) ama qaybaha wadnaha ee lagu dhaqay xaaladaha taagan (Ctrl) ama xaaladaha CTCM (MC) ee 12 maalmood) ee sawirada difaaca jirka (miisaanka bannaan = 100 µm). Qiyaasta sirdoonka macmalka ah ee qaab dhismeedka unugyada wadnaha (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) xaleef/koox kasta oo laga soo qaado doofaarro kala duwan, tijaabada ANOVA hal dhinac ah ayaa la sameeyaa; ####p <0.0001 marka la barbar dhigo D0 iyo ****p <0.0101 Ct. Qiyaasta sirdoonka macmalka ah ee wadajirka qaabdhismeedka unugyada wadnaha (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) xaleef/koox kasta oo doofaarro kala duwan ah, tijaabada ANOVA hal dhinac ah ayaa la sameeyaa; ####p <0.0001 marka la barbar dhigo D0 iyo ****p <0.0101 Ct. Количественная оценка структурной целостности сердечной ткани искусственным интеллектом (n = 7 (D0), 7 (D15), 2 (D15) пот разных свиней, проводится однофакторный тест ANOVA; ####p <0,0001 по сравнению с D0 и ****p <0,0001 пню Qiyaasta qaabdhismeedka qaabdhismeedka unugyada wadnaha iyadoo la adeegsanayo sirdoonka macmal (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) qaybo / kooxo doofaarro kala duwan, tijaabada ANOVA hal dhinac ah ayaa la sameeyay; ####p <0.0001 vs. oo leh D0 iyo ****p <1 marka loo eego D0.00.人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) xabbado/koox kasta oo doofaarro kala duwan ah, hal-way imtixaan ANOVA;#0#0p;#0#0p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) jeex/koox kasta oo doofaarro kala duwan ah, hal-way imtixaan ANOVA;#0#0p;#0#0p 0.0001 与D12 Ctrl 相比） Искусственный интеллект для количественной оценки структурной руппу каждой из разных свиней, односторонний тест ANOVA; ####p <0,0001 vs. D0 Для сравнения ****p <0,0001 пни срав . Sirdoonka macmalka ah si loo qiyaaso qaabdhismeedka qaabdhismeedka unugyada wadnaha (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) qaybo / koox kasta oo doofaarro kala duwan ah, imtixaanka ANOVA hal dhinac ah; ####p <0.0001 vs .D0 marka la barbardhigo ****p <0.000 c Sawirada matalayaasha (bidix) iyo qiyaasidda (midig) ee jeexjeexyada wadnaha ee lagu walaaqay wasakhaynta Masson's trichrome (Scale bare = 500 µm) (n = 10 xabbo/koox kasta oo doofaarro kala duwan ah, tijaabada ANOVA hal dhinac ah ayaa la sameeyaa; ####p <0.0001 marka la barbar dhigo D0 iyo 02 p ***t) c Sawirada matalayaasha (bidix) iyo qiyaasta (midig) ee jeexjeexyada wadnaha ee lagu dhejiyay wasakhaynta trichrome Masson (Scale bare = 500 µm) (n = 10 xaleef / koox kasta oo doofaarro kala duwan ah, tijaabada ANOVA hal-gees ah ayaa la sameeyaa; #### p <0.0001 marka la barbar dhigo D0 iyo ***t 0.1 p. c Репрезентативные изображения сштаб без покрытия = 500 мкм с D0 и ***p <0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c Sawirada matalayaasha (bidix) iyo qiyaasta (midig) ee qaybaha wadnaha ee lagu dhajiyay wasakhaynta trichrome Masson (miisaanka aan daboolin = 500 µm) (n = 10 qaybood / koox doofaarro kala duwan ah, tijaabada ANOVA hal-gees ah ayaa la sameeyay; #### p <0.0001 marka la barbar dhigo D0 iyo ***0p <0.1) c 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像（左）和量化（右）（裸尺度（（右）（裸尺度）（：：）片/组，每组来自不同的猪，进行单向ANOVA 测试；#### p <0.0001 与D0 相比，***p <0.001 C 用 masson 三 色 染料500 µm) （n = 10 个 切片 组 每 组 来自 不同 猪 ， 进行 单向 单向 Anova 测试；#0 ***p <0.001 与D12 Ctrl 相比） c Репрезентативные изображения стая шкала = 500 мкм) (n = 10 срезов/группа. анализа ;### #p <0,0001 по сравнению с D0, ***p <0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c Sawirada matalayaasha (bidix) iyo tirada (midig) ee qaybaha wadnaha ee leh wasakhaynta trichrome Masson (blank = 500 µm) (n = 10 qaybood/koox, mid kasta oo ka mid ah doofaarka kala duwan, oo lagu tijaabiyay falanqayn hal dhinac ah ee kala duwanaanshaha;### # p <0.0001 marka la barbar dhigo D0.0.1)Baararka khaladku waxay matalaan celceliska ± weecanka caadiga ah.
Waxaan qiyaasnay ​​in marka lagu daro unugyo yaryar oo dhexdhexaad ah dhaqanka, daacadnimada kardiomyocyte la wanaajin karo iyo horumarinta fibrosis waa la dhimi karaa inta lagu jiro dhaqanka CTCM.Sidaa darteed waxaanu baarnay unugyo yar-yar anagoo adeegsanayna dhaqamadayada xakameynta joogtada ahDexamethasone (Dex), triiodothyronine (T3), iyo SB431542 (SB) ayaa loo doortay shaashaddan.Unugyadan yar yar ayaa hore loogu isticmaalay dhaqamada hiPSC-CM si ay u kiciyaan korriinka wadnaha unugyada iyadoo la kordhinayo dhererka sarcomere, T-tubules, iyo xawaaraha socodka.Intaa waxaa dheer, labadaba Dex (glucocorticoid) iyo SB ayaa loo yaqaanaa inay xakameeyaan caabuqa29,30.Sidaa darteed, waxaanu tijaabinay in ku darida hal ama isku-darka unugyadan yar-yar ay hagaajinayaan sharafta qaabdhismeedka qaybaha wadnaha.Baaritaanka bilowga ah, qiyaasta xarun kasta waxaa lagu doortay iyadoo lagu salaynayo uruurinta inta badan lagu isticmaalo moodooyinka dhaqanka unugga (1 μM Dex27, 100 nM T327, iyo 2.5 μM SB31).Kadib 12 maalmood oo dhaqan ah, isku darka T3 iyo Dex waxay keeneen qaabdhismeedkii ugu fiicnaa ee cardiomyocyte iyo dib-u-qaabaynta fibreska ugu yar (Tirooyinka dheeriga ah 4 iyo 5).Intaa waxaa dheer, isticmaalka labanlaab ama laba jibaaran uruurintan T3 iyo Dex waxay soo saartay saameyn xun marka loo eego qiyaasta caadiga ah (Jaantuska Dheeraadka ah. 6a,b).
Baadhitaanka hore ka dib, waxaanu samaynay isbarbardhig madax-ilaa-madaxa ah oo ah 4 xaaladood oo dhaqan ah (Jaantuska 4a): Ctrl: Qaybaha wadnaha oo lagu dhaqan geliyay dhaqankeena taagan ee aan hore u sharaxnay anagoo adeegsanayna dhexdhexaadkeena la hagaajiyay;20.21 TD: T3 iyo Ctrl s Added Dex Arbacada;MC: qaybaha wadnaha ee lagu dhaqan geliyey CTCM iyadoo la isticmaalayo dhexdhexaadkeenii hore ee la hagaajiyey;iyo MT: CTCM oo leh T3 iyo Dex oo lagu daray dhexdhexaadinta.Ka dib 12 maalmood oo beerashada, jiritaanka MS iyo unugyada MT waxay ahaan jireen sidii unugyo cusub oo lagu qiimeeyay MTT assay (Jaantus. 4b).Waxa xiiso leh, ku-darka T3 iyo Dex ee dhaqamada transwell (TD) ma aysan keenin horumar la taaban karo oo ku-meel-gaar ah marka la barbardhigo xaaladaha Ctrl, taas oo muujinaysa doorka muhiimka ah ee kicinta farsamada si loo ilaaliyo jiritaanka qaybaha wadnaha.
jaantuska naqshadaynta tijaabada ah ee muujinaya afarta xaaladood ee dhaqameed ee loo isticmaalo in lagu qiimeeyo saamaynta kicinta farsamada iyo kabista T3/Dex ee dhexdhexaadka ah 12 maalmood. b Bar garaafku wuxuu muujinayaa qiyaasta suurtagalnimada 12 maalmood ka dib dhaqanka dhammaan xaaladaha 4 ee 4 (Ctrl, TD, MC, iyo MT) marka la barbar dhigo jeexjeexyada wadnaha cusub (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD iyo D12 MT), 12 (D12 MC) 12 (D12 MC) qaybo kala duwan 01, ###p <0.001 marka la barbar dhigo D0 iyo **p <0.01 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). b Bar garaafku wuxuu muujinayaa qiyaasta suurtagalnimada 12 maalmood ka dib dhaqanka dhammaan xaaladaha 4 ee 4 (Ctrl, TD, MC, iyo MT) marka la barbar dhigo jeexjeexyada wadnaha cusub (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD iyo D12 MT), 12 (D12 MC) 12 (D12 MC) qaybo kala duwan 01, ###p <0.001 marka la barbar dhigo D0 iyo **p <0.01 marka la barbar dhigo D12 ctrl). b Гистограмма показывает количественую оценку ирования (контроль, TD, MC и MT) по сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD) уппу от разных свиней, проводится односторонний тест ANOVA; ####p <0,0001, ###p <0,001 по сравнению с D0 и **1. ). b Shaxda barku waxay muujinaysaa qiyaasta suurtagalnimada 12 maalmood ka dib dhaqanka dhammaan xaaladaha 4 ee 4 (xakamaynta, TD, MC, iyo MT) marka la barbar dhigo qaybaha wadnaha cusub (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD, iyo D12 MT), 12 (D12 MC) qaybo kala duwan. 01, ###p <0.001 vs. D0 iyo **p <0.01 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). b 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC 和MT）与新鲜心脏切片(D0) (n = 18 (D0) 12 MT) ，来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA控制)b 4 12 (D12 MC) b Гистограмма, показывающая все 4 условия культивирования (контроль, TD, MC iyo MT) 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD iyo D12 MT), от разных свиней 12 (D12 MC) срезы/группа, односторонний тест # ANOVA; ###0#p <0, ю с D0, ** p <0,01 по сравнению с контролем D12). b Histogram muujinaya dhammaan xaaladaha 4 ee dhaqanka (control, TD, MC iyo MT) marka la barbar dhigo qaybaha wadnaha cusub (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD iyo D12 MT), ka doofaarro kala duwan 12 (D12 MC) qaybo / koox, hal-way imtixaanka ANOVA, ###0#0. p<0.01 vs. xakamaynta D12). c Bar garaafku wuxuu muujinayaa qiyaasta qulqulka gulukooska 12 maalmood ka dib dhaqanka dhammaan xaaladaha 4 ee dhaqameed (Ctrl, TD, MC, iyo MT) marka la barbar dhigo jeexjeexyada wadnaha cusub (D0) (n = 6 xaleef / koox doofaarro kala duwan ah, tijaabada ANOVA hal dhinac ah ayaa la sameeyaa; ###p <0.001, marka la barbar dhigo D0 iyo ***0p <0.1) c Bar garaafku wuxuu muujinayaa qiyaasta qulqulka gulukooska 12 maalmood ka dib dhaqanka dhammaan xaaladaha 4 ee dhaqameed (Ctrl, TD, MC, iyo MT) marka la barbar dhigo jeexjeexyada wadnaha cusub (D0) (n = 6 xaleef / koox doofaarro kala duwan ah, tijaabada ANOVA hal dhinac ah ayaa la sameeyaa; ###p <0.001, marka la barbar dhigo D0 iyo ***0p <0.1) c Гистограмма показывает количественую ирования (контроль, TD, MC и MT) по сравнению няется тест ANOVA; ###p <0,001 по сравнению с D0 и ***p <0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c Histogram wuxuu muujinayaa qiyaasta qulqulka gulukooska 12 maalmood ka dib dhaqanka iyadoo la raacayo dhammaan xaaladaha 4 ee dhaqameed (control, TD, MC iyo MT) marka la barbar dhigo qaybaha wadnaha cusub (D0) (n = 6 qaybood / koox ka soo jeeda doofaarro kala duwan, tijaabada ANOVA hal dhinac ah ayaa la sameeyay; ###p <0.001 marka la barbar dhigo D0 iyo *** p <0.001 marka la barbar dhigo D1). c 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC 和MT）与新鲜心脏切片(D0) 玡件（Ctrl、TD、Mc通量定量（n = 6 片/组，来自不同猪，单不同猪，单向执行ANOVA . C 条形图 显示 所有 4 种 条件 （（ctrl 、 td 、 mc 和 mt）后 后 12 天 的 通量 定量 （n = 6相比，***p <0.001 与D12 Ctrl 相比）。 c Гистограмма, показывающая количественную оценку потока. льтивирования (контроль, TD, MC и MT) по сравнению. Были проведены тесты ANOVA; ###p <0,001 по сравнению с D0, ***p <0,001 по сравнению с D12 (контроль). c Histogram muujinaysa qiyaasta qulqulka gulukooska ee 12 maalmood ka dib dhaqanka dhammaan xaaladaha 4 ee dhaqanka (control, TD, MC, iyo MT) marka la barbar dhigo qaybaha wadnaha cusub (D0) (n = 6 qaybood / koox, doofaarro kala duwan, hal dhinac Were ANOVA imtixaanada ayaa la sameeyay, ###p <0.001 marka la barbar dhigo D0,1 ***1)d Qorshayaasha falanqaynta cadaadiska ee cusub (buluug), maalinta 12 MC (cagaaran), iyo maalinta 12 MT (casaan) unugyo toban dhibcood oo unug goboleed ah (n = 4 xaleef/koox, tijaabada ANOVA hal dhinac ah; ma jirin farqi weyn oo u dhexeeya kooxaha).Dhulka Volcano oo muujinaya hiddo-sidaha si ka duwan loo muujiyey ee qaybaha wadnaha cusub (D0) marka la barbar dhigo qaybaha wadnaha ee lagu dhaqmo xaaladaha taagan (Ctrl) ama xaaladaha MT (MT) ee 10-12 maalmood.Khariidadda kulaylka ee hiddo-wadaha sarcomere ee qaybaha wadnaha ee lagu dhaqday mid kasta oo ka mid ah xaaladaha dhaqanka.Baararka khaladku waxay matalaan celceliska ± weecanka caadiga ah.
Ku-tiirsanaanta dheef-shiid kiimikaadka ee ka beddelashada oksaydhka aashitada dufanka leh ee loo beddelo glycolysis waa calaamad muujinaysa kala-duwanaanshaha kardhomyocyte.Cardiomyocytes ee aan qaan-gaarin ayaa ugu horreyntii u isticmaala gulukoosta wax soo saarka ATP waxayna leeyihiin mitochondria hypoplastic oo leh cristae5,32 yar.Falanqaynta isticmaalka gulukoosku waxay muujisay in marka la eego xaaladaha MC iyo MT, ka faa'iidaysiga gulukoosku uu la mid yahay midka maalintii 0 (Jaantus 4c).Si kastaba ha noqotee, shaybaarada Ctrl waxay muujiyeen koror weyn oo ku saabsan isticmaalka gulukooska marka la barbar dhigo unug cusub.Tani waxay muujinaysaa in isku-darka CTCM iyo T3/Dex ay kor u qaadayso jiritaanka unugyada waxayna ilaalinaysaa nooca dheef-shiid kiimikaadka ee qaybaha wadnaha ee 12-maalmood.Intaa waxaa dheer, falanqaynta cadaadiska ayaa muujisay in heerarka cadaadisku ay la mid yihiin unugyada wadnaha cusub ee 12 maalmood ee hoos yimaada xaaladaha MT iyo MS (Jaantus. 4d).
Si loo falanqeeyo saamaynta guud ee CTCM iyo T3/Dex ee muuqaalka qoraalka caalamiga ah ee unugyada jeexjeexyada wadnaha, waxaanu ku samaynay RNAseq jeexjeexyada wadnaha ee dhammaan afarta xaaladood ee dhaqameed ee kala duwan (Xogta Dheeraadka 1).Waxa xiisaha lihi leh, qaybaha MT waxay muujiyeen isu ekaanshaha qoraalka sare ee unugyada wadnaha cusub, iyadoo 16 keliya si ka duwan loo muujiyey 13,642 hiddo-wadaha.Si kastaba ha ahaatee, sida aan horay u muujinnay, xaleefyada Ctrl waxay soo bandhigeen 1229 hiddo-sidaha si kala duwan loo muujiyay ka dib 10-12 maalmood ee dhaqanka (Jaantus. 4e).Xogtan waxaa xaqiijiyay qRT-PCR ee hiddo-wadaha wadnaha iyo fibroblast (Jaantuska Dheeraadka ah. 7a-c).Waxa xiiso leh, qaybaha Ctrl waxay muujiyeen hoos u dhigista hiddo-wadaha wareegga wadnaha iyo unugyada iyo firfircoonida barnaamijyada hidda-socodka bararka.Xogtaasi waxay soo jeedinaysaa in kala-duwanaanshaha, kaas oo caadi ahaan dhaca ka dib dhaqanka muddada-dheer, si buuxda loo dhimay xaaladaha MT (Jaantuska Dheeraadka ah. 8a,b).Daraasad taxadar leh oo lagu sameeyay hiddo-wadaha sarcomere ayaa muujisay in kaliya marka la eego xaaladaha MT ay yihiin hiddo-wadaha ku dhejinaya sarcomere (Jaantus. 4f) iyo kanaalka ion (Jaantuska Dheeraadka ah. 9) oo la ilaaliyo, iyaga oo ka ilaalinaya xakamaynta xaaladaha Ctrl, TD, iyo MC.Xogtaasi waxay muujineysaa in isku darka kicinta farsamada iyo kaftanka (T3/Dex), jeexjeexa wadnaha ee qoraalka uu la mid noqon karo jeexjeexyada wadnaha cusub 12 maalmood ka dib dhaqanka.
Natiijooyinkan qoraalka ah waxaa lagu taageeray xaqiiqda ah in qaabdhismeedka qaabdhismeedka wadnaha ee wadnaha ee qaybaha wadnaha ay si fiican u ilaalinayaan xaaladaha MT ee maalmaha 12, sida lagu muujiyay connexin 43 oo sugan iyo kuwa gudaha ah (Jaantus. 5a).Intaa waxaa dheer, fibrosis ee qaybaha wadnaha ee hoos yimaada xaaladaha MT ayaa si weyn hoos loogu dhigay marka la barbardhigo Ctrl oo la mid ah qaybaha wadnaha cusub (Jaantus. 5b).Xogtaasi waxay muujinaysaa in isku-darka kicinta farsamada iyo daaweynta T3/Dex ay si wax ku ool ah u ilaaliso qaab-dhismeedka wadnaha ee qaybaha wadnaha ee dhaqanka.
Sawirada difaaca jirka ee matale ee troponin-T (cagaaran), connexin 43 (casaan), iyo DAPI (buluug) ee qaybaha wadnaha ee hadda go'doonsan (D0) ama la dhaqan ilaa 12 maalmood dhammaan xaaladaha dhaqameed ee afarta qaybood ee wadnaha (bar = 100 µm).). Qiyaasta sirdoonka macmalka ah ee qaab dhismeedka unugyada wadnaha (n = 7 (D0 iyo D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC iyo D12 MT) jeex / koox doofaarro kala duwan ah, tijaabada ANOVA hal dhinac ah ayaa la sameeyaa; ####p <0.0001 marka la barbar dhigo D0 iyo 0 p <0.0 p <0.0p> rl). Qiyaasta sirdoonka macmalka ah ee qaab dhismeedka unugyada wadnaha (n = 7 (D0 iyo D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC iyo D12 MT) xaleef / koox doofaarro kala duwan, hal-jid imtixaanka ANOVA ayaa la sameeyaa; #### p <0.0001 marka la barbar dhigo D0 iyo 0 p <0.0 p <0.0p, 0p,0p,0p,0p,0p,0p,0p,0p,0p,0p,0p,0p iyo D0.0p rl). Количественная оценка структурной целостности ткани сердца с помощью iyo D12 MT) срезов/группу от разных свиней, проведен однофакторный тест ANOVA; 01 по сравнению с D12 Ctrl). Tirada la-habeynta qaabdhismeedka wadnaha iyadoo la adeegsanayo sirdoonka macmalka ah (n = 7 (d0 iyo d12 (d12 mt), d12 mc iyo d12 mc iyo d12 mc iyo d12 mc iyo d12 mc iyo d12.0001.对不同猪的心脏组织结构完整性（n = 7（D0 和D12 Ctrl）、5（D12 TD、D12 MC 和D12 、D12 MC 和D12 MT智能量化，进行单向ANOVA 测试；#### p <0.0001 与D0 和*p <0.05 相比，或****p < 0.0001 与对 不同 猪 的 心脏 结构 完整性 （n = 7 （d0 和 d12 ctrl） （5 （d12 td 、 d12 mc量 化 进行 单向 单向 单向 测试 ； ######### p <0.0001 与D0 )Qiyaasta qaabdhismeedka qaabdhismeedka unugyada wadnaha iyadoo la adeegsanayo sirdoonka macmal ee doofaarka kala duwan (n = 7 (D0 iyo D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC iyo D12 MT) qaybo / koox) oo leh hal dhinac oo tijaabo ANOVA ah;#### p <0,0001 по сравнению с D0 и *p <0,05 или ****p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). #### p <0.0001 marka la barbar dhigo D0 iyo *p <0.05 ama ****p <0.0001 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). b Sawirada iyo qiyaasida jeexjeexyada wadnaha ee lagu walaaqay wasakhaynta trichrome Masson (Scale bar = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, iyo D12 MC), 9 (D12 MT) jeex/koox laga soo qaaday doofaarro kala duwan, hal-way ANOVA imtixaan la barbar dhigay <1###0. .001, ama ****p <0.0001 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). b Sawirada iyo qiyaasida jeexjeexyada wadnaha ee lagu walaaqay wasakhaynta trichrome Masson (Scale bar = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, iyo D12 MC), 9 (D12 MT) jeex/koox laga soo qaaday doofaarro kala duwan, hal-way ANOVA imtixaan la barbar dhigay <1###0. .001, ama ****p <0.0001 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). b Репрезентативные ка = 500 мкм) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD iyo D12 MC), 9 (D12 MT) 0001 по сравнению с D0 и ***p <0,001 ama ****p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). b Sawirada iyo qiyaasida qaybaha wadnaha ee lagu walaaqay wasakhaynta trichrome Masson (skeelka bar = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD iyo D12 MC), 9 (D12 MT) qaybo/koox doofaarro kala duwan ah, sameeyey hal-way ANOVA iyo ###0.0.0. 1 ama ****p <0.0001 vs. D12 Ctrl). b. D12 MC），来自不同猪的9 个（D12 MT）切片/组，进行单因素方差分析；#*##p <0.0001 与或****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比） b 用 masson 三 色 染料 的 心脏 切片、 d12 td 和 d12 mc） 来自 不同 的 9 个 d12 mt 切片 切片切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片/组，进行单因素方差分析；*####p <0.0001 <0.0001或****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比） b Репрезентативные ) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD iyo D12 MC), 9 (D12 MT) 0,001 ama ****p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). b Sawirada matalayaasha iyo qiyaasida qaybaha wadnaha ee lagu shubay masson's trichrome (skeelka bar = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD iyo D12 MC), 9 (D12 MT) qaybo doofaarro/koox kala duwan, hal hab ANOVA; #0##0p <1 ****p <0.0001 marka la barbar dhigo D12 Ctrl).Baararka khaladku waxay matalaan celceliska ± weecanka caadiga ah.
Ugu dambeyntii, awoodda CTCM si ay ugu ekaato hypertrophy wadnaha waxaa lagu qiimeeyay kordhinta fidinta unugyada wadnaha.Gudaha CTCM, cadaadiska qolka hawada ugu sarreeya wuxuu ka kordhay 80 mmHg ilaa 80 mmHg.Fanka.(fidinta caadiga ah) ilaa 140 mmHg Art.(Jaantuska. 6a).Tani waxay u dhigantaa kororka 32% ee fidinta (Jaantus. 6b), kaas oo hore loo muujiyay sida boqolkiiba inta u dhiganta fidinta qaybaha wadnaha si loo gaaro dhererka sarcomere oo la mid ah kan lagu arkay hypertrophy.Fidinta iyo xawaaraha unugyada wadnaha inta lagu jiro foosha iyo nasashada ayaa ahaa mid joogto ah lix maalmood oo dhaqan ah (Jaantus. 6c).Unugyada wadnaha ee ka imanaya xaaladaha MT ayaa la sakhiray fiditaan caadi ah (MT (Caadi)) ama xaalado fidsan (MT (OS)) muddo lix maalmood ah.Horeba afar maalmood ka dib dhaqanka, biomarker hypertrophic NT-ProBNP ayaa si weyn kor loogu qaaday dhexdhexaadinta xaaladaha MT (OS) marka loo eego xaaladaha MT (caadiga ah) (Jaantus. 7a).Intaa waxaa dheer, lix maalmood ka dib dhaqanka, xajmiga unugyada MT (OS) (Jaantus. 7b) ayaa si weyn u kordhay marka loo eego qaybaha MT wadnaha (caadiga ah).Intaa waxaa dheer, NFATC4 beddelka nukliyeerka ayaa si weyn loogu kordhiyay unugyo fidsan (Jaantus. 7c).Natiijooyinkani waxay muujinayaan horumarka horumarka leh ee dib-u-qaabaynta cudurrada ka dib hyperdistension waxayna taageeraan fikradda ah in qalabka CTCM loo isticmaali karo meel lagu barto calaamadaha hypertrophy wadnaha ee fidsan.
Raadka matalayaasha cadaadiska qolka hawada, cadaadiska qolka dareeraha, iyo cabbirada dhaqdhaqaaqa unugyada ayaa xaqiijinaya in cadaadiska qolku uu beddelo cadaadiska qolka dareeraha, taasoo keenta dhaqdhaqaaq u dhigma oo jeexjeexa nudaha.b Boqolkiiba fidsan oo matale ah iyo qalooca heerka fidsan ee qaybaha unugyada sida caadiga ah u fidsan (orange) iyo fidsan (buluug).c Bar garaafka oo muujinaya wakhtiga wareegga (n = 19 xabbo koox kasta, doofaarro kala duwan), wakhtiga foosha (n = 18-19 xabbo koox kasta, doofaarro kala duwan), wakhtiga nasashada (n = 19 xaleef koox kasta, doofaarro kala duwan) ), baaxadda dhaqdhaqaaqa unugyada (n = 14 xaleef / koox, laga bilaabo doofaarro kala duwan), systolic 4 qaybood oo kala duwan, systolic systolic. heerka (n = 14 (D0), 15 (D6) ) qaybo/kooxaha) doofaarro kala duwan), laba-dabo T-tijaabada Ardayga ma muujin farqi la taaban karo ee halbeeg kasta, taasoo muujinaysa in xuduudaha kuwan weli joogto ah inta lagu guda jiro 6 maalmood ee dhaqanka oo koronto.Baararka khaladku waxay matalaan celceliska ± weecanka caadiga ah.
Qiyaasta garaafka garaafka ee NT-ProBNP ee warbaahinta dhaqameed ee ka soo jeeda jeexjeexyada wadnaha ee lagu dhaqo MT caadiga ah (Norm) ama xaaladaha dheeraadka ah (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, iyo D4 MTOS) xaleef / koox doofaarro kala duwan ah, ANOVA laba-geesood ah ayaa la sameeyaa. Qiyaasta garaafka garaafka ee NT-ProBNP ee warbaahinta dhaqameed ee ka soo jeeda jeexjeexyada wadnaha ee lagu dhaqay MT caadiga ah (Norm) ama xaaladaha dheeraadka ah (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, iyo D4 MTOS) xaleef / koox doofaarro kala duwan ah, ANOVA laba-dhinac ah ayaa la sameeyay.Histogram-ka tirada ee NT-ProBNP ee dhexdhexaadinta dhaqanka laga soo bilaabo jeexjeexyada wadnaha ee lagu dhaqo xaaladaha caadiga ah ee MT stretch (caadiga ah) ama xad-dhaafka (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, iyo D4) MTOS) xaleef / koox doofaarro kala duwan, falanqaynta laba arrimood ayaa la sameeyaa;**p <0,01 по сравнению с нормальным растяжением). ** p <0.01 marka la barbar dhigo fidinta caadiga ah). a 在MT 正常拉伸(Norm) 或过度拉伸(OS) 条件下培养的心脏切片培养基中NT-ProBNP rm),3（D2 MTOS、D4 MTNorm 和D4 MTOS）来自不同猪的切片/组，进行双向方差分析；**与手析；**与︎：1 . Qiyaasta xoojinta NT-ProBNP ee jeexjeexyada wadnaha ee hoos yimaada MT-ga caadiga ah (Norm) ama xaaladaha dheeraadka ah (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm和D4 MTOS) oo ka kala duwan ed leh iskala bax caadi ah, p <0.01).histogram-ka qiyaasta NT-ProBNP ee jeexjeexyada wadnaha ee lagu dhaqo xaaladaha caadiga ah ee MT-ga caadiga ah (caadiga ah) ama xad-dhaafka (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm) iyo D4 MTOS) jeex / koox doofaarro kala duwan, falanqaynta laba-dhinac ee kala duwanaanta;**p <0,01 по сравнению с нормальным растяжением). ** p <0.01 marka la barbar dhigo fidinta caadiga ah). b Sawirada matalayaasha ee jeexjeexyada wadnaha ee lagu walaaqay troponin-T iyo WGA (bidix) iyo cabbirka cabbirka unugga (midig) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) unugyo/koox ka kooban 10 xabbo oo kala duwan oo doofaarro kala duwan ah, T-tijaabo Laba-dabo leh ayaa la sameeyaa; 0****p <0) b Sawirada matalayaasha ee jeexjeexyada wadnaha ee lagu walaaqay troponin-T iyo WGA (bidix) iyo cabbirka cabbirka unugga (midig) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) unug/koox ka kooban 10 xabbo oo kala duwan oo doofaarro kala duwan ah, T-tijaabo laba-gees leh oo arday ah ayaa la sameeyaa; 0****p <0) b Репрезентативные к (справа) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) клеток/групу из 10 разныh ****p <0,0001 по сравнению с нормальным растяжением). b Sawirada matalayaasha ee qaybaha wadnaha ee lagu walaaqay troponin-T iyo AZP (bidix) iyo cabbirka cabbirka unugga (midig) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) unugyo/koox ka kooban 10 qaybood oo kala duwan oo doofaarro kala duwan ah, laba-dabo leh t-tijaabo Ardayga ayaa la sameeyay marka la barbar dhigo 00 p. b 用肌钙蛋白-T 和WGA（左）和细胞大小量化（右）染色的心脏切片的代）和细胞大小量化（右）染色的心脏切片的代表，3：来自不同猪的10 个不同切扇的369 ) b Sawirada matale ee jeexjeexyada wadnaha ee lagu walaaqay calcarein-T iyo WGA (bidix) iyo cabbirka unugga (midig) (n = 330 (D6 MTOS), 369 laga bilaabo 10 xabbo oo kala duwan b Репрезентативные а) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) из 10 различных срезов от разных 01 по сравнению с нормальным растяжением). b Sawirada matalayaasha ee qaybaha wadnaha ee lagu walaaqay troponin-T iyo AZP (bidix) iyo cabbirka cabbirka unugga (midig) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) oo ka socda 10 qaybood oo kala duwan oo doofaarro kala duwan ah****p <0.0001 marka loo eego cadaadiska caadiga ah). c Sawirada matalayaasha ee maalinta 0 iyo maalinta 6 MTOS jeexjeexyada wadnaha oo loo calaamadeeyay troponin-T iyo NFATC4 iyo qiyaasidda u wareejinta NFATC4 ee xudunta CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) jeex / koox doofaarro kala duwan ah, Ardayga Laba-dabo leh ayaa sameeyay t. - 5. c Sawirada matalayaasha ee maalinta 0 iyo maalinta 6 MTOS jeexjeexyada wadnaha oo loo calaamadeeyay troponin-T iyo NFATC4 iyo qiyaasidda u wareejinta NFATC4 ee xudunta CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) jeexjeexyo / koox doofaarro kala duwan, Laba-dabo leh waa 0. c Репрезентативные NFATC4 тьюдента; *p <0,05). c Sawirada matalayaasha ee qaybaha wadnaha ee 0 iyo 6 maalmood MTOS, oo loo calaamadeeyay troponin-T iyo NFATC4, iyo qiyaasidda NFATC4 beddelka xudunta unugyada godadka (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) jeexjeexyo / koox doofaarro kala duwan ah) waxay sameeyeen laba-tailed Stutest;p <0.05). C 用于肌钙蛋白-T 和NFATC4 免疫标记的第0 天和第6 天MTOS易位至CM 细胞核的量化（n = 4 (D0)、3 (D6 MTOS) 切片/组, 进行双尾学生t 检验；*p) c Sawirada matalayaasha calcanin-T iyo NFATC4 immunolabeling 第0天和第6天MTOS jeexjeexyada wadnaha, iyo NFATC4 ee NFATC4 kala duwan学生et 电影；*p <0.05). c Репрезентативные ранслокации NFATC4 в ядра CM от разных свиней (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) срез/группа, два- хвостатый t-критеридет, 5 <0. c Sawirada matalayaasha ah ee MTOS jeexjeexyada wadnaha ee maalinta 0 iyo 6 ee troponin-T iyo NFATC4 immunolabeling iyo qiyaasidda NFATC4 ee u beddelashada xudunta CM ee doofaarka kala duwan (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) xabbado / koox, laba-dabo t -scriter; 0 'Student.Baararka khaladku waxay u taagan yihiin celceliska weecanka caadiga ah.
Cilmi-baarista wadnaha iyo xididdada tarjumaadda waxay u baahan tahay moodooyinka gacanta oo si sax ah u soo saara jawiga wadnaha.Daraasaddan, qalab CTCM ayaa la sameeyay oo lagu sifeeyay kicin kara qaybaha ultrathin ee wadnaha.Nidaamka CTCM waxaa ka mid ah kicinta elektiroonigga ah ee physiological ahaan la mid ah iyo T3 iyo kobcinta dareeraha Dex.Marka qaybaha wadnaha ee porcin ay la kulmaan arrimahan, jiritaankooda, daacadnimadooda qaab dhismeedka, dhaqdhaqaaqa dheef-shiid kiimikaadka, iyo muujinta qoraalka ayaa la mid ah sida unugyada wadnaha cusub ka dib 12 maalmood ee dhaqanka.Intaa waxaa dheer, fidinta xad dhaafka ah ee unugyada wadnaha waxay keeni kartaa hypertrophy wadnaha oo ay keento hyperextension.Guud ahaan, natiijooyinkani waxay taageerayaan doorka muhiimka ah ee xaaladaha dhaqanka jireed si ay u ilaaliyaan dabeecadda wadnaha ee caadiga ah waxayna bixiyaan goob lagu baaro daroogada.
Arrimo badan ayaa gacan ka geysta abuurista jawi ku habboon shaqada iyo badbaadada wadnaha iyo unugyada.Waxyaabaha ugu cad cad ee arrimahan ka mid ah waxay la xiriiraan (1) isdhexgalka unugyada, (2) kicinta elektiroonigga ah, (3) arrimo kaftan ah, iyo (4) substrates dheef-shiid kiimikaad.Isdhexgalka unug-ilaa-unug-fisiyooloji wuxuu u baahan yahay shabakado saddex-geesood ah oo kakan oo ah noocyo unugyo badan oo ay taageerayaan matrix-ka-ka-baxsan.Is dhexgalka gacanta ee adag ee noocan oo kale ah way adag tahay in dib loo dhiso in vitro iyadoo la wadaago dhaqanka noocyada unugyada gaarka ah, laakiin si fudud ayaa loo gaari karaa iyadoo la adeegsanayo dabeecadda organotypic ee qaybaha wadnaha.
Kala-baxa makaanikada iyo kicinta korantada ee wadnomyocytes ayaa muhiim u ah ilaalinta phenotype wadnaha33,34,35.Iyadoo kicinta farsamada si weyn loogu isticmaalay hiPSC-CM qaboojinta iyo korriinka, dhowr daraasadood oo qurux badan ayaa dhowaan isku dayay kicinta farsamada ee jeexjeexyada wadnaha ee dhaqanka iyadoo la adeegsanayo loading uniaxial.Daraasadahaani waxay muujinayaan in 2D uniaxial loading mechanical ay saameyn togan ku leedahay phenotype ee wadnaha inta lagu jiro dhaqanka.Daraasadahaan, qaybaha wadnaha waxaa lagu raray isometric tensile Forces17, loading toosan auxotonic18, ama wareegga wadnaha ayaa dib loo abuuray iyadoo la adeegsanayo jawaab celinta tamarta beddelka iyo kicinta xiisadda.Si kastaba ha ahaatee, hababkani waxay isticmaalaan fidinta unugyada uniaxial iyada oo aan la hagaajin deegaanka, taasoo keentay in la xakameeyo hiddo-wadaha wadnaha oo badan ama xad-dhaaf ah ee hiddo-wadaha la xidhiidha jawaabaha fidinta aan caadiga ahayn.CTCM-ga halkan lagu sharraxay waxa uu bixiyaa kicinta korantada 3D kaas oo u ekaysiinaya wareegga wadnaha ee dabiiciga ah marka la eego wakhtiga wareegga iyo fidinta jireed (25% fidsan, 40% systole, 60% diastole, iyo 72 garaac daqiiqaddii).Inkasta oo kicinta farsamada ee saddex-geesoodka ah oo keliya aysan ku filneyn in la ilaaliyo jiritaanka unugyada, isku-dhafka kaftanka iyo kicinta farsamada iyadoo la adeegsanayo T3 / Dex ayaa looga baahan yahay si ku filan si loo ilaaliyo jiritaanka unugyada, shaqada, iyo daacadnimada.
Qodobbada kaftanku waxay door muhiim ah ka ciyaaraan habaynta phenotype wadnaha ee qaangaarka.Tan waxaa lagu muujiyay daraasadaha HiPS-CM kuwaas oo T3 iyo Dex lagu daray warbaahinta dhaqanka si loo dardargeliyo korriinka unugyada.T3 waxaa laga yaabaa inay saameyn ku yeelato gaadiidka amino acids, sokorta iyo kalsiyumka guud ahaan xuubabka unugyada36.Intaa waxaa dheer, T3 waxay kor u qaadaysaa muujinta MHC-α iyo MHC-β hoos u dhigista, kor u qaadista samaynta myofibrils-ka degdega ah ee wadnaha baaluq marka la barbardhigo myofibrils-ka tartiib tartiib ah ee CM uurjiifka.Yaraanta T3 ee bukaanada hypothyroid-ka waxay keentaa luminta xadhkaha myofibrillar iyo hoos u dhaca horumarinta codka37.Dex waxay u shaqeysaa soo-dhoweeyayaasha glucocorticoid-ka waxaana la muujiyey inay kordhiso qanjidhada myocardial ee quluubta go'doonsan;38 Horumarkan waxaa loo maleynayaa inuu la xiriiro saameynta gelitaanka kaalshiyamka dhigaalka-dhigista (SOCE) 39,40.Intaa waxaa dheer, Dex waxay ku xidhan tahay reseptors-keeda, taasoo keenta jawaab-celin ballaaran oo gudaha ah oo xakameynaya shaqada difaaca iyo caabuqa30.
Natiijooyinkayagu waxay muujinayaan in kicinta farsamada jireed (MS) ay hagaajisay waxqabadka guud ee dhaqanka marka la barbar dhigo Ctrl, laakiin waxay ku guuldareysatay inay ilaaliso jiritaanka, sharafta qaabdhismeedka, iyo muujinta wadnaha muddo 12 maalmood ah dhaqanka.Marka la barbar dhigo Ctrl, ku darida T3 iyo Dex ee dhaqamada CTCM (MT) waxay wanaajiyeen jiritaankooda waxayna ilaaliyeen muuqaalada qoraalka la mid ah, daacadnimada qaabdhismeedka, iyo dhaqdhaqaaqa dheef-shiid kiimikaadka leh unug cusub oo wadnaha ah muddo 12 maalmood ah.Intaa waxaa dheer, iyada oo la xakameynayo heerka fiditaanka unugyada, qaabka hypertrophy wadnaha ee hyperextension ayaa la sameeyay iyadoo la adeegsanayo STCM, taasoo muujinaysa habka STCM.Waa in la ogaadaa in inkasta oo dib-u-habaynta wadnaha iyo fibrosis ay inta badan ku lug leeyihiin xubno aan toos ahayn kuwaas oo unugyada wareegga ah ay ku siin karaan cytokines ku habboon iyo sidoo kale phagocytosis iyo arrimo kale oo dib-u-habeyn ah, qaybaha wadnaha ayaa wali la jaan qaadi kara habka fibrotic ee ka jawaab celinta cadaadiska iyo dhaawaca.galay myfibroblasts.Tan hore ayaa loogu qiimeeyay qaabkan jeexjeexa wadnaha.Waa in la ogaadaa in cabirrada CTCM lagu beddeli karo iyada oo la beddelo cadaadiska / baaxadda korantada iyo soo noqnoqda si loo ekaysiiyo xaalado badan sida tachycardia, bradycardia, iyo taageerada wareegga wareegga (wadnaha makaaniga aan raran).Tani waxay nidaamka ka dhigaysaa mid dhexdhexaad ah oo lagu baaro daroogada.Awoodda CTCM in ay ku daydo hypertrophy-ka wadnaha ee xad-dhaafka ah ayaa waddada u xaaraya tijaabinta nidaamkan daaweynta shakhsi ahaaneed.Gabagabadii, daraasadda hadda jirta waxay muujinaysaa in fidinta farsamada iyo kicinta kaftanka ay muhiim u tahay ilaalinta dhaqanka qaybaha unugyada wadnaha.
In kasta oo xogta halkan lagu soo bandhigay ay soo jeedinayso in CTCM ay tahay madal rajo-gelin leh oo lagu qaabeeyo myocardium-ka saxda ah, habkan dhaqanku waxa uu leeyahay xaddidaadyo.Xaddidaadda ugu weyn ee dhaqanka CTCM waa in ay ku soo rogto culeysyo farsamo oo firfircoon oo joogto ah jeexyada, taas oo meesha ka saaraysa awoodda si firfircoon ula socota foosha jeexjeexyada wadnaha inta lagu jiro wareeg kasta.Intaa waxaa dheer, iyada oo ay ugu wacan tahay cabbirka yar ee qaybaha wadnaha (7 mm), awoodda lagu qiimeeyo shaqada systolic ee ka baxsan hababka dhaqanka iyadoo la adeegsanayo dareemayaasha xoogga dhaqameed waa xaddidan tahay.Qoraal-gacmeedka hadda jira, waxaan qayb ahaan ka gudubnay xaddidan annagoo qiimeynayna danab indhaha sida tilmaame shaqada qandaraasle.Si kastaba ha ahaatee, xaddidani waxay u baahan doontaa shaqo dheeraad ah waxaana laga yaabaa in wax laga qabto mustaqbalka iyadoo la soo bandhigayo hababka kormeerka indhaha ee shaqada jeexjeexyada wadnaha ee dhaqanka, sida khariidaynta indhaha iyadoo la adeegsanayo kalsiyum iyo midabyo xasaasi ah.Xaddidaadda kale ee CTCM waa in qaabka shaqadu aanu maamulin walbahaarka jireed (horay iyo rarista dambe).Gudaha CTCM, cadaadiska ayaa loo kiciyay jihooyin ka soo horjeeda si loo soo saaro 25% fidinta jireed ee diastole (fiditaan buuxa) iyo systole (dhererka foosha inta lagu jiro kicinta korantada) unugyo aad u waaweyn.Xaddidaaddan waa in laga saaraa naqshadaha CTCM ee mustaqbalka iyadoo cadaadis ku filan la saarayo unugyada wadnaha ee labada dhinac iyo iyadoo la adeegsanayo xiriirka saxda ah ee cadaadiska-mugga ee ka dhaca qolalka wadnaha.
Dib-u-habaynta xad-dhaafka ah ee ay keentay ee lagu soo sheegay qoraal-gacmeedkan ayaa ku kooban in la ekaysiiyo calaamadaha hypertrophic hyperstretch.Sidaa darteed, qaabkani wuxuu ka caawin karaa daraasadda calaamadaha hypertrophic ee fidsan ee fidsan iyada oo aan loo baahnayn arrimo kaftan ah ama neerfaha (kuwaas oo aan ka jirin nidaamkan).Daraasado dheeraad ah ayaa loo baahan yahay si loo kordhiyo tirada badan ee CTCM, tusaale ahaan, la-dhaqanka unugyada difaaca jirka, wareegga wareegga dhiigga ee plasma, iyo innervation marka la wadaago unugyada neerfaha waxay hagaajin doontaa suurtogalnimada in lagu qaabeeyo cudurka CTCM.
Saddex iyo toban doofaar ayaa loo adeegsaday daraasaddan.Dhammaan hababka xayawaanka waxaa loo sameeyay si waafaqsan tilmaamaha hay'adaha waxaana ansixiyay Jaamacadda Louisville Hay'adda Xannaanada Xoolaha iyo Guddiga Isticmaalka.Xididka xididada xididada waa la isku dhejiyay waxaana wadnaha lagu shubay 1 L oo ah wadnaha wadnaha oo nadiif ah (110 mM NaCl, 1.2 mM CaCl2, 16 mM KCl, 16 mM MgCl2, 10 mM NaHCO3, 5 U/mL heparin, pH ilaa 7.4); Wadnaha waxaa lagu xafiday xal wadne xanuunka qabow-qabow ilaa la geynayo shaybaarka barafka oo inta badan ah <10 min. Wadnaha waxaa lagu xafiday xal wadne xanuunka qabow-qabow ilaa la geynayo shaybaarka barafka oo inta badan ah <10 min. сердца хранили в ледяном кардиоплегическом растворе. Wadnaha waxa lagu kaydiyay xal wadne xanuunka qabow-qabow ilaa inta loo qaadayo shaybaadhka barafka, kaas oo inta badan qaata <10 min.将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟。将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟。 Держите сердца в ледяной кардиоплегии до транспортировки в лабораторию на льду, обычно <10 мин. Qalbiyada ku hay wadnaha wadnaha ee barafka ilaa inta aad shaybaarka u qaadayso barafka, badanaa <10 daqiiqo.
Qalabka CTCM waxaa lagu sameeyay software-ka SolidWorks-ka-caawinta kombuyuutarka (CAD).Qolalka dhaqanka, qaybiyayaal iyo qolalka hawadu waxay ka samaysan yihiin CNC caag cad oo akril ah.Giraan 7mm dhexroorka ah ayaa laga sameeyay cufnaanta sare ee polyetylen (HDPE) ee xarunta waxayna leedahay o-ring jeexdin si ay u dejiso o-ring silikoon loo isticmaalo in lagu xidho warbaahinta hoosteeda.Xuub silica dhuuban ayaa ka sooca qolka dhaqanka iyo saxanka kala soocida.Xuubka silikoonku waa leys laga jaray 0.02 ″ xaashi silikoon ah oo dhumucdiisuna tahay 35A.Gacks silikoon hoose iyo kan sare waa laser laga soo gooyay 1/16 ″ xaashida silikoon dhumucdiisuna waxay leeyihiin adayg 50A.316L birta aan fiicnayn iyo lawska garabka ayaa loo isticmaalaa in lagu xidho block iyo abuurista shaabad aan hawo lahayn.
Guddi wareeg oo daabacan oo go'an (PCB) ayaa loogu talagalay in lagu dhex daro nidaamka C-PACE-EM.Xidhiidhiyaha mashiinka Swiss ee PCB-ga waxay ku xiran yihiin electrodes graphite by fiilooyin naxaas ah oo qalin ah iyo 0-60 naxaas ah oo lagu xidhay electrodes-ka.Qalabka wareegga daabacan waxaa lagu dhejiyaa daboolka daabacaha 3D.
Qalabka CTCM waxaa gacanta ku haya dhaq-dhaqaaqa pneumatic pneumatic (PPD) kaas oo abuura cadaadis wareeg ah oo la kantaroolo oo la mid ah wareegga wadnaha.Marka cadaadiska gudaha qolka hawadu uu kordho, xuubka silikoon ee dabacsan ayaa kor u sii fidaya, taas oo ku qasbeysa dhexdhexaadinta hoosta goobta nudaha.Meesha nudaha ayaa markaa la kala bixin doona cayrintan dareeraha ah, iyada oo la jaanqaadaysa ballaarinta jireed ee wadnaha inta lagu jiro diastole.Marka ugu sarraysa ee nasashada, kicinta korantada ayaa lagu dabaqay iyada oo loo marayo electrodes graphite, taas oo hoos u dhigtay cadaadiska qolka hawada oo sababay qandho qaybaha unugyada.Tuubada dhexdeeda waxaa ku yaal waalka hemostatic oo leh dareeraha cadaadiska si loo ogaado cadaadiska nidaamka hawada.Cadaadiska uu dareemo dareeraha cadaadiska waxaa lagu dabaqaa xog aruuriyaha ku xiran laptop-ka.Tani waxay u oggolaaneysaa la socodka joogtada ah ee cadaadiska gudaha qolka gaaska.Markii cadaadiska qolka ugu badnaan la gaarey (heerka 80 mmHg, 140 mmHg OS), aaladda helitaanka xogta waxaa lagu amray inay u dirto calaamada nidaamka C-PACE-EM si ay u soo saarto calaamadda korantada biphasic ee 2 ms, oo loo dejiyay 4 V.
Qaybaha wadnaha ayaa la helay iyo xaaladaha dhaqanka ee ceelasha 6 ayaa la sameeyay sida soo socota: U wareeji qalbiyada la goostay weelka wareejinta una wareeji saxan ka kooban qabow (4 ° C.) wadnaha wadnaha.Hawo-mareenka bidix waxaa lagu go'doomiyay daab nadiif ah oo la jarjaray 1-2 cm3.Unugyadan unugyada waxaa lagu dhejiyay taageerada unugyada oo leh xabagta unugyada waxaana lagu dhejiyay qubeys unug microtome ah oo gariiraya oo ay ku jiraan xalka Tyrode iyo si joogto ah oksijiin (3 g / L 2,3-butanedione monooxime (BDM), 140 mM NaCl (8.18 g) . ), 6 mM KCl (0.1400 g.M), 1-6 g. S (2.38 g), 1 mM MgCl2 (1 ml 1 M xal), 1.8 mM CaCl2 (1.8 ml 1 M xal), ilaa 1 L ddH2O).Microtome gariiraya waxaa loo dejiyay in la gooyo 300 µm xaleef qaro weyn inta jeer ee 80 Hz, baaxadda gariirka toosan ee 2 mm, iyo heerka hore ee 0.03 mm/s.Qubeyska nudaha waxaa ku wareegsanaa baraf si uu xalku u qaboojiyo heerkulkana waxaa lagu ilaaliyay 4°C.Ku wareeji qaybaha nudaha qubayska mikrotome una wareeji qubeyska soo-jiidashada oo ay ku jirto si joogto ah oksijiin leh xalka Tyrode ee barafka ilaa qaybo ku filan laga helo hal saxan oo dhaqameed.Dhaqamada transwell, qaybaha unugyada waxaa lagu dhejiyay 6 mm oo nadiif ah taageerooyinka polyurethane ballaaran waxaana lagu meeleeyay 6 ml oo dhexdhexaad ah oo la hagaajiyay (199 dhexdhexaad ah, 1x ITS supplement, 10% FBS, 5 ng / ml VEGF, 10 ng / ml FGF-alkaline iyo 2X antibiyootiko-antifungal).Kicinta korantada (10 V, inta jeer ee 1.2 Hz) ayaa lagu dabaqay qaybaha unugyada iyada oo loo marayo C-Pace.Xaaladaha TD, T3 cusub iyo Dex ayaa lagu daray 100 nM iyo 1 μM isbeddel kasta oo dhexdhexaad ah.Dhexdhexaadiyaha waxaa lagu buuxiyaa ogsijiin ka hor beddelka 3 jeer maalintii.Qaybaha unugyada waxaa lagu beeray kubatar ku jira 37°C iyo 5% CO2.
Dhaqamada CTCM, qaybaha unugyada waxaa lagu dhejiyay daabacaha 3D ee gaarka loo sameeyay oo ku jira saxan Petri oo ka kooban xalka Tyrode oo la bedelay.Qalabka waxaa loogu talagalay in lagu kordhiyo xajmiga jeexjeexa wadnaha 25% ee aagga giraanta taageerada.Tan waxaa loo sameeyaa si qaybaha wadnuhu aysan u fidin ka dib marka laga soo wareejiyo xalka Tyrode ee dhexdhexaadka ah iyo inta lagu jiro diastole.Isticmaalka xabagta histoacrylic, qaybaha 300 µm qaro weyn ayaa lagu dhejiyay giraanta taageerada 7 mm dhexroor.Ka dib markaad ku dhejisid qaybaha nudaha giraanta taageerada, jar qaybaha nudaha dheeraadka ah oo ku dheji qaybaha unugyada ku dheji qubayska xalka Tyrode ee barafka (4 ° C) ilaa qaybo ku filan loo diyaariyey hal qalab.Wadarta wakhtiga habaynta qalabka oo dhan waa in aanu ka badnayn 2 saacadood.Ka dib markii 6 qaybood oo unugyo ah lagu xidhay siddooyinkooda taageerada, aaladda CTCM waa la ururiyey.Qolka dhaqanka ee CTCM waxaa horay loogu sii buuxiyey 21 ml oo dhexdhexaad ah oo oksijiin hore leh.U wareeji qaybaha nudaha qolka dhaqanka oo si taxadar leh uga saar goobooyin hawo leh pipette.Qaybta nudaha ayaa markaa lagu hagayaa daloolka oo si tartiib ah loogu riixaa meesha.Ugu dambeyntii, dhig daboolka korantada qalabka oo ku wareeji qalabka ku-beeraha.Kadibna ku xidh CTCM tuubada hawada iyo nidaamka C-PACE-EM.Dhaqdhaqaaqa pneumatic-ka ayaa furma oo waalka hawadu wuxuu furay CTCM.Nidaamka C-PACE-EM waxaa loo habeeyay inuu keeno 4 V at 1.2 Hz inta lagu guda jiro labajibbaaran ee 2 ms.Dhexdhexaadiyaha waxaa la bedelay laba jeer maalintii iyo electrodes-ka ayaa la bedelay hal mar maalintii si looga fogaado ku urursan graphite on electrodes.Haddii loo baahdo, qaybaha unuggu waa laga saari karaa ceelasha dhaqanka si loo soo saaro xumbo hawo ah oo ku soo hoos dhacday.Xaaladaha daawaynta MT, T3/Dex waxaa lagu daray mid cusub oo leh isbeddel dhexdhexaad ah oo kasta oo leh 100 nM T3 iyo 1 μM Dex.Aaladaha CTCM waxaa lagu beeray kubatar ku jira 37°C iyo 5% CO2.
Si loo helo dariiqyada fidsan ee jeexjeexyada wadnaha, nidaam kamarad gaar ah ayaa la sameeyay.Kamarada SLR (Canon Rebel T7i, Canon, Tokyo, Japan) ayaa loo adeegsaday Navitar Zoom 7000 18-108mm lens makro (Navitar, San Francisco, CA).Aragtida waxaa lagu sameeyay heerkulka qolka ka dib markii lagu bedelay dhexdhexaadinta dhexdhexaad cusub.Kamaradu waxay ku taagan tahay xagal 51° fiidyahana waxa lagu duubay 30 fiim ilbiriqsikii.Marka hore, software il furan (MUSCLEMOTION43) ayaa lagu isticmaalay Image-J si loo qiyaaso dhaqdhaqaaqa jeexjeexyada wadnaha.Maaskarada waxaa la abuuray iyadoo la adeegsanayo MATLAB (MathWorks, Natick, MA, USA) si loo qeexo gobollada xiisaha u leh garaacista jeexjeexyada wadnaha si looga fogaado buuqa.Maaskaro gacanta loo qaybiyay ayaa lagu dabaqayaa dhammaan sawirada qaab qaabaysan ka dibna loo gudbiyaa muruqa.Dhaqdhaqaaqa Murqaha wuxuu isticmaalaa celceliska xoojinta pixels ee jir kasta si loo qiyaaso dhaqdhaqaaqiisa marka loo eego qaabka tixraaca.Xogta waa la duubay, la sifeeyay oo loo isticmaalay in lagu qiyaaso wakhtiga wareegga iyo qiimaynta fiditaanka nudaha inta lagu jiro wareegga wadnaha.Fiidiyowga la duubay ayaa dib loo habeeyey iyadoo la adeegsanayo shaandhada dhijitaalka ah ee wejiga koowaad ee eber.Si loo qiyaaso fiditaanka nudaha (ugu sarraysa-ilaa-ugu sarreysa), falanqaynta ugu sarreysa-ilaa-ugu sarreysa ayaa la sameeyay si loo kala saaro meelaha ugu sarreeya iyo marinnada calaamadaha la duubay.Intaa waxaa dheer, detrending ayaa la sameeyaa iyadoo la adeegsanayo nidaamka 6aad ee kala-duwanaanshaha si loo baabi'iyo leexashada calaamadaha.Koodhka barnaamijka waxaa lagu sameeyay MATLAB si loo go'aamiyo dhaqdhaqaaqa unugyada caalamiga ah, wakhtiga wareegga, wakhtiga nasashada, iyo wakhtiga foosha (Barnaamijka Dheeraadka ah ee Xeer 44).
Falanqaynta culeyska, iyadoo la adeegsanayo fiidiyowyo isku mid ah oo loo sameeyay qiimeynta fidinta farsamada, waxaan marka hore raadinay laba sawir oo matalaya meelaha ugu sarreeya ee dhaqdhaqaaqa (ugu sarreeya (sare) iyo kan hoose (hoose) ee dhaqdhaqaaqa) sida uu qabo software MUSCLEMOTION.Ka dib waanu kala qaybinay gobollada unugyada waxaanan isticmaalnay qaab algorithmeedka hadhka ah unugga qaybsan (Jaantuska Dheeraadka ah 2a).Unugyada kala qaybsan ayaa markaa loo qaybiyay toban qaybood oo hoose, culayska dusha kastana waxaa lagu xisaabiyay iyadoo la isticmaalayo isla'egta soo socota: Strain = (Sup-Sdown)/Sdown, halkaasoo Sup and Sdown ay yihiin masaafada qaabka ee hooska sare iyo hoose ee dharka, siday u kala horreeyaan (Sawir Dheeraad ah .2b).
Qaybaha wadnaha ayaa lagu hagaajiyay 4% paraformaldehyde 48 saacadood.Unugyada go'an ayaa fuuqbaxay 10% iyo 20% sukrose 1 saac, ka dibna 30% sukrose habeenkii.Qaybaha ayaa markaa lagu dhex-xidhay isku-xidhka heer-kulka ugu wanaagsan (OCT compound) oo si tartiib tartiib ah loogu qaboojiyey qubeyska isopentane/qalalan baraf ah.Ku kaydi baloogyada dhejiska ee OCT at -80 °C ilaa kala-goynta.Islaaydhyo ayaa loo diyaariyey sidii qaybo dhumucdiisu tahay 8 μm.
Si aad OCT uga saartid qaybaha wadnaha, kuleyli boggaga kuleyliyaha 95 °C 5 daqiiqo.Ku dar 1 ml PBS silid kasta oo ku dhufo 30 daqiiqo heerkulka qolka, ka dibna daadi qaybaha adigoo dejinaya 0.1% Triton-X gudaha PBS 15 daqiiqo heerkulka qolka.Si aad uga hortagto unugyada difaaca jirka ee aan gaarka ahayn inay ku xidhaan muunada, ku dar 1 ml oo ah 3% BSA xal silid oo ku rid 1 saac heerkulka qolka.Ka dib BSA waa laga saaray waxaana lagu dhaqay boodhadhka PBS.Sambal kasta ku calaamadee qalin.Unugyada difaaca aasaasiga ah (oo lagu qasi jiray 1:200 gudaha 1% BSA) (connexin 43 (Abcam; #AB11370), NFATC4 (Abcam; #AB99431) iyo troponin-T (Thermo Scientific; #MA5-12960) ayaa lagu daray in ka badan 90 daqiiqo ama F.0. 488 (Thermo Scientific; #A16079), liddi ku ah bakaylaha Alexa Fluor 594 (Thermo Scientific; #T6391) 90 daqiiqo oo dheeraad ah ayaa lagu maydhay 3 jeer PBS Si loo kala saaro wasakhaynta bartilmaameedka ee asalka ah, waxaan u isticmaalnay kaliya antibody-ka sare sida xakamaynta. nification) iyo Keyence mikroskoob oo leh 40x weyneyn.
WGA-Alexa Fluor 555 (Thermo Scientific; #W32464) ee 5 μg/ml ee PBS ayaa loo isticmaalay midabaynta WGA waxaana lagu marsiiyay qaybo go'an 30 daqiiqo heerkulka qolka.Bogagga ayaa markaa lagu maydhay PBS, Suudaan madow ayaa lagu daray bog kasta waxaana lagu duray 30 daqiiqo.Bogagga ayaa markaa lagu maydhay PBS waxaana lagu daray dhex dhexaadinta vectashield.Sawirada waxaa lagu arkay mikroskoob Keyence ah oo 40x weyneynaya.
OCT ayaa laga saaray muunadaha sida kor lagu sharaxay.Ka dib markaad meesha ka saarto OCT-da, dhex geli sawirada Bouin's xal habeen gudihii.Sawirada waxaa lagu dhaqay biyo nadiif ah 1 saac ka dibna waxaa lagu riday bibrich aloe acid fuchsin 10 daqiiqo ah.Kadibna sawirada waxaa lagu dhaqay biyo nadiif ah waxaana lagu dhejiyay xal 5% phosphomolybdenum/5% phosphotungstic acid ah 10 daqiiqo.Adiga oo aan biyo raacin, si toos ah ugu wareeji xaashida xalalka buluuga ah ee aniline ilaa 15 daqiiqo.Kadibna sawirada waxaa lagu dhaqay biyo nadiif ah waxaana lagu riday 1% xal acid acetic 2 daqiiqo.Sawirada waxaa lagu qallajiyey 200 N ethanol waxaana loo wareejiyay xylene.Sawirro midab leh ayaa lagu sawiray iyadoo la isticmaalayo mikroskoob Keyence ah oo leh ujeedo 10x ah.Boqolkiiba aagga Fibrosis waxaa lagu qiyaasey iyadoo la isticmaalayo software Analyzer Keyence.
CyQUANT™ MTT Jiritaanka Unugyada Assay (Invitrogen, Carlsbad, CA), lambarka buugga V13154, marka loo eego borotokoolka soo-saaraha oo leh xoogaa wax ka beddel ah.Gaar ahaan, feerka qalliinka ee dhexroorkiisu yahay 6 mm ayaa la isticmaalay si loo xaqiijiyo cabbirka unugyada isku midka ah inta lagu jiro falanqaynta MTT.Unugyada si gaar ah ayaa loogu dhejiyay ceelasha saxan 12-ceel ah oo ay ku jiraan substrate MTT sida uu qabo borotokoolka soo saaraha.Qaybaha waxa lagu beeray 37°C. muddo 3 saacadood ah iyo nudaha nooluhu waxa ay dheefshiidaan substrate-ka MTT si ay u sameeyaan isku-dhismeed guduudan.Ku beddel xalka MTT 1 ml DMSO oo ku rid 37 °C 15 daqiiqo si aad u soo saarto farmazan guduudan qaybaha wadnaha.Muunado ayaa lagu qasi jiray 1:10 gudaha DMSO ee 96-si fiican oo saxan hoose ah oo cad iyo midabka midabka guduudan oo lagu qiyaasay 570 nm iyadoo la adeegsanayo akhristaha saxanka Cytation (BioTek).Wax-akhrinta ayaa caadi laga dhigay miisaanka jeex kasta oo wadnaha ah.
Warbahinta jeexjeexa wadnaha waxaa lagu bedelay warbaahin ka kooban 1 μCi/ml [5-3H] -glucose (Moravek Biochemicals, Brea, CA, USA) si loo qiimeeyo isticmaalka gulukooska sida horay loo sharaxay.Ka dib 4 saacadood ka dib, ku dar 100 µl dhexdhexaad ah tuubo microcentrifuge furan oo ka kooban 100 µl of 0.2 N HCl.Kadib tuubada waxaa la dhex geliyey tuubo wax lagu sawiro oo ka kooban 500 μl oo dH2O si ay u uumibaxdo [3H] 2O 72 saacadood at 37°C.Kadibna ka saar tuubada microcentrifuge tuubada wax lagu sawiro oo ku dar 10 ml oo dareere ah.Tirooyinka scintillation waxaa lagu sameeyay iyadoo la adeegsanayo Tri-Carb 2900TR dareeraha scintillation analyzer (Shirkadda Packard Bioscience, Meriden, CT, USA).Ka faa'iidaysiga gulukooska ayaa markaa la xisaabiyay iyada oo la tixgalinayo [5-3H] -waxqabadyada gaarka ah ee gulukooska, dheellitirka aan dhamaystirnayn iyo asalka, milanka [5-3H] - gulukoosta aan la calaamadin, iyo waxtarka kahortagga scintillation.Xogtu waxay caadi u tahay tirada qaybaha wadnaha.
Ka dib isu-soo-noqoshada unugyada Trizol, RNA waxaa laga go'doomiyay qaybaha wadnaha iyadoo la adeegsanayo Qiagen miRNeasy Micro Kit #210874 sida uu qabo borotokoolka soo saaraha.Diyaarinta maktabadda RNAsec, isku xigxiga iyo falanqaynta xogta ayaa loo sameeyay sida soo socota:
1 μg oo RNA ah muunadkiiba ayaa loo isticmaalay sidii qalab bilow ah oo loogu talagalay diyaarinta maktabadda RNA.Maktabadaha isku xigxiga ayaa la sameeyay iyadoo la adeegsanayo NEBNext UltraTM RNA Kit Preparation Kit ee Illumina (NEB, USA) iyadoo la raacayo talooyinka soo-saaraha, iyo koodhadhka tusmooyinka ayaa lagu daray taxanaha sifada muunad kasta.Si kooban, mRNA waxaa laga sifeeyay wadarta RNA iyadoo la isticmaalayo kuulo birlab ah oo ku xiran poly-T oligonucleotides.Burburinta waxaa lagu fuliyaa iyadoo la isticmaalayo kala duwanaansho heerkul sare ah NEBNext First Strand Synthesis Reaction Buffer (5X).Xariggii kowaad cDNA waxa lagu farsameeyay iyadoo la isticmaalayo random hexamer primers iyo M-MuLV reverse transcriptase (RNase H-).Xadhkaha labaad ee cDNA ayaa markaa la farsameeyaa iyada oo la adeegsanayo DNA-ga polymerase I iyo RNase H. Hadhaaga dusha sare waxaa loo rogaa cidhifyo aan fiicneyn iyadoo la adeegsanayo exonuclease/polymerase.Ka dib markii la diidey 3′ dhamaadka jajabka DNA-ga, adabtarada NEBNext oo leh qaab dhismeedka timaha biin ayaa ku dheggan si loogu diyaariyo isku-dhafka.Xulashada jajabyada cDNA ee dhererka la doorbidayo 150-200 bp.Qaybaha maktabadda ayaa lagu sifeeyay iyadoo la isticmaalayo nidaamka AMPure XP (Beckman Coulter, Beverly, USA).Kadib, 3 μl USER Enzyme (NEB, USA) oo leh cDNA cabir-dooran oo ku xidhan adabtarada ayaa la isticmaalay 15 daqiiqo at 37°C ka dibna 5 daqiiqo at 95°C kahor PCR.PCR ka dib waxaa lagu sameeyay iyadoo la adeegsanayo Pusion High-Fidelity DNA polymerase, PCR-ga caalamiga ah, iyo tilmaanta (X).Ugu dambeyntii, alaabada PCR waa la nadiifiyey (Nidaamka AMPure XP) iyo tayada maktabadda oo lagu qiimeeyay nidaamka Agilent Bioanalyzer 2100.Maktabadda cDNA ayaa markaa la isku xigxigay iyadoo la adeegsanayo taxanaha Novaseq.Faylasha sawirka ceeriin ee Illumina ayaa loo beddelay akhrinta cayriin iyadoo la isticmaalayo CASAVA Base Calling.Xogta ceyriinka ah waxaa lagu kaydiyaa qaabka FASTQ(fq) oo ka kooban taxanaha akhrinta iyo tayada aasaasiga ah ee u dhiganta.Dooro HISAT2 si aad ula mid noqoto taxanaha la shaandheeyay ee loo akhriyo genome tixraaca Sscrofa11.1.Guud ahaan, HISAT2 waxay taageertaa genomes kasta oo cabbir ah, oo ay ku jiraan genome ka weyn 4 bilyan oo saldhig, iyo qiyamka caadiga ah ayaa loo dejiyey inta badan xuduudaha.Kala qaybinta akhrinta xogta RNA Seq si hufan ayaa loo waafajin karaa iyadoo la adeegsanayo HISAT2, nidaamka ugu dhaqsaha badan ee hadda la heli karo, isla markaana ka saxsan qaab kasta oo kale.
Badanaa qoraallada ayaa si toos ah uga tarjumaya heerka muujinta hidde-sidaha.Heerarka muujinta hidda-wadaha waxaa lagu qiimeeyaa tirada badan ee qoraallada (tirinta taxanaha) ee la xidhiidha genome ama exons.Tirada akhrintu waxay u dhigantaa heerarka muujinta hidde-sidaha, dhererka hidda-wadaha, iyo qoto-dheeraanta isku xigxiga.FPKM (jarjarooyinka kunkii lammaane ee saldhigga ah ee qoraallada isku xigxiga ee hal milyan oo saldhig ah) ayaa la xisaabiyay iyo P-qiyamka muujinta kala duwanaanta ayaa lagu go'aamiyay iyadoo la adeegsanayo xirmada DSeq2.Waxaan markaas xisaabinay heerka daahfurka beenta ah (FDR) ee qiima kasta P iyadoo la adeegsanayo habka Benjamini-Hochberg9 oo ku salaysan shaqada R-ku-dhisan ee "p.adjust".
RNA oo ka go'day qaybaha wadnaha ayaa loo beddelay cDNA iyadoo la eegayo 200 ng/μl iyadoo la adeegsanayo SuperScript IV Vilo Master mix ka Thermo (Thermo, bisad. 11756050).Tirada RT-PCR waxaa lagu sameeyay iyadoo la adeegsanayo Applied Biosystems Endura Plate Microamp 384-si fiican saxan falcelin hufan (Thermo, bisad. 4483319) iyo koollada indhaha ee microamp (Thermo, bisad. 4311971).Isku darka falcelinta ayaa ka koobnayd 5 µl Taqman Fast Advanced Master mix (Thermo, bisad # 4444557), 0.5 µl Taqman Primer iyo 3.5 µl H2O isku qasan halkii ceel.Wareegyada qPCR ee caadiga ah ayaa la orday waxaana la qiyaasay qiyamka CT iyadoo la adeegsanayo aaladda Biosystems Quantstudio 5 ee waqtiga-dhabta ah PCR (module 384-well; alaabta # A28135).Qoryaha Taqman waxaa laga soo iibiyay Thermo (GAPDH (Ss03375629_u1), PARP12 (Ss06908795_m1), PKDCC (Ss06903874_m1), CYGB (Ss06900188_m1), RGL1 (Ss060_01) mH), GATA4 (Ss03383805_u1), GJA1 (Ss03374839_u1), COL1A2 (Ss03375009_u1), COL3A1 (Ss04323794_m1), ACTA2 (Ss0424558)
Siideynta warbaahinta ee NT-ProBNP waxaa lagu qiimeeyay iyadoo la isticmaalayo xirmada NT-ProBNP (doofaarka)Si kooban, 250 µl muunad kasta iyo halbeeg kasta ayaa lagu daray nuqul ka mid ah ceel kasta.Isla markiiba ka dib marka lagu daro muunada, ku dar 50 µl ee Assay Reagent A ceel kasta.Si tartiib ah u rux saxanka oo ku xidh dabool.Ka dibna kaniiniyada waxaa lagu duray 37 ° C 1 saac.Ka dib hammi xalka oo ku maydh ceelasha 4 jeer 350 µl oo ah 1X xal dhaqid, ku rid xalinta 1-2 daqiiqo mar kasta.Dabadeed ku dar 100 µl ee Assay Reagent B ceelkiiba kuna dabool saxan saxan ah.Kiniinka si tartiib ah ayaa loo ruxay waxaana lagu duray heerkul ah 37 ° C 30 daqiiqo.Dami xalka oo ku dhaq ceelasha 5 jeer 350 µl oo ah 1X xal dhaqid ah.Ku dar 90 µl oo xal substrate ah ceel kasta oo xidh saxanka.Ku rid saxanka heerkulka 37 ° C 10-20 daqiiqo.Ku dar 50 µl Stop Solution ceel kasta.Saxanka ayaa isla markiiba la cabiray iyadoo la isticmaalayo saxan akhriyaha Cytation (BioTek) oo lagu dhejiyay 450 nm.
Falanqaynta awoodda ayaa la sameeyay si loo doorto cabbirrada kooxda kuwaas oo bixin doona> 80% awoodda lagu ogaanayo 10% isbeddelka saxda ah ee cabbirka oo leh 5% heerka qaladka Nooca I. Falanqaynta awoodda ayaa la sameeyay si loo doorto cabbirrada kooxda kuwaas oo bixin doona> 80% awoodda lagu ogaanayo 10% isbeddelka saxda ah ee cabbirka oo leh 5% heerka qaladka Nooca I. Анализ мощности ения параметра с 5% частотой ошибок типа I. Falanqaynta awoodda ayaa la sameeyay si loo doorto cabbirrada kooxeed ee bixin doona> 80% awoodda lagu ogaanayo 10% isbeddelka cabbirka saxda ah oo leh 5% heerka qaladka Nooca I.进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％I变化和5％I变匔和5％I型给。进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％I变化和5％I变匔和5％I型给。 Был проведен анализ мощности для выбора размера группы менения параметров iyo 5% частоты ошибок типа I. Falanqaynta awoodda ayaa la sameeyay si loo doorto cabbir kooxeed oo bixin doonta> 80% awood lagu ogaanayo 10% isbeddelka saxda ah iyo 5% heerka qaladka nooca I.Qaybaha unugyada ayaa si aan kala sooc lahayn loo doortay tijaabada ka hor.Dhammaan falanqeyntu waxay ahaayeen kuwo indho la'aan ah, shaybaarradana waxaa la go'aamiyay kaliya marka dhammaan xogta la falanqeeyo.GraphPad Prism software (San Diego, CA) ayaa loo isticmaalay in lagu sameeyo dhammaan falanqaynta tirakoobka. Dhammaan tirakoobyada, p-qiimaha ayaa loo tixgeliyey inay muhiim u yihiin qiyamka <0.05. Dhammaan tirakoobyada, p-qiimaha waxaa loo tixgeliyey inay muhiim u yihiin qiyamka <0.05. Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. Dhammaan tirakoobyada, p-qiimaha waxaa loo tixgeliyey inay muhiim u yihiin qiyamka <0.05.对于所有统计数据，p 值在值<0.05 时被认为是显着的。对于所有统计数据，p 值在值<0.05 时被认为是显着的。 Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. Dhammaan tirakoobyada, p-qiimaha waxaa loo tixgeliyey inay muhiim u yihiin qiyamka <0.05.Imtixaanka t-Ardayga laba-dabo leh ayaa lagu sameeyay xogta iyadoo la barbardhigay 2 keliya.Hal-jid ama laba-jid ANOVA ayaa la isticmaalay si loo go'aamiyo muhiimadda u dhaxaysa kooxo badan.Marka la samaynayo imtixaanada hoc post, Tukey sixitaankiisa waxa lagu dabaqay xisaabta isbarbardhigga badan.Xogta RNAsec waxay leedahay tixgalin gaar ah oo tirakoobka marka la xisaabinayo FDR iyo p.adjust sida lagu qeexay qaybta Hababka.
Macluumaad dheeraad ah oo ku saabsan naqshadeynta daraasadda, eeg Warbixinta Cilmi-baarista Dabeecadda ee la taaban karo ee ku xiran maqaalkan.