Sababaraha topik ngungkulan LC teu pernah kadaluwarsa, sabab aya masalah dina praktekna LC, sanajan téhnologi instrumen ngaronjatkeun kana waktu. Aya loba cara nu masalah bisa timbul dina sistem LC sarta mungkas nepi di bentuk puncak kirang.
Senang nulis kolom "LC Troubleshooting" ieu sareng mikiran topik unggal bulan, sabab sababaraha topik henteu kantos kaluar tina gaya. Nalika dina widang kromatografi, panalungtikan topik atanapi ideu tangtu janten leungit sabab diganti ku ideu anu langkung énggal sareng langkung saé, dina widang ngungkulan masalah, ti saprak artikel ngungkulan anu munggaran muncul dina jurnal ieu (sababaraha LC dina sababaraha taun ka pengker masih aya 19)8 (sabaraha LC dina waktos éta masih aya 19)8 (sababaraha LC dina waktos éta masih aya). Kuring geus fokus sababaraha bagian LC Troubleshooting on tren kontemporer mangaruhan kromatografi cair (LC) (contona, babandingan relatif pamahaman kami ngeunaan pangaruh tekanan dina ingetan [2] Kamajuan Anyar) Interprétasi kami hasil LC jeung kumaha troubleshoot kalawan instruments LC modern. Dina installment bulan ieu urang, Kuring neraskeun nu 1 séri nu "Ceuk 20 Désémber" na dimimitian ku pupusna dina topik 20. ngungkulan — elemen anu gede pikeun troubleshooter nu mana wae nu penting, euweuh urusan umur sistem urang ngagunakeun.Topik inti ti séri ieu kacida relevan jeung LCGC urang kawentar “LC Troubleshooting Guide” bagan témbok (4) nongkrong di loba laboratorium. Keur bagian katilu ti séri ieu, kuring milih fokus dina masalah nu patali jeung bentuk puncak atawa ciri puncak nu 4.Wek bisa mertimbangkeun sagala rupa bagan puncak goréng! masalah ieu di jéntré dina hiji artikel, jadi dina installment munggaran ngeunaan topik ieu, kuring bakal difokuskeun sababaraha leuwih sering kuring ningali. Kuring miharep pamaké LC ngora jeung heubeul bakal manggihan sababaraha tips mantuan sarta panginget dina topik penting ieu.
Kuring manggihan sorangan beuki ngajawab patarosan ngungkulan kalawan "nanaon anu mungkin".Respon ieu bisa sigana gampang lamun tempo observasi nu hese napsirkeun, tapi kuring manggihan eta mindeng luyu.Kalayan loba mungkin sabab tina bentuk puncak goréng, hal anu penting pikeun tetep hiji pikiran kabuka nalika tempo naon masalahna bisa jadi, sarta pikeun bisa prioritas sabab poténsi dimimitian usaha ngungkulan urang, fokus kana eta paling umum kamungkinan.
Léngkah konci dina sagala latihan troubleshooting - tapi hiji nu kuring pikir underrated - nyaeta recognizing yén aya masalah anu kudu direngsekeun.Recognizing yén aya masalah mindeng hartina recognizing yén naon kajadian ka alat béda ti ekspektasi urang, nu ngawangun ku téori, pangaweruh empiris, jeung pangalaman (5). "Wangun puncak" nu dimaksud di dieu nyaeta a simetris, mulus, bentukna fluff (sabenerna ngarujuk kana wangun fluffy, mulus tur mulus). , ngarah tepi, tailing, jsb), tapi ogé ka lebar.Harepan urang pikeun bentuk puncak sabenerna basajan.Teori (6) ogé ngarojong ekspektasi buku ajar yén, di hal nu ilahar, puncak kromatografi kudu simetris jeung saluyu jeung bentuk sebaran Gaussian, ditémbongkeun saperti dina Gambar 1a. Naon urang nyangka ti puncak artikel ieu bakal dibahas dina artikel nu leuwih kompleks. e 1 némbongkeun sababaraha kamungkinan séjén nu bisa dititénan-dina basa sejen, sababaraha cara hal bisa jadi salah.Dina sésa installment ieu, urang bakal méakkeun waktu ngabahas sababaraha conto husus tina situasi nu bisa ngakibatkeun tipe ieu bentuk.
Kadang-kadang puncak henteu katalungtik pisan dina kromatogram dimana aranjeunna diharepkeun bakal eluted.The bagan témbok luhur nunjukkeun yén henteuna puncak (asumsina sampel sabenerna ngandung analit target dina konsentrasi anu sakuduna nyieun respon detektor cukup pikeun nempo eta luhureun noise) biasana patali jeung sababaraha masalah instrumen atawa kaayaan fase mobile lepat (lamun observasi pisan).puncak, biasana teuing "lemah"). Daptar pondok tina masalah poténsi jeung solusi dina kategori ieu bisa kapanggih dina Table I.
Sakumaha didadarkeun di luhur, sual sabaraha broadening puncak kudu ditolerir saméméh nengetan jeung nyoba ngalereskeun eta mangrupakeun topik kompléks nu bakal dibahas dina artikel nu bakal datang. Pangalaman abdi nyaeta broadening puncak signifikan mindeng dibarengan ku parobahan signifikan dina bentuk puncak, sarta tailing puncak téh leuwih umum ti pre-puncak atawa splitting. Tapi, nominally simetris sababaraha alesan ogé bisa jadi dibalukarkeun ku sababaraha alesan: Puncak simetris broadened.
Unggal masalah ieu geus dibahas di jéntré dina isu saméméhna tina ngungkulan LC, jeung pamiarsa kabetot dina jejer ieu bisa ningali ka ieu artikel saméméhna pikeun émbaran ngeunaan sabab akar jeung solusi poténsial pikeun masalah ieu.Leuwih jéntré.
Puncak tailing, puncak fronting, sarta bengkahna sadayana tiasa disababkeun ku fenomena kimiawi atawa fisik, sarta daptar solusi poténsial pikeun masalah ieu rupa-rupa lega, gumantung kana naha urang keur kaayaan masalah kimiawi atawa fisik. Sering, ku ngabandingkeun puncak béda dina kromatogram a, anjeun tiasa manggihan clues penting ngeunaan nu palakuna. kapangaruhan, tapi sésana kasampak rupa, ngabalukarkeun paling dipikaresep kimiawi.
Nyababkeun kimiawi puncak tailing teuing kompléks ngabahas sakeudeung dieu.The maca kabetot disebut masalah panganyarna ngeunaan "LC Troubleshooting" pikeun sawala leuwih di-jero (10). Sanajan kitu, hiji hal gampang pikeun nyobaan nyaéta pikeun ngurangan massa analyte nyuntik tur tingal lamun bentukna puncak ngaronjatkeun. atawa kaayaan kromatografi kudu dirobah jadi bentuk puncak alus bisa dimeunangkeun sanajan kalawan massa nu leuwih gede nyuntik.
Aya ogé loba alesan fisik poténsial pikeun puncak tailing.Readers kabetot dina sawala nu detil rupa kemungkinan disebut masalah sejen panganyarna ngeunaan "LC Troubleshooting" (11) .Salah sahiji sabab fisik leuwih umum tina puncak tailing nyaéta sambungan goréng dina hiji titik antara injector jeung detektor (12) .Conto ekstrim ditémbongkeun dina Gambar 1d. sateuacan, sarta dipasang loop suntik volume leutik kalawan ferrule nu geus molded onto a stainless steel capillary.After sababaraha percobaan ngungkulan awal, urang sadar yén jero port dina stator klep suntik éta loba deeper ti kami dipaké pikeun, hasilna volume maot badag di handap port.This masalah gampang direngsekeun ku ngaganti loop suntik nu bener tina tabung nu sejen, bisa direngsekeun ku cara ngaganti loop suntik kana ferru nu sejen, pikeun ngaleungitkeun puteran suntik kana tabung sejen.
Leuwih puncak sapertos anu dipidangkeun di Gambar 5e ogé tiasa disababkeun ku masalah fisik atanapi kimia, ngabalukarkeun kamar partiskeun, atanapi panémbalan partise ieu. Beralahit ide (linier), jumlah analisa anu dipikasahan ku fase stasia (ku kituna, faktor tahan) lega sareng jamban nonjejarah, tapi henteu langkung lega, tapi puncakna. ditaluykeun. Dina bentuk nonlinee nangtukeun bentuk-puncak Chomatografis, hasilna dina médah peuntas atanapi jalanan ku jalan pérak anu dislibeskeun. kalakuan ieu.
Kadang-kadang urang niténan naon sigana puncak "beulah", sakumaha ditémbongkeun dina Gambar 1f. Léngkah munggaran dina ngarengsekeun masalah ieu nyaéta pikeun nangtukeun naha bentuk puncak alatan ko-élusi parsial (ie, ayana dua sanyawa béda tapi raket eluting). ks patali jeung Performance fisik teu aya hubunganana jeung kolom sorangan. Mindeng, clue pangpentingna kaputusan ieu naha sakabéh puncak dina chromatogram némbongkeun wangun pamisah, atawa ngan hiji atawa dua. Lamun ngan hiji atawa dua, éta meureun masalah ko-élusi;lamun sagala puncak dibeulah, meureun nya masalah fisik, paling dipikaresep patali jeung kolom sorangan.
Puncak pamisah patali sipat fisik kolom sorangan biasana alatan inlet atanapi outlet frits sawaréh diblokir, atawa reorganisasi partikel dina kolom, sahingga fase mobile ngalir leuwih gancang ti fase mobile di wewengkon nu tangtu formasi channel kolom .di wewengkon séjén (11) .Sawaréh clogged frit kadang bisa diberesihan ku reversing aliran ngaliwatan kolom;kumaha oge, dina pangalaman abdi, ieu biasana mangrupa jangka pondok tinimbang solusi jangka panjang. Ieu mindeng fatal kalawan kolom modern lamun partikel recombine dina kolom. Dina titik ieu, éta pangalusna pikeun ngaganti kolom tur nuluykeun.
Puncak dina Gambar 1g, ogé ti conto panganyarna dina lab kuring sorangan, biasana nunjukkeun yén sinyal téh jadi luhur nu geus ngahontal tungtung luhur rentang respon. Pikeun detektor absorbance optik (UV-vis dina hal ieu), nalika konsentrasi analyte pisan tinggi, analyte nu absorbs lolobana cahaya ngaliwatan sél aliran detektor, ninggalkeun saeutik pisan cahaya tina rupa-rupa sumber sinyal nu teu dideteksi ku photoavinder listrik. ise, kayaning lampu stray jeung "arus poék", ngajadikeun sinyal pisan "kabur" dina penampilan sarta bebas tina konsentrasi analit.Nalika ieu kajantenan, masalahna tiasa gampang direngsekeun ku cara ngirangan volume suntikan analit - ngirangan volume suntikan, éncér sampel, atanapi duanana.
Di sakola kromatografi, kami nganggo sinyal detektor (nyaéta, sumbu-y dina kromatogram) salaku indikator konsentrasi analit dina sampel. Janten sigana aneh ningali kromatogram kalayan sinyal di handap nol, sabab interpretasi basajan nyaéta yén ieu nunjukkeun konsentrasi analit négatip - anu tangtosna henteu mungkin sacara fisik.
Dina hal ieu, puncak négatip saukur hartina molekul eluting tina kolom nyerep kirang cahaya ti fase mobile sorangan langsung saméméh jeung sanggeus puncak. Ieu bisa lumangsung, contona, lamun ngagunakeun panjang gelombang deteksi rélatif low (<230 nm) jeung aditif fase mobile anu nyerep lolobana cahaya dina panjang gelombang ieu. Aditif sapertos bisa jadi fase mobile komponén panyangga atawa négatif panyangga kayaning a. kurva libration sarta ménta inpo kuantitatif akurat, jadi euweuh alesan fundamental pikeun nyingkahan éta per se (metoda ieu sok disebut salaku "deteksi UV teu langsung") (13). Tapi, lamun urang rék nyingkahan puncak négatip sakabehna, dina kasus deteksi absorbance, leyuran Hadé pisan mun éta ngagunakeun panjang gelombang deteksi béda ambéh analyte fase nyerep cahaya atawa leuwih ti fase mobile.
Puncak négatif ogé tiasa muncul nalika ngagunakeun deteksi indéks réfraktif (RI) nalika indéks réfraktif komponén lian ti analit dina sampel, sapertos matriks pangleyur, béda sareng indéks réfraktif fase sélulér. Ieu ogé kajadian sareng deteksi UV-vis, tapi éfék ieu condong diréduksi relatif ka deteksi RI.
Dina bagian tilu dina topik dasar ngungkulan LC, Kuring ngabahas kaayaan nu bentuk puncak observasi béda ti bentuk puncak ekspektasi atawa normal. Ngungkulan éféktif masalah sapertos dimimitian ku pangaweruh ngeunaan bentuk puncak ekspektasi (dumasar kana téori atawa pangalaman prior jeung métode nu aya), jadi simpangan tina ekspektasi ieu téh écés. Masalah bentuk Puncak boga loba alesan poténsi béda (sabagéan ageung alesan pikeun ngabéréskeun masalah ieu, dina jéntré I, jeung sajabana) tina téori ieu. often.Know rinci ieu nyadiakeun tempat alus pikeun ngamimitian ngungkulan, tapi teu candak sagala possibilities.Readers kabetot dina daptar leuwih di-jero sabab na leyuran bisa ningali ka LCGC "LC Troubleshooting Guide" bagan témbok.
(4) LCGC "LC Troubleshooting Guide" bagan témbok.https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Analisis Data jeung Processing Signal dina Kromatografi (Elsevier, New York, NY, 1998), pp 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF og Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev.907, 31-44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.