Hatur nuhun pikeun ngadatangan Nature.com.Vérsi browser anu anjeun anggo gaduh dukungan terbatas pikeun CSS. Kanggo pangalaman pangsaéna, kami nyarankeun yén anjeun nganggo browser anu diropéa (atanapi mareuman modeu kasaluyuan dina Internet Explorer).
Partikel silika porous anu disiapkeun ku métode sol-gél kalawan sababaraha modifikasi pikeun meunangkeun macroporous particles.These partikel anu diturunkeun ku malik tambahan fragmentation chain transfer (RAFT) polimérisasi kalawan N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) jeung styrene pikeun nyiapkeun N-phenylmaleimide fase stasioner1 (PMP) stasioner1 stasioner1. .8 mm id) anu dipak ku slurry packing.Evaluated PMP separation kolom tina campuran péptida diwangun ku lima péptida (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) jeung kinerja chromatorumsingraphical albuminurgik (promotif chromatorum). Jumlah plat téoritis tina campuran péptida saluhur 280.000 pelat / m². Ngabandingkeun kinerja separation tina kolom dimekarkeun kalawan kolom komérsial Ascentis Express RP-Amide, éta katalungtik yén kinerja separation tina kolom PMP éta punjul ti kolom komérsial dina watesan efisiensi separation sarta resolusi.
Dina taun-taun ayeuna, industri biopharmaceutical parantos janten pasar global anu ngembangna kalayan paningkatan anu ageung dina pangsa pasar. Kalayan kamekaran ngabeledug industri biofarmaseutikal1,2,3, analisa péptida sareng protéin anu dipikahoyong pisan. cairan, jaringan jeung sél mangrupa tugas pisan nangtang alatan jumlah badag spésiés berpotensi bisa didéteksi dina sampel tunggal. Sanajan spéktrométri massa mangrupa alat mujarab pikeun péptida jeung protéin sequencing, lamun sampel sapertos anu nyuntik kana spéktrométer massa dina hiji pass, separation moal idéal. Masalah ieu bisa mitigated ku ngalaksanakeun analisa jumlahna massal (ka LC) spéktromatografi cair. méter dina waktu nu tangtu4,5,6.Salian ti éta, salila separation fase cair, analytes bisa museur di wewengkon sempit, kukituna concentrating analytes ieu sarta ngaronjatkeun sensitipitas deteksi MS.Kromatografi cair (LC) geus maju sacara signifikan leuwih dékade kaliwat tur geus jadi téknik populér di analisis proteomic7,8,9,10.
Kromatografi cair fase tibalik (RP-LC) loba dipaké pikeun purifikasi jeung separation tina campuran péptida maké silika octadecyl-dirobah (ODS) salaku fase cicing11,12,13. Sanajan kitu, RP fase cicing teu nyadiakeun separation nyugemakeun tina péptida jeung protéin alatan fase 14, philore stasioner husus maranéhanana anu dipikabutuh pikeun 14, philore stasioner husus. nganalisis péptida jeung protéin kalawan gugus polar jeung non-polar pikeun berinteraksi sareng jeung nahan analytes ieu16. Campuran-mode kromatografi, nu nyadiakeun interaksi multimodal, bisa jadi alternatif pikeun RP-LC pikeun misahkeun péptida, protéin, jeung campuran kompléks séjénna. Sababaraha campuran-mode stasioner fase geus disiapkeun jeung fase stasioner modeu campuran 18 geus disiapkeun jeung fase, peptide11, para11, jeung fase 1, peptide1, jeung protéin geus disiapkeun. 20,21. Campuran-mode fase cicing (LILIN / RPLC, HILIC / RPLC, polar intercalation / RPLC) cocog pikeun péptida jeung protéin separations alatan ayana duanana grup polar jeung non-polar22,23,24,25,26,27,28 .Similarly, polar fase separasi kakuatan polar jeung polar, polar, polar, polar, polar, beungkeutan alus, némbongkeun kakuatan polar jeung gugus selektif polar alus pikeun stasion polar sarta seleksi polar. jeung analit non-polar, sabab separation gumantung kana interaksi antara analit jeung fase cicing.Interaksi multimodal 29, 30, 31, 32. Nembe, Zhang et al.30 nyiapkeun fase stasioner polyamine dodecyl-terminated tur suksés dipisahkeun hidrokarbon, antidepressants, flavonoid, nucleosides, estrogens, sarta sababaraha analytes séjén.The intercalator polar boga duanana gugus polar jeung non-polar, ku kituna bisa dipaké pikeun misahkeun péptida jeung protéin nu mibanda duanana hidrofobik jeung hidrofilik-kolom gugus. handapeun ngaran dagang kolom Ascentis Express RP-Amide, tapi kolom ieu dipaké pikeun analisis amina 33 wungkul.
Dina ulikan ayeuna, hiji fase cicing polar-embedded (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) ieu disiapkeun jeung dievaluasi pikeun separation of péptida jeung trypsin digests of HSA.The fase cicing ieu disiapkeun ngagunakeun strategi handap.Partikel silika porous anu disiapkeun nurutkeun prosedur dibikeun dina ieu publikasi urang saméméhna mibanda sababaraha modifikasi kana protokol préparasi, Péthylene Glikogéna (protocol, PE Glikoseléna) . Pikeun nyiapkeun partikel silika kalayan ukuran pori badag. Kadua, hiji ligan anyar, phenylmaleimide-métil vinyl isocyanate, ieu disintésis sarta dipaké pikeun derivatize partikel silika pikeun nyiapkeun hiji fase stasioner study polar. Fase stasioner hasilna ieu dipak kana kolom stainless steel (100 × 1.8 mm id) ngajamin skéma ranjang dioptimalkeun pikeun packing kolom dioptimalkeun. kolom nu.Evaluate dipak separation kolom tina campuran péptida diwangun ku lima péptida;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) jeung nyerna Trypsin of albumin sérum manusa (HAS). .Boh péptida jeung protéin anu katalungtik ogé ngumbar tur efisien dina kolom PMP, nu éta leuwih efisien ti kolom Ascentis Express RP-Amide.
PEG (Polyéthylene Glycol), Urea, Asam asétat, Trimethoxy Orthosilicate (TMOS), Trimethyl Chlorosilane (TMCS), Trypsin, Human Serum Albumin (HSA), Amonium Chloride, Urea, Hexane Methyldisilazane (HMDS), Methacryloyl Chloride (MCTEMP, Styrene, Grade 4, Benzylchloride) trile (ACN), Métanol, 2-Propanol, sarta Acetone Dibeuli ti Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, AS).
Campuran uréa (8 g), poliétilén glikol (8 g), jeung 8 mL asam asétat 0,01 N diaduk salila 10 menit, terus 24 mL TMOS ditambahkeun kana eta dina kaayaan és-tiis. Campuran réaksi ieu dipanaskeun dina 40 ° C salila 6 jam lajeng dina 120 ° C cai bahan garing dituang dina autoclave salila 8 jam. 70 ° C pikeun jam 12. Massa lemes garing ieu taneuh lemes dina oven jeung calcined dina 550 ° C pikeun jam 12. Tilu bets anu disiapkeun jeung dicirikeun pikeun nalungtik reproducibility dina ukuran partikel, ukuran pori jeung aréa permukaan.
Ku modifikasi permukaan partikel silika jeung pre-sintésis ligan phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) dituturkeun ku polimérisasi radial kalawan styrene, sanyawa polar-ngandung grup ieu disiapkeun.Fase stasioner pikeun agrégat sareng ranté polystyrene.Prosés persiapan dijelaskeun di handap.
N-phenylmaleimide (200 mg) jeung métil vinyl isocyanate (100 mg) ieu leyur dina toluene garing, sarta 0,1 ml 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ditambahkeun kana flask réaksi pikeun nyiapkeun phenylmaleimide-métil vinyl isocyanate copolymer (PMC) 6 jam dina dried kopolimer 3 ° C. 40 ° C salila 3 jam.
partikel silika garing (2 g) ieu dispersed dina toluene garing (100 ml), diaduk jeung sonicated dina 500 ml buleud handap flask pikeun 10 min.PMCP (10 mg) ieu leyur dina toluene jeung ditambahkeun dropwise kana flask réaksi ngaliwatan corong muterna. Campuran ieu refluxed dina 100 ° C jeung saringan 6 ° C pikeun jam 100 ° C jeung 6 ° C. jam. Saterusna, partikel silika kabeungkeut PMCP (100 g) leyur dina toluene (200 ml) jeung 4-hidroksi-TEMPO (2 mL) ditambahkeun dina ayana 100 µL dibutyltin dilaurate salaku katalis. Campuran ieu diaduk dina 50 ° C salila 8 jam dina 350 ° C, disaring jeung garing.
Styrene (1 mL), benzoyl péroxida BPO (0,5 mL), jeung partikel silika TEMPO-PMCP-napel (1,5 g) dispersed dina toluene jeung purged kalawan nitrogen. The polimérisasi styrene dilaksanakeun dina 100 ° C salila 12 jam. Produk anu dihasilkeun ieu dikumbah ku métanol jeung skéma sakabéhna garing dina Figure 60 ° C sapeuting.
Sampel anu degassed di 393 K salila 1 jam pikeun ménta tekanan residual kirang ti 10-3 Torr.Jumlah N2 adsorbed dina tekanan relatif P / P0 = 0.99 ieu dipaké pikeun nangtukeun volume pori total.The morfologi bulistir jeung ligan-kabeungkeut silika partikel ieu nalungtik kalawan scanning éléktron micros, Japan-ligi-bone (H. Sampel éléktron Jepang). partikel silika ded) ieu disimpen dina kolom aluminium ngagunakeun tape karbon napel.Emas ieu plated dina sampel ngagunakeun Q150T sputter coater, sarta 5 nm Au lapisan ieu disimpen dina samples.This ngaronjatkeun efisiensi prosés maké tegangan lemah sareng nyadiakeun gandum rupa, sputtering tiis.A Thermo éléktron (Waltham, MA, AS1) 2. Analisis Elemen Flash (Waltham, MA, AS) 2 Flash EA. Mastersizer 2000 ukuran partikel analyzer ieu dipaké pikeun ménta distribusi ukuran partikel.Partikel silika taranjang jeung ligan-kabeungkeut partikel silika (5 mg unggal) anu dispersed dina 5 ml isopropanol, sonicated pikeun 10 mnt, vortexed pikeun 5 mnt, sarta disimpen dina bangku optik tina Mastersizer.Thermogravimetric menit 5. Analisis suhu per 0 °C dina rentang 0 °C per 0.
Kaca-dijejeran stainless steel kolom sempit-bore tina dimensi (100 × 1,8 mm id) ieu dipak ngagunakeun métode slurry packing, nerapkeun prosedur sarua dipaké dina Ref.31.A kolom stainless steel (kaca-dijejeran, 100 × 1,8 mm id) kalawan outlet pas ngandung frit 1 µm ieu disambungkeun ka packer slurry (Alltech Deerfield, IL, AS). Nyiapkeun slurry fase cicing ku suspending 150 mg fase stasioner dina 1,2 mL métan jeung métanol pikeun neundeun eta. kitu ogé pangleyur propelling.Eusian kolom sequentially ku nerapkeun tekenan 100 MP salila 10 menit, 80 MP salila 15 menit, sarta 60 MP salila 30 menit.During packing, Geter mékanis ieu dilarapkeun kalawan dua shakers kolom GC (Alltech, Deerfield, IL, AS) pikeun mastikeun packing seragam dina kolom jeung ngaleupaskeun sagala karuksakan. kolom ti Unit packing slurry tur sambungkeun pas sejen ka inlet jeung sistem LC pikeun pariksa kinerja na.
Pompa LC (10AD Shimadzu, Jepang), injector (Valco (AS) C14 W.05) kalayan loop suntik 50nL, degasser mémbran (Shimadzu DGU-14A), jandela kapilér UV-VIS diwangun. bungkusan ter, kapilér (50 μm id 365 sarta ngurangan kapilér union (50 μm) dipasang dina 1/16 ″ outlet tina rugbi réduksi. Pangumpulan data jeung ngolah kromatografi anu dipigawé maké software Multichro 2000. Ngawaskeun dina 254 nm Analytes diuji pikeun absorbance data UV. Prodta (Ormatographic) dianalisis.
Albumin tina sérum manusa, bubuk lyophilized, ≥ 96% (éléktroforésis gél agarose) 3 mg dicampur tripsin (1,5 mg), 4,0 M uréa (1 ml), jeung 0,2 M amonium bikarbonat (1 mL). Solusi ieu diaduk salila 10 menit sarta diteundeun dina cai mandi di 67,1 ° C dina suhu 67,1 ° C dina suhu 67,1 ° C dina cai 0,1% quench. Ganti solusi sareng simpen di handap 4 ° C.
Pemisahan campuran péptida sareng HSA trypsin digests dievaluasi sacara misah dina kolom PMP. Pariksa pamisahan campuran péptida sareng nyerna trypsin HSA ku kolom PMP sareng bandingkeun hasilna kana kolom Ascentis Express RP-Amide. Nomer plat téoritis diitung sapertos kieu:
Gambar SEM partikel silika bulistir jeung partikel silika kabeungkeut ligan ditémbongkeun dina Gbr.2 .Gambar SEM partikel silika bulistir (A, B) némbongkeun yén, kontras jeung studi urang saméméhna, partikel ieu buleud nu partikel nu elongated atawa boga simetri henteu teratur. Beungeut partikel silika ligan-kabeungkeut (C, D) nyaeta smoother ti partikel silika bulistir, nu bisa jadi alatan palapis polystyrene permukaan partikel silika.
Nyeken gambar mikroskop éléktron partikel silika bulistir (A, B) jeung ligan-kabeungkeut partikel silika (C, D).
Sebaran ukuran partikel partikel silika bulistir jeung partikel silika ligan-kabeungkeut ditémbongkeun dina Gambar 3 (A). Kurva distribusi ukuran partikel dumasar-Volume némbongkeun yén ukuran partikel silika ngaronjat sanggeus modifikasi kimiawi (Gbr. 3A).Data distribusi ukuran partikel partikel silika ti ulikan ayeuna jeung ulikan saméméhna dibandingkeun dina Table 1 (A, P.3μ, ukuran partikel, d.3μ) dibandingkeun dina Table 1 (A, D.3 μ (partikel). kana ulikan kami saméméhna mibanda ad (0.5) nilai 3.05 μm (polystyrene-kabeungkeut silika partikel) 34. bets ieu miboga sebaran ukuran partikel narrower dibandingkeun ulikan saméméhna urang alatan babandingan varying PEG, uréa, TMOS, jeung asam asétat dina campuran réaksi. Ukuran partikel tina PMP fase partikel-kabeungkeut ieu rada leuwih badag batan nu ti fase partikel silika-beungkeut permukaan polystyrene ieu. stirena ngan ukur neundeun lapisan polistirena (0,97 µm) dina permukaan silika, sedengkeun dina fase PMP ketebalan lapisanna 1,38 µm.
Distribusi ukuran partikel (A) jeung distribusi ukuran pori (B) partikel silika bulistir jeung partikel silika kabeungkeut ligan.
Ukuran pori, volume pori jeung aréa permukaan partikel silika ulikan ayeuna dirumuskeun dina Table 1 (B). The propil PSD partikel silika bulistir jeung partikel silika ligan-beungkeut ditémbongkeun dina Gambar 3 (B). Hasilna comparable kana ulikan urang saméméhna. Ukuran pori tina bulistir jeung ligan-dibeungkeut silika jeung partikel nu masing-masing 2491, nu nunjukkeun yén ukuran pore nu 2491, nu masing-masing nurun po. modifikasi kimiawi, sakumaha ditémbongkeun dina Table 1 (B), sarta parobahan kurva ditémbongkeun dina Gbr. 3 (B). Nya kitu, volume pori partikel silika turun tina 0,67 nepi ka 0,58 cm3 / g sanggeus modifikasi kimiawi. Wewengkon permukaan spésifik tina partikel silika ayeuna ditalungtik nyaeta 116 m2 / g 2 (ditémbongkeun saméméhna ti partikel silika 116 m2 / g 2, nu saméméhna geus ditémbongkeun ka 116 m2 / g2). B), luas permukaan (m2/g) partikel silika ogé turun tina 116 m2/g jadi 105 m2/g sanggeus modifikasi kimiawi.
Hasil analisis unsur fase cicing ditémbongkeun dina Table 2. The loading karbon tina fase cicing ayeuna nyaeta 6,35%, nu leuwih handap tina loading karbon tina ulikan saméméhna urang (polystyrene kabeungkeut partikel silika, 7,93% 35 jeung 10,21%, masing-masing) 42. The loading karbon tina fase stasioner ayeuna, sakumaha ogé préparasi popherene SP, ligands ayeuna, sakumaha low tina , nylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) jeung 4-hydroxy-TEMPO dipaké. Persentase beurat nitrogén fase diam ayeuna nyaéta 2,21%, dibandingkeun jeung 0,1735 jeung 0,85% beurat nitrogén dina studi saméméhna. éta 2,7% jeung 2,9%, masing-masing, sedengkeun loading karbon tina produk ahir (6) éta 6,35%, ditémbongkeun saperti dina Table 2. The leungitna beurat ieu dipariksa kalawan PMP fase diam, sarta kurva TGA ditémbongkeun dina Gambar 4. Kurva TGA nembongkeun leungitna beurat 8,6%, nu aya dina perjangjian alus jeung N.35 karbon, teu ukur aya dina perjangjian alus jeung N.35 karbon, tapi N.35.
Ligan phenylmaleimide-methylvinylisocyanate dipilih pikeun modifikasi permukaan partikel silika sabab mibanda gugus phenylmaleimide polar jeung gugus vinylisocyanate.Grup isocyanate Vinyl salajengna bisa meta jeung styrene ku polimérisasi radikal hirup. Alesan kadua pikeun nyelapkeun gugus nu boga interaksi sedeng jeung éléktrostatik sarta interaksi mophenylytelmatelyte nu teu kuat antara fase éléktrostatik jeung stasioner euweuh. Ety teu boga muatan maya dina pH normal. Polaritasna fase diam bisa dikontrol ku jumlah optimal stirena jeung waktu réaksi polimérisasi radikal bébas. Léngkah pamungkas réaksi (polimérisasi radikal bébas) kritis tur bisa ngarobah polaritasna fase cicing. disiapkeun kalawan konsentrasi béda tina styrene boga loadings karbon béda.Again, beban ieu fase cicing kana kolom stainless steel sarta pariksa kinerja kromatografi maranéhanana (selectivity, resolusi, nilai N, jsb) .Dumasar kana percobaan ieu, hiji rumusan dioptimalkeun dipilih pikeun nyiapkeun fase cicing PMP pikeun mastikeun polaritasna dikawasa jeung ingetan analit alus.
Lima campuran péptida (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) ogé dievaluasi ngagunakeun kolom PMP ngagunakeun fase mobile;60/40 (v/v) asetonitril/cai (0,1% TFA) dina laju aliran 80 μL/menit.Dina kaayaan élusi optimal, jumlah plat téoritis (N) per kolom (100 × 1,8 mm id) nyaéta 20.000 ± 100 (200.000 pelat N/m²). gram ditémbongkeun dina Gambar 5A. Analisis gancang dina kolom PMP dina laju aliran tinggi (700 μL / mnt), lima péptida anu eluted dina hiji menit, nilai N éta pohara alus, 13.500 ± 330 per kolom (100 × 1.8 mm id), Cocog jeung 135.000 mm (ukuran 135.000 mm/m). × 1,8 mm id) anu dipak kalawan tilu kavling béda tina PMP fase cicing pikeun mariksa reproducibility.The analyte konsentrasi pikeun tiap kolom dirékam ngagunakeun kaayaan élusi optimal sarta Jumlah pelat téoritis N jeung waktu ingetan pikeun misahkeun campuran test sarua dina unggal column.The data reproducibility pikeun kolom PMP ditémbongkeun dina Table 4.The reproducibility pisan low tina kolom, PMP 3.
Separation campuran péptida dina kolom PMP (B) jeung kolom Ascentis Express RP-Amide (A);fase mobile 60/40 ACN / H2O (TFA 0,1%), dimensi kolom PMP (100 × 1,8 mm id);analitik Urutan élusi sanyawa: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) jeung 5 (leucine) asam enkephalin)).
A kolom PMP (100 × 1.8 mm id) ieu dievaluasi pikeun separation of tryptic digests of sérum albumin manusa dina kinerja luhur kromatografi cair.The kromatogram dina Gambar 6 nunjukeun yen sampel dipisahkeun ogé sarta resolusina alus pisan.HSA digests dianalisis ngagunakeun laju aliran 100 µL/0.000/mnt cai jeung fase 100 µL/0.0% cai TFA. ditémbongkeun dina kromatogram (Gambar 6), nyerna HSA geus dibeulah jadi 17 puncak pakait jeung 17 péptida.Efisiensi separation unggal puncak dina HSA nyerna diitung sarta nilai dibere dina Table 5.
A tryptic nyerna HSA (100 × 1.8 mm id) ieu dipisahkeun dina kolom PMP;laju aliran (100 µL / mnt), fase mobile 60/40 asetonitril / cai kalawan 0,1% TFA.
dimana L nyaéta panjang kolom, η nyaéta viskositas fase gerak, ΔP nyaéta tekanan balik kolom, sarta u nyaéta laju linier fase mobile. Perméabilitas kolom PMP éta 2.5 × 10-14 m2, laju aliran éta 25 μL / mnt, sarta 60/40 v / v / v 1.0 mm perméabilitas kolom PMP 1. sarua jeung nu ti ulikan saméméhna urang Ref.34.The perméabilitas kolom dipak kalawan partikel superficially porous nyaéta: 1.7 × 10-15 pikeun 1.3 μm partikel, 3.1 × 10-15 pikeun 1.7 μm partikel, 5.2 × 10-15 jeung 2.5 × 2μm pikeun partikel 2.5 × 10-2μm. refore, perméabilitas fase PMP sarua jeung partikel inti-cangkang 5 μm.
dimana Wx nyaéta beurat kolom anu dipak kalayan kloroform, Wy nyaéta beurat kolom anu dipak kalayan métanol, sareng ρ nyaéta dénsitas pelarut. Kapadetan métanol (ρ = 0,7866) sareng kloroform (ρ = 1,484). s 31 nu saméméhna urang nalungtik éta 0,63 jeung 0,55, masing-masing. Ieu ngandung harti yén ayana ligan uréa ngurangan perméabilitas fase stasioner. Di sisi séjén, total porosity kolom PMP (100 × 1,8 mm id) nyaéta 0,60. The perméabilitas PMP kolom-tipe 8 leuwih handap ti C1 kolom-kolom packed. fase ligan C18 napel kana partikel silika salaku ranté linier, sedengkeun dina fase stasioner tipe polystyrene, lapisan polimér A kawilang kandel kabentuk sabudeureun eta.Dina percobaan has, porositas kolom diitung salaku:
Gambar 7A,B nembongkeun kolom PMP (100 × 1,8 mm id) jeung kolom Ascentis Express RP-Amide (100 × 1,8 mm id) ngagunakeun kaayaan élusi sarua (ie, 60/40 ACN/H2O jeung 0,1% TFA).) tina plot van Deemter.Campuran péptida anu dipilih (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) disiapkeun dina 20 µL/ Laju aliran minimum pikeun kadua kolom nyaéta 800 µL/min. Nyaéta kolom Express RP-Amide masing-masing 2,6 µm sareng 3,9 µm. Nilai HETP nunjukkeun yén efisiensi pamisahan kolom PMP (100 × 1,8 mm id) langkung saé tibatan kolom Ascentis Express RP-Amide anu sayogi sacara komersil (100 × 1,8 mm id dina plot). signifikan dibandingkeun ulikan urang saméméhna.Efisiensi separation luhur kolom PMP (100 × 1.8 mm id) dibandingkeun jeung kolom Ascentis Express RP-Amide dumasar kana perbaikan dina bentuk partikel, ukuran, jeung prosedur packing kolom kompléks dipaké dina work34 ayeuna.
(A) plot van Deemter (HETP versus laju linier fase mobile) diala maké kolom PMP (100 × 1,8 mm id) dina 60/40 ACN / H2O kalawan 0,1% TFA. (B) plot van Deemter (HETP versus laju linier fase mobile) diala ngagunakeun hiji Ascentis Express RP-/CN0 × id 1 kolom (10 mm0 × id2) (10 mm Amide × 1 kolom) O kalawan 0,1% TFA.
Fase stasioner polistirena anu dipasang ku polar disiapkeun sareng dievaluasi pikeun pamisahan campuran péptida sintétik sareng nyerna trypsin tina albumin sérum manusa (HAS) dina kromatografi cair kinerja tinggi. tésis tina fase cicing, sarta packing kolom kompléks.Salian efisiensi separation tinggi, tekanan deui kolom low dina laju aliran tinggi mangrupa kaunggulan sejen tina fase stasioner ieu.PMP kolom némbongkeun reproducibility alus tur bisa dipaké pikeun analisis campuran péptida jeung nyerna trypsin rupa proteins.We maksudna ngagunakeun kolom ieu pikeun separation produk alam, sanyawa PMP bioactive jeung fungal bakal dipaké dina kolom PMP cair jeung fungal di hareup tutuwuhan. dievaluasi pikeun pamisahan protéin sareng antibodi monoklonal.
Widang, JK, Euerby, Bapak, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Panalungtikan on Péptida Separation Systems ku Fase Dibalikkeun Kromatografi Bagian I: Ngembangkeun hiji Kolom Characterization Protocol.J.Kromatografi.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al.Improved péptida aktip dirancang pikeun pengobatan kasakit tepa.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. péptida terapi sintétik: elmu jeung market.drug discovery.15 (1-2) kiwari, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Protéomic Liquid Chromatography.J.Kromatografi.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al.Advanced cair kromatografi-massa spéktrométri ngamungkinkeun incorporation of metabolomics sasaran sacara lega na proteomics.anus.Chim.Acta 1069, 89-97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Peran UHPLC dina ngembangkeun ubar.J.Séptémber Sci.30 (8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM aspék dasar tur praktis kromatografi cair tekanan ultrahigh pikeun separations gancang.J.Séptémber Sci.30 (8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Aplikasi kromatografi cair kinerja ultra-luhur dina development.J obat.Kromatografi.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al.Monolithic macroporous hydrogels disiapkeun tina minyak-di-cai emulsions fase internal tinggi pikeun purifikasi efisien enteroviruses.Chemical.Britain.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Peran kromatografi cair dina proteomics.J.Kromatografi.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. Tren munculna dina separations kromatografi cair fase tibalik tina péptida terapi jeung protéin: téori sarta aplikasi.J.Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Separation dua diménsi péptida ngagunakeun sistem RP-RP-HPLC ngagunakeun nilai pH béda dina dimensi separation kahiji jeung kadua.J.Séptémber Sci.28 (14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al.Karakteristik mindahkeun massa jeung kinerja kinétik kolom kromatografi-efisiensi tinggi dipak kalawan C18 sub-2 μm partikel pinuh sarta superficially porous ditalungtik.J.Séptémber Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al.Tren panganyarna na tantangan analitik dina isolasi, idéntifikasi jeung validasi tutuwuhan bioactive peptides.anus.biological anus.Chemical.410 (15), 3425-3444.https://doi.org/10.1007/s00216-0218-08-(20216-0218-08).
Mueller, JB et al.The bentang proteomic karajaan kahirupan.Alam 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al.Ngolah hilir péptida terapi ku kromatografi cair preparative.Molekul (Basel, Swiss) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Campuran-mode kromatografi jeung aplikasi na biopolymers.J.Kromatografi.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y. & Sun, Y. Ligands pikeun kromatografi protéin modeu campuran: prinsip, karakterisasi, jeung desain.J.Biotéhnologi.144(1), 3-11 (2009).