Хвала вам што сте посетили Натуре.цом. Верзија претраживача коју користите има ограничену подршку за ЦСС. За најбоље искуство препоручујемо да користите ажурирани прегледач (или искључите режим компатибилности у Интернет Екплорер-у). У међувремену, да бисмо обезбедили сталну подршку, приказаћемо сајт без стилова и ЈаваСцрипт-а.
Порозне честице силицијум диоксида су припремљене сол-гел методом са неким модификацијама да би се добиле макропорозне честице. Ове честице су дериватизоване полимеризацијом реверзибилног адиционог преноса фрагментације ланца (РАФТ) са Н-фенилмалеимид-метилвинилизоцијанатом (ПМИ) и стиреном да би се припремила Н-интерканилмалеинска станица П поимиде. челичне колоне (100 × 1,8 мм ид) паковане су паковањем суспензије. Процењено одвајање ПМП колоне пептидне смеше која се састоји од пет пептида (Гли-Тир, Гли-Леу-Тир, Гли-Гли-Тир-Арг, Тир-Иле-Гли-Сер-Арг и перформансе хуманог дигестија ентопха леу) (ХАС). Под оптималним условима елуирања, теоретски број плоча мешавине пептида је чак 280.000 плоча/м². Упоређујући перформансе сепарације развијене колоне са комерцијалном Асцентис Екпресс РП-Амиде колоном, примећено је да је учинак одвајања ПМП колоне био супериорнији од комерцијалне колоне у смислу ефикасности сепара.
Последњих година, биофармацеутска индустрија је постала глобално тржиште у експанзији са значајним повећањем тржишног удела. Са експлозивним растом биофармацеутске индустрије1,2,3, веома је пожељна анализа пептида и протеина. Поред циљног пептида, неколико нечистоћа се генерише током синтезе пептида. протеини у телесним течностима, ткивима и ћелијама је изузетно изазован задатак због великог броја врста које се потенцијално могу детектовати у једном узорку. Иако је масена спектрометрија ефикасан алат за секвенцирање пептида и протеина, ако се такви узорци убризгају у масени спектрометар у једном пролазу, раздвајање неће бити идеално. Овај проблем који ће се ублажити помоћу течне хроматизације претходном анализом (МСпар) може се ублажити. те улазе у масени спектрометар у датом времену4,5,6. Поред тога, током раздвајања течне фазе, аналити могу бити фокусирани у уским регионима, чиме се концентришу ови аналити и побољшава осетљивост детекције МС. Течна хроматографија (ЛЦ) је значајно напредовала током протекле деценије и постала је популарна техника у протеомској анализи,8,9,17.
Течна хроматографија у обрнутој фази (РП-ЛЦ) се широко користи за пречишћавање и одвајање пептидних силиција (ОДС) као стационарне фазе11,12,13.Кова, не пружају задовољавајуће одвајање пептида и протеина због њихове сложене структуре и амфифилне природе и амфифилне природе 14,15. Пептиди и протеини са поларним и непарним деловима да комуницирају и задрже ове аналитике16.микед-хроматографија, која омогућава мултимодалне интеракције, може бити алтернатива РП-ЛЦ за одвајање пептида, протеина и других сложених мешавина. Асеверална мешовита стационарна фаза коришћена су и ступонти који су се одвајали у пептид и раздвајања протеина17. године , 19,20,21.микед-режим стационарних фаза (восак / РПЛЦ, ХИЛИЦ / РПЛЦ, Полар Интерцалатион / РПЛЦ) су погодни за пептидне и протеине одвајане због присуства поларних и непарних група22,23 .Симиларли, Поларне стационарне фазе са ковалираним поларним групама и јединственом селективној полирама -Поларне аналитике, јер одвајање зависи од интеракције између аналивне и стационарне фазе.Мултимодалне интеракције 29, 30, 31, 32. Недавно су Зханг ет ал.30 је припремио полиаминску стационарну фазу са додецил-терминацијом и успешно раздвојио угљоводонике, антидепресиве, флавоноиде, нуклеозиде, естрогене и неколико других аналита. Поларни интеркалатор има и поларне и неполарне групе, тако да се може користити за одвајање пептида и протеина који имају и хидрофобне и хидрофобне колоне са хидрофобним и ембеддираним слојем. ед Ц18 колоне) су комерцијално доступне под трговачким називом Асцентис Екпресс РП-Амиде колоне, али се ове колоне користе само за анализу амина 33.
У тренутној студији, поларно уграђена стационарна фаза (Н-фенилмалеимид уграђен полистирен) је припремљена и процењена за одвајање пептида и трипсина дигестије ХСА. Стационарна фаза је припремљена применом следеће стратегије. Порозне честице силицијум диоксида су припремљене према процедури датој у нашој претходној публикацији са неким модификацијама препарата протолицоетхилене пацова (протолицоетхилене г) ), ТМОС, водена сирћетна киселина је подешена за припрему честица силицијум диоксида са великом величином пора. Друго, нови лиганд, фенилмалеимид-метил винил изоцијанат, је синтетисан и коришћен за дериватизацију честица силицијум диоксида да би се припремила поларно уграђена стационарна фаза. Добијена стационарна фаза је пакована у колону без стаин0 мм ид1 колоне за паковање у колону без колоне. паковање је потпомогнуто механичким вибрацијама како би се обезбедило формирање хомогеног слоја унутар колоне. Проценити раздвајање упаковане колоне мешавина пептида које се састоје од пет пептида;(Гли-Тир, Гли-Леу-Тир, Гли-Гли-Тир-Арг, Тир-Иле-Гли-Сер-Арг, Леуцине Енкепхалин) и трипсин дигестија хуманог серумског албумина (ХАС). Примећено је да се мешавина пептида и дигестија трипсина ХСА раздваја са добром резолуцијом и ефикасношћу. Примећено је да су и пептиди и протеини добро решени и ефикасни на колони ПМП, која је била ефикаснија од колоне Асцентис Екпресс РП-Амиде.
ПЕГ (полиетилен гликол), уреа, сирћетна киселина, триметокси ортосиликат (ТМОС), триметил хлоросилан (ТМЦС), трипсин, хумани серумски албумин (ХСА), амонијум хлорид, уреа, хексан метилдисилазан (ХМДС), метакрилоил хлоросидин (бензоил хлоросидин, ПОМЦ), БПО), ХПЛЦ ацетонитрил (АЦН), метанол, 2-пропанол и ацетон купљени од Сигма-Алдрицх (Сент Луис, МО, САД).
Мешавина урее (8 г), полиетилен гликола (8 г) и 8 мЛ 0,01 Н сирћетне киселине је мешана током 10 минута, а затим је додато 24 мЛ ТМОС у ледено хладним условима. Реакциона смеша је загревана на 40°Ц током 6 сати, а затим на 120°Ц, реакциона смеша је загревана на 40°Ц, а затим на 120°Ц, реакциона смеша је стављена без воде на 8 сати. материјал је сушен на 70°Ц током 12 сати. Осушена мека маса је глатко млевена у пећници и калцинисана на 550°Ц током 12 сати. Три серије су припремљене и окарактерисане да се испита репродуктивност у величини честица, величини пора и површини.
Модификацијом површине честица силицијум-диоксида унапред синтетизованим лигандом фенилмалеимид-метилвинилизоцијаната (ПЦМП) праћеном радијалном полимеризацијом са стиреном, припремљено је једињење које садржи поларну групу.Стационарна фаза за агрегате и полистиренске ланце. Процес припреме је описан у наставку.
Н-фенилмалеимид (200 мг) и метил винил изоцијанат (100 мг) су растворени у сувом толуену, и 0,1 мЛ 2,2'-азоизобутиронитрила (АИБН) је додато у реакциони балон да би се припремила смеша фенилмалеимид-метилана-винил (Смеша је загрејана на 6°Ц ПМ°Ц). 3 сата, филтрира и суши у рерни на 40°Ц 3 сата.
Осушене честице силицијум диоксида (2 г) су дисперговане у сувом толуену (100 мЛ), мешане и соникиране у посуди са округлим дном од 500 мЛ током 10 мин. ПМЦП (10 мг) је растворен у толуену и укапавањем додаван у реакциони балон преко левка за кап. 0°Ц током 3 сата. Затим, ПМЦП-везане честице силицијум диоксида (100 г) су растворене у толуену (200 мл) и додат је 4-хидрокси-ТЕМПО (2 мЛ) у присуству 100 µЛ дибутилкалај дилаурата као катализатора. Смеша је мешана на 5°Ц 3 сата, мешана је 5°Ц. сати.
Стирен (1 мЛ), бензоил пероксид БПО (0,5 мЛ) и ТЕМПО-ПМЦП-везане честице силицијум диоксида (1,5 г) су дисперговани у толуену и прочишћени азотом. Полимеризација стирена је изведена на 100°Ц током 12 сати. Добијени производ је сушен током ноћи на 0°Ц. приказано на слици 1.
Узорци су дегазирани на 393 К током 1 сата да би се добио резидуални притисак мањи од 10-3 Торр. Количина Н2 адсорбованог на релативном притиску од П/П0 = 0,99 је коришћена да се одреди укупна запремина пора. Морфологија голих и лигандом везаних честица силицијум диоксида је испитана уз помоћ микроскопичног скенирања Јапана, Тоцхнотецхнолог, Хигхсцопи Д. Узорци (голи силицијум диоксид и честице силицијум-диоксида везане за лиганд) су постављени на алуминијумску колону коришћењем лепљиве угљеничне траке. Злато је нанесено на узорке коришћењем К150Т распршивача, а слој Ау од 5 нм је нанесен на узорке. Ово побољшава ефикасност процеса коришћењем ниских напона и обезбеђује фино зрно. Ал анализатор је коришћен за елементарну анализу. Малверн (Ворцестерсхире, УК) Мастерсизер 2000 анализатор величине честица је коришћен за добијање дистрибуције величине честица. Честице голе силицијум диоксида и честице силицијум-диоксида везане за лиганд (свака по 5 мг) су дисперговане у 5 мЛ изопропанола, и стављене ултразвучно на Мастер 5 мин. зер.Термогравиметријска анализа је вршена брзином од 5 °Ц у минути у температурном опсегу од 30 до 800 °Ц.
Стубови од нерђајућег челика обложени стаклом уских отвора димензија (100 × 1,8 мм ид) паковани су методом паковања суспензије, применом исте процедуре која је коришћена у Реф.31. Колона од нерђајућег челика (обложена стаклом, 100 × 1,8 мм ид) са излазном арматуром која садржи фриту од 1 µм је повезана са пакером за суспензију (Аллтецх Деерфиелд, ИЛ, УСА). Припремите суспензију стационарне фазе суспендовањем 150 мг стационарне фазе у меној колони од 1,2 м танол и испратите је у колону од 1,2 м танол. као погонски растварач. Напуните колону узастопно применом притиска од 100 МП током 10 минута, 80 МП током 15 минута и 60 МП током 30 минута. Током паковања, примењиване су механичке вибрације са два ГЦ тресла за колону (Аллтецх, Деерфиелд, ИЛ, УСА) да би се обезбедило да се колона уједначено отпусти у паковање и смањи притисак на колону. колону из јединице за паковање суспензије и спојите другу арматуру на улаз и на ЛЦ систем да проверите његове перформансе.
Конструисана је ЛЦ пумпа (10АД Схимадзу, Јапан), ињектор (Валцо (САД) Ц14 В.05) са ињекционом петљом од 50нЛ, мембрански дегазер (Схимадзу ДГУ-14А), УВ-ВИС капиларни прозор. Након паковања, капилари (50 μм ид 365 и редукциони спојни капилари (50 μм) су инсталирани на излазу од 1/16″ редукционог споја. Прикупљање података и хроматографска обрада су обављени коришћењем Мултицхро 2000 софтвера. Анализирани су подаци за ултраљубичасту апсорпцију на 1/16″). гинПро8 (Нортхамптон, МА).
Албумин из хуманог серума, лиофилизовани прах, ≥ 96% (електрофореза у агарозном гелу) 3 мг помешан са трипсином (1,5 мг), 4,0 М урее (1 мЛ) и 0,2 М амонијум бикарбонатом (1 мЛ). Раствор је мешан 10 минута у воденом купатилу, а затим је држан у воденом купатилу од 6°Ц 7°Ц. 0,1% ТФА. Филтрирајте раствор и чувајте на температури испод 4 °Ц.
Раздвајање мешавине пептида и ХСА трипсина процењено је одвојено на ПМП колонама. Проверите раздвајање мешавине пептида и дигестије трипсина ХСА помоћу ПМП колоне и упоредите резултате са колоном Асцентис Екпресс РП-Амиде. Теоретски број плоче се израчунава на следећи начин:
СЕМ слике голих честица силицијум диоксида и честица силицијум-диоксида везаних за лиганд су приказане на Сл.2 .СЕМ слике голих честица силицијум диоксида (А, Б) показују да су, за разлику од наших претходних студија, ове честице сферичне у којима су честице издужене или имају неправилну симетрију. Површина честица силицијум-диоксида везаних за лиганд (Ц, Д) је глаткија од површине голог силицијум-диоксида чији је део честица силицијум диоксида због површине слоја честица силицијум диоксида. лес.
Скенирајући електронски микроскоп слике голих честица силицијум диоксида (А, Б) и честица силицијум-диоксида везаних за лиганд (Ц, Д).
Расподела величине честица голих честица силицијум диоксида и честица силицијум-диоксида везаних за лиганд приказане су на слици 3(А). Криве расподеле величине честица засноване на запремини показале су да се величина честица силицијум диоксида повећала након хемијске модификације (слика 3А). Подаци о расподели величине честица силицијум диоксида из тренутне студије су упоређени у табели величине 5 и претходне студије величине 5 (д). ПМП је 3,36 μм, у поређењу са нашом претходном студијом са ад(0,5) вредношћу од 3,05 μм (честице силицијум-диоксида везане за полистирен)34. Ова серија је имала ужу дистрибуцију величине честица у поређењу са нашом претходном студијом због различитих односа ПЕГ, урее, ТМОС и сирћетне киселине. Везана фаза честица силицијум-диоксида коју смо претходно проучавали. То значи да је површинска функционализација честица силицијум-диоксида стиреном нанела само слој полистирена (0,97 µм) на површину силицијум-диоксида, док је у ПМП фази дебљина слоја била 1,38 µм.
Расподела величине честица (А) и расподела величине пора (Б) голих честица силицијум диоксида и честица силицијум-диоксида везаних за лиганд.
Величина пора, запремина пора и површина честица силицијум диоксида из тренутне студије дати су у табели 1(Б). ПСД профили голих честица силицијум диоксида и честица силицијум-диоксида везаних за лиганд су приказани на слици 3(Б). Резултати су упоредиви са нашом претходном студијом. Величине пора голих и везаних за лигандове силицијум диоксида који су у односу на 4 и 31 део пора смањени су у односу на величину пора10. с за 69 након хемијске модификације, као што је приказано у табели 1(Б), а промена криве је приказана на слици 3(Б). Слично томе, запремина пора честица силицијум диоксида се смањила са 0,67 на 0,58 цм3/г након хемијске модификације. ).Као што је приказано у табели 1(Б), површина (м2/г) честица силицијум диоксида се такође смањила са 116 м2/г на 105 м2/г након хемијске модификације.
Резултати елементарне анализе стационарне фазе приказани су у табели 2. Оптерећење угљеником тренутне стационарне фазе је 6,35%, што је ниже од оптерећења угљеником у нашој претходној студији (честице силицијум-диоксида везане за полистирен, 7,93%35 и 10,21%, респективно) 42. Пошто је оптерећење угљеником тренутне стационарне фазе ниско, струја стационарне фазе у припреми је ниска, СП у поларној фази је ниско. као што су фенилмалеимид-метилвинилизоцијанат (ПЦМП) и 4-хидрокси-ТЕМПО су коришћени. Проценат тежине азота у тренутној стационарној фази је 2,21%, у поређењу са 0,1735 и 0,85% масеног процента азота у претходним студијама, респективно. То значи да је тежински проценат азота у тренутној фази азота већи због пхенимиларног оптерећења. Продукти (4) и (5) су износили 2,7% и 2,9%, респективно, док је оптерећење угљеником финалног производа (6) било 6,35%, као што је приказано у табели 2. Губитак тежине је проверен са ПМП стационарном фазом, а ТГА крива је приказана на слици 4. ТГА крива показује губитак тежине од 8,6%, јер се садржај угљеника не слаже само са 8,6%, али 5% се не слаже само са Н. , и Х.
Фенилмалеимид-метилвинилизоцијанатни лиганд је изабран за површинску модификацију честица силицијум диоксида јер има поларне фенилмалеимидне групе и винилизоцијанатне групе. Винил изоцијанатне групе могу даље да реагују са стиреном живом радикалном полимеризацијом. Други разлог је да се убаци група са аналном фазом која има снажну интеракцију аналне, електростатске фазе и јаке интеракције са стиреном. фенилмалеимидна група нема виртуелно наелектрисање при нормалном пХ. Поларитет стационарне фазе се може контролисати оптималном количином стирена и временом реакције полимеризације слободних радикала. Последњи корак реакције (полимеризација слободних радикала) је критичан и може променити поларитет стационарне фазе. Елементарна анализа је извршена да се провери повећање времена реакције у фази угљика и да се посматра повећање количине угљеника у станици. оптерећење угљеником у стационарној фази и обрнуто. СП припремљени са различитим концентрацијама стирена имају различита оптерећења угљеником. Опет, убаците ове стационарне фазе у колоне од нерђајућег челика и проверите њихове хроматографске перформансе (селективност, резолуција, вредност Н, итд.). На основу ових експеримената, изабрана је оптимизована формулација да би се припремила контролна фаза поновне стационарне поларности ПМП да би се обезбедила добра стационарна фаза контролног поларитета.
Пет мешавина пептида (Гли-Тир, Гли-Леу-Тир, Гли-Гли-Тир-Арг, Тир-Иле-Гли-Сер-Арг, леуцин енкефалин) је такође процењено коришћењем ПМП колоне користећи мобилну фазу;60/40 (в/в) ацетонитрил/вода (0,1% ТФА) при брзини протока од 80 μЛ/мин. Под оптималним условима елуирања, теоретски број плоче (Н) по колони (100 × 1,8 мм ид) је 20.000 ± 100 (200.000 П рома за колону). тограми су приказани на слици 5А. Брза анализа на ПМП колони при високој брзини протока (700 μЛ/мин), пет пептида је елуирано у року од једног минута, вредности Н су биле веома добре, 13,500 ± 330 по колони (100 × 1,8 мм ид), одговара 135,000 × 1,8 мм ид), одговара 135,000 × 1,8 мм ид), пет пептида је елуирано у току једног минута. 1,8 мм ид) су упаковане са три различите серије ПМП стационарне фазе да би се проверила репродуктивност. Концентрација аналита за сваку колону је забележена коришћењем оптималних услова елуације и броја теоретских плоча Н и времена задржавања да би се иста тест смеша одвојила на свакој колони. Подаци о репродуктивности за ПМП колоне су приказани у Табели 4, са веома ниском корелацијом ПМП колоне, приказане су вредности ПМП колоне са веома ниском репродуктивношћу. .
Одвајање мешавине пептида на колони ПМП (Б) и колони Асцентис Екпресс РП-Амиде (А);мобилна фаза 60/40 АЦН/Х2О (ТФА 0,1%), димензије ПМП колоне (100 × 1,8 мм ид);аналитички Редослед елуирања једињења: 1 (Гли-Тир), 2 (Гли-Леу-Тир), 3 (Гли-Гли-Тир-Арг), 4 (Тир-Иле-Гли-Сер-Арг) и 5 ​​(леуцин) киселина енкефалин)).
Колона ПМП (100 × 1,8 мм ид) је процењена за одвајање триптичких дигестија хуманог серумског албумина у течној хроматографији високих перформанси. Хроматограм на слици 6 показује да је узорак добро одвојен и да је резолуција веома добра. ХСА дигести су анализирани коришћењем брзине протока од 100 µЛ/мин. хроматограма (Слика 6), ХСА дигестија је подељена на 17 врхова који одговарају 17 пептида. Израчуната је ефикасност раздвајања сваког пика у ХСА дигестији и вредности су дате у табели 5.
Триптички дигест ХСА (100 × 1,8 мм ид) је одвојен на ПМП колони;брзина протока (100 µЛ/мин), мобилна фаза 60/40 ацетонитрил/вода са 0,1% ТФА.
где је Л дужина колоне, η је вискозитет мобилне фазе, ΔП је противпритисак колоне, а у је линеарна брзина мобилне фазе. Пропустљивост ПМП колоне је била 2,5 × 10-14 м2, брзина протока је била 25 μЛ/мин, а 60/40 в/в колоне је коришћена. ) била је слична оној у нашој претходној студији Реф.34. Пропустљивост колоне пуне површински порозних честица је: 1,7 × 10-15 за честице од 1,3 μм, 3,1 × 10-15 за честице од 1,7 μм, 5,2 × 10-15 µм за честице 5,2 × 10-15 µм и 5,2 × 10-15 µм за честице. 5 μм честице 43. Према томе, пермеабилност ПМП фазе је слична оној код честица језгро-љуска од 5 μм.
где је Вк тежина колоне напуњене хлороформом, Ви је тежина колоне напуњене метанолом, а ρ је густина растварача. Густине метанола (ρ = 0,7866) и хлороформа (ρ = 1,484). Укупна порозност СИЛИЦИЈСКИХ ЧЕСТИЦА и ЧЕСТИЦЕ ЦИЛИЦА 1 × 10 мм 1-8д. Колоне урее 31 које смо претходно проучавали су биле 0,63 и 0,55, респективно. То значи да присуство лиганда урее смањује пропустљивост стационарне фазе. Са друге стране, укупна порозност ПМП колоне (100 × 1,8 мм ид) је 0,60. Пропустљивост је 0,60. Стационарне фазе типа 18, лиганди Ц18 су везани за честице силицијум диоксида као линеарни ланци, док се у стационарним фазама типа полистирена, око њега формира релативно дебео слој полимера А. У типичном експерименту, порозност колоне се израчунава као:
Слика 7А,Б приказује ПМП колону (100 × 1,8 мм ид) и Асцентис Екпресс РП-Амиде колону (100 × 1,8 мм ид) користећи исте услове елуирања (тј. 60/40 АЦН/Х2О и 0,1% ТФА).) ван Деемтерове парцеле.Одабране мешавине пептида (Гли-Тир, Гли-Леу-Тир, Гли-Гли-Тир-Арг, Тир-Иле-Гли-Сер-Арг, Леуцине Енкепхалин) припремљене су у 20 µЛ/ Минимална брзина протока за обе колоне је 800 µЛум ХЕ/мин. Минимална брзина протока је 800 µЛум ХЕ/мин. МП колона и Асцентис Екпресс РП-Амиде колона биле су 2,6 µм и 3,9 µм, респективно. ХЕТП вредности показују да је ефикасност одвајања ПМП колоне (100 × 1,8 мм ид) много боља од комерцијално доступне Асцентис Екпресс РП-Амиде колоне (100 мм ид1). смањење вредности Н са повећањем протока није значајно у поређењу са нашом претходном студијом. Већа ефикасност одвајања ПМП колоне (100 × 1,8 мм ид) у поређењу са Асцентис Екпресс РП-Амиде колоном заснована је на побољшањима облика, величине честица и сложених процедура паковања колоне које се користе у тренутном раду34.
(А) ван Деемтер график (ХЕТП у односу на линеарну брзину мобилне фазе) добијен коришћењем ПМП колоне (100 × 1,8 мм ид) у 60/40 АЦН/Х2О са 0,1% ТФА. (Б) ван Деемтер график (ХЕТП у односу на линеарну брзину мобилне фазе) добијен коришћењем Асцентисде Екпресс колоне РП × 100 мм (Асцентис × 4 мм) у А180. ЦН/Х2О са 0,1% ТФА.
Стационарна фаза од полистирена у поларном слоју је припремљена и процењена за одвајање мешавина синтетичких пептида и трипсина дигестије хуманог серумског албумина (ХАС) у течној хроматографији високих перформанси. Хроматографске перформансе ПМП колона за мешавине пептида су одличне у ефикасности и резолуцији сепарације. честице лица, контролисана синтеза стационарне фазе и сложено паковање колоне. Поред високе ефикасности одвајања, низак повратни притисак у колони при великим брзинама протока је још једна предност ове стационарне фазе. ПМП колоне показују добру репродуктивност и могу се користити за анализу мешавина пептида и дигестију трипсина различитих протеина. .У будућности ће се ПМП колоне такође процењивати на одвајање протеина и моноклонских антитела.
Фиелд, ЈК, Еуерби, МР, Лау, Ј., Тхøгерсен, Х. & Петерссон, П. Истраживање система за сепарацију пептида хроматографијом реверзне фазе И део: Развој протокола за карактеризацију колоне.Ј.Цхроматограпхи.1603, 113–129.хттпс://дои.орг/10.1016/ј.цхрома.2019.05.038 (2019).
Гомез, Б. ет ал. Побољшани активни пептиди дизајнирани за лечење инфективних болести. Биотецхнологи.Адванцед.36(2), 415-429.хттпс://дои.орг/10.1016/ј.биотецхадв.2018.01.004 (2018).
Влиегхе, П., Лисовски, В., Мартинез, Ј. & Кхрестцхатиски, М. Синтхетиц тхерапеутиц пептидес: сциенце анд тхе маркет. друг дисцовери.15 (1-2) тодаи, 40-56.хттпс://дои.орг/10.1016/ј.друдис.2009.10.10.
Ксие, Ф., Смитх, РД & Схен, И. Напредна протеомска течна хроматографија.Ј.Хроматографија. А 1261, 78–90 (2012).
Лиу, В. ет ал. Напредна течна хроматографија-масена спектрометрија омогућава инкорпорацију широко циљане метаболомике и протеомике.анус.Цхим.Ацта 1069, 89–97 (2019).
Цхеснут, СМ & Салисбури, ЈЈ Улога УХПЛЦ у развоју лекова.Ј.Сеп. Сци.30(8), 1183-1190 (2007).
Ву, Н. & Цлаусен, АМ Фундаментални и практични аспекти течне хроматографије ултрависоког притиска за брза одвајања.Ј.Сеп. Сци.30(8), 1167-1182.хттпс://дои.орг/10.1002/јссц.200700026 (2007).
Врен, СА & Тцхелицхефф, П. Примена течне хроматографије ултра-високих перформанси у развоју лекова.Ј.Цхроматограпхи.1119(1-2), 140-146.хттпс://дои.орг/10.1016/ј.цхрома.2006.02.052 (2006).
Гу, Х. ет ал. Монолитни макропорозни хидрогелови припремљени од емулзија високе унутрашње фазе уља у води за ефикасно пречишћавање ентеровируса.Цхемицал.Бритаин.Ј.401, 126051 (2020).
Схи, И., Ксианг, Р., Хорватх, Ц. & Вилкинс, ЈА Улога течне хроматографије у протеомици.Ј.Цхроматограпхи.А 1053(1-2), 27-36 (2004).
Фекете, С., Веутхеи, Ј.-Л. & Гуилларме, Д. Трендови у развоју у реверзно-фазној течној хроматографији раздвајања терапеутских пептида и протеина: теорија и примена.Ј.Фармација.Биомедицинска наука.анус.69, 9-27 (2012).
Гилар, М., Оливова, П., Дали, АЕ & Геблер, ЈЦ Дводимензионално одвајање пептида коришћењем РП-РП-ХПЛЦ система користећи различите пХ вредности у првој и другој димензији раздвајања.Ј.Сеп. Сци. 28(14), 1694-1703 (2005).
Фелетти, С. ет ал. Испитиване су карактеристике преноса масе и кинетичке перформансе високоефикасних хроматографских колона са Ц18 суб-2 μм потпуно и површински порозним честицама.Ј.Сеп. Сци. 43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Пиовесана, С. ет ал. Недавни трендови и аналитички изазови у изолацији, идентификацији и валидацији биљних биоактивних пептида.анус.биологицал анус.Цхемицал.410(15), 3425–3444.хттпс://дои.орг/10.1007/с00216-02-к22816-018-к08.
Муеллер, ЈБ ет ал. Протеомски пејзаж краљевства живота. Природа 582(7813), 592-596.хттпс://дои.орг/10.1038/с41586-020-2402-к (2020).
ДеЛуца, Ц. ет ал. Низводна обрада терапеутских пептида препаративном течном хроматографијом. Молецуле (Басел, Свитзерланд) 26(15), 4688(2021).
Ианг, И. & Генг, Кс. Микед-моде хроматограпхи анд итс апплицатион то биополимерс.Ј.Цхроматограпхи.А 1218(49), 8813–8825 (2011).
Зхао, Г., Донг, Кс.-И. & Сун, И. Лиганди за мешовиту хроматографију протеина: принцип, карактеризација и дизајн.Ј.Биотехнологија.144(1), 3-11 (2009).