Sababaraha topik ngungkulan LC teu pernah kadaluwarsa, sabab aya masalah dina praktekna LC, sanajan téhnologi instrumen ngaronjatkeun kana waktu. Aya loba cara nu masalah bisa timbul dina sistem LC sarta mungkas nepi di bentuk puncak kirang.
Senang nulis kolom "LC Troubleshooting" ieu sareng mikiran topik unggal bulan, sabab sababaraha topik henteu pernah kaluar tina gaya. Sedengkeun dina widang kromatografi, panalungtikan topik atanapi ide-ide tertentu janten leungit sabab diganti ku ideu anu langkung énggal sareng langkung saé, dina widang ngungkulan masalah, ti saprak artikel ngungkulan anu munggaran muncul dina jurnal ieu (sabaraha LC dina waktos éta masih kénéh aya) 198 (sabaraha LC dina Jurnal masih aya). sababaraha taun katukang, Kuring geus fokus sababaraha bagian LC Troubleshooting on tren kontemporer mangaruhan kromatografi cair (LC) (contona, babandingan relatif pamahaman kami pangaruh tekanan dina ingetan [2] Kamajuan Anyar) Interprétasi kami hasil LC jeung kumaha troubleshoot kalawan instruments LC modern. Dina installment bulan ieu sacara, nu kuring neraskeun 1 séri 2, nu 2 nu dimimitian dina 1 Désémber 2. Topik "hirup jeung maot" ngeunaan LC ngungkulan - elemen anu gede pikeun troubleshooter sagala penting, euweuh urusan umur sistem kami ngagunakeun.Topik inti séri ieu kacida relevan pikeun LCGC urang kawentar "LC Troubleshooting Guide" bagan témbok (4) nongkrong di loba laboratorium.Pikeun bagian katilu ti séri ieu, kuring milih pikeun difokuskeun bentuk atawa isu nu patali jeung puncak 4. sabab poténsi béda tina bentuk puncak goréng!Urang teu bisa mertimbangkeun sakabéh masalah ieu di jéntré dina hiji artikel, jadi dina installment munggaran ieu dina topik, abdi bakal difokuskeun sababaraha leuwih sering kuring ningali. Kuring miharep pamaké LC ngora jeung heubeul bakal manggihan sababaraha tips mantuan sarta panginget dina topik penting ieu.
Kuring manggihan sorangan beuki ngajawab patarosan ngungkulan kalawan "nanaon anu mungkin".Tanggapan ieu sigana gampang lamun tempo observasi nu hese napsirkeun, tapi kuring manggihan eta mindeng luyu.Kalayan loba mungkin sabab tina bentuk puncak goréng, hal anu penting pikeun tetep hiji pikiran kabuka nalika tempo naon masalahna bisa jadi, sarta pikeun bisa prioritas sabab poténsi dimimitian usaha ngungkulan urang, fokus kana eta paling umum kamungkinan.
Hiji hambalan konci dina sagala latihan troubleshooting - tapi hiji nu kuring pikir underrated - nyaeta recognizing yén aya masalah anu perlu direngsekeun.Recognizing yén aya masalah mindeng hartina recognizing yén naon kajadian ka alat nu béda ti ekspektasi urang, nu ngawangun ku téori, pangaweruh empiris, jeung pangalaman (5).The "puncak bentukna" dimaksudkeun di dieu nyaeta ammetrical (sabenerna ngarujuk kana bentuk peaal, ammetrical, henteu ngan asimétri, ammetric). mulus, mengembang, tepi ngarah, tailing, jsb), tapi ogé ka width. ekspektasi kami pikeun bentuk puncak sabenerna basajan. Téori (6) ogé ngarojong ekspektasi buku ajar yén, di hal nu ilahar, puncak kromatografi kudu simetris tur saluyu jeung bentuk distribusi Gaussian, sakumaha ditémbongkeun dina Gambar 1a. Naon anu urang nyangka ngeunaan masalah nu bakal datang leuwih kompleks jeung leuwih kompleks dina mangsa nu bakal datang. artikel.Wangun puncak séjénna dina Gambar 1 némbongkeun sababaraha kamungkinan séjén nu bisa dititénan-dina basa sejen, sababaraha cara hal bisa jadi salah. Dina sésa installment ieu, urang bakal méakkeun waktu nyawalakeun sababaraha conto husus tina situasi nu bisa ngakibatkeun jenis bentuk ieu.
Kadang-kadang puncak henteu katalungtik pisan dina kromatogram dimana aranjeunna diharepkeun bakal eluted.The bagan témbok luhur nunjukkeun yén henteuna puncak (asumsina sampel sabenerna ngandung analit target dina konsentrasi anu sakuduna nyieun respon detektor cukup pikeun nempo eta luhureun noise) biasana patali jeung sababaraha masalah instrumen atawa kaayaan fase mobile lepat (lamun observasi pisan). puncak, biasana teuing "lemah"). Daptar pondok tina masalah poténsi jeung solusi dina kategori ieu bisa kapanggih dina Table I.
Sakumaha didadarkeun di luhur, sual sabaraha broadening puncak kudu ditolerir saméméh nengetan jeung nyoba ngalereskeun eta mangrupakeun topik kompléks nu bakal dibahas dina artikel nu bakal datang. Pangalaman abdi nyaeta broadening puncak signifikan mindeng dibarengan ku parobahan signifikan dina bentuk puncak, sarta tailing puncak téh leuwih umum ti pre-puncak atawa splitting.Najan kitu, nu nominally simetris sababaraha puncak ogé bisa disababkeun ku sababaraha alesan:
Unggal masalah ieu geus dibahas di jéntré dina isu saméméhna tina ngungkulan LC, jeung pamiarsa kabetot dina jejer ieu bisa ningali ka ieu artikel saméméhna pikeun émbaran ngeunaan sabab akar jeung solusi poténsial pikeun masalah ieu. Leuwih jéntré.
Puncak tailing, puncak fronting, sarta bengkahna sadayana tiasa disababkeun ku fenomena kimiawi atawa fisik, sarta daptar solusi poténsial pikeun masalah ieu rupa-rupa lega, gumantung kana naha urang keur kaayaan masalah kimiawi atawa fisik. Sering, ku ngabandingkeun puncak béda dina kromatogram a, anjeun tiasa manggihan clues penting ngeunaan nu palakuna. sababaraha puncak kapangaruhan, tapi sésana kasampak rupa, sabab paling dipikaresep kimiawi.
Nyababkeun kimiawi puncak tailing teuing kompléks pikeun ngabahas sakeudeung di dieu. Nu maca kabetot disebut masalah panganyarna ngeunaan "LC Troubleshooting" pikeun sawala leuwih di-jero (10). Tapi, hiji hal gampang pikeun nyobaan nyaéta pikeun ngurangan massa analyte nyuntik tur tingal lamun bentuk puncak ngaronjatkeun. massa analit, atawa kaayaan kromatografi kudu dirobah jadi bentuk puncak alus bisa dimeunangkeun sanajan kalawan massa nu leuwih gede nyuntik.
Aya ogé loba alesan fisik poténsial pikeun puncak tailing.Readers kabetot dina sawala nu detil rupa kemungkinan disebut masalah sejen panganyarna ngeunaan "LC Troubleshooting" (11) .Salah sahiji sabab fisik leuwih umum tina tailing puncak mangrupakeun sambungan goréng dina titik antara injector jeung detektor (12) .Conto ekstrim dipidangkeun dina Gambar 1d, Sistim klep anyar urang dicandak dina sababaraha minggu katukang. yén kami geus teu dipaké saméméh, sarta dipasang a loop suntik volume leutik kalawan ferrule nu geus molded onto a stainless steel capillary.After sababaraha percobaan ngungkulan awal, urang sadar yén jero port di stator klep suntik éta loba deeper ti kami dipaké pikeun, hasilna volume maot badag di handapeun port.Masalah ieu gampang direngsekeun ku cara ngaganti tube ferru posisi ditangtoskeun, urang bisa direngsekeun ku cara ngaganti posisi ferru ditangtoskeun. volume maot di handapeun port.
Puncak fronts kawas nu ditémbongkeun dina Gambar 1e ogé bisa disababkeun ku fisik atawa kimia problems.A ngabalukarkeun fisik umum tina ujung ngarah éta ranjang partikel kolom teu ogé dipak, atawa yén partikel geus reorganized kana waktu.Salaku kalawan tailing puncak disababkeun ku fenomena fisik ieu, kalawan cara anu pangalusna pikeun ngalereskeun ieu pikeun ngaganti kolom tur tetep going.Fundamentally timbul tina wangun dasarna kimiawi urang mindeng timbul tina naon anu disebut ujung pearls. "non-linier" kaayaan ingetan.Dina kaayaan idéal (linier), jumlah analit dipikagaduh ku fase stasioner (ku kituna, faktor ingetan) sacara linier patali jeung konsentrasi analit dina kolom.Chromatographically, ieu ngandung harti yén salaku massa analit disuntikkeun kana kolom naek, puncak jadi jangkung, non-linear hubunganana, tapi henteu lega, hubungan ieu pegat, tapi teu lega. Henteu ngan jadi jangkung tapi ogé lega sakumaha leuwih massa ieu nyuntik.Sajaba ti éta, wangun nonlinier nangtukeun bentuk puncak kromatografi, hasilna ngarah atawa labuh edges.Salaku overload massa nu ngabalukarkeun puncak tailing (10), puncak ngarah disababkeun ku ingetan nonlinier ogé bisa didiagnosis ku cara ngurangan disuntikkeunanalyt bentukna kudu ningkatkeun massana. tepi, atawa kaayaan kromatografi kudu dirobah pikeun ngaleutikan kabiasaan ieu.
Sok we niténan naon sigana puncak "beulah", ditémbongkeun saperti dina Gambar 1f. Léngkah munggaran dina ngarengsekeun masalah ieu téh nangtukeun naha bentuk puncak alatan ko-élusi parsial (ie, ayana dua sanyawa béda tapi raket eluting). Puncak "pamisah" aya hubunganana sareng Kinerja fisik henteu aya hubunganana sareng kolom éta sorangan. Sering, petunjuk anu paling penting pikeun kaputusan ieu nyaéta naha sadaya puncak dina kromatogram nunjukkeun bentuk pamisah, atanapi ngan ukur hiji atanapi dua. Upami éta ngan ukur hiji atanapi dua, éta sigana masalah ko-élusi; lamun sagala puncak dibeulah, meureun nya masalah fisik, paling dipikaresep patali jeung kolom sorangan.
Puncak pamisah patali sipat fisik kolom sorangan biasana alatan inlet atanapi outlet frits sawaréh diblokir, atawa reorganisasi partikel dina kolom, sahingga fase mobile ngalir leuwih gancang ti fase mobile di wewengkon nu tangtu formasi channel kolom .di wewengkon séjén (11) .Sawaréh clogged frit kadang bisa diberesihan ku reversing aliran ngaliwatan kolom; kumaha oge, dina pangalaman abdi, ieu biasana mangrupa jangka pondok tinimbang solusi jangka panjang. Ieu mindeng fatal kalawan kolom modern lamun partikel recombine dina kolom. Dina titik ieu, éta pangalusna pikeun ngaganti kolom tur nuluykeun.
Puncak dina Gambar 1g, ogé ti conto panganyarna dina lab kuring sorangan, biasana nunjukkeun yén sinyal téh jadi luhur nu geus ngahontal tungtung luhur rentang respon. Pikeun detektor absorbance optik (UV-vis dina hal ieu), nalika konsentrasi analyte pisan tinggi, analyte nu absorbs lolobana cahaya ngaliwatan sél aliran detektor, ninggalkeun saeutik pisan cahaya tina kaayaan sinyal photoavinder ieu dideteksi. ku rupa-rupa sumber noise, kayaning lampu stray jeung "arus poék", sahingga sinyal pisan "kabur" dina penampilan sarta bebas tina konsentrasi analyte. Nalika ieu kajantenan, masalahna tiasa gampang direngsekeun ku cara ngirangan volume suntikan analit - ngirangan volume suntikan, éncér sampel, atanapi duanana.
Di sakola kromatografi, kami nganggo sinyal detektor (nyaéta, sumbu-y dina kromatogram) salaku indikator konsentrasi analit dina sampel. Janten sigana aneh ningali kromatogram kalayan sinyal di handap nol, sabab interpretasi saderhana nyaéta yén ieu nunjukkeun konsentrasi analit négatip - anu tangtosna henteu mungkin sacara fisik.
Dina hal ieu, puncak négatip ngan hartina molekul eluting tina kolom nyerep kirang cahaya ti fase mobile sorangan langsung saméméh jeung sanggeus puncak. Ieu bisa lumangsung, contona, lamun ngagunakeun panjang gelombang deteksi rélatif low (<230 nm) jeung aditif fase mobile anu nyerep lolobana cahaya dina panjang gelombang ieu. Aditif sapertos bisa jadi fase mobile komponén panyangga atawa négatif bisa dipaké panyangga atawa négatif kayaning méthanol. puncak nyiapkeun kurva calibration sarta ménta inpo kuantitatif akurat, jadi euweuh alesan fundamental pikeun nyingkahan éta per se (metoda ieu kadangkala disebut "deteksi UV teu langsung") (13) . Tapi, lamun urang rék nyingkahan puncak négatip sakabehna, dina kasus deteksi absorbance, leyuran Hadé pisan mun éta ngagunakeun panjang gelombang deteksi béda, sahingga fase nyerep leuwih ti fase mobile, sahingga fase nyerep leuwih ti fase mobile. cahayana tibatan analit.
Puncak négatif ogé bisa muncul nalika maké indéks réfraktif (RI) deteksi nalika indéks réfraktif komponén lian ti analit dina sampel, kayaning matrix pangleyur, béda ti indéks réfraktif fase mobile. Ieu ogé lumangsung kalawan deteksi UV-vis, tapi pangaruh ieu condong jadi attenuated relatif ka deteksi RI. fase mobile.
Dina bagian tilu dina topik dasar ngungkulan LC, Kuring ngabahas kaayaan nu bentuk puncak observasi béda ti bentuk puncak ekspektasi atawa normal. Ngungkulan masalah sapertos dimimitian ku pangaweruh ngeunaan bentuk puncak ekspektasi (dumasar kana téori atawa pangalaman prior jeung métode nu aya), jadi simpangan tina ekspektasi ieu téh écés. Masalah bentukna Puncak boga loba poténsi sabab béda (dina ujung ieu, jeung saterusna. alesan kuring ningali paling sering. Nyaho rinci ieu nyadiakeun tempat nu sae pikeun ngamimitian ngungkulan, tapi teu newak sagala kemungkinan. Pamiarsa kabetot dina daptar leuwih di-jero sabab na leyuran bisa ningali ka LCGC "LC ngungkulan Guide" bagan témbok.
(4) LCGC "LC Troubleshooting Guide" bagan témbok.https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Analisis Data jeung Processing Sinyal dina Kromatografi (Elsevier, New York, NY, 1998), pp 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF og Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev. 907, 31-44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.