„Никада не сумњајте да мала група промишљених, посвећених грађана може променити свет. У ствари, то је једина која постоји.“
Куреусова мисија је да промени дугогодишњи модел медицинског објављивања, у којем подношење истраживачких радова може бити скупо, сложено и дуготрајно.
Плазма богата тромбоцитима/prp, регенерација ткива, активација тромбоцита, глукозно-пролиферативна терапија, тромбоцити, пролиферативна терапија
Цитирајте овај чланак као: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (17. мај 2022) Утицај глукозе на број и запремину тромбоцита: импликације за регенеративну медицину. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
Плазма богата тромбоцитима (PRP) и хипертонични раствори глукозе се често користе за ињекције у регенеративној медицини, понекад заједно. Ефекат хипертоничног глукозе на лизу и активацију тромбоцита није раније објављен. Тестирали смо ефекат повишених концентрација глукозе на број тромбоцита и еритроцита, као и на запремину ћелија у PRP и пуној крви (WB). Брзо делимично смањење броја тромбоцита догодило се код свих смешa глукозе помешаних са PRP или пуном крвљу, што је у складу са делимичном лизом. Након првог минута, број тромбоцита је остао стабилан, што указује на брзу акомодацију резидуалних тромбоцита до екстремне (>2000 mOsm) хипертоничности. Након првог минута, број тромбоцита је остао стабилан, што указује на брзу акомодацију резидуалних тромбоцита до екстремне (>2000 mOsm) хипертоничности. После прве минуте количество тромбоцитов оставалось стабилно, что указује на биструу аккомодациу остальних тромбоцитов до екстремног (>2000 мОсм) хипертонуса. Након првог минута, број тромбоцита је остао стабилан, што указује на брзу акомодацију преосталих тромбоцита до екстремне (>2000 mOsm) хипертоничности.第一分钟后,血小板计数保持稳定,表明残余血小板迅速适应极端（> 2000. мОсм）高渗状态.2000 мОсм）高渗状态. После прве минуте количество тромбоцитов оставалось стабилно, что указује на биструу адаптациу остальних тромбоцитов к екстремальному (>2000 мОсм) гиперосмоларном состоаниу. Након првог минута, број тромбоцита је остао стабилан, што указује на брзу адаптацију резидуалних тромбоцита на екстремно (>2000 mOsm) хиперосмоларно стање.Концентрације глукозе од 25% и више довеле су до значајног повећања средње запремине тромбоцита (MPV), што указује на рану фазу активације тромбоцита. Потребна су даља истраживања како би се утврдило да ли долази до лизе или активације тромбоцита и да ли хипертонична ињекција глукозе сама или у комбинацији са PRP може пружити додатну клиничку корист.
Педесетих година прошлог века, амерички хирург Џорџ Хакет је открио да може трајно ублажити болове у зглобовима и леђима код многих пацијената убризгавањем пролиферативног раствора у тетиве и лигаменте. Његови експерименти на зечевима показали су да третман, који је назвао пролиферативном терапијом, узрокује увећање и јачање тетива. Хистолошке студије су потврдиле да се током овог процеса производи нови колаген [1].
Током првих неколико деценија, испробана су многа различита решења за дистрибуцију. До 1990-их, већина лекара је сматрала високе концентрације глукозе најбезбеднијом и најефикаснијом методом. Међутим, механизам деловања остаје нејасан.
Мало клиничких студија је спроведено у 20. веку након Хакетовог рада. Међутим, у 2000-им годинама дошло је до обновљеног интересовања и завршено је неколико успешних клиничких испитивања пролиферативне терапије за лечење болова у доњем делу леђа [2], остеоартритиса колена [3] и латералног епикондилитиса [4].
Регенерација ткива захтева учешће матичних ћелија. Стога, високе концентрације глукозе морају некако изазвати миграцију, репликацију и диференцијацију матичних ћелија. Претпостављамо да тромбоцити могу деловати као гласници и да високе концентрације глукозе могу узроковати да тромбоцити ослобађају цитокине и факторе раста, чиме се подстичу регенеративни процеси, посебно миграција матичних ћелија у подручја са високим концентрацијама глукозе.
Активација тромбоцита увек претходи повећању интрацелуларног калцијума [5]. Лиу и др. су 2008. године показали да високи нивои глукозе повећавају активност канала канонског типа 6 (TRPC6) пролазног рецепторског потенцијала у плазма мембрани, што доводи до прилива јона калцијума у ​​тромбоците [6]. Друга студија је показала да излагање маргиналне зоне микротубула јонима калцијума изазива релаксацију, ширење и деформацију маргиналне зоне, што заузврат узрокује промену облика из диска у сферни, што резултира средњом запремином тромбоцита (MPV) [7].
Наша хипотеза у овој студији је да излагање тромбоцита високим концентрацијама глукозе утиче на маргиналну зону микротубула и интрацелуларно окружење, што доводи до повећања МПВ.
Сви учесници су потписали образац информисаног пристанка након што су им објашњени детаљи студије и пре него што су примили узорке. У овој студији коришћени су само PRP узорци са хематокритом већим од 2% како би се број еритроцита и средња запремина црвених крвних зрнаца (MCV) могли укључити ради поређења.
Студија је спроведена у четири фазе, прва фаза је била PRP, а преостале фазе су биле пуна крв (Табела 1). Као што је претходно описано [8], све релативне центрифугалне силе (RCF, g-сила) су израчунате из средње тачке (Rmid, у цм) крвне колоне у центрифугалном шприцу. Одабрали смо MPV као маркер сензибилизације тромбоцита и број тромбоцита као индикатор потенцијалне лизе тромбоцита, што се може лако измерити на стандардним хематолошким анализаторима.
У првој фази, 47 волонтера је дало узорке крви - једну епрувету са етилендиаминтетрасирћетном киселином (ЕДТА) и један узорак пуне крви са ПРП-ом (антикоагулиран натријум цитратом (NaCl, 3%)) (Табела 1). Одмах ставите клацкалицу у епрувету. Комплетна крвна слика (ККС) је урађена на узорцима ЕДТА у три примерка, а узорци NaCl су анализирани у три примерка за анализу ККС, а затим је ПРП припремљен различитим методама описаним горе [8]. Сви узорци ПРП су припремљени центрифугирањем на 900–1000 g. Мешајте сваки узорак ПРП-а на вортекс мешалици 5–10 секунди, а затим поделите пет аликвота од 0,5 ml у епрувете.
Да би се проценио ефекат изложености тромбоцитима на повишене концентрације глукозе, једнаке количине (0,5 мл) 0%, 5%, 12,5%, 25% и 50% глукозе у води помешане су са узорцима тромбоцита да би се добиле концентрације смеше глукозе од 0%, 2,5%, 6,25%, 12,5% ​​и 25%, а епрувете су мешане на мућкалици за епрувете током 15 минута. TAC сваке смеше је анализиран у три примерка након 15 минута. Број тромбоцита (PLT), број еритроцита, MCV и MPV су усредњени за сваку епрувету, а средњи број тромбоцита, број еритроцита, MCV и MPV су израчунати за све PRP узорке.
Након завршетка прве фазе прикупљања података, приметили смо значајно повећање запремине тромбоцита у PRP тромбоцитима након додавања D50W. PRP тромбоцити не представљају нужно све тромбоците у крви, а PRP медијум се разликује од WB медијума. Стога смо одлучили да спроведемо другу фазу испитивања ефекта додавања D50W у пуну крв.
За други круг, изабрали смо величину узорка од 30 на основу резултата из прве серије, као што је описано у одељку Анализа. У овој серији, 20 добровољаца је дало узорке крви (Табела 1). Пуна крв (1,8 мл) је увучена у шприц од 3 мл и антикоагулирана са 0,2 мл 40% NaCl. Шприц са пуном крвљу је мешан пет секунди вртлог миксером, а комплетна крвна слика је анализирана у три примерка. Након анализе, антикоагулирана крв је додата у 2 мл 50% глукозе у шприцу од 5 мл (коначна концентрација глукозе је била приближно 25% (Д25)) и стављена у епрувету за мућкање на 30 минута. Након 30 минута, Д25/КМС у шприцевима са собом су анализирани у три примерка. Број тромбоцита, број еритроцита, MCV и MPV по шприцу су усредњени, а средње вредности PLT, број еритроцита, MCV и MPV су израчунате за сваки узорак пре и после додавања глукозе.
Пошто су тромбоцити у пуној крви обично изложени хипертоничној глукози током пролиферативне глукозне терапије због минимално инвазивне ињекције, и није уобичајено комбиновати PRP са хипертоничном глукозом непосредно пре ињекције, одлучили смо да проучимо хипертоничну глукозу у комбинацији са WB у Одељку 1. Трећи и четврти корак. У свакој фази, 20 волонтера је донирало 7-8 мл ACD-A (киселина која садржи тринатријум цитрат (22,0 г/л), лимунску киселину (8,0 г/л) и глукозу (24,5 г/л), раствор декстроза цитрата) за антикоагуланте у крви (Табела 1). Само смеше глукозе веће од 12,5% коришћене су за одређивање граничног процента повезаног са повећањем MPV. У трећој фази, 1 мл крви се ставља у епрувету. Затим мешајте крв на вртложном миксеру 10 секунди додавањем 1 мл 30% глукозе, 40% глукозе или 50% глукозе у епрувету да бисте добили коначну концентрацију глукозе од 15%, 20% и 25%, респективно. Узорци крви са глукозом су анализирани на комплетну крвну слику одмах након мешања и понављани свака два минута током 30 минута.
Током почетног мешања, додавање 1:1 хипертоничног глукозе и WB или PRP излаже тромбоците концентрацијама изнад 25% током неколико секунди. У четвртом кораку, да бисмо проценили ефекат хипертоничног глукозе са минималним почетним вршним концентрацијама и тестирали горњу границу ефекта глукозе, додали смо само малу количину крви у D25W или D50W. Ставили смо 1 ml D25W или D50W у епрувету и додали 0,2 ml WB док сте мешали узорак на вортексу 10 секунди. У овим случајевима, крв је била изложена глукози у концентрацији приближно 20% изнад коначне концентрације, а не 50% изнад коначне концентрације као у Фази 3, што је резултирало коначним концентрацијама глукозе од 20,8% и 41,6%. Мешани узорци су анализирани у истом временском интервалу као у кораку 3.
У првом кораку сваке серије разблаживања глукозе, узето је 30 узорака, јер је то била одговарајућа величина узорка за пилот студију [9]. На крају сваке фазе (укључујући и прву фазу), процените адекватност величине узорка користећи формулу која се користи за одређивање величине узорка потребне за процену средње вредности континуиране исходне променљиве у једној популацији. Формула n = Z2 x SD2 /E2. У овој једначини, Z је Z-скор, SD је стандардна девијација, а E је жељена грешка [10]. Наша алфа је 0,05, што одговара Z вредности од 1,96, и очекујемо грешку од 5 (у процентима). Стога решавамо за n = (1,962 x SD2)/52. Резултати су показали да је величина узорка потребна за сваку фазу била мања од стварног прикупљеног броја.
Током периода 1, 3 и 4, користећи више од једне концентрације глукозе, ефекат различитих концентрација глукозе анализиран је поређењем фракционе промене између времена 0 и сваког наредног времена (фаза 1 у 15 минута, период 3 у 15 минута). и четири у 15 секунди, затим свака два минута.) Брзине промена за сваки временски период упоређене су коришћењем Ман-Витнијевог U-теста јер подаци нису пратили нормалну расподелу како је одређено Шапиро-Вилковим тестом нормалности. Пошто је у првом, трећем и четвртом кораку (укупно пет) извршена анализа 1-према-1 неколико група (пет), извршена је Бонферонијева корекција да би се жељена алфа вредност подесила на ≤0,01, али не ≤0,05.
Смањење броја тромбоцита са свим концентрацијама хипертонске декстрозе и повећање MPV у PRP тромбоцитима при концентрацији декстрозе >12,5%: Број PRP тромбоцита је порастао од једног до пет пута веће концентрације у поређењу са почетном пуном крвљу, варирајући у зависности од методе (није приказано). Смањење броја тромбоцита са свим концентрацијама хипертонске декстрозе и повећање MPV у PRP тромбоцитима при концентрацији декстрозе >12,5%: Број PRP тромбоцита је порастао од једне до пет пута веће концентрације у поређењу са почетном пуном крвљу, варирајући у зависности од методе (није приказано). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрацијах гипертоничне декстрози и увеличение МПВ в тромбоцитах ПРП при концентрацијах декстрози > 12,5%: количество тромбоцитов ПРП увеличило в 1-5 раз по сравнениу с исходној целичној кровьу, в зависности од метода (не показано). Смањен број тромбоцита при свим хипертоничним концентрацијама декстрозе и повећан MPV у PRP тромбоцитима при концентрацији декстрозе >12,5%: Број PRP тромбоцита се повећао 1-5 пута у поређењу са почетном пуном крвљу, у зависности од методе (није приказано). ).在> 12,5% 的葡萄糖浓度下, 所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数, ПРП 迀中台МП增加：与基线全血相比, ПРП 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍, 因方法而，因方法而， При концентрацији глукозе >12,5% ​​, висока концентрација глукозе смањује крвну слику, PRP крвни MPV се повећава: у поређењу са 与基线全血, PRP крвна слика се повећава од 1 до 5 пута у односу на концентрацију (није описано). При концентрацијах глукози >12,5% све концентрације хипертоничне гликозе снижали су број тромбоцитов, а МПВ повишали у тромбоцитама ПРП: број тромбоцитов ПРП увеличало се од 1- до 5-кратних концентрација по сравњењу с исходним концентрацијама целичне крви, у зависности од методе (не описано). При концентрацијама глукозе >12,5%, све хипертензивне концентрације глукозе смањиле су број тромбоцита и повећале МПВ у тромбоцитима примењеним на ПРП: број тромбоцита примењених на ПРП повећао се 1 до 5 пута у поређењу са почетним концентрацијама у пуној крви, у зависности од методе (као што је описано).Слика 1 показује да се број тромбоцита смањио за скоро 75% након разблаживања у води и за 20-30% након 15 минута разблаживања са различитим концентрацијама глукозе у поређењу са основним PRP и разблаживањем 1:1 прилагођеним запремини (1- k1 са корекцијом запремине). k -1 размножавање).1 размножавање).
Број ћелија у сваком разблажењу изражава се као део оригиналног броја пре разблаживања.
МПВ се минимално смањио током производње ПРП, без даље промене концентрације разблажења на 12,5% у води или глукози (укључујући 25% смеше ПРП глукозе) и повећао се за више од 20% након разблажења у 50% раствору глукозе (Сл. 2). Насупрот томе, еритроцити нису показали значајну промену запремине ни при једном другом разблажењу осим Х2О.
Просечна запремина ћелија у сваком разблажењу изражава се као проценат оригиналне запремине пре разблаживања.
Слично, али мање изражено смањење броја тромбоцита и повећање CVR примећени су код пацијената са БЦ изложених 50% глукози (за формулацију са 25% глукозе). Табела 2 упоређује број ћелија и запремину ћелија у пуној крви разблаженој у 50% декстрози са подацима PRP фазе 1 разблаженим у 50% декстрози. Промене у броју еритроцита и MCV еритроцита нису биле очигледне и нису биле у фокусу наше пажње.
SD = стандардна девијација, MD = средња разлика између група, SE = стандардна девијација средње разлике, RBC = еритроцити, PLT = тромбоцити, PRP = плазма богата тромбоцитима, WB = пуна крв
Након додавања D50W у WB, проценат губитка тромбоцита прилагођен разблажењу био је 7,7% (310±73 наспрам 286±96) у поређењу са 17,8% за разблажење PRP у D50W (664±348 наспрам 544±277). MPV WB се повећао за 16,8% (са 10,1 ± 0,5 на 11,8 ± 0,6), док се MPV PRP повећао за 26% (9,2 ± 0,8 наспрам 11,6 ± 0,7). Иако су средње разлике у смањењу броја тромбоцита и повећању MPV биле значајно веће код PRP, промене у смањењу броја тромбоцита унутар WB биле су готово значајне (310 ± 73 на 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), а повећање MPV је било значајно (10,1 ± 0,5 на 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Иако су средње разлике у смањењу броја тромбоцита и повећању MPV биле значајно веће код PRP, промене у смањењу броја тромбоцита унутар WB биле су готово значајне (310 ± 73 на 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), а повећање MPV је било значајно (10,1 ± 0,5 на 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Иако су средње разлике у смањењу броја тромбоцита и повећању CVR биле значајно веће код PRP, промене у смањењу броја тромбоцита унутар WB биле су готово значајне (310 ± 73 на 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).повећање МПВ било значительно (от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) п < 0,001). повећање МПВ је било значајно (са 10,1 ± 0,5 на 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管ПРП 在血小板计数减少和МПВ 增加方面的平均差异显着更大，但ВБ内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%)；п = .06）和МП的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) п < 0,001).尽管 ПРП 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 板 叅减少 的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%) ； п = 0,06）和МПВ 的嘢1 的寞0. ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Промена у смањењу броја тромбоцита унутар WB била је готово значајна (са 310 ± 73 на 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), иако је PRP имао значајно веће средње разлике у смањењу броја тромбоцита и повећању MPV, а повећање MPV је било значајно.(од 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (од 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Коначна концентрација глукозе од 20% била је потребна да би се видела значајна промена у MPV, али је промена у MPV била израженија при коначној концентрацији од 25%. Губитак тромбоцита се стабилизовао након почетног пада. Приметили смо почетни нагли пад CVR, међутим, CVR се брзо обнављао при коначној концентрацији глукозе од 25%, што је било значајно више од нивоа CVR примећених при коначним концентрацијама глукозе од 20% и 15% (Слика 3 и лево од Табеле 3; осенчени оквири). означавају p-вредности ≤ алфа са Бонферонијевом корекцијом од 0,01). Такође је дошло до почетног наглог пада броја PLT, примећеног у почетној фази од 0-15 с, а затим је остао стабилан (од 15 с до 30 мин; лево од Табеле 4).
Додавање различитих концентрација глукозе у пуну крв резултирало је почетним брзим смањењем MPV, након чега је уследио опоравак зависан од концентрације од преко 20%. Легенда приказује концентрацију глукозе након разблаживања. D15, D20 и D25 су спроведени у разблажењу 1:1. D21 и D41 су спроведени у разблажењу 1:5.
Табела 4 приказује промену броја тромбоцита када се разблажи у хипертоничној глукози. Уочили смо зависну везу од дозе између тренутног пада броја PLT при разблажењу 1:1 и при разблажењу 1:5. Упоређујући разблажења 1:1 као једну групу са разблажењима 1:5, група 1:1 је имала тренутно смањење броја тромбоцита мање него група 1:5 - 66±48.000 (23%) у односу на 99±69.000 (37%), p = 0,014) у групи 1:5. Након почетног пада на првој тачки мерења, број тромбоцита као проценат глукозе се стабилизовао (Слика 4).
Када се пуна крв дода глукози у односу 1:1, број тромбоцита се смањује за око 25%. Међутим, када је пуна крв додата у односу 1:5, смањење је било много веће – око 50%.
Резултати за 41% глукозе су повећали МПВ брже и драматичније него за 25% или 21% МПВ. Код свих осталих разблажења није примећено тренутно почетно смањење МПВ након додавања 50% глукозе. При коришћењу 25% глукозе (концентрација глукозе 20,8% при коначном разблажењу), промена МПВ је била упоредива са променом 20% глукозе при разблажењу 1:1 (Слика 3). Иако су промене МПВ у почетку биле веће при мешовитој концентрацији од 41% него при 25%, разлика у МПВ између 41% и 25% након 16 минута више није била значајна (Табела 3, десно). Такође је занимљиво да је 25% глукозе повећало МПВ ефикасније од 20,8%.
Ова ин витро студија је делимично потврдила нашу хипотезу. Показао је потенцијалну делимичну лизу тромбоцита додатком декстрозе, брзу акомодацију тромбоцита до екстремне хипертоничности и значајан пораст МПВ као одговор на концентрације хипертонске декстрозе веће од 25%. Показао је потенцијалну делимичну лизу тромбоцита додатком декстрозе, брзу акомодацију тромбоцита до екстремне хипертоничности и значајан пораст МПВ као одговор на концентрације хипертонске декстрозе веће од 25%. Он показао потенциальниј частичниј лизис тромбоцитов примесьу декстрози, биструу аккомодациу тромбоцитов до екстремального гипертонуса и знатное повишење МПВ в ответ на хипертоническу концентрацију декстрози > 25%. Показао је потенцијалну делимичну лизу тромбоцита декстрозом, брзу акомодацију тромбоцита до екстремне хипертоничности и значајно повећање МПВ као одговор на хипертонични ниво декстрозе >25%.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗,以及响应> 25% 浓度的高渗葡萄糖时МПВ 显着上升。它 显示 出 通过 葡 萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适店 适应 鞁竑响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 мпв 显着。。。。. Он показује потенцијални частичниј лизис тромбоцитов смесами с глукозом, биструу адаптациу тромбоцитов к екстремальному хипертонусу и знатное повећање МПВ-а при концентрацији хипертоничне гликозе > 25%. Показује потенцијалну делимичну лизу тромбоцита смешама глукозе, брзу адаптацију тромбоцита на екстремну хипертоничност и значајно повећање МПВ као одговор на хипертоничну глукозу >25%.Почетно повећање је било максимално при изложености глукози од 41,6%, али се повећање МПВ приближило 25% изложености глукози приближно 20 минута након излагања.
Концентрација тромбоцита је под утицајем глукозе. Приметили смо да се количина PLT смањила при свим разблажењима глукозе. Нагли пад броја тромбоцита у H2O (0%) разблажењима PRP серије може бити повезан са осмотском лизом. Алтернативно, ово би могао бити артефакт узрокован згрушавањем тромбоцита, али је то у супротности са недостатком промене MPV при овом разблажењу. Ово откриће значи да су неки тромбоцити веома осетљиви на хипоосмоларност.
У свим разблажењима глукозе у односу 1:1, количина PLT се смањила за 20-30%, чак и до D5W (хипотонично на 252 mOsm), што може указивати на специфичан неосмотски ефекат глукозе, пошто су и PLT и MPV остали непромењени при троструком повећању концентрације глукозе од D5W до D25W. У ствари, концентрације PLT су имале тенденцију благог повећања са повећањем осмоларности.
Смањење PLT између разблажења 1:1 и 1:5 значи да ефекат растварања зависи од почетне и коначне концентрације глукозе. Ако би зависио само од почетне концентрације, онда би се очекивала разлика у смањењу PLT између концентрација 1:1. Али ми не очекујемо. Ако ефекат лизе зависи само од коначне концентрације глукозе, онда не очекујемо велику разлику између разблажења 1:1 од 20% и разблажења 1:5 од 20,8%. Ипак смо то урадили.
Ако дође до губитка тромбоцита услед лизе тромбоцита, формира се делимични лизат, након чега се цитокини и фактори раста ослобађају у екстрацелуларно окружење. Неколико студија је показало да је лизат тромбоцита готово једнако ефикасан као PRP као раствор за пролиферацију [11]. Показало се да је сам PRP ефикасно решење за лечење пролиферације [12-14].
Неактивни тромбоцити циркулишу у облику диска ојачаног са неколико унутрашњих структура. Током активације, они попримају сфернији или амебски облик, што резултира повећањем запремине. Повећање запремине захтева повећање површине, што је резултат екструзије отвореног тубуларног система (OCS) и додавања егзоцитних гранула мембрани. Остаје да се утврди да ли повећање MPV изазвано хипертоничном глукозом укључује један или оба ова механизма, али ако је у питању овај други, онда би повећање MPV указивало на дегранулацију.
Ова студија је показала да излагање високим концентрацијама глукозе на ПРП или тромбоцитима пуне крви резултира повећањем МПВ у року од 15 минута са концентрацијом глукозе од 25% и 41,6%, респективно.
Повећање MPV тромбоцита може бити последица дилатације околних сплетова микротубула као одговор на прилив калцијума. Лиу и др. Показано је да глукоза посредује у приливу калцијума кроз TRPC6 канал тромбоцита [6]. Наша хипотеза је да глукоза индукује релаксацију сплетова микротубула, што доводи до повећања MPV и сензибилизације и/или активације тромбоцита. Међутим, судећи према нашим резултатима, ово је само део приче. У нашим тестовима, ниједна концентрација испод D25W није резултирала повећањем MPV. С обзиром да нисмо тестирали излагање концентрацијама глукозе између 12,5% и 25%, наши резултати фазе 1 сугеришу да може постојати праг у овом опсегу концентрација глукозе који доводи до повећања MPV. Даља тестирања у фазама 3 и 4 показала су да се чини да је 20-25% глукозе праг за ово, али остаје нејасно зашто.
Такође смо приметили смањење MPV од ~9% након центрифугирања. Није јасно да ли је ово смањење MPV последица већих и гушћих тромбоцита заробљених у слоју еритроцита центрифуге. Ово запажање може бити важно за клиничаре јер може имплицирати да су PRP тромбоцити мања и мање густа подгрупа WB тромбоцита.
У претходној студији, показали смо да је припрема PRP ручним методама јефтина [8]. Ако глукоза сензибилизује тромбоците ткива или PRP, чинећи их подложнијим активацији, или ако се PRP производи са делимичним лизатним својствима, то може побољшати регенерацију и смањити потребу за терапијом. Стога, комбинација PRP и високо концентроване глукозе може бити исплативија од самог PRP-а или глукозе.
Наша студија има неколико недостатака. Прво, користимо PRP добијен из неколико различитих метода. То може довести до супротстављених резултата. Друго, нисмо били у могућности да извршимо биохемијску анализу ниједног од наших узорака како бисмо прецизније утврдили да ли је дошло до активације тромбоцита. Желели бисмо да измеримо П-селектин, тромбоцитни фактор 4, моноцитне агрегате тромбоцита или друге маркере активације тромбоцита како бисмо боље разумели степен или присуство дегранулације алфа гранула, али то је ван оквира ове студије. Треће, нисмо били у могућности да потврдимо електронском микроскопијом или другим методама да је повећање MPV у тромбоцитима изложеним глукози последица ефекта на сплетове микротубула.
Смеше WB или PRP са 25% глукозе повећале су MPV, сигнализирајући почетак активације тромбоцита, иако ова студија није показала прогресију агрегације или дегранулације. Хипертонична смеша глукозе довела је до губитка тромбоцита, што вероватно представља литички ефекат. Делимична активација или лиза тромбоцита може изазвати регенерацију ткива након ињекције тромбоцита. Није јасно до каквих клиничких последица ове промене могу довести. Даља истраживања су показала прецизнија мерења активације или лизе и проценила различите клиничке ефекте хипертоничних смеша глукозе са WB или PRP.
Терапија пролиферацијом глукозе је једноставна и јефтина регенеративна терапија која се брзо шири и подржава клиничка истраживања. Ова студија сугерише физиолошки механизам који би, ако се потврди, могао да нам помогне да разумемо део регенеративног механизма пролиферативне терапије.
Биомедицинска и здравствена информатика на Универзитету Мисури, Медицински факултет Канзас Ситија, Канзас Сити, САД
Људски субјекти: Сви учесници у овој студији су дали или нису дали сагласност. Међународно друштво за ћелијску медицину издало је одобрење ICMS-2017-003. Следећи протокол је одобрен за даљу употребу од стране Институционалног одбора за ревизију Међународног друштва за ћелијску медицину: Наслов: Израчунавање приноса лека у плазми богатој тромбоцитима на основу почетног броја тромбоцита у комплетној крвној крви. Животињски субјекти: Сви аутори су потврдили да у ову студију нису били укључени животиње или ткива. Сукоб интереса: У складу са ICMJE јединственим обрасцем за откривање информација, сви аутори изјављују следеће: Информације о плаћању/услузи: Сви аутори изјављују да нису примили финансијску подршку ни од једне организације за поднети рад. Финансијски односи: Сви аутори изјављују да тренутно или у последње три године немају финансијске односе ни са једном организацијом која би могла бити заинтересована за поднети рад. Други односи: Сви аутори изјављују да не постоје други односи или активности које могу утицати на поднети рад.
Харисон ТЕ, Боулер Ј, Ривс К и др. (17. мај 2022) Утицај глукозе на број и запремину тромбоцита: импликације за регенеративну медицину. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Ауторска права 2022 Харисон и др. Ово је чланак отвореног приступа дистрибуиран под условима лиценце Creative Commons Attribution CC-BY 4.0. Неограничена употреба, дистрибуција и репродукција у било ком медијуму је дозвољена, под условом да се наведу оригинални аутор и извор.